SBORNÍK PŘEDNÁŠEK. FYZIOLOGICKÁ REGULAČNÍ MEDICÍNA ve veterinární medicíně. 17. května 2011 v Brně 18. května 2011 v Košicích

SBORNÍK PŘEDNÁŠEK

FYZIOLOGICKÁ REGULAČNÍ MEDICÍNA ve veterinární medicíně

17. května 2011 v Brně 18. května 2011 v Košicích

FYZIOLOGICKÁ REGULAČNÍ MEDICÍNA VE VETERINÁRNÍ MEDICÍNĚ 15.30

Prezence

15.50

Zahájení

16.00 – 17.15

Onemocnění pohybového aparátu u zvířat a jeho léčba pomocí MD injekcí – vlastní zkušenosti z praxe MVDr. Fabio Olivieri, veterinární lékař, Milano,Trento

17.15 – 17.30

Přestávka

17.30 – 18.45

Fyziologická regulační medicína ve veterinární praxi: • u bolestivých a zánětlivých stavů • u chronického renálního selhání • u eosinofilního granulomu u koček • u parvovirové gastroenteritidy MVDr. Fabio Olivieri, veterinární lékař, Milano,Trento

18.50 – 19.10

Vliv probiotik na kvalitu živočišné produkce Mgr. Lucie Kotlářová, klinický farmaceut, Edukafarm + Universita degli studi di Camerino

19.10 – 19.30

Diskuze

Určeno: veterinárním lékařům a odborné veřejnosti Odborný garant: MUDr. Alessandro Perra, vědecký sekretář Akademie pro fyziologickou regulační medicínu, Milán, Itálie

Publikaci vydal: Edukafarm, s. r. o. (ve spolupráci s Farmakologickým ústavem 2. a 3. LF UK a s Mezinárodní akademií pro FRM) Odborná redakce: Edukafarm Publikace je určena pro odbornou veřejnost Copyright: © Edukafarm 2011

Fyziologická regulační medicína ve veterinární medicíně 1

2

Tato prezentace je založena zkušenostech v oblasti FRM.

Fyziologická regulaþní medicína ve veterinární medicínĢ

autorových

Prezentované informace nenahrazují oficiální doporuþené postupy. Autor nepĜebírá odbornou ani právní odpovČdnost za chybné použití prezentovaných informací. Uvedené informace jsou urþeny k edukaþním úþelĤm pro zdravotnické odborníky, kteĜí je mohou využít v rámci své odborné praxe.

MVDr. FABIO OLIVIERI, MILANO/TRENTO

3

na

4

Obsah

PƎedstavení….

1. OnemocnĢní pohybového aparátu u zvíƎat a jeho léēba pomocí MD injekcí – vlastní zkušenosti z praxe 2. Seznámení se s konceptem fyziologické regulaēní medicíny a její využití – U bolestivých a zánĢtlivých stavƽ – U chronického renálního selhání – U eosinofilního granulomu u koēek – U parvovirové gastroenteritidy Zkušenosti z vlastní praxe

5

6

1. OnemocnĢní pohybového aparátu

INJEKNÍ STRATEGIE

Kolagen Medical Device (inj.)

Kolagen Medical Device GUNA MD OBSAHUJE VYSOCE IST NÝ VEP\OVÝ KOLAGEN

Cílem je jeho dodání do chrupavky, šlach, vazƽ a kloubních pouzder za úēelem doplnĢní, zvýšení jeho množství, pƎestavbĢ a ochranĢ tĢchto struktur.

7

8

Kde se nachází nachá kolagen?

STRUKTURA KOLENNÍHO KLOUBU

1. EXTRAARTIKULÁRNÍ APARÁT ¾ ¾ ¾ ¾

VAZY KLOUBNÍ POUZDRO ŠLACHY SVALY

2. INTRAARTIKULÁRNÍ APARÁT

¾ VAZY ¾ KLOUBNÍ CHRUPAVKA

3


10

2 KLOUBNÍ KOMPARTMENTY

VNITěNÍ

VNċJŠÍ

Lateral

Medial

Meniscus

Meniscus

FRONT CROSS PĜední kĜížový vaz LIGAMENT

Kolenní kloub – intra-artikulární struktura

11

12

Kolagen Medical Device • Každý z MD pĜípravkĤ obsahuje vepĜový vysoce þištČný kolagen a pĜírodní látky (fytofarmaka), které napomáhají specifické distribuci kolagenu do míst potĜeby. • NČkteré z nich jsou specifické pro anatomické oblasti: Neck (šíje), Lumbar (lumbální oblast), Knee (koleno); jiné jsou specifické pro tkánČ mesodermálního pĤvodu (Muscle – svaly, Neural-nervová tkáĖ, Matrix - extracelulární matrix)

13

14

Kolagen Medical Device

Kolagen Medical Device

Proþ vepĜový kolagen? VepĜové tkánČ mají vysoký obsah kolagenu (Glycin 22,8%, Prolin 13,8%, Hydroxyprolin 13%).

Ostatní aminokyseliny tvoĜí pĜibližnČ 3% obsahu. Proto více než 50% tkánČ tvoĜí kolagen. Díky speciálnímu filtraþnímu procesu, sterilizaci a kontrole molekulární hmotnosti se získává þistý produkt (bez kontaminaþních látek) a se standardními chemicko-fyzikálními vlastnostmi pro zajištČní bezpeþnosti.

15

Cíl podání tohoto biomateriálu „in loco“ – tam, kde je zapotĜebí –, je strukturální povahy: znovu umístit kolagen tam, kde je ho nedostatek posílit, strukturovat a ochránit (vytvoĜením tzv. adhezivní bariéry) chrupavky, šlachy, vazy, kloubní pouzdra atd., zlepšit profil kolagenových vláken a následnČ i veškerých anatomických struktur, ve kterých je kolagen pĜítomen, a poskytnout základnu mechanického typu pro pĜíslušnou oblast.

16

SLOŽENÍ

Jednou z nejdĤležitČjších pĜíþin bolesti pohybového aparátu je ochablost vnitĜních a vnČjších stabilizaþních kloubních systémĤ. Ochablé podpĤrné systémy vyvolávají napĜíklad kloubní hypermobilitu, pĜedevším v nefyziologickém smČru a úhlech, pĜi níž dojde z jedné strany k pĜedþasnému opotĜebení a následnČ pak i k opotĜebení podpĤrných systémĤ, což pĤsobí na progresivní degeneraci chrupavky. Mechanická podpora kolagenem representuje úþinnou pĜírodní opČru (bio-scaffold).

4


18

PĜípravky Guna MD mohou být podávány také bČhem léþby: -kortikoidy, NSAIDs, chondroprotektivy. -aplikovány bČhem fyzikální a manipulaþní þi jiné léþebné metody (akupunktura, elektroakupunktura, shiatzu, magnetoterapie, ultrazvuk, laserová terapie, elektroterapie apod.).

V humánní medicínČ GUNA MD injekce mají zdokumentovaný terapeutický efekt v 7 kontrolovaných klinických studiích.

-Úþinnost -Bez alergických reakcí -Snášenlivost -Ekonomicky výhodná injekþní terapie

PƎípravky lze kombinovat mezi sebou (natáhnout do jedné stƎíkaēky), nikoliv s odlišnými pƎípravky.

19

20

OTÁZKY: Jaký je rozdíl mezi terapií GUNA MD a kyselinou hyaluronovou?

Kolagen patƎí mezi glykoproteiny, na rozdíl od kyseliny hyaluronové, která je svým složením proteoglykan. Rozdíl mezi glykoproteinem a proteoglykanem spoēívá v zastoupení cukru a aminokyselin. U glykoproteinu pƎevládají aminokyseliny nad cukry, u proteoglykanu je zastoupeno více cukru než aminokyselinových složek.

21

Odlišné biochemické vlastnosti kolagenu a kyseliny hyaluronové jsou zodpovĢdné za specifické organoleptické vlastnosti. -Kolagen je strukturální protein, zatímco kyselina hyaluronová, charakterizovaná vysokou viskozitou, disponuje lubrikaēním úēinkem v kloubní štĢrbinĢ. To je také dƽvod, proē se kyselina hyaluronová uplatŸuje pƎevážnĢ v intraartikulárních prostorech, na rozdíl od kolagenu, který sehrává svou roli i v mimokloubním prostoru (šlachy, vazy, svaly).

22

Lze použít pƎípravky GUNA MD také u akutní bolesti? - kyselina hyaluronová artikulární ve velkých kloubech.

intra-

- Kolagen pĜevážnČ (ale nikoliv pouze) extra-artikulární v malých, stĜedních a velkých kloubech.

- Kyselina hyaluronová je úþinná v pĜípadech mírné až stĜednČ tČžké klinické závažnosti. -Kolagen je efektivní také v pĜípadech vážného ohrožení motoriky pacienta.

23

Mají pƎípravky GUNA MD také protizánĢtlivý úēinek? PƎípravky GUNA MD mají nepƎímý protizánĢtlivý úēinek. Ten spoēívá ve zlepšení funkce extracelulární matrix a reparace tkáŸových procesƽ (mikrotraumata, traumata). Zvyšuje se pevnost kapilárních stĢn. MD pƎípravky se svým obsahem kolagenu jsou považovány za „booster“, urychlovaēe hojivých procesƽ v tkáních a kloubech. Svým regeneraēním úēinkem pƽsobí MD pƎípravky zároveŸ i protibolestivĢ – tím, že se odstraŸují pƎíēiny bolesti, pƎispívají k jejímu vymizení.

Ano, a to v tĢchto pƎípadech: 1 aplikace (sezení) dennĢ (v intervalu 24 hodin) po dobu 3 po sobĢ následujících dní. Dále pokraēovat 2 aplikace týdnĢ (napƎ. pondĢlí a ētvrtek) až do vymizení pƎíznakƽ. PreventivnĢ je vhodné podávat 1 aplikaci týdnĢ po dobu 4 týdnƽ.

24

Jaké pomocné látky jsou obsaženy v pƎípravcích GUNA MD a v jakém množství?

Úēinnost pƎípravkƽ GUNA MD je podpoƎena pƎítomností pomocných látek pƎírodního pƽvodu. Pomocné látky v MD pƎípravcích mají za svƽj cíl posílení a stabilizaci úēinku kolagenu.

5


26

Kasuistika 1

Pomocné látky v GUNA MD mají transportní úlohu s cílem dopravit kolagen in situ (do konkrétních anatomických kompartmentĤ).

