TOKSISITAS DAN PROFIL KIMIAWI EKSTRAK RAMUAN MENIRAN, KUNYIT, DAN TEMULAWAK THERESIA PRATIWI ELINGSETYO SANUBARI

TOKSISITAS DAN PROFIL KIMIAWI EKSTRAK RAMUAN MENIRAN, KUNYIT, DAN TEMULAWAK

THERESIA PRATIWI ELINGSETYO SANUBARI

DEPARTEMEN BIOKIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2010

ABSTRAK THERESIA PRATIWI ELINGSETYO SANUBARI. Toksisitas dan profil kimiawi ekstrak ramuan meniran, kunyit, dan temulawak. Dibimbing oleh MARIA BINTANG dan WARAS NURCHOLIS. Kunyit, temulawak, dan meniran merupakan tanaman obat yang berkembang saat ini. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek toksisitas yang ditimbulkan oleh ekstrak ramuan kunyit, temulawak, dan meniran dan untuk menentukan profil kimiawi yang berperan aktif dari ekstrak ramuan tersebut dengan menggunakan KLT dan FTIR. Ekstrak ramuan dibuat dengan mencampurkan meniran: kunyit: temulawak menggunakan tujuh formula yaitu 1:1:1; 1:1:0; 1:0:1; 0:1:1; 1:0:0; 0:1:0; 0:0:1. Ramuan ini kemudian diuji toksisitasnya dengan cara memasukkan larva Artemia salina ke dalam air yang mengandung ekstrak selama 24 jam. Tiga ekstrak terbaik dengan LC50 rendah dilihat profil kimiawinya menggunakan KLT dan FTIR. Hasil ekstrak terbaik ini adalah ekstrak dengan perbandingan meniran: kunyit: temulawak 1:1:1, 1:1:0, dan 1:0:1 dan hasil LC50 yang diperoleh adalah 5.5377 ppm, 16.3763 ppm, dan 11.6243 ppm. Ekstrak ramuan dengan potensi hayati tertinggi (5.537 ppm) memiliki profil KLT dengan noda lebih tebal dan spektrum FTIR yang tidak memiliki gugus C≡C sedangkan dua ektrak lainnya memiliki noda yang tipis dan spektrum FTIR yang memiliki gugus C≡C.

ABSTRACT THERESIA PRATIWI ELINGSETYO SANUBARI. Toxicity and chemical profile mixed extract phyllanthin, turmeric, and curcuma. Under the direction of MARIA BINTANG and WARAS NURCHOLIS. Turmeric, curcumin, and phyllantin are one of medicinal plants that has high potency to be explored nowadays. This research was done to determine the toxicity effects from turmeric, curcumin, and phyllantin mixed extract, and also to define the mixed extract chemical’s profile with KLT and FTIR. Mixed extract were made by mixing turmeric, curcumin, and phyllantin in seven different composition, that were 1:1:1; 1:1:0; 1:0:1; 0:1:1; 1:0:0; 0:1:0; 0:0:1. Then its toxicity effect were measured by exposing Artemia salina to the extract for 24 hours. Three best extract with the lowest LC50 were taken to define their chemical’s profile using TLC and FTIR. The best three extract were tumeric: curcumin: phyllantin mixture extract in 1:1:1; 1:1:0; and 1:0:1 proportion, with LC50 5.5377 ppm, 16.3763 ppm, and 11.6243 ppm, respectively. Mixed compound extract with high biological potential (5.537 ppm) show TLC profile with thick spot and without C≡C bond for FTIR spectrum as the other two exctract have thinner spot and have C≡C bond.

TOKSISITAS DAN PROFIL KIMIAWI EKSTRAK RAMUAN MENIRAN, KUNYIT, DAN TEMULAWAK

THERESIA PRATIWI ELINGSETYO SANUBARI

Skripsi Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains pada Departemen Biokimia

DEPARTEMEN BIOKIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2010

Judul Skripsi Nama NIM

: Toksisitas dan Profil Kimiawi Ekstrak Ramuan Meniran, Kunyit, dan Temulawak : Theresia Pratiwi Elingsetyo Sanubari : G84061607

Disetujui Komisi Pembimbing

Prof. Dr. drh. Maria Bintang, MS Ketua

Waras Nurcholis, M.Si Anggota

Diketahui

Dr. I Made Artika, M.App. Sc Ketua Departemen Biokimia

Tanggal Lulus :

PRAKATA Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Kuasa, atas kemudahan dan kemampuan yang diberikan sehingga penulis dapat menyelesaikan penulisan karya ilmiah ini dengan judul Toksisitas dan Profil Kimiawi Ekstrak Ramuan Meniran, Kunyit, dan Temulawak. Karya ilmiah ini disusun berdasarkan penelitian yang dilaksanakan dari bulan Februari sampai Mei di Laboratorium Pusat Studi Biofarmaka (PSB) IPB, Bogor. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Prof. Dr. Drh. Maria Bintang, MS dan Waras Nurcholis, M.Si selaku pembimbing yang telah memberikan ilmu dan waktunya dalam penyusunan karya ilmiah ini. Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada Mas Endi, Mbak Wiwi, Bu Nunuk, dan Nio yang telah memberikan bantuan dan pengarahan ketika berada di laboratorium PSB. Ucapan terima kasih juga penulis ucapkan kepada orang tua yang telah memberikan doa, kasih sayang, perhatian dan dukungannya. Tak lupa penulis juga berterima kasih kepada Tyas, Nestri, Tika, Ranti, Mitha, Narita, Marsudi, Rizky, Danang, Herdit, Taufiq, Putze, Ervian, April, Haya, Lingga, Putra, Asep, Igoy, Sapto, Dea, Kak Novi, Fatia, Teza, Mbak Desi, Mbak Ndanda, Mbak Ndini, dan Mas Teo yang telah memberikan bantuan dan kerjasama yang baik. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat.

Bogor, Agustus 2010

Theresia Pratiwi Elingsetyo Sanubari

RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Surakarta pada tanggal 26 Maret 1988 dari ayah Junibakti Sanubari dan ibu Agustina Sawitri Sunandari. Penulis merupakan putri tunggal. Tahun 2006 penulis lulus dari SMA Sedes Sapientiae Semarang dan pada tahun yang sama penulis berhasil masuk Institut Pertanian Bogor melalui Jalur Undangan Seleksi Masuk IPB. Penulis memilih jurusan Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Selama mengikuti perkuliahan, penulis pernah mengikuti kegiatan Praktik Lapangan di Laboratorium Ekofisiologi, Balai Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik, Bogor selama bulan Juli sampai dengan Agustus 2009 dan menulis laporan ilmiah bejudul Analisis Konsentrasi Asam Absisat dan Zeatin pada Jamur Phyptophthora sp. Disamping itu penulis aktif menjadi staf divisi infokomtari (Informasi, Komunikasi, dan Kesekretariatan) CREBs pada tahun ajaran 2007/2008 dan pada tahun yang sama penulis menjadi staf divisi kesejahteraan UKM Kemaki IPB. Pada tahun 2008/2009, penulis menjadi staf divisi infokomtari CREBs kembali.

DAFTAR ISI Halaman DAFTAR TABEL .............................................................................................. vi DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ vii DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... viii PENDAHULUAN .............................................................................................. 1 TINJAUAN PUSTAKA Ramuan Herbal Tradisional ..................................................................... 2 Larva Udang (Arthemia salina Leach) ..................................................... 3 Meniran (Phyllantbus niruri L.)................................................................ 3 Kunyit (Curcuma domestica Val.) ............................................................ 4 Temulawak (Curcuma xanthorriza Robx)................................................. 5 Uji Toksisitas LC50 dengan Analisis Probit (Finney)................................. 5 Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ............................................................. 6 Spektroskopi Inframerah Transformasi Fourier (FTIR) ............................. 8 BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat ......................................................................................... 9 Metode ..................................................................................................... 9 PEMBAHASAN Kadar air ............................................................................................... 10 Ekstraksi ................................................................................................ 10 Uji Toksisitas ........................................................................................ 11 Profil Kromatogram KLT Ekstrak Terbaik ............................................. 12 Profil Spektrum FTIR Ekstrak Terbaik .................................................. 14 SIMPULAN DAN SARAN .............................................................................. 15 DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 15 LAMPIRAN ...................................................................................................... 19

DAFTAR TABEL Halaman 1

Kadar air meniran, kunyit, dan temulawak ............................................... 10

2

Rendemen sampel .................................................................................... 11

3

Nilai LC50 sampel .................................................................................... 12

4

Optimasi KLT ......................................................................................... 14

5

Gugus fungsi tiga ekstrak terbaik ............................................................. 15

DAFTAR GAMBAR Halaman 1

Siklus hidup Artemia salina ..................................................................... 3

2

Meniran ................................................................................................. 4

3

Kunyit ..................................................................................................... 5

4

Temulawak ............................................................................................. 5

5

Struktur kurkuminoid ............................................................................. 5

6

Perlengkapan kromatografi lapis tipis ..................................................... 7

7

Tahap setelah penotolan sampel (a) Perbandingan Rf standar dengan Rf sampel, (b) Lempengan di bawah sinar UV ............................................ 7

8

Penyemprotan ninhidrin (a) Sebelum disemprot ninhidrin, (b) Setelah disemprot ninhidrin ................................................................................. 8

9

Struktur silika gel .................................................................................... 8

10

Spektroskopi inframerah transformasi fourier .......................................... 8

11

Struktur phyllantin ................................................................................. 12

12

Minyak atsiri temulawak (a) Struktur kurkumin, (b) Struktur bisdesmetoksikurkumin ......................................................................... 12

13

Struktur xanthorizol ............................................................................... 12

14

Kromatogram deteksi (a) UV 254nm optimasi sampel 1:1:1, (b) UV 366nm optimasi sampel 1:1:1 ................................................................ 13

15

Kromatogram deteksi (a) UV 254nm optimasi sampel 1:1:0, (b) UV 366nm optimasi sampel 1:1:0 ................................................................ 13

16

Kromatogram deteksi (a) UV 254nm optimasi sampel 1:0:1, (b) UV 366nm optimasi sampel 1:0:1 ................................................................ 14

17

Profil spektrum sampel 1:1:1 ............................................................... 15

18

Profil spektrum sampel 1:1:0 ................................................................. 15

19

Profil spektrum sampel 1:0:1 ................................................................. 15

DAFTAR LAMPIRAN Halaman 1

Alur penelitian ...................................................................................... 20

2

Kadar air kering .................................................................................... 21

3

Kadar air basah ...................................................................................... 22

4

Rendemen ekstrak ................................................................................ 23

5

Nilai LC50 ekstrak sampel ..................................................................... 24

6

Optimasi KLT ...................................................................................... 26

7

Optimasi KLT sampel 1:1:1 dengan panjang gelombang 254 nm .......... 28

8

Optimasi KLT sampel 1:1:1 dengan panjang gelombang 366 nm .......... 29

9

Optimasi KLT sampel 1:1:0 dengan panjang gelombang 254 nm .......... 30

10

Optimasi KLT sampel 1:1:1 dengan panjang gelombang 366 nm .......... 31

11

Optimasi KLT sampel 1:0:1 dengan panjang gelombang 254 nm .......... 32

12

Optimasi KLT sampel 1:0:1 dengan panjang gelombang 366 nm .......... 33

13

Spektrum FTIR ..................................................................................... 34

