SKRIPSI EMMA RAHMAWATI UJI AKTIVITAS ANTIKANKER HERBA PACAR AIR (Impatients balsamina Linn.) TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA T47D SECARA IN VITRO DENGAN METODE MTT (Ekstrak n-heksana dan Ekstrak Metanol)
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2013
i
ii
iii
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum warohmatullahi wabarokatuh Puji syukur tercurahkan kepada Allah SWT, Tuhan semesta alam karena berkat rahmat dan ridhonya, penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul UJI AKTIVITAS ANTIKANKER HERBA PACAR AIR (Impatiens balsamina Linn.) TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA T47D SECARA In Vitro DENGAN METODE MTT (Ekstrak n-Heksana dan Ekstrak Metanol). Skripsi ini diajukan untuk memenuhi syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang. Dalam penyusunan skripsi ini penulis tidak terlepas dari peranan pembimbing dan bantuan dari seluruh pihak. Oleh karena itu, dengan segala kerendahan hati, penulis ingin mengucapkan banyak terima kasih kepada: 1.
Allah SWT, Tuhan semesta alam yang memberikan rahmat, nikmat dan hidayahnya kepada umatnya, Rasulullah SAW, yang sudah menuntun kita menuju jalan yang lurus.
2.
Prof.Dr.Sukardiman,MS.,Apt. selaku dosen pembimbing I dan Annisa Farida Muti, S.Farm., M.Sc.,Apt. selaku dosen pembimbing II atas saran, bimbingan, dan arahannya yang dengan sabar telah meluangkan waktu untuk membimbing dan mengarahkan penulis.
3.
Siti Rofida, M.Farm.,Apt dan
Ahmad Sobrun Jamil,S.Si.,M.P selaku
Dosen Penguji atas saran dan kritikan yang diberikan sehingga penyusunan skripsi ini menjadi lebih baik. 4.
Tri Lestari H.M.Kep.Sp.Mat., selaku Dekan Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang yang telah memberikan kesempatan penulis belajar di Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang.
5.
Dra. Uswatun Chasanah, M.Kes., Apt., selaku Ketua Program Studi Farmasi Universitas Muhammadiyah Malang yang telah member motivasi
iv
dan kesempatan penulis belajar di Program Studi
Farmasi
Universitas
Muhammadiyah Malang. 6.
Fakultas Farmasi Universitas Airlangga khususnya Ibu Lusi dan temanteman FFUA (Dini, Aula, dkk) yang telah membantu dalam pembelajaran sehingga penulis dapat mengenal dan mempelajari tentang kultur jaringan.
7.
Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran Universitas Gajah Mada, khususnya Prof.Dr.Supargiyono,DTM&H.,SU.,PhD.,Sp.ParK dan Ibu Rumbiwati, S.T.,M.Sc yang telah bersedia meluangkan waktu dan memberikan tempat agar penulis dapat melaksanakan penelitiannya dengan baik.
8.
Ika Ratna Hidayati, S.Farm., Apt., selaku Dosen wali. Terima kasih banyak atas arahan ibu selama ini.
9.
Untuk semua Dosen Farmasi Universitas Muhamadiyah Malang yang sudah memberikan waktunya untuk mengajarkan ilmu-ilmu yang sangat bermanfaat. Terutama Ibu Arina Swastika Maulita, S.Farm., Apt., yang telah susah payah membantu jalanya ujian skripsi sehingga kami dapat melaksanakan ujian skripsi dengan baik.
10. Staff Tata Usaha Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang terima kasih karena telah banyak membantu dalam hal administrasi. 11. Kedua orang tua penulis yang tercinta, Bapak H. Herman Sudiono, dan Ibu Hj.Kamariah, yang tiada hentinya memotivasi dalam segala hal, terima kasih atas didikan dan kerja kerasnya untuk membahagiakan putrinya serta dengan sabar mendoakan untuk kebaikan dan kesuksesan putrinya. Buat kakak dan adik penulis (Luthfi Immaniar Prastiwi, Muhammad Ikhsan dan Lukman Baihaqi) terimakasih atas motivasi dan doa-doanya. 12. Sahabat seperjuanganku Atika, Wilda, Farah, Etika, Melda, Reshtia, Dita Rini dan Shifa dengan banyak keceriaan, kebersamaan, bantuan, motivasi, semangat serta kerja samanya sehingga skripsi ini dapat terwujud. 13. Teman-teman Farmasi 2009 terimakasih atas kebersamaannnya selama 4 tahun terakhir ini, kalian memberikan warna baru dalam kehidupanku.