Yago, nĢmecký ovēák, pes, 39 Kg, 7 let starý. Týden kulhá, pƎevážnĢ ráno po probuzení.

-Pomocné látky Guna MD hrají roli v transportu, umístČní a stabilizaci kolagenu.

Dg: monolaterální osteoartritida kyēelního kloubu

-Pomocné látky jsou vlastnČ CDS systém (Collagen Delivery System). -Pomocné látky byly vybrány z rostlinné Ĝíše.

27

28

Kasuistika 1 Léēba: Firocoxib: 227 mg/den Po 5 dnech mírné zmírnĢní kulhání, ale u psa se objevují zažívací problémy (prƽjem) Majitel chce ukonēit podávání firocoxibu. Je snížena dávka a zapoēata léēba pomocí MD HIP. MVDr. Fabio Olivieri, kasuistika 1, nČmecký ovþák, kyþelní kloub

29

30

Kasuistika 1

After two months

ZmĢna terapie: Firocoxib: 57 mg x2, jednou dennĢ MD HIP aplikace jednou dennĢ po dobu 3 dnƽ, poté 1 ampule každý druhý den po dobu 1 týdne; po dobu 2 mĢsícƽ 1 ampule týdnĢ.

MVDr. Fabio Olivieri, kasuistika 1, nČmecký ovþák, kyþelní kloub

31

32

MD-HIP Kolagen Medical Device pro kyēelní oblast

Podávání: 1 ampule 2krát týdnĢ, subkutánnĢ nebo intramuskulárnĢ (psi), 2-3 ampule 2krát týdnĢ (konĢ)

6


34

35

36

37

38

Kasuistika 2 Lara, fena Border Collie, 21 Kg, 3 roky stará. Kulhá 10 dní, pƎevážnĢ bĢhem tréninku. Svalová bolest v levém konēetinĢ. Není pƎítomna kloubní bolest, ale bolest pƎi abdukci. Bolest pƎi zatlaēení na sval.

39

40

Kasuistika 2 Nejsou nasazeny žádné NSA ani kortikoidy kvƽli pƎedchozí špatné toleranci tĢchto léēiv.

Kasuistika 2 Vymizení bolesti bĢhem následujících 8 dní, Lara nekulhá a je klidná.

Terapie: MD Muscle subkutánnĢ, jednou dennĢ po dobu 3 dnƽ. Zlepšení abdukce, ale dosud bolestivé. Po dvou dnech další subkutánní aplikace a následuje další aplikace po dvou dnech.

7


42

Co použít pro metakarpální a metatarsální bolest?

MD MUSCLE • Psi: 1 ampule 2x týdnĢ • KonĢ: 2-3 ampule 2x týdnĢ

43

44

MD-SMALL JOINTS mƽže být použit také pro oblast krku a poranĢní ocasu

Podávání: 1 ampule 2krát týdnĢ, subkutánnĢ nebo intramuskulárnĢ (psi), 2-3 ampule 2krát týdnĢ (konĢ)

45

46

Metoda práce

2. Seznámení se s konceptem fyziologické regulaēní medicíny a její využití – U bolestivých a zánĢtlivých stavƽ – U chronického renálního selhání – U eosinofilního granulomu u koēek – U parvovirové gastroenteritidy

START

CÍL

•Odborný základ FRM

•Mechanismus úēinku bioterapeutických úēinných látek pƎípravkƽ FRM

ROVNOVÁHA P.N.E.I.

TERAPI E SYMPTOMp P\ÍPRAVKEM SPECIFICKÝM PRO URITÝ ORGÁN I CHOROBU

DRENÁŽ, DETOXIKACE

47

48

Fyziologická regulaĀní medicína (FRM)

Západní konvenþní medicína

8

Medicína nízkých dávek

FRM Nový farmakologický koncept: jediný bioterapeutický pƎípravek, v kterém jsou kombinovány synergicky pƽsobící složky z oblasti komplementární medicíny a konvenēní medicíny s cílem dosáhnout pozitivních klinických výsledkƽ.

Princip: molekulární biologie

Další pomocné látky

NEUROPEPTIDY, CYTOKINY, HORMONY, RpSTOVÉ FAKTORY

KOMPONENTY ODVOZENÉ OD LÁTEK Z MINERÁLNÍ, ROSTLINNÉ, ŽIVOIŠNÉ OBLASTI


50

FYZIOLOGICKÁ REGULANí MEDICíNA

Homeostatické kontrolní systémy

FRM integruje aktuální vĢdecké poznatky z tĢchto oblastí: •Psycho-neuro-endokrino-imunologie (P.N.E.I.) •Molekulární biologie

Molekulární biologie

P.N.E.I.

P N E I

CENTRÁLNÍ NERVOVÝ SYSTÉM & NEUROVEGETATIVNÍ SYSTÉM

ENDOKRINNÍ SYSTÉM

IMUNITNÍ SYSTÉM

Ader, R., Psychoneuroimmunology, IV edition, vol. 1 e 2, Academic Press, Amsterdam 2007. It is the classical text on the matter, pubblished for the first time in 1981.

51

52

SYSTÉM P.N.E.I. A KOMUNIKAýNÍ MOLEKULY

PSYCHÉ

SYSTÉM P.N.E.I. A KOMUNIKAýNÍ MOLEKULY

NEUROPEPTIDY

P

NA VZNIKU VŠECH ONEMOCNċNÍ SE N

PODÍLÍ ZMċNċNÁ KONCENTRACE

HORMONY HORMONY

KOMUNIKAýNÍCH MOLEKUL

E I

INTERLEUKINY

SOMA

I

E

N

P

PSYCHÉ

53

54

Fyziologická regulaþní medicína pĜedstavuje dynamický nový koncept

NEMOC

FRM vychází z inovativního terapeutického konceptu obnovy fyziologického stavu podáváním komunikaþních molekul (hormonĤ, interleukinĤ, neuropeptidĤ a rĤstových faktorĤ) v nízkých koncentracích (pĜipravených technologií SKA), ekvivalentních fyziologické koncentraci v lidském organismu…

ZVÝŠENÁ KONCENTRACE

10-6

ZDRAVÍ

pg/ml SKA – ng/ml SKA FYZIOLOGICKÁ KONCENTRACE

10-15 SNÍŽENÁ KONCENTRACE

NEMOC 55

56

• Komunikaþní molekuly jsou velmi úþinné…

ÚýINKY RģZNÝCH DÁVEK CYTOKINģ TM TOXICKÁ KONCENTRACE mg/ml

TOXICKÉ ÚýINKY

10-3 FARMAKOLOGICKÉ ÚýINKY

10-6

FRAMAKOLOGICKÁ KONCENTRACE mcg/ml

VEDLEJŠÍ ÚýINKY

• ale ve farmakologických dávkách mohou zpĤsobit také závažné nežádoucí úþinky.

MINIMÁLNÍ EFEKTIVNÍ FARMAKOLOGICKÁ DÁVKA

S SKA : FYZIOLOGICKÉ ÚýINKY

FYZIOLOGICKÁ KONCENTRACE ng-pcg/ml

10-15 MINIMÁLNÍ ÚýINNÁ FYZIOLOGICKÁ DÁVKA

BEZ SKA: ŽÁDNÉ BIOLOGICKÉ þi FYZIOLOGICKÉ ÚýINKY

1. Marinaro, M. et al. 1999. Use of intransal IL-12 to target predominantly Th1 responses to nasal and Th2 resposnses to oral vaccines given with cholera toxin. J. Immunol. 162(1): 114-121 2. Mariinaro, M. et al. 1997. Oral but not parenteral interleukin IL-12 redirects T helper 2 (Th2)-type responses to an oral vaccine without altering mucosal IgA responses. J. Exp. Med. 185(3): 415-427 3. Lee, S. Y. et al. 2001. Oral administration of IL-12 suppresses anaphylatctic reactions in a murine model of peanut hypersensitivity. Clin. Immunol. 101(2): 220-228 4. Vial, T. et al. 1995. Immune mediated side-effects of cytokines in humans. Toxicology 105(1): 31-57

9


58 © Dipartimento Scientifico Guna S.p.a.

in cooperation with:

Pokud nejde o… NÍZKÉ DÁVKY

Úēinky rƽzných dávek IL-1-ɴ na izolované lidské fibroblasty

58

59

60

61

62

IMUNITNÍ SYSTÉM

ROVNOVÁŽNÉ SYSTÉMY ORGANISMU

Th1

Th2

62

63

64

Th-1/Th-2 ROVNOVÁHA TTh-2 h-2 2 Th2 UP-REGULACE

Th1 UP-REGULACE

IL-12 IFN-JJ

Crohnova nemoc Psoriáza

…Alergie

Th-2

Th-1

IL-4 IL-5

IL-12 IFN-JJ

Th2 DOWN-REGULACE

IL-4 IL-5

Th2

Asthma Atopie

Th1

Th1 DOWN-REGULACE

63

10

•IL-4 •IL-5


66

…Bolest

…Crohnova nemoc

Th1

Th1

•IL-1 •TNF-ɲ •IL-6

•TNF-ɲ •IFN-ɶ •IL-17 •IL-12 •IL-8

Th2

67

68 Th0

STIMULACE IL-12

Th1

STIMULACE IL-4

Koncept ROVNOVÁHY a použití cytokinĤ

Th1

Th2

Th2

Th3

Th2 PROTIZÁNċTLIVÉ

PROZÁNċTLIVÉ TOLERANCE

IL-4

INF-ɶ, IL-12 INHIBICE INHIBICE INF-ɶ

KONCEPT ROVNOVÁHY Produkce Th subtypƽ (1, 2) podnĢcuje „cross-regulaēní“ proces. Zatímco IL-4 stimuluje diferenciaci smĢrem k Th2 a inhibuje diferenciaci k Th1 buŸkám, IL-12 a IFN-ɶ stimuluje diferenciaci smĢrem k Th1 a inhibuje diferenciaci k Th2 buŸkám. Cooke , A. Th17 in Inflammatory Conditions. 2006, Rev Diabetic Stud 3: 72-7 - Bettelli E. et al. Th17: The third member of the effector T cell trilogy. Current Opinion in Immunology 2007, 19: 652-657

69

GCSF

TGF-ȕ

IL10

IL1

IL10

TGF beta

IL2

IL4

INF-gammma

IL5

IL6

IL6

IL8

IL7

TNF-alfa

IL9

IL12

IL13

68

70

Vztah mezi hormony a cytokiny

Vztah mezi hormony a cytokiny – IL-1, TNF-ɲ, IFN-ɶ a zvláštĢ IL-6 hrají zásadní roli ve funkci thyreoidey: inhibují uptake a organifikaci jodu, inhibují rƽst thyreocytƽ, syntézu thyreoglobulinu a uvolŸování thyreoideálních hormonƽ, a jaterní deionizaci, která aktivuje pƎemĢnu T4 na T3 – IL-1 ɴ a TNF-ɲ inhibuje TRH, stimuluje sekreci somatostatinu – IL-6 má nepƎímý inhibiēní úēinek prostƎednictvím stimulace kƽry nadledvin

• Hormony ovlivŸují hladiny cytokinƽ, tvoƎí komunikaci mezi endokrinním a imunitním systémem – ŽENSKÉ POHLAVNÍ HORMONY inhibují Th2 odpovĢě a stimulují tvorbu Th1 cytokinƽ – KORTISOL inhibuje Th1 reakci, zvlášĢ produkci IL-2. Rƽzné cytokiny, napƎ. IL-1, IL-6, TNF-ɲ, IFN stimulují sekreci ACTH a tím kontrolují sekreci kortisolu.

