SD Rapid test Troponin I Návod k použití soupravy Výrobce: STANDARD DIAGNOSTICS, INC. 156-68 Hagal-dong, Giheung-gu, Yongin-si, Kyonggido, Korea. Tel: +82 31 899 2800, fax: +82 31 899 2840, www.standardia.com Distributor: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail:
[email protected], Web: www.vidia.cz
POUŽITÍ: SD Rapid test Troponin I je rychlý imunochromatografický test pro kvalitativní detekci srdečního troponinu I (cTnI). Test umožňuje rychlou a jednoduchou detekci antigenů v lidském séru, plazmě a plné krvi. Test lze rovněž použít jako pomůcku při diagnostice infarktu myokardu. SD Rapid test Troponin I poskytuje kvalitativní analytický výsledek, kterým nelze sledovat vzestup a pokles cTnI v jednom testování. Testování se nedoporučuje pro sledování AMI (akutní infarkt myokardu). Výsledky testu je potřeba interpretovat ve spojení s ostatními výsledky a klinickými nálezy pacienta. Pouze pro laboratorní použití. ÚVOD: Troponinový komplex je tvořen ze tří podjednotek, troponinu T (TnT), troponinu C (TnC) a troponinu I (TnI). Tyto podjednotky mají různé funkce: TnC váže Ca2+, TnT váže tropomyozin a TnI je inhibiční podjednotka. Troponinový komplex, společně s tropomyozinem, formuje hlavní komponentu, která reguluje aktivitu Ca2+ senzitivní ATPasy aktinomyozinu v příčně pruhovaném svalstvu (kosterní a srdečný sval). TnC srdečního svalu je stejné jako v kosterním svalu, kdežto TnI a TnT srdečné isoformy jsou jiné než isoformy v kosterním svalu, co umožňuje přípravu specifických protilátek proti srdečním isoformám. V současné době se zkoumá využití detekce sérových hladin různých isoforem TnI. Detekce cTnI v séru bylo vyzkoumáno jako pomůcka při stanovení poškození myokardu u pacientů s akutním infarktem myokardu (AMI). Několik klinických zpráv prokázalo diagnostickou hodnotu stanovení sérové hladiny cTnI v identifikaci pacientů s akutním infarktem myokardu. Byla zkoumána časová závislost uvolňování cTnI v séru a srovnávána s jinými zavedenými srdečními markery, jako je CK-MB, myoglobin a TnT. Souhrnné údaje z několika klinických záznamů dokumentují, že u pacientů s AMI, je cTnI uvolňováno do oběhu ve vyšším množství než je horní referenční pro normální stav, 4-6 hodin od nástupu příznaků a vrcholové koncentrace jsou dosaženy po 12–24 hodinách. Tento průběh uvolňování je podobný jako u CK-MB. Nicméně, hladina CK-MB se navrátí k normálním hodnotám po 72 hodinách, zatímco hladina cTnI zůstává zvýšená po dobu 5 až 7 dnů. Vzhledem k odlišné struktuře cTnI a dostupnosti vysoce specifické metody detekce pro cTnI, byla zkoumána užitečnost tohoto markeru pro diagnostiku AMI v celkových klinických podmínkách, které zahrnují poškození kosterního svalstva. Vysoká specificita měření TnI pro identifikaci poškození myokardu byla prokázána v podmínkách, jako je perioperační období, po maratonském běhu a po tupém traumatu hrudníku. Uvolňování cTnI do krve bylo dokumentováno v klinických podmínkách, které zahrnují poškození myokardu, jiné než AMI, 1
jako je nestabilní angina pectoris, městnavé srdeční selhání a ischemické poškození v důsledku operace by-passu koronární tepny. Měření cTnI byly zkoumány a dokumentovány jako cenné při identifikaci pacientů s AMI prezentující se erektilní dysfunkci s bolestí na hrudi. PRINCIP TESTU: SD Rapid test Troponin I má na povrchu testu 2 linie: „T“ (testovací linie) a „C“ (kontrolní linie). Tyto linie nejsou viditelné ve výsledkové zóně před aplikací vzorku. Kontrolní linie se používá jako kontrola testu. Kontrolní linie by se měla vždy objevit, pokud je test řádně proveden a reagencie jsou funkční. Pokud jsou ve vzorku přítomna určitá koncentrace Troponinu I, ve výsledkové zóně se objeví purpurová testovací linie. Když se vzorek aplikuje na test, Troponin I ve vzorku reaguje s koloidním zlatem (myší monoklonální protilátky „anti kardiální troponin I“). Tvoří tak komplex antigen-konjugát protilátky s koloidním zlatem. Jak tento komplex vzlíná přes výsledkovou zónu, je zachycen Troponin I-specifickými protilátkami imobilizovanými v testovací linii ve výsledkové zóně (kozí polyklonální protilátky „anti kardiální troponin I – cTnI“) a vzniká barevná linka. Pokud je koncentrace ve vzorku nižší než cut-off hodnota, ve výsledkové zóně bude viditelná jen kontrolní linka.. OBSAH SOUPRAVY: -