v
14. Teman-teman kos pink (vita, ameq, popo, ity, tutus, ayu, mela, dila) terimakasih buat semangat yang diberikan sehingga skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik. 15. Untuk semua pihak yang belum disebutkan namanya, penulis mohon maaf dan terima kasih yang sebesar-besarnya. Semua keberhasilan ini tak luput dari bantuan, doa yang telah kalian semua berikan. Jasa dari semua pihak yang telah membantu dalam penelitian ini, penulis tidak mampu membalas dengan apapun. Semoga amal baik semua pihak mendapat imbalan dari Allah SWT. Penulis menyadari bahwa skripsi ini jauh dari kesempurnaan, oleh karena itu penulis mengharapkan saran
dan kritik yang
membangun dari pembaca demi kebaikan skripsi ini. Semoga penulisan ini dapat berguna bagi penelitian berikutnya, amiin.
Wassalamu’alaikum warohmatullohi wabarokatuh
Malang, 31 Juli 2013 Penyusun
(Emma Rahmawati)
vi
RINGKASAN UJI AKTIVITAS ANTIKANKER HERBA PACAR AIR (Impatiens balsamina Linn) TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA T47D SECARA IN VITRO DENGAN METODE MTT Kanker merupakan penyakit penyebab kematian pertama didunia setelah penyakit jantung dan jumlahnya diprediksi akan mengalami peningkatan dua kali lipat pada tahun 2030. Salah satu jenis kanker yang sering terjadi pada saat ini adalah kanker payudara. Kanker payudara adalah kanker yang terjadi karena terganggunya system pertumbuhan sel di dalam jaringan payudara. Beberapa usaha pengobatan kanker telah dilakukan dengan cara seperti pembedahan, radiasi, dan kemoterapi. Namun usaha ini masih belum memperoleh hasil yang memuaskan. Selain cara di atas, sebagian penderita lebih memilih menggunakan terapi alternatif. Salah satu pengobatan alternatif adalah dengan cara memanfaatkan bahan alam yang khususnya telah dipercaya oleh sebagian masyarakat sebagai obat tradisional (Baratawidjaya & Rengganis, 2010; WHO, 2011; Depkes RI, 2010). Salah satu bahan tanaman yang dapat digunakan sebagai alternatif pengobatan kanker adalah tanaman pacar air (Impatiens balsamina Linn). Penelitian terdahulu dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethaly Test (BST) membuktikan bahwa tanaman pacar air memiliki aktivitas sebagai antikanker. Berdasarkan hasil analisis yang diperoleh harga LC50 adalah 744,4893 ± 85,96 µg/ml dimana dinyatakan bahwa suatu tanaman mempunyai aktivitas antikanker apabila harga LC50 < 1000 µg/ml. Sehingga perlu diadakan penelitian lanjutan dengan melakukan uji aktivitas dari ekstrak n-heksana dan ekstrak metanol herba pacar air (Impatiens balsamina Linn) secara in vitro dengan metode MTT (Microculture Tetrazolium Salt). Dari ekstrak yang diuji yaitu ekstrak n-heksana mempunyai harga IC50 sebesar 97,493 µg/ml, sedangkan ekstrak metanol mempunyai harga IC50 sebesar 295,359 µg/ml. Dari hasil uji KLT, diketahui bahwa terdapat kandungan flavonoid dan steroid pada ekstrak n-heksana herba pacar air. Penelitian ini perlu dilakukan kembali dengan menggunakan pelarut dan jenis sel kanker lain serta perlu dilakukan isolasi dan identifikasi lebih lanjut terhadap senyawa aktif yang terdapat pada herba pacar air (Impatiens balsamina Linn).