71

GUNA-LYMPHO •Snížení Snížen ní lokální lokál zánČtlivé reakce v lymfoepiteliálních tkáních. •Snížení spasmĤ lymfatických cév na zánČtlivém podkladu a následná obnova lymfatické cirkulace

Myosotis Equisetum Hydrocotile Taraxacum Sarsaparilla Lymphatic vessel Capillary tisssue

72 D-L Malic Ac./Fumaricum Ac./Pyruvicum Ac. Trychinoil/Natrium oxalac.

•Stabilizace tonu žilní stČny s následným snížením exsudátu a zmenšením lymfedému.

L-Thyroxin Vein porcine

Zlepšení proudČní

ProtizánČtlivý Hypertrofie a hyperplazie úþinek na lymfatické tkánČ lymfoepiteliální tkánČ Posílení

Hydrastis Juglans Graphites

imunitního systému

•Stimulace humorální imunity a inhibiþní modulace nadmČrné bunČþné kompenzaþní odpovČdi

Magnesium phosphoricum Juglans regia

GUNA-MATRIX

•Deaktivace (pomocí zánČtu) a neutralizace uložených toxinĤ*. •Synergický úþinek Fucus a thyreoidálních hormonĤ na aktivaci nervového systému sympatiku**.

lymfy

Calendula Phytolacca Apis Magnesia phosph.

•Pyrogenium •Fucus •Tyrosine •Phenilalanine •Histidine

•Hyaluronidase •Thuja •Natrium sulfuricum

•Stimulace mitochondriální aktivity.* •Okyselování matrixu

Protitoxínové aktivity

Detoxikace matrixu

Lymfatická drenáž

•Prolactine 1 ng*** •Hydrolýza matrix*

PĤsobení proti konstituþní predispozici k nasycení matrix a vývoji dysmetabolické mesenchymopatie** •Solubilizace matrix***

•IL 6; 10 pg* •DHEA •Pyrogenium •Conjunctive Tissue •Tyrosine •Phenilalanine •Histidine

•Prolactine; 1ng***

•DHEA

•Úprava predispozice k proliferaci lymfoepiteliální tkánČ

•Ac. D-L malicum •Natrium oxal. •Natrium pyruv. •NADID •Trychinoil •Vit. C •Ac. L(+) lacticum

•Lymphatic vessel •Postup inaktivovaných toxinĤ smČrem k lymfatickému okruhu k jejich drenáži

•Vz •Vzestup kinetiky kiinetiky ineti y základních látek (proteinová hydrolýza, zvýšená schopnost ionizace, histaminová aktivita, vzestup teploty) •Stimulace sympatiku** •Vagotonické oslabení.***

11


74

Cytokiny a rƽstové faktory FRM

TERAPEUTICKÝ TROJÚHELNÍK FRM

P\ÍPRAVEK PRO REPROGRAMOVÁNÍ P.N.E.I.

P\ÍP P\ÍPRAVEK SPECIFICKÝ PRO URITÝ ORGÁN I NEMOC

P\ÍPRAVEK PRO DRENÁŽ

75

•GCSF •TGF-ɴ •TNF-ɲ

76

POUŽITÍ CYTOKINģ VE FRM POSÍLENÍ ÚýINKU

•NGF •NT3 •NT4 •PDGF •BDNF •CNTF •EGF •FGF •G1 •IGF-1

•IL10 •IL11 •IL12

•INF-ɲ •INF-ɶ •IL1 •IL2 •IL3 •IL4 •IL5 •IL6 •IL7 •IL8 •IL9

OSLABENÍ ÚýINKU

POUŽITÍ HODMONģ VE FRM

HORMON

CYTOKIN POSÍLENÍ ÚýINKU

ANTAGONISTICKY PģSOBÍCÍ CYTOKIN GUNA-GCSF

INF alpha/gamma

GUNA INF alfa/gamma

GUNA-IL 4

IL 1

GUNA-IL 1

GUNA- Anti IL 1 /GUNA-IL 10

ACTH

GUNA ACTH

POUŽITÍ ANTAGONISTICKÉHO HORMONU GUNA TSH

IL 2

GUNA-IL 2

GUNA-IL 11

KALCITONIN

GUNA CALCITONIN

GUNA PARATHORMON

IL 3

GUNA-IL 3

GUNA-IL 10

beta-ESTRADIOL

GUNA beta-ESTRADIOL

GUNA PROGESTERON

IL 4

GUNA-IL 4

FSH

GUNA FSH

GUNA beta-ESTRADIOL

IL 5

GUNA-IL 5

GUNA-INF alfa and gamma / GUNA-IL 12 GUNA-TGF-beta

GH

IL 6

GUNA-IL 6

© Dipartimento Scientifico Guna S.p.a.

GUNA-IL 10 /GUNA-IL 4

OSLABENÍ ÚýINKU

GCSF

IL 7

GUNA-IL 7

Acute inflammation: GUNA-IL4 /GUNA-INF-Ȗ Chronic inflammation: GUNA-IL 6 GUNA-IL 10 / GUNA-TGF-ȕ

IL 8

GUNA-IL 8

GUNA-IL 10 /GUNA-TGF-beta

IL 9

GUNA-IL 9

GUNA-IL 10

IL 10

GUNA-IL 10

GUNA-IL 1 /GUNA-TNF-alfa /GUNA-IL 6

IL 11

GUNA-IL 11

GUNA-IL 2

IL 12

GUNA-IL 12

GUNA-IL 4 /GUNA-IL10

TGF-beta TNF-alpha

GUNA-TGF-beta GUNA-TNF-alfa

GUNA-IL 12 GUNA Anti Il-1 + GUNA-IL 10

POUŽITÍ STEJNÉHO HORMONU

GUNA IGF 1

GUNA SOMATOSTATIN

LH

GUNA LH

GUNA PROGESTERON

PARATHORMON

GUNA PARATHORMON

GUNA CALCITONINA

PROGESTERON

GUNA PROGESTERON

GUNA beta-ESTRADIOL

PROLAKTIN

GUNA PROLACTIN

GUNA MELATONIN

SOMATOSTATIN

GUNA SOMATOSTATIN

GUNA IGF 1 / GUNA PROLACTIN

TSH

GUNA TSH

GUNA ACTH GUNA SOMATOSTATINA

75

77

78 GUNA METODA – TERAPEUTICKÁ STRATEGIE

GUNA METODA – TERAPEUTICKÁ STRATEGIE

BUNċýNÁ DRENÁŽ

1 P.N.E.I. PNEI ROVNOVÁHA

4 PODPORA RA A BUNċýNÉ BUN VÝŽIVY

UZDRAVENÍ

5

DRENÁŽ

PODPORA DP PORA A BUNċýNÉHO ċý ý É METABOLISMU

LYMFATICKÁ DRENÁŽ

KONTROLA SYMPTOMģ

3

2

PODPORA BUNċýNÉHO METABOLISMU

KONTROLA ONT TROL TRO SYMPTOMģ

DRENÁŽ RE ENÁŽ ENÁŽ

PODPORA BUNċýNÉ VÝŽIVY

BUNċýNÁ DRENÁŽ

DRENÁŽ EXTRACELULÁRNÍ MATRIX

79

DRENÁŽ EXTRACELULÁRNÍ MATRIX

NEMOC

LYMFATICKÁ DRENÁŽ

DRENÁŽ VYLUýOVACÍCH ORGÁNģ

P.N.E.I. ROVNOVÁHA

DRENÁŽ VYLUýOVACÍCH ORGÁNģ

80

STRATEGIE DRENÁŽE

Struktura

Úēinek

PƎípravek

BUĕKA BUNċýNÁ DRENÁŽ

•GUNA-CELL

DRENÁŽ MATRIX

•GUNA-MATRIX

MATRIX •GUNA-LYMPHO

ORGÁNY

DRENÁŽ ORGÁNģ

12

DETOXIKACE MATRIX

BUNċýNÁ DETOXIKACE

DRENÁŽ ORGÁNģ

•GUNA-LIVER •GUNA-KIDNEY •GUNA-BOWEL


82

INDIKÁTORY ÚROVNċ INTOXIKACE ÚROVEĕ III Strukturální zmČny a ztráta funkþnosti ÚROVEĕ II

Snížená funkþnost: Hypertrofie a hyperplázie ÚROVEĕ I ZánČtlivá reakce 81

83

84 DETOXIKACE Intoxikace eliminaþních orgánĤ + blokáda vyluþovacích orgánĤ (intoxikace a dysfunkce vyluþovacích orgánĤ)

Stimulace drenáže matrixu:

Klinické využití FRM v praxi veterináƎe

• Guna-Matrix • Guna-Lympho

Podpora funkce eliminaēních orgánƽ

Drenáž eliminaþních orgánĤ a pojivové tkánČ

Drenážovaná pojivová tkáĖ + odblokování pojivové tkánČ – obnova eliminaþích funkcí

• Guna-Liver (játra) • Guna-Kidney (ledviny)

Obnova enzymatické aktivity

katalyzátory

• Guna-Bowel (stƎevo)

85

86

AKUTNÍ POST TRAUMATICKÉ ZÁN TY -SHRNUTÍ-

ZánĢtlivé a bolestivé stavy

Ambulantní péēe – MD injekce pro specifickou oblast – 1 ampule 2krát dennĢ po dobu 1 nebo 2 týdnƽ (u koní dvounásobná dávka)

• Domácí péēe – GUNA FLAM – GUNA ANTI IL-1

87

88

Akutní post traumatické zánĢty Proē Anti IL-1 v nízké dávce? • Použitím Anti IL-1 v nízké koncentraci se sníží upregulace IL-1 receptorƽ, sníží se pozitivní zpĢtnou vazbu na Th1 lymfocytech.

