Tvorba trvalých mikroskopických preparátů Tvorba demonstračních sbírek pro praktickou výuku biologických oborů FRVŠ G4/2198/2012
Lukáš Fusek, Robin Kundrata, Kateřina Sklenářová
Tvorba trvalých mikroskopických preparátů
Použitá média • solakryl
• glycerol-želatina
Solakryl syntetická pryskyřice nemísitelný s vodou tuhne rychleji a má neutrální reakci nutnost objekty dokonale odvodnit alkoholovou řadou (70%, 80%, 96%) • ředí se xylenem (rozpouští vzduchové bubliny) jedovaté výpary!!!
• • • •
Solakryl - pomůcky • • • • • • • • •
solakryl, xylen ethanol 70%, 80% a 96% (na odvodnění preparátů) skleněná tyčinka nebo kapátko podložní skla (rozměr 76x26 mm) krycí skla hranatá (rozměr 15x15 mm) preparační jehly pinzety skalpel průhledný lak na nehty
Solakryl - tvorba preparatů • • • • •
objekty nutné odvodnit před vložením do preparátů klasický způsob pomocí vzestupné alkoholové řady 3 Petriho misky s ethanolem - koncentrace 70 %, 80 % a 96 % po odvodnění umístit objekt do Petriho misky s xylenem doba umístění objektů v jednotlivých miskách je přímo úměrná velikosti živočicha či jeho částí
Solakryl - tvorba preparátů • na odmaštěné podložní sklíčko nanést skleněnou tyčinkou příslušné množství solakrylu (předem naředěný xylenem na potřebnou hustotu) • do připravené směsi solakrylu a xylenu pinzetou vložit živočicha nebo jeho část - do středu kapky média a opatrně ponořit • upravit objekt do správné polohy a preparát opatrně přiklopit odmaštěným krycím sklíčkem • preparát odložit ve vodorovné poloze, aby médium nestékalo • solakryl schne asi 1–2 týdny
Solakryl - tvorba preparátů • ztuhlé médium, které přesahuje přes okraj krycího sklíčka, opatrně odříznout pomocí žiletky či skalpelu • čisté a odmaštěné preparáty orámovat průhledným lakem na nehty po celém obvodu krycího skla
Glycerol-želatina • médium s vodou mísitelné • jemnější objekty pro lepší manipulaci převést nejdříve do směsi glycerol-voda (1:5, 1:10)
Glycerol-želatina - pomůcky • • • • • • • • • • •
glycerol, želatina, destilovaná voda podložní skla (rozměr 76x26 mm) krycí skla hranatá (rozměr 15x15 mm) krycí skla kulatá (průměr 18 mm, 20 mm) skleněná tyčinka nebo kapátko preparační jehly pinzety skalpel průhledný lak na nehty vteřinové lepidlo silikonové a pryžove kroužky (vnitřní průměr min. 1cm, šířka kroužku 2mm, výška kroužku 2mm)
Glycerol-želatina - výroba • smíchat 40 ml destilované vody, 50 ml glycerolu a 7 g práškové želatiny • namíchanou směs zahřívat ve vodní lázni za současného pomalého míchání • veškerý prášek se rozpouští asi 5–10 min
Glycerol-želatina - tvorba preparátů • práce s glycerol-želatinou vyžaduje opatrné, přesné a rychlé zacházení • nejlépe se pracuje s glycerol-želatinou zahřátou ve vodní lázni na teplotu 50–60°C • skleněnou tyčinkou přenést želatinu na krycí sklo - opatrné nanášení (= zamezení vzniku vzduchových bublin)
Glycerol-želatina - tvorba preparátů • poté do GŽ vložit připravený objekt a opatrně ponořit na dno • po upravení objektu do potřebné polohy opatrně přiklopit krycím sklíčkem • hotový preparát nechat utuhnout ve vodorovné poloze tuhnutí GŽ probíhá rychle (několik hodin, popř. den)
Glycerol želatina - rámečky • pro vkládání větších objektů - např. celá těla větších bezobratlých • max. velikost objektu, který je možné do rámečků vložit, je rozměr asi 10 x 10 mm; s výškou cca 1,5 mm • pro tvorbu rámečku je vhodné použít silikonové nebo pryžové kroužky • výška kroužku je 2 mm, vnitřní průměr min. 1 cm a tloušťka kroužku min. 2 mm
Glycerol želatina - rámečky • podložní sklíčko i kroužek odmastit 70% etanolem • na kroužek nanést po obvodu tenkou vrstvu vteřinového lepidla a přiložit na podložní sklo, opatrně přitlačit, aby lepidlo zabralo co největší plochu kroužku • po několika minutách lze s takto vytvořeným rámečkem bez problému pracovat
Glycerol želatina - rámečky • do připraveného rámečku nanést potřebné množství dobře rozpuštěné glycerol-želatiny • do středu opatrně vložit objekt, ponořit až na dno a upravit do požadované polohy
Glycerol želatina - rámečky • hladina média musí přesahovat přes okraj kroužku - mírný přesah média je podstatný pro zamezení vzniku bublin při uzavírání preparátu kulatým krycím sklíčkem • po utuhnutí orámovat průhledným lakem po celém obvodu kroužku
Ukázky objektů nafocených z trvalých mikroskopických preparátů
štírek domácí (Chelifer cancroides)
Alcedoffula alcedinis
vodoměrka štíhlá (Hydrometra stagnorum)
komár pisklavý (Culex pipiens)
hmyzenka (Protura)
jepice čeledi Baetidae
klíště obecné (Ixodes ricinus)
mšice (Aphidae)
Elateridae – křídlo
Trichoptera – křídlo
Elateridae – samčí kopulační orgán
Elateridae – hlava
