První hodnocená zkušenost s testem Septin 9 v České republice

Hereditárny Klinická a experimentální angioedém ako gastroenterologie: príčina bolestí brucha původní práce

doi: 10.14735/amgh2016300

První hodnocená zkušenost s testem Septin 9 v České republice A first evaluation of the Septin 9 test in the Czech Republic P. Sychra1, V. Procházka1, L. Roubalová2, J. Zapletalová3, M. Konečný1 II. interní klinika –  gatroenterologická a hepatologická LF UP a FN Olomouc Oddělení klinické bio­chemie, FN Olomouc 3 Ústav lékařské bio­fyziky, LF UP Olomouc 1

2

Souhrn: Rakovina tlustého střeva a konečníku zůstává přes pokrok v dia­gnostice i terapii nadále celospolečenským problémem. Ně­kte­rá nenaplněná očekávání screeningových programů vedou ke zkoumání možností využití stávajících poznatků molekulární bio­logie k časné dia­gnostice. Zprávy o možnostech testování epigenetických známek nositelů rakoviny tlustého střeva nás vedly ke studii proveditelnosti testu Septin 9 pomocí Epi proColon Plasma Quick kit na skupině 108 pa­cientů podstupujících kolonosko­ pii, která byla referenční metodou. Zajímala nás senzitivita a specificita testu v našich klinických podmínkách. V souboru 108 osob byl kolonoskopicky zjištěn u 41 osob adenom, u 21 osob karcinom a 46 osob mělo negativní kolonoskopický nález. V kategorii osob s negativním kolonoskopickým nálezem byl Septin 9 u 34 negativní a u dvou pozitivní, u 10 osob byl test hodnocen pro níz­ kou koncentraci DNA v izobátu jako nezjištěno (ND –  non detected). V kategorii pa­cientů s prokázaným adenomem byl Septin 9 ve 26 případech negativní a v jednom pozitivní a u 14 osob byl výsledek ND. Ve skupině pa­cientů s karcinomem byl Septin 9 nega­ tivní u sedmi osob, pozitivní u sedmi osob, u dalších sedmi osob byl test hodnocen jako ND. Senzitivita testu Septin 9 pro predikci karcinomu nebo adenomu byla 19,5 % a specificita 94,4 %. Pozitivita testu Septin 9 byla zjištěna signifikantně častěji u osob s kar­ cinomem než u osob s adenomem nebo s negativním nálezem při kolonoskopii (p = 0,003). Septin 9 jako test prokázal vysokou spe­ cificitu (94,4 %). Zklamáním byla velmi nízká senzitivita u osob s adenomem v testovaném souboru (jen 3,7 %). Celkové výsledky studie jsou ve velké míře ovlivněny testy, ve kterých byla koncentrace DNA v izolátu vyhodnocena jako nedostatečná a výsledek byl stanoven jako ND. Klíčová slova: septiny – Septin 9 – senzitivita – specifita – kolorektální nádory Summary: Colorectal cancer still persists despite advances in diagnosis and therapy. The unfulfilled expectations of screening pro­ grams has led to the development of new tests based on molecular biology for early diagnosis. Reports over the past 15 years con­ cerning the possibility of using epigenetic markers of colon cancer for colon cancer diagnosis led us to study the feasibility of using the Septin 9 test comprised in the Epi proColon Plasma Quick Kit on a group of 108 patients undergoing colonoscopy, the reference method. We were interested in the sensitivity and specificity of the test under our clinical conditions. Among the 108 patients, colonoscopy detected adenomas in 41, carcinomas in 21, and no findings in 46 persons. In the patients with negative colonoscopic findings, the Septin 9 test was negative for 34 and positive for two, with 10 people were classified as “not detected” (ND) because the DNA concentration in the isobath was below the required level. In patients with a confirmed adenoma, the Septin 9 test was negative in 26 and positive in one, and 14 people were classified as ND. In patients with cancer, the Septin 9 test was negative in seven and positive in seven, and seven were classified as ND. The sensitivity of the Septin 9 assay was 19.5% and the specificity was 94.4%. Septin 9 test positivity was found significantly more often in people with cancer than in those with an adenoma or with negative findings on colonoscopy (p = 0.003). The Septin 9 test showed a high degree of specificity (94.4%). It was disappointing that the test showed very low sensitivity in patients with adenoma (only 3.7%). The overall results of the study were affected by the high proportion of tests in which the concentration of DNA in the isolate was insufficient, necessitating that these patients be classified as ND. Key words: septins – Septin 9 – sensitivity – specificity – colorectal neoplasms

