SPIRULINA PLATENSIS MENCEGAH PENURUNAN KOMPONEN DARAH PERIFER PADA TIKUS (RATTUS NORVEGICUS) YANG DIBERIKAN CYCLOPHOSPAMIDE

TESIS

SPIRULINA PLATENSIS MENCEGAH PENURUNAN KOMPONEN DARAH PERIFER PADA TIKUS (RATTUS NORVEGICUS) YANG DIBERIKAN CYCLOPHOSPAMIDE

RATNA SARI DEWI

PROGRAM PASCASARJANA UNIVERSITAS UDAYANA DENPASAR 2014 1

2

TESIS


RATNA SARI DEWI NIM 0814048201

PROGRAM MAGISTER PROGRAM STUDI ILMU BIOMEDIK PROGRAM PASCASARJANA UNIVERSITAS UDAYANA DENPASAR 2014

3


Tesis untuk Memperoleh Gelar Magister Pada Program Magister, Program Studi Ilmu Biomedik, Program Pascasarjana Universitas Udayana

RATNA SARI DEWI NIM 0814048201

PROGRAM MAGISTER PROGRAM STUDI ILMU BIOMEDIK PROGRAM PASCASARJANA UNIVERSITAS UDAYANA DENPASAR 2014

4

Lembar Pengesahan

TESIS INI TELAH DISETUJUI PADA TANGGAL 20 FEBRUARI 2014

Pembimbing I,

Prof. dr. I Gusti Made Aman, Sp.FK NIP 1945 0619 197602 1 001

Pembimbing II,

dr. Tjokorda Gde Dharmayuda, Sp.PD, KHOM NIP 1956 0621 198312 1 001

Mengetahui

Ketua Program Magister Ilmu Biomedik Program Pascasarjana Universitas Udayana,

Prof. Dr. dr. Wimpie Pangkahila, Sp.And.FAACS NIP: 19461213 197107 1 001

Direktur Program Pascasarjana Universitas Udayana,

Prof. Dr. dr. AA. Raka Sudewi, Sp.S (K) NIP: 19590215 198510 2 001

5

Tesis Ini Telah Diuji Pada Tanggal 28 Februari 2014

Panitia Penguji Tesis Berdasarkan SK Rektor Universitas Udayana Nomor: 0382a/UN144/HK/2014, Tertanggal 17 Februari 2014

Ketua

: Prof. dr. I Gusti Made Aman, Sp.FK

Sekretaris

: dr. Tjokorda Gde Dharmayuda, Sp.PD, KHOM

Anggota

: 1. Prof. Dr. dr. N. Adiputra, MOH 2. Prof. Dr. dr. N. Tigeh Suryadhi, MPH, Ph.D 3. Dr. dr. Ida Sri Iswari, SpMK, M.Kes

6

ABSTRAK


Spirulina platensis adalah mikroalga hijau-biru. Spirulina platensis mengandung vitamin seperti vitamin B, vitamin E, Vitamin K, phenolic acids, tocopherols, g-linolenic acid, asam folat, pigmen seperti b-carotenes, chlorophyll a dan phycocyanin, dan mineral terutama zat besi. Spirulina mempunyai fungsi sebagai antioksidan, antiviral, imunomodulator, mampu mengobati dislipidemia, meningkat hemoglobin, leukosit dan trombosit serta mampu menstimulasi stem sel di sumsum tulang. Kemampuan meningkatkan dan menstimulasi sumsum tulang dan diperkirakan bisa mengurangi efek samping supresi sumsum tulang akibat pemberian cyclophospamide. Penelitian ini bertujuan untuk melihat bahwa Spirulina platensis bisa mencegah penurunan komponen darah perifer pada tikus yang diberikan cyclophospamide. Penelitian Randomized Post Test Only Control Group Design ini dilakukan selama 14 hari dengan menggunakan 30 ekor Rattus norvegicus, jantan dewasa yang dibagi menjadi Kelompok Kontrol (akuabides 2cc), Kelompok Perlakuan 1 (spirulina 250 mg / Kg BB) dan Perlakuan 2 (spirulina 500 mg / Kg BB). Perlakuan masing-masing kelompok dimulai dari hari 1-14 dan pada hari ke 7 diberikan cyclophopamide 50 mg / Kg BB intraperitoneal dosis tunggal. Pemeriksaan darah dilakukan pada hari ke 11 dan hari ke 14. Pada penelitian ini dengan analisis One Way Anova didapatkan perbedaan yang bermakna (p < 0,05) kadar hemoglobin, eritrosit, leukosit, trombosit dan neutrofil pada hari ke 11 dan 14 pada kelompok kontrol, kelompok perlakuan 1 dan 2. Pada uji Post Hoc-LSD ditemukan bahwa pencegahan penurunan hemoglobin, eritrosit, trombosit sudah terjadi pada dosis 250 mg/Kg BB dan leukosit dan neutrofil dibutuhkan peningkatan dosis sampai 500 mg/Kg BB tikus (p < 0,05). Penelitian menyimpulkan bahwa spirulina 250 – 500 mg / kg BB tikus dapat mencegah penurunan hemoglobin, eritrosit, leukosit, trombosit dan neutrofil. Disarankan untuk melakukan penelitian lebih lanjut untuk mencari dosis yang lebih tepat agar bisa menghindari efek pro oksidan pada hemoglobin tetapi sekaligus mampu memenuhi kebutuhan dosis pada kelompok leukosit.

Kata kunci: Cyclophospamide, spirulina, Rattus norvegicus, darah perifer

7

ABSTRACT

SPIRULINA PLATENSIS PREVENTED THE DECREASE IN PERIPHERAL BLOOD IN RATTUS NORVEGICUS ADMINISTRATED CYCLOPHOSPAMIDE

Spirulina platensis is a blue-green micro-algae. Spirulina contains vitamins like vitamin B, vitamin E, Vitamin K, phenolic acids, tocopherols, glinolenic acid, folic acid, pigments like b-carotenes, chlorophyll a and phycocyanin and mineral like iron. Spirulina has functions as anti-oxidant, antiviral, immunomodulatory, treating dyslipidemia, stimulating stem cells in the bone marrows and increasing hemoglobin, leucocyte and platelets. The ability of Spirulina to improve and stimulate the bone marrow is expected to reduce the side effects of bone marrow suppression due to cyclophospamide administration. This study aimed to see that spirulina may prevent the decrease in peripheral blood components in rats injected cyclophospamide. A Randomized Post Test Only Control Group Design experiment was conducted for 14 days, using 30 adult males of Rattus norvegicus. The rats was divided into three groups consisting of ten animals in each group. Control-Group animals were fed orally with 2 ml of aquabidest for 14 days. Group-I animals were each fed with 250 mg/kg body of spirulina and Group-2 animals were each fed with 500 mg/kg body of spirulina for 14 days. On the day 7, the rats were given a single i.p. injection of cyclophospamide 50 mg/kg body. The blood samples were collected from each group on day 11th and 14th, respectively. In this study, a significant difference (p < 0,05) in the level of hemoglobin, erythrocytes, leucocytes, platelets and neutrophils on day 11 and 14 in the control group and treatment group1 and 2 were found in One Way Anova analysis. The post ad Hoc analysis found that the prevention of hemoglobin, erythrocytes, and platelets decline had occurred at a dose 250 mg/Kg BB. Leucocytes and neutrophils required increasing doses up to 500 mg/Kg BB rat (p < 0,05). In summary, the study showed that the dose of spirulina of 250 – 500 mg/kg body weight could prevent the decrease of hemoglobin, eritrocyte, leucocyte, platelet, and neutrophil. The specific spirulina dose to prevent prooxidant effect on hemoglobin is needed to be further evaluated.

Key words: Cyclophospamide, spirulina, Rattus norvegicus, peripheral blood

8

DAFTAR ISI

Halaman SAMPUL DALAM …………………………………………………………….. PRASYARAT GELAR...………………….………….…………………...…… LEMBAR PERSETUJUAN..…………………………………………………. LEMBAR PENGESAHAN……………………………………………………. SURAT PERNYATAAN BEBAS PLAGIAT...………………………………. UCAPAN TERIMA KASIH….……………………………………………….. ABSTRAK…………………………………………………………………….... ABSTRACT……………..……………………………………………………… DAFTAR ISI……………………………………………………………………. DAFTAR TABEL…..…………………………………………...…………….. DAFTAR GAMBAR .....……….………………………………………………. DAFTAR SINGKATAN DAN LAMBANG …………………...…………….. DAFTAR LAMPIRAN ………………………………………………………..

BAB I PENDAHULUAN ………………………………….……………….. 1.1

Latar Belakang ……………………..….………………………………..

1.2

Rumusan Masalah ………………..……………………………………..

1.3

Tujuan Penelitian ……………………………………………………….

1.3.1 Tujuan Umum………………………………...…………………………

9

1.3.2 Tujuan Khusus..………………………………..……………………….. 1.4

Manfaat Penelitian……………….………………..……………………

BAB II

KAJIAN PUSTAKA………….….…………………………..……

2.1

Cyclophospamide ..………………………………………………….…

2.1.1

Efek Farmakologis ...………………………….………………………

2.2

Spirulina ..…………………………………….……………...…………

2.2.1

Spirulina sebagai antioksidan …………………………………………

2.2.2

Spirulina dan pengaruh pada sistem hematopoiesis tikus ...…...……

2.3

Hematopoesis Manusia …...……………………………………………

2.4

Tikus Winstar (Rattus norvegicus)…………….………………………

2.4.1

Hematopoiesis Rattus norvegicus…………………….………………

2.4.2

Nilai Normal Darah Perifer ………………………..………………..

BAB

III

KERANGKA BERPIKIR, PENELITIAN

KONSEP

DAN

HIPOTESIS

3.1

Kerangka Berpikir ……………...……………………..………………

3.2

Konsep Penelitian .……………………..………………………………

3.3

Hipotesis Penelitian……...………………………..…………………….

BAB IV

METODE PENELITIAN ……………………………...………......

4.1

Rancangan Penelitian…………………………………..……………….

4.2

Subjek dan Sampel……….……………..…………………..…………..

10

4.2.1 Besaran Sampel ………………………………………………………… 4.2.1.1 Teknik penentuan Sampel ……………………………………………. 4.3

Variabel ……..………………………………………………………...…

4.3.1

Klasifikasi Variabel.………………………………………………...…

4.3.2

Definisi operasional variable…………………………………………...

4.4

Bahan dan Instrumen Penlitian ………………………………………

4.5

Protokol Penelitian ………...…………………………………………..

4.6

Analisis Data …………………………………………………………....

BAB V

HASIL PENELITIAN ………..……………………………………..

5.1

Uji Normalitas Data………………...…………………………………..

5.2

Uji Homogenitas Data antar Kelompok…...………………………….

5.3

Hemoglobin…………………………………….……………………….

5.3.1

Efek perlakuan antar kelompok di hari ke 11………………………..

5.3.2

Efek perlakuan antar kelompok hari ke 14……………...……………

5.4

Eritrosit……………………………….………………………………….

5.4.1 Efek perlakuan hari ke 11………………………..……………………. 5.4.2 Efek perlakuan hari ke 14………………………...……………………. 5.5

Leukosit……………………………….………………………………….

5.5.1 Efek perlakuan hari ke 11……………………………………………… 5.5.2 Efek perlakuan hari ke 14……………………………………………… 5.6

Trombosit…………………………….………………………………….

11

5.6.1 Efek perlakuan hari ke 11……………………………………………… 5.6.2 Efek perlakuan hari ke 14……………………………………………… 5.7

Neutrofil………………………….……………………………………….

5.7.1 Efek perlakuan hari ke 11………………………………………………. 5.7.2 Efek perlakuan hari ke 14……………………………………………….

BAB VI

PEMBAHASAN…………………………………………………….

6.1

Pengaruh Spirulina terhadap Pencegahan Penurunan Hemoglobin....

6.2.

Pengaruh Spirulina terhadap Pencegahan Penurunan Leukosit dan Neutrofil ......................................................................................................

6.3.

Pengaruh Spirulina terhadap Pencegahan Penurunan Eritrosit..........

6.4

Pengaruh Spirulina terhadap Pencegahan Penurunan Trombosit.......

BAB VII SIMPULAN DAN SARAN…………………………………………

DAFTAR PUSTAKA…..………………………………………………………. LAMPIRAN …………………………………………………………………… DAFTAR TABEL

12

DAFTAR TABEL

Halaman

Table 2.1

Komposisi Vitamin pada Spirulina ............................................

Tabel 2.2

Jenis Pigment pada Spirulina powder ......................................

Table 2.3

Hitung Jenis Leukosit Tikus .......................................................

Tabel 5.1

Uji Normalitas Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit dan Neutrofil .............................................................

Tabel 5.2

Uji Homogenitas Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit dan Neutrofil .............................................................

Tabel 5.3

Rerata Hemoglobin antar Kelompok pada Hari ke 11 Sesudah Diberikan Perlakuan ...................................................................

Tabel 5.4

Analisis Komparasi Hemoglobin antar Kelompok pada Hari ke 11 …………. .............................................................................

Tabel 5.5

Rerata Hemoglobin antar Kelompok pada Hari ke 14 Sesudah Diberikan Perlakuan ....................................................

Tabel 5.6

Analisis Komparasi Hemoglobin antar Kelompok pada Hari ke 14.. ..................................................................................

Tabel 5.7

Rerata Eritrosit antar Kelompok pada Hari ke 11 Sesudah Diberikan Perlakuan ....................................................

Tabel 5.8

Analisis Komparasi Eritrosit antar Kelompok pada Hari ke 11 ..............................................................................................

Tabel 5.9

Rerata Eritrosit antar Kelompok pada Hari ke 14 Sesudah Diberikan Perlakuan ....................................................

Tabel 5.10

Analisis Komparasi Eritrosit antar Kelompok pada Hari ke 14 .............................................................................................

Tabel 5.11

Rerata Leukosit antar Kelompok pada Hari ke 11 Sesudah Diberikan Perlakuan ....................................................

13

Tabel 5.12

Analisis Komparasi Leukosit antar Kelompok pada Hari ke 11 .....................................................................................

Tabel 5.13

Rerata Leukosit antar Kelompok pada Hari ke 14 Sesudah DiberikanPerlakuan ....................................................

Tabel 5.14

Analisis Komparasi Leukosit antar Kelompok pada Hari ke 14 ..............................................................................................

Tabel 5.15

Rerata Trombosit antar Kelompok pada Hari ke 11 Sesudah Diberikan Perlakuan ....................................................

Tabel 5.16

Analisis Komparasi Trombosit antar Kelompok pada Hari ke 11 ..............................................................................................

Tabel 5.17

Rerata Trombosit antar Kelompok pada Hari ke 14 Sesudah Diberikan Perlakuan ....................................................

Tabel 5.18

Analisis Komparasi Trombosit antar Kelompok pada Hari ke 14 .....................................................................................

Tabel 5.19

Rerata Neutrofil antar Kelompok pada Hari ke 11 Sesudah Diberikan Perlakuan ....................................................

Tabel 5.20

Analisis Komparasi Neutrofil antar Kelompok pada Hari ke 11 .....................................................................................

Tabel 5.21

Rerata Neutrofil antar Kelompok pada Hari ke 14 Sesudah Diberikan Perlakuan ....................................................

Tabel 5.22

Analisis Komparasi Neutrofil antar Kelompok pada Hari ke 14 ....................................................................................

14

DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 2.1

Gugus kimia Cyclophospamide ……………………….............

Gambar 2.2

Mekanisme alkilasi Alkylating agents dengan N7 DNA ………..

Gambar 2.3

Spirulina ……….………………………………………..............

Gambar 2.4

Jalur Produksi Reactive Oxygen Species (ROS) dan Pembersihan dengan GSH, glutathione ………………..............

Gambar 2.5

Diagram Sistem Hirarki Sel Induk Hematopoeitik Manusia ..

Gambar 2.6

Skema diferensiasi hematopoiesis sel darah tikus ……………..

Bagan 3.1

Konsep Penelitian ..………………………………........................

Bagan 4.1

Skema Rancangan Penelitian …………………………………..

Bagan 4.2

Skema Hubungan antar Variabel Penelitian …………………..

Bagan 4.3

Skema Alur Penelitian ………………………………………….

Gambar 5.1

Rerata Hemoglobin antar Kelompok pada hari ke 11 dan hari ke 14………………………………………………………………..

Gambar 5.2

Rerata Eritrosit antar Kelompok pada hari ke 11 dan hari ke 14…………………………………………………………………...

Gambar 5.3

Rerata Leukosit antar Kelompok pada hari ke 11 dan hari ke 14……………………………………………………………...

Gambar 5.4

Rerata Trombosit antar Kelompok pada hari ke 11 dan hari ke 14……………………………………………………………...

Gambar 5.5

Rerata Neutrofil antar Kelompok pada hari ke 11 dan hari ke 14……………………………………………..

15

DAFTAR SINGKATAN ATAU TANDA

SINGKATAN BB

: Berat badan

Cm

: Centimeter

CXC

: Cyclophospamide

DNA

: Deoxyribonucleic acid

EM

: Mielosit awal

EO

: Eosinofil

EOp

: Prekursor eosinofil

Er

: Prekursor eritroid

GRAS

: Substances Generally Recognized as Safe

G0

: Fase istirahat

Hb

: Hemoglobin

Ht

: Hematokrit

Kg

: Kilogram

LA

: Linoleic acid

GM-CSF

: Granulocyte stimulating factor

Gy

: Gray

IL-3

: Interleukin-3

M

: Mielosit lanjut

MB

: Mieloblast

MDA

: Malondialdehyde

ME

: Metarubisit

mg

: Milligram

ml

: Milliliter

macrophage-colony

16

MM

: Metamielosit

NSN

: Neutrofil non segmented

P

: Promielosit

PCB

: Chromophore phycocyanobilin

PR

: Prorubisit

RB

: Rubiblast

RU

: Rubisit

SIH

: Sel induk hemopoetik

SL

: Limfosit

SN

: Neutrofil segmented

Sp

: Spirulina

TPO

: Thrombopoietin

17

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman Lampiran 1

Tempat dan Waktu Penelitian ..........................................

Lampiran 2

Keterangan Kelaikan Etik (Ethical Clearence) ...............

Lampiran 3

Keterangan kandungan Serbuk spirulina platensis yang dipakai pada penelitian ....................................................

Lampiran 4

Pengujian Kenormalan Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit dan Neutrofil ................

Lampiran 5

Pengujian Homogenitas Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit dan Neutrofil ................

Lampiran 6

Pengujian Deskriptif Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit dan Neutrofil .................................

Lampiran 7

Pengujian One Way Anova pada Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit dan Neutrofil ................

Lampiran 8

Pengujian Multipel Komparasi pada Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit, dan Neutrofil.......................................................................