vii
DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL............................................................................................ i LEMBAR PENGESAHAN ................................................................................ ii LEMBAR PENGUJIAN ....................................................................................iii KATA PENGANTAR ....................................................................................... iv RINGKASAN ................................................................................................... vii ABSTRAK .......................................................................................................viii ABSTRACT ....................................................................................................... ix DAFTAR ISI ....................................................................................................... x DAFTAR TABEL ............................................................................................xiii DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xiv DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xv DAFTAR SINGKATAN ................................................................................. xvi BAB I PENDAHULUAN ................................................................................... 1 1.1 Latar belakang ................................................................................... 1 1.2 Rumusan Masalah ............................................................................. 4 1.3 Tujuan Penelitian .............................................................................. 4 1.4 Hipotesis Penelitian........................................................................... 4 1.5 Manfaat Penelitian ............................................................................ 4 BAB II TINJAUAN PUSTAKA......................................................................... 6 2.1 Tinjauan tentang Pacar air ................................................................. 6 2.1.1 Klasifikasi................................................................................ 6 2.1.2 Sinonim ................................................................................... 6 2.1.3 Nama Daerah ........................................................................... 7 2.1.4 Morfologi ................................................................................ 7 2.1.5 Etiologi dan Penyebaran.......................................................... 8 2.1.6 Khasiat ..................................................................................... 8 2.1.7 Kandungan .............................................................................. 8 2.2 Tinjauan tentang Kanker ................................................................ 10 2.2.1 Definisi ................................................................................. 10
viii
2.2.2 Perbedaan Sel Kanker dengan Sel Normal .......................... 11 2.2.3 Karateristik Sel Kanker ........................................................ 12 2.2.4 Proses Karsinogenesis .......................................................... 13 2.2.5 Gejala Kanker ....................................................................... 16 2.3 Tinjauan tentang Kanker Payudara ................................................ 16 2.3.1 Definisi ................................................................................. 16 2.3.2 Etiologi ................................................................................. 17 2.3.3 Faktor Resiko ....................................................................... 19 2.3.4 Gejala ................................................................................... 21 2.4 Tinjauan Sel T47D ......................................................................... 22 2.5 Tinjauan tentang Antikanker .......................................................... 23 2.6 Tinjauan tentang Kultur Sel ........................................................... 29 2.7 Tinjauan tentang Microculture Tetrazolium Salt (MTT) Assay .... 29 2.7.1 Cara Menghitung Porsentase Sel Hidup .............................. 31 2.8 Tinjauan tentang Metode Ekstraksi ................................................ 32 2.9 Tinjauan tentang Aktivitas Antikanker Tanaman Pacar Air ......... 33 2.10Tinjauan Golongan Senyawa dalam Tanaman Pacar Air ............. 34 BAB III KERANGKA KONSEPTUAL .......................................................... 35 BAB IV METODE PENELITIAN ................................................................... 38 4.1 Bahan Penelitian ........................................................................... 38 4.1.1 Bahan Alam .......................................................................... 38 4.1.2 Bahan Kimia ......................................................................... 38 4.2 Alat-alat Penelitian........................................................................ 39 4.2.1 Alat Pembuatan Ekstrak ........................................................ 39 4.2.2 Alat Uji Aktivitas .................................................................. 39 4.3 Variabel Penelitian ........................................................................ 39 4.3.1 Variabel Bebas ...................................................................... 39 4.3.2 Variabel Tergantung ............................................................. 40 4.3 Metode Penelitian ......................................................................... 40 4.4.1 Rancangan Percobaan ........................................................... 40 4.4.2 Kerangka Operasional ........................................................... 41 4.4.3 Prosedur Kerja ...................................................................... 42