Úvod Kolorektální karcinom (CRC  –  colo­ rectal carcinoma) je jedna z  nejčas­ tějších onkologických dia­gnóz. V  ČR

300

Gastroent Hepatol 2016; 70(4): 300– 304

je tento nádor druhý nejčastěji dia­ gnostikovaný novotvar u mužů i u žen. V mezinárodním srovnání ČR zaujímá

páté místo. Z  tohoto důvodu stoupá význam screeningu CRC. V  současné době je využíván imunochemický test

První hodnocená Hereditárny zkušenost angioedém s testem Septin ako príčina 9 v České bolestí republice brucha

na okultní krvácení ve stolici (FIT –  fae­ cal im­munochemical test) a dále scree­ ningová kolonoskopie. Novou možností v dia­gnostice CRC je stanovení hypermetylace genu pro Septin 9  z  periferní krve. Cílem naší studie bylo posoudit senzitivitu a spe­ cificitu tohoto testu v dia­gnostice CRC v našich klinických podmínkách a z to­ hoto pohledu zvážit jeho možnosti ve screeningovém programu. Screenin­ gem rozumíme organizované, konti­ nuální a vyhodnocované úsilí o časný záchyt zhoubných nádorů tlustého střeva a konečníku u bezpříznakových osob. Již v asymp­tomatické fázi onemoc­ nění dochází k  intermitentnímu kr­ vácení. Tato skutečnost je využívána v základním pilíři screeningového vy­ šetření  –  testu na okultní krvácení. Screen­ing má v  ČR dlouhou tradici. Prvotní pilotní studie byly v  ČR pro­ vedeny v  letech 1979– 1 984  a  ná­ rodní program screeningu byl zahájen 1. 7. 2000 [1– 4]. Screeningové vyšetření je v ČR dvou­ stupňové. Provádí se pomocí testu na okultní krvácení do stolice (TOKS) u asymp­tomatické populace nad 50 let věku, a pokud je test pozitivní, násle­ duje kolonoskopické vyšetření. Vyšet­ ření TOKS se ve věku 50– 55 let provádí 1× ročně. Od 55 let se test provádí pra­ videlně ve dvouletém intervalu nebo je jeho alternativou provedení scree­ ningové kolonoskopie. Pokud je ko­ lonoskopie negativní a  jsou splněny všechny kvalitativní parametry vyšet­ ření (personální, technické, optimální příprava střeva, kompletní vyšetření tlustého střeva, vytahovací čas), pak je interval následné screeningové ko­ lonoskopie 10  let. V  lednu 2014  bylo spuštěno adresné zvaní cílové popu­ lace k preventivnímu vyšetření. Mezi další screeningové postupy uží­ vané ve světě patří také detekce gene­ tických markerů a ně­kte­ré zobrazovací metody  –  sigmoideoskopie, kolono­ skopie, irigografie a CT virtuální kolo­ nografie s použitím CT či MR [5].

V současné době nejsou žádná do­ poručení pro použití testu Septin 9 pro dia­gnostiku a screen­ing CRC. Test sta­ novuje metylovaný tumor supresorový gen mSEPT9 v plazmě. Gen SEPT9 kó­ duje protein Septin 9. Septiny jsou multifunkční proteiny, které jsou zapo­ jeny do buněčné přestavby, apoptózy, neurodegenerace a  karcinogeneze. Test Septin 9  je založen na detekci aberantně metylované DNA v  sek­ venci v2  pro gen SEPT9. Cytozinové zbytky v oblasti v2 pro gen SEPT9 jsou specificky metylovány ve tkáni CRC oproti zdravé sliznici tlustého střeva a konečníku. Tato specifická metylace může být zjišťována z  volné DNA v  plazmě, která je uvolňována nádo­ rovými buňkami. Pro běžnou popu­ laci v  běžném riziku má test podle předchozích studií senzitivitu 48  % a specificitu 92 % při stanovení v du­ bletu. Specificita pro pokročilé ade­ nomy byla jen 11,2 %. Studie ukázaly, že CRC může být u  asymp­tomatické populace testem detekován, ale není vhodný pro běžný screening, pro­ tože senzitivita pro adenomy je velice nízká [6– 8].