12

PENDAHULUAN Perkembangan teknologi tidak selalu berakibat baik tetapi juga dapat berakibat buruk. Perkembangan teknologi ini biasanya diiringi oleh perubahan lingkungan dan pola masyarakat itu sendiri. Mudahnya teknologi menjadikan manusia menginginkan pola hidup yang “mudah”. Mereka menjadi tidak menjaga komposisi dan pola makan mereka. Hal ini dapat berakibat terjadinya berbagai penyakit. Obat-obat kimia atau sintetis dibuat semakin bervariasi dan mempunyai banyak pilihan guna menanggulangi penyakit yang ditimbulkan. Obat-obat kimia ini tidak selalu menimbulkan efek yang baik tetapi juga efek buruk jika penggunaannya berlebihan. Contoh efek buruk yang dapat terjadi adalah dapat merusak ginjal, kelumpuhan otot mata, meningkatkan tekanan darah dan kontraksi jantung yang membahayakan bagi pasien yang sudah mengidap penyakit janttung atau tekanan darah tinggi, dan dapat merusah hati (Sukandar 2004). Dampak yang terjadi ini menyebabkan digunakan cara pengobatan baru yaitu dengan menggunakan ramuan dari bahan alami atau dengan kata lain dengan menggunakan obat-obatan herbal. Pengembangan ekstrak ramuan sangatlah pesat walaupun demikian masih banyak yang menggunakan obat-obatan kimia atau dengan cara ekstrak tunggal. Hal ini disebabkan karena obat dengan cara ekstrak ramuan masih sulit dalam hal pemasaran, pengemasan, dan keamanan. Pemasaran dan pengemasan sulit dilakukan karena ekstrak ramuan biasanya merupakan obat herbal yang cepat busuk sedangkan keamanan masih belum banyak dilakukan karena merupakan metode baru. Masyarakat kurang peduli dengan hal keamanan karena mereka percaya bahwa obat yang berasal dari alam adalah “aman”. Hal ini disebabkan karena obat dengan cara ekstrak ramuan mempunyai sejarah yang panjang yaitu berasal dari Cina dan belum pernah terjadi efek buruk. Perkembangan obat dengan cara ekstrak ramuan ini pun sudah dilakukan oleh Negara Indonesia yaitu dengan dikembangkannya jamu tetapi belum maksimal karena masyarakat modern lebih percaya pada khasiat obat yang dibuat secara kimia. Padahal obat dengan cara ekstrak ramuan ini sangat cocok dengan Bangsa Indonesia karena Indonesia memiliki keanekaragaman hayati yang besar dan tanaman obat-obatan merupakan kekayaan budaya Indonesia. Banyak tanaman

yang bermanfaat dan berkhasiat ditemukan di Indonesia. Data sekarang menunjukkan bahwa Indonesia memiliki tanaman obat tidak kurang dari 1000 jenis tanaman (Winarno 1997). Oleh karena itu, jamu ini harus dikembangkan oleh masyarakat ilmiah secara luas. Tanaman obat yang berkembang saat ini adalah kunyit, temulawak, dan meniran (Katno & Pramono 2003). Ketiga tanaman ini memiliki banyak manfaat. Kunyit digunakan sebagai astringensia (Hudayani 2008). Selain itu, kunyit juga bermanfaat sebagai menurunkan tekanan darah tinggi, tumor, asam urat, menghilangkan kelelahan, dan diabetes. Temulawak digunakan sebagai obat jerawat, meningkatkan napsu makan, antioksidan, pencegah kanker, dan antimikrob (Nugroho et al 2008). Manfaat lain yang ada adalah sakit limfa, sakit ginjal, sakit pinggang, asma, maag, sakit perut, dan memperbanyak produksi ASI. Meniran digunakan sebagai penyakit radang, infeksi saluran kencing, serta untuk merangsang keluarnya air seni, untuk penyembuhan diare, busung air, infeksi saluran pencernaan, dan penyakit yang disebabkan karena gangguan fungsi hati (Widyastuti 2008). Berbagai manfaat yang dihasilkan oleh tanaman-tanaman obat ini memerlukan pendekatan untuk mengetahui aktivitasnya jika tanaman ini diekstrak secara ramuan. Aktivitas dari ekstrak ramuan ketiga tanaman ini dapat diketahui dengan cara melihat efek toksisitasnya. Berdasarkan penelitian sebelumnya yang banyak dilakukan adalah untuk melihat efek toksisitas sampel, yaitu meniran, kunyit, dan temulawak secara tunggal dan melihat profilnya secara masingmasing menggunakan spektroskopi inframerah transformasi fourier (FTIR) dan kromatografi lapis tipis (KLT). Sejauh ini belum dibuktikannya secara ilmiah efek sitotoksitas dari ekstrak herbal ramuan dan profil kimiawinya menggunakan FTIR dan KLT. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui efek toksisitas yang ditimbulkan oleh ekstrak ramuan dan untuk melihat profil kimiawi yang berperan aktif dari ekstrak ramuan dengan menggunakan KLT dan FTIR. Hipotesis dari penelitian ini adalah ekstrak ramuan memiliki efek toksisitas dan profil kromatogram FTIR dan KLT tertentu pada tingkat konsentrasi tertentu. Hasil penelitian ini bermanfaat dalam memperoleh informasi ilmiah mengenai efek toksisitas dari ekstrak ramuan dan profil kimiawinya sehingga dapat digunakan dalm pengobatan yang aman.

13

TINJAUAN PUSTAKA Ramuan Herbal Tradisional Obat tradisional adalah bahan atau ramuan bahan yang berupa bahan tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan sariaan (galenik) atau campuran dari bahan tersebut, yang secara turun temurun telah digunakan untuk pengobatan berdasarkan pengalaman (Syafri 2009). Obat tradisional di Indonesia dikenal dengan nama jamu yang dikenal sejak berdirinya Candi Borobudur (tahun 800-900), di Cina dikenal dengan nama Traditional Chinese Medicine (TCM) sejak 2200 tahun lalu, sedangkan di India mengenal penggunaan herbal sejak 1200 tahun sebelum masehi (Novara 2009). Dokumen tertulis telah ada di India dan Cina, dan inilah barangkali yang menyebabkan pengobatan berbasis herbal di kedua negara tersebut maju. Di Indonesia dari Jawa menyebar ke Bali, dokumen di Jawa ada 2 macam yaitu: 1. Serat kawruh bab jampijampi, 2. Serat Centini (Novara 2009). Perkembangan jamu ini pertama kali dimulai pada tahun 1940 pada Kongres ke-2 Dokter Indonesia. Jamu Indonesia berasal dari budaya kuno Jawa yang dipengaruhi oleh pengobatan tradisional Cina, India dan Arab (Novara 2009). Jamu di Indonesia dibuat dengan cara yang sangat sederhana, misalnya tumbuhan dikeringkan, dibuat menjadi serbuk dan diseduh dengan air panas. Tanpa takaran dosis dalam penggunaannya. Jamu menjadi salah satu alternatif dalam pengobatan (Syafri 2009). Senyawa kimia yang bermanfaat untuk kesehatan saat ini dan waktu akan datang sejalan dengan perkembangan dan kemajuan ilmu pengetahuan dan teknologi yang banyak terkandung dalam tanaman herbal. Sesuai dengan kemajuan ilmu pengetahuan dan teknologi, tanaman obat tidak lagi valid dan nyaman jika digunakan dalam bentuk bahan utuh (simplisia), namun dimanfaatkan dalam bentuk ekstrak, yaitu sari yang dibuat dengan menggunakan pelarut yang sesuai dan aman (Sukardiman 2009). Traditional Chinese Medicine (TCM) merupakan pengobatan yang berdasarkan filosofi Cina yaitu Yin-Yang dan lima elemen. Cara pengobatan Cina yang paling tua dan klasik telah ditulis 2000-3000 tahun yang lalu dalam Huangdi Neijing. Teori dasar TCM mencakup lima organ zang dan enam organ fu, qi (energi vital), darah, serta tulang punggung. TCM merupakan dasar dari prinsip

holistik dan secara umum menekankan sistem keselarasan. TCM dikategorikan menjadi dua kelompok berdasarkan penyebab penyakitnya yaitu penyebab eksternal dan penyebab internal. Ini dibedakan dari sindrom yang terjadi dengan delapan prinsip yaitu yin, yang, bagian luar, bagian dalam, dingin, panas, kekurangan (xu) dan kelebihan (shi) (Xu & Yang 2009). Walaupun teknik akuputur dan sejenisnya terkenal dan digunakan di daerah barat, namun diagnosa secara klinik dan herbalogi Cina merupakan komponen penting pada TCM. Pengobatan herbal Cina ini tidak hanya menggunakan tumbuhan, tetapi juga dapat menggunakan hewan dan mineral. Pengobatan herbal dengan preparasi (pao zhi) dan formula (fang ji) juga sangat bagus dan unik (Xu & Yang 2009). Traditional Chinese Medicine (TCM) telah diterima sejak seribu tahun yang lalu dengan berbagai pengobatan yang berbeda dengan gejalanya. Metode TCM ini telah diakui oleh pemerintahan Cina dan sekarang telah mengalami moderinisasi. Tahun 1950an, Chairman Mao Zedong didelegasikan sebagai penemu pengobatan yang bersifat sistematis ini. Hal yang paling utama yang harus dihilangkan yaitu pengobatan TCM bukan merupakan pengobatan yang bersifat mistis. Salah satu contohnya, yaitu konsep Hun Po yang tidak menunjukkan adanya sifat mistis dari pengobatan TCM dan Hun Po menganalisis pengobatan ini pada tahun 1960an sampai 1970an. Bagian dari praktek akupuntur terdapat standarisasi yang menunjukkan poin dan kekuatan tekniknya sehingga terdapat guru dan ditemukan sekolah dengan model akademik TCM. Pengobatan herbal ini dan defisiensi sindrom Zang Fu ini yang telah distandarisasi, mengakibatkan banyak orang yang mengatakan bahwa ini adalah pengobatan Cina yang lebih dari TCM (Xu & Yang 2009). Walaupun demikian pengobatan dengan cara TCM ini masih dianggap kuno dan ketinggalan jaman oleh bangsa barat, sistem mereka yang mengolah obat-obatan dalam pabrik terkadang lebih mempunyai keefektifan yang lebih. Tetapi lebih disadari lagi karena banyak obat-obatan barat berasal dari tumbuhan alam, binatang, dan sumber mineral. Hal ini dibuktikan oleh organisasi kesehatan dunia (WHO) yang melaporkan bahwa 120 produk obat-obatan berasal dari tanaman pada tahun 1985. Perusahaan obat melakukan screening aktivitas dari ratusan tanaman setiap tahunnya (Bannink 2009).

14

Satu kekuatan dari penggunaan formula herbal (TCM) adalah formula ini telah dikombinasikan secara hati-hati dan seimbang untuk meminimalkan efek dan toksisitas yang mungkin terjadi dengan penggunaan herbal secara tunggal. Efek samping dan tokisisitas masih mungkin terjadi terlebih jika terjadi kesalahan menulis resep walaupun efek yang ditimbulkan lebih kecil dibanding dengan obat-obatan kimia. Keuntungan lainnya adalah pencampuran herbal yang terjadi dalam satu formula dapat terjadi diantara herbal yang mungkin tidak akan muncul ketika kita menggunakannya secara tunggal. Hal yang menjadi masalah adalah tanaman tidak dapat dipatenkan sehingga terapi herbal tradisional yang merupakan pengobatan alternatif pun masih sulit untuk dikembangkan. Obat barat memiliki kekurangan dibanding pengobatan Cina karena ia tidak memiliki kemampuan dalam hal memperkuat tubuh, meningkatkan energi dan meningkatkan sistem imun dan sumsum tulang (Bannink 2009). Larva Udang (Arthemia salina Leach) Artemia merupakan kelompok udangudangan (Crustaceae) dari filum Arthropoda yang berkerabat dekat dengan zooplankton lain seperti Copepode dan Dophnia (kutu air). Artemia hidup di danau-danau garam (berair asin) yang ada di seluruh dunia. Udang ini toleran terhadap selang salinitas yang sangat luas, mulai yang hampir tawar sampai jenuh bergaram. Artemia hidup di daerah dengan salinitas yang bervariasi, tergantung dari jumlah air hujan dan penguapan yang terjadi. Apabila kadar garam kurang dari 6% telur Artemia akan tenggelam sehingga telur tidak bisa menetas. Jika kadar garam lebih dari 25% telur akan tetap berada dalam kondisi tersuspensi, sehingga dapat menetas dengan normal (Croghan 1957). Siklus hidup Artemia (Gambar 1) dapat dimulai dari waktu menetasnya kista atau telur. Kista akan menetas menjadi embrio setelah 15-20 jam pada suhu 25oC. Embrio ini masih akan menempel pada kulit kista selama 20-24 dan kemudian berubah menjadi naupli yang sudah bisa berenang bebas (Kanwar 2007). Variabel yang menentukan siklus hidup Artemia adalah pH, cahaya, suhu, kadar garam, dan oksigen. pH dengan selang 8-9 merupakan selang yang paling baik, sedangkan pH di bawah 5 atau lebih tinggi dari 10 dapat membunuh Artemia (Nunes 2006). Cahaya minimal diperlukan dalam proses penetasan dan akan sangat menguntungkan bagi pertumbuhan mereka.

Lampu standar grow-lite sudah cukup untuk keperluan hidup Artemia. Kadar oksigen harus dijaga dengan baik untuk pertumbuhan Artemia. Melalui asupan suplai oksigen yang baik, Artemia akan berwarna kuning atau merah jambu. Warna ini bisa berubah menjadi kehijauan apabila mereka banyak mengkonsumsi mikro algae. Saat kondisi yang ideal seperti ini, Artemia akan tumbuh dan beranak-pinak dengan cepat pada kondisi yang ideal, sehingga suplai Artemia untuk ikan peliharaan dapat berlanjut secara kontinu. Kadar oksigen dalam air yang rendah dan banyak mengandung bahan organik atau jika salinitas meningkat, Artemia akan memakan bakteri, plankton, dan sel-sel khamir (yeast). Artemia akan memproduksi hemoglobin sehingga tampak berwarna merah atau orange dan keadaan ini terus berlanjut Artemia mulai memproduksi kista (Widyastuti 2008).