18

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Spirulina platensis adalah mikroalga hijau-biru. Spirulina platensis mengandung beberapa vitamin, seperti vitamin B, vitamin E, Vitamin K, phenolic acids, tocopherols, g-linolenic acid, asam folat; pigmen, seperti b-carotenes, chlorophyll a dan phycocyanin; dan mineral, terutama zat besi. Spirulina mempunyai fungsi sebagai antioksidan, antiviral, imunomodulator, mampu mengobati dislipidemia, meningkatkan hemoglobin, leukosit dan trombosit serta mampu menstimulasi stem sel di sumsum tulang. Kemampuan meningkatkan dan menstimulasi sumsum tulang dan diperkirakan bisa mengurangi efek samping cyclophospamide. Cyclophospamide adalah salah satu golongan Alkylating agent yang bersifat sitotoksik dengan cara merusak sintesis DNA dan pembelahan sel (Brunton, 2008; Katzung, 2006). Hal ini dibuktikan dalam beberapa penelitian seperti berikut ini. Penyuntikan cyclophospamide 300 mg/kg, dosis tunggal intraperitoneal pada tikus menemukan deplesi masif sel hemopoietik dan kerusakan berat pada sel stroma, sel endotel sinus, sel retikuler dan makrofag serta dilatasi sinusoid di sumsum tulang (Anton, 1997). Setelah 8 jam penyuntikan cyclophospamide 100 mg/kg intravena pada tikus usia 8-10 minggu didapatkan peningkatan pengambilan radiolabeled Anexin V oleh sel yang mengalami

19

apoptosis intramedular pada tulang panjang, pelvis dan vertebra serta lien sehingga terjadi penurunan selularitas sumsum tulang terutama sel mononuklear, pendarahan, dilatasi sinusioid dan selular atipik ringan (Blankenberg, dkk., 2001). Apoptosis ini disebabkan oleh efek dari derivat hidroperoksida Cyclophospamide (4-OOH-CY). Derivat hidroperoksida inilah yang akan merusak sel hematopoietik dan stromal sumsum tulang sehingga menyebabkan mielosupresi sumsum tulang dengan cara mengaktifkan jalur kematian dengan memproduksi reaktif oksigen spesies (ROS), berkurangnya glutation (GSH) dan gangguan pada membran mitokondria sehingga akan terjadi apoptosis (Murata dkk, 2004; Tsai-Turton, dkk., 2007; Strauss, dkk., 2008). Mielosupresi sumsum tulang akan bermanifestasi sebagai anemia, leukopenia, neutropenia dan trombositopenia di darah perifer (Tobias, 2010). Trombositopenia pada jumlah trombosit < 20.000 sel / uL akan memudahkan terjadinya perdarahan dan jumlah neutrofil < 500 sel /uL akan memudahkan terjadi infeksi yang bisa mengancam nyawa (Glaspy, 2008). Ratna (2013). Penelitian pendahuluan pada tikus mendapatkan bahwa dengan pemberian cyclophospamide dosis 30 mg – 50 mg / kilogram berat badan didapatkan penurunan leukosit 64% -74%, penurunan hemoglobin 11% - 15%, penurunan trombosit sebesar 27,6% - 46% dan neutrofil sebesar 62% -91%. Penurunan hemoglobin, eritrosit, leukosit, neutrofil dan trombosit bisa berakibat fatal pada individu. Anemia akan mengurangi transfer oksigen ke seluruh tubuh. Trombositopenia pada jumlah trombosit < 20.000 sel / uL akan memudahkan

20

terjadi pendarahan dan jumlah neutrofil < 500 sel /uL akan mudah terjadi infeksi yang bisa mengancam nyawa (Glaspy, 2008). Anemia, leukopenia dan neutropenia serta trombositopenia akibat mielosupresi yang diinduksi oleh cyclophospamide pada beberapa penelitian bisa diatasi oleh spirulina. Kandungan vitamin B12, Asam folat dan zat besi pada Spirulina platensis mampu meningkatkan produksi hemoglobin, leukosit dan hitung jenis darah perifer. Kandungan vitamin E dan Phenolic acids (Shukla, dkk., 2009; Shanmugapriya dan Ramanathan, 2012), b-carotenes dan chlorophyll a (Mohammed, 2011) dan C-phycocyanin (Estrada, dkk., 2001) memberikan kemampuan antioksidan pada Spirulina platensis. Hal ini dibuktikan dengan penurunan produksi ROS (reactive oxygen species) dan menurunkan kadar malondialdehyde (MDA) hati (Verma, dkk., 2006; Li dkk., 2009.), meningkatkan aktivitas enzim NADPH oxidase (Romay, 1998), enzim superoxide dismutase (SOD) (Li, dkk., 2009) dan glutathione peroxidase (Verma, dkk., 2006; Li, dkk., 2009). Spirulina platensis 300 mg/kg pada tikus albino wistar meningkatkan kadar hemoglobin, leukosit dan hitung jenis dimulai pada hari ke-15 dan maksimal pada hari ke-30 (Simsek, dkk., 2007). Spirulina platensis 60 mg/kg tikus yang diberikan 5 hari sebelum penyuntikan cyclophospamide 100 mg/kg selama 3 hari dan dilanjutkan sampai 7 hari setelahnya menunjukkan peningkatan produksi leukosit (Zhang, dkk., 2001). Phycocyanin yang terkandung pada Spirulina platensis

meningkatkan proliferasi sel - sel sumsum tulang akibat

menstimulasi Granulocyte macrophage-colony stimulating factor (GM-CSF) dan

21

interleukin-3 (IL-3) dan menginduksi aktivitas pembentukan koloni (colonyforming) pada kultur sel lien tikus, serta meningkatkan rasio neutrofil dan limfosit pada darah perifer tikus (Hayashi, dkk., 2006) Peneliti berdasarkan data berikut ini:

1). efek cyclophospamide yang

mensupresi sumsum tulang pada hari ke 4 sehingga kadar hemoglobin, eritrosit, leukosit, neutrofil dan trombosit darah perifer menurun dan bisa mengancam nyawa; 2) Kemampuan memperbaiki diri sel hematopoietik yang baik setelah disupresi oleh cyclophospamid yang dimulai pada hari ke tujuh; 3) Efek spirulina platensis mampu meningkatkan produksi sumsum tulang dengan memperbaiki lingkungan mikro dan meningkatkan mekanisme regulasi sistem hematopoisis. Maka Penelitian ini dilakukan untuk melihat efek dan mencari dosis spirulina untuk mencegah penurunan kadar hemoglobin, eritrosit, leukosit, neutrofil dan trombosit darah perifer pada tikus yang diberikan Cyclophospamide tanpa dipengaruhi oleh kemampuan memperbaiki diri sel hematopoietik sumsum tulang.

22

1.2 Rumusan Masalah Berdasarkan latar belakang yang disampaikan maka dapat disimpulkan permasalahan yang akan dicari jawabannya melalui penelitian ini dapat dirumuskan sebagai berikut: 1. Apakah pemberian spirulina dapat mencegah penurunan hemoglobin pada tikus yang diberikan cyclophospamide? 2. Apakah pemberian spirulina dapat mencegah penurunan eritrosit pada tikus yang diberikan cyclophospamide? 3. Apakah pemberian spirulina mencegah penurunan leukosit pada tikus yang diberikan cyclophospamide? 4. Apakah pemberian spirulina dapat mencegah penurunan trombosit pada tikus yang diberikan cyclophospamide? 5. Apakah pemberian spirulina dapat mencegah penurunan neutrofil pada tikus yang diberi cyclophospamide?

1.3 Tujuan Penelitian 1.3.1

Tujuan umum Untuk mengetahui spirulina dapat mencegah penurunan hemoglobin,

eritrosit, leukosit, neutrofil cyclophospamide.

dan trombosit

pada tikus

yang diberikan

23

1.3.2

Tujuan khusus

1. Untuk mengetahui pemberian spirulina mencegah penurunan hemoglobin pada tikus yang diberikan cyclophospamide. 2. Untuk mengetahui pemberian spirulina mencegah penurunan eritrosit pada tikus yang diberikan cyclophospamide. 3. Untuk mengetahui pemberian spirulina mencegah penurunan leukosit pada tikus yang diberikan cyclophospamide. 4. Untuk mengetahui pemberian spirulina mencegah penurunan trombosit pada tikus yang diberikan cyclophospamide. 5. Untuk mengetahui pemberian spirulina mencegah penurunan neutrofil pada tikus yang diberikan cyclophospamide.

1.4 Manfaat Penelitian 1.4.1

Manfaat akademis Menambah informasi ilmiah mengenai pengaruh spirulina terhadap

hemoglobin, eritrosit, trombosit, leukosit dan neutrofil darah perifer tikus yang diberikan cyclophospamide pada saat terjadi mielosupresi.

1.4.2

Manfaat praktis Pada langkah selanjutnya, dapat dilakukan penelitian uji klinik dengan

pemberian spirulina pada pasien yang mendapatkan cyclophospamide untuk menilai kemampuan pencegahan penurunan hemoglobin, eritrosit, trombosit, leukosit dan neutrofil darah perifer.

24

BAB II KAJIAN PUSTAKA

2.1 Cyclophosphamide Cyclophosphamide (Gambar 2.1) adalah salah satu jenis dari nitrogen mustards dari kelas Alkylating agents dan paling banyak digunakan (Brunton, 2008).

Gambar 2.1 Gugus kimia. Dikutip dari Bruton, 2006

Efek dari cyclophospamide adalah melalui transfer gugus alkyl ke komponen sel. Alkilasi dari DNA (Deoxyribonucleic acid ) nukleus menyebabkan kematian sel. Sisi utama alkilasi pada DNA inti adalah posisi N7 dari guanine (Gambar 2.2). Basa-basa yang lain juga bisa berikatan di N1 dan N3 adenin, N3 dari cytosine, dan O6 dari guanine, atom phosphate dan protein-protein yang berasosiasi dengan DNA. Kemampuan berikatan dengan basa-basa lain ini lebih jarang bila dibandingkan dengan N7 guanin. Interaksi dapat terjadi pada satu atau dua untai DNA melalui cross-linking. Alkylating agents bersifat bifungsional pada dua reaktif group di mana alkilasi pada guanine dapat menyebabkan miscoding 7

25

pasangan basa dengan thymine atau pada depurinasi residu guanine. Efek lebih lanjut adalah pemutusan rantai DNA pada sisi gula-phospat (backbone of DNA). Obat ini sangat berpengaruh pada replikasi sel terutama pada fase lanjut G1 dan S dan memblok fase G2 (Katzung, 2006; Brunton, 2008)

Gambar 2.2 Mekanisme alkilasi Alkylating agents dengan N7 DNA. Dikutip dari Bruton, 2006

2.1.1 Efek farmakologis Alkylating agents mempunyai efek lokal dan sistemik. Efek lokal berupa kerusakan jaringan tempat sisi injeksi. Efek sistemik terjadi tergantung pada dosis dan umumnya mengenai jaringan yang cepat bertumbuh seperti sumsum tulang, sistem gastrointestinal dan sistem reproduksi. Cyclophospamide bersifat cell cycle phase-non-specific drugs yang berarti obat ini bekerja pada semua fase proliferasi sel kecuali pada fase G0 (fase istirahat). Cyclophospamide bersifat dose dependent di mana semakin besar dosis maka semakin besar efek merusak sel dan semakin besar pula efek toksik. Obat ini diberikan dengan dosis tinggi dan dalam waktu singkat di mana dapat menyebabkan aplastik sumsum tulang dan dalam waktu

26

yang bersamaan membunuh banyak sel tumor. Efikasi klinis ini bermanfaat pada keganasan hematologi seperti leukemia dan limphoma (Ritter, dkk., 2010). Dosis Cyclophospamide pada manusia adalah 3.5–5 mg/kg/hari per oral selama 10 hari atau 1 g/m2 IV dosis tunggal. Dosis yang berlebihan dapat menyebabkan depresi berat sumsum tulang manusia yang ditandai dengan mielosupresi akut berupa leukopenia, trombositopenia, dan perdarahan, alopesia dan hemorrhagic cystitis. Hitung granulosit darah tepi manusia turun sampai titik nadir pada hari ke 6 -10 dan membaik pada hari ke 14-21. Cyclophospamide mempunyai efek yang lebih kecil pada trombosit darah perifer manusia dibandingkan dengan obat lain (Katzung, 2006; Brunton, 2008; Ritter, dkk., 2010). Brown dan Carbone (1971). meneliti efek cyclophospamide terhadap sumsum tulang tikus normal. Peneliti menemukan bahwa penekanan sumsum tulang terjadi pada dosis di atas 30 mg/kg dan bersifat eksponensial. Dari penelitian ini didapatkan bahwa cyclophospamide 200 mg/kg intraperitoneal menurunkan selularitas sumsum tulang setelah 24 jam pemberian pada tikus. Penyuntikan intraperitoneal cyclophospamide 50 mg/kg pada tikus akan mendepresi sumsum tulang. Mielosupresi akan terus menurun sampai 4 hari berikutnya lalu membaik pada hari ke-6 sampai hari ke-10 (Sladek, 1972). Pada sumsum tulang paha tikus, 12 jam pertama setelah penyuntikan didapatkan deplasi masif sel-sel hemopoietik dan mulai membaik 10 hari setelah penyuntikan (Anton, 1997). Penyuntikan Cyclophospamide dengan dosis 30 mg/kg – 50 mg/kg intra peritoneal dosis tunggal pada tikus ditemukan pada hari ke-4 sudah

27

didapatkan rerata penurunan leukosit 64%-74%, penurunan hemoglobin 11%15%, penurunan trombosit sebesar 27,6% - 46% dan neutrofil sebesar 62% - 91%. Penurunan komponen darah perifer sudah terjadi pada dosis 30 mg/kg berat badan dan penurunan lebih banyak terjadi pada dosis 50 mg/kg berat badan. Pada hari ke-7 setelah penyuntikan didapatkan rerata peningkatan leukosit 120% -143%, neutrofil 8% - 171%, hemoglobin 11% - 17%, dan trombosit 18% -12% (Ratna, 2013). Efek cyclophopamide dengan dosis 50 mg/kg ke intra peritoneal selama 10 hari menunjukkan penurunan Hb yang signifikan dibandingkan kontrol (p<0,05) (Chakraborty, dkk., 2009). Penelitian lain menunjukkan bahwa cyclophospamide dengan dosis 50 mg/kg selama 3 kali signifikan menurunkan Hb (hemoglobin), retikulosit, leukosit, neutrofil, limfosit, dan trombosit (Molyneux, dkk., 2011). Di sumsum tulang, setelah 12 jam penyuntikan cyclophospamide 300 mg/kg, dosis tunggal intraperitoneal, menemukan deplesi masif sel hemopoietik dan kerusakan berat pada sel stroma, sel endotel sinus, sel retikuler dan makrofag serta dilatasi sinusoid di sumsum tulang. Kerusakan akibat perlakuan bersifat sementara di mana sel hemopoietik sumsum tulang membaik pada hari ke-10. Sel stromal menunjukkan kerusakan sampai hari ke-15 dan kembali normal pada hari ke-30. Hal ini menunjukkan bahwa kemampuan memperbaiki diri yang tinggi pada sel hemopoietik sumsum tulang walaupun pada saat itu terjadi kerusakan sel stroma sumsum tulang (Anton, 1997). Penyuntikan Cyclophospamide 100 mg/kg intravena pada tikus usia 8-10 minggu setelah 8 jam didapatkan peningkatan pengambilan radiolabeled Anexin V oleh sel yang mengalami apoptosis intramedular pada tulang panjang, pelvis dan vertebra serta lien dimana pada

28

pemeriksaan histologi sumsum tulang 8 jam setelah penyuntikan didapatkan penurunan selularitas sumsum tulang terutama sel mononuklear, pendarahan, dilatasi sinusioid dan selular atipik ringan. Kerusakan ini mencapai puncak 24 jam setelah penyuntikan dimana secara histologi ditemukan hiposelular sumsum tulang yang bermakna terutama pada sel mononuclear dibandingkan prekusor eritrosit, proses apoptosis yang semakin berlanjut (ditandai dengan peningkatan dilatasi sinusoid dan pendarahan). Pada 72 jam berikutnya ditemukan dilatasi sinusoid dan hiposelular, proliferasi fibroblas dengan berbagai derajat, pendarahan dan sel atipik (Blankenberg, dkk., 2001). Apoptosis pada sumsum tulang ini disebabkan oleh efek dari derivat hidroperoksida Cyclophospamide (4-OOH-CY). Derivat

hidroperoksida

ini

akan

mengaktifkan

jalur

kematian

dengan

memproduksi reaktif oksigen spesies (ROS), berkurangnya glutation (GSH) dan gangguan pada membran mitokondria sehingga akan terjadi apoptosis

pada

sumsum tulang (Murata, dkk., 2004; Tsai-Turton, dkk., 2007; Strauss, dkk., 2008).

2.2 Spirulina Spirulina adalah mikroalga hijau biru berbentuk filament spiral yang mampu berfotosintesis (Gambar 2.3). Dua jenis Spirulina yang penting adalah Spirulina maxima and Spirulina platensis. Saat ini ada dua sudut pandang tentang jenis mikroorganisme ini. Dengan adanya klorofil maka Spirulina digolongkan sebagai tumbuhan dengan kelas Chyanophyceae tetapi menurut bakteriologis, Spirulina adalah bakteri karena mempuyai struktur prokariotik. Spirulina sebagai

29

makanan sudah dikenal sejak Aztec (400 tahun yang lalu) dan di Kanembu, Republic of Chad (Belay, 2002; Sanchez, dkk., 2003). Saat ini produksi spirulina di seluruh dunia diperkirakan kurang lebih 3.000 ton metrik. Spirulina dijual dengan leluasa di toko makanan dan pasar umum dan sudah terbukti keamananannya. Spirulina mengandung tinggi protein (60% -70 % dari berat kering). Siprulina juga mengandung asam amino essensial seperti leucine (10.9%), valine (7.5%), dan isoleucine (6.8%), (Cohen, 1997 dikutip dari Sanchez, dkk., 2003). Di antara makanan, spirulina mengandung tinggi provitamin A (β-carotene) dan B12. Spirulina mengandung 4% -7% lipid (linoleic acid (LA) dan γ-linolenic acid). Kandungan mineral yang dikandung terbanyak spirulina adalah besi (60%) di mana lebih mudah diserap daripada ferrous sulfate (Pyufoulhoux, dkk., 2001 dikutip dari Sanchez dkk, 2003). Karbohidrat juga terkandung dalam spirulina sebanyak 13,6% berupa glukosa, rhamnose, mannose, xylose and galaktosa. Spirulina tidak mempunyai selulosa pada dinding selnya sehingga mudah dicerna dan diserap (Sanchez, dkk., 2003). Spirulina mengandung pigmen chlorophyll a, carotenes dan phycobiliprotein (phycocyanin dan allophycocyanin) (Estrada, dkk., 2001). Berikut adalah tabel kandungan spirulina: vitamin (Tabel 2.1), dan pigment (Table 2.2) (Belay, 2002).

Gambar 2.3. Spirulina (dikutip dari Tsukii. Y, 2003)

30

Tabel 2.1 Kandungan Vitamin pada Spirulina. Dikutip dari Belay, 2002 Vitamin Provitamin A

mg 100 g-1 2.330.000 IU kg –1

β-carotene

140

Vitamin E

100 a-tocopherol equiv.