• Regulace funkcextracellulární matrix function prostĜednictvím modulace pĤsobení hypofyzárních hormonĤ a stimulace epifýzy

10-20 kapek 3krát/dennĢ 10-20 kapek 3krát/dennĢ

3 „pilíĜe“ v jediném pĜípravku

Aconitum* Belladonna* Ferrum phosphoricum* Apis* Bryonia* Pyrogenium* Phytolacca* Natrium pyruvicum* Acidum citricum* Cu-gluconate*

GUNA-FLAM

Proē GUNA FLAM? • OBSAHUJE: – – – – –

ANTI IL-1 (antiflogisticky) Beta endorfin (analgeticky) Melatonin TGF beta (imunomodulace) IL-10 (imunoregulace)

Anti IL 1-alfa** TGF 1 beta*** IL 10***

Melatonin Hypophysis porcine Pineal Gland Conjunctive tissue

• Modulace neurogenické a cévní exsudativní fáze zánČtlivého procesu*

Hepar sulfuris Pyrogenium Ferrum phosphoricum

• Stimulace RES a inhibice možné septické progrese zánČtlivého procesu

Aconitum*

Beta-endorphin**

• Inhibice zánČtlivého procesu od samého poþátku**

• Potenciace imunitní protizánČtlivé aktivity (polarita Th2-Th3)***

• Modulace neurogenické fáze zánČtu* • Sensitizace beta-endorfinových periferních receptorĤ**

13


90

Chronické zánĢty

OSTEOARTRITIDA KLOUBU

• GUNA MATRIX kapky – drenáž extracelulární matrix 10-20 kapek 3krát dennĢ

•DRENÁŽ MATRIXU •SNÍŽENÍ VÝSKYTU SYMPTOMp •P\EBUDOVÁNÍ CHRUPAVKY

• GUNA INTERLEUKIN 10 kapky - imunomodulaēní 10-20 kapek 3krát dennĢ • GUNA FLAM kapky – protizánĢtlivé, analgetické, imunomodulaēní 10-20 kapek 3krát dennĢ

91

92

Osteoatritida

CHRONICKÉ RENÁLNÍ SELHÁNÍ

PATOLOGICKÝ ZÁN TLIVÝ STAV IMUNOLOGICKÁ HYPERAKTIVACE FYZIOLOGICKÁ PROTIZÁN TLIVÁ ODPOV

TERAPIE POTRALUJÍCÍ HYPEREXPRIMOVANÉ POMOC MOC OC C CÍ CYTOKINY POMOCÍ GUNA ANTI IL ILL-1 -1 1 PODPORA TÉTO REAKCE GUNA A TGF GFF-ɴ -ɴ ɴ GUNA A IL ILL-10 0

93

94



• GUNA MATRIX • GUNA LIVER • GUNA KIDNEY

1. DRENÁŽ MATRIX 2. DRENÁŽ ELIMINANÍCH ORGÁNp 3. KONTROLA SYMPTOMp A OBNOVA FUNKNOSTI

20 KAPEK 2X DENN 20 KAPEK 2X DENN 20 KAPEK 2X DENN

Jednotlivé pƎípravky mohou být míchány dohromady mezi sebou.

95

96


• SNÍŽENÍ PROTEINp • ZVÝŠENÍ VLÁKNINY • INULIN INTEGRACE k navázání dusíkatých složek potravin a vylouēení stolicí

14

EOSINOFILNÍ GRANULOM U KOEK


98

HYPEREOSINOFILIE

EOSINOFILNÍ GRANULOM KOEK

Th2

•IL-4 •IL-5 Th1

99

…CO JE POT\EBA? MUSÍ OBNOVIT ROVNOVÁHU Th1/Th2 SYSTÉMU …JAK?

100

EOSINOFILNÍ GRANULOM KOEK • GUNA FLAM • GUNA INTERLEUKIN 12 • GUNA INTERFERON GAMMA

EOSINOFILNÍ GRANULOM KOEK ObecnĢ dojde ke snížení symptomƽ bĢhem nĢkolika dnƽ, potƎeba kortikosteroidƽ je snížená.

8-10 kapek každého léēiva 2-3x dennĢ, rozpuštĢné ve vodĢ

101

102

PARVOVIROVÁ GASTROENTERITIDA

PARVOVIROVÁ GASTROENTERITIDA • • • •

103

Zvýšit imunitu Snížit symptomy a zánĢt Obnova stƎevní mukózy Drenáž

104

CITOMIX

PARVOVIROVÁ GASTROENTERITIDA

•MOUNTAIN CRANBERRY

•LYMPHATIC VESSEL

•ANANASSA SATIVA

•MEDULLA OSSIS SUIS •THYMUS GLAND

•HYDROCOTYLE ASIAT.

• • • •

CITOMIX + GUNA INTERFERON GAMMA GUNA FLAM COLOSTRO NONI GUNA LYMPHO

Látky Látky

PĤsobí antisepticky (Mountain cranberry), protizánČtlivČ (Ananassa sativa), stimulace RES (Hydrocotyle asiatica)

živoþišného

rostlinného pĤvodu pĤvodu

CYTOKINY

Stimulace imunokompetentních tkání

•GCSF; 10pg

SpouštČþ imunitní reakce

•IL1; 1 pg

•IL4; 10 pg

•INF gamma 10 pg

•IL2; 1 pg

•IL6 0,01 pg

Stimulace B bunČk(IL4) a T, B, NK (IL2). © Dipartimento Scientifico Guna S.p.a.

15


Vitaminy Coenzymy Imunologická stimulace

IgA IgM IgG Creatina Creatinina Citrullina Lattoferrina Transferrina Taurina

Fosfoetanolamina

Fosfoserina

Imunitní a antiimikróbní aktivia

16

106

Colostro Noni Vitamina A Vitamina B1 Vitamina B2 Vitamina B6 Vitamina B9 Vitamina B12 Vitamina C Vitamina D Vitamina E Coenzima Q10

Stimulace enzymové aktivity, antioxidaþní efekt

Aminokyseliny Alanina Arginina Ac. aspartico Cistina Glutamina Ac. glutammico Glicina Istidina Isoleucina Leucina Lisina Metionina Ornitina Fenilalanina Prolina Serina Treonina Triptofano Tirosina Valina

Obnova stĜevní sliznice pomocí pospory syntézy bílkovin

DĢkuji za pozornost

Mineraly Sodio Potassio Calcio Magnesio Ferro Rame Zinco Cromo Selenio Fosforo

Optimalizace biodostupnosti enzymových systémĤ

Hormony a RĤstové faktory Prolattina Testosterone Estradiolo Progesterone Calcitonina Osteocalcina Insulina IGF-1 EGF FGF TGF

RĤst stĜevních bunČk. Zlepšení bariérového efektu stĜevní sliznice.

• Kontakt: Fabio Olivieri MVDr. email: [email protected] email: [email protected]

FYZIOLOGICKÁ REGULAČNÍ MEDICÍNA Cílená detoxikace formou podpory biotransformačních a exkrečních procesů na úrovni: • buňky • extracelulární matrix • lymfatického systému • vylučovacích orgánů (játra, ledviny, střevo)

– Dokáže podpořit a zefektivnit nastavenou terapii – Dokáže předcházet zánětům a degenerativním onemocněním • Jako xenobiotika (z řeckého xenos = cizí) se označují látky tělu cizí, které organismus nepotřebuje k plnění svých funkcí. • Většina cizorodých látek se zapojuje do chemického dění v organismu, může zasahovat do metabolismu, ovlivňovat jeho regulace nebo měnit biologické struktury a jejich funkce, zprostředkovaně tak mohou ovlivňovat účinky nastavené farmakoterapie u pacienta. • Cílená biotransformace a vyloučení xenobiotik z buněčné a mezibuněčné úrovně směrem k eliminačním orgánům vede k zefektivnění buněčných funkcí i metabolismu mezibuněčného prostoru vyplněného komunikační a imunologicky aktivní extracelulární matrix. • Fyziologická regulační medicína nabízí koncepci biotransformace xenobiotik od buněčné úrovně až po exkreci eliminačními orgány v souladu s xenobiochemickými principy.

Více informací k dané problematice na www.edukafarm.cz

Vliv probiotik na kvalitu živočišné produkce 1

2

Cíl podávání probiotik

farmakolog Mgr. Lucie KotláĜová ([email protected]) •Edukafarm, Praha •Universita degli studi di Camerino, Itálie – externí spolupráce v oblasti probiotik

y Obnovení

a udržení normální stĜevní mikroflóry, která je pĜedpokladem pro ¾Zlepšené trávení ¾Zlepšení imunity a rezistence k onemocnČní ¾Redukce prĤjmĤ ¾Redukce vlivu stresu ¾Redukce hladin stĜevních patogenĤ

3

4

Probiotika/odborné práce y

y

ýetné klinické studie podporující oblasti využití probiotik pro podpory lidského zdraví.

¾ Popsaný

genotyp / monitorování genetické stability (= omezení rizika vzniku mutace)

Aplikace u zvíĜat:

¾Po narození pro ustanovení fyziologické mikroflóry ¾Po zmČnČ krmení þi místa pohybu ¾Antibiotická léþba ¾Po vakcinaci ¾PĜed, bČhem a po stresu ¾PrĤjem ¾Jaterní onemocnČní ¾Kolorektální karcinom ¾RĤzná onemocnČní stĜev

5

¾ Rezistence

vĤþi kyselému pH žaludku (= životaschopnost – vitalita)

¾ PĜilnavost ¾ Setrvání

ke stĜevní sliznici

ve stĜevČ

6

Nová moderní generace probiotik! y

Co by mČlo splnit probiotikum? Sledujeme tato kritéria…

Porovnání Synbiotecu s ostatními probiotiky y

pĜilnavost probiotických bakterií ke sliznici stĜeva

L.rhamnosus IMC 501 + L. paracasei IMC 502

SYNBIOTEC

¾Izolace a selekce v rámci evropského projektu CROWNLIFE italskou Univerzitou degli studi di Camerino za úþelem využití ve funkþních potravinách! ¾Synergická / výjimeþná adheze ke stĜevní sliznici! ¾Popsána genetická mapa a molekulární profil probiotika – sledována genetická stabilita ve funkþních potravinách.