Gambar 1 Siklus hidup Artemia salina (Fathiawati 2008). Meniran (Phyllanthus niruri L.) Nama lain dari Phyllanthus niruri L. adalah Phyllanthus urinaria L., Phyllanthus alatas BI, Phyllanthus cantonensis Hornen, Phyllanthus echinatus Wall, Phyllanthus leptocarpus Wight. Nama daerah lainnya yaitu Jawa: meniran, meniran merah, meniran hijau. Sunda: memeniran. Maluku: gosau cau, hsieh hsia chu (Kurniastuty 2008). Meniran merupakan tumbuhan terna, berumah satu dan bunganya berkelamin tunggal, batang tumbuh tegak mencapai 100 cm dengan warna yang bervariasi, antera memecah secara horizontal, dan berbuah licin (Hidayat 2008). Umumnya, meniran tidak dipelihara karena dianggap sebagai rumput biasa. Tumbuhan ini dapat subur ditempat

15

yang lembab pada dataran rendah sampai ketinggian 1000 meter di atas permukaan laut. Herba dan akar tanaman ini digunakan untuk obat radang ginjal, radang selaput lendir mata, virus hepatitis, peluruh dahak, peluruh haid, ayan, nyeri gigi, sakit kuning, sariawan, antibakteri, kanker, dan infeksi saluran kencing (Gunawan 2008). Meniran banyak disalahgunakan sebagai obat penggugur kandungan, dan pada pemakai berlebih dari Phyllanthin herba dapat menyebabkan impoten. Flavonoid yang terkandung dalam meniran memberikan efek menghambat kerja enzim xanthin oksidase sehingga dapat digunakan untuk pengobatan kelebihan asam urat dan batu ginjal. Herba meniran mengandung metabolit sekunder flavonoid, terpenoid, alkaloid dan steroid (Gunawan 2008). Senyawa golongan flavonid yang terdapat dalam meniran adalah kuersetin, kuersetrin, isokuersetrin, astragalin, rutin kaemperol-4-ramnopiranosida, eriodictiol-7- ramnopiranosida, fisetin-4-Oglikosida, 5,6,7,4-tetrahidroksi-8-(3-metilbut2-enil) flavonon-5-O-rutinosida (nirurin). Senyawa flavonoid 3,5,7, trihidroksi-flanonol4-0-a-L-(-) rhamnopiranosida terdapat di dalam akar; suatu senyawa glikosida flavonoid dengan kaemperol sebagai aglikon dan rhamnosa sebagai bagian glikon. Ikatan glikosida terdapat pada posisi 4 sebagai gliksida flavonoid terdapat pula 5,3,4trihidroksi flavanon-7-0-a-L-(-), suatu flavanone (eriodiktiol); L(-)-rhamnosa sebagai bagian gikon. Disamping itu terdapat senyawa lignan, tanin, saponin, norsekurinin, sekurinin, allosekurinin, dan senyawa alkaloid. Senyawa lignan terdiri atas nirfillin (3,3,5,9,9pentametoksi-4-hidroksi,4,5-metilendioksilignan), fillinirurin (3,4metilendioksi-5-metoksi-9-hidroksi-4-7epoksi-8,3-neolignan), isolintertralin, hipofillantin (tidak pahit), nirtetralin, nirantin, fillanthin (pahit), hinikinin, lintetralin, phyllantostatin A (Sudarsono 1998).

Gambar 2 Meniran.

Kunyit (Curcuma domestica Val.) Kunyit (Gambar 3) memiliki nama lain juga untuk setiap daerah. Daerah sunda menyebutnya sebagai koneng temen, kunyit (Aceh), kuning (Gayo), unik (Batak), cahang (Dayak), kunyit, janar (Banjar), kunir, kunir betis, temu kuning (Jawa), konye, temu koneng (Madura), kunyit (Sasak), huni (Bima), unyi (Bugis), kumino, unin, unine, uninum (Ambon), rame, kandeifu, nikwai, mingguai, jaw (Irian) (Kusumaningrum 2008). Tanaman kunyit merupakan tanaman perdu dengan tinggi tidak mencapai 1 m dan membentuk percabangan. Batangnya pendek dan merupakan batang semu yang dibentuk oleh pelepah daun, membentuk rimpang yang warnanya jingga dan bercabang-cabang, setiap tumbuh berdaun 3-8 helai. Daunnya merupakan daun tunggal bertangkai panjang, bentuk lanset lebar, ujung dan pangkal runcing, tepi rata, pertulangan menyirip, panjang 20-40 cm, lebar 8-12,5 cm dan warna hijau pucat (Krismawati 2004). Rimpang kunyit digunakan untuk melancarkan aliran darah dan energi vital, peluruh kentut, peluruh haid, mempermudah persalinan antibakteri, antiinflamasi, memperlancar pengeluaran empedu ke usus, obat penurun kadar kolesterol dan trigliserida darah yang tinggi, demam, pilek dengan hidung tersumbat, rematik, diare, nyeri dada, sindroma dispepsia, haid tidak teratur, hepatitis, batu empedu, dan berbagai penyakit radang seperti radang hidung, radang telinga, radang gusi, radang usus buntu, radang amandel, radang rahim dan keputihan (Rustam et al 2007). Rimpang kunyit mengandung 3 - 4% kurkumin, sedang minyak atsiri kunyit terdiri dari artumeron, α dan β tumeron, tumerol, αatlanton, β-kariofilen, linalol, 1,8 sineol. Di samping itu rimpang kunyit juga mengandung pati atau amilum, gom dan getah, lemak, protein, kalsium, fosfor dan besi, aroma harum dan rasa khas (Sirait 2008). Rimpang kunyit mempunyai bau khas aromatik, rasa agak pahit, agak pedas dan bertindak sebagai astringensia. Astringensia merupakan zat yang bekerja lokal yaitu dengan mengkoagulasi protein tetapi demikian kecil daya penetrasinya sehingga hanya permukaan sel yang dipengaruhi. Akibat dari aksi tersebut permeabilitas membran mukosa yang kontak dengan astringen menurun sehingga kepekaan bagian tersebut menurun pula (Hudayani 2008).

16

Gambar 3 Kunyit. Temulawak (Curcuma xanthorriza Roxb) Temulawak (Gambar 4) merupakan tanaman obat berbatang semu dengan tinggi hingga lebih dari 1 m tetapi kurang dari 2 m, berwarna hijau atau coklat gelap. Akar rimpang terbentuk dengan sempurna dan bercabang kuat, berwarna hijau gelap. Rimpang induk dapat memiliki 3-4 buah rimpang. Warna kulit rimpang coklat kemerahan atau kuning tua, sedangkan warna daging rimpang oranye tua atau kuning. Rimpang temulawak terbentuk di dalam tanah pada kedalaman sekitar 16 cm. Tiap rumpun umumnya memiliki 6 buah rimpang tua dan 5 buah rimpang muda (Nugroho et al. 2008). Daerah tumbuh selain di dataran rendah juga dapat tumbuh baik sampai pada ketinggian tanah 1500 meter di atas permukaan laut (Istafid 2006). Klasifikasi temulawak adalah sebagai berikut: dunia plantae, divisi spermatophyta, sub divisi angiospermae, kelas monocotyledonae, keluarga zingerberaceae, genus Curcuma, spesies Curcuma xanthorriza Roxb. Perakaran temulawak dapat beradaptasi pada berbagai jenis tanah. Produksi rimpang yang optimal diperlukan tanah yang subur, gembur, dan berdrainase baik. Pemupukan anorganik dan organik diperlukan juga untuk memberi unsur hara yang cukup dan menjaga struktur tanah agar tetap gembur (Nurcholis 2006). Temulawak merupakan tumbuhan monokotil berakar rimpang. Rimpang adalah bagian batang di bawah tanah. Rimpang disebut juga umbi akar, umbi batang, atau umbi tinggal. Rimpang temulawak terdiri atas rimpang induk (empu) dan rimpang anakan (cabang). Rimpang induknya berbentuk bulat seperti telur dan berwarna kuning tua atau coklat kemerahan. Bagian dalammnya berwarna jingga kecoklatan (Afifah & Tim Lentera 2003). Manfaat temulawak terutama disebabkan adanya kurkuminoid yang merupakan senyawa aktif dalam rimpang tanaman dari familia Zingerberaceae. Komposisi kimia dari

rimpang temulawak adalah protein pati sebesar 29-30%, kurkumin 1-2%, dan minyak atsirinya antara 6-10%. Daging buah (rimpang) temulawak mempunyai beberapa kandungan senyawa kimia antara lain berupa fellandrean dan tumerol atau yang sering disebut minyak menguap. Kemudian minyak atsiri, kamfer, glukosida, foluymetik karbinol. Temulawak mengandung minyak atsiri seperti limonina yang mengharumkan, sedangkan kandungan flavonoida-nya berkhasiat menyembuhkan radang. Buahnya mengandung minyak terbang (aneol, (1S,5S)2,6,6-trimetilbisiklo [3.1.1] hept-2-ena, felandren, dipentana, fenchon, metil kavikol, anisaldehida, asam anisat, kamfer), dan minyak lemak. Manfaat kurkuminoid antara lain sebagai obat jerawat, meningkatkan nafsu makan, antioksidan, pencegah kanker, dan antimikrob (Nugroho 2008). Warna kekuningan dari temulawak disebabkan oleh adanya kurkumin (C25H32O3) (Gambar 5).

Gambar 4 Temulawak. OCH3

OCH3 OH

HO

O

O

Gambar 5 Struktur kurkuminoid (Kertia 2005). Uji Tosisitas LC50 dengan Analisis Probit (Finney) Lethal concentration (LC50) adalah konsentrasi yang dibutuhkan untuk mematikan setengah dari populasi (50%) yang ada (Frank 1995). Nilai LC50 tidak konstan, artinya nilainya berbeda antara spesies yang satu dengan spesies yang lain karena adanya variasi antar spesies. Nilai LC50 merupakan bentuk statistika yang didesain untuk menggambarkan respon yang mematikan komponen dalam beberapa populasi dari suatu percobaan (Balazh 1870). Banyak faktor yang berpengaruh di dalamnya antara lain: umur, suhu, jumlah hewan uji, dan jenis galur (Finney 1971).

17

Salah satu metode analisis statistika yang digunakan untuk menghitung besarnya LC50 adalah dengan menggunakan analisis probit. Analisis tersebut diperkenalkan oleh Finney tahun 1971. Metode regresi linier digunakan untuk mendapatkan grafik garis lurus apabila probit kematian ditransformasikan pada log konsentrasi. Konsentrasi yang dapat mengakibatkan kematian 50% populasi hewan diperoleh dengan menarik garis dari 50% probit kematian (Finney 1971). Perbedaan konsentrasi pada setiap perlakuan secara jelas mempermudah dalam menentukan konsentrasi letal pada suatu hewan yang diujikan. Kontrol dalam percobaan sangat penting dalam suatu perhitungan mortalitas alami. Jika terjadi kematian dari suatu kontrol, perlu dilakukan koreksi terhadap analisis dengan persen kematian terkoreksi. Setiap makhluk hidup mempunyai tingkat toleransi terhadap suatu rangsangan, respon tidak akan terjadi apabila berada di bawah tingkat toleransi tersebut (Finney 1971). Suatu zat dikatakan aktif atau toksik bila nilai LC50 < 1000 ppm untuk ekstrak dan ≤ 30 ppm untuk suatu senyawa (Juniarti 2009). Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Kromatografi digunakan untuk memisahkan substansi campuran menjadi komponen-komponen yang lebih spesifik. Seluruh bentuk kromatografi bekerja berdasarkan prinsip yang berlaku, yaitu fase diam dan fase gerak. Semua kromatografi memiliki fase diam (dapat berupa padatan, atau kombinasi cairan-padatan) dan fase gerak (berupa cairan atau gas). Fase gerak mengalir melalui fase diam dan membawa komponenkomponen yang terdapat dalam campuran. Pelaksanaan kromatografi lapis tipis (Gambar 6) menggunakan sebuah lapis tipis silika atau alumina yang seragam pada sebuah lempeng gelas atau logam atau plastik yang keras. Gel silika atau alumina merupakan fase diam. Fase diam untuk kromatografi lapis tipis seringkali juga mengandung substansi yang mana dapat berpendar dalam sinar ultra violet (UV). Fase gerak merupakan pelarut atau campuran pelarut yang sesuai (Kartasubrata 1987). Sebuah garis menggunakan pensil digambar dekat bagian bawah lempengan dan setetes pelarut dari campuran pewarna ditempatkan pada garis itu. Diberikan penandaan pada garis di lempengan untuk menunjukkan posisi awal dari tetesan. Jika ini dilakukan menggunakan tinta, pewarna dari

tinta akan bergerak selayaknya kromatogram dibentuk. Ketika bercak dari campuran itu mengering, lempengan ditempatkan dalam sebuah gelas kimia bertutup berisi pelarut dalam jumlah yang tidak terlalu banyak. Perlu diperhatikan bahwa batas pelarut berada di bawah garis dimana posisi bercak berada. Alasan untuk menutup gelas kimia adalah untuk meyakinkan bawah kondisi dalam gelas kimia terjenuhkan oleh uap dari pelarut. Selayaknya mendapatkan kondisi ini, dalam gelas kimia biasanya ditempatkan beberapa kertas saring yang terbasahi oleh pelarut. Kondisi jenuh dalam gelas kimia dengan uap mencegah penguapan pelarut. Karena pelarut bergerak lambat pada lempengan, komponenkomponen yang berbeda dari campuran pewarna akan bergerak pada kecepatan yang berbeda dan akan tampak sebagai perbedaan bercak warna (Kartasubrata 1987). Pelarut dapat mencapai sampai pada bagian atas dari lempengan. Ini akan memberikan pemisahan maksimal dari komponen-komponen yang berwarna untuk kombinasi tertentu dari pelarut dan fase diam. Perhitungan nilai Rf yang menunjukan kualitatif suatu senyawa, dilakukan dengan melihat perbedaan warna yang telah terbentuk dari campuran. Namun, sering kali pengukuran diperoleh dari lempengan untuk memudahkan identifikasi senyawa-senyawa yang muncul. Pengukuran ini berdasarkan pada jarak yang ditempuh oleh pelarut dan jarak yang tempuh oleh bercak warna masingmasing (Gambar 7a). Ketika pelarut mendekati bagian atas lempengan, lempengan dipindahkan dari gelas kimia dan posisi pelarut ditandai dengan sebuah garis, sebelum mengalami proses penguapan (Clark 2007). Nilai Rf untuk setiap warna dihitung dengan rumus sebagai berikut: Rf