Thiamin / B1

3.5

Riboflavin / B2

4.0

Niacin / B3

14.0

Vitamin B6

0.8

Vitamin B12

0.32

Folic acid

0.01

Biotin

0.005

Phantothenic acid

0.1

Vitamin K

2.2

Tabel 2.2 Jenis Pigmen pada Spirulina Powder Dikutip dari Belay, 2002 Pigment

mg 100g-1

Carotenoids

370

Chlorophyll a

1000

Phycocyanin

14000

Studi di Mexico menunjukkan bahwa S. platensis tidak embriogenik pada fetus mencit (Chamorro, dkk., 1986; Chamorro and Salazar, 1990. dikutip dari Sanchez, dkk., 2003). Hal ini diperkuat dengan pemberian 30 - 120 mg/kg spirulina kering selama 12 minggu pada tikus tidak menunjukkan efek toksik pada

31

fungsi hati dan ginjal (Hutadilok-Towatana, dkk., 2008). Spirulina tidak mengandung

phycotoxins sehingga tidak menyebabkan alergi atau gangguan

gastrointestinal pada manusia (Chamorro, dkk., 1996). Studi tentang efek toksik kronik dan sub-kronik tidak menunjukkan efek toksik pada spirulina (Chamorro, dkk., 1996; Switzer, 1980. dikutip dari Sanchez, dkk., 2003). Tahun 2003, FDA mengkatagorikan spirulina sebagai Substances Generally Recognized as Safe (GRAS).

2.2.1

Spirulina sebagai antioksidan Saat ini diketahui bahwa bilirubin bebas pada spirulina yaitu Chromophore

phycocyanobilin

(PCB)

atau

c-phycocyanin

(C-PC)

berpotensi

sebagai

antioksidan. C-phycocyanin adalah antioksidan alami atau primer dari kelompok phytochemical, golongan flavonoid (Hamid, dkk., 2010) dan larut dalam air (Eriksen, 2008). Struktur kimia pada c-phycocyanin, dapat menghilangkan radikal peroksida dengan menambahkan satu atom hidrogen. Hal ini diperkuat oleh Estrada, dkk (2001) yang menemukan bahwa kemampuan menghambat radikal hidroksil tergantung dari kadar phycocyanin. Phycobiliprotein phycocyanin adalah komponen yang mempunyai efek antioksidan pada spirulina (Estrada, dkk., 2001). Lima belas gram spirulina mengandung 100 mg PCB (0,66%). Dosis spirulina yang diperlukan antara 150 – 1000 mg /hari /kg berat badan tikus (McCarty, 2007). Penelitian pada rodent menunjukkan bahwa pemberian secara oral spirulina atau C- phycocyanin (holoprotein Spirulina yang mengandung PCB) mempunyai

32

efek anti oksidan dengan menghambat aktivitas NADPH oksidase (gambar.2.4). C-Phycocyanin 170,3 + 1,62 mg/kg berat badan tikus (spirulina 300 mg/kg BB) juga mengurangi ROS dengan cara menghambat pembentukan ROS pada phagosit (NADPH oksidase dan mieloperoksidase) atau mencegah metabolisme asam arachcidonat (Romay, dkk., 1998). C-phycocyanin mampu bertindak sebagai selective COX-2 inhibitory dan menginhibisi Bcl2 sehingga terjadi apoptosis terhadap sel tumor (Pardhasaradhi, dkk., 2003). Spirulina 800 mg/kg berat badan yang diberikan pada tikus 7 hari sebelum dipaparkan dengan gamma radiation (8 Gy) didapatkan peningkatkan glutathione (GSH) dan penurunan malondialdehyde (MDA) hati (Verma, dkk., 2006). Phycocyanin signifikan menghambat overproduksi ROS intracelular dan malondialdehyde (MDA), juga meningkatkan aktivitas enzim superoxide dismutase (SOD) dan glutathione peroxidase pada human islet amyloid polypeptide (hIAPP) yang mengalami sitotoksik (Li, dkk., 2009). Selain phycocyanin sebagai antioksidan, kompenen phenolic (tocopherol) yang terkandung pada ekstrak Spirulina platensis juga mempunyai kemampuan antioksidan. Jenis tocopherol yang terbanyak adalah α-tocopherol (73% dari total tocopherol) dan sisanya adalah γ-tocopherol (27%). Aktivitas antiokidan αtocopherol paling efisien dibandingkan β-tocopherol (25–50% dari aktivitas αtocopherol) dan γ-tocopherol (10–35% dari α-tocopherol) (Shanmugapriya dan Ramanathan, 2012). Pada kultur Spirulina platensis yang ditambahkan H2O2, menunjukkan peningkatan kadar β-carotene dan α-tocopherol yang linier

33

signifikan terhadap aktivitas antioksidan katalase, peroksidase, and superoxide dismutase (SOD) (El-Baky, dkk., 2007). Spirulina akan meningkatkan apoptosis pada sel yang memang memerlukan radikal bebas untuk dieliminasi tetapi tidak pada sel yang sehat (Chu, dkk., 2010).

Gambar 2.4 Jalur Produksi Reactive Oxygen Species (ROS) dan Pembersihan dengan GSH, glutathione; GSSG, glutathione disulfide. (Dikutip dari: Dro¨ ge, 2002).

2.2.2

Spirulina dan pengaruh pada sistem hematopoiesis tikus Pada anjing yang diberikan

sinar γ 100 Gy/menit dan tikus yang

dikemoterapi dengan cyclophosphamide 100 mg/kg mencit dimana sebelum perlakuan kedua binatang ini diberikan spirulina yang dilarutkan dalam akua destilata dengan dosis 15 mg/kg, 30 mg/kg, 60 mg/kg selama 5 hari. Dari penelitian ini ditemukan bahwa spirulina mempunyai efek radioproteksi dan kemoproteksi terbaik pada dosis 60 mg/kg/hari selama total 12 hari dibanding kelompok

cyclophosphamide-Berbamine

hydrochlorida.

Pada

kelompok

cyclophosphamide-spirulina ditemukan peningkatan DNA dan sel berinti, peningkatan leukosit dan hemoglobin pada fase supresi (Zhang, dkk., 2001).

34

Penelitian lainnya dilakukan pada tikus putih albino yang diradiasi 8 Gy sehingga mengalami depresi sumsum tulang. Pada kelompok yang mengkonsumsi spirulina 800 mg/kg/hari yang dilarutkan dalam akua destilata selama tujuh hari sebelum radiasi gamma (8Gy) didapatkan peningkatan kadar hemoglobin, total leukosit dan total eritrosit. Pada hari ke-5 setelah radiasi gamma didapatkan penurunan kadar hemoglobin, total leukosit dan total eritrosit pada semua kelompok tetapi pada kelompok spirulina didapatkan penurunan yang lebih rendah dibandingkan kelompok kontrol (Verma, dkk., 2006). Pemberian spirulina platensis yang dilarutkan dalam air dengan dosis 300 mg/kg/hari pada tikus didapatkan peningkatan hemoglobin, eritrosit, trombosit, leukosit dan hitung jenis sejak hari ke-15 dan semakin meningkat pada akhir penelitian (hari ke-30) (Simsek, dkk., 2007). Suatu studi in vitro dengan pemberian ekstrak Spirulina platensis selama 5 minggu terbukti meningkatkan proliferasi formasi koloni sel sumsum tulang mencit, Rasio neutrofil dan limfosit di sumsum tulang dan darah perifer, meningkatkan granulosit macrophage-colony stimulating factor (GM-CSF) dan Interleukin-3 (IL-3) pada kultur supernatan sel lien (Hayashi, dkk., 2006).

2.3

Hematopoesis manusia Hematopoesis ialah proses pembentukan darah. Pada orang dewasa dalam

keadaan fisiologis semua hematopoesis terjadi di sumsum tulang. Untuk kelangsungan hematopoesis diperlukan lingkungan mikro sumsum tulang, sel induk hematopoesis (hematopoeitik stem cell), bahan pembentuk darah, dan mekanisme regulasi (Leung dan Verfaillie, 2005; Fauci, dkk., 2012).

35

Sel induk hemopoetik (SIH) / hematopoietic stem cell (HSC) adalah selsel yang berkembang menjadi sel-sel darah termasuk eritrosit, leukosit dan trombosit. SIH mempunyai kemampuan self renewal (mampu memperbaiki diri sendiri) dan berdeferensiasi menjadi semua sel matang sel darah. Pertama, SIH dirangsang oleh Interleukin-7 (IL-7) sehingga berdeferensiasi menjadi turunan limphoid (lymphoid progenitors) dan mieloid (mieloid progenitors) akibat rangsangan trombopoitin (TPO) dan stem cell factor (SCF) (Gambar 2.5). Common lymphoid progenitors berdeferensiasi menjadi prekursor limphocyte T/NK cell (natural killer) dan prekursor limfosit B akibat rangsangan IL-7 dan oleh FLT-3 Ligand, common lymphoid progenitor menjadi sel plasma. Prekursor limfosit B berdiferensiasi menjadi sel B setelah distimulasi oleh interleukin-4. Prekursor limfosit T/NK sel distimulasi oleh interleukin-7 menjadi prekursor sel T dan prekursor NK sel. Interleukin-2 akan merangsang diferensiasi prekursor sel T menjadi sel T. Interleukin-15 merubah prekursor NK-cell menjadi NK-cell. Common mieloid progenitors (CMP) berdeferensiasi menjadi prekursor granulosit-monosit, prekursor eritrosit-megakariosit dan monosit. Prekursor granulosit-monosit dengan dirangsang oleh granulocyte-monocyte colony stimulating factor (GM-CSF) berdeferensiasi menjadi prekusor granulosit dan prekusor monosit. Prekusor monosit distimulus oleh monocyte colony stimulating factor (M-CSF) menjadi monosit. Prekusor granulosit dirangsang oleh granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) berdiferensiasi granulosit, interleukin-5 menjadi eosinofil, dan oleh interleukin-3 dan stem cell factor

36

menjadi sel basofil dan sel mast. Prekursor eritrosit-megakariosit berkembang dari CMP akibat perangsangan interleukin-3, stem cell factor, dan trombopoitin (TPO). Oleh pengaruh eritropoitin (EPO), prekusor eritrosit-megakariosit menjadi eritrosit dan TPO menjadi trombosit (Fauci, dkk., 2012).

Gambar 2.5 Diagram Sistem Hirarki Sel Induk Hematopoeitik Manusia dan regulasi. IL2: Interleukin 2; IL 3: Interleukin 3; IL 4: Interleukin 4; IL 5: Interleukin 5; IL 7: Interleukin 7; IL 15: Interleukin 15; SCF: Stem Cell Factor; TPO: Thrombopoetin; EPO: Eritopoitin; GM-SCF: Granulocyte MacrophageColony Stimulating Factor; G-CSF: Granulocyte-Colony Stimulating Factor ; MCSF: Monocyte-Colony Stimulating Factor; FLT-3 Ligand: Fms-related Tyrosine Kinase (dikutip dari Fauci dkk., 2012)

Pada dewasa muda yang sehat, SIH predominan berada di dalam sumsum tulang berupa sel darah yang tidak aktif. Di dalam sumsum tulang, sel - sel ini mempunyai hubungan dengan lingkungan mikro. Apabila ada stressor, sistem

37

lingkungan mikro mengeluarkan faktor ekstrinsik yang mengatur hematopoeitik sehingga mengaktifkan SIH. Eritrosit, leukosit dan trombosit akan dikeluarkan dari sumsum tulang ke perifer sesuai dengan kebutuhan tubuh. Eritropoisis dipicu oleh kondisis anemia atau hipoksia. Hormon Eritropoitin akan dilepaskan oleh sel peritubulus sel ginjal. Hormon ini akan mengikatkan diri pada reseptor di progenirator di eritroblast dan eritroid sehingga memicu proliferasi dan diferensiasi di sumsum tulang. Setelah dikeluarkan dari sumsum tulang ke sirkulasi, usia eritrosit adalah 120 hari dan kemudian dihancurkan. Kadar hemoglobin pria dewasa 13,5-17,5 gram/dL dan pada wanita dewasa 12-16 gram/dL. Leukosit juga diproduksi di sumsum tulang dan produksi akan meningkat akibat respon adanya inflamasi dan infeksi. Normal, jumlah leukosit adalah 4.3– 10.8 x 109/L, dengan neutrophils 45–74% , batang 0–4%, limfosit 16–45%, monosit 4–10%, eosinofil 0–7%, dan basofil 0–2%. Umur granulosit setelah dilepaskan dari sumsum tulang ke sirkulasi normalnya adalah 4-8 jam dan bisa 45 hari di jaringan. Monosit juga mempunyai waktu yang pendek di darah yaitu 1020 jam. Monosit yang berada di jaringan dapat hidup berbulan-bulan sampai melakukan fagositosit kemudian hancur. Limfosit memasuki sirkulasi secara kontinu dari aliran limfe dari jaringan limphoid dan kelenjar getah bening, berputar terus menerus. Hidup limfosit bisa mingguan sampai bulanan (Leung dan Verfaillie, 2005 ; Sieff dan Nathan, 2003; Guiton dan Hall, 2006; Fauci, dkk., 2012).

38

Hormon Thrombopoietin (TPO) adalah hormon yang mengendalikan produksi platelet. Hormon ini diproduksi di hati dan diinduksi oleh inflamasi. Penurunan megakariosit dan platelet akan merangsang produksi TPO. Platelet di sirkulasi hanya berumur 7-10 hari (Leung dan Verfaillie, 2005 ; Sieff dan Nathan, 2003; Guyton dan Hall, 2006; Fauci, dkk., 2012).

2.4 Tikus Wistar (Rattus norvegicus) Tikus wistar (Rattus norvegicus), di Indonesia sering juga disebut tikus besar dan sering digunakan sebagai hewan percobaan di laboratorium. Tikus wistar berukuran lebih besar dari famili tikus umumnya dimana tikus ini dapat mencapai 40 cm diukur dari hidung sampai ekor dengan berat 140-500 gram. Tikus wistar tidak dapat muntah karena struktur anatomi yang berbeda di tempat esophagus bermuara ke lambung, selain itu tikus wistar tidak mempunyai kandung empedu. Berikut adalah data biologis Tikus wistar dengan lama hidup: 2 - 3 tahun (dapat sampai 4 tahun), berat dewasa: 300 – 400 gram (Jantan), 250-300 gram (betina), dan volume darah: 57 – 70 ml/kg (Smith dan Mangkoewidjojo, 1988). Kualitas makanan merupakan faktor yang penting dimana mempengaruhi kemampuan tikus untuk mencapai potensi genetik untuk tumbuh, berkembang biak, hidup lama dan bereaksi terhadap pengobatan atau tindakan. Tikus wistar membutuhkan minum air lebih banyak karena itu air minum harus tersedia secara terus menerus. Tiap tikus dewasa membutuhkan minum 20 – 45 ml / hari (Smith dan Mangkoewidjojo, 1988).

39

2.4.1 Hematopoiesis Rattus norvegicus Hematopoiesis Rattus norvegicus adalah proses pembentukan sel darah. Pada tikus hematopoiesis dibagi menjadi 2 yaitu primitive hematopoiesis dan definitive hematopoiesis. Primitive hematopoiesis dimulai saat awal kehamilan, saat di yolk sack. Definitive hematopoiesis pada kehamilan lebih lanjut atau saat awal post natal dan terjadi di hati dan kemudian di lien dan timus terakhir di sumsum tulang. Saat dewasa, hematopoiesis tikus terjadi pada sumsum tulang pipih seperti sternum, iga, pelvis, vertebra, tengkorak, dan epifisis tulang panjang. Pada sumsum tulang selain sel darah juga terdapat prekusor darah, sel retikular, dan serat retikulin, sistem sinusoid, dan sel lemak. Sumsum tulang adalah organ yang dinamik dimana fungsi dan strukturnya dipengaruhi oleh faktor nutrisi, signal endokrin dan kebutuhan terhadap sel darah merah, sel darah putih dan trombosit (Welman, 2010). Sumsum tulang mengandung sel induk hemopoetik (SIH) yang akan berdiferensiasi,

bermultiplikasi

dan

menjadi

dewasa

untuk

merespon

keseimbangan tubuh. SIH mempunyai kemampuan memperbaharui diri sendiri (self-renewal) dan berdiferensiasi menjadi oligopotensial SIH kemudian unipoten SIH dan jalur sel khusus (Gambar 2.6).

40

CFU- MEG

CFU- E

MYELOID STEM CELL

PLURIPOTENT HEMATOPOIETIC STEM CELL

MEGAKARIOSIT

PLATELETS

RUBIBLAST

ERYTHROCYTES

MONOBLAST

MONOCYTESMACROPHAGES

MYELOBLAST

NEUTROPHILS

CFU- GM

CFU- EOS

MYELOBLAST

CFU- BAS

MYELOBLAST

T-CELLS PRECURSORS

LYMPHOBLAST

B-CELLS PRECURSORS

LYMPHOBLAST

EOSINOPHILS

BASOPHILS

TLYMPHOCYTES

. LYMPHOID STEM CELL

BLYMPHOCYTES

Gambar 2.6 Skema diferensiasi hematopoiesis sel darah tikus Dikutip dari Schalm’s Veterinary Hematology., 1986 dari Jain., 1993

Beberapa faktor endogen dan eksogen mempengaruhi hematopoeisis termasuk lingkungan mikro sumsum tulang dan faktor humoral lokal. Beberapa faktor pertumbuhan hematopoeisis akan memicu diferensiasi jalur sel. Mereka meliputi interleukin, colony-stimulating factor granulocyte - macrophage colony – stimulating factor (GM - CSF), dan beberapa poietin spesifik (eritropoitin (EPO), eosinophilopoietin, trombopoietin, granulocytopoietin, dan monocytopoietin). Limphokin tertentu seperti lymphocyte mitogenic factor dan T-cell growth factor, IL-7 dan IL-2 untuk T-cell, IL-4 untuk B-cell, mempunyai peran dalam

41

mengatur limfopoiesis (Jain, 1993; Welman, 2012). Pada tikus dikenal Specific GM - lymphoid precursors yang mana akan berkembang menjadi prekusor limfoid, eritrosit-megakariosit dan granulosit. Specific GM - lymphoid precursors tidak ditemukan pada spesies yang lebih tinggi seperti manusia (Welman, 2012). Pada hewan normal, jumlah eritrosit, leukosit dan tipe leukosit dan platelet dalam jumlah normal. Proses hematopoiesis akan meningkat apabila kebutuhan atau destruksi yang meningkat seperti penurunan jumlah eritrosit (pendarahan akut atau anemia hemolitik), peningkatan kebutuhan leukosit saat infeksi atau inflamasi, dan peningkatan penghancuran trombosit (penyakit autoimun). Hal ini terjadi agar keseimbangan dan kebutuhan tubuh tetapi terjaga (Jain,1993).