Design, cíle a metody Do pilotní studie Septin 9 na II. interní klinice FN Olomouc bylo zařazeno 108  pa­cientů indikovaných ke kolo­ noskopii. Téměř v 80 % byla kolonosko­ pie provedena pro symp­tomy. U všech osob byla odebrána krev na test Sep­ tin 9 a provedena totální kolonoskopie. Pa­cienti byli rozděleni do tří kategorií dle kolonoskopického nálezu  –  nega­ tivní nález, nález adenomu, nález kar­ cinomu. Cílem studie bylo posouzení proveditelnosti, senzitivity a specifity testu. Základní charakteristiky studo­ vaného souboru (pohlaví, věk, BMI, kuřáctví, alkohol  –  příležitostná kon­ zumace, diabetes mel­litus 2. typu, ro­ din­ná anamnéza –  adenom nebo CRC) jsou uvedeny v tab. 1. Pa­c ientům bylo odebíráno 9 ml krve do zkumavek Vacuette® Grei­ ner s  přídavkem K3EDTA. Po odběru

Tab. 1. Studovaný soubor a jeho základní charakteristiky (n = 108). Tab. 1. The series and its basic cha­ racteristics (n = 108). Věk Výška (m) Hmotnost (kg) BMI

70,0 (32–89) 1,68 (1,51–1,92) 80,5 (38–130) 28,5 (15,6–49,9)

Pohlaví muž/žena

53/55 (49/51 %)

Pozitivní koloskopie

62 (57,4 %)

Nález kolonoskopie negativní

46 (42,6 %)

adenom

41 (38,0 %)

karcinom

21 (19,4 %)

diabetes mellitus

50 (46,3 %)

Kouření nekuřák

68 (69,4 %)

kuřák

20 (20,4 %)

bývalý kuřák

10 (10,2 %)

Alkohol

43 (43,4 %)

Septin 9 pozitivní

10 (13,0 %)

Data v tabulce jsou prezentována jako počet (%), resp. medián (min.–max.).

byly vzorky ihned dopraveny do labo­ ratoře. Každá zkumavka byla centri­ fugována 12  min při 1  350  ±  150  rcf. Do alikvotační zkumavky byly přene­ seny min. 4 ml plazmy a následně byly vzorky uchovávány při – 20  °C až do analýzy.

Laboratorní metody Pro stanovení byly použity kity druhé generace, které vykazují vyšší senziti­ vitu (81 % při 95% CI 91– 99 %) a spe­ cificitu (97 % při 95% CI 72– 87 %). Mez detekce je 14 pg/ ml.

Izolace DNA a bisulfitická konverze vzorků plazmy Pro izolaci genomové DNA bylo pou­ žito 3,5 ml plazmy. Izolace byla prove­ dena ručně, na magnetických partiku­ lích, kitem Epi proColon Plasma Quick kit (kat. číslo M5-02-001, firma Epige­ nomics AG, Germany) dle protokolu vý­ robce. V izolátu DNA byla ihned usku­

Gastroent Hepatol 2016; 70(4): 300– 304

301

Hereditárny První hodnocená angioedém zkušenost akos testem príčina bolestí Septinbrucha 9 v České republice

tečněna bisulfitická konverze reagencií Epi proColon Bisulfite Solution, která je součástí kitu Epi proColon Plasma Quick kit. Konverze byla opět realizo­ vána dle protokolu. Elucí bylo získáno 60 ml bisulfiticky konvertované DNA (bisDNA). S  každou sérií vzorků byla zpracovávána i  pozitivní kontrola Epi proColon Positive Control z  kitu Epi proColon Control kit (kat. číslo M5-02-003, firma Epigenomics AG, Germany). BisDNA byla okamžitě použita pro analýzu polymerázové řetězové reakce (PCR –  polymerase chain reaction) a po analýze byla ihned zlikvidována.