= jarak yang ditempuh oleh komponen jarak yang ditempuh oleh pelarut

Jika sampel yang akan dianalisis tidak memiliki warna, maka terdapat dua cara, yaitu menggunakan pendaran fluor yang pada fase diam berupa sebuah lempengan lapis tipis memiliki substansi yang ditambahkan kedalamnya, supaya menghasilkan pendaran fluor ketika diberikan sinar ultraviolet (UV). Pendaran ini ditutupi pada posisi dimana bercak pada kromatogram berada, meskipun bercak-bercak itu tidak tampak berwarna jika dilihat dengan mata. Bercak tampak sebagai bidang kecil yang gelap bila berada di bawah sinar UV (Gambar 7b) (Kartasubrata 1987).

18

Penutup gelas

Gelas kimia

Pelat

Garis awal

Spot awal

Pelarut

Gambar 6 Perlengkapan kromatografi lapis tipis (Kartasubrata 1987).

Jarak oleh pelarut

Jarak oleh beberapa pelarut

(a)

Sinar UV

(b) Gambar 7 Tahap setelah penotolan sampel (a) Perbandingan Rf standar dengan Rf sampel (b) Lempengan di bawah sinar UV (Kartasubrata 1987). Cara yang kedua, yaitu dengan metode kimiawi. Beberapa keadaan, dimungkinkan untuk membuat bercak-bercak menjadi tampak dengan cara mereaksikannya dengan zat kimia sehingga menghasilkan produk yang berwarna. Sebuah contoh yang baik adalah kromatogram yang dihasilkan dari campuran

asam amino (Clark 2007). Kromatogram dapat dikeringkan dan disemprotkan dengan larutan ninhidrin. Ninhidrin bereaksi dengan asam amino menghasilkan senyawa-senyawa berwarna, umumnya coklat atau ungu (Gambar 8) (Kartasubrata 1987). Kromatogram dikeringkan kembali dan kemudian ditempatkan pada wadah bertutup (seperti gelas kimia dengan tutupan gelas arloji) bersama dengan kristal iodium. Uap iodium dalam wadah dapat berekasi dengan bercak pada kromatogram, atau dapat dilekatkan lebih dekat pada bercak daripada lempengan. Substansi yang dianalisis tampak sebagai bercak-bercak kecoklatan (Clark 2007). Cara bekerja kromatografi lapis tipis dengan menggunakan silika gel sebagai fase diam. Gel silika adalah bentuk dari silikon dioksida (silika). Atom silikon dihubungkan oleh atom oksigen dalam struktur kovalen yang besar. Atom silikon berlekatan dengan gugus –OH membentuk ikatan Si-O-H selain Si-O-Si pada permukaan gel silika (Gambar 9). Permukaan gel silika sangat polar dan karenanya gugus -OH dapat membentuk ikatan hidrogen dengan senyawa-senyawa yang sesuai disekitarnya, sebagaimana halnya gaya Van Der Waals dan atraksi dipol-dipol (Clark 2007). Ketika pelarut mulai membasahi lempengan, pelarut pertama akan melarutkan senyawa-senyawa dalam bercak yang telah ditempatkan pada garis dasar. Senyawasenyawa akan cenderung bergerak pada lempengan kromatografi sebagaimana halnya pergerakan pelarut. Cepat lambatnya senyawa-senyawa dibawa bergerak ke atas pada lempengan, tergantung pada beberapa faktor, yaitu: pertama, bagaimana kelarutan senyawa dalam pelarut. Hal ini bergantung pada bagaimana besar atraksi antara molekulmolekul senyawa dengan pelarut. Kedua, bagaimana senyawa melekat pada fase diam, misalnya gel silika. Hal ini tergantung pada bagaimana besar atraksi antara senyawa dengan gel silika. Ketiga, bercak awal mengandung dua senyawa, yang satu dapat membentuk ikatan hidrogen, dan yang lainnya hanya dapat mengambil sebagian interaksi Van Der Waals yang lemah (Harjadi 1976). Senyawa yang dapat membentuk ikatan hidrogen akan melekat pada gel silika lebih kuat dibanding senyawa lainnya, hal ini dapat dikatakan senyawa ini terjerap lebih kuat daripada senyawa yang lainnya. Penjerapan merupakan pembentukan suatu ikatan dari satu substansi pada permukaan.

19

Penjerapan bersifat tidak permanen, terdapat pergerakan yang tetap dari molekul antara yang terjerap pada permukaan gel silika dan yang kembali pada larutan dalam pelarut (Saeni 1989). Senyawa hanya dapat bergerak ke atas pada lempengan selama waktu terlarut dalam pelarut.

(a)

(b)

Gambar 8 Penyemprotan ninhidrin (a) Sebelum disemprot ninhidrin, (b) Setelah disemprot ninhidrin (Kartasubrata 1987).

Gambar 9 Struktur silika gel (Clark 2007). Spektroskopi Inframerah Transformasi Fourier (FTIR) Metode spektofotrometer mengukur jumlah radiasi elektromagnetik yang diserap oleh larutan contoh. Jumlah serapan ini berkaitan dengan konsentrasi analat dalam larutan. Terdapat tiga proses dasar penyerapan radiasi oleh molekul yang semuanya melibatkan kenaikan molekul ke tingkat energi yang lebih tinggi, yaitu rotasi, vibrasi, dan transisi elektronik (Christian 1986). Radiasi IR tidak memiliki cukup tinggi energi untuk menyebabkan transisi elektronik. Bila radiasi IR dilewatkan melalui suatu cuplikan, maka molekul akan menyerap energi sehingga terjadi vibrasi (Hendayana et al. 1994). Panjang gelombang serapan oleh suatu ikatan bergantung pada jenis getaran ikatan antar atom. Tipe ikatan yang berlainan akan menyerap radiasi IR pada panjang gelombang yang berbeda (Fessenden & Fessenden 1986). Vibrasi yang terjadi meliputi vibrasi ulur, dan tekuk dan dikenal beberapa istilah, yaitu rocking, twisting, scissoring, dan waging (Hollas 1994).

Spektrum IR terletak pada kisaran bilangan gelombang 12800-10 cm-1. Daerah 1400-4000 cm-1 merupakan daerah yang khusus untuk identifikasi gugus-gugus fungsional sedangkan daerah 1500-800 cm-1 merupakan daerah sidik jari (fingerprint region) (Murad et al 2006). Perbedaan struktur dan susunan molekul sedikit saja akan menyebabkan perubahan distribusi puncak serapan pada daerah sidik jari. Spektrum IR diperoleh dengan mengukur intensitas radiasi cahaya sebelum (Io) dan sesudah (I) melewati contoh. Spektrum IR ditampilkan dengan mengalurkan transmitans (T=I/Io) sebagai fungsi dari bilangan gelombang. Nilai transmitans dapat diganti dengan nilai serapan, yaitu sinar yang diserap oleh contoh. Serapan pada panjang gelombang tertentu dapat menghasilkan nilai konsentrasi contoh berdasarkan hukum Beer. Berdasarkan jenis aplikasi dan instrumentasi, spektrum IR dibagi ke dalam tiga jenis radiasi, yaitu IR dekat, pertengahan, dan jauh. FTIR (Gambar 12) termasuk dalam kategori radiasi IR pertengahan (bilangan gelombang 4000-200 cm-1) (Nur 1989). Berbeda dari spektroskopi dispersif, FTIR tidak mengukur panjang gelombang satu demi satu, melainkan dapat mengukur intensitas transmitans pada berbagai panjang gelombang secara serempak (Skoog et al. 1998). Monokromator prisma atau kisi yang dapat mengurangi energi sinar diganti dengan interferometer. Interferometer membuat spektrometer mampu mengukur semua frekuensi optik secara serempak dengan mengatur intensitas dari setiap frekuensi tunggal sebelum sinyal sampai ke detektor. Hasil dari interferometer yang berupa interferogram (plot antara intensitas dan posisi cermin) ini tidak dapat diinterpretasikan dalam bentuk aslinya. Proses transformasi Fourier akan mengubah interferogram menjadi spektrum antara intensitas dan frekuensi (George & Mclntyre 1987).

Gambar 10 Spektroskopi inframerah transformasi fourier (Setecltd 2009).

20

BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah rimpang temulawak, rimpang kunyit, daun meniran yang didapatkan dari kebun Pusat Studi Biofarmaka (PSB) bogor, etanol 96%, dan akuades. Selain itu, diperlukan bahanbahan berupa larva udang Artemia salina, air laut, kloroform, dimetil eter, aseton, dan KBr. Alat-alat yang digunakan adalah alat-alat gelas, maserator, oven, eksikator, cawan porselin, neraca analitik, pipet mikro, penguap putar Buchi R-114, kertas aluminium foil, tissue, evaporator, dan vial. Alat-alat lain yang diperlukan adalah spektroskopi inframerah transformasi fourier (FTIR), Kromatografi Lapis Tipis (KLT), pompa tekan, chamber, lampu ultraviolet (UV) 254 nm dan 366 nm, mortar agate, Erlenmeyer, dan pelat KLT. Metode Penentuan Kadar Air dari Sampel Basah dan Sampel Kering (AOAC 2006) Cawan porselin dikeringkan pada suhu 105oC. Cawan porselin yang dikeringkan kemudian didinginkan dalam eksikator dan ditimbang. Masing-masing sampel kering diambil sebanyak 2 gram sedangkan untuk sampel basah diambil sebanyak 3 gram dimasukkan dalam cawan dan dikeringkan pada suhu 105oC. Sampel ini berupa rimpang temulawak, rimpang kunyit, dan daun meniran. Proses ini dilakukan selama 6 jam. Sampel yang telah kering diambil dan didinginkan dalam eksikator dan ditimbang. Tahap ini dilakukan berulang sampai berat sampel konstan. Kadar air dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut: Kadarair 

Bobot sampel  Bobot ker ing  Bobot cawan  Bobot sampel

 100%

Ekstraksi Etanol Sampel Ekstrak Ramuan (Metode BPOM 2004) Sebanyak masing-masing sampel (rimpang temulawak, rimpang kunyit, dan meniran) dengan total 30 gram, dimasukkan ke dalam maserator. Setelah itu, sampel ditambah dengan etanol 96% sebanyak 150 mL agar larut. Larutan ini dikocok kemudian direndam selama 24 jam di ruangan gelap. Maserat yang diperoleh dipisahkan dan proses maserasi diulang sebanyak 2x. Semua maserat yang diperoleh dijadikan satu dan diuapkan menggunakan penguap putar Buchii R-114. Pembuatan ekstrak untuk sediaan herbal

ramuan dilakukan untuk 7 macam perlakuan, yaitu berdasarkan perbandingan bahan baku sampel. Perbandingan tersebut adalah 1:1:1; 1:1:0; 1:0:1; 0:1:1; 1:0:0; 0:1:0; 0:0:1 untuk daun meniran : rimpang kunyit : rimpang temulawak dengan bobot masing-masing sampel 10 gram. Uji Toksisitas dengan Metode BSLT (McLaughlin et al. 1998) Air laut dimasukkan dalam wadah kecil. Sedikit telur udang Artemia salina dimasukkan kedalam wadah kecil tersebut, diberi aerator, dan lampu untuk menarik udang. Setelah dua hari, telur udang akan menetas menjadi udang-udang kecil yang disebut nauplii dan siap digunakan untuk melakukan pengujian. Sepuluh ekor larva udang dimasukkan dalam vial yang didalamnya terdapat sampel uji dengan konsentrasi 10, 50, 100, 150, 200, 250, 500, 750 dan 1000 ppm. Setelah 24 jam, jumlah larva udang yang mati untuk tiap-tiap konsentrasi dihitung dan dicatat. Selanjutnya nilai LC50 dihitung melalui metode analisis probit dengan sofware SPSS. Suatu zat dikatakan aktif atau toksik bila nilai LC50 < 1000 ppm untuk ekstrak dan ≤ 30 ppm untuk suatu senyawa (Juniarti 2009) Profil Kromatogram KLT Ekstrak Terbaik (Fernand 2003) Pemilihan pelarut yang digunakan untuk fase gerak digunakan 3 pelarut yang merupakan pelarut menghasilkan hasil optimum bagi ketiga ekstrak ramuan yaitu kloroform, diklorometan, dan etanol. Sebanyak 10 mL masing-masing pelarut dimasukkan ke dalam bejana kromatografi dan dijenuhkan selama 20 menit. Setelah itu, pelat KLT yang berisi cuplikan dimasukkan ke dalam bejana kromatografi, pengembangan dilakukan hingga eluen (fase gerak) mencapai jarak ± 0.5 cm dari tepi atas pelat. Pelat diangkat dan dikeringkan. Identifikasi dilakukan untuk melihat bercak yang muncul pada pelat. Pelarut yang dipilih, yaitu yang memberikan penampakan bercak terbanyak dan memiliki pemisahan yang baik dengan mewakili sifat polar, semipolar, dan nonpolar. Ekstrak ramuan yang akan ditotolkan dilarutkan dengan etanol 96% hingga diperoleh konsentrasi 10000 mg/L. Chamber KLT diisi dengan eluen terbaik yang telah diuji serta dibiarkan selama 20 menit agar larutan menjadi jenuh. Pelat KLT yang telah ditotolkan kemudian dimasukkan ke dalam chamber berisi eluen. Eluen

