Új marker a Cystatin C bevezetése GFR meghatározására Nephrológiai Beteganyagon Gellérné Jakatics Judit, Horváth Lászlóné, Dr. Hetyésy Katalin Petz Aladár Megyei Kórház Központi Laboratórium
Krónikus veseelégtelenség • A világon egyre nagyobb egészségügyi problémát jelentenek • A végstádiumú vesebetegség elıfordulása folyamatosan nı
• Definíció: a glomerulus filtrációs ráta (GFR) 60ml/perc alatt van 1,73 testfelület m2 Ha legalább 3 hónapon keresztül, vagy legalább 3 hónapja fentáll a vese funkcionális, vagy strukturális károsodása normál vagy kóros GFR mellett 2
Idült vesebetegség CKD • Lakosság több mint 10%-át érinti • Hypertonia, diabetes következtében fél millió krónikus vesebetegségben szenvedı él MO.-on • Ezt a számot emeli:glomerulosclerosis, glomeruláris- és tubulointersticiális vesebetegségek • Idıskor vesefunkciót csökkentı hatása
3
Idült vesebetegség stádiumai Stádium
Jellemzık
GFR Gyakori (ml/perc/1,73 m2) -ság( %)
1.
Vesebet. Norm. v. magas GFR-rel
>90
3,3
2.
Vesebet. csökkent GFR-rel
60-89
3,0
3.
Mérsékelt veseelégtelenség
30-59
4,3
4.
Súlyos veseelégtelenség
15-29
0,2
5.
végstádiumú
<15 v. dialízis
4 0,1
GFR a vesefunkció jelzıje • Meghatározása: a mindennapi gyakorlatban körülményes (izotóp clearence vizsgálatok) • Pontatlan (creatinin clearence 24 órás vizeletgyőjtésbıl) • MANET és az MLDT közös ajánlása a GFR képletekkel becsült számítása, az eGFR 5
eGFR • Módszertıl függı képlet alapján: • GFR=175x(Scr x 0,0113) -1,154 x (kor) -0,203 /x 0,742 ha nı/ (x 1,21 ha fekete rassz) Ahol: GFR (ml/min/1,73 m2 ); kreatinin ( umol/l) ; kor (év) • Normális vagy enyhén csökkent GFR esetén pontatlan, egyéb módszer javasolt 6
Endogén kreatinin clearence Kreatinin nem tekinthetı ideális anyagnak Okok: • Kis mennyiségben tubulusokon át is kiválasztódik • Szervezetben keletkezı mennyisége több befolyásoló tényezıtıl függ • Analitikai meghatározás problémái • Nincs nemzetközi standardizáció 7
Mi tekinthetı ideális anyagnak? • Nem metabolizálódik a szervezetben • Szabadon halad át a glomeruluson • Tubulusok nem vehetik fel, nem választhatják ki, nem szívódhat vissza • Húgyutakban sem választódhat ki • Egyensúlyi állapot 8
Cystatin C • Alacsony molekulasúlyú 13,3 kDa • Citoplazmatikus protein • Proteáz inhibitor • 120 aminosavból álló, nem glikált fehérje • Minden sejtmaggal rendelkezı sejt termeli • Nem befolyásolja nem, életkor, izomtömeg 9
A Cystatain C szuperfamilia A cystatin C aminosavszekvenciáját 1981-ben fedezték fel. 1. Intracellularis
2. Extracellularis
3. Intravscularis
Cystatin A Cystatin B
Cystatin C Cystatin D Cystatin E Cystatin F Cystatin S Cystatin SA Cystatin SN
LMW-kininogen HMW-kininogen
10
Cystatin C • Érzékenyebb markere az enyhe renális diszfunkciókank, mint a kreatinin • Kis molekulatömeg, stabil termelıdési arány • Emelkedett plazmaszint, majdnem kizárólagosan csökkent GFR-hez kapcsolódik 11
Cystatin C meghatározása Minták: • Szérum, EDTA-s és heparinos plazma • Tárolható : 2-8 oC-on 48 óráig, -20 o C-on 6 hónapig stabil • Kiolvasztás 37 oC-on Vizsgálat elve: szérumot vagy plazmát összekeverjük cystatin C immunoparticles reagenssel. Keletkezı IC-t mérjük turbidimetriával.