Real-time PCR Pro Real-time PCR analýzu byl pou­ žit kit Epi proColon Sensitive PCR kit (kat. číslo M5-02-002, firma Epigeno­ mics AG, Germany). V  jedné analýze byla detekována současně cílová me­ tylovaná Septin 9 DNA a interní kont­ rola (DNA genu pro β-actin). Všechny vzorky i kontroly byly stanoveny v tri­ plikátu. PCR master mix byl připraven z Epi proColon PCR mixu a Epi proCo­ lon polymerázy dle protokolu. Objemy byly závislé na aktuálním počtu vzorků. Do PCR reakční směsi bylo použito 15 µl PCR master mixu a 15 µl vzorku bisDNA. Celkový objem reakční PCR směsi byl 30 µl. Real-time PCR analýza byla prove­ dena na přístroji Bio-Rad CFX 96 s ter­ málním cyklerem C1000  dle následu­ jícího protokolu  –  denaturace 20  min při 94 °C, 45 cyklů 5 s při 62 °C, 35 s při 55,5 °C, 30 s při 93 °C a finální zchlazení 5 s při 40 °C. Průměrný přírůstek teploty byl 3,3 °C/ s. Data byla získávána na konci každého kroku při 55,5 °C. Výsledky byly vyhodnoceny programem Bio-Rad CFX Manager. Celá analýza byla provedena dle optimalizovaného Epi proColon Real­ -time PCR protokolu pro analyzátory Applied Biosystems® 7500  Fast, nebo 7500 Fast Dx uvedeném v protokolu.

PCR analýza dat Jako „pozitivní test“ Septin 9 byly vy­ hodnoceny výsledky, kde nejméně

302

Gastroent Hepatol 2016; 70(4): 300– 304

Tab. 2. Test Septin 9 pro predikci pozitivního nálezu (adenom, karcinom, adenom nebo karcinom). Tab. 2. Septin 9 test to predict a positive finding (adenoma, carcinoma, adenoma or carcinoma). Adenom

Karcinom

Adenom nebo karcinom

senzitivita (%)

3,7 (0,09–18,9)

50,0 (23,0–76,9)

19,5 (8,8–34,9)

specificita (%)

94,4 (81,3–99,3)

94,4 (81,3–99,3)

94,4 (81,3–99,3)

FP (%)

5,6 (0,7–18,7)

5,6 (0,7–18,7)

5,6 (0,7–18,7)

FN (%)

96,3 (81,0–99,9)

50,0 (23,0–76,9)

80,5 (65,1–91,2)

FP – falešná pozitivita, FN – falešná negativita

dva ze tří vzorků triplikátu byly po­ zitivní. Pozitivita byla stanovena na základě cyklu, ve kterém narůsta­ jící fluorescence proťala stanove­ nou mez detekce, tzv. cros­s­ing point (CP). Ve všech případech pozitivity pa­cientských vzorků byly naměřené CP menší než CP pozitivní kontroly v  dané analýze. Jako „negativní test“ byly vyhodnoceny výsledky, v  nichž nejméně dva ze tří vzorků triplikátu byly negativní. V případě, že CP interní kontroly pro gen β-actin byl detekován po 36,5  cyklu, byla koncentrace DNA v  izolátu vyhodnocena jako nedosta­ tečná a výsledek byl dán jako „nezjiš­ těno (ND – not detected).

Statistická analýza dat Ke statistické analýze dat byl pou­ žit software IBM SPSS Statistics v. 22. K  porovnání pozitivity testu Septin 9 u jednotlivých nálezů byl použit Fishe­ rův přesný test s Bonfer­roniho korekcí signifikance.