ix
4.4.3.1 Pembuatan Ekstrak Bahan Uji ..................................... 42 4.4.3.2 Pembuatan Media ........................................................ 44 4.4.3.3 Pembuatan Larutan Induk dan Larutan Uji ................. 45 4.4.3.4 Proses Penumbuhan Sel ............................................... 45 4.4.3.5 Proses Penggantian Media ........................................... 46 4.4.3.6 Proses Panen Sel .......................................................... 47 4.4.3.7 Perhitungan Sel ............................................................ 47 4.4.3.8 Uji Aktivitas Antikanker dengan Metode MTT .......... 49 4.4.3.9 Cara Menghitung Porsentase Sel Hidup ...................... 51 4.4.3.10 Analisis Data ............................................................. 52 4.4.3.11 Uji Kromatografi Lapis Tipis ...................................... 52 BAB V HASIL PENELITIAN ......................................................................... 54 5.1 Hasil Pembuatan Ekstrak n-Heksana dan Ekstrak Metanol Herba Pacar Air (Impatiens balsamina Linn) ........................................ 54 5.2 Hasil Perhitungan Sel T47D dan Volume Panenan Sel .............. 54 5.3 Data Uji Aktivitas Antikanker dari Ekstrak n-Heksana dan Ekstrak Metanol Herba Pacar Air (Impatiens balsamina Linn) terhadap Sel Kanker Payudara T47D dengan Metode MTT ........................... 55 5.4 Penentuan Harga IC50 Doxorubicin Ekstrak n-Heksana dan Ekstrak Metanol Herba Pacar Air (Impatiens balsamina Linn) terhadap Sel Kanker Payudara T47D dengan Analisis Probit .......................... 58 5.5 Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT) .................................. 59 BAB VI PEMBAHASAN ................................................................................. 61 BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN ......................................................... 65 DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................... 66 LAMPIRAN ...................................................................................................... 71
x
DAFTAR TABEL Tabel
Halaman
IV.1 Kelompok Perlakuan Kultur Sel Kanker Payudara T47D ....................... 40 V.1 Hasil Pembuatan Ekstrak n-Heksana dan Ekstrak Metanol Herba Pacar Air (Impatiens balsamina Linn)..................................................................... 54 V.2 Hasil Absorbansi Kontrol sel dan Kontrol Media .................................. 55 V.3 Hasil Absorbansi Kontrol positif Doxorubicin ....................................... 56 V.4 Data Hasil Uji Aktivitas Antikanker dari Ekstrak n-Heksana dan Ekstrak Metanol Herba Pacar Air (Impatiens balsamina Linn) terhadap Sel Kanker Payudara T47D dengan Metode MTT .................................................... 57 V.5 Hasil Penentuan Harga IC50 Doxorubicin Ekstrak n-Heksana dan Ekstrak Metanol Herba Pacar Air (Impatiens balsamina Linn) terhadap Sel Kanker Payudara T47D dengan Analisis Probit ................................................... 58
xi
DAFTAR GAMBAR Gambar
Halaman
2.1 Pacar Air (Impatiens balsamina L.) ............................................................. 6 2.2 Struktur Flavonoid ....................................................................................... 9 2.3 Struktur Saponin ........................................................................................ 10 2.4 Struktur Steroid .......................................................................................... 10 2.5 Proses Karsinogenesis ................................................................................ 13 2.6 Siklus Terbentuknya Sel ............................................................................ 15 2.7 Vinblastin ................................................................................................... 25 2.8 Vinkristin ................................................................................................... 25 2.9 Vindesin ..................................................................................................... 26 2.10 Etoposida ................................................................................................... 27 2.11 Teniposida ................................................................................................. 27 2.12 Paclitaxel ................................................................................................... 28 2.13 Docetaxel................................................................................................... 28 2.14 Reaksi Reduksi MTT ................................................................................ 30 3.1 Skema Kerangka Konseptual ..................................................................... 37 4.1 Skema Kerangka Operasional .................................................................... 41 4.2 Skema Pembuatan Ekstrak n-heksana dan Metanol Herba Pacar Air ....... 43 5.1 Kondisi Sel Sebelum dan Sesudah Pemberian MTT Dilihat di Bawah Mikroskop .................................................................................................. 55 5.2 Grafik Hubungan antara Konsentrasi Kontrol Positif dan Bahan Uji terhadap Viabilitas sel Kanker Payudara .................................................................. 58 5.3 Hasil uji KLT flavonoid ekstrak n-heksana herba pacar air ...................... 59 5.4 Hasil uji KLT steroid ekstrak n-heksana herba pacar air ........................... 60
xii
DAFTAR LAMPIRAN Lampiran
Halaman
1.
Daftar Riwayat Hidup .............................................................................. 71
2.
