Rapid-VIDITEST Swine Flu Jednokrokový kazetový test pro detekci antigenu viru chřipky typu A. Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261 090 565, Fax: 261 090 566, E-mail:
[email protected], Web: www.vidia.cz
POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Swine Flu je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenu viru chřipky typu A. Je určen pro humánní diagnostiku ke stanovení antigenu prasečí chřipky z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů, a také pro veterinární diagnostiku ke stanovení antigenu ze vzorků od prasat (z výtěrů nosohltanu, z plicní tkáně a stolice). ÚVOD: Virus chřipky typu A (Influenza A virus) z čeledi Orthomyxoviridae obsahuje RNA genom. Genom viru kóduje jeden nebo dva nestrukturální proteiny a devět strukturálních proteinů, které společně s lipidovým obalem převzatým od hostitelské buňky vytvářejí virovou částici. Virus chřipky je jednou nejrozšířenějších příčin morbidity a mortality lidské populace na celém světě. Prasečí chřipka je vyvolávána subtypy H1N1, H1N2, H3N1, H3N2 a H2N3. Nákazy u vepřů způsobují celosvětově hlavně tři subtypy chřipkového viru typu A (H1N1, H3N2, and H1N2). Prasečí chřipka se klinicky projevuje u člověka symptomy jako je kašel, horečka, bolení v krku, únava, nechuť k jídlu a méně často zvracení a průjmy. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Swine Flu je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenu viru chřipky typu A v nazopharyngeálních výtěrech od lidí a od prasat a ve vzorcích odebraných z plicní tkáně prasat nebo jejich výkalů. V testovacích zónách kazety je navázána myší monoklonální protilátka proti virovému antigenu. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl předem ponechán vyschnout v místě aplikace vzorku. Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve „výsledkové zóně“ projeví jako barevná linka. Vzlínání pokračuje až k imobilizovaným kontrolním protilátkám v „kontrolní zóně“, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1
OBSAH SOUPRAVY: -
Testovací kazety (obsahují jednorázové plastové pipety) Sterilní odběrové tampóny Roztok B (ředicí roztok pro vzorky) Testovací zkumavky Návod k použití Certifikát kontroly balení Odběrová zkumavka s pufrem pro vzorky tkáně/stolice
POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: -
Sterilní nádoba pro odběr vzorků jednorázové rukavice stopky
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Sběr humánních vzorků: 1. Stěr z nosohltanu: Vnořte vatový tampón skrze nosní dírku do oblasti zadního nosohltanu. 2. Nosní výplach/aspirát: Nakapejte do nosních dírek sterilní fyziologický roztok a vzorek zachytávejte do odběrové nádoby. Sběr vzorků od prasat: 1. Stěr z nosohltanu: Vnořte vatový tampón skrze nozdru do oblasti zadního nosohltanu. 2. Výplach nosohltanu: Nakapejte do nozder fyziologický roztok a vzorky nechte vytékat do sterilní odběrové nádoby. 3. Plicní tkáň usmrceného zvířete: Odeberte menší část postižené plicní tkáně a rozetřete/homogenizujte v roztoku PBS, stočte a odeberte supernatant. 4. Výkaly/stolice: Vzorky stolice/výkalů odebírejte do čistých a suchých odběrových nádob (bez konzervantů a transportních medií). Odešlete ihned po odběru do laboratoře (citlivost s časem klesá). Vzorky z nosohltanu během skladování a transportu udržujte chlazené na 2º-4ºC.
2
PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací kazetu, vzorky nosního výtěru nebo výplachu a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (15 až 30°C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. Postup pro vzorky nosních výplachů/aspirátů: Pro každý vzorek použijte novou testovací zkumavku a dávkovací pipetu. 1. Do testovací zkumavky přidejte vzorek výplachu/aspirátu z nosohltanu (6 kapek nebo 300 µl) (1). 2. Přidejte roztok B (3 kapky nebo 150 µL) a zamíchejte (2). Vyjměte testovací kazetu z obalu a ihned po otevření ji použijte. Pro každý vzorek použijte novou testovací kazetu. 3. Aplikujte 100 µL do oválného okénka, které je označeno písmenem S (3). Začněte měřit čas. Po 10 minutách odečtěte výsledek (objeví se barevné linky).
Postup pro vzorky nosních výtěrů: Pro každý vzorek (stěr) použijte novou testovací zkumavku a dávkovací pipetu. 1. Do testovací zkumavky aplikujte 15 kapek roztoku B (1). 2. Vložte do ní odběrový tampon. Krouživým pohybem tamponu důkladně roztok promíchejte. Třete tampon o stěnu zkumavky, vytlačte z něj co nejvíce tekutiny (2). Vyjměte testovací kazetu z obalu a ihned po otevření ji použijte. Pro každý vzorek použijte novou testovací kazetu. 3. Aplikujte 100 µL do oválného okénka, které je označeno písmenem S (3). Začněte měřit čas. Po 10 minutách odečtěte výsledek.
