Marker koncepció (Bovilis® BVD)
VI. MSDay Budapest 2013. február 21.
Dr. Földi József
Mi a marker vagy diva koncepció ?
Típusai
BVDV NS3 (p80) marker – vakcinák és tesztek
A BVDV NS3 marker elv gyakorlati alkalmazása javaslatok
Mi a marker vagy diva koncepció ?
Diva Divus ?
Mi a marker vagy diva koncepció ? Diva = Differentiation of Vaccinated and Infected Animals Vakcinázott és fertőzött állatok elkülönítése Mi szükséges ehhez ? Ismert marker tulajdonsággal rendelkező antigén Monoklonális ellenanyag
Bartha Adorján – 1961, K61 törzs
Lomniczi Béla – 1987, mitől attenuált a K61 törzs ?
Alapelv Egy antigén (vírus, vakcina) marker tulajdonsága kizárólag a marker elemre elkülönítő monoklonális ellenanyagon alapuló tesztben mutatkozik meg. Ez ELISA típusú teszt. Marker vírusneutralizáció nincs! Vírusneutralizáció
Nem marker ELISA
Marker ELISA
Nem fertőzött, nem vakcinázott
Neg
Neg
Neg
Nem fertőzött, marker vakcinázott
Poz
Poz
Neg
Fertőzött, akár vakcinázott akár nem
Poz
Poz
Poz
Nem marker vakcinázott, akár fertőzött akár nem
Poz
Poz
Poz
Marker vakcina típusok 1. Deléciós markerek
Aujeszky vírus IBR vírus gE vs gB
- elég nagyméretű vírus - a hiányzó vírus fehérje nem lehet életfontosságú - a hiányzó vírus fehérje nem lehet kulcsfontosságú az immunválasz szempontjából
Marker vakcina típusok 2. Alegység vakcinák
Klasszikus sertéspestis E2 vs Erns
- Vektor vírus teljesen más mint az eredeti pl.: Pestivirus - Baculovirus - immunválasz szempontjából kulcsfontosságú fehérje kifejeződése a vektorban
Marker vakcina típusok 3. Nem strukturális proteineken alapuló marker
RSZKF – 3ABC BVDV – NS3 (ApX IV)
- Nem strukturális protein = NEM alkotóeleme a vírusnak (nincs a virionban) - ENZIMEK, a virion szintézisét és összeépülését segítik - Ha nincs vírus replikáció, nincsenek jelen
A Pestivirusok (BVDV) NS3 nem strukturális proteinje
- NS3 illetve NS2-3 régebbi nevén p80/p125 - Tripszinszerű serin proteináz ÉS nukleozid trifoszfatáz - A vírus replikáció kezdetén nagy mennyiségben szintetizálódik - Ellenanyag termelést vált ki - Ha nincs vírus replikáció, nem képződik = INAKTIVÁLT
VAKCINA!!!
BVDV NS3 (p80) marker – vakcinák és tesztek - A vakcina csak inaktivált lehet élő vakcina vírus szaporodik az állatban = van NS3 és ellenanyag - A marker jelleg „erősségét” a gyártási eljárás befolyásolja NEM minden inaktivált BVD vakcina NS3 marker – ezt vizsgálni kell (a gyártónak) - Marker teszt = BVDV NS3 (p80) ellenanyagok kimutatásán alapuló ELISA Fajlagosság* Specificitás
Érzékenység* Szenzitivitás
100%
90%
nincs adat
nincs adat
100%
94%
Svanovir BVDV p80 Ab (Svanova, Svédo.)
98%
92%
Cedi-test BVDV
99%
98%
Ingezim BVDV Compac
(Ingenasa, Sp)
Idexx BVDV P80**
(Idexx USA)
Serelisa BVD p80
(Synbiotics, Fr)
(Cedi Diagnostics, NL)
* Vírusneutralizációs próbához viszonyítva ** korábban Pourquier BVD/MD-BD P80
BVDV VN átlagtiter és NS3 pozitív állatok arányának alakulása négyszeri Bovilis® BVD vakcinázás után VN titer 9
p80 ELISA Poz
V4
V3
8 BVDV VN titer
7 6
V2
5 4 3
V1
Két NS3/p80 ELISA teszttel vizsgálva
2 1 0
0
30
60
270 Napok
300
654
684 Arias és mtsai. nem publikált adatok
NS3 pozitív állatok aránya és BVDV VN átlagtiter Bovilis® BVD vakcinázás és ráfertőzés után, háromféle NS3 teszttel (A, B, C) Negatív
Kétes
Pozitív
100%
20 16
80% 70%
12
60% 50%
8
40% 30%
BVDV VN titer
NS3 pozítív állatok aránya
90%
4
20% 10% 0%
0
A B C 0.nap
V1
A B C 28.nap
V2
A B C 49.nap
RF
A B C 56.nap
A B C 63.nap
A B C 70.nap
Makoschey és mtsai, Vaccine, 2007
NS3 pozitív állatok aránya ötszöri Bovilis® BVD vakcinázás négyféle NS3 teszttel (A, B, C, D) szérumból és tejből A
B
C
D
Szérum
Állattelepi vizsgálat
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 28. (V2)
56. (V3)
84. (V4)
112. (V5)
140.