-
25 samostatně balených testovacích kazet s desikantem - 1 test obsahuje: zlaté konjugáty (jako hlavní komponenta): myší monoklonální protilátka anti-Troponin I– koloidní zlato (0,04±0,008g), králičí polyklonální protilátka anti-LDH koloidní zlato (0,04±0,008g), testovací linie (jako hlavní komponenta): polyklonální anti-kardiální Troponin I (0,32±0,064g), polyklonální protilátka anti- kardiální Troponin I (0,32±0,064g), kontrolní linie (jako hlavní komponenta): rekombinantní LDH antigen (0,32±0,064g), 25 jednorázových kapátek (80 l) návod k použití
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ, SKLADOVÁNÍ: 1. Plná krev • Odeberte plnou krev do zkumavky (obsahující antikoagulancia jako je heparin, EDTA a citrát sodný) ze žíly. • Optimální výsledky jsou dosaženy, v případě testování pacientských vzorků bezprostředně po odběru. Pokud vzorky krve nejsou testovány okamžitě, měly by být uskladněny v lednici při teplotě 2 ~ 8 ° C. Při skladování v rozmezí teplot 2 ~ 8 ° C , by vzorky měly být zpracovány do 24 hodin od odběru. 2. Plazma nebo sérum • [Plazma] Odeberte plnou krev do zkumavky (obsahující antikoagulancia, jako je heparin, EDTA a citrát sodný) ze žíly a následnou cestrifugací krve získejte vzorek plazmy. • [Sérum] Odeberte plnou krev do zkumavky (neobsahující antikoagulancia jako je heparin, EDTA a citrát sodný) ze žíly, nechte krev usadit po dobu 30 minut, následně centrifugujte a odeberte supernatant. • Pokud plazma nebo sérum nejsou testovány okamžitě, měly by být uskladněny v lednici, při teplotě 2 ~ 8 ° C. Pro skladování delší než 24 hodin se doporučuje zmražení vzorku (pod -20 °C) . Před použitím se vzorky nechají vytemperovat při pokojové teplotě (15 ~ 30 °C). • U plazmy nebo séra obsahujících sraženiny můžou vzniknout nekonzistentní výsledky testu. Tyto vzorky musí být před analýzou pročištěny. • Vyhněte se opakovanému zmrazování a rozmrazováním vzorků. 2
3. Opatření • Antikoagulancia, jako heparin, EDTA, citrát a nemají vliv na výsledek testu. • Interference: hemolytické vzorky, vzorky s revmatoidním faktorem a lipemické a ikterické vzorky mohou ovlivnit výsledky testů. • Používejte samostatně jednorázové kapátka nebo špičky pipety pro každý vzorek, aby se zabránilo křížové kontaminaci vzorků, které by mohly způsobit chybné výsledky.¨ PRACOVNÍ POSTUP (TESTOVACÍ SCHÉMA): I. Pracovní postup (viz testovací schéma) 1. Odeberte vzorky podle instrukcí v odstavci „Sběr a příprava vzorků, skladování“ 2. Před testem vytemperujte testovací kazetu na pokojovou teplotu (15 – 30°C). Neotevírejte sáček pokud nejste připraveni provést test. 3. Vyjměte testovací kazetu ze sáčku těsně před provedením testu, označte kazetu podle pacienta nebo kontroly kvůli identifikaci. 4. Napipetujte 80 l séra, plazmy, plné krve (pomocí pipety) do jamky pro vzorek (S). V případe použití kapátka, naplňte kapátko na úroveň vyznačené linky (80 l) a aplikujte do jamky pro vzorek (S). 5. Odečtěte výsledek za 15 minut. Výsledky po více než 20 minutách neinterpretujte. Upozornění: Čas pro odečtení výsledku je optimalizován pro pokojovou teplotu 15 – 30°C. Pokud je teplota výrazně nižší než 15°C, čas interpretace by měl být adekvátně prodloužen ..