2.4.2 Nilai Normal Darah Perifer Table 2.3 Nilai Normal Darah Perifer Tikus. Dikutip dari: Campbell., 2012 Eritrosit x 106/µL

Hb g/dL

660-9.000

13,2- 16,4

Trombosit x103/µL 840- 1.240

Leukosit x103/µL

Neutrofil x103/µL

7,3–12,6

1,25-3,71

42

BAB III KERANGKA BERPIKIR, KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1 Kerangka Berpikir Proses hematopoisis adalah proses normal pembentukan darah di sumsum tulang guna mencukupi kebutuhan tubuh. Proses hematopoiesis adalah suatu proses yang kompleks dimana memerlukan beberapa faktor seperti (1) bahan pembentuk darah, (2) sel hematopoiesis, (3) mekanisme regulasi dan (4) lingkungan mikro sumsum tulang. Proses hematopoiesis akan berfungsi normal bila keempat faktor tadi tersedia dan berfungsi normal. Bahan baku (zat besi, vitamin B12 dan asam folat) yang bisa didapatkan dari makan bila berkurang akan mengganggu proses hematopoiesis. Proses hematopoiesis sumsum tulang yang normal tercermin dari produksi eritrosit, hemoglobin, jenis leukosit, dan trombosit di darah perifer yang normal juga. Apabila salah satu faktor tersebut terganggu atau rusak akan kadar eritrosit, hemoglobin, jenis leukosit, dan trombosit juga akan terganggu. Kadar hemoglobin, eritrosit, leukosit, neutrofil dan trombosit darah perifer juga dipengaruhi oleh infeksi, pendarahan, dan lingkungan. Salah satu faktor yang bisa merusak proses hematopoiesis disebabkan oleh cyclophospamide. Cyclophospamide adalah salah satu golongan Alkylating agent yang bersifat sitotoksik dengan cara merusak sintesis DNA dan pembelahan sel. Cyclophospamide mampu merusak sel hematopoiesis dan lingkungan mikro (sel

25

43

stromal) di sumsum tulang sehingga bisa terjadi mielosupresi / depresi fungsi sumsum tulang. Akibat dari mielosupresi bisa mengakibatkan anemia, leukopenia, neutropenia dan trombositopenia. Anemia akan mengganggu penghantaran nutrisi dan oksigen, trombositopenia bisa mengakibatkan pendarahan dan neutropenia bisa mengakibatkan infeksi berat. Semuanya itu bisa berakibat fatal sampai mengancam nyawa. Anemia, leukopenia, dan trombositopenia diakui dapat diatasi oleh spirulina yang sudah banyak beredar di masyarakat. Spirulina adalah mikroalga hijau biru berbentuk filament spiral yang mampu berfotosintesis. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa Spirulina platensis yang mengandung antioksidan mampu meningkatkan produksi eritrosit, hemoglobin, jenis leukosit, dan trombosit oleh sumsum tulang dengan meningkatkan proliferasi formasi koloni sel sumsum

tulang

mencit

dan

meningkatkan

sistem

regulasi

(granulosit

macrophage-colony stimulating factor (GM-CSF) dan Interleukin-3 (IL-3)) pada kultur supernatan sel lien. Berdasarkan penelitian di atas, peneliti ingin membuktikan efek spirulina terhadap proses hematopoisis tikus yang dimielosupresi oleh cyclophospamide terutama pada fase supresi (pada hari ke-4) yaitu mencegah penurunan eritrosit, hemoglobin, leukosit dan trombosit pada tikus .

44

3.2 Konsep Penelitian Berdasarkan perumusan masalah dan kajian pustaka maka disusun kerangka konsep sebagai berikut: SPIRULINA

1. 2. 3. 4.

FAKTOR EKSTERNAL

FAKTOR INTERNAL

Nutrisi (kurang) Minuman (kurang) Lingkungan Obat / Cyclophospamide

1. Perdarahan 2. Infeksi berat

TIKUS YANG DIBERIKAN CYCLOPHOSPAMIDE 1. Hemoglobin 2. Leukosit 3. Neutrofil

4. Eritrosit 5. Trombosit

Bagan 3.1 Konsep Penelitian Keterangan: = Tidak diteliti

45

3.3 Hipotesis Penelitian Berdasarkan kerangka konsep, maka hipotesis yang dapat diajukan adalah: 1. Pemberian spirulina dapat mencegah penurunan hemoglobin pada tikus yang diberikan cyclophospamide. 2.

Pemberian spirulina dapat mencegah penurunan eritrosit pada tikus yang diberikan cyclophospamide.

3.

Pemberian spirulina mencegah penurunan leukosit pada tikus yang diberikan cyclophospamide.

4.

Pemberian spirulina dapat mencegah penurunan trombosit pada tikus yang diberikan cyclophospamide.

5.

Pemberian spirulina dapat mencegah penurunan neutrofil pada tikus yang diberi cyclophospamide.

46

BAB IV METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan penelitian Penelitian ini adalah penelitian eksperimental, dengan rancangan penelitian yang digunakan adalah Randomized Post Test Only Control Group Design (Federer, 1991)

P

S

R

P0

O1

O2

P1

O3

O4

P2

O5

O6

Bagan 4.1 Skema Rancangan Penelitian

Keterangan: P

= Populasi

S

= Sampel

R

= Randomisasi

P0 = Perlakuan pada Kelompok Kontrol yang diberikan akuabidest 2cc perhari selama penelitian (14 hari) dan penyuntikan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal pada hari ke 7. O1 = Observasi darah perifer tikus (Hb, leukosit, eritrosit, trombosit, dan neutrofil) pada Kelompok Kontrol pada hari ke 11.

29

47

O2 = Observasi darah perifer tikus (Hb, leukosit, eritrosit, trombosit, dan neutrofil) pada Kelompok Kontrol pada hari ke 14. P1 = Perlakuan pada Kelompok Perlakuan 1 yang diberikan mg/kg

berat

badan

perhari

selama

penelitian

Spirulina 250

(14

hari)

dan

cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal pada hari ke 7. O3 = Observasi darah perifer tikus (Hb, leukosit, eritrosit, trombosit, dan neutrofil) pada Kelompok Perlakuan 1 pada hari ke 11. O4 = Observasi darah perifer tikus (Hb, leukosit, eritrosit, trombosit, dan neutrofil) pada Kelompok Perlakuan 1 pada hari ke 14. P2 = Perlakuan pada Kelompok Perlakuan 2 diberikan Spirulina 500 mg/kg berat badan perhari selama penelitian (14 hari) dan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal pada hari ke 7. O5 = Observasi darah perifer tikus (Hb, leukosit, eritrosit, trombosit, dan neutrofil) pada Kelompok Perlakuan 2 pada hari ke 11. O6 = Observasi darah perifer tikus (Hb, leukosit, eritrosit, trombosit, dan neutrofil) pada Kelompok Perlakuan 2 pada hari ke 14.

4.2 Subjek dan sampel a. Kriteria subjek Sampel pada penelitian ini adalah tikus wistar dengan kriteria sebagai berikut: -

Tikus wistar jantan, berumur 2,5 – 3 bulan, berat badan jantan 175-200 gram dengan kondisi sehat

48

b. Kriteria inklusi a. Tikus putih jantan sehat dewasa galur wistar b. Berumur 2,5-3 bulan c. Berat 175-200 gram c. Kriteria drop out: apabila tikus mati pada saat penelitian berlangsung

4.2.1 Besaran sampel Pada penelitian ini perhitungan jumlah sample dihitung dengan rumus (Federer, 1991) Rumus:

( r – 1 ) ( t – 1 ) > 15

r = jumlah sample t = jumlah kelompok Dari rancangan penelitian : ( r – 1) ( 3 – 1 ) > 15 r > 8,5 = 8,5

dibulatkan menjadi 9

Dari rumus (Federer, 1991), jumlah sampel (n) minimal yang diperoleh = 9 per kelompok. Penelitian terdiri dari 3 kelompok yaitu kelompok kontrol (1), kelompok (2) dan kelompok (3). Masing-masing kelompok diputuskan terdiri dari 10 ekor (1 ekor cadangan) yang dipilih secara Simple randomized, sehingga yang dibutuhkan pada penelitian ini adalah 30 ekor.

49

4.2.1.1 Teknik Penentuan Sampel Teknik penentuan sampel dilakukan dengan cara sebagai berikut: a. Dari populasi tikus putih (Rattus norvegicus) diadakan pemilihan sampel berdasarkan kriteria inklusi: tikus wistar jantan sehat, berumur 2,5-3 bulan, berat 175-200 gram. b. Dari sampel yang memenuhi syarat, tikus diambil secara simple random dan dibagi menjadi 3 kelompok. Masing-masing kelompok 10 ekor.

4.3 Variabel 4.3.1 Klasifikasi variable Variable dalam penelitian ini adalah: a. Variabel bebas: a) Spirulina b. Variabel tergantung: a) Hemoglobin b) Leukosit c) Trombosit d) Eritrosit e) Neutrofil c. Variabel kontrol: a) Jenis tikus b) Jenis kelamin c) Umur hewan coba

50

d) Berat badan e) Perdarahan f) Infeksi g) Kehamilan tempat penelitian h) Lingkungan i) Makanan

Variabel Bebas

Spirulina Variabel Tergantung # Hb # Trombosit # Neutrofil

# Leukosit # Eritrosit

Variabel Kontrol # Jenis tikus

# Umur

# Jenis kelamin

# Berat badan

# Infeksi

# Kehamilan

# Perdarahan

# Lingkungan

# Makanan

Bagan 4.2 Skema Hubungan antar Variabel Penelitian

4.3.2 Definisi operasional variabel 1. Komponen darah perifer Kadar hemoglobin, eritrosit, leukosit, neutrofil dan trombosit yang diambil beberapa kali selama penelitan.

51

2. Hemoglobin (Hb) Pigment eritrosit yang membawa oksigen, dibentuk bersamaan dengan eritrosit di sumsum tulang. Hemoglobin dari darah tepi akan diukur pada hari ke-11 dan ke-14 dengan menggunakan alat Hematologyc Analizer Siemen Advia 2120. Kadar hemoglobin pada tikus dewasa 13,2 – 16,4 g/dL. 3. Leukosit Sel darah yang tidak mempunyai warna dan mempunyai kemampuan amuboid. Darah perifer diambil dan leukosit akan diukur pada hari ke-11, ke-14 dengan menggunakan alat Hematologi Analizer Siemen Advia 2120. Kadar leukosit pada tikus dewasa 7,3-12,6 x 103/ µL. 4. Trombosit Sel darah yang berperan dalam proses koagulasi dan berasal dari sel megakariosit di sumsum tulang. Trombosit pada darah perifer akan diukur pada hari ke-11dan ke-14 dengan menggunakan alat Hematologyc Analizer Siemen Advia 2120. Kadar trombosit pada tikus dewasa 840 – 1,240 x 103/ µL. 5. Eritrosit Sel darah merah yang dibentuk di sumsum tulang yang mengandung hemoglobin. Eritrosit dari darah perifer diukur pada hari ke-11dan ke-14 dengan menggunakan Hematologyc Analizer Siemen Advia 2120. Kadar eritrosit pada tikus dewasa 660 – 9.000 x 103/ µL.

52

6. Neutrofil Salah satu jenis leukosit polimorfonuklear dengan nilai normal 1,253,71 x103/µL

yang

dihitung

pada

hari

ke-11

dan

ke-14dengan

menggunakan alat Hematologyc Analizer Siemen Advia 2120. 7. Spirulina platensis a. Jenis ganggang hijau-biru yang diproduksi oleh Dongtai City Spirulina Bio-Engineering Co., Ltd, China disertai Certificate of Analysis dan NOP Certificate USDA Organic no.5647 serta Food Safety Management System GB/ T 22000-2006/ ISO22000: 2005. b. Spirulina berupa bubuk, pada kelompok perlakuan 1 diberikan selama penelitian sebanyak 250 mg/kg/hari yang dilarutkan dalam 2 ml air hangat. c. Spirulina berupa bubuk, pada kelompok perlakuan 2 diberikan selama penelitian sebanyak 500 mg/kg/hari yang dilarutkan dalam 2 ml air hangat. 8. Cyclophospamide Obat yang mampu mendepresi sumsum tulang, diberikan pada kedua kelompok dengan dosis 50 mg/kg/hari per intra peritoneal satu kali pada hari ke 7. Satu vial cyclophospamide 1000 mg dicampur dengan 100 cc NaCl 0,9% sehingga 1 cc mengandung cyclophospamide 10 mg. 9. Umur Dipilih kisaran kelompok umur yang sama pada semua tikus percobaan dengan membandingkan dengan berat badan maka dipakai tikus berumur 2,5 - 3 bulan, berat 175-200 gram.

53

10. Mencegah penurunan Penurunan eritrosit, hemoglobin, leukosit, trombosit, dan neutrofil lebih sedikit daripada kelompok kontrol. 11. Perdarahan Keluarnya darah dari saluran cerna bagian atas maupun bawah dan saluran kemih setelah pemberian cyclophospamide. 12. Nutrisi dan Lingkungan kandang Kandang pemeliharaan yang terbuat dari plastik dan berukuran 23 cm x 17 cm x 9,5 cm. Kandang beralas sekam padi dan ditutup dengan ayaman kawat, dilengkapi dengan tempat makan dan minum. Makanan dan minuman diberikan tak terbatas (ad libitum). Kandang ditempatkan dalam ruangan berventilasi dan udara alami.

4.4 Bahan dan instrumen penelitian 4.4.1 Bahan penelitian 1) Tikus wistar jantan (Rattus norvegicus) berusia 2,5 - 3 bulan, berat 175-200 gram. 2) Pakan tikus, minuman, dan kandang tikus. 3) Cyclophospamide 4) Spirulina 5) Iodium 6) Metil alkohol 70% 7) Kapas

54

4.4.2 Alat penelitian 1) Timbangan gram 2) Pipet kapiler 3) Spuit 3 cc 4) Tabung EDTA 5) Kandang tikus, tempat makanan dan minuman 6) Hematoanalizer Siemen Advia 2120

55

4.5 Protokol penelitian 1. Persiapan hewan coba a. Tikus wistar yang didapatkan dari Laboratory Animal unit bagian Farmakologi Kedokteran / Fakultas Kedokteran Udayana, Denpasar Bali. b. Tikus wistar sebanyak 30 ekor yang sudah memenuhi kriteria inklusi diadaptasikan selama 1 minggu. c. Tikus wistar dibagi menjadi 3 kelompok dengan simple random dan masing-masing kelompok adalah 10 ekor. d. Tikus wistar ditempatkan pada wadah plastik. Satu wadah plastik ditempati oleh 2 ekor tikus. Tikus akan diberikan makanan dan minuman ad libitum. 2. Pemberian perlakuan a. Pada awal penelitian, setelah mengadaptasikan tikus pada ketiga kelompok, masing-masing kelompok diberikan perlakuan sebagai berikut: i. Kelompok Kontrol akan diberikan akuabides 2 cc personde mulai dari awal penelitian sampai akhir penelitian (14 hari) dan diberikan Spirulina Platensis 250 mg/Kg berat badan setelah penelitian. ii. Kelompok Perlakuan 1 diberikan Spirulina platensis 250 mg/kg berat badan selama penelitian setiap hari per sonde (14 hari). iii. Kelompok Perlakuan 2 diberikan Spirulina platensis 500 mg/kg berat badan selama penelitian setiap hari per sonde (14 hari).

56

b. Pada hari ke-7, ketiga kelompok disuntikan dengan cyclophospamide 50 mg/kg berat badan, intraperitoneal, satu kali. c. Pada hari ke 11 dan 14, pada ketiga kelompok, dilakukan pengambilan darah perifer ulangan di medial kantus pada plexus venosus retroorbitalis untuk pemeriksaan kadar eritrosit, hemoglobin, leukosit, neutrofil dan trombosit. d. Setelah selesai penelitian, tikus akan dibius dengan kloroform sampai meninggal. 3. Sedian spirulina a. Serbuk Spirulina platensis b. Tiap tikus pada Kelompok Perlakuan 1 dan 2 diberikan Spirulina platensis yang sudah dilarutkan dengan air hangat 2 cc dan diberikan dengan sonde, dimulai pada hari ke-0 sampai hari ke-14 sesuai dosis dan berat badan masing-masing tikus. 4. Cyclophospamide a. Sediaan: Satu vial cyclophospamide 1000 mg dicampur dengan 100 cc NaCl 0,9% sehingga 1 cc mengandung cyclophospamide 100 mg. b. Cyclophospamide akan disuntikkan intraperitoneal satu kali saja pada hari ke-7 penelitian . Dosis sesuai dengan berat badan masing-masing tikus. 5. Hewan Percobaan a. Dalam penelitian ini digunakan tikus wistar Jantan. Tikus berumur 2,5 3 bulan, berat 175-200 gram.

57

b. Tikus dipelihara dalam kandang di Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Udayana Denpasar. Selama masa percobaan, tikus ditempatkan di dalam kandang yang terbuat dari plastik dengan ukuran 23 cm x 17 cm x 9,5 cm dengan tutup kawat. c. Kandang ditempatkan di dalam ruangan dengan suhu 20ºC - 25ºC, berventilasi dan udara alami. Tiap kandang memuat 2 ekor tikus. d. Kandang beralas sekam padi dan ditutup dengan ayaman kawat, dilengkapi dengan tempat makan dan minum. e. Makanan dan minuman diberikan tak terbatas (ad libitum). 6. Injeksi intraperitoneal a. Tikus diregangkan dengan kepala lebih rendah. b. Area injeksi intraperitoneal dilakukan di area perut kanan bawah. Area tersebut didesinfeksi dengan alkohol 70% c. Dilakukan penyuntikan dengan spuit 3 cc. d. Setelah jarum menembus dinding peritoneum, lakukan aspirasi untuk memastikan jarum tidak menebus kandung kemih atau usus (tidak ada material yang keluar) dan bila tidak ada maka suntikan perlahan campuran cyclophospamide. 7. Pengambilan Darah Perifer Tikus Wistar a. Melakukan fiksasi dengan tangan kiri pada kepala tikus sehingga kepala tidak bisa bergerak. b. Darah diambil di medial kantus pada plexus venosus retroorbitalis dengan menggunakan pipet mikrokapiler.

58

c. Darah yang keluar diambil 0,5 ml dan ditampung pada wadah yang sudah mengandung EDTA. 8. Pemeriksaan Hb, Ht, leukosit, eritrosit, trombosit, dan neutrofil Darah dari medial kantus sinus retroorbita + 0.5 ml dimasukkan ke dalam tabung EDTA dan dianalisis dengan mesin Hematologic Analyzer Siemen Advia 2120

59

Secara singkat alur penelitian dapat digambarkan sebagai berikut: Tikus Wistar 30 ekor

Kriteria Inklusi / eksklusi

KLP Kontrol 10 ekor

KLP Perlakuan 1 10 ekor

KLP Perlakuan 2 10 ekor

Pada hari ke-0

Pada hari ke-0

Pada hari ke-0

Pemberian aquabidest 2 cc per hari/ sonde sampai akhir penelitian.