Surat Pernyataan ...................................................................................... 72
3.
Surat Determinasi ................................................................................... 73
4.
Sertifikat Kultur Jaringan ....................................................................... 74
5.
Data Hasil Pembacaan ELISAreader ..................................................... 75
6.
Pembuatan Larutan Uji Ekstrak n-Heksana dan Ekstrak Metanol Herba Pacar Air .................................................................................................. 76
7.
Pembuatan Konsentrasi Doksorubisin ..................................................... 77
8.
Analisis Probit Kontrol Positif Doksorubisin .......................................... 78
9.
Analisis Probit Ekstrak n-Heksana .......................................................... 80
10.
Analisis Probit Ekstrak Metanol .............................................................. 82
11.
Lampiran Foto ......................................................................................... 84
xiii
DAFTAR SINGKATAN BST
= Brine Shrimp Lethality Test
DLA
= Dalton’s Ascites Lymphoma
DMEM
= Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium
DMSO
= Dimethyl Sulfoxide
DMSO
= Dimethyl Sulfoxide
DNA
= Deoxyribose Nucleic Acid
EEIB
= Ekstrak Etanol Impatiens balsamina
FBS
= Fetal Bovine Serum
HCl
= Hidroclhoride Acid
IC50
= Inhibitory Concentration 50
MEM
= Mal Essential Medium
MK
= Media Kultur
MTT
= Microculture Tetrazolium Salt
OD
= Optical Density
PBS
= Phospate Buffer Saline
RPMI
= Rosewall Park Memorial Institute
SDS
= Sodium Dedocyl Sulfate
SDS
= Sodium Dedosil Sulfat
WHO
= World Health Organization
YKI
= Yayasan Kanker Indonesia
iv
DAFTAR PUSTAKA Abcam. 2007. T47D (Human Ductal Breast Epithelial Tumor Cell Line) Whole Cell Lysate. Datasheet. Amelia, Rafinda. 2011. Uji Praskrining Aktivitas Antikanker Herba Pacar Air (Impatiens balsaminaLinn.) Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BST) (Ekstrak n-Heksana dan Ekstrak Metanol), Malang: Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang Anggraini, Polis Novita, 2008. Aktivitas Campuran Ekstrak Etanol Herba Sambiloto dan Rimpang Kunyit Terhadap Sel Kanker Payudara Manusia T47D In Vitro Dengan Metode MTT, Fakultas Farmasi Universitas Airlangga. Anggriani, P. 2008. Uji Sitotoksik Ektrak Etanol 70% Buah Kemukus(Piper cubeba L) Terhadap Sel Hela. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Ariviani, Setyaningrum. 2010. Kapasitas Anti Radikal Ekstrak Antosianin Buah salam (Syzigium polyanthum Wight. Walp) Segar dengan Variasi Proporsi Pelarut.Caraka Tani XXV No. 1 Baratawidjaya, Karnen Garna., Rengganis, iris. 2010. Imunologi Dasar. Jakarta: Balai Penerbit FKUI. Baskar, N., Devi, B.Parimala., Jayakar, B. 2012. Anticancer Studies on Ethanol Extract of Impatiens balsamina. Tamilnadu, India. Basmal, J., Amini, S., Sugiyono & Murniyati. 2009. Seminar Nasional Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan. Jakarta. Bosman, 1999, Aspek-Aspek Fundamental Kanker, in Van de Velde, C.J,H., Bosman, F.T.,Wagner D.J.Th., Onkologi, ed V, diterjemahkan oleh Arjuno, Panitia Kanker RSUP Dr.Sardjito, Yogyakarta, hal 333-345. Bouker, K.B., Clarke, R., Liu, M.C. 2003. Antiesterogen Resitance in Breast Cancer and the Role of Esterogen Receptor Signaling.Oncogene.