21

dibiarkan naik sampai batas yang diharapkan. Kemudian KLT dikeluarkan dari chamber dan dikeringkan. Selanjutnya pelat KLT dimasukkan ke dalam gelas kimia yang berisi beberapa kristal iod. Noda atau bercak yang dihasilkan dideteksi menggunakan ultraviolet (UV) dengan panjang gelombang 254 nm dan 366 nm. Hasil yang diperoleh dihitung nilai Rfnya. Profil Spektrum FTIR Ekstrak Terbaik (Metode PSB) Setelah uji toksisitas selesai, diambil 3 fraksi paling baik yaitu ekstrak dengan nilai LC50 rendah. Ekstrak yang masih tersisa (sebagian digunakan untuk uji toksisitas), dikeringkan menggunakan evaporator. Ekstraksi yang diambil untuk dikeringkan adalah 45 mL untuk masing-masing sediaan herbal. Untuk ekstrak yang berasal dari sediaan herbal ramuan langsung dikeringkan menggunakan evaporator. Ekstrak kering yang dihasilkan kemudian ditimbang sebanyak 3 mg dan dicampur dengan 200 mg KBr. Campuran ini kemudian digerus menggunakan mortar agate sampai tercampur rata. Bahan yang sudah tercampur dimasukkan ke dalam cetakan dan ditutup rapat. Cetakan sampel dimasukkan ke dalam alat press yang tersambung dengan pompa tekan. Penekanan sampel menggunakan pompa tekan dilakukan selama 15 menit sampai terbentuk pelet. Pelet yang sudah jadi selanjutnya dianalisis menggunakan FTIR.

HASIL DAN PEMBAHASAN Kadar Air Hasil kadar air yang diperoleh (Tabel 1) menunjukkan bahwa sampel temulawak memiliki kadar air terbesar yaitu 15.14% dan kadar air terendah dimiliki oleh meniran yaitu sebesar 7.27%. Kadar air yang tinggi ini menunjukkan bahwa temulawak memiliki daya simpan yang relatif singkat dan mudah rusak oleh mikrob. Pertumbuhan mikrob ini dapat dikurangi dengan mengurangi kadar airnya. Hal tersebut dapat dilakukan dengan cara menyimpan serbuk temulawak dalam wadah dan tempat yang kering serta tidak lembab atau dengan memanaskan kembali serbuk temulawak sehingga kadar airnya dapat berkurang (Pratiwi 2009). Penyebab tingginya kadar air temulawak adalah akibat waktu yang digunakan ketika pengambilan sampel. Pengambilan sampel dilakukan pada bulan Februari yang

merupakan musim hujan yang berarti kandungan airnya semakin banyak. Selain itu, temulawak. Bentuk rimpang dari temulawak yang menyebabkan penyerapan air yang lebih banyak dibandingkan meniran yang berbentuk daun. Rimpang temulawak ini berukuran lebih besar dibandingkan rimpang kunyit yang mengakibatkan air yang bisa diserap pun makin besar. Alasan lain kadar air temulawak bernilai besar adalah metabolit sekunder temulawak mengikat air sehingga ketika dikeringkan yang hanya menggunakan sinar matahari, air yang terkandung di dalam rimpangnya tidak semuanya menguap. Air bebas saja yang menguap sedangkan air terikat tidak teruapkan semua. Fungsi dari penentuan kadar air ini yaitu untuk menyatakan kandungan zat dalam tumbuhan sebagai persen kering sehingga dapat diketahui kadar senyawa lain seperti vitamin dan mineral. Kegunaan lainnya adalah untuk mengetahui ketahanan suatu bahan dalam penyimpanan (Harjadi 1993). Sampel akan baik dalam penyimpanan jika memiliki kadar air kering kurang dari 10% (Winarno 1992). Pengeringan sampel dilakukan terlebih dahulu untuk menentuan kadar air sampel. Pengeringan ini dapat menyebabkan air dan minyak atsiri dalam bahan menguap sehingga berat bahan pun berkurang. Penguapan akan menyebabkan struktur jaringan menjadi keras karena sebagian besar air keluar dari jaringan (Marsudi 2004). Maksud dari pengeringan sampel adalah untuk menghindari pengaruh mikrob, karena kandungan air dalam suatu bahan akan mempengaruhi daya tahan terhadap serangan mikrob (Yani 2008). Pengeringan sampel dilakukan pada suhu 105oC dan dimasudkan agar air yang terkandung, yaitu air terikat dan air bebas di dalam sampel dapat menguap semuanya. Tabel 1 Kadar air meniran, kunyit, dan temulawak Sampel Kadar air kering Meniran 7.27% Kunyit 9.37% Temulawak 15.14% Ekstraksi Hasil rendemen ekstraksi (Tabel 2) menunjukkan bahwa hasil rendemen sampel dengan perbandingan 0:0:1 memiliki rendemen paling besar yaitu sebesar 29.3583%. Sampel ini hanya berisi temulawak saja. Rendemen yang besar ini disebabkan oleh jumlah minyak atsirinya yang

22

besar juga. Minyak atsiri yang dimiliki oleh temulawak sekitar 6-10% (Hadipoentyanti & Syahid 2007) sedangkan kunyit maksimal 6% (Samun 2008). Banyaknya kandungan minyak atsiri ini maka akan menyebabkan volume air yang ada semakin banyak (Sumarni 2008). Alasan lainnya yaitu pengaruh dari ketebalan dinding sel dan membran sel dari temulawak (Nurcholis 2008). Ekstraksi dengan maserasi menyebabkan pemecahan dinding sel dan membran sel akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar sel sehingga metabolit sekunder yang ada di dalam sitoplasma akan terlarut dalam pelarut etanol yang digunakan. Hal ini yang menentukan besar kecilnya rendemen yang dihasilkan dalam proses ekstraksi menggunakan metode maserasi, sehingga dapat dilihat bahwa temulawak yang memiliki dinding sel tipis mampu menghasilkan rendemen yang besar. Ukuran simplisia temulawak yang dihasilkan pun berpengaruh. Semakin kecil atau halus ukurannya maka rendemen yang dihasilkan pun semakin besar. Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi dan menggunakan pelarut etanol 96%. Pemilihan metode maserasi dilakukan karena bahan yang akan diekstrak zat aktifnya mudah larut dalam pelarut etanol dan tidak menggunakan suhu tinggi, hanya menggunakan suhu ruang saja (Nugraha 2008). Alasan lain digunakan metode maserasi adalah untuk memperkecil kerusakan sampel dan zat aktif karena metode ini tidak menggunakan panas sebagai katalisator dan tidak terjadi penguapan. Sedangkan pelarut etanol dipilih karena etanol diharapkan menghasilkan rendemen yang tinggi dibanding pelarut yang lain. Hal ini disebabkan karena etanol merupakan pelarut dengan tingkat kepolaran tinggi, sehingga dapat menarik bahan aktif yang terdapat pada sampel (Pratiwi 2009). Etanol absolut bersifat tidak beracun dan menghasilkan ektrak yang lebih murni dibandingkan dengan ekstraksi menggunakan etanol 70%. Hal yang perlu diperhatikan dalam melakukan ekstraksi adalah sampel yang harus disimpan dalam tempat gelap dan dilakukan pengadukan terlebih dahulu sebelum disimpan. Pengadukan berfungsi untuk meratakan konsentrasi di luar serbuk sampel sehingga dengan pengadukan tersebut perbedaan derajat konsentrasi yang sekecilkecilnya antara larutan di dalam sel dengan larutan di luar sel tetap. Penyimpanan pada ruangan gelap dilakukan karena sebagian sampel terdiri atas kunyit dan temulawak yang

memiliki kandungan kurkumin. Kurkumin ini sangat sensitif terhadap cahaya dan mudah terdegradasi strukturnya (Nugraha 2008). Tabel 2 Rendemen sampel Sampel Rendemen ± sd 1:1:1 18.14% ±0.0030 1:1:0 16.43% ±0.0086 1:0:1 15.87% ±0.0301 0:1:1 24.69% ±0.0144 1:0:0 7.68% ±0.0340 0:1:0 27.39% ±0.0106 0:0:1 29.36% ±0.0252 Uji Toksisitas Uji toksisitas dilakukan dengan menggunakan larva udang Artemia salina. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa sampel dengan perbandingan 1:1:1; 1:1:0; dan 0:1:1 memiliki potensi toksisitas yang tinggi (Tabel 3). Walaupun demikian tetap dapat dikatakan bahwa semua sampel memiliki potensi hayati yang tinggi karena menurut Juniarti (2009) menyatakan bahwa suatu zat dikatakan memiliki potensi hayati bila nilai LC50 <1000ppm untuk ekstrak sedangkan untuk senyawa murni nilai LC50≤30 ppm. Hasil perhitungan uji toksisitas dapat dilihat pada Lampiran 7. Dipilihnya Artemia salina untuk penelitian disebabkan karena hewan tersebut mampu bertahan dalam keadaan yang ekstrim. Selain itu, Artemia salina dapat mengatasi perubahan osmotik dan regulasi ionik yang tinggi (Croghan 1957). Larva udang Artemia ini memiliki toleransi terhadap selang salinitas yang sangat luas, mulai dari air tawar hingga air yang bersifat jenuh garam (Dyah 1991). Alasan lain yang menyebabkan dipilihnya larva ini sebagai hewan percobaan karena memiliki kulit membran yang tipis sehingga kematian satu larva karena efek toksik dari suatu senyawa dapat dianalogkan dengan kematian sebuah sel dalam organisme (Fenton 2002; Gad 2007). Tingginya potensi hayati dari sampel perbandingan 1:1:1; 1:1:0; dan 1:0:1 dapat disebabkan karena adanya sampel meniran di dalamnya. Di dalam meniran ini terdapat senyawa aktif berupa phyllantin (Gambar 11) yang termasuk golongan lignan. Berdasarkan nilai rendemennya maka meniran memiliki rendemen paling kecil tetapi memiliki senyawa aktif yang secara farmakologi tinggi. Sampel dengan perbandingan 0:1:1 potensinya masih lebih rendah karena dalam sampel tersebut hanya terdiri atas kunyit dan temulawak. Kedua sampel ini memiliki

23

senyawa yang sama yaitu kurkuminoid (Gambar 12a) hanya saja pada kunyit di dalam kurkuminoidnya terdapat bisdesmetoksikurkumin (Gambar 12b) dan menurut Sari (2007) cara kerja bisdesmetoksikurkumin bertolak belakang dengan kurkumin untuk sekresi empedu. Kurkuminoid temulawak lebih efektif dalam merangsang dinding kantong empedu untuk mengeluarkan cairan empedu supaya pencernaan lebih sempurna. Cara kerja yang bertolak belakang ini menyebabkan kedua sampel ini bukannya saling menguatkan tetapi saling antagonis. Sedangkan sampel dengan perbandingan 1:1:1 menghasilkan aktivitas yang paling baik ketika ada meniran yang didalamnya terdapat phyllantin. Hal ini berarti meniran dapat berfungsi sebagai potensiator karena mampu menghilangkan efek berlawanan yang terjadi pada temulawak dan kunyit. Tabel 3 Nilai LC50 sampel Sampel Rata-rata LC50 (ppm) 1:1:1 5.5377 1:1:0 16.3763 1:0:1 11.6243 0:1:1 16.7320 1:0:0 324.9060 0:1:0 20.7590 0:0:1 184.2500

Perbedaan yang sangat mendasar juga adalah pada temulawak terdapat xanthorizol yang tidak ditemui pada kunyit. Xanthorizol (Gambar 13) ini merupakan zat bioaktif yang memiliki aktivitas toksisitas (Nurcholis 2008) sehingga aktivitas ekstrak sampel dengan perbandingan 1:0:1 yang berisi meniran dan temulawak memiliki aktivitas toksisitas yang lebih tinggi dibandingkan ekstrak sampel dengan perbandingan 1:1:0 yang berisi meniran dan kunyit. Pembuatan ekstrak untuk uji toksisitas dilakukan dengan melarutkan ekstrak hasil maserasi dengan air laut. Air laut sendiri mengandung 3.5% garam yang terdiri atas klorida, sulfat, natrium, kalium, kalsium, magnesium, dan lain-lain (Priyotomo 2007). Air laut digunakan sebagai medium pertumbuhan Artemia salina karena larva Artemia salina hanya mampu hidup di air laut dengan kandungan nutrien yang cocok. Ekstrak hasil maserasi tidak berupa cairan tetapi berbentuk pasta yang sulit larut dalam air maka untuk melarutkannya harus dibantu dengan penggunaan tween80. Tween 80 disini berfungsi sebagai surfaktan (Sudjaswadi 2005).