Výsledky V souboru 108  pa­cientů bylo 41  pac­ ientů s adenomem, 21 pa­cientů s kar­ cinomem a  46  pa­cientů s  negativním nálezem. V kategorii pa­cientů s nega­ tivním kolonoskopickým nálezem byl Septin 9 u 34 osob negativní a u 2 osob pozitivní a u 10 osob nebyl nález hod­ nocen pro nízkou koncentraci DNA v izolátu (ND). V kategorii pa­cientů se zjištěným adenomem byl Septin 9 ve

26 případech negativní a v 1 pozitivní, ve 14 případech byl vyhodnocen jako ND. Ve skupině pa­cientů s karcinomem byl Septin 9  u sedmi osob negativní a u sedmi osob pozitivní, u zbývajících sedmi byl vyhodnocen jako ND. V naší studii byla zjištěna senzitivita testu Septin 9 pro predikci přítomnosti kar­ cinomu nebo adenomu 19,5 % a spe­ cificita 94,4  %. Výsledky zpracování poukazují na jistou míru falešné pozi­ tivity (5,6 %) a také falešné negativity (80,5 %). Senzitivita testu Septin 9 pro predikci karcinomu byla 50,0  %, spe­ cificita 94,4  %. Senzitivita testu Sep­ tin 9 pro predikci adenomu byla pouze 3,7 %, specificita 94,4 %. Výsledky vč. 95% CI shrnuje tab. 2. Pozitivita testu Septin 9  byla zjiš­ těna signifikantně častěji u karcinomů (50,0 %) než u adenomů (3,7 %) nebo negativních nálezů (5,6  %), hladina signifikance Fisherova přesného testu byla p = 0,003.

Souhrn výsledků studie Septin 9 Septin 9  jako test prokázal vysokou míru specificity (94,4  %). Největším zklamáním v testovaném souboru byla velmi nízká senzitivita testu Septin 9 u osob s adenomem –  jen 3,7 %. Velkou měrou se na celkových výsledcích naší studie podílejí testy, ve kterých byla koncentrace DNA v  izolátu vyhodno­ cena jako nedostatečná a výsledek byl stanoven jako ND. V naší studii se jedná celkem o 31 případů (v sedmi případech u  osob s  karcinomem, ve 14  u  osob

První hodnocená Hereditárny zkušenost angioedém s testem Septin ako príčina 9 v České bolestí republice brucha

s adenomem a v 10 u osob s negativ­ ním nálezem).

Diskuze Rakovina tlustého střeva a konečníku svými bio­logickými vlastnostmi dovo­ luje odhalení časných stadií, a tím mož­ nost onemocnění zcela vyléčit. Většinu negativních důsledků tohoto nádoro­ vého onemocnění lze významně ome­ zit depistáží [1– 4]. Metod využí­vaných ve screeningu CRC je řada. Ve světě jsou nejčastěji používány metody opí­ rající se o medicínu založenou na dů­ kazech. Mezi ověřené patří TOKS a kolonoskopie. Přes jisté limity vede stá­ vající screen­ing k  pozvolnému snižo­ vání nemocnosti i úmrtnosti na rako­ vinu kolorekta. Optimistické výsledky se po letech postupné kultivace scree­ ningu ukazují i v naší populaci. Organi­ zace depistáže, mediální kampaň, edu­ kace laické i  odborné části populace a v poslední době i adresné zvaní zvý­ šily zájem o český národní depistážní program, který má pozitivní odezvu v populaci. Přesto část cílové populace váhá podrobit se zavedeným meto­ dám screeningu. Poznatky molekulární bio­logie o  epigenetických faktorech v  karcinogenezi vedly k  odhalení vý­ znamu metylace úseků DNA s  ná­ sledným nevhodným umlčením genů, které, mimo jiné, plní úlohu nádoro­ vého supresoru. Tkáň nádorů rako­ viny kolorekta obsahuje hypermetylaci v  úseku v2  genu pro Septin 9  prak­ ticky ve všech testovaných vzorcích a v plazmě nositelů rakoviny kolorekta lze z cirkulující frakce DNA hyperme­ tylaci detekovat. V celé řadě studií bylo prokázáno, že hypermetylace v úseku v2  genu pro Septin 9 může být pou­ žita jako bio­marker pro detekci všech stadií CRC. Takový bio­marker lze pou­ žívat pro dia­gnostiku malignity, moni­ torování léčebného efektu nebo iden­ tifikaci recidivy tumoru  [7,8]. Práce Grützman­na et  al představila v  roce 2008 analýzu Septin 9 metylace DNA v  plazmě jako jednoduchou, mini­ málně invazivní metodu detekce všech