v
CCRC (Cancer Chemoprevention Research Center). 2009. Preparasi sampel. Yogyakarta: Fakultas Farmasi UGM. Corwin, Elizabeth, J. 2008. Buku Saku Patofisiologi. Jakarta: EGC Cushnie, T.P dan Lamb, A.J. 2006.Antimicrobial Activity of Flavonoids.Int J Antimicrob Agents.Vol. 26. Dalimartha, S., 2003. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia III. Jakarta : Trubus Agriwidya. Dalimartha, S., 2003. Ramuan Tradisional Untuk Pengobatan Kanker. Cetakan VI. Jakarta : Penebar Swadaya. De Jong, Wim. 2004. Kanker, Apakah Itu?. Cetakan I. Jakarta : Arcan. Depkes. 2010. Laporan PTM Berdasarkan Rumah Sakit dan Puskesmas Kabupaten Sukoharjo. Sukoharjo: Depkes. Diananda, Rahma. 2007. Mengenal Seluk Beluk Kanker. Yogyakarta: Katahati. Doyle, A., Griffith, S .J .B., 2000.Cell and Tissue Culture for Medical Research, 49, John Willey and Sons, Ltd., New York Freshney, L.R. 1987. Culture of Animal Cell: A Manual Basic of Technique, 2nd edition, Alan R. Liss Inc, New York, pp Ganiswara, S.G & Nafrialdi. 1995. Farmakologi dan Terapi. Edisi keempat. Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Gibbs, J.B. 2000.Anticancer Drug Targets: Growth Factors and Growth Factor Signalling, J. Clin Invest, 105, 9-13 Hanahan, D., Weinberg, R.A., 2000, The Hallmarks of Cancer, Cell. Harahap, Y., Syahfan, H.N., Karsono, B., 2007.Uji Sitotoksisitas Sedian Jadi Daging Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa) Terhadap Sel MCF-7 Secara IN VITRO.Jurnal Bahan Alam Indonesia. ISSN Vol 6. No 2 : 1412 – 2855. Harbone, J.B. 1987. Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan. Bandung : Institute Teknologi Bandung. Hariana, H.A. TumbuhanObat dan Khasiatnya 2. 2008. Jakarta: Niaga Swadaya.
vi
Heti, D. 2008. Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol 70% Herba Sisik Naga (Drymoglossum piloselloides Presl) terhadap sel T47D.Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Surakarta Hondermarck, H. 2003. Breast Cancer : When Proteomics Challenges Bilogical Complexity. Mol. Cell Proteomics. Junaedi, S. 2000. Uji Sitotoksik Metode MTT. Cancer Chemoprevention Research Center. Yogyakarta: Fakultas Farmasi Universitas Gajah Mada. Kee, Joyce L., Hayes, Evelyn R. 1996. Farmakologi. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Keitel, M. A., dan Kopala, M. 2000. Counseling Woman with Breast Cancer: A Guide for Professional. Thousan Oaks: Sage Publications, Inc Kristanti, A.N, Aminah, N.S, Tanjung, M dan Kurniadi, B. 2008. Buku Ajar Fitokimia. Surabaya: Airlangga University Press Kubota, H., Avarbock, M. R and Brinster, R. L . 2003. Spermatogonial Stem Cells share some, but not all, Phenotypic and Functional Charateristic with Other Stem Cells. Proc. Nat., Acad. Sci. USA 100. Kumar, V., Cotran, R.S., dan Robbins, S.L. 2007. Neoplasma, Buku Ajar Patologi Robbinson. Edisi ke-7. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Mangan, Yelia. 2010. Solusi Sehat Mencegah dan Mengatasi Kanker. Jakarta: Agromedia Pustaka. Mardiana, Lina. 2004. Kanker Pada Wanita. Jakarta: Penebar Swadaya. Markham, K.R. 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung: Penerbit ITB. Mulyadi. 1997. Kanker: Karsinogen, Karsinogenesis dan Antikanker. Yogyakarta: Tiara Wacana Yogya. Mutia, Dita. 2010. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Buah Anggur (Vitis vinifera) Terhadap Larva Artemia salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BST), Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro.