Gambar 13 Struktur xanthorizol (Hwang 2000). Gambar 11 Struktur phyllantin (Sudarsono 1998). OCH3

OCH3 OH

HO

O

OH

(a) OH

HO

O

OH

(b) Gambar 12 Minyak atsiri temulawak (a) Struktur kurkumin, (b) Struktur bisdesmetoksikurkumin (Sirait 2002).

Profil Kromatogram KLT Ekstrak Terbaik Profil kromatogram KLT dilakukan untuk tiga ekstrak sampel terbaik yang memiliki potensi hayati yang rendah. Ketiga ekstrak terbaik ini memiliki hasil spot terbaik pada tingkat optimasi bervariasi (Tabel 4). Walaupun demikian besar optimasi yang didapat berkisar antar 60:40 dan 40:60. Sampel dengan perbandingan 1:1:1 memiliki optimasi pada perbandingan 40:60 dengan menghasilkan 11 spot untuk panjang gelombang 254nm. Sampel dengan perbandingan 1:1:0 menghasilkan optimasi pada perbandingan 60:40 yang menghasilkan 9 spot pada panjang gelombang 254nm. Optimasi tidak menggunakan perbandingan

24

40:60 karena pada perbandingan tersebut hanya menghasilkan 7 spot untuk panjang gelombang 254nm. Sedangkan untuk sampel 1:0:1 dapat menggunakan kedua perbandingan karena keduanya menghasilkan spot dengan jumlah yang sama. Tetapi lebih baik menggunakan perbandingan 60:40 karena menghasilkan pemisahan spot yang lebih jelas. Berdasarkan jumlah spot yang terbentuk maka dapat dikatakan bahwa semua sampel lebih baik dilihat menggunakan UV dengan panjang gelombang 254nm. Deteksi dengan menggunakan UV 366nm masih tetap perlu dilakukan karena dengan sinar UV ini pemisahan senyawa dapat terlihat dengan jelas. Hasil pemisahan pun dapat memperlihatkan kadar sampel yang diujicobakan. Semakin tebal spot yang dihasilkan maka kadar senyawa tersebut akan semakin tinggi. Sampel perbandingan 1:1:1 (Gambar 14 a dan b) menunjukkan bahwa meniran memiliki spot yang paling tebal yang berarti memiliki kadar yang tinggi. Kadar yang paling tinggi untuk meniran diduga berasal dari phyllantin sedangkan untuk temulawak dan kunyit diduga berasal dari kurkumin karena senyawa-senyawa tersebut merupakan senyawa penciri dari masingmasing sampel tersebut. Hal ini berarti bahwa phyllantin berperan paling besar untuk sampel 1:1:1 yang memiliki aktivitas toksisitas paling tinggi. Sampel kedua yang memiliki aktivitas toksisitas tinggi adalah sampel dengan perbandingan 1:0:1 (Gambar 16 a dan b). Sampel tersebut masih memiliki kadar phyllantin yang tinggi. Turunnya aktivitasnya disebabkan oleh kadar kurkuminoid yang tinggi juga. Sampel dengan perbandingan 1:1:0 (Gambar 15 a dan b) kadar setiap senyawa kecil dan kadar menirannya pun hanya kecil dan tipis dibanding kedua sampel yang lain. Besarnya nilai aktivitas toksisitas yang dimiliki juga dipengaruhi oleh adanya xanthorizol. Sampel dengan perbandingan 1:1:1 dan 1:0:1 mempunyai spot berwarna biru yang menandakan adanya xanthorizol (Sidik et al 1987). Spot biru yang dihasilkan untuk sampel perbandingan 1:1:1 lebih tebal daripada yang dihasilkan oleh sampel dengan perbandingan 1:0:1, yang berarti kadar xanthorizol sampel 1:1:1 lebih tinggi dibandingkan sampel dengan perbandingan 1:0:1. Maka nilai LC50 yang dihasilkan oleh sampel 1:1:1 pun lebih rendah. Bentuk profil yang dihasilkan menunjukkan bahwa semakin

tebal spot meniran dan adanya spot berwarna biru yang menandakan adanya xanthorizol maka nilai LC50 sampel akan semakin rendah. Hasil deteksi yang didapat terkadang menghasilkan spot yang miring atau tidak lurus. Hal ini disebabkan oleh penempatan pelat KLT ketika running pada dasar yang tidak lurus dan dapat disebabkan oleh pemotongan KLT yang tersendat-sendat.

(a)

(b)

Gambar 14 Kromatogram deteksi (a) UV 254nm optimasi sampel 1:1:1, (b) UV 366nm optimasi sampel 1:1:1

(a)

(b)

25

Gambar 15 Kromatogram deteksi (a) UV 254nm optimasi sampel 1:1:0, (b) UV 366nm optimasi sampel 1:1:1

(a)

(b)

Gambar 16 Komatogram deteksi (a) UV 254nm optimasi sampel 1:0:1, (b) UV 366nm optimasi sampel 1:0:1. Tabel 4 Optimasi KLT Sampel Optimasi 1:1:1 1:1:0 1:0:1 1:1:1 1:1:0 1:0:1

60:40

40:60

Jumlah spot 254nm 366nm 9 5 9 4 10 4 11 5 7 5 10 4

Pemilihan eluen dilakukan untuk melihat pemisahan terbaik untuk ekstrak sampel ramuan. Eluen yang dipilih adalah kloroform:diklorometan. Hal ini didasarkan karena ekstrak sampel ramuan terdiri atas meniran, kunyit, dan temulawak. Eluen yang digunakan untuk pemisahan meniran berdasarkan Puspita (2009) adalah kloroform : diklorometan dengan perbandingan 0.6553:0.3447, untuk kunyit menurut Miftahuddin (2010) adalah kloroform : diklorometan dengan perbandingan 67.5:32.5 sedangkan untuk temulawak menurut Fatmawati (2008) adalah kloroform. Dominan pemisahan yang menggunakan kloroform:diklorometan inilah yang menjadikan alasan dipilihnya penggunakan kedua eluen tersebut. Optimasi perbandingan eluen yang digunakan pun dilakukan. Perbandingan yang digunakan adalah 100:0; 10:90; 20:80; 30:70; 40:60; 50:50; 60:40; 70:30; 80:20; 10:90; dan 0:100.

Profil Spektrum FTIR Ekstrak Terbaik Ekstrak terbaik yang dipilih untuk dilihat profil spektrumnya adalah sampel dengan perbandingan 1:1:1; 1:1:0, dan 1:0:1 atau yang memiliki nilai LC50 rendah. Ekstrak yang dipilih sama dengan ekstrak yang digunakan untuk uji KLT. Hasil profil spektrum FTIR akan menunjukkan adanya gugus fungsi. Gugus-gugus fungsi ini ditunjukkan oleh puncak-puncak yang terbentuk dalam vibrasi (Tabel 5). Hasil dari analisis profil FTIR ini menunjukkan bahwa sampel dengan perbandingan 1:1:1 tidak memiliki gugus C≡C. Sampel dengan perbandingan 1:1:0 dan 1:0:1 memiliki gugus fungsi yang sama. Dilihat dari gugus fungsi yang didapat dan perbedaannya maka dapat dikatakan bahwa ketika ketiga ekstrak digabung menjadi satu dengan komposisi yang sama maka akan menghilangkan satu gugus fungsi. Hal ini mungkin karena adanya efek dari meniran yaitu aktivitas dari phyllantin yang sangat potensial yang dapat menstabilkan kunyit dan temulawak sehingga efek antara kunyit dan temulawak dapat berjalan tidak secara antagonis. Sampel dengan perbandingan 1:1:0 dan 1:0:1 memiliki gugus C≡C maka dapat dikatakan bahwa gugus tersebut berasal dari temulawak atau kunyit yaitu kurkuminoid yang kembali menguat. Akibat dari timbulnya gugus ini menyebabkan potensi pada uji toksisitas lebih rendah dibanding ketika semua dicampur. Aktivitas phyllantin yang besar mampu menghilangkan gugus penciri yang dimiliki oleh kurkuminoid. Sampel dengan perbandingan 1:0:1 (Gambar 19) walaupun memiliki jumlah phyllantin tebal yang terlihat pada spot KLT tidak mampu meniadakan gugus C≡C karena jumlah kurkuminoid yang dimiliki oleh temulawak pun banyak. Walaupun bentuk spektrum yang dihasilkan hampir sama dan gugus fungsinya pun hampir sama tetapi terdapat ciri khas yang dimiliki oleh setiap sampel. Sampel dengan LC50 paling rendah yaitu sampel dengan perbandingan 1:1:1 (Gambar 17) memiliki pola gugus C-H yang lebih berlekuk dan tidak terlalu curam kemudian memiliki bentuk yang landai rendah untuk puncak pola gugus C-H berikutnya. Sampel ini pun tidak memiliki gugus C≡C. Sampel dengan perbandingan 1:1:0 (Gambar 18) memiliki potensi aktivitas yang rendah. Jika dilihat dari pola spektrumnya, sampel ini memiliki pola gugus C-H yang tidak terlalu berlekuk dan tidak curam dan menghasilkan pola gugus C≡C

26

yang sangat memuncak. Hal ini diperkuat dari hasil puncak yang dihasilkan. Kurkuminoid memiliki daerah puncak serapan antara 1628-1429cm-1 sedangkan xanthorizol memiliki daerah puncak serapan 3300, 1453, 1123, dan 856 cm-1 (Sidik et al 1987). Semakin runcing spekrumnya maka konsentrasinya semakin tinggi. Aktivitas LC50 sampel perbandingan 1:1:0 lebih tinggi dibandingkan sampel dengan perbandingan 1:0:1 dapat disebabkan oleh kurkuminoid yang banyak. Jumlah yang banyak ini dapat dilihat dari spektrum yang bentuknya lebih runcing dibanding sampel dengan perbandingan 1:0:1. Sampel meniran:temulawak memiliki puncak runcing tetapi tidak sebanyak sampel meniran:kunyit. Tabel 5 Gugus fungsi tiga ekstrak terbaik Sampel Vibrasi Ulur Puncak Gugus (cm-1) Serapan Fungsi 1:1:1 3600-3200 3391.49 O-H 2900-2720 2925.80 C-H dan 2728.90 1650-1510 1513.46 C=C 1:1:0 3750-3100 3380.36 O-H 2900-2700 2926.39 C-H 2300-2100 2345.88 C≡C 1650-1510 1513.07 C=C 1:0:1 3500-3200 3390.22 O-H 2900-2700 2925.79 C-H dan 2728.90 2400-2200 2360.52 C≡C 1600-1510 1513.54 C=C

Gambar 17 Profil spektrum sampel 1:1:1.

Gambar 18 Profil spektrum sampel 1:1:0.

Gambar 19 Profil spektrum sampel 1:0:1.

SIMPULAN DAN SARAN Simpulan Tiga ekstrak terbaik yang dihasilkan adalah ekstrak dengan perbandingan meniran: kunyit: temulawak, yaitu 1:1:1; 1:1:0; dan 1:0:1 dengan hasil LC50 berturut-turut 5.5377 ppm, 16.3763 ppm, dan 11.6243 ppm. Hasil KLT menunjukkan bahwa semakin tebal spot yang dihasilkan maka potensi hayati yang dihasilkan pun semakin baik. Hasil analisis FTIR menunjukkan bahwa sampel dengan perbandingan 1:1:1 memiliki gugus fungsi OH, C-H, dan C=C, sampel dengan perbandingan 1:1:0 dan 1:0:1 memiliki gugus fungsi yang sama yaitu O-H, C≡C, dan C=C. Saran Perlu dilakukan pengujian lanjut untuk identifikasi senyawa apa saja yang terdapat pada ekstrak ramuan meniran, kunyit, dan temulawak sehingga dapat diketahui senyawa apa yang paling berperan dalam ekstrak ramuan ini. Selain itu, perlu dicoba kembali dengan mengganti komposisi formula ramuan dan dilihat apakah mempunyai efek yang sama atau tidak.