Pemberian Spirulina platensis 250 mg/kg/BB per hari / sonde sampai akhir penelitian.

Pemberian Spirulina platensis 500 mg/kg/BB per hari / sonde sampai akhir penelitian.

Pada hari ke-7 Pemberian dosis cyclophospamide 50 mg/kg/hari, intraperitoneal, satu kali

Pada hari ke-11 Dilakukan pengambilan darah lengkap perifer

Pada hari ke-14 Dilakukan pengambilan darah lengkap perifer

Pengumpulan Data dan Analisis

Bagan 4.3 Skema Alur Penelitian Keterangan: Klp = Kelompok

60

4.6 Analisis data Data yang diperoleh dianalisis dengan langkah-langkah sebagai berikut: a. Analisis deskriptif b. Uji normalitas dengan Saphiro-Wilk test. Data berdistribusi normal karena p > 0.05. c. Uji homogenitas antar kelompok perlakuan dengan Levene’s test. Variasi data adalah homogen karena p > 0,05 d. Uji komparasi antar kelompok perlakuan karena data normal dan homogen maka dipakai analisis One-way Anova dan dilanjutkan dengan analisis Post Hoc – Least significant difference test (LSD) e. Pada penelitian ini derajat kemaknaan ditetapkan α= 0,05

61

BAB V HASIL PENELITIAN

Dalam penelitian ini digunakan tikus wistar jantan sebanyak 30 ekor, berumur 2,5 – 3 bulan, berat badan jantan 175-200 gram dengan kondisi sehat, yang terbagi menjadi 3 (tiga) kelompok masing-masing berjumlah 10 ekor tikus, yaitu Kelompok Kontrol (aquabides), Kelompok Perlakuan 1 (Spirulina 250 mg/kg BB), dan Kelompok Perlakuan 2 (Spirulina 500 mg/kg BB). Dalam bab ini diuraikan uji normalitas data, uji homogenitas data, uji komparabilitas, dan uji efek perlakuan.

5.1 Uji Normalitas Data Data hemoglobin, eritrosit, leukosit, trombosit, dan neutrofil baik sebelum perlakuan maupun sesudah perlakuan pada masing-masing kelompok diuji normalitasnya dengan menggunakan uji Shapiro-Wilk. Hasilnya menunjukkan bahwa semua data berdistribusi normal (p>0,05), dan hasil analisis disajikan pada Tabel 5.1 berikut.

44

62

Tabel 5.1 Uji Normalitas Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit dan Neutrofil Shapiro-wilk Data

Hemoglobin

Eritrosit

Leukosit

Trombosit

Neutrofil

Hari ke

p Kontrol

Perlakuan 1

Perlakuan 2

11

0,382

0,230

0,179

14

0,430

0,773

0,383

11

0,313

0,801

0,295

14

0,466

0,262

0,239

11

0,213

0,796

0,188

14

0,133

0,443

0,159

11

0,486

0,499

0,685

14

0,337

0,075

0,101

11

0,284

0,474

0,208

14

0,226

0,503

0,459

5.2 Uji Homogenitas Data antar Kelompok Data hemoglobin, eritrosit, leukosit, trombosit, dan neutrofil antar kelompok

baik

sebelum

perlakuan

maupun

sesudah

perlakuan

diuji

homogenitasnya dengan menggunakan uji Levene’s test. Hasilnya menunjukkan bahwa data homogen (p>0,05), disajikan pada Tabel 5.2 berikut.

63

Tabel 5.2 Uji Homogenitas Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit dan Neutrofil dengan Levene’s Test p Data

Hari ke 11

Hari ke 14

Hemoglobin

0,283

0,580

Eritrosit

0,061

0,580

Leukosit

0,201

0,132

Trombosit

0,389

0,386

Neutrofil

0,053

0,490

5.3 Hemoglobin 5.3.1 Efek perlakuan antar kelompok di hari ke 11 Uji efek perlakuan diuji berdasarkan rerata hemoglobin pada hari ke 11 antar kelompok sesudah diberikan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal dan perlakuan pada masing-masing kelompok. Hasil analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova disajikan pada Tabel 5.3 berikut.

Tabel 5.3 Rerata Hemoglobin antar Kelompok pada Hari ke 11 Sesudah Diberikan Perlakuan n

Rerata Hemoglobin (g/dL)

SB

Kontrol

10

12,01

0,57

Perlakuan 1

10

13,02

0,67

Perlakuan 2

10

12,42

0,48

Kelompok Subjek

F

p

7,55

0,002

64

Tabel 5.3 di atas, menunjukkan bahwa rerata hemoglobin kelompok kontrol adalah 12,010,57 g/dL, rerata kelompok perlakuan 1 adalah 13,020,67 g/dL, dan kelompok perlakuan 2 adalah 12,420,48 g/dL. Analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova menunjukkan bahwa nilai F = 7,55 dan nilai p = 0,002. Hal ini berarti bahwa ketiga kelompok sesudah diberikan perlakuan berupa cyclophospamide dan spirulina, rerata hemoglobinnya adalah berbeda secara bermakna (p < 0,05). Untuk mengetahui kelompok yang berbeda dengan kelompok kontrol, dilakukan uji lanjutan dengan Post Hoc – Least significant difference test (LSD). Hasilnya ditampilkan pada Tabel 5.4.

Tabel 5.4 Analisis Komparasi Hemoglobin antar Kelompok pada Hari ke 11 Beda Rerata Hemoglobin (g/dL)

p

Interpretasi

Kontrol dan Perlakuan 1

-1,01

0,001

Bermakna


-0,41

0,127

Tidak bermakna

Perlakuan 1 dan Perlakuan 2

0,59

0,03

Bermakna

Kelompok Subjek

Hasil uji LSD di atas menunjukan sebagai berikut: 1. Rerata hemoglobin Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 1. 2. Rerata hemoglobin Kelompok Kontrol adalah tidak berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2.

65

3. Rerata hemoglobin Kelompok Perlakuan 1 adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2.

5.3.2 Efek perlakuan antar kelompok hari ke 14 Uji efek perlakuan diuji berdasarkan rerata hemoglobin pada hari ke 14 antar kelompok sesudah diberikan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal dan perlakuan pada masing-masing kelompok. Hasil analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova disajikan pada Tabel 5.5 berikut.

Tabel 5.5 Rerata Hemoglobin antar Kelompok pada Hari ke 14 Sesudah Diberikan Perlakuan Kelompok Subjek

n

Rerata Hemoglobin (g/dL)

SB

Kontrol

10

11,72

1,37

Perlakuan 1

10

13,45

1,14

Perlakuan 2

10

12,86

0,92

F

p

5,72

0,008

Tabel 5.5 di atas, menunjukkan bahwa rerata hemoglobin Kelompok Kontrol adalah 11,721,37 g/dL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 13,451,14 g/dL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 12,860,92 g/dL. Analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova menunjukkan bahwa nilai F = 5,72 dan nilai p = 0,008. Hal ini berarti bahwa ketiga kelompok sesudah diberikan perlakuan berupa cyclophospamide dan bermakna (p < 0,05).

spirulina, rerata hemoglobinnya adalah berbeda secara

66

Untuk mengetahui kelompok yang berbeda dengan kelompok kontrol, dilakukan uji lanjutan dengan Post Hoc – Least significant difference test (LSD). Hasilnya ditampilkan pada Tabel 5.6

Tabel 5.6 Analisis Komparasi Hemoglobin antar Kelompok pada Hari ke 14 Beda Rerata Hemoglobin (g/dL)

p

Interpretasi


-1,73

0,003

Bermakna


-1,14

0,037

Bermakna


0,59

0,267

Tidak bermakna

Kelompok Subjek

Hasil uji LSD di atas menunjukan sebagai berikut: 1. Rerata hemoglobin Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan kelompok perlakuan 1. 2. Rerata hemoglobin Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan kelompok perlakuan 2. 3. Rerata hemoglobin Kelompok Perlakuan 1 adalah tidak berbeda bermakna dengan kelompok perlakuan 2.

67

14 13,45

13,5

13,03

12,86

13 12,5

12,42 12,01

12

11,72

11,5 11 10,5 Akuabides

Spirulina 250 mg/Kg BB Spirulina 500 mg/Kg BB Hari ke 11

Hari ke 14

Gambar 5.1 Rerata Hemoglobin antar Kelompok pada hari ke 11 dan hari ke 14

5.4 Eritrosit 5.4.1 Efek perlakuan hari ke 11 Uji efek perlakuan diuji berdasarkan rerata eritrosit pada hari ke 11 antar kelompok sesudah diberikan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal dan spirulina. Hasil analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova disajikan pada Tabel 5.7 berikut. Tabel 5.7 Rerata Eritrosit antar Kelompok pada Hari ke 11 Sesudah Diberikan Perlakuan n

Rerata Eritrosit ( x 106/μL)

SB

Kontrol

10

7,47

0,87

Perlakuan 1

10

8,26

0,23

Perlakuan 2

10

8,17

0,57

Kelompok Subjek

F

P

4,98

0,014

68

Tabel 5.7 di atas, menunjukkan bahwa rerata eritrosit Kelompok Kontrol adalah 7,470,87 x 106/μL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 8,260,23 x 106/μL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 8,170,57 x 106/μL.

Analisis

kemaknaan dengan uji One Way Anova menunjukkan bahwa nilai F= 4,98 dan nilai p = 0,014. Hal ini berarti bahwa ketiga kelompok sesudah diberikan perlakuan berupa cyclophospamide dan

spirulina, dan ditemukan rerata

eritrositnya adalah berbeda secara bermakna (p < 0,05). Untuk mengetahui kelompok yang berbeda dengan Kelompok Kontrol, dilakukan uji lanjutan dengan Post Hoc – Least significant difference test (LSD). Hasilnya ditampilkan pada Tabel 5.8.

Tabel 5.8 Analisis Komparasi Eritrosit antar Kelompok pada Hari ke 11 Beda Rerata Eritrosit (x 106 /μL)

p

Interpretasi


-0,796

0,008

Bermakna


-0,708

0,016

Bermakna


0,088

0,753

Tidak bermakna

Kelompok Subjek

Hasil uji LSD di atas menunjukan sebagai berikut: 1. Rerata eritrosit Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 1. 2. Rerata eritrosit Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan

69

Kelompok Perlakuan 2. 3. Rerata eritrosit Kelompok Perlakuan 1 adalah tidak berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2.

5.4.2 Efek perlakuan hari ke 14 Uji efek perlakuan diuji berdasarkan rerata eritrosit pada hari ke 14 antar kelompok sesudah diberikan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal dan spirulina. Hasil analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova disajikan pada Tabel 5.9 berikut. Tabel 5.9 Rerata Eritrosit antar Kelompok pada Hari ke 14 Sesudah Diberikan Perlakuan n

Rerata Eritrosit (x 106 /μL)

SB

Kontrol

10

7,35

0,97

Perlakuan 1

10

8,38

0,72

Perlakuan 2

10

8,30

0,64

Kelompok Subjek

F

P

5,18

0,012

Tabel 5.9 di atas, menunjukkan bahwa rerata eritrosit Kelompok Kontrol adalah 7,350,97 x 106/μL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 8,380,72 x 106/μL, dan Kelompok Perlakuan

2 adalah 8,300,64 x 106/μL.

Analisis

kemaknaan dengan uji One Way Anova menunjukkan bahwa nilai F= 5,18 dan nilai p = 0,012. Hal ini berarti bahwa ketiga kelompok sesudah diberikan

70

perlakuan berupa cyclophospamide dan spirulina, ditemukan rerata eritrositnya adalah berbeda secara bermakna (p < 0,05). Untuk mengetahui kelompok yang berbeda dengan Kelompok Kontrol, dilakukan uji lanjutan dengan Post Hoc – Least significant difference test (LSD). Hasilnya ditampilkan pada Tabel 5.10.

Tabel 5.10 Analisis Komparasi Eritrosit antar Kelompok pada Hari ke 14 Beda Rerata Eritrosit (x 106/μL)

p

Interpretasi


-1,023

0,007

Bermakna


-0,941

0,013

Bermakna


0,082

0,818

Tidak bermakna

Kelompok Subjek

Hasil uji LSD di atas menunjukan sebagai berikut: 1. Rerata eritrosit Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan . 1 2. Rerata eritrosit Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2. 3. Rerata eritrosit Kelompok Perlakuan 1 adalah tidak berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2.

71

8,6 8,4

8,26

8,38

8,3 8,17

8,2 8 7,8

7,6 7,4

7,47

7,35

7,2

7 6,8 Akuabides

Spirulina 250 mg/Kg Spirulina 500 mg/Kg BB BB

Hari Ke 11

Hari ke 14

Gambar 5.2 Rerata Eritrosit antar Kelompok pada hari ke 11 dan hari ke 14 5.5 Leukosit 5.5.1 Efek perlakuan hari ke 11 Uji efek perlakuan diuji berdasarkan rerata leukosit pada hari ke 11 antar kelompok sesudah diberikan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal dan spirulina. Hasil analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova disajikan pada Tabel 5.11 berikut. Tabel 5.11 Rerata Leukosit antar Kelompok pada Hari ke 11 Sesudah Diberikan Perlakuan n

Rerata Leukosit (x 106/μL)

SB

Kontrol

10

2,01

0,59

Perlakuan 1

10

2,63

0,57

Perlakuan 2

10

2,79

0,79

Kelompok Subjek

F

p

3,88

0,033

72

Tabel 5.11 di atas, menunjukkan bahwa rerata leukosit Kelompok Kontrol adalah 2,010,59 x 106/μL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 2,630,57 x 106/μL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 2,790,79 x 106/μL.

Analisis

kemaknaan dengan uji One Way Anova menunjukkan bahwa nilai F= 3,88 dan nilai p = 0,033. Hal ini berarti bahwa ketiga kelompok sesudah diberikan perlakuan berupa cyclophospamide dan spirulina, ditemukan rerata leukositnya adalah berbeda secara bermakna (p < 0,05). Untuk mengetahui kelompok yang berbeda dengan Kelompok Kontrol, dilakukan uji lanjutan dengan Post Hoc – Least significant difference test (LSD). Hasilnya ditampilkan pada Tabel 5.12.

Tabel 5.12 Analisis Komparasi Leukosit antar Kelompok pada Hari ke 11 Beda Rerata Leukosit (x 106/μL)

p

Interpretasi


-0,621

0,046

Bermakna


-0,782

0,014

Bermakna


-0,161

0,591

Tidak bermakna

Kelompok Subjek

Hasil uji LSD di atas menunjukan sebagai berikut: 1. Rerata leukosit Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 1. 2. Rerata leukosit Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan

73

Kelompok Perlakuan 2. 3. Rerata leukosit Kelompok Perlakuan 1 adalah tidak berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2.

5.5.2 Efek perlakuan hari ke 14 Uji efek perlakuan diuji berdasarkan rerata leukosit pada hari ke 14 antar kelompok sesudah diberikan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal dan spirulina. Hasil analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova disajikan pada Tabel 5.13 berikut.

Tabel 5.13 Rerata Leukosit antar Kelompok pada Hari ke 14 Sesudah Diberikan Perlakuan N

Rerata Leukosit (x 106/μL)

SB

Kontrol

10

7,88

2,62

Perlakuan 1

10

7,92

3,05

Perlakuan 2

10

10,83

1,51

Kelompok Subjek

F

p

4,66

0,018

Tabel 5.13 di atas, menunjukkan bahwa rerata leukosit Kelompok Kontrol adalah 7,882,62 x 106/μL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 7,923,05 x 106/μL, dan Kelompok Perlakuan

2 adalah 10,831,51 x 106/μL.

Analisis

kemaknaan dengan uji One Way Anova menunjukkan bahwa nilai F= 4,66 dan nilai p = 0,018. Hal ini berarti bahwa ketiga kelompok sesudah diberikan

74

perlakuan berupa cyclophospamide dan spirulina, ditemukan rerata leukositnya adalah berbeda secara bermakna (p < 0,05). Untuk mengetahui kelompok yang berbeda dengan Kelompok Kontrol, dilakukan uji lanjutan dengan Post Hoc – Least significant difference test (LSD). Hasilnya ditampilkan pada tabel 5.14.

Tabel 5.14 Analisis Komparasi Leukosit antar Kelompok pada Hari ke 14 Beda Rerata Leukosit (x 106/μL)

p

Interpretasi


-0,039

0,972

Tidak Bermakna


-2,953

0,013

Bermakna


-2,914

0,014

Bermakna

Kelompok Subjek

Hasil uji LSD di atas menunjukan sebagai berikut: 1. Rerata leukosit Kelompok Kontrol perlakuan adalah tidak berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 1. 2. Rerata leukosit Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2. 3. Rerata leukosit Kelompok Perlakuan 1 adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2.

75

12 10 8 6 4 2 0

10,83 7,92

7,88

2,79

2,63

2,01

Akuabides

Spirulina 250 mg/Kg Spirulina 500 mg/Kg BB BB

Hari 11

hari 14

Gambar 5.3 Rerata Leukosit antar Kelompok pada hari ke 11 dan hari ke 14

5.6 Trombosit 5.6.1 Efek perlakuan hari ke 11 Uji efek perlakuan diuji berdasarkan rerata trombosit pada hari ke 11 antar kelompok sesudah diberikan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal dan spirulina. Hasil analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova disajikan pada Tabel 5.15 berikut.

Tabel 5.15 Rerata Trombosit antar Kelompok pada Hari ke 11 Sesudah Diberikan Perlakuan n

Rerata Trombosit (x 103/μL)

SB

Kontrol

10

791,70

109,59

Perlakuan 1

10

909,10

91,49

Perlakuan 2

10

920,00

147,89

Kelompok Subjek

F

p

3,59

0,041

76

Tabel 5.15 di atas, menunjukkan bahwa rerata trombosit Kelompok Kontrol adalah 791,70109,59 x 103/μL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 909,1091,49 x 103/μL , dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 920,00147,89 x 103/μL. Analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova menunjukkan bahwa nilai F= 3,59 dan nilai p = 0,041. Hal ini berarti bahwa ketiga kelompok sesudah diberikan perlakuan berupa cyclophospamide dan

spirulina, ditemukan rerata

trombositnya adalah berbeda secara bermakna (p < 0,05). Untuk mengetahui kelompok yang berbeda dengan Kelompok Kontrol, dilakukan uji lanjutan dengan Post Hoc – Least significant difference test (LSD). Hasilnya ditampilkan pada Tabel 5.16.

Tabel 5.16 Analisis Komparasi Trombosit antar Kelompok pada Hari ke 11 Beda Rerata Trombosit (x 103/μL)

p

Interpretasi


-117,400

0,036

Bermakna


-128,300

0,023

Bermakna


-10,900

0,839

Tidak Bermakna

Kelompok Subjek

Hasil uji LSD di atas menunjukan sebagai berikut: 1. Rerata trombosit Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 1. 2. Rerata trombosit Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2.