Nafrialdi dan Gunawan, S,G. 2007. Antikanker, Farmakologi dan Terapi. Edisi ke-5. Jakarta: Departemen Farmakologi Dan Terapeutik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
vii
National Cancer Institute. 2001. Measuring Cancer Death. Cited from http://www.cancer.gov/csr. Maret 2007 Nurcahyo, Jalu. 2010. Awas bahaya kanker rahim dan kanker payudara. Yogyakarta: Wahana Totalita Publisher. Ramli, Muchlis., Umbas, Rainy, dan Panigoro, Sonar. S., 2002. Deteksi Dini Kanker. Jakarta : Fakultas Kedokteran UI. Schafer, J.M., Lee, E.S., O’Regan, R.M., Yao, K., dan Jordan, V.C. 2000. Rapid Development of Tamoxifen-Stimulated Mutant p53 Breast Tumor (T47D) in Athymic Mice, Clinical Cancer Research. Siswandono dan Soekardjo, B. 2008. Kimia Medisinal. Edisi ke-2. Surabaya: Airlangga University Press. Spector, David L., Goldman, Robert., Leinwand, Leslie A. 1998. Cells a aboratory Manual : Culture and Biochemical Analysis of Cells, Cold Spring Harbore Laboratory Press. Srisadono, Arya .2008. Skrining Awal Ekstrak Etanol Daun Sirih (Piper betle Linn) Sebagai Antikanker dengan Metode BST.Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro. Steenis, C. G. G. J., Den Hoed, D., Bloembergen, S., dan Eyma, P. J., 2008. Flora Untuk Sekolah di Indonesia, Cetakan ke-12. Jakarta : Pradnya Paramita. Sudiana, I. Ketut. 2008. Patobiologi Molekuler Kanker. Jakarta: Salemba Medika. Suffness, M and Pezzuto, J.M. 1991. “Assays Related to Cancer Drug Discovery.” Methods in Plant Biochemistry: Assays for Bioactivity Vol. 6, Academic Press, London. Sukardaja, I Dewa Gede. 2000. Onkologi Klinik. Surabaya: Airlangga University Press. Sumarawati, Titiek dan fatmawati, Dina. 2011. Isolasi dan Uji Sitotoksik Senyawa Alkaloid Mahkota Dewa (Phaleria macocarpa) pada Kultur Sel Kanker Pyudara T47D. Semarang : Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sultan Agung Semarang. Sweetman, Sean C. 2009.Martindale: The Complete Drug Reference. Edisi ke36. Syofyan., Lucida, Henny., Bakhtiar, Amri. 2008. Peningkatan Kelarutan Kuersetin Melalui Pembentukan Kompleks Inklusi dengan β –
viii
Siklodekstrin.Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi, Vol. 13, No. 2, hal.43-48. Tambunan, G.W. 1995. Diagnosa dan Tatalaksana 10 Jenis Kanker di Indonesia.Cetakan III. Jakarta: EGC. Tjatra, Ahmad. 2002. Neoplasia, Buku Ajar Patologi I (Umum). Edisi ke-1. Jakarta: Sagung Seto. Tjay, Tan Hoan., Rahardja, Kirana. 2007. Obat-Obat Penting. Jakarta: Gramedia. Tjitrosoepomo, G. 1993. Taksonomi Tumbuhan (Spermatophyta). Cetakan ke4. Yogyakarta: Gajahmada University Press. Verma, S.P., Goldin, B.R., and Lin, P.S. 1998. The Inhibition of the Estrogenis Effects of Pesticides and Enviromental Chemicals by Curcumin anf Isoflavonoids. Envir Health Presp. WHO.
2011. Cancer mortality and morbity. Global Health Observatory, http://www.who.int/gho/ncd/mortality_morbidity/cancer_text/en/index.ht ml.
Winarno, Eko. 2011. Uji sitoksisitas Ekstrak Kapang Aspergillus sp. Terhadap Sel Kanker Payudara T47D. Depok: Skripsi Program Sarjana Universitas Indonesia. Yayasan Kanker Indonesia (YKI). 2011. Kanker Payudara. Diakses pada tanggal 12 September 2011. http://www.yayasankankerindonesia.org Yuniarti, T. 2008. Ensiklopedia Tanaman Obat Tradisional. Yogyakarta: Media Pressindo. Zampieri, L., Bianchi, P., Ruff, P., dan Arbuthnot, P. 2002. Differential Modulation by Estradiol of P-Glycoprotein Drug Resistance Protein Expression in Cultured MCF7 and T47D Breast Cancer Cells.
ix