27

DAFTAR PUSTAKA Afifah E, Tim Lentera. 2003. Khasiat dan Manfaat Temulawak: Rimpang Penyembuh Aneka Penyakit. Jakarta: Agromedia Pustaka. [AOAC] The Association of Official Analytical Chemist. 2006. Official Method of Analysis. Ed ke-18. Washington DC: Assosiation of Official Analytical Chemistry. [BPOM] Badan Pengawas Obat dan Makanan. 2004. Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat Indonesia. Jakarta: BPOM RI. Balazs T. 1870. Measurement of Acute Toxicity. Dalam GE Paget (Penyunting). Methods in Toxicology. Edinburg: Blackwell Scientific. Bannink EO. 2009. Introduction to Applications of Traditional Chinese Medicine. Oakland: Bloomfield Hills. Christian GD. 1986. Analytical Chemistry. Ed ke-4. New York: John Wiley & Sons. Clark J. 2007. Thin layer chromatrogaphy. [terhubung berkala]. http://che-mistry.org./tlc/situ.html. [3 September 2009]. Croghan PC. 1957. The osmotic and ionic regulation of Artemia salina. Zoology Journal 10: 219-232. Dyah SH. 1991. Pembenihan udang galah (Macrobrahium rosenbergii de Man). [laporan kerja praktek]. Bandung Fakultas Biologi, Institut Teknologi Bandung. Fathiawati. 2008. Uji toksisistas ekstrak daun Ficus racemosa L terhadap Artemia salina Leach dan profil kromatografi lapis tipis [skripsi]. Surakarta: Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiah Surakarta. Fatmawati DA. 2008. Pola protein dan kandungan kurkumoid rimpang temulawak (Curcuma xanthorriza Roxb.) [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Fenton JJ. 2002. Toxicology: A Case-Oriented Approach. Boca Raton: CRC Pr. Fernand VE. 2003. Initial characterization of crude extracts from Phyllanthus amarus Schum. And Thonn. and Quassia amara

L. Using normal phase thin layer chromathography [tesis]. Lousiana: Program Pascasarjana, University of Suriname. Fessenden, Fessenden. 1986. Kimia Organik Jilid 1. Ed ke-3. Pudjamaatmaka AH, penerjemah. Jakarta: Erlangga. Terjemahan dari Organic Chemistry. Finney DJ. 1971. Probit Analysis 3rd ed. New York: Cambridge University Pr. Frank CL. 1995. Toksikologi Dasar. Edi, penerjemah. Jakarta: UI Pr. Terjemahan dari Basic of Toxicology. Gad SC. 2007. Animal Models in Toxicology: 2ndEdition. Boca Raton: CRC Pr. George B, Mclntyre P. 1987. Infrared Spectroscopy. London: John Wiley & Sons. Gunawan I, Bawa I, Sutrisnayanti N. 2008. Isolasi dan identifikasi senyawa terpenoid yang aktif antibakteri pada herba meniran (Phyllanthus niruri Linn). Jurnal Kimia I2: 31-39. Hadipoentyanti E, Syahid F. 2007 . Respon temulawak (Curcuma xanthorrhiza Roxb) hasil rimpang kultur jaringan generasi kedua terhadap pemupukan. Jurnal Littri 13: 106-110. Harjadi W. 1976. Ilmu Kimia Analitik. Bogor: IPB Pr. _________. 1993. Ilmu Kimia Analitik Dasar. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama. Hendayana S, Kadorohman A, Sumarna AA, Supriatna A. 1994. Kimia Analitik Instrumen. Ed ke-1. Semarang: IKIP Semarang Pr. Hidayat T et al.. 2008. Analisis filogenik molekuler pada Phyllanthus niruri L. (Euphorbiaceae) menggunakan urutan baa DNA daerah Internal Transcribe Spacer (ITS). Jurnal Matematika dan Sains 13: 16-21. Hollas JM. 2004. Modern Spectroscopy. Ed ke-4. New York: J Wiley. Hudayadi M. 2008. Efek antidiare ekstrak etanol rimpang kunyit (Curcuma domestica Val.) pada mencit jantan galur Swiss webster [skripsi]. Surakarta: Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiah Surakarta.

28

Hwang J. 2000. Antibacterial composition having xanthorizzol. Food Phytochemical for Cancer Prevention 547: 237-243. Hylands PJ. 2009. Chemometric and metabonomic in studies on traditional chinese medicine [abstrak]. Di dalam: The 1st World Conference on the Pharmacology of Natural and Traditional Medicines; Hangzhou, 9-12 Sep 2009. Hangzhou: Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology. hlm 287. Abstr no 11. Istafid W. 2006. Visibility studi minuman instan ekstrak temulawak dan ekstrak mengkudu sebagai minuman kesehatan [skripsi]. Semarang: Fakultas Teknik, Universitas Negeri Semarang. Juniarti, Osmeli D, Yuhernita. 2009. Kandungan senyawa kimia, uji toksisitas (brine shrimp lethality test) dan antioksidan(1,1-diphenyl-2-pikrilhydrazyl) dari ekstrak daun saga (Abrus precatorius L.). Makara Sains 13:50-54. Kanwar A. 2007. Brine shrimp (Artemia salina) a marine animal for simple and rapid biological assays. Journal of Chinese Clinical Medicine 2: 236-240. Katno, Pramono S. 2003. Tingkat Manfaat dan Keamanan Tanaman Obat dan Obat Tradisional. Yogyakarta: Balai penelitian tanaman obat tawangmangu. Kartasubrata Y. 1987. Dasar-dasar kromatografi. Makalah pada Kursus Metode Analisis Instrumental. Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia 15:1-17 hlm.[terhubung berkala]. http://lipichemistry-/bandung/html. [20 Agustus 2009]. Kertia N et al.. 2005. Pengaruh pemberian kombinasi minyak atsiri temulawak dan ekstrak kunyit dibandingkan dengan piroksikam terhadap angka leukosit cairan sendi penderita dengan osteoartritis lutut. Farmasi Indonesia 16: 155-161. Kusumaningrum OD. 2008. Uji aktivitas antipiretik infusa rimpang kunyit (Curcuma domestica Val) pada kelinci putih jantan galur New Zealand [skripsi]. Surakarta: Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiah Surakarta. Krismawati A, Sabran M. 2004. Pengelolaan sumber daya genetik tanaman obat spesifik

Kalimantan Tengah. Nuftah 12: 16-23

Buletin

Plasma

Kurniastuty A. 2008. Pengaruh pemberian fraksi etil asetat etanol 70% herba meniran (Phyllanthus nururi L.) terhadap penurunan kadar asam urat mencit putih jantan galur Balb-C hiperurisemia [skripsi]. Surakarta: Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiah Surakarta. Marsudi F. 2004. Pengaruh cara pengeringan dan pencelupan dalam dipsol, netrium metabisulfit dan magnesium hidroksida terhadap kualitas bubuk cabai kering giling. Buletin Agro Industri 17: 21-30. McLaughlin JL, Rogers LL, Anderson JE. 1998. The use of biological assays to evalute botanicals. J Drug Inform 32: 513524. Miftahuddin A. 2010. Diferensiasi temulawak, kunyit, dan bangle berdasarkan pola pemisahan senyawa menggunakan kromatografi lapis tipis [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Murad AA, Lin M, Cavinato AG, Rasco BA. 2006. The use of Forurier transform infrared spectroscopy to differentiate Escherichia Coli O157: H7 from other bacteria inoculate into apple juice. J food Microb 23: 162-168. Nugraha YA. 2008. Analisis kadar kurkumin pada temulawak dengan metode Badan Pengawas Obat dan Makanan (BPOM) [laporan praktik lapang]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Nugroho N, Malau DP, Rokhmanto F, Laili N. 2008. Pengaruh suhu ekstraksi terhadap kandungan kurkumoid dan air serbuk temulawak (Curcuma xanthorrhiza). Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia 6: 1-18. Nunes B, Carvaldo F, Guilhermino L, Stappen G. 2006. Use of the genus Artemia inecotoxicity testing. Enviroment Pollution 144:453-462. Nur MA. 1989. Spektroskopi. Bogor: IPB Pr. Nurcholis W. 2006. Kandungan xanthorrizol temulawak (Curcuma xanthorriza Robx) pada berbagai cara budidaya dan masa tanam [skripsi]. Bogor: : Fakultas

29

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor.

http://www.setecltd.kr/product/spectro/ftr i.htm [9 Februari 2010].

_________. 2008. Profil senyawa penciri bioaktivasi tanaman temulawak pada agrobiofisik berbeda [tesis]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.

Sidik, Moelyono, Muhtadi A. 1987. Temulawak. Jakarta: Yayasan pengembangan obat bahan alam.

Novara R. 2009. Pengembangan sediaan obat herbal. [terhubung berkala] http://pharmaedu.wordpress.com [6 Maret 2010]. Pratiwi E. 2009. Aktivitas antioksidan ekstrak dan fraksi aktif temukunci (Boesenbergia pandurata Roxb.) [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Priyotomo G. 2007. Kandungan umum air laut. [terhubung berkala] http://gadang-ebookformaterialscience.blogspot.com/200 7/12/info-kandungan-umum-air-laut. html [7 juni 2009]. Puspita MDA. 2009. Pengoptimuman fase gerak KLT menggunakan desain campuran untuk pemisahan komponen ekstrak meniran (Phyllanthus niruri) [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Rustam E, Atmasari I, Yanwirasti. 2007 Efek antiinflamasi etanol kunyit (Curcuma domestica Val.) pada tikus putih jantan galur wistar. Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi 2:112-115. Saeni MS. 1989. Kimia Fisik I. Bogor: IPB Pr. Samun. 2008. Koefisien transfer massa volumetris ekstraksi zat warna alami rimpang kunyit (kurkuminoid) di dalam tangki berpengaduk [skrpsi]. Surakarta: Fakultas Teknik Kimia Mesin, Universitas Sebelas Maret. Sari Y. 2007. Kajian proses pengayaan virgin coconout oil dengan ekstrak zat pigmen dari temulawak, kunyit, dan angkak serta aplikasinya pada penggorengan bahan pangan [skripsi]. Bogor: Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Setecltd. 2009. Oil analisis optical spectometer for wear particel analysis. [terhubung berkala]

Sirait M. 2002. Kurkuminoid kompleks yang lebih mudah larut dan warna yang stabil, proses perolehan serta komposisi farmasinya. Bogor: Balai Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik. ______. 2008. Penggunaan berbagai jenis tanaman obat untuk menanggulangi bau badan. Warta penelitian dan Pengembangan Tanaman Industri 3: 811. Skoog DA, Holler PJ, Nierman TA. 1998. Principles of Instrumental Analysis. Ed ke5. Philadelphia: Harcaurt Brace. Sudarsono. 1998. Tumbuhan Obat Indonesia. Yogyakarta: PPOT UGM. Sukandar E. 2004. Tren dan Paradigma Dunia Farmasi Industri – Klinik Teknologi Kesehatan. Bandung: ITB Pr. Sukardiman. 2009. Komisi Pengembangan Obat Tradisional. Surabaya: Unair Pr. Sumarni, Aji N, Solekan. 2008. Pengaruh volume air dan berat bahan pada penyulingan minyak atsiri [skripsi]. Yogyakarta: Fakultas Teknologi Industri, Institut Sains & Teknologi AKPRIND Yogyakarta. Syafri R. 2009. Pemanfaatan Tumbuhan dan Pengobatan. Palembang: Balai Besar Pengawasan Obat. Widyastuti S. 2008. Uji toksisitas ekstrak daun iprih (Ficus glabella Blume) terhadap Artemia salina Leach dan profil kromatografi lapis tipis [skripsi]. Surakarta: Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta. Winarno FG. 1997. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama. Yani A. 2008. Infeksi cendawan pada biji kopi selama proses pengolahan primer (studi kasus di propinsi Bengkulu). Jurnal Argo Agrosia 11:87-95. Xu J, Yang Y. 2009. Traditional chinese medicine in chinese health care system. Health Policy 90:133-13.