77

3. Rerata trombosit Kelompok Perlakuan 1 adalah tidak berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2.

5.6.2 Efek perlakuan hari ke 14 Uji efek perlakuan diuji berdasarkan rerata trombosit pada hari ke 14 antar kelompok sesudah diberikan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal dan spirulina. Hasil analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova disajikan pada Tabel 5.17 berikut.

Tabel 5.17 Rerata Trombosit antar Kelompok pada Hari ke 14 Sesudah Diberikan Perlakuan n

Rerata Trombosit (x 103/μL)

SB

Kontrol

10

760,90

180,68

Perlakuan 1

10

950,90

113,75

Perlakuan 2

10

930,40

161,94

Kelompok Subjek

F

p

4,54

0,020

Tabel 5.17 di atas, menunjukkan bahwa rerata trombosit Kelompok Kontrol adalah 760,90180,68 x 103/μL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 950,90113,75 x 103/μL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 930,40161,94 x 103/μL. Analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova menunjukkan bahwa nilai F= 4,54 dan nilai p = 0,020. Hal ini berarti bahwa ketiga kelompok sesudah diberikan perlakuan berupa cyclophospamide dan

spirulina, ditemukan rerata

trombositnya adalah berbeda secara bermakna (p < 0,05).

78

Untuk mengetahui kelompok yang berbeda dengan Kelompok Kontrol, dilakukan uji lanjutan dengan Post Hoc – Least significant difference test (LSD). Hasilnya ditampilkan pada Tabel 5.18.

Tabel 5.18 Analisis Komparasi Trombosit antar Kelompok pada Hari ke 14 Beda Rerata Trombosit (x 103/μL)

p

Interpretasi


-190,000

0,011

Bermakna


-169,500

0,021

Bermakna

20,500

0,769

Tidak Bermakna

Kelompok Subjek


Hasil uji LSD di atas menunjukan sebagai berikut: 1. Rerata trombosit Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 1. 2. Rerata trombosit Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2. 3. Rerata trombosit Kelompok Perlakuan 1 adalah tidak berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2.

79

909,1

1000 800

791,7

950,9

920

930,4

760,9

600 400 200 0 Akuabides

Spirulina 250 mg/Kg BB Hari ke 11

spirulina 500 mg/Kg BB

Hari ke 14

Gambar 5.4 Rerata Trombosit antar Kelompok pada hari ke 11 dan hari ke 14 5.7 Neutrofil 5.7.1 Efek perlakuan hari ke 11 Uji efek perlakuan diuji berdasarkan rerata neutrofil pada hari ke 11 antar kelompok sesudah diberikan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal dan spirulina. Hasil analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova disajikan pada Tabel 5.19 berikut.

Tabel 5.19 Rerata Neutrofil antar Kelompok pada Hari ke 11 Sesudah Diberikan Perlakuan n

Rerata Neutrofil (x 103/μL)

SB

Kontrol

10

0,25

0,11

Perlakuan 1

10

0,44

0,21

Perlakuan 2

10

0,46

0,20

Kelompok Subjek

F

p

3,91

0,032

80

Tabel 5.19 di atas, menunjukkan bahwa rerata neutrofil Kelompok Kontrol adalah 0,250,11 x 103/μL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 0,440,21 x 103/μL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 0,460,20 x 103/μL.

Analisis

kemaknaan dengan uji One Way Anova menunjukkan bahwa nilai F= 3,91 dan nilai p = 0,032. Hal ini berarti bahwa ketiga kelompok sesudah diberikan perlakuan berupa cyclophospamide dan spirulina, ditemukan rerata neutrofilnya adalah berbeda secara bermakna (p < 0,05). Untuk mengetahui kelompok yang berbeda dengan Kelompok Kontrol, dilakukan uji lanjutan dengan Post Hoc – Least significant difference test (LSD). Hasilnya ditampilkan pada Tabel 5.20.

Tabel 5.20 Analisis Komparasi Neutrofil antar Kelompok pada Hari ke 11 Beda Rerata Neutrofil (x 103/μL)

p

Interpretasi


-0,181

0,037

Bermakna


-0,215

0,015

Bermakna


-0,034

0,684

Tidak Bermakna

Kelompok Subjek

Hasil uji LSD di atas menunjukan sebagai berikut: 1. Rerata neutrofil Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 1. 2. Rerata neutrofil Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2.

81

3. Rerata neutrofil Kelompok Perlakuan 1 adalah tidak berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2.

5.7.2 Efek perlakuan hari ke 14 Uji efek perlakuan diuji berdasarkan rerata neutrofil pada hari ke 14 antar kelompok sesudah diberikan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal dan spirulina. Hasil analisis kemaknaan dengan uji One Way Anova disajikan pada Tabel 5.21 berikut.

Tabel 5.21

Rerata Neutrofil antar Kelompok pada Hari ke 14 Sesudah Diberikan Perlakuan n

Rerata Neutrofil (x 103/μL)

SB

Kontrol

10

0,63

0,25

Perlakuan 1

10

0,93

0,36

Perlakuan 2

10

1,06

0,38

Kelompok Subjek

F

p

4,19

0,026

Tabel 5.21 di atas, menunjukkan bahwa rerata neutrofil Kelompok Kontrol adalah 0,630,25 x 103/μL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 0,930,36 x 103/μL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 1,060,38 x 103/μL.

Analisis

kemaknaan dengan uji One Way Anova menunjukkan bahwa nilai F= 4,19 dan nilai p = 0,026. Hal ini berarti bahwa ketiga kelompok sesudah diberikan perlakuan berupa cyclophospamide dan spirulina, ditemukan rerata neutrofilnya adalah berbeda secara bermakna (p < 0,05).

82

Untuk mengetahui kelompok yang berbeda dengan kelompok kontrol, dilakukan uji lanjutan dengan Post Hoc – Least significant difference test (LSD). Hasilnya ditampilkan pada Tabel 5.22.

Tabel 5.22 Analisis Komparasi Neutrofil antar Kelompok pada Hari ke 14 Beda Rerata Neutrofil (x 103/μL)

p

Interpretasi


-0,308

0,053

Tidak Bermakna


-0,426

0,009

Bermakna


-0,118

0,444

Tidak Bermakna

Kelompok Subjek

Hasil uji LSD di atas menunjukan sebagai berikut: 1. Rerata neutrofil Kelompok Kontrol adalah tidak berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 1. 2. Rerata neutrofil Kelompok Kontrol adalah berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2. 3. Rerata neutrofil Kelompok Perlakuan 1 adalah tidak berbeda bermakna dengan Kelompok Perlakuan 2.

83

1,2

1,06 0,93

1 0,8

0,63 0,6 0,4

0,46

0,44

0,25

0,2

0 Akuabides

Spirulina 250 mg/Kg BB Hari ke 11

Gambar 5.5

Spirulina 500 mg/Kg BB

Hari ke 14

Rerata Neutrofil antar Kelompok pada hari ke 11 dan hari ke 14

84

BAB VI PEMBAHASAN HASIL PENELITIAN

Untuk melihat pengaruh pemberian spirulina dalam mencegah penurunan hemoglobin, eritrosit, leukosit, trombosit, dan neutrofil dalam darah tikus wistar, maka dilakukan penelitian pada tikus wistar jantan sehat yang diberikan cyclophospamide. Sebagai hewan coba digunakan tikus wistar jantan sehat. Penelitian ini menggunakan tikus karena sistem hematopoietik dengan manusia. Pemilihan jenis kelamin jantan adalah untuk mengontrol pendarahan dan kehamilan dimana kedua hal ini bisa mempengaruhi hasil penelitian. Penelitian menggunakan 30 ekor tikus wistar jantan yang dibagi menjadi 3 kelompok yaitu Kelompok Kontrol (aquabides), Kelompok perlakuan 1 (spirulina 250 mg/kg BB tikus), dan Kelompok Perlakuan 2 (spirulina 500 mg/kg BB tikus). Penelitian dilakukan selama 2 minggu.

6.1 Pengaruh Spirulina terhadap Pencegahan Penurunan Hemoglobin Hasil penelitian dan analisis data hemoglobin darah pada ketiga kelompok didapatkan uji normalitas (Uji Shapiro Wilk) dan homogenitas (Levene’s test) adalah berdistribusi normal (p > 0,05). Hal ini berarti data pada ketiga kelompok adalah sama. Hasil analisis deskriptif dan uji One Way Anova didapatkan perbedaan yang bermakna menemukan bahwa rerata hemoglobin hari ke 11 Kelompok 67

85

Kontrol adalah 12,010,57 g/dL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 13,020,67 g/dL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 12,420,48 g/dL, dengan F = 7,55 dan nilai p = 0,002. Dari data di atas menunjukkan bahwa rerata hemoglobin pada Kelompok Kontrol lebih rendah dibandingkan Kelompok Perlakuan 1 dan 2 setelah 4 hari penyuntikan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal. Dengan uji One Way Anova, didapatkan perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol dan perlakuan. Post Hoc-LSD ditemukan perbedaan yang bermakna itu antara Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 1 (beda rerata -1,01, p = 0,001) serta Kelompok Perlakuan 1 dengan Kelompok Perlakuan 2 (beda rerata 0,59, p = 0,03). Peneliti melihat bahwa spirulina mampu mencegah penurunan hemoglobin darah pada hari ke 11 (4 hari setelah penyuntikan cyclophospamide 50 mg/kg intraperitoneal) pada dosis 250 mg / Kg BB tikus. Perbedaan tidak bermakna ditemukan antara Kelompok Kontrol dengan Kelompok perlakuan 2 (beda rerata 0,41, p = 0,127). Hal ini berarti dengan pemberian spirulina 500 mg / Kg BB tidak berbeda dengan kontrol. Hasil analisis deskriptif rerata hemoglobin pada hari ke 14 Kelompok Kontrol adalah 11,721,37 g/dL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 13,451,14 g/dL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 12,860,92 g/dL. Pada hasil deskriptif terlihat bahwa rerata hemoglobin pada Kelompok Kontrol lebih rendah daripada kelompok lainnya. Pada uji One Way Anova didapatkan nilai F = 5,72 dan nilai p = 0,008 yang berarti terdapat perbedaan yang bermakna. Dari hasil uji lanjutan dengan Post Hoc – LSD ditemukan kelompok yang bermakna adalah Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 1 (beda rerata -1,73, p = 0,003) serta

86

Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 2 (beda rerata -1,14, p = 0,037). Dari data yang ada disimpulkan bahwa dengan pemberian spirulina 250 mg / Kg BB dan 500 mg / Kg BB mampu mencegah penurunan hemoglobin pada hari ke 14 dibandingkan kontrol. Pada uji Post Hoc-LSD juga ditemukan bahwa tidak ada perbedaan antara Kelompok Perlakuan 1 dan 2. Ini berarti bahwa pemberian dosis 250 mg /Kg BB dan 500 mg / Kg BB memberikan dampak yang sama terhadap hemoglobin pada hari ke 14. Oleh karena itu pada penelitian ini, peneliti mengganggap dosis spirulina 250 mg / Kg BB adalah cukup untuk mencegah penurunan hemoglobin pada hari ke 14. Pada uji Post Hoc-LSD hari ke 11 menemukan bahwa spirulina 500 mg / Kg BB tidak mampu mencegah penurunan hemoglobin. Pada hari ke 11 dan 14 menunjukkan bahwa dosis spirulina yang efektif adalah 250 - 500 mg /Kg BB tikus. Hasil penelitian ini menunjukan bahwa dengan dosis 250 mg / Kg BB sudah cukup untuk mencegah penurunan hemoglobin pada tikus yang diberikan Cyclophospamid. Peneliti beranggapan bahwa spirulina dengan dosis 500 mg / Kb BB pada hari ke 11 yang diharapkan berfungsi sebagai anti oksidan sebaliknya menjadi pro-oksidan dan pada hari ke 14, spirulina 500 mg / Kg BB kembali menjadi antioksidan. Antioksidan yang terkandung pada spirulina adalah β-carotene, vitamin E, Chlorophyll a, dan Phycocyanin. Beberapa anti oksidan bisa berubah menjadi prooksidan yang mempunyai sifat seperti radikal bebas. Anti oksidan tersebut adalah β-carotene (Silvia dkk, 2004), kelompok phenolic seperti vitamin E (α-Tocopherol) dan Phycocyanin (golongan flavonoid) (Finaud, dkk., 2006). β-

87

carotene bertindak sebagai pro oksidan bila berada pada lingkungan dengan tekanan oksigen tinggi yang membentuk hidroksil radikal (Young dan Lowe, 2001, Palozza, dkk., 2003). α-Tocopherol dosis tinggi akan berubah menjadi pro oksidan bila tidak terdapat vitamin C yang cukup (Cillard, dkk., 1980, Vertuani, dkk., 2004) dan berada di sistem yang mengandung logam aktif redoks (besi dan tembaga) dimana akan membentuk ROS dan radikal phenoxyl yang mana akan merusak DNA dan lipid (Galati dan O’Brien, 2004). Flavonoid dapat bertindak sebagai pro oksidan bila berinteraksi dengan logam Fe2+, Fe3+ dan Cu2+. Vitamin E bekerja sama dengan β-carotene, GSH, vitamin C atau asam lipoik untuk mengendalikan lipid peroksidase (Finaud, dkk., 2006). Berdasarkan teori di atas dan mengingat bahwa hemoglobin mengandung besi dan membawa oksigen maka kandungan antioksidan yang terkandung dalam spirulina dengan dosis 500 mg / Kg BB berubah menjadi pro oksidan. Peneliti melihat bahwa perubahan ini bersifat sementara karena pada hari ke 14, kelompok perlakuan 2 (spirulina 500 mg / kg BB) kembali menjadi anti oksidan. Hal ini dikarenakan oleh adanya proses recycling radikal α-Tocopheroxyl yang merugikan menjadi α-Tocopheroxyl kembali. Proses ini bisa terjadi karena adanya co-oksidan seperti vitamin c atau bilirubin (Kontus, dkk., 1996). Bilirubin sendiri adalah antioksidan di cairan tubuh dan akan meningkat bila terjadi stress oksidatif (Finaud, dkk., 2006). Pada hemoglobin terkandung bilirubin yang pada kondisi seperti ini bisa bersifat sebagai co-oksidan dan mendukung terjadinya proses radical recycling.

88

6.2. Pengaruh Spirulina terhadap Pencegahan Penurunan Leukosit dan Neutrofil Hasil analisis deskriptif dan uji One Way Anova rerata leukosit pada hari ke 11 Kelompok Kontrol adalah 2,010,59 x 103/µL, Kelompok Perakuan 1 adalah 2,630,57 x 103/µL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 2,790,79 x 103/µL dengan nilai F= 3,88 dan nilai p = 0,033. Dengan analisis Post Hoc – LSD didapatkan perbedaan yang bermakna antara Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 1 (beda rerata -0,621, p = 0,046) serta Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 2 (beda rerata -0,782, p = 0,014). Pada hari ke 11, ditemukan bahwa rerata leukosit pada Kelompok Kontrol lebih rendah daripada kelompok perlakuan lainnya. Jadi spirulina mampu mencegah penurunan leukosit dibandingkan kontrol. Pada Post hoc-LSD antar kelompok 1 dan 2 tidak berbeda maka disimpulkan bahwa pemberian spirulina dosis 250 mg / Kg BB dan 500 mg / Kg BB tidak berbeda sehingga dengan dosis 250 mg / Kg BB sudah bisa mencegah penurunan leukosit. Hasil analisis deskriptif dan uji One Way Anova leukosit pada hari ke 14 kelompok Kelompok Kontrol adalah 7,882,62 x 103/µL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 7,923,05 x 103/µL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 10,831,51 x 103/µL, dengan nilai F= 4,66 dan nilai p = 0,018. Dengan analisis Post Hoc – LSD didapatkan perbedaan yang bermakna antara Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 2 (beda rerata -2,953, p = 0,013) serta Kelompok Per1akuan 1 dan 2 (beda rerata -2,914, p = 0,014) sedangkan antara Kelompok

89

Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 1 tidak bermakna ( beda rerata -0,039, p = 0,972). Dari data di atas disimpulkan bahwa pada hari ke 14, spirulina mampu mencegah penurunan leukosit dibandingkan kontrol terjadi dengan dosis 500 mg /Kg BB. Dosis spirulina 250 mg / Kg BB tidak bisa mencegah penurunan leukosit pada hari ke 14. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa diperlukan kenaikan dosis spirulina untuk mencegah penurunan leukosit pada tikus yang diberikan cyclophospamide. Hasil analisis deskriptif dan uji One Way Anova rerata neutrofil pada hari ke 11 Kelompok Kontrol adalah 0,250,11 x 103/µL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 0,440,21 x 103/µL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 0,460,20 x 103/µL dengan nilai F= 3,91 dan nilai p = 0,032. Dengan analisis Post Hoc – LSD didapatkan perbedaan yang bermakna antara Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 1 (beda rerata -0,181, p = 0,037) serta Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 2 (beda rerata -0,215, p = 0,015). Pada hari ke 11 ditemukan

penurunan

neutrofil

pada

Kelompok

Kontrol

lebih

banyak

dibandingkan kelompok yang lain. Perbedaan tidak bermakna ditemukan antara Kelompok Perlakuan 1 dan 2. Hal ini menunjukkan bahwa dosis 250 mg/Kg BB sudah bisa mencegah penurunan neutrofil pada tikus

yang diberikan

cyclophospamide. Hasil analisis deskriptif dan uji One Way Anova rerata neutrofil pada hari ke 14 Kelompok Kontrol adalah 0,630,25 x 103/µL , rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 0,930,36 x 103/µL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 1,060,38 x 103/µL, dengan nilai F= 4,19 dan nilai p = 0,026. Dengan analisis Post Hoc –

90

LSD didapatkan perbedaan yang bermakna antara Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 2 (beda rerata -0,426, p = 0,009). Pada hari ke 14, spirulina 500 mg / Kg BB tikus diperlukan untuk mencegah penurunan neutrofil tikus yang diberikan cyclophospamide. Pada hasil analisis One Way Anova dan Post ad Hoc kelompok leukosit dan neutrofil, pada hari ke 11 ditemukan perbandingan yang bermakna (p < 0,05) pada kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan 1 dan 2, sedangkan pada hari ke 14 ditemukan perbandingan yang bermakna hanya antara kelompok kontrol dan perlakuan 2. Pada penelitian ini tampak bahwa terjadi kenaikkan kebutuhan dosis spirulina 250 mg / kg BB menjadi 500 mg / Kg BB di hari ke 14. Dartsch. (2008) menemukan bahwa kebutuhan antioksidan dari spirulina pada neutrofil dan leukosit saat terjadi imflamasi bersifat dose-dependent. Literatur lain juga menunjukkan bahwa pada kultur Spirulina platensis yang ditambahkan H2O2, menunjukkan peningkatan kadar β-carotene dan α-tocopherol yang linier signifikan terhadap aktivitas antioksidan katalase, peroksidase, and superoxide dismutase (SOD) (El-Baky, dkk., 2007).