Maria Cristina Verdenelli. Probiotic properties of Lactobacillus rhamnosus and Lactobacillus paracasei isolated from human faeces. Eur J Nutr. 2009 Sep;48(6):355-63

7

8

Synergie L.rhamnosus IMC 501 + L. paracasei IMC 502 – adheze 25%

PĜilnavost ke stĜevní sliznici pĜedurþuje probiotikum SYNBIOTEC •

K imunomodulaþním vlastnostem

y

Správný vývoj stĜevní imunity – imunomodulaþní (u alergikĤ), imunostimulaþní (u zdravých jedincĤ)

= dopad na snížení nemocnosti zvíĜat na úrovni virových a bakteriálních infektĤ, respiraþních infektĤ a GIT infektĤ Maria Cristina Verdenelli. Probiotic properties of Lactobacillus rhamnosus and Lactobacillus paracasei isolated from human faeces. Eur J Nutr. 2009 Sep;48(6):355-63

18

Vliv probiotik na kvalitu živočišné produkce 9

10

Synbiotec – klinická studie prokazující podporu ovogeneze y

Synbiotec – klinická studie prokazující podporu ovogeneze ZmČny v sekundární struktuĜe proteinĤ (amide I band) ZmČny ve fosfolipidovém a glucidovém spektru Zvýšení lysosomálního enzymu (cathepsin L) bČhem poslední IV fáze zrání

Sledování efektu Lactob. Rhamnosus IMC 501 na zrání oocytu na modelu zebrafish

y

Podávání po dobu 10 dnĤ

y

Podpora dozrávání oocytu ve vajíþko

Giordini et al.Effects of Lactobacillus rhamnosus on zebrafish oocyte maturation: an FTIR imaging and biochemical analysis. Anal Bioanal Chem. 2010 Dec;398(7-8):3063-72.

ěez vajeþníky /kontrolní skupina

11

ěez vajeþníky /skupina s probiotiky

12

Ovogeneze – IV fáze

Ovogeneze – III fáze Ovogeneze fáze III Kotnrolní skupina

Ovogeneze fáze IV Kontrolní skupina

Ovogeneze fáze III Probiotická skupina

13

Ovogeneze fáze IV Probiotická skupina

14

Podpora reprodukce pomocí Synbiotecu U hospodáĜských zvíĜat (skot, drĤbež, prasata, ovce, kozy) y V chovu koní y V chovu ryb y Ve vþelaĜství y

y y

y

Dávkování – chov ryb-reprodukce

V zájmovém chovatelství Psi, koþky, aquakultury, exotické ptactvo,

Pro podporu ovogeneze 106 UFC/ml

y

Dávkování: 0,01g Synbiotecu / 1 litr

y

y

Chov vzácných zvíĜat (ZOO)

15

y

Akvarijní rybiþky- 100 l. tank (1g Synbiotecu) = cca 25 Kþ/den

16

SYNBIOTEC - benefity y y y y y y y y

Zlepšení zdravotního stavu zvíĜat Zvýšení jejich odolnosti vĤþi stresu Zkrácení doby rekonvalescence Rychlejší narĤst váhy Lepší využití složek krmiva Ochranná bariéra proti bakteriím E.coli, salmonele a ostatním patogenĤm Podpora imunity Klinickými studiemi potvrzena podpora reprodukþní þinnosti

Bibliografie y

y

y

y

Martarelli, Verdenelli et al.(2010). Effect of a probiotic intake on oxidant and antioxidant parameters in plasma of athletes during intense exercise training. Curr. Microbiology Verdenelli et al.(2010). Investigation on antigenotoxic properties of the probiotic Lactobacillus rhamnosusIMC 501®by gas chromatography-mass spectrometry. Italian Journal of Food Science, n. 4, vol. 22 – 2010: 473-477 Maria Cristina Verdenelli. Probiotic properties of Lactobacillus rhamnosus and Lactobacillus paracasei isolated from human faeces. Eur J Nutr. 2009 Sep;48(6):355-63 Giordini et al.Effects of Lactobacillus rhamnosus on zebrafish oocyte maturation: an FTIR imaging and biochemical analysis. Anal Bioanal Chem. 2010 Dec;398(7-8):3063-72

19

Nová moderní generace probiotik, vyvinutá renomovanou italskou Universitou degli Studii di Camerino Parametry: • garance množství životaschopných probiotik v konečném produktu, a to po dobu jeho použitelnosti, • popsána genetická mapa a molekulární profil = garance genetické stability ve funkčních potravinách a v doplňcích stravy = zamezení rizika vzniku mutace, • patentem chráněné složení 2 probiotických kmenů (Lactobacillus rhamnosus IMC 501 / RHM, Lactobacillus paracasei IMC 502 /PRC) + dokumentace/studie dokládající jejich výjimečné vlastnosti, • rezistence k nízkému pH – odolnost vůči žaludečním a žlučovým kyselinám, • vysoká termostabilita (60-65 ˚C), • zdokumentovaná mimořádná adheze (přilnavost) k buňkám střevní sliznice = vysoký potenciál působení proti choroboplodným mikroorganismům, • antioxidační efekt, • nadějný protektivní vliv na riziko karcinogeneze v oblasti GIT/střevo.

Přilnavost probiotických bakterií SYNBIOTEC ke sliznici střeva (porovnání s ostatními probiotiky)

SYNBIOTEC

Maria Cristina Verdenelli. Probiotic properties of Lactobacillus rhamnosus and Lactobacillus paracasei isolated from human faeces. Eur J Nutr. 2009 Sep;48(6):355-63

Klinické využití:

• v potravinářství • ve farmacii • v humánní medicíně • ve veterinární medicíně

Příloha 1 Anal Bioanal Chem DOI 10.1007/s00216-010-4234-2

ORIGINAL PAPER

Effects of Lactobacillus rhamnosus on zebrafish oocyte maturation: an FTIR imaging and biochemical analysis Elisabetta Giorgini & Carla Conti & Paolo Ferraris & Simona Sabbatini & Giorgio Tosi & Corrado Rubini & Lisa Vaccari & Giorgia Gioacchini & Oliana Carnevali

Received: 7 June 2010 / Revised: 16 September 2010 / Accepted: 21 September 2010 # Springer-Verlag 2010

Abstract The aim of this study was to verify the effects of probiotic Lactobacillus rhamnosus on zebrafish oocyte maturation using FPA (focal plane array) FTIR imaging together with specific biochemical assays (SDS–PAGE, real-time PCR and enzymatic assay). Oocyte growth is prevalently due to a vitellogenic process which consists of the hepatic synthesis of vitellogenin and its selective uptake during maturation. The administration of L. rhamnosus IMC 501 for 10 days induced chemical changes to oocyte composition, promoting the maturation process. Some interesting biochemical features, linked to protein secondary structure (amide I band) and to phospholipidic and glucidic patterns, were detailed by vibrational analysis. The spectroscopic results were supported by the early increase of the lysosomal enzyme involved in the final oocyte maturation, the cathepsin L. This enzyme increases during follicle maturation, with the highest levels in class IV oocytes. In E. Giorgini (*) : C. Conti : P. Ferraris : S. Sabbatini : G. Tosi Dipartimento di Idraulica, Strade, Ambiente e Chimica, Università Politecnica delle Marche, 60121 Ancona, Italy e-mail: [email protected] C. Rubini Dipartimento di Neuroscienze, Università Politecnica delle Marche, 60121 Ancona, Italy L. Vaccari Beamline SISSI, Sincrotrone Elettra, 34102 Trieste, Italy G. Gioacchini : O. Carnevali Dipartimento di Scienze del Mare, Università Politecnica delle Marche, 60121 Ancona, Italy

treated females, class III oocytes showed higher cathepsin L gene expression and enzymatic activity, with levels comparable to class IV oocytes isolated from controls; this can be related to the proteolytic cleavage of the higher molecular mass yolk protein components, as evidenced by SDS–PAGE. Keywords FPA FTIR imaging . Vibrational analysis . Fish oocytes . Probiotic . Ovary . Danio rerio

Introduction In recent years, probiotics have attracted considerable attention not only as feed additives but also for their positive effects in a great number of diseases [1–8]. Up until now, their role in reproduction and mechanisms of action have been poorly studied. However, it is noteworthy to evidence a recent study on the positive role of Lactobacillus rhamnosus on zebrafish oocyte growth and gametes quality [9]. The zebrafish and human genomes have been shown to share extensive conserved synthetic fragments and are therefore increasingly seen as a powerful and highly amenable model system for many human and animal diseases with complete genome available. In addition, many zebrafish genes and their human homologue display structural and functional similarities [10]. For this reason, zebrafish have been considered a good model to elucidate molecular mechanisms involved in several different physiological processes, including reproduction. Zebrafish oocytes, due to their number, size, relative flatness and distinctive maturation states, are ideal subjects for vibrational microspectroscopy experiments. A zebrafish ovary is asynchronous, composed by oocytes at different

21

E. Giorgini et al.

size, whose maturation process causes relevant modifications in protein components [11]. In teleosts, vitellogenin (VTG), the yolk precursor protein synthesized in the female liver, is incorporated by the oocyte from the bloodstream by receptor-mediated endocytosis; once inside the oocyte, VTG is processed into smaller yolk proteins consisting of lipovitellins, phosvitins, phosvettes and ß-components, which are stored in the oocyte during the growth period and will be the source of nutrients and energy for the developing embryo [12–14]. Fourier Transform Infrared (FTIR) microspectroscopy is a powerful technique to study the composition and the macromolecular chemistry of cells and tissues, providing a biochemical fingerprint of the samples under investigation. Infrared mapping and imaging techniques generate chemical cartograms based on peak height, integrated areas under specific bands or band ratios, giving a semi-quantitative evaluation of sample biocomponents. The identification and correlation of spectral groups (clusters), directly evidenced on the images, can be achieved by means of multivariate procedures [15–17]. A recent study analysed mice oocytes by using Synchrotron Radiation IR Microspectroscopy (SR-IRMS), provided the overall biochemical composition of samples during maturation: in fact, differences between immature oocytes at the germinal vesicle and mature metaphase II stage were nicely evidenced [18]. Since 1990s, our group is involved in applying infrared spectroscopy to study biological modifications [19–22]. A previous study on zebrafish oocytes, carried out in our laboratories, provided the characterization of specific spectral markers ongoing from class I–II to IV oocytes, allowing to define a new method for classifying the different maturation states [23]. As a further extent, we decided to evaluate at molecular level the effects of probiotic L. rhamnosus on zebrafish follicle composition, by IR imaging using a bidimensional focal plane array (FPA) detector, Q-polymerase chain reaction (PCR), enzymatic assay and sodium dodecyl sulphate– polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE).