stadií CRC s možným potenciálem do­ plnit nenaplněná očekávání a potřeby stávajících depistáží [7]. Postupný po­ krok v  metodice vyšetřování tohoto bio­markeru vedl podle ně­kte­rých stu­ diích až k 90% senzitivitě a 88% speci­ ficitě pro všechna stadia onemocnění, falešná pozitivita testu byla 12 %. Pro časná, léčitelná stadia (I a II) test pro­ kázal 87% senzitivitu [8]. Na rozdíl od těchto optimistických výsledků sku­ pina z  Mayo clinic v  roce 2012  uve­ řejnila výsledky malé klinické studie, které poukazují na významně nižší sen­ zitivitu testu na metylovaný Septin 9 v  porovnání s  testem stolice na mar­ kery poškozené DNA při vyhledávání adenomů i CRC  [9]. Ve stejném roce publikovala maďarská skupina stu­ dii, jejíž výsledky ukazují na významně vyšší senzitivitu i specificitu testu Sep­ tin 9 v porovnání s gFOBT (guajakový test na okultní krvácení) a  CEA. Vý­ sledky byly lepší bez ohledu na loka­ lizaci CRC [10]. V americké modelové studii použití testu Septin 9 snížilo in­ cidenci o 35– 41 % a úmrtnost na CRC o  53– 61  % proti populaci bez scree­ ningu. Náklady na dosažení cíle byly vyšší v  porovnání s  TOKS, FIT, sig­ moideoskopií a  kolonoskopií. FIT do­ sáhl nejnižších nákladů a  byl pova­ žován za preferovanou alternativu v  porovnání se všemi ostatními stra­ tegiemi. Analýza uvádí, že na úrovni populace může být test Septin 9  pří­ nosem v případě přijatelné ceny a vý­ znamného zvýšení podílu vyšetřované populace o tu část, která neakceptuje ostatní depistážní strategie [11]. K po­ dobným závěrům dospěla modelová analýza stávajících screeningových po­ stupů v  porovnání s  testem Septin  9 v  Německu  [12]. Dalším impulzem pro studium klinického využití testu na metylovanou DNA pro Septin 9 z krve mohou být výsledky multicent­ rické, prospektivní studie srovnávající test FIT s novým testem na Septin 9 –  Epi proColon. V tomto srovnání z po­ hledu senzitivity (72 %) test Epi proCo­ lon nebyl horší než FIT, i když specificita

81,5  % byla nižší než u  FIT (97,4  %). Negativní prediktivní hodnota obou testů byla stejná (99,8  %)  [13]. Roz­ sáhlá studie na amerických a  němec­ kých pracovištích s použitím testu na bázi Septin 9  ukázala, že signál ra­ koviny tlustého střeva a  konečníku v  krvi může být detekován u  asymp­ tomatických osob s  průměrným rizi­ kem, podstupujících screening. Autoři současně uvádějí, že využitelnost testu na populační úrovni screeningu bude vyžadovat zvýšení citlivosti metody pro detekci časných nádorů a  pokro­ čilých adenomů [14]. Další zprávy do­ kumentují vývoj nových testů, u  kte­ rých je uváděna vyšší citlivost (až 92 %) a  specificita (až 90  %) pro komerčně připravené testy druhé generace Epi proColon 2.0  (výrobce Epigenomics AG) [15]. Tento test jsme použili v naší studii. Výzkumníci z  Číny aplikovali stejný test na téměř 500 pa­cientů. Re­ ferenční ověřovací metodou byla ve všech případech, podobně jako v naší práci, kolonoskopie. Výsledky studie z Číny jsou až překvapivé –  v případě testu Epi pro Colon 2.0 byla senziti­ vita pro karcinom 74,8 % při specificitě 87,4 % oproti 58,0 % senzitivity u testu FIT při specificitě 82,4 %. Test nové ge­ nerace Septin 9 ukázal lepší výsledky při detekci rakoviny než FIT, v  pří­ padě detekce pokročilého adenomu byly výsledky podobné [16]. Naše zá­ věry potvrzují ve shodě s čínskou stu­ dií vysokou specificitu, avšak na rozdíl od čínských autorů naše první zkuše­ nosti ukazují zhruba na poloviční sen­ zitivitu pro karcinom a nedostatečnou senzitivitu pro adenom. Z  metaana­ lýzy a systematického přehledu dosud publikovaných prací vyplývá, že zjišťo­ vání metylovaného genu pro Septin 9 lze považovat za velmi perspektivní bio­marker, vysoce citlivý a  specifický pro detekci CRC  [17]. Námi uváděné výsledky vlastní studie nejsou překva­ pením, ale jsou do jisté míry skeptické, neboť testy byly prováděny komerč­ ním setem Epi proColon druhé gene­ race pro Septin 9. Jistě jsou z pohledu

Gastroent Hepatol 2016; 70(4): 300– 304

303

Hereditárny První hodnocená angioedém zkušenost akos testem príčina bolestí Septinbrucha 9 v České republice

již uvedených zpráv marginální, nic­ méně jsou první klinickou zkušeností s tímto testem na malé kohortě české populace, kde je dobře zavedený a na bázi výsledků medicíny založené na dů­ kazech dobře organizovaný populační screen­ing CRC. Nejcen­nější v naší stu­ dii je zjištění, že výsledky nebyly roz­ dílné oproti publikovaným v ně­kte­rých předchozích zprávách z  jiných zemí a navíc ukazují na jistý problém s rela­ tivně vysokým podílem testů, kdy kon­ centrace DNA v izolátu byla vyhodno­ cena jako nedostatečná (ve 31 testech ze 108) a výsledek byl shledán jako ND. Využití testu Septin 9 je v ČR v rámci screeningu CRC v  současné době ve­ lice problematické, jak stran výsledků testů, tak také z  ekonomického hle­ diska. Imunochemický test na skryté krvácení i kolonoskopie jsou efektivní, levnější a dobře zavedené metody v or­ ganizovaném populačním screeningu opírajícím se o  medicínu založenou na důkazech. Přestože pro použití to­ hoto testu není dostatek důkazů, ně­ kte­ré zdravotní pojišťovny v ČR tento test nabízejí jako součást nadstandard­ ního preventivního balíčku, zřejmě ve snaze zachytit tu část cílové populace, která nereaguje na standardní varianty metod vyšetření regulérního a  le­ gislativně zakotveného populačního screeningu.

Závěr V pilotní studii jsme na vlastní kohortě poprvé v české populaci ověřovali mož­ nosti vyšetření testu Septin 9 provede­ ného komerčním kitem Epi proColon 2.0. Naše výsledky potvrdily proveditel­ nost testu a jeho vysokou specificitu pro CRC, ale nepotvrzují vysokou senziti­ vitu uváděnou v  předchozích studiích. V podobě, v jaké je test k dispozici, není podle našich výsledků vhodnou meto­ dou pro populační screen­ing a  záchyt adenomů. Nicméně považujeme jej za možný perspektivní bio­marker, jenž si zasluhuje další pozornost, vývoj, kulti­ vaci senzitivity a specificity testu a kli­ nický výzkum.