6.3. Pengaruh Spirulina terhadap Pencegahan Penurunan Eritrosit Hasil analisis deskriptif dan uji One Way Anova, rerata eritrosit pada hari ke 11 Kelompok Kontrol adalah 7,470,87 x 106/µL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 8,260,23 x 106/µL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 8,170,57 x 106/µL dengan kemaknaan nilai F= 4,98 dan nilai p = 0,014. Dengan analisis Post Hoc – LSD didapatkan perbedaan yang bermakna antara Kelompok Kontrol

91

dengan Kelompok Perlakuan 1 (beda rerata -0,796, p = 0,008) serta Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 2 (beda rerata -0,708, p = 0,016). Hasil analisis di atas ditemukan bahwa spirulina mencegah penurunan eritrosit dibandingkan kontrol sudah terjadi pada dosis 250 mg /Kg BB. Hasil analisis deskriptif rerata eritrosit pada hari ke 14 Kelompok Kontrol adalah 7,350,97 x 106/µL, rerata Kelompok Perlakuan 1 adalah 8,380,72 x 106/µL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 8,300,64 dengan nilai F= 5,18 dan nilai p = 0,012. Dengan analisis Post Hoc – LSD didapatkan perbedaan yang bermakna antara Kelompok Kontrol dengan Perlakuan 1 (beda rerata -1,023, p = 0,007) serta Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 2 (beda rerata 0,941, p = 0,013) tetapi tidak pada Kelompok Perlakuan 1 dengan 2 ( beda rerata 0,082, p = 0,818). Hasil analisis di atas ditemukan bahwa spirulina mencegah penurunan eritrosit dibandingkan kontrol sudah terjadi dengan dosis 250 mg /Kg BB. Dari data antar kelompok pada hari ke 11 dan hari ke 14 ditemukan bahwa spirulina mampu mencegah penurunan eritrosit darah. Dosis pencegahan sudah terlihat pada hari ke 11 pada kelompok spirulina 250 mg/Kg BB berlanjut terus sampai hari ke 14. Jadi bisa disimpulkan bahwa dengan dosis 250 mg bisa mencegah penurunan eritrosit.

6.4 Pengaruh Spirulina terhadap Pencegahan Penurunan Trombosit Hasil analisis deskriptif dan uji One Way Anova rerata trombosit pada hari ke 11 Kelompok Kontrol adalah 791,70109,59 x 103/µL, rerata Kelompok

92

Perlakuan 1 adalah 909,1091,49 x 103/µL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 920,00147,89 x 103/µL dengan nilai F= 3,59 dan nilai p = 0,041. Dengan analisis Post Hoc – LSD didapatkan perbedaan yang bermakna antara Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 1 (beda rerata -117,400, p = 0,036) serta Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 2 (beda rerata -128,30, p = 0,023). Pada hari ke 11, spirulina mencegah penurunan trombosit dibandingkan kontrol terjadi dengan dosis 250 mg /Kg BB dan 500 mg / Kg BB. Pada analisis Post Hoc-LSD antara Kelompok Perlakuan 1 dan 2 tidak didapatkan perbedaan (p = 0,839) maka peneliti pada penelitian ini menyarankan agar dosis 250 mg / Kg BB digunakan untuk pencegahan penurunan trombosit akibat pemberian cyclophospamide. Rerata trombosit pada hari ke 14 Kelompok Kontrol adalah 760,90180,68 x 103/µL, Kelompok Perlakuan 1 adalah 950,90113,75 x 103/µL, dan Kelompok Perlakuan 2 adalah 930,40161,94 x 103/µL, dengan nilai F= 4,54 dan nilai p = 0,020. Dengan analisis Post Hoc – LSD didapatkan perbedaan yang bermakna antara Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 1 (beda rerata -190,00, p = 0,011) serta Kelompok Kontrol dengan Kelompok Perlakuan 2 (beda rerata 169,50, p = 0,021) tetapi tidak pada Kelompok Perlakuan 1 dengan 2. Hasil penelitian menunjukkan bahwa spirulina dosis 250 mg /Kg BB bisa mencegah penurunan trombosit dibandingkan kontrol. Pada penelitian ini ditemukan bahwa spirulina dapat mencegah penurunan hemoglobin, eritrosit, leukosit, trombosit, dan neutrofil yang diberikan

93

cyclophospamide. Beberapa penelitian lain juga menunjukkan bahwa spirulina mampu mencegah penurunan kadar hemoglobin, leukosit, eritrosit, trombosit dan neutrofil (Zhang, dkk., 2001, Verma, dkk., 2006; Simsek, dkk., 2007). Hal ini disebabkan karena Spirulina platensis mengandung vitamin seperti vitamin B, vitamin E, Vitamin K, phenolic acids, tocopherols, g-linolenic acid, asam folat, pigmen seperti b-carotenes, chlorophyll a dan phycocyanin, dan mineral terutama zat besi (Sánchez dkk, 2003). Kandungan vitamin B12, Asam folat dan zat besi pada Spirulina platensis mampu meningkatkan produksi hemoglobin, leukosit dan hitung jenis darah perifer. Kandungan vitamin E dan Phenolic acids (Shukla dkk, 2009; Shanmugapriya dan Ramanathan, 2012), bcarotenes dan chlorophyll a (Mohammed, 2011) dan C-phycocyanin (Estrada, dkk, 2001) memberikan kemampuan antioksidan pada Spirulina platensis. Hal ini dibuktikan dengan penurunan produksi ROS (reactive oxygen species) dan menurunkan kadar menurunkan malondialdehyde (MDA) hati (Verma, dkk., 2006; Li dkk., 2009.), meningkatkan aktivitas enzim NADPH oxidase (Romay, 1998), enzim superoxide dismutase (SOD) (Li, dkk., 2009) dan glutathione peroxidase (Verma, dkk., 2006; Li, dkk., 2009). Penelitian lainnya yang mendukung adalah Pada kultur Spirulina platensis yang ditambahkan H2O2, menunjukkan peningkatan kadar β-carotene dan α-tocopherol yang

linier

signifikan terhadap aktivitas antioksidan katalase, peroksidase, and superoxide dismutase (SOD) (El-Baky, dkk., 2007). Selain sebagai antioksidan, pigmen Phycocyanin yang terkandung pada Spirulina platensis mampu meningkatkan proliferasi sel - sel sumsum tulang akibat menstimulasi Granulocyte macrophage-

94

colony stimulating factor (GM-CSF) dan interleukin-3 (IL-3) dan menginduksi aktivitas pembentukan koloni (colonyforming) pada kultur sel lien tikus, serta meningkatkan rasio neutrofil dan limfosit pada darah perifer tikus (Hayashi, dkk., 2006). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa spirulina mampu mencegah penurunan hemoglobin, eritrosit, leukosit, neutrofil dan trombosit darah perifer akibat pemberian cyclophospamide. Hal ini dikarenakan Spirulina platensis mampu meningkatkan produksi sumsum tulang dengan memperbaiki lingkungan mikro dan meningkatkan mekanisme regulasi sistem hematopoisis.

95

BAB VII SIMPULAN DAN SARAN

7.1 Simpulan Berdasarkan hasil penelitian pemberian spirulina pada tikus wistar jantan yang diberikan cyclophospamide, didapatkan simpulan sebagai berikut: 1. Pemberian spirulina dengan dosis 250 / Kg BB dapat mencegah penurunan hemoglobin pada tikus yang diberikan cyclophospamide. 2. Pemberian spirulina dengan dosis 250 mg / Kg BB dapat mencegah penurunan eritrosit pada tikus yang diberikan cyclophospamide. 3. Pemberian spirulina dengan dosis 500 mg/ Kg BB dapat mencegah penurunan leukosit pada tikus yang diberikan cyclophospamide. 4. Pemberian spirulina dengan dosis 250 mg / Kg BB dapat mencegah penurunan trombosit pada tikus yang diberikan cyclophospamide. 5. Pemberian spirulina dengan dosis 500 mg / Kg BB dapat mencegah penurunan neutrofil pada tikus yang diberi cyclophospamide.

96

7.2 Saran Sebagai saran dalam penelitian ini adalah: 1. Diperlukan penelitian lebih lanjut untuk mencari dosis spirulina yang lebih tepat antara rentang 250 – 500 mg / Kg BB tikus untuk menghindari efek pro oksidan pada hemoglobin sekaligus bisa memenuhi peningkatan kebutuhan anti oksidan pada kelompok leukosit dan neutrofil. 2. Diperlukan penelitian uji klinik dengan menggunakan spirulina pada pasien yang mendapatkan cyclophospamid.

97

DAFTAR PUSTAKA

Anton, E. 1997, Liver After Cyclophospamide Treatment In Mice. Tissue and Cell. Vol 29, Issue 1:1-9. Belay, A. 2002. The Potential Application of Spirulina (Arthrospira) As A Nutritional And Therapeutic Supplement In Health Management. The Journal of The American Nutraceutical Association Vol. 5, No. 2, p.27-48. Blankenberg, F.G., Naumovski, L., Tait, J.F., Post, A.M., Strauss H.W. 2001. Imaging Cyclophosphamide-Induced Intramedullary Apoptosis In Rats Using 99mtc-Radiolabeled Annexin V. The Journal of Nuclear Medicine; 42:309–316. Brown, C.I., Carbone, P.P. 1971. Effects of Chemotherapeutic Agents on Normal Mouse Bone Marrow Grown In Vitro. Cancer Research; 31:185 -190. Brunton, L.L. 2008. Antineoplastik Agents in Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics 11th Ed. Chapter 51. San Francisco. McGraw-Hill. Campbell, T.W. 2012. Veterinary Hematology and Clinical Chemistry ed 2nd. Oxford. John Willey & Son. Chakraborty, P., Ugir, H.S., Murmu, N., Kumar, D. J., Smarajit, P. and Bhattacharya S. 2009. Modulation of Cyclophosphamide-Induced Cellular Toxicity by Diphenylmethyl Selenocyanate In Vivo, an Enzymatic Study. Journal of Cancer Molecules 4(6):183-189. Chu, W.L., Lim, Y.W., Radhakrishnan, A.K., Lim, P.K. 2010. Protective Effect of Aqueous Extract from Spirulina platensis against Cell Death Induced by Free Radicals. BMC Complementary and Alternative Medicine,; 10; 53:18. Cillard, J., Cillard, P., Cormier, M., Girre, L. 1980. α–Tocopherol Prooxidants Effect in Aqueous Media: Increased Autoxidation Rate of Linoleic Acid. J. Am. Oil Chem; 57: 252-255. Dartsch, P.C., 2008. Antioxidant Potential of Selected Spirulina platensis Preparations. Phytotherapy Research: 22; 5, p. 627–633. Dro¨ ge, W. 2002. Free Radicals in the Physiological Kontrol of Cell Function. Physiol Rev.82. p. 47–95.

98

El-Baky, H.H.A., El Baz, F.K., El-Baroty. G.S. 2007. Enhancement of Antioxidant Production in Spirulina Plantensis Under Oxidative Stress. American-Eurasian Journal of Scientific Research 2 (2): 170-179. Eriksen, N.T. 2008. Production of Phycocyanin—a Pigment with Applications in Biology, Biotechnology, Foods and Medicine. Appl Microbiol Biotechnol 80:1–14. Estrada, J.E.P., Bescos, P.B., fresno, A.M.V. 2001. Antioxidant Activity of Different Fractions of Spirulina platensis Proteant Extract. Il Farmaco vol. 56, issue 5-7. 497-500. Fauci, A.S., Kasper, D.L., Longo, D.L., Braunwald, E., Hauser, S.L., Jameson, J.L., Loscalzo, J. 2012. Hematopoiesis and the Physiologic Basis of Red Cell Production in Harrison's Principles of Internal Medicine 18th ed. San Francisco. McGraw-Hill. FDA. Agency Response Letter GRAS Notice No. GRN 000127, 2003, available from http://www.fda.gov/Food/Food Ingredients Packaging/ Generally RecognizedasSafeGRAS /GRASListings/ucm153944.htm. Accessed: May, 4th, 2010 Federer, W. 1991. Statistic and Society: Data Colecction and Interpretation 2nd ed. New York. Marcrl Dekker. Finaud, J., Lac, G.,Filaire, E. 2006. Oxidative Stress Relationship with Exercise and Training. Sports Med; 36 (4): 327-358. Galati, G., O’Brien, P.J. 2004. Potential Toxicity of Flavonoids and Other Dietary Phenolics: Significance for Their Chemopreventive and Anticancer Properties. Free Radic. Biol. Med; 37: 287-303. Glaspy. J, 2008. Hematologic Problems in Abeloff’s Clinical Oncology 4th Ed. New York. Elsevier. p. 675-682. Guyton, A.C., Hall, J.E. 2006. Blood Cells, Immunity, and Blood Clotting in Textbook Of Medical Physiology 11th Ed. Philadelphia. Elsevier. p. 417429. Hamid, A.A., Aiyelaagbe, O.O., Usman, L.A., Ameen, O.M., Lawal, A. 2010. Antioxidants: Its Medicinal and Pharmacological Applications, African Journal Of Pure And Applied Chemistry Vol. 4(8); 142-151

99

Hayashi, O., Ono, S., Ishii, K., Shi, Y.H., Hirahashi, T., Katoh, T. 2006. Enhancement of Proliferation and Differentiation in Bone Marrow Hematopoietic Cells by Spirulina (Arthrospira) platensis in Mice, Springer. Journal of Applied Phycology; 18: 47–56. Hutadilok-Towatana, N., Reanmongkol, W., Satitit, S., Panichayupakaranant, P., Ritthisunthorn P. 2008. A Subchronic Toxicity Study Of Spirulina Platensis. Food Sci. Technol. Res. 14 (4): p.351 – 358. Jain, N.C. 1993. Essential of Veterinary Hematology. Philadelphia. Williams & Wilkins. p.72-76. Katzung, B.G. 2006. Cancer Chemotherapy in Basic and Clinical Pharmacology 10th Ed. Chapter 55. San Francisco. McGraw-Hill. Kontush, A., Finckh, B., Karten, B., kohlschutte, A., Beisiege, U. 1996. Antioxidant And Prooxidant Activity Of A-Tocopherol In Human Plasma and Low Density Lipoprotein. Journal of Lipid Research; Volume 37:1436-1448. Leung, A.J.H., Verfaillie, C.M. 2005. Stem Cell Model of Hematopoiesis in Hoffman: Hematology: Basic Principles and Practice, 4th ed., Philadelphia. Churchill Livingstone. Li, X.L., Xu, G., Chen, T., Wong, Y.S., Zhao, H.L., Fan, R.R., Gu, X.M., Tong, P.C., Chan, J.C. 2009. Phycocyanin protects INS-1E pancreatic beta cells against human islet amyloid polypeptide-induced apoptosis through attenuating oxidative stress and modulating JNK and p38 mitogenactivated protein kinase pathways. Int J Biochem Cell Biol. 41(7):1526-35. McCarty, M.F. 2007. Clinical Potential of Spirulina as a Source of Phycocyanobilin. J Med Food 10 (4): 566–570 Mohammed, M.K., 2011. Production of Carotenoids (Antioxidants/ Colourant) In Spirulina Platensis in Response to Indole Acetic Acid (IAA). International Journal of Engineering Science and Technology. Vol. 3 No. 6; 4973-4979. Molyneux, G., Andrews, M., Sones, W., York, W., Barnett, A., Quirk, E., Yeung, W., Turton, J. 2011. Haemotoxicity of Busulphan, Doxorubicin, Cisplatin and Cyclophosphamide in the Female BALB/c Mouse Using A Brief Regimen Of Drug Administration. Cell Biol Toxicology: 27; 13–40. Murata, M., Suzuki, T., Midorikawa, K., Oikawa, S., Kawanishi, S. 2004. Oxidative DNA Damage Induced By A Hydroperoxide Derivative Of Cyclophosphamide. Free Radic Biol Med. 15;37(6):793-802.

100

Palozza, P., Serini, S., Nicuolo, F.D., Piccioni, E., Calviello. 2003. Prooxidant Effects of B-Carotene In Cultured Cells. Molecular Aspects of Medicine, 24:353–362. Pardhasaradhi, B.V.V., Mubarak,A. A., Kumari, A.L., Reddanna, P., Khar, A. 2003. Phycocyanin-Mediated Apoptosis In AK-5 Tumor Cells Involves Down-Regulation Of Bcl-2 And Generation of ROS. Molecular Cancer Therapeutics (2):1165–1170. Ratna, S.D., 2013. Laporan Penelitian Pendahuluan: Spirulina Menghambat Penurunan Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit, dan Hitung Jenis Darah Perifer Tikus (Rattus norvegicus) yang Diberikan Cyclophospamide. Belum dipublikasikan. Ritter, J.M., Lewis, L.D., Mant, T.Gk., Ferro, A. 2010. Cancer Chemotherapy in A Textbook Of Clinical Pharmacology and Therapeutics 5th Ed. London. Hodder Arnold. p. 267-385. Romay, C., Armesto, J., Remirez, D., Gonza´lez, R., Ledon, N., Garcı´a, I. 1998. Antioxidant and Anti-Inflammatory Properties of C-phycocyanin from Blue-Green Algae. Inflammation Research:47; 36–41. Sánchez, M., Castillo B,J., Rozo, C., Rodríguez, I. 2003. . Spirulina (arthrospira): A Review: An Edible Microorganism, available from: http://www.javeriana.edu.co/universitas_scientiarum/universitas_docs/vol 8n1/J_bernal.htm. accessed July,2011 Shanmugapriya, R., Ramanathan, T. 2012. Antioxidant and Radical Scavenging Effect of Blue-Green Alga Spirulina platensis. International Journal of Pharmaceutical & Biological Archives. 3(5):1086-1090. Shukla, V., Vashistha, M., Singh, S.N., 2009. Evaluation Of Antioxidant Profile And Activity Of Amalaki (Emblica Officinalis), Spirulina And Wheat Grass. Indian Journal Of Clinical Biochemistry: 24; 70-75. Sieff, C.A., Nathan, D.G. 2003. Stem cells and Haemopoiesis in Oxford Textbook of Medicine, 4th Ed. Oxford . Oxford University Press. P. 505-515. Simsek, N., Karadeniz, N., Karaca, T. 2007. Effects of The Spirulina platensis and Panax Ginseng Oral Supplementation on Peripheral Blood cells in Rats, Revue Méd. Vét:10; 483-488. Sladek, N. E. 1972. Therapeutic Efficacy of Cyclophosphamide as A Function of Inhibition of Its Metabolism. Cancer Research: 32; 1848-1854.