Experimental Sample preparation Adult Danio rerio (zebrafish) females, purchased from a commercial dealer (Acquario di Bologna, BO, Italy), were Table 1 Primers list and sequences

22

kept in aquaria at 28 °C and oxygenated water. Fishes were fed twice daily with commercial food (Vipagran, Sera, Germany) and two times with Artemia salina. Eggs laid by parental fish were kept and grown. Six-month-old adult zebrafish were used for testing the effects of probiotic on reproductive process. Two experimental groups were performed: a control group (C), fed on commercial diet only, and a treated group (P), fed on commercial diet mixed with lyophilized probiotic for 10 days. The probiotic strain used was L. rhamnosus IMC 501®, provided by Synbiotec S.r.l. (Camerino, MC, Italy) and supplied in the water tanks in a final concentration of 106 CFU ml−1, as suggested by the producer. The count of egg-spawned output was performed every day at 9.00 a.m. within 1 h after light. At the end of the treatment, 30 ovaries were frozen in liquid nitrogen, fixed on corky supports with OCT cryostat embedding medium (Tissue-Tek®) and cryosectioned at a predefined thickness of 5–7 μm by using a KRYOSTAT 1720 DIGITAL instrument; adjacent slices were deposed on silicon supports for vibrational analysis and on conventional glass slides for morphological examination (haematoxylin and eosyn stained) [23]. These procedures were performed in accordance with the Guidelines on the Handling and Training of Laboratory Animals by the Universities Federation for Animal Welfare and with the Italian animal welfare legislation (D.L. 116/92). FTIR measurements and data analysis FTIR measurements were carried out at the FTIR beamline SISSI, ELETTRA synchrotron [24], by using a Bruker VERTEX 70 interferometer coupled with a Hyperion 3000 Vis-IR microscope and equipped with a liquid nitrogen cooled FPA detector (detector area size 64×64 pixels). For every ovary section, images were acquired in transmission mode using a 15× condenser/objective (pixel resolution of about 2.6 μm); specific zones, corresponding to oocytes of classes I–II, III and IV, were selected for IR mapping. Each IR image (OPUS 6.5, Bruker software package), obtained by acquiring simultaneously groups of 4,096 spectra, was collected averaging 128 scans for each detector pixel with a spectral resolution of 4 cm −1, rationing the background single-channel image against the sample single-channel one. Bigger images were done by defining a grid of images, until a maximum of 36,864 spectra. All the samples were compared with independent trials.

Gene

For primer

Rev primer

CatL β-actin

TGCAACAGAGGAAGGGTGGAG GGTACCCATCTCCTGCTCCAA

TCCAGCTTGTTTGGGACCTCA GAGCGTGGCTACTCCTTCACC

Effects of Lactobacillus rhamnosus on zebrafish oocyte maturation Fig. 1 Photomicrograph of (a) C and (b) P zebrafish ovary sections (haematoxylin-andeosin-stained)

a

b

400 μm

400 μm

By using OPUS 6.5, total absorbance cartograms, representing the total intensity of the infrared absorption, were generated for each sample by integrating areas between 1,800 and 1,000 cm−1. For a deeper analysis, the corresponding spectral data were run with CytoSpec 1.4.02 to obtain chemical maps of the integrated areas under CH stretching region (3,100–2,800 cm−1), amide I mode (1,720–1,580 cm−1) and phosphate and carbohydrate zones (1,300–900 cm−1). Average spectra were extracted from IR images, selecting an area from the inner zone of each oocyte, in order to avoid the influence of phospholipidic membrane (OPUS

a

6.5); depending on oocyte size, the number of selected spectra was in the range 1,360–12,550. All the average spectra were two points baseline linear fitted in the spectral range 4,000–900 cm−1 and vector-normalized [25]. At the occurrence, second-derivative (nine-point smoothing) and peak fitting (Gaussian algorithm) procedures were adopted to determine the right position and absorbance intensity of bands. By using GRAMS/AI 7.02 (Galactic Industries, Inc., Salem, NH) software package, peak fitting was performed on average spectra (interpolated in the range 1,720–1,580 cm−1 and two points baseline linear fitted); to identify the underlying component bands, the number of

b 100 μm

c

100 μm

d CH

Fig. 2 Total absorbance cartogram of IIIC oocyte, reconstructed by integrating the area between 1,800 and 1,000 cm−1 (a), together with the corresponding photomicrograph (b); chemical maps of the

e AI

PO2

integrated areas under the CH2 and CH3 stretching regions (3,100– 2,800 cm−1) (c), the amide I band (1,720–1,580 cm−1) (d) and the phosphate and carbohydrate zones (1,300–900 cm−1) (e)

23

E. Giorgini et al.

peaks together with their centre values was carefully individuated according to second-derivative results and fixed before running the iterative process, to obtain the best reconstructed curve (residual near to zero). Mean values of area and wavelength were purchased for each component peak. Attribution of the bands was done according to literature [16, 25–30]. Cathepsin L enzymatic assay The cathepsin L (Cat L) enzymatic assays were optimized and performed from each experimental group (C and P) on the three oocyte stages: I–II, III and IV. The crude extract for the enzymatic assays was made by homogenizing the tissue with distilled water (1:2, w/v). The homogenate was centrifuged at 14,000×g for 10 min at 4 °C. The supernatant was carefully separated from the lipid layer. The total protein level in the supernatant was determined by the method of Bradford [31] with bovine serum albumin (Sigma) as the standard. Supernatants were used for enzymatic assays.

a

The Cat L enzymatic activity was routinely assayed against the synthetic substrate Z-Phe-Arg-NNapOMe (α-N-benzyloxycarbonyl- L-Phe-L-Arg-4-methoxy-β-naphthylamide) (5-mM final concentration) by a selective colourimetric assay [32]. For the quantitative analysis, we used a standard curve based on 4-methoxy-2-naphtylamine (0.5–35 μM), in order to convert absorbance in molar concentration. The colourimetric assay was performed as follows: 2.5–5 μl of oocytes at I–II, III and IV stages crude extract were added to 376 μl of activator buffer (0.1 M NaAc, 1.33 mM ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA, 6.66 mM cysteine, 5.33 M urea; pH 5). The mixture was incubated for 5 min at 40 °C in order to activate the enzyme and then added to 6.25 μl of substrate ZPhe-Arg-NNapOMe (6 mg/ml in DMSO) and water until a final volume of 500 μl. After 20 min of incubation at 45 °C, the reaction was stopped with 500 μl of colour reagent, containing Fast Garnet Salt (1 mg/ml) with pCMB (10 mM) and EDTA (50 mM), in a ratio of 1:1, pH 6.0. After addition of 1 ml of But-OH, the tube was centrifuged for 5 min at 14,000×g, in order to separate the reaction product (4-Me2-NA). The supernatant was read at 520 nm [32]. The assay

b 100 μm

c 100 μm

d CH

e AI

Fig. 3 Total absorbance cartogram of IIIP oocyte, reconstructed by integrating the area between 1,800 and 1,000 cm−1 (a), together with the corresponding photomicrograph (b); chemical maps of the

24

PO2


Effects of Lactobacillus rhamnosus on zebrafish oocyte maturation

activity is expressed as micromole per minute per milligramme per microlitre of 4-methoxy-2-naphthylamine released. The crude extract amount, temperature, pH and time of incubations were optimized and utilized for cathepsin L assay in all classes of isolated oocytes. The inhibition studies were performed by using both leupeptin and N-(benzyloxycarbonyl)-L-phenylalanyl-L-tyrosinal [33–35]. SDS–PAGE Five oocytes from selected stage (I–II, III and IV) of each experimental group (C and P) were homogenized in 10 μl of lysis buffer and then centrifugated at 14,000×g for 15 min to separate the dissolved yolk from the insoluble cellular debris. The supernatant was run on SDS–PAGE under denaturing conditions according to basic procedures using 10% acrylamide mini-gels (7×10 cm) [12]. Molecular weight standards were placed in wells and electrophoresed at constant current (50 mA). Protein bands were visualized by fixing gels in 12% trichloroacetic acid for 1 h, overnight staining in 0.2% Coomassie Blue R-350 (AmershamPharmacia Biotech Uppsala, SE-75184, Sweden) in 30%

a

methanol plus 10% acetic acid and final distaining in 25% methanol and 7% acetic acid. Gene expression Total RNA was extracted from samples using mini kit RNeasy® (Qiagen) extraction kit following the manufacturer’s protocol. Total RNA extracted was eluted in 25 μl of RNase-free water. Final RNA concentrations were determined by spectrophotometer, and the RNA integrity was verified by ethidium bromide staining of 28S and 18S ribosomal RNA bands on 1% agarose gel. RNA was stored at −80 °C until use. Total RNA was treated with DNase (10 UI at 37 °C for 10 min, MBI Fermentas); a total amount of 1 μg of RNA was used for cDNA synthesis, employing iScript cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad). Real-time PCR PCRs were performed with SYBR green method in an iQ5 iCycler thermal cycler (Bio-Rad). For each sample, triplicate PCR reactions were carried out. The reactions were set

b

100 μm

c 100 μm

d

CH

Fig. 4 Total absorbance cartogram of IVC oocyte, reconstructed by integrating the area between 1,800 and 1,000 cm−1 (a), together with the corresponding photomicrograph (b); chemical maps of the

e

AI

PO2


25

E. Giorgini et al.

a

b 100 μm

c

d

e

100 μm

AI

CH

PO2

integrated areas under the CH2 and CH3 stretching region (3,100– 2,800 cm−1) (c), the amide I band (1,720–1,580 cm−1) (d) and the phosphate and carbohydrate zones (1,300–900 cm−1) (e)

on a 96-well plate by mixing, for each sample, 1 μl of diluted (1/20) cDNA, 5 μl of 2× concentrated iQ™ SYBR Green Supermix (Bio-Rad), containing SYBR Green as a fluorescent intercalating agent, 0.3 μM forward primer and

0.3 μM of reverse primer. The thermal profile for all reactions was 3 min at 95 °C and then 45 cycles of 20 s at 95 °C, 20 s at 60 °C and 20 s at 72 °C. Fluorescence monitoring occurred at the end of each cycle. Additional

Fig. 6 Average spectra of classes I–II, III and IV oocytes (control C, red; probiotic-treated P, blue) in the range 4,000– 900 cm−1 (classes III and IV spectra were shifted along the y-axis). Grey rectangles indicate the analysed spectral windows

Absorbance / a.u.