30

LAMPIRAN

31

Lampiran 1 Alur penelitian Rimpang temulawak, rimpang kunyit, dan meniran basah Dikeringkan dan dioven

Simplisia

Ramuan ekstrak 1:1:1; 0:1:1; 1:1:0; 1:0:1; 1:0:0; 0:1:0; dan 0:0:1

Ekstraksi

Uji Toksisitas LC50

Analisis Data LC50

Tiga Ekstrak Terbaik

Analisis Profil Kromatogram dengan KLT

Analisis Profil Spektrum dengan FTIR

Analisis Data Kromatogram KLT

Analisis Data Spekrum FTIR

32

Lampiran 2 Kadar air kering Sampel

Ulangan

Cawan kosong (gr)

Berat sampel (gr)

Meniran

1 2 3

21.2115 22.7087 22.5356

2.0149 2.0087 2.0028

Bobot setelah pemanasan 23.0778 25.5710 24.3937

1 2 3

22.5613 24.4034 21.2668

2.0045 2.0029 2.0041

24.2732 26.1086 22.9516

1 2 3

22.4643 26.4518 21.1474

2.0081 2.0017 2.0025

24.2904 28.2534 22.9686

Rata-rata Kunyit

Rata-rata Temulawak

Rata-rata

Contoh perhitungan kadar air kering:

Kadarair 

Bobot sampel

2.0149  (23.0788  21.2115)  100% 2.0149  7.32%

Kadarair  Kadarair

Bobot sampel  Bobot ker ing  Bobot cawan 

 100%

% kadar air kering 7.32 7.29 7.20 7.27 14.59 14.89 15.93 15.14 9.06 9.99 9.05 9.37

33

Lampiran 3 Kadar air basah Sampel

Ulangan

Cawan kosong (gr)

Berat sampel (gr)

Meniran

1 2 3

3.4075 3.4505 3.3350

3.0144 3.0166 3.0023

Bobot setelah pemanasan 4.2733 4.2986 4.1533

1 2 3

3.5203 3.4839 3.3046

3.0233 3.0584 3.0194

3.5949 3.6931 3.7212

1 2 3

3.5526 3.5294 3.5054

3.0507 3.0338 3.0584

3.8283 3.7652 3.7178

Rata-rata Kunyit

Rata-rata Temulawak

Rata-rata

Contoh perhitungan kadar air basah: Kadarair 

Bobot sampel

3.0144  (4.2733  3.4075)  100% 3.0144  71.28%

Kadarair  Kadarair

Bobot sampel  Bobot ker ing  Bobot cawan 

 100%

% kadar air kering 71.28 71.88 72.74 71.97 97.52 93.14 86.20 92.29 90.96 92.23 93.06 92.08

34

Lampiran 4 Rendemen ekstrak Sampel

Ulangan

1:1:1

Rata-rata 1:1:0

Rata-rata 1:0:1

Rata-rata 0:1:1

Rata-rata 1:0:0

Rata-rata 0:1:0

Rata-rata 0:0:1

1 2 3

Total bobot sampel (gr) 30.0129 30.0242 30.0122

Ekstrak (gr) 5.4656 5.3491 5.5247

1 2 3

30.0243 30.0207 29.9920

4.8420 5.2216 4.7254

1 2 3

29.9945 29.9524 29.9614

5.4144 5.1298 3.7269

1 2 3

29.9964 30.0019 30.0074

6.9858 7.3849 7.8512

1 2 3

30.0901 29.9412 30.0137

2.2597 1.8626 2.7932

1 2 3

30.0137 30.0145 30.0051

8.1516 7.9443 8.5684

1 2 3

30.0137 30.0084 30.0063

8.5584 9.9955 7.8778

Rata-rata

Contoh perhitungan rendemen ekstrak:

% Re ndemen 

Ekstrak  100% Bobot awal

5.4656  100% 30.0129 % Re ndemen  18.21% % Re ndemen 

% rendemen ± sd 18.21 17.82 18.41 18.14 ± 0.0030 16.13 17.39 15.76 16.43 ± 0.0086 18.05 17.13 29.96 15.87 ± 0.0301 23.29 24.61 26.16 24.69 ± 0.0144 7.51 6.22 9.30 7.68 ± 0.0340 27.16 26.47 28.56 27.39 ± 0.0106 28.51 33.31 26.25 29.36 ± 0.0252

35

Lampiran 5 Nilai LC50 ekstrak sampel Sampel 1:1:1

1:1:0

1:0:1

0:1:1

1:0:0

0:1:0

0:0:1

Ulangan 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3

LC50 8.012 3.053 5.548 23.457 17.598 8.074 11.391 0.025 23.457 20.822 23.457 5.917 303.066 269.970 401.688 15.898 18.470 27.909 152.864 90.500 309.386

Rata-Rata LC50 5.5377

16.3763

11.7350

16.7320

324.9060

20.7590

184.2500

36

Lampiran 6 Optimasi KLT Nama Sampel

Meniran: Kunyit: Temulawak (1:1:1)

Perbandingan pelarut (Kloroform:Dikl orometana) 100:0

spot

0.89; 0.82; 0.73; 0.37; 0.24; 0.13; 0.09; 0.05

8

90:10

0.91; 0.86; 0.78; 0.71; 0.35; 0.21; 0.12; 0.05

8

80:20

0.95; 0.88; 0.79; 0.74; 0.46; 0.33; 0.25; 0.18; 0.12; 0.05 0.95; 0.90; 0.78; 0.36; 0.26; 0.22; 0.13; 0.05 0.95; 0.84; 0.77; 0.41; 0.34; 0.26; 0.20; 0.13; 0.05 0.84; 0.28; 0.21; 0.16; 0.11; 0.05 0.94; 0.86; 0.80; 0.75; 0.69; 0.43; 0.23; 0.15; 0.12; 0.08; 0.05 0.79; 0.70; 0.57; 0.23, 0.15; 0.11; 0.08; 0.04

10

0.79; 0.72; 0.58; 0.21; 0.13; 0.08; 0.03 0.75; 0.64; 0.50; 0.20; 0.12; 0.08; 0.04 0.80; 0.67; 0.50; 0.13; 0.05 0.89; 0.82; 0.34; 0.10; 0.04

7

0.85; 0.75; 0.33; 0.11; 0.03 0.94; 0.90; 0.80; 0.71; 0.31; 0.12; 0.06 0.93; 0.88; 0.79; 0.70; 0.37; 0.24; 0.15; 0.06 0.92; 0.86; 0.79; 0.73; 0.55; 0.29; 0.17; 0.11; 0.05

70:30 60:40

50:50 40:60

30:70

20:80 10:90 0:100 Meniran: Kunyit: Temulawak (1:1:0)

Deteksi 254 nm Rf

100:0

90:10 80:20 70:30 60:40

Deteksi 366 nm Rf Spot

0.82; 0.53; 0.46; 0.37; 0.24; 0.16; 0.13; 0.05 0.88; 0.50; 0.45; 0.35; 0.22; 0.16; 0.13; 0.05 0.91; 0.75; 0.43; 0.35; 0.21; 0.13; 0.07 0.90; 0.70; 0.35; 0.14; 0.05 0.91; 0.67; 0.34; 0.13; 0.05

8

0.48; 0.29; 0.12; 0.05 0.81; 0.43; 0.23; 0.07; 0.02

4

0.71; 0.32; 0.27; 0.23; 0;15; 0.11; 0.05 0.71; 0.28; 0.21; 0.12; 0.08; 0.03 0.63; 023; 0.20; 0.10; 0.08; 0.04 0.14; 0.06; 0.03

7

5

0.78; 0.50; 0.31; 0.17; 0.09; 0.02

6

5

0.75; 0.46; 0.34; 0.11; 0.05 0.76; 0.38; 0.32; 0.13; 0.07 0.73; 0.42; 0.37; 0.16; 0.07 0.59; 0.30; 0.11; 0.05

5

8 9

6 11

8

7 5

7 8 9

8

7

5 5

5

6 6 3

5 5 4

37

Lampiran 6 (lanjutan) Nama Sampel

Meniran: Kunyit: Temulawak (1:1:0)

Perbandiingan pelarut (Kloroform:di klorometan) 50:50

Deteksi 366nm Rf Spot

0.88; 0.81; 0.73; 0.52; 0.29; 0.16; 0.13; 0.04

8

0.50; 0.30; 0.13; 0.06

4

0.87; 0.77; 0.69; 0.59; 0.28;0.15; 0.05 0.92; 0.78; 0.16; 0.10; 0.04 0.92; 0.78; 0.68; 0.56; 0.21; 0.08 0.94; 0.80; 0.72; 0.57; 0.22; 0.20; 0.06 0.72; 0.60; 0.45; 0.16; 0.05 0.85; 0.75; 0.68; 0.26; 0.16; 0.09; 0.04

7

0.27; 0.16; 0.10; 0.05; 0.02

5

5

0.18; 0.13; 0.06; 0.04 0.27; 0.20; 0.10; 0.07; 0.02 0.26; 0.22; 0.11; 0.09; 0.05

4

0.20; 0.17; 0.06; 0.05 0.71; 0.40; 0.25; 0.13; 0.07; 0.02

4

90:10

0.92; 0.83; 0.78; 0.40; 0.15; 0.05

6

8

80:20

0.92; 0.83; 0.77; 0.39; 0.30; 0.24; 0.15; 0.06 0.91; 0.87; 0.76; 0.68; 0.34; 0.28; 0.22; 0.16; 0.06 0.96; 0.88; 0.84; 0.77; 0.68; 0.36; 0.27; 0.21; 0.15; 0.05 0.81; 0.74; 0.66; 0.42; 0.20; 0.07; 0.07; 0.03 0.93; 0.88; 0.80; 0.75; 0.51; 0.31; 0.21; 0.17; 0.12; 0.04 0.90; 0.79; 0.72; 0.39; 0.26; 0.17; 0.10; 0.04 0.89; 0.77; 0.67; 0.53; 0.24; 0.17; 0.10; 0.06; 0.03

8

0.84; 0.55; 0.47; 0.39; 0.26; 0.18; 0.15; 0.06 0.79; 0.48; 0.39; 0.16; 0.06

9

0.70; 0.40; 0.35; 0.13; 0.05

5

10

0.69; 0.36; 0.15; 0.06

4

8

0.42; 0.20; 0.07; 0.04

4

10

0.53; 0.33; 0.13; 0.06

4

8

0.38; 0.26; 0.10; 0.04

4

9

0.24; 0.18; 0.09; 0.06; 0.03

5

40:60

30:70 20:80 10:90

0:100 Meniran: Kunyit: Temulawak (1:0:1)

Deteksi 254nm Rf Spot

100:0

70:30

60:40

50:50

40:60

30:70

20:80

6 7

5 7

5 5

6

5

38

Lampiran 6 (lanjutan) Nama Sampel

Meniran: Kunyit: Temulawak (1:0:1)

Perbandiingan pelarut (Kloroform:di klorometan) 10:90

0:100

Deteksi 254nm Rf Spot

Deteksi 366nm Rf Spot

0.96; 0.84; 0.75; 0.22; 0.08; 0.03

6

0.29; 0.24; 0.12; 0.09; 0.04

5

0.81; 0.70; 0.53; 0.20; 0.10; 0.07; 0.02

7

0.19; 0.06; 0.02

3

39

Lampiran 7 Optimasi KLT Sampel 1:1:1 dengan Panjang Gelombang 254nm

Keterangan: 1 Kloroform: diklorometan (100:0), 2 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (80:20), 4 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (60:40), 6 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (40:60), 8 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (20:80), 10 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (0:100).

(90:10), 3. (70:30), 5 (50:50), 7 (30:70), 9 (10:90), 11

40

Lampiran 8 Optimasi KLT Sampel 1:1:1 dengan Panjang Gelombang 366nm

Keterangan: 1 Kloroform: diklorometan (100:0), 2 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (80:20), 4 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (60:40), 6 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (40:60), 8 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (20:80), 10 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (0:100).

(90:10), (70:30), (50:50), (30:70), (10:90),

3. 5 7 9 11

41

Lampiran 9 Optimasi KLT Sampel 1:1:0 dengan Panjang Gelombang 254nm

Keterangan: 1 Kloroform: diklorometan (100:0), 2 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (80:20), 4 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (60:40), 6 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (40:60), 8 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (20:80), 10 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (0:100).

(90:10), (70:30), (50:50), (30:70), (10:90),

3. 5 7 9 11

42

Lampiran 10 Optimasi KLT Sampel 1:1:0 dengan Panjang Gelombang 366nm

Keterangan: 1 Kloroform: diklorometan (100:0), 2 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (80:20), 4 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (60:40), 6 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (40:60), 8 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (20:80), 10 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (0:100).

(90:10), 3. (70:30), 5 (50:50), 7 (30:70), 9 (10:90), 11

43

Lampiran 11 Optimasi KLT Sampel 1:0:1 dengan Panjang Gelombang 254nm

Keterangan: 1 Kloroform: diklorometan (100:0), 2 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (80:20), 4 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (60:40), 6 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (40:60), 8 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (20:80), 10 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (0:100).

(90:10), (70:30), (50:50), (30:70), (10:90),

3. 5 7 9 11

44

Lampiran 12 Optimasi KLT Sampel 1:0:1 dengan Panjang Gelombang 366nm

Keterangan: 1 Kloroform: diklorometan (100:0), 2 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (80:20), 4 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (60:40), 6 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (40:60), 8 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (20:80), 10 Kloroform: diklorometan Kloroform: diklorometan (0:100).

(90:10), (70:30), (50:50), (30:70), (10:90),

3. 5 7 9 11

45

Lampiran 13 Spektrum FTIR

A

B

C Keterangan: (A) Sampel perbandingan 1:1:1, (B) Sampel Perbandingan 1:1:0, (C) Sampel Perbandingan 1:0:1