101

Smith, J.B dan Mangkoewidjojo, S. 1988. Pemeliharaan, Pembiakan dan Pengunaan Hewan Percobaan di Daerah Tropis: Tikus. Universitas Indonesia. hal. 37-57. Strauss, G., Westhoff, M.A., Fischer-Posovszky, P., Fulda, S., Schanbache, M., Eckhoff, S.M., Stahnke, K., Vahsen, N., Kroemer, G., Debatin, K.M. 2008. 4-Hydroperoxy-Cyclophosphamide Mediates Caspasein dependent T-Cell Apoptosis Involving Oxidative Stress-Induced Nuclear Relocation Of Mitochondrial Apoptogenic Factors AIF and Endo G. Cell Death and Differentiation 15; 332–343. Tobias, J. Hochhauser, D. 2010. Systemic Treatment For Cancer in Cancer and Its Management 6th ed. London. Willey-Blackwell. p.104-124. Tsai-Turton, M., Luong, B.T., Tan, Y., Luderer. U. 2007. CyclophosphamideInduced Apoptosis in COV434 Human Granulosa Cells Involves Oxidative Stress and Glutathione Depletion. Toxicological Sciences 98(1); 216–230. Tsukii. Y., 2003. Gambar Spirulina. available from http:/ /protist.i.hosei.ac.jp/ PDB4/PCD3229/ PCD3229.html. Accessed July, 2011 Verma, S., Samarth, R., Panwar, M. 2006. Evaluation of Radioprotective Effects of Spirulina in Swiss Albino Mice. Asian J. Exp. Sci; Vol. 20. No. 1:121126. Vertuani, S., Angusti, A., Manfredini, S. 2004. The Antioxidants and ProAntioxidants Network: An Overview. Current Pharmaceutical Design; 10, 1677-1694. Welman, M.L. 2010. Hematopoiesis in Schalm’s Veterinary Hematology, 6th ed. Singapore. Blackwell Publishing. p. 27-64. Young, A.J., Lowe, G.M. 2001. Antioxidant and Prooxidant Properties of Carotenoids. Arch. Biochem. Biophys; 382: 20-27. Zhang, H.Q., Lin, A.P., Sun, Y., Deng, A.M. 2001. Chemo- and Radio-Protective Effect of Polysaccharida of Spirulina platensis on Hemopoietic System of Mice and Dogs. Acta Pharmacol Sin: 1121-1124.

102

Lampiran 1

TEMPAT DAN WAKTU PENELITIAN Penelitian dilaksanakan di: 2. Laboratorium Animal unit bagian Farmakologi Kedokteran. Denpasar Bali. 3. Laboratorium Daerah Denpasar, Bali Jadwal Penelitian Percobaan dan Pengumpulan data Analisa Data Pelaporan

Juli 2013

Agustus 2013

Februari 2014

Lampiran 2 103

ETIKAL KLIREN (Difoto kopi)

104

Lampiran 3 KANDUNGAN SPIRULINA YANG DIPAKAI PADA PENELITIAN per 10 gram VITAMIN Vitamin A

23000 IU

Vitamin B1

0.35 mg

Beta Caroten

14 mg

Vitamin B2

0.40 mg

Vitamin C

0

Vitamin B3

1.4 mg

Vitamin D

1200 IU

Vitamin B6

80 mcg

Vitamin E

1 mg

Asam Folat

1 mcg

Vitamin K

200 mcg

Vitamin B12

20 mcg

Biotin

0.5 mcg

As.Pantotenat

10 mcg

Inositol

6.4 mcg

MINERAL 70 mg

Posphat

80 mg

Kalsium Besi

15 mg

Magnesium

40 mg

Natrium

90 mg

Selenium

10 mcg

Kalium

140 mg

Mangan

0.5 mg

Krom

25 mcg

Seng

0.3 mg

Germanium

60 mcg

Tembaga

120 mcg

14 %

Klorofil Hijau

1.0 %

PIGMEN Phycocyanin Biru Karotenoid Orange

0.47 %

105

KAROTENOID Beta karoten

0.25 %

Xanthophyll lain

0.03 %

Myxoxanthophyll

0.09 %

Zeaxanthin

0.08 %

Cryptoxanthin

0.01 %

Echinenone

0.01 %

Karoten lain

0.21 %

ASAM AMINO ESSENSIAL Isoleusin 5.6 %

Leusin

8.7 %

Lisin

4.7 %

Metionin

2.3 %

Fenilalanin

4.5 %

Treonin

5.2 %

Triptofan

1.4 %

Valin

6.5 %

Arginin

6.9 %

Sistin

1.0 %

ASAM AMINO NON ESSENSIAL 7.6 % Alanin Asam Aspartat 9.8 % Asam Glutamat

14.6 %

Glisin

5.2 %

Histidin

1.5 %

Prolin

4.3 %

Serin

5.2 %

Tirosin

4.8 %

106

Lampiran 4. Pengujian Kenormalan Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit dan Neutrofil Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Kelompok Hemoglobin Hari 11

Hemoglobin Hari 14

Eritrosit Hari 11

Eritrosit Hari 14

Leukosit Hari 11

Leukosit Hari 14

Statistik

df

Sig.

Shapiro-Wilk Statistik

df

Sig.

Kontrol

.157

10

.200*

.923

10

.382

Perlakuan 1

.187

10

.200*

.902

10

.230

Perlakuan 2

.201

10

.200*

.892

10

.179

Kontrol

.140

10

.200*

.928

10

.430

Perlakuan 1

.148

10

.200*

.959

10

.773

Perlakuan 2

.222

10

.175

.923

10

.383

Kontrol

.217

10

.198

.915

10

.313

Perlakuan 1

.169

10

.200*

.961

10

.801

Perlakuan 2

.219

10

.191

.912

10

.295

Kontrol

.141

10

.200*

.932

10

.466

Perlakuan 1

.214

10

.200*

.907

10

.262

Perlakuan 2

.190

10

.200*

.903

10

.239

Kontrol

.197

10

.200*

.899

10

.213

Perlakuan 1

.175

10

.200*

.961

10

.796

Perlakuan 2

.182

10

.200*

.894

10

.188

Kontrol

.245

10

.091

.881

10

.133

Perlakuan 1

.172

10

.200*

.930

10

.443

107

Trombosit Hari 11

Trombosit Hari 14

Neutrofil Hari 11

Neutrofil Hari 14

Perlakuan 2

.208

10

.200*

.888

10

.159

Kontrol

.183

10

.200*

.934

10

.486

Perlakuan 1

.157

10

.200*

.935

10

.499

Perlakuan 2

.144

10

.200*

.951

10

.685

Kontrol

.170

10

.200*

.918

10

.337

Perlakuan 1

.214

10

.200*

.859

10

.075

Perlakuan 2

.206

10

.200*

.871

10

.101

Kontrol

.178

10

.200*

.910

10

.284

Perlakuan 1

.158

10

.200*

.933

10

.474

Perlakuan 2

.195

10

.200*

.898

10

.208

Kontrol

.197

10

.200*

.901

10

.226

Perlakuan 1

.155

10

.200*

.935

10

.503

Perlakuan 2

.156

10

.200*

.931

10

.459

a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance.

108

Lampiran 5 Pengujian Homogenitas Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit dan Neutrofil Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic

df1

df2

Sig.

Hemoglobin hari ke 11

1.321

2

27

.283

Hemoglobin hari ke 14

.556

2

27

.580

Eritrosit hari ke 11

3.051

2

27

.061

Eritrosit hari ke 14

.556

2

27

.580

Leukosit hari ke 11

1.703

2

27

.201

Leukosit hari ke 14

2.187

2

27

.132

Trombosit hari ke 11

.977

2

27

.389

Trombosit hari ke 14

.987

2

27

.386

Neutrofil hari ke 11

3.283

2

27

.053

Neutrofil hari ke 14

.732

2

27

.490

109

Lampiran 6. Pengujian Deskriptif Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit dan Neutrofil Descriptives 95% Confidence Interval for Mean Std. Deviation Std. Error

Lower

Upper

Bound

Bound

N

Mean

Minimum Maximum

Hemoglobin Kontrol

10

12.0100

.57436

.18163

11.5991

12.4209

11.00

12.70

Hari 11

Perlakuan 1

10

13.0200

.67791

.21437

12.5351

13.5049

12.20

14.00

Perlakuan 2

10

12.4212

.48567

.15358

12.0738

12.7686

11.40

13.00

Total

30

12.4837

.70435

.12860

12.2207

12.7467

11.00

14.00

Hemoglobin Kontrol

10

11.7200 1.37016

.43328

10.7398

12.7002

9.00

13.20

Hari 14

Perlakuan 1

10

13.4500 1.14625

.36248

12.6300

14.2700

11.70

15.20

Perlakuan 2

10

12.8600

.92999

.29409

12.1947

13.5253

11.70

14.40

Total

30

12.6767 1.33873

.24442

12.1768

13.1766

9.00

15.20

Eritrosit

Kontrol

10

7.4700

.87041

.27525

6.8473

8.0927

5.72

8.53

Hari 11

Perlakuan 1

10

8.2660

.23908

.07560

8.0950

8.4370

7.94

8.71

Perlakuan 2

10

8.1780

.57727

.18255

7.7650

8.5910

7.12

8.88

Total

30

7.9713

.69830

.12749

7.7106

8.2321

5.72

8.88

Eritrosit

Kontrol

10

7.3590

.96797

.30610

6.6666

8.0514

5.39

8.55

Hari 14

Perlakuan 1

10

8.3820

.72142

.22813

7.8659

8.8981

7.11

9.24

Perlakuan 2

10

8.3000

.64389

.20362

7.8394

8.7606

7.29

9.07

Total

30

8.0137

.89655

.16369

7.6789

8.3484

5.39

9.24

Leukosit

Kontrol

10

2.0150

.59268

.18742

1.5910

2.4390

1.32

2.98

Hari 11

Perlakuan 1

10

2.6360

.57924

.18317

2.2216

3.0504

1.55

3.56

110

Perlakuan 2

10

2.7970

.79434

.25119

2.2288

3.3652

1.79

3.85

Total

30

2.4827

.72564

.13248

2.2117

2.7536

1.32

3.85

Leukosit

Kontrol

10

7.8780 2.61643

.82739

6.0063

9.7497

3.47

11.32

Hari 14

Perlakuan 1

10

7.9170 3.05785

.96698

5.7295

10.1045

4.32

14.18

Perlakuan 2

10

10.8310 1.51135

.47793

9.7498

11.9122

9.14

13.67

Total

30

8.8753 2.77737

.50708

7.8382

9.9124

3.47

14.18

Trombosit

Kontrol

10

791.70 109.5922

34.656

713.3024

870.0976

650.00

960.00

Hari 11

Perlakuan 1

10

909.10 91.49554

28.933

843.6480

974.5520

728.00

1024.00

Perlakuan 2

10

920.00 147.8918

46.767

814.2045 1025.7955

684.00

1123.00

Total

30

873.60 128.8534

23.525

825.4853

921.7147

650.00

1123.00

Trombosit

Kontrol

10

760.90 180.6761

57.134

631.6521

890.1479

349.00

998.00

Hari 14

Perlakuan 1

10

950.90 113.7457

35.969

869.5312 1032.2688

805.00

1224.00

Perlakuan 2

10

930.40 161.9418

51.210

814.5538 1046.2462

701.00

1121.00

Total

30

880.73 172.5834

31.509

816.2896

945.1770

349.00

1224.00

Neutrofil

Kontrol

10

.2540

.10997

.03478

.1753

.3327

.12

.41

Hari 11

Perlakuan 1

10

.4350

.20754

.06563

.2865

.5835

.16

.76

Perlakuan 2

10

.4690

.21769

.06884

.3133

.6247

.15

.73

Total

30

.3860

.20258

.03699

.3104

.4616

.12

.76

Neutrofil

Kontrol

10

.6310

.24772

.07834

.4538

.8082

.33

1.02

Hari 14

Perlakuan 1

10

.9390

.36410

.11514

.6785

1.1995

.50

1.70

Perlakuan 2

10

1.0570

.38993

.12331

.7781

1.3359

.55

1.65

Total

30

.8757

.37515

.06849

.7356

1.0157

.33

1.70

111

Lampiran 7 Pengujian One Way Anova pada Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit dan Neutrofil ANOVA Sum of Squares Hemoglobin Hari11

5.159

2

2.580

Within Groups

9.228

27

.342

14.387

29

15.469

2

7.734

Within Groups

36.505

27

1.352

Total

51.974

29

3.809

2

1.904

Within Groups

10.332

27

.383

Total

14.141

29

6.462

2

3.231

Within Groups

16.848

27

.624

Total

23.310

29

3.410

2

1.705

Within Groups

11.860

27

.439

Total

15.270

29

Between Groups

57.377

2

28.689

Within Groups

166.323

27

6.160

Total

223.700

29

Between Groups

101208.200

2

50604.100

Within Groups

380285.000

27

14084.630

Hemoglobin Hari 14 Between Groups

Eritrosit Hari 14

Leukosit Hari D11

Leukosit Hari 14

Trombosit Hari 11

Mean Square

Between Groups

Total

Eritrosit Hari 11

Df

Between Groups

Between Groups

Between Groups

F

Sig.

7.548

.002

5.721

.008

4.976

.014

5.178

.012

3.882

.033

4.657

.018

3.593

.041

112

Trombosit Hari 14

Neutrofil Hari 11

Total

481493.200

29

Between Groups

217501.667

2

108750.833

Within Groups

646264.200

27

23935.711

Total

863765.867

29

Between Groups

.267

2

.134

Within Groups

.923

27

.034

1.190

29

.968

2

.484

Within Groups

3.114

27

.115

Total

4.081

29

Total Neutrofil Hari 14

Between Groups

4.543

.020

3.907

.032

4.195

.026

113

Lampiran 8 Pengujian Multipel Komparasi pada Data Hemoglobin, Eritrosit, Leukosit, Trombosit, dan Neutrofil

Multiple Comparisons LSD 95% Confidence Interval

Mean Dependent Variable

Difference (I(I) Kelompok

(J) Kelompok

J)

Lower Std. Error

Sig.

Bound

Upper Bound

Hemoglobin Kontrol

Perlakuan 1

-1.01000*

.26145

.001

-1.5464

-.4736

Hari 11

Perlakuan 2

-.41120

.26145

.127

-.9476

.1252

1.01000*

.26145

.001

.4736

1.5464

.59880*

.26145

.030

.0624

1.1352

.41120

.26145

.127

-.1252

.9476

Perlakuan 1

-.59880*

.26145

.030

-1.1352

-.0624

Hemoglobin Kontrol

Perlakuan 1

-1.73000*

.52001

.003

-2.7970

-.6630

Hari 14

Perlakuan 2

-1.14000*

.52001

.037

-2.2070

-.0730

1.73000*

.52001

.003

.6630

2.7970

.59000

.52001

.267

-.4770

1.6570

1.14000*

.52001

.037

.0730

2.2070

Perlakuan 1

-.59000

.52001

.267

-1.6570

.4770

Eritrosit Hari Kontrol

Perlakuan 1

-.79600*

.27665

.008

-1.3636

-.2284

11

Perlakuan 2

-.70800*

.27665

.016

-1.2756

-.1404

.79600*

.27665

.008

.2284

1.3636

.08800

.27665

.753

-.4796

.6556

Perlakuan 1

Kontrol Perlakuan 2

Perlakuan 2

Perlakuan 1

Kontrol

Kontrol Perlakuan 2

Perlakuan 2

Perlakuan 1

Kontrol

Kontrol Perlakuan 2

114

Kontrol

.70800*

.27665

.016

.1404

1.2756

Perlakuan 1

-.08800

.27665

.753

-.6556

.4796

Eritrosit Hari Kontrol

Perlakuan 1

-1.02300*

.35327

.007

-1.7479

-.2981

14

Perlakuan 2

-.94100*

.35327

.013

-1.6659

-.2161

Kontrol

1.02300*

.35327

.007

.2981

1.7479

.08200

.35327

.818

-.6429

.8069

Kontrol

.94100*

.35327

.013

.2161

1.6659

Perlakuan 1

-.08200

.35327

.818

-.8069

.6429

Leukosit Hari Kontrol

Perlakuan 1

-.62100*

.29640

.046

-1.2292

-.0128

11

Perlakuan 2

-.78200*

.29640

.014

-1.3902

-.1738

Kontrol

.62100*

.29640

.046

.0128

1.2292

Perlakuan 2

-.16100

.29640

.591

-.7692

.4472

Kontrol

.78200*

.29640

.014

.1738

1.3902

Perlakuan 1

.16100

.29640

.591

-.4472

.7692

Leukosit Hari Kontrol

Perlakuan 1

-.03900

1.10997

.972

-2.3165

2.2385

14

Perlakuan 2

-2.95300*

1.10997

.013

-5.2305

-.6755

.03900

1.10997

.972

-2.2385

2.3165

-2.91400*

1.10997

.014

-5.1915

-.6365

Kontrol

2.95300*

1.10997

.013

.6755

5.2305

Perlakuan 1

2.91400*

1.10997

.014

.6365

5.1915

Perlakuan 1

-117.40000* 53.07472

.036

-226.3003

-8.4997

Perlakuan 2

-128.30000* 53.07472

.023

-237.2003

-19.3997

117.40000* 53.07472

.036

8.4997

226.3003

-10.90000 53.07472

.839

-119.8003

98.0003

Perlakuan 2

Perlakuan 1

Perlakuan 2 Perlakuan 2

Perlakuan 1

Perlakuan 2

Perlakuan 1

Kontrol Perlakuan 2

Perlakuan 2

Trombosit

Kontrol

Hari 11

Perlakuan 1

Kontrol Perlakuan 2

115

Perlakuan 2

Trombosit

Kontrol

Hari 14

Perlakuan 1

128.30000* 53.07472

.023

19.3997

237.2003

Perlakuan 1

10.90000 53.07472

.839

-98.0003

119.8003

Perlakuan 1

-190.00000* 69.18918

.011

-331.9645

-48.0355

Perlakuan 2

-169.50000* 69.18918

.021

-311.4645

-27.5355

190.00000* 69.18918

.011

48.0355

331.9645

20.50000 69.18918

.769

-121.4645

162.4645

169.50000* 69.18918

.021

27.5355

311.4645

-20.50000 69.18918

.769

-162.4645

121.4645

Kontrol

Kontrol Perlakuan 2

Perlakuan 2

Kontrol Perlakuan 1

Neutrofil Hari Kontrol

Perlakuan 1

-.18100*

.08269

.037

-.3507

-.0113

11

Perlakuan 2

-.21500*

.08269

.015

-.3847

-.0453

Kontrol

.18100*

.08269

.037

.0113

.3507

Perlakuan 2

-.03400

.08269

.684

-.2037

.1357

Kontrol

.21500*

.08269

.015

.0453

.3847

Perlakuan 1

.03400

.08269

.684

-.1357

.2037

Neutrofil Hari Kontrol

Perlakuan 1

-.30800

.15187

.053

-.6196

.0036

14

Perlakuan 2

-.42600*

.15187

.009

-.7376

-.1144

.30800

.15187

.053

-.0036

.6196

Perlakuan 2

-.11800

.15187

.444

-.4296

.1936

Kontrol

.42600*

.15187

.009

.1144

.7376

.11800

.15187

.444

-.1936

.4296

Perlakuan 1

Perlakuan 2

Perlakuan 1

Perlakuan 2

Kontrol

Perlakuan 1 *. The mean difference is significant at the 0.05 level.

SPIRULINA PLATENSIS MENCEGAH PENURUNAN KOMPONEN DARAH PERIFER PADA TIKUS (RATTUS NORVEGICUS) YANG DIBERIKAN CYCLOPHOSPAMIDE

Recommend Documents