INTERPRETACE VÝSLEDKU: 1. V levé části výsledkové zóny se objeví kontrolní barevná linka, která ukazuje, že test řádně funguje. Tato linka se nazývá „Kontrolní linka“. 2. Pravá část výsledkové zóny ukazuje výsledek testu. Tato linka se nazývá „testovací linka“. Negativní výsledek: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna barevná linka. Výsledková zóna T zůstane bez linky. Troponin I pozitivní: Kromě barevné linky v kontrolní zóně C se objeví také barevná linka ve výsledkové zóně T, nezáleží na tom, která se objeví dříve. Přítomnost dvou linek značí pozitivní výsledek. Neplatný: Test je neplatný, pokud se ve výsledkové zóně neobjeví barevná linka, a to bez ohledu na přítomnost barevné linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nesprávný pracovní postup nebo stárnutí reagencií po uplynutí expirační doby. Zkontrolujte pracovní postup a zopakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. INTERNÍ KONTROLA KVALITY: SD Rapid test Troponin I má na povrchu testu testovací a kontrolní linky, které nejsou viditelné před aplikací vzorku. Kontrolní linka zajišťuje kontrolu průběhu testu a měla by se objevit, pokud je test řádně proveden a reagencie jsou funkční. Kontrolní linka ukazuje, že roztok byl úspěšně aplikován a aktivní komponenty na stripu jsou funkční. Negarantuje však, že vzorek byl řádně aplikován. Kontrolní linie také nereprezentuje pozitivní kontrolu. 3
OMEZENÍ TESTU: Test je určen pouze pro profesionální a in-vitro diagnostické účely. Pozitivní výsledek testu může být použit pouze jako ukazatel poškození myokardu a vyžaduje další potvrzení. Doporučováno je také opakované testování pacientů s podezřením na AMI v různých časových úsecích, z důvodu zpoždění mezi počátkem příznaků a uvolněním kardiálních bílkovinných markerů do krevního řečiště. Jedná se o kvalitativní screeningový test a není navržen pro použití kvantitativního stanovení. Stejně jako u všech diagnostických testů by neměla být definitivní klinická diagnóza stanovena na základě výsledků jediného testu. Výsledky testů by měly být použity ve spojení s dalšími klinickými informacemi, jako jsou klinické příznaky a symptomy a jiné výsledky testů pro diagnostiku AMI. Potvrzení výsledků testů by mělo být provedeno pouze lékařem, po zhodnocení všech klinických a laboratorních nálezů. U vzorků, které obsahují neobvykle vysoké titry určitých protilátek, jako jsou lidské anti-myší nebo lidské anti-králičí protilátky je známo, že mají vliv na výsledné fungování testů. Nicméně tyto studie nebyly testovány s použitím rychlého testu SD Rapid test Troponin I.
CHARAKTERISTIKA TESTU: Účinnost testu byla potvrzena komerčním kvantitativním testem Troponin I. Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce: Kvantitativní test Pozitivní (≥0,5ng/ml): 127 Negativní (<0,5ng/ml): 334 Citlivost Specifita
SD Rapid test Troponin I Pozitivní Negativní 123 4 9 325 96,9% (123/127) 97,3% (325/334)
OČEKÁVANÉ HODNOTY: Cut off hodnota pro cTnl je 0,5 ng/ml. Vzorky obsahující cTnl o koncentraci stejné nebo vyšší než je stanovená hodnota cut-off budou dávat pozitivní výsledek s použitím SD Rapid test Troponin I. SKLADOVÁNÍ A STABILITA / BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
Testovací kazeta by měla být skladována při pokojové teplotě (1-30°C). Nezmrazujte soupravu nebo její komponenty. Testovací kazeta je citlivá na vlhkost i teplo. Vykonejte test ihned po otevření a vyjmutí testovací kazety z obalu. Nepoužívejte po uplynutí expirační doby. Expirace soupravy je uvedena na vnějším obalu soupravy. Nepoužívejte soupravu v případě poškození obalu nebo poškození zatavení testu. Zkontrolujte změnu barvy indikátoru vlhkosti vysoušedla a vyhoďte obal, pokud barevný indikátor vykazuje saturaci.