Fig. 5 Total absorbance cartogram of IVP oocyte, reconstructed by integrating the area between 1,800 and 1,000 cm−1 (a), together with the corresponding photomicrograph (b); chemical maps of the

IV

III

I-II 3998,2

3600

3200

2800

2400

2000

1800

Wavenumbers / cm

26

1600 -1

1400

1200

1000 899,9

Effects of Lactobacillus rhamnosus on zebrafish oocyte maturation Fig. 7 Peak fitting in the region 1,720–1,580 cm−1 of IIIC, IVC, IIIP and IVP oocytes

III C

IV C

Absorbance/ a.u.

R

R

III P

IV P

Wavenumber/ cm-1

1159

R random coil structures

1169

dissociation curve analysis was performed and showed in all cases one single peak. The β-actin was used as reference genes in each sample in order to standardize the results by eliminating variation in mRNA and cDNA quantity and quality. The primer sequences were reported in Table 1. No amplification product was observed in negative control and no primer–dimer formation was observed in the control templates. The data obtained were analysed using the iQ5 optical system software version 2.0 (Bio-Rad). Modification of gene expression is represented with respect to the control sampled at the same time of the treatment.

helical structures

Absorbance / a.u.

β structures

IV

III 1200

1180

1160

1140

1120

Wavenumbers / cm-1 Fig. 8 Representative SDS–PAGE electrophoretic pattern from class I–IIC, I–IIP, IIIC, IIIP, IVC and IVP oocytes. Positions of MW standards (in kilodalton) are indicated. This panel is a composite of three gels

Fig. 9 Average spectra of classes III and IV oocytes (control C, red; probiotic-treated P, blue) in the range 1,185–1,130 cm−1 (class IV spectra were shifted along the y-axis)

27

E. Giorgini et al.

Statistical analysis

Fig. 10 Cathepsin L gene expression (a) and enzymatic activity (b) in classes I–II, III and IV oocytes by Q-PCR. Different letters indicate significant (P<0.05) differences

28

1062 1055

The effects of probiotic were studied on the reproduction of two groups of zebrafish females: the first group (P) treated with probiotic L. rhamnosus and the second group (C) taken as standard reference fed with a normal diet. The higher number of in vivo ovulated eggs by treated females (3:1), indicating an increase of fecundity by probiotics administration, led to the hypothesis of a positive role of this food additive. In order to investigate these effects at a molecular level, IR imaging was applied on ovary sections extracted from the two groups P and C. The use of bidimensional array FPA detector was fundamental for fast acquisition of chemical images with satisfactory S/N ratio at high spatial resolution, imposed by diffraction limit [36, 37]. The photomicrographs of two ovary sections (haematoxylin-and-eosin-stained), isolated from control group C and from treated group P, showed well-evident morphological differences: in IVC oocytes, the presence of vesicles due to the uptake of vitellogenin is evident (Fig. 1a), while IVP oocytes result in more homogeneity and light colour (Fig. 1b).

IV

1083

Results and discussion

Absorbance / a.u.

Regarding the statistical analyses of enzymatic activity and gene expression, the presented data are mean±SD for the number of experiments. Student’s t test was used for comparison between the two experimental groups. P<0.05 was considered significant.

1100

1080

1060

1040

1020

Wavenumbers / cm-1

Fig. 11 Second-derivative spectra of IVC (red) and IVP (blue) oocytes in the range 1,100–1,015 cm−1

From each experimental group (control C and probiotic treated P), the total absorption images of the integrated areas between 1,800 and 1,000 cm−1 of class I–II, III and IV oocytes were obtained. No changes were found in classes I–II, leading to the hypothesis that probiotic does not influence this early stage of maturation. The total absorbance cartograms of classes IIIC, IIIP, IVC and IVP oocytes were reported in Figs. 2a, 3a, 4a and 5a, respectively, together with the corresponding photomicrographs (Figs. 2b, 3b, 4b and 5b). In order to evaluate the phospholipidic and proteic patterns, chemical maps were obtained by integrating on the following spectral areas: 3,100–2,800 cm−1 (CH2 and CH3 stretching region) (Figs. 2c, 3c, 4c and 5c), 1,720–1,580 cm−1 (amide I band) (Figs. 2d, 3d, 4d and 5d) and 1,300–900 cm−1 (phosphate and carbohydrate moieties) (Figs. 2e, 3e, 4e and 5e). By comparing photomicrographs of control C follicles (IIIC and IVC) with those of probiotic-treated samples (IIIP and IVP), the latter showed more homogeneous features, as confirmed by the corresponding total absorbance cartograms, too. This trend was also found in the distribution of phospholipids and proteins shown in chemical maps. Considering that vitellogenin, strongly related to oocyte maturation, is a phosphoglycolipoprotein, it could be hypothesized that there is a major uptake, at yolk level, of this component in probiotic-treated females. Average spectra of all classes and treatments were taken into account (Fig. 6). I–IIC and I–IIP spectra were almost

Effects of Lactobacillus rhamnosus on zebrafish oocyte maturation

the same, while differences were found in classes III and IV, between control (C) and probiotic-treated (P) oocytes, above all in amide I band shape (protein secondary structure), in CH lipid stretching modes and in glucidic and phosphate moieties (1,300–900 cm−1). Peak fitting procedure was performed on amide I band to evaluate helical (α-helix, 1,657 and 1,649 cm−1, and threeturn helix, 1,665 cm−1), random coil (1,641 cm−1), β-turn (1,693 cm−1) and β-sheet (1,682, 1,638 and 1,614 cm−1) secondary structures (Fig. 7) [29]. The following results were obtained: (1) on follicle maturation, the value of helix/ β structures absorbance ratio remained approximately constant in C, while an increase was observed in P; (2) random coil structures were detectable only in C samples, with a threefold increase from I–II to IV oocytes; (3) in both groups, a new band at 1,665 cm−1, attributable to three-turn helix secondary structure, was found in class IV oocytes, indicating a differentiation of the proteic pattern on maturation. Changes in cytoplasmic proteins were also shown by the SDS–PAGE test (Fig. 8). The electrophoretic pattern evidenced that vitellogenin incorporation occurred in class III oocytes, even if class IIIP oocytes showed an amount of cytoplasmic proteins similar to that of class IVC. As previously described, during oocyte maturation, components at lower molecular mass appeared, too [34]; these alterations could be due to proteolytic events, controlled by CatL activity, occurring on yolk proteins [34, 38]: such processes generate small peptides and free amino acids that produce the osmotic driving force for water uptake into the oocyte [39–41]. To evaluate oocyte hydration, the bands at 1,159 cm−1 (νCO-H) and 1,169 cm−1 (νCO-P) were investigated (Fig. 9) [19]: in group P, hydration is already well evident in class III oocytes, while in group C it is observed only in class IV. In addition, in class IVP oocytes, a clear phosphorylation process is registered, as indicated by the increase of the band at 1,169 cm−1. The cleavage of proteins side chains is also confirmed by the increase of band ratios 2,959/2,926 cm−1 (νasym CH3/ CH2) and 2,873/2,854 cm−1 (νsym CH3/CH2), more evident in class IIIP oocytes with respect to IIIC [18, 23]. To confirm the spectral data, cathepsin L, the lysosomal enzyme involved in yolk processing during the last phase of follicle maturation, was analysed. In both class III and IV oocytes, a significant increase of CatL gene expression (Fig. 10a) and enzymatic activity (Fig. 10b) occurred after the probiotic treatment (P<0.05). In IVC and IVP oocytes, some changes were also observed in the convoluted band centred at 1,072 cm−1. In order to discriminate the component bands, secondderivative procedure (nine points) was performed on average spectra (Fig. 11). In IVP follicle, the increase of phosphorylation (see above) was confirmed by the blue

shift of the band from 1,083 cm −1 (ν symPO2 − ) to 1,087 cm−1. In addition, in IVP oocytes, an increase of the band at 1,062 cm−1 (–CO–O–C– stretching mode of phospholipids) was evident with respect to the band at 1,055 cm−1 (C–O stretching mode of carbohydrates), due to a higher content of yolk proteins [42].

Conclusion Zebrafish is considered a model organism in which biological processes can be studied, spanning at different scales ranging from molecules via cells to tissues and the whole organism, offering a convenient and powerful model system for biomedical research. FTIR imaging analysis clearly evidences molecular changes induced by probiotic administration, such as the increase of water uptake and phosphorylation processes, together with the modification of secondary protein structures. These changes can be related to a higher fecundity in the probiotic-treated group, suggesting a positive involvement of this agent on zebrafish reproduction. These results support the potentiality of feed additives such as probiotics, largely used in human diet, on improvement of reproductive technology.

References 1. Mach T (2006) J Physiol Pharmacol 57(Suppl 9):23–33 2. Reid G (2008) J Clin Gastroenterol 42(Suppl 3 Pt 2):S234–S236 3. Cremonini F, Di Caro S, Nista EC (2002) Aliment Pharmacol Ther 16(8):1461–1467 4. Whorwell PJ, Altringer L, Morel J (2006) Am J Gastroenterol 101 (7):1581–1590 5. Famularo G, Perluigi M, Pierluigi M, Coccia R, Mastroiacovo P, De Simone C (2001) Med Hypotheses 56(4):421–430 6. Gupta V, Garg R (2009) Indian J Med Microbiol 27:202–209 7. Doron S, Gorbach SL (2006) Expert Rev Anti Infect Ther 4 (2):261–275 8. Zhdanova IV, Yu L, Lopez-Patino M, Shang E, Kishi S, Guelin E (2008) Brain Res Bull 75:433–441 9. Gioacchini G, Maradonna F, Bizzaro D, Olivotto I, Carnevali O (2010) Reproduction (in press) 10. Fishman MC (2001) Science 294:1290–1291 11. Selman K, Wallace RA, Sarka A, Xiaoping Q (1993) J Morphol 218:203–224 12. Wallace RA (1985) Vitellogenesis and oocyte growth in nonmammalian vertebrates. In: Browder LW (ed) Developmental biology, vol 1. Plenum, NY, pp 127–177 13. Tyler CR, Sumpter JP (1996) Rev Fish Biol Fish 6:287–318 14. Babin PJ, Carnevali O, Lubzens E, Schneider WJ (2007) Molecular aspects of oocyte vitellogenesis in fish. In: Babin PJ, Cerdà J, Lubzens E (eds) The fish oocyte: from basic studies to biotechnological applications. Kluwer Academic, Springer, pp 39–76 15. Diem M, Romeo M, Matthaus C, Miljkovic M, Miller L, Lasch P (2004) Infrared Phys Technol 45:331–338 16. Jackson M, Mantsch HH (2002) Pathology by infrared and Raman spectroscopy. In: Chalmers JM, Griffiths PR (eds) Handbook of vibrational spectroscopy, vol 5. Wiley, Chichester, pp 3227–3245