3
Postup pro vzorky tkání (supernatant)/stolice: Pro každý vzorek používejte novou odběrovou zkumavku s pufrem. Odšroubujte víčko zkumavky: 1. Vzorek stolice: Vnořte tyčinku několikrát do vzorku stolice, abyste odebrali malou část vzorku (100mg) (1). Zašroubujte víčko zkumavky nyní obsahující pufr a vzorek stolice. Protřepejte obsah (2). Z tekutých vzorků stolice a tkáňového supernatantu odeberte vzorek plastovou pipetou a přidejte 100 μL vzorku do odběrové zkumavky s pufrem. 2. Vyjměte testovací kazetu z obalu a ihned po otevření ji použijte. Zatřepejte zkumavkou se vzorkem, abyste rozmíchali vzorek v pufru. 3. Odlomte špičku víčka (3). Pro každý vzorek použijte novou testovací kazetu. 4. Aplikujte přesně 4 kapky do oválného okénka, které je označeno písmenem S (3). Začněte měřit čas. Po 10 minutách odečtěte výsledek.
INTERPRETACE VÝSLEDKŮ:
ZELENÁ ČERVENÁ
Negativní
ČERVENÁ
Pozitivní
Neplatný
4
Neplatný
POZITIVNÍ: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. NEGATIVNÍ: V kontrolní zóně C se objeví jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane prázdná. NEPLATNÝ: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. POZNÁMKA K INTERPRETACI VÝSLEDKU: Intenzita červené linky v místě označeném T se může měnit v závislosti na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto kvalitativním testem nelze posuzovat množství antigenu ani odhadovat nárůst nebo pokles. PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně, je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. OČEKÁVANÝ PŘÍNOS: Ve Spojených státech je nákaza chřipkou zodpovědná za přibližně 36 000 úmrtní a více než 200 000 hospitalizací. Celkové náklady spojené s každoroční chřipkovou epidemií se odhadují na 10 miliard dolarů. OMEZENÍ TESTU: 1. Rapid-VIDITEST Swine Flu prokazuje pouze přítomnost viru chřipky typu A v testovaném vzorku (kvalitativní detekce). Tímto kvalitativním testem nelze posuzovat množství antigenu ani odhadovat jeho nárůst nebo pokles. 2. V případě, že je test negativní, ale klinické symptomy přetrvávají, doporučujeme znovu otestovat jinými klinickými metodami. Negativní výsledek v žádném případě nevylučuje možnost chřipkové infekce. 3. Tento test slouží pouze k pravděpodobné diagnóze chřipkové infekce. Veškeré výsledky musí být interpretovány v souladu s ostatními klinickými známkami a laboratorními nálezy, které má lékař/veterinář k dispozici. VLASTNOSTI TESTU: Citlivost a specifita Různá ředění virového extraktu byla testována přímo v ředicím roztoku nebo v negativním vzorku nosního výtěru. Detekce byla provedena podle návodu a výsledky byly porovnány s jiným komerčně dostupným testem. Test vykazoval >99% citlivost a >99% specifitu ve srovnání s jiným komerčně dostupným rychlotestem.
5
Křížové reakce S testem Rapid-VIDITEST Swine Flu byla provedena studie křížové reaktivity. Nebyla nalezena žádná křížová reaktivita s běžnými respiračními patogeny a dalšími organizmy a látkami, které se příležitostně mohou nacházet ve vzorcích z nosohltanu, např. RSV (Respiračně syncytiální virus), Adenovirus. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě 2 až 30°C. Test je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: -
Pouze pro in vitro diagnostiku Nepoužívejte po uplynutí expirační doby Testy až do použití uchovávejte zatavené v neporušených obalech. Pokud je hliníkový obal porušený test nepoužívejte. Používejte ochranný oděv a ochranné rukavice. Při práci nejezte, nepijte a nekuřte. Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem. Testovací kazetu likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. Test provádějte nejpozději do 2 hodin od otevření hliníkového obalu.
REFERENCE: 1. BARENFANGER et al., “Clinical and Financial Benefits of Rapid Detection of Respiratory Viruses: an Outcomes Study”. Journal of Clinical Microbiology. August 2000, Vol 38 No 8, p. 2824-2828. 2. LOWEN, A. et al., “The guinea pig as a transmission model for human influenza viruses”. PNAS, June 2006, Vol 103, No 26, 9988-9992. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro
Číslo šarže
Datum exspirace
Výrobce
Datum poslední revize: 04/2013
6