A
B
168.
C
196.
240.
D
330.
426.
Tej
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 28. (V2)
56. (V3)
84. (V4)
112. (V5)
140.
168.
196.
240.
330.
426.
Alvárez és mtsai. The Vet J. 2012
Következtetések Többször (>3) vakcinázott állatok egy része (5-40%) vakcinázás után időlegesen pozitív reakciót adhat NS3 tesztben
A pozitívan reagálók aránya és ennek időtartama erősen teszt függő
NS3 pozitív reakciók gyakrabban fordulnak elő szérum minták, mint tejminták vizsgálata során
A BVDV NS3 marker elv gyakorlati alkalmazása - javaslatok A BVDV fertőződés forrásai Egyéb
Fertőzött sperma
Időszakos vírus ürítők Perzisztens vírus hordozók
Értelmetlen a marker elv gyakorlati alkalmazására gondolni, amíg meg nem bizonyosodtunk arról, hogy nincs jelen perzisztens vírus hordozó az állományban, vagy ha jelen van, el nem távolítottuk !!!
Mire jó akkor a marker teszt ? Rendszeresen vakcinázott, perzisztens vírus hordozótól mentes állományban a vírus cirkuláció nyomon követésére (pl. új perzisztens behurcolása vagy születése)
Mikor vegyünk mintákat ? Többször vakcinázott állatokból: a legutóbbi oltás idejétől minél távolabb, praktikusan a következő vakcinázással egyidejűleg Növendékekből: 7-12 hónapos korban, praktikusan az első vakcinázással egyidejűleg ( kb. 8 hónapos kor)
Milyen mintákat vegyünk ? Ha tejelő teheneket mintázunk, akkor inkább tejmintát, egyébként vérmintát
Mekkora a javasolt mintaszám ? Korcsoportonként 10 minta
Milyen gyakran vegyünk mintát ? Évente egyszer, ha nincs állat behozatal az állományba 6-12 hónapos növendékek: évente 2-4-szer
Megszívlelendők
A BVD marker teszt negatív eredménye nem jelenti az állat BVD negatív státuszát (VN, nem marker ELISA pozitív lesz!)
A BVD marker teszt nem alkalmas a perzisztens vírushordozók kiszűrésére (PI állatok ellenanyag tesztekben többnyire negatívak) A BVD marker teszt állomány diagnosztikai eszköz, nem alkalmas egyedi fertőzöttségi státusz megítélésére (többször vakcinázott állatok, rövid idővel vakcinázás után átmenetileg pozítvan reagálhatnak a tesztben)
„Cetere censeo, Carthaginem esse delendam!” Marcus Portius Cato
Egyébként javaslom, hogy először is a perzisztens vírus hordozó egyedeket ki kell Földi József selejtezni!
Köszönöm a figyelmet!
Melyik állítás IGAZ az alábbiak közül ? A) A BVD vakcina marker tulajdonsága ugyanazon az elven alapul, mint az IBR vakcina marker jellege. B) Minden inaktivált BVD vakcina egyben marker vakcina is C) Van az MSD-nek élő BVDV marker vakcinája is D) A jelenleg alkalmazott marker elv alapján csak inaktivált BVD vakcina lehet marker
Mi a vírusok NEM STRUKTURÁLIS proteinjeinek legfontosabb szerepe ? A) Védik a vírust az immunrendszer sejtjeitől B) Enzimek, a virion alkotó elemek szintézisét és összeépítését segítik C) Elősegítik a vírus bejutását a sejtbe D) Díszítik az envelopot
Mi a neve a BVDV nem strukturális proteinjének, amelynek hiányán a vakcina marker tulajdonsága alapszik ? A) gE (régebbi nevén gI) B) Erns (régebbi nevén E2) C) NS3 (régebbi nevén p80) D) MZ/X (régebbi nevén üki3)
Melyik más betegség elleni marker vakcinával megegyező elven alapul a BVDV marker vakcina ? A) Ragadós száj- és körömfájás B) Sertéspestis C) IBR D) PRRS