29

E. Giorgini et al. 17. Tosi G, Burattini E, Malvezzi-Campeggi F, Chilosi M, Conti C, Ferraris P, Monti F, Sabbatini S, Zamò A (2007) J Mol Struct 834–836:170–175 18. Diem M, Wood BR, Chernenko T, Matthus C, Chong C, Bernhard U, Jene C, Brandli AA, McNaughton D, Tobin MJ, Trounson A, Lacham-Kaplan O (2008) Anal Chem 80:9065–9072 19. Tosi G, Conti C, Ferraris P, Garavaglia M, Giorgini E, Rubini C, Sabbatini S (2009) Microsc Res Tech 72:67–75 20. Anastassopoulou J, Boukaki E, Conti C, Ferraris P, Giorgini E, Rubini C, Sabbatini S, Theophanides T, Tosi G (2009) Vib Spectrosc 51:270–275 21. Tosi G, Balercia P, Conti C, Ferraris P, Garavaglia M, Giorgini E, Lo Muzio L, Sabbatini S, Stramazzotti D, Rubini C (2010) Anal Quant Cytol (in press) 22. Conti C, Ferraris P, Giorgini E, Pieramici T, Possati L, Rocchetti R, Rubini C, Sabbatini S, Tosi G, Mariggiò A (2007) Lo Muzio L. J Mol Struct 834–836:86–94 23. Carnevali O, Conti C, Ferraris P, Garavaglia MG, Gioacchini G, Giorgini E, Rubini C, Sabbatini S, Tosi G (2009) J Mol Struct 938:207–213 24. Lupi S, Nucara A, Perucchi A, Calvani P, Ortolani M, Quaroni L, Kiskinova M (2007) J Opt Soc Am B 24:959–964 25. Wood BR, Chiriboga L, Yee H, Quinn MA, Mc Naughton D, Diem M (2004) Gynecol Oncol 93:59–68 26. Jackson M, Mantsh HH (1993) Spectrochim Acta Rev 15:53–69 27. Gazi E, Dwyer J, Lockyer NP, Mijan J, Gardner P, Hart CA, Brown MD, Clarke NW (2005) Vib Spectrosc 38:193–201

30

28. Liu KZ, Shi MH, Mantsh HH (2005) Blood Cell Mol Diseases 35:404–412 29. Stuart B (2004) Infrared spectroscopy. Wiley, Chichester 30. Pacifico A, Chiriboga LA, Lasch P, Diem M (2003) Vib Spectrosc 32:107–115 31. Bradford MM (1976) Anal Biochem 72:248–254 32. Kamboj RC, Pal S, Raghav N, Singh H (1993) Biochimie 75:873– 878 33. Margiotta-Casaluci L, Carnevali O (2009) Chem Ecol 25:49–60 34. Carnevali O, Cionna C, Tosti L, Lubzens E, Maradonna F (2006) Gen Comp Endocrinol 146(3):195–203 35. Carnevali O, Cionna C, Tosti L, Cerdà J, Gioacchini G (2008) Mol Reprod Dev 75:97–104 36. Burattini E, Malvezzi-Campeggi F, Chilosi M, Conti C, Ferraris P, Monti F, Sabbatini S, Tosi G, Zamò A (2007) J Mol Struct 834– 836:170–175 37. Carr GL (2001) Rev Sci Instrum 72(3):1–7 38. Carnevali O, Carletta R, Cambi A, Vita A, Bromage N (1999) Biol Reprod 60(1):140–146 39. Matsubara T, Ohkubo N, Andoh T, Sullivan CV, Hara A (1999) Dev Biol 213:18–32 40. LaFleur GJ, Raldùa D, Fabra M, Carnevali O, Denslow N, Wallace RA, Cerdà J (2005) Biol Reprod 73:815–824 41. Fabra M, Raldúa D, Bozzo MG, Deen PMT, Lubzens E, Cerdà J (2006) Dev Biol 295:250–262 42. Lasch P, Boese M, Pacifico A, Diem M (2002) Vib Spectrosc 28:147–157

Systém stabilizace pohybového aparátu – království kolagenu V léčbě bolesti provázející choroby pohybového aparátu se velmi úspěšně uplatňují přípravky tzv. fyziologické regulační medicíny (FRM). Jednou z užívaných substancí je kolagen – látka, kterou můžeme charakterizovat jako extracelulární, ve vodě nerozpustný strukturální glykoprotein tvořící základní stavební jednotku pojivových tkání (v tělech savců až 1/3 veškerých obsažených bílkovin). Je funkční součástí kloubní chrupavky, kloubního pouzdra, periartikulární matrix i svalů. Kolagen je odbouráván různými kolagenázami (např. metaloproteinázami), zvýšeně pak např. při osteoartróze.

Jednou z významných příčin bolestí pohybového ústrojí je ochablost vnitřních a vnějších stabilizačních kloubních systémů. Ochablé podpůrné systémy vyvolávají kloubní hypermobilitu, zejména v nefyziologických polohách, v nichž dochází k předčasnému opotřebení těchto systémů, což dále zvyšuje riziko progresivní degenerace chrupavky. Obleněné nebo hypermobilní součásti podpůrného systému stimulují receptory bolesti a zvyšují napětí svalů v okolí kloubu. Při zpevňování stabilizačních systémů kloubů místně podaným kolagenem jde nejen o regeneraci struktury (vytvoření biologické podpory, tzv. bioscaffold), ale také o analgetické působení. Lokálně podaný kolagen přispívá též k odstranění bolestivých kontrakcí svalstva v okolí kloubu a k obnově jeho funkce i funkce postiženého kloubu.

Základní účinnou složkou zdravotnických prostředků GUNA MD je kolagen v kombinaci s adjuvantními rostlinnými extrakty. K hlavním terapeutickým funkcím kolagenu řadíme tzv. bariérový efekt, lubrikační aktivitu a podporu eventuální souběžné farmakologické léčby. Transport kolagenu na místo určení spolu s dalšími účinnými a pomocnými látkami je založen na patentem chráněném „drug delivery systému“. Principiálně tedy kolagen znovu umísťujeme tam, kde ho je nedostatek, kde posiluje, strukturuje a vytvořením tzv. adhezivní bariéry chrání tkáň chrupavky, šlach, vazů a kloubního pouzdra (viz.obr. výše). Kolagen dále zlepšuje lubrikaci kloubu a kvalitu kolagenových ﬁbril a následně funkci veškerých anatomických struktur, kde je kolagen zastoupen.

GUNA MD zahrnuje celou škálu přípravků určených pro různé problémy muskuloskeletálního aparátu MD-NECK (šíje) MD-THORACIC (hrudník) MD-LUMBAR (lumbální oblast) MD-SHOULDER (rameno) MD-HIP (kyčel) MD-KNEE (koleno) MD-SMALL JOINTS (malé klouby) MD-POLY (pluriartikulární systém) MD-ISCHIAL (ischiatická oblast)

MD-MUSCLE (svaly) MD-NEURAL (nervy) MD-MATRIX (extracelulární systém) MD-TISSUE (měkké tkáně) Edukační kartu vydal: EDUKAFARM, s. r. o. Odborná redakce: MVDr. Alexandra Bôžiková © EDUKAFARM, s. r. o.

FYZIOLOGICKÁ REGULAČNÍ MEDICÍNA V TERAPII BOLESTI POHYBOVÉHO APARÁTU Bez nežádoucích účinků

Indikace v humánní medicíně: Guna MD přípravky působí analgeticky, antiﬂogisticky a fyziologickou regenerací zlepšují pohyblivost kloubů a přidružených tkání, a to vždy v té oblasti, pro kterou jsou určeny. Zároveň zmírňují poškození způsobená stárnutím, průvodními chronickými onemocněními, poraněními a úrazy.

Bez lékových interakcí

Příklady použití dle empirických zkušeností veterinárních lékařů: U psů lze použít MD-Hip v kombinaci s MD-Muscle u dysplazie kyčelního kloubu, MD-small joints u loketního kloubu (například velké plemena Německý ovčák, Labradorský retriever ad. Obecně jsou MD přípravky vhodné u artrózy, artritidy, diskopatie (Jezevčík, Baset ad.). U koní je možné využití MD-Hip injekcí zejména při onemocnění šlachového aparátu, kopytního kloubu, karpálního a tarzálního kloubu a metakarpálního a metatarzálního kloubu (MD-Small joints). S výhodou lze použít MD injekce u sportovních koní díky jistotě negativního dopingového testu. Terapeutický protokol v humánní medicíně: Standardní protokol je použití 1–2 ampulí 1–3x týdně po dobu prvních dvou týdnů podle závažnosti a klinického stavu; následně jedno ošetření týdně až do úlevy od bolesti.

Kombinace s analgetiky vede ke snížení jejich spotřeby, a proto i ke snížení nežádoucích účinků

Dávkování dle empirických zkušeností veterinárních lékařů: U psů dávkování – viz humánní. U koní je dávka dvojnásobná. Forma aplikace: injekční forma k subkutánnímu, intradermálnímu a intraartikulárnímu podání. Statut: zdravotnický prostředek (medical device). Distribuce v ČR: NOVIKO s.r.o., tel: +420 800 112 988, e-mail: [email protected] InPHARM CZ: tel: +420 725 569 606, e-mail: [email protected]

MD-Hip

MD-Muscle: možno kombinovat s dannými přípravky

Informační servis zajišťuje inPHARM, spol. s.r.o., tel: +420 241 432 133, e-mail: [email protected]

zdravotnický prostředek

MD-Hip

MD-Small Joints

Pozn.: Pro lékaře je k dispozici Manuál léčby bolesti s Guna MD přípravky. Obsahuje humanní způsob použití, dávkování a aplikační body pro jednotlivé indikace. Manuál je dostupný na vyžádání zdarma u společnosti inPHARM.



MD-Small Joints

Distribuce v SR: MED-ART, spol. s r.o. tel 0800 900 700 mail:[email protected] inPHARM, spol. s.r.o., tel: +421 244 630 402, e-mail: [email protected]

SBORNÍK PŘEDNÁŠEK. FYZIOLOGICKÁ REGULAČNÍ MEDICÍNA ve veterinární medicíně. 17. května 2011 v Brně 18. května 2011 v Košicích

Recommend Documents