304

Gastroent Hepatol 2016; 70(4): 300– 304

Literatura

1. Kocna P, Vanickova Z, Zima T. Labora­ tory screen­ing markers in gastroenero­ logy –  state of the art. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub 2013; 157(2): 91– 97. doi: 10.5507/ bp.2013.027. 2. Fric P, Zavoral M, Dvorakova H et  al. An adapted program of colorectal cancer screening – 7  years experience and cost­ -benefit analysis. Hepatogastroenterology 1994; 41(5): 413– 416. 3. Zavoral M, Suchanek S, Majek O  et  al. Colorectal cancer screening: 20  years of development and recent progres­s. World J Gastroenterol 2014; 20(14): 3825– 3834. doi: 10.3748/ wjg.v20.i14.3825. 4. Suchanek S, Majek O, Vojtechova G et al. Colorectal cancer prevention in the Czech Re­ public: time trends in performance indicators and cur­rent situation after 10 years of screen­ ing. Eur J Cancer Prev 2014; 23(1): 18– 26. doi: 10.1097/ CEJ.0b013e328364f203. 5. Wohl P, Bednařík M, Wohl P et al. Com­ parison of various strategies for colorectal cancer screen­ing tests. Eur J Gastroente­ rol Hepatol 2011; 23(12): 1157– 1164. doi: 10.1097/ MEG.0b013e3283491438. 6. Fukushige S, Horii A. DNA methylation in cancer: a gene silenc­ing mechanism and the clinical potential of its bio­markers. To­ hoku J Exp Med 2013; 229(3): 173– 185. 7. Grützmann R, Molnar B, Pilarsky C et al. Sensitive detection of colorectal can­ cer in peripheral blood by Septin 9  DNA methy­lation as­say. PLoS One 2008; 3(11): e3759. doi: 10.1371/ journal.pone.0003759. 8. War­ren JD, Xiong W, Bunker AM. Septin 9 methylated DNA is a sensitive and specific blood test for colorectal cancer. BMC Med 2011; 9: 133. doi: 10.1186/ 1741-7015-9-133. 9. Ahlquist DA, Taylor WR, Mahoney DW et al. The stool DNA test is more accurate than the plasma Septin 9  test in detect­ ing colorectal neoplasia. Clin Gastroen­ terol Hepatol 2012; 10(3): 272– 277. doi: 10.1016/ j.cgh.2011.10.008. 10. Tóth K, Sipos F, Kalmár A et al. Detection of methylated SEPT9 in plasma is a reliable screen­ing method for both left- and right­ -sided colon cancers. PLoS One 2012; 7(9): e46000. doi: 10.1371/ journal.pone.0046000. 11. Ladabaum U, Al­len J, Wandell M et al. Co­ lorectal cancer screen­ing with blood-based bio­markers: cost-ef­f ectiveness of methy­ lated Septin 9 DNA versus cur­rent strate­ gies. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2013; 22(9): 1567– 1576. doi: 10.1158/ 10559965.EPI-13-0204. 12. Ladabaum U, Alvarez-Osorio L, Rosch T et al. Cost-ef­f ectiveness of colorectal can­ cer screen­ing in Germany: cur­rent endo­ scopic and fecal test­ing strategies ver­ sus plasma methylated Septin 9  DNA. Endosc Int Open 2013; 2(2): E96– E104. doi: 10.1055/ s-0034-1377182.

13. Johnson DA, Barclay RL, Mergener  K et  al. Plasma Septin9  versus fecal im­ munochemical test­ing for colorectal can­ cer screening: a  prospective multicenter study. PLos One 2014; 9(6): e98238.  doi: 10.1371/ journal.pone.0098238. 14. Church TR, Wandell M, Lofton-Day C et al. Prospective evaluation of methylated SEPT9 in plasma for detection of asymp­ tomatic colorectal cancer. Gut 2014; 63(2): 317– 325. doi: 10.1136/ gutjnl-2012-304 149. 15. Molnár B, Tóth K, Barták BK et  al. Plasma methylated septin 9: a  colorectal cancer screen­ing marker. Expert Rev Mol Dia­gn 2015; 15(2): 171– 184. doi: 10.1586/  14737159.2015.975212. 16. Jin P, Kang Q, Wang X et  al. Perfor­ mance of a  second-generation methyl­ ated SEPT9  test in detect­ing colorectal neoplasm. J Gastroenterol Hepatol 2015; 30(5): 830– 833. doi: 10.1111/ jgh.12855. 17. Li B, Gan A, Chen X et al. Performance of DNA hypermethylation markers in peri­ pheral blood for the detection of colorectal cancer: a meta-analysis and systematic re­ view. PLoS One 2016; 11(5): e0155095. doi: 10.1371/ journal.pone.0155095. Touto cestou bych rád poděkoval doc. MU Dr. V. Procházkovi za záštitu a výpomoc s celým projektem SEPTIN 9. Článek vznikl za podpory vnitřního grantu LF-IGA-2015-028.

Autoři deklarují, že v souvislosti s předmě­ tem studie nemají žádné komerční zájmy. The authors declare they have no poten­ tial conflicts of interest concerning drugs, products, or services used