12
Kalibráció
13
Kontrollok 0,91-1,23 mg/l, célérték:1,07 mg/
14
Kontrollok 3,88-5,25 mg/l, célérték:4,57 mg/l
15
Ellenırzések • A vizsgáló laboratóriumok alapvetı feladatai közé tartozik a mérések bizonytalanságának ellenırzése. – Ezek a szórás, az átlagértékek, – Emellett egy új teszt bevezetésekor meg kell gyızıdnünk a tesztet gyártó cég által megadott reprodukálhatósági és az interferencia tényezık megfelelnek-e a valóságnak.
16
Szórás, átlag C y s t a t in C m g /l
1,15 1,1
1,05
kontroll 1 (0,91-1,23 mg/l; célérték:1,07 mg/l)
1
0,95 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19
0,9
Mintaszám
Szórás:0,028 Átlag:1,066 17 VK%:2,67
C y s ta tin C m g /l
Szórás, átlag 2. 4,55 4,5
Kontroll 2 (3,885,25 mg/l; célérték:4,57 mg/l)
4,45 4,4
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19
4,35
Mintaszám
Szórás: 0,032 Átlag:4,248 VK%:0,7518
Reprodukálhatóság Cystatin C (mg/l) Friss
24 órás
48 órás 1 hónap
átlag
szórás
2,31
2,31
2,32
2,30
2,31
0,007
1,22
1,20
1,21
1,24
1,22
0,015
3,47
3,47
3,68
3,70
3,58
0,110
3,57
3,57
3,54
3,44
03,53
0,053
3,15
3,17
3,20
3,25
3,19
0,038
2,94
2,95
3,01
3,00
2,98
0,030
2,98
2,93
3,24
3,18
3,08
0,130
5,98
6,03
5,92
5,90
5,96
0,051
4,17
4,18
4,22
4,40
4,24
0,093 19
3,62
3,61
3,57
3,53
3,58
0,036
Interferencia /lipémia/ Triglicerid (mmol/l) 8,2 9,3 9,6 10,4 11,8 12,0 13,6 23,5 15,7 16,2
Koleszterin (mmol/l) 7,2 7,1 8,5 9,8 11,8 7,3 10,2 11,4 9,3 9,6
Cystatin C (mg/l) 1,63 2,68 0,94 2,65 1,86 0,67 2,12 0,73 2,39 0,89
Lipidmentes cystatin C (mg/l) 1,65 2,70 1,01 2,64 1,85 0,64 2,19 0,70 2,36 20 0,90
Interferencia /hemolízis/ Hemolizált cystatin C (mg/l) 1,04
Hemolízis mentes cystatin C (mg6l) 1,02
0,73
0,75
0,67
0,67
1,90
1,91
0,94
0,91
0,80
0,83
2,38
2,35
4,25
4,22
0,97
0,94
21
Beteganyag • A nephrológiai osztállyal együttmőködve a cystatin C bevezetésekor 60 beteg szérum kreatinin-, cystatin C értékeit, valamint a keratini celarence-t és a cystatin C-bıl számított GFR-t hasonlítottuk össze, melyet a következı képlet alapján számolunk. • GFR(ml/min)= 69,3 (cystatin C (mg/l) ) –1,60 •
European Clinical Laboratory 2004, 23: Nol. 22
Creatinin clearence és a cystatin C-bıl számított GFR 200 150
creatinin clearence cystatin C GFR
100 50
mintaszám
25
22
19
16
13
10
7
4
0 1
m l/p e rc /1 ,7 3 m 2
250
23
Konklúzió • A cystatin C érzékenyebb markere a renális diszfunkcióknak, mint a kreatinin • Specifikusan, gyorsan mérhetı • Értéke nem függ a nemtıl, az izomtömegtıl, az életkortól csak kis mértékben • Referens tartomány: – 60 éves korig: 0,55-1,15 mg/l
– 60 éves kor felett:0,63-1,44 mg/l
24
Konklúzió • Szakirodalmi ajánlás alapján a cystatin C értéke: – Krónikus hemodialízis programban kezelt beteg esetén: 3,9-7,2 mg/l – Akut dialízis szükségessége: 4,25-7,2 mg/l – Biztos anuria: 7,2 mg/l felett 25
Konklúzió „ Értékünk az ember”
• A laboratóriumok feladata, hogy pontos, megbízható vizsgálatokat végezzenek. • Költségszámítások: – Kreatinin(Jaffé): 4,50 Ft/teszt – Kreatinin(enzimatikus): ∼ 100 Ft/teszt – Cystatin C: 612 Ft/teszt 26
Köszönöm a figyelmet!
27