UPOZORNĚNÍ: 1. 2. 3.
Pouze pro diagnostiku in vitro. Nejezte a nekuřte při nakládání se vzorky. Při práci se vzorky používejte ochranné rukavice. Po práci si důkladně umyjte ruce. 4
4. 5. 6. 7.
Vyvarujte se rozlití nebo tvorbě aerosolu. Pokud došlo k rozlití, použijte vhodný desinfekční prostředek. Dekontaminujte a zlikvidujte všechny vzorky, reakční soupravy a potencionálně kontaminované materiály do odpadní nádoby jako infekční odpad. Dodržujte důsledně návod k použití, abyste dosáhli přesných výsledků.
Vyloučení odpovědnosti: Přestože byla uplatněna všechna opatření pro zabezpečení diagnostické spolehlivosti a přesnosti tohoto produktu, produkt je používán mimo dosahu výrobce a distributora, a výsledky proto mohou být ovlivněny vnějšími faktory a /nebo chybou uživatele. Osoba, která je subjektem diagnózy, by měla kontaktovat lékaře pro potvrzení výsledku testu. Upozornění: Výrobce a distributor tohoto produktu není zodpovědný za případné ztráty, odpovědnost, nároky, náklady nebo ztrátu, jestli přímé nebo nepřímé nebo následné, vycházející z podobné nebo nesprávné diagnózy – pozitivní nebo negativní, při použití tohoto produktu.
POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro
Číslo šarže (LOT)
Skladujte při 1-30°C
Na jedno použití. Nepoužívejte znovu
Návod k použití
Katalogové číslo
TESTOVACÍ SCHÉMA: I. Otevřete vnější obal a prohlédněte obsah: 1. Testovací kazeta individuálně balená s desikantem 2. Kapátko (80 µl) 3. Návod k použití
Otevřete obal kazety a prohlédněte obsah: 1. Výsledková zóna 2. Okénko pro nanesení vzorku a ředicího roztoku
žlutá zelená
II. Pozorně si přečtěte návod k použití soupravy.
5
III. Zkontrolujte expiraci na zadní straně obalu kazety. Pokud je souprava proexpirovaná, použijte jinou soupravu.
IV. Napipetujte 80 l séra, plazmy, plné krve (pomocí pipety, nebo kapátka) do jamky pro vzorek.
80ml séra, plasmy nebo plné krve
Vzorek nasajte po černou rysku
V. Za 15 minut odečtěte výsledek. Neodečítejte výsledek po více než 15 minutách. Můžou se objevit falešně negativní výsledky.
INTERPRETACE VÝSLEDKU: Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna barevná linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Troponin I pozitivní: Kromě barevné linky v kontrolní zóně C se objeví také barevná linka ve výsledkové zóně T. Neplatný: Žádná linka v C zóně. Doporučujeme opakování testu.
6
REFERENCE: 1. Structural studies of interactions between cardiac troponin I and actin in regulated thin filament using forster resonance energy transfer. Xing J, Chinnaraj M, Zhang Z, Cheung HC, Dong WJ. Biochemistry. 2008 December 16; 47(50): 13383–13393. 2. Troponin elevation in patients with various tachycardias and normal epicardial coronaries. Kanjwal K, Imran N, Grubb B, Kanjwal Y. Indian Pacing Electrophysiol J. 2008 Jul–Sep; 8(3): 172–174. 3. Profile of patients with acute heart failure and elevated troponin I levels. Sukova J, Ostadal P, Widimsky P. Exp Clin Cardiol 2007;12(3):153-156. 4. Use of troponin for the diagnosis of myocardial contusion after blunt chest trauma. Jackson L, Stewart A. Emerg Med J. 2005 March; 22(3): 193–195.
Poslední revize tohoto návodu: 03/2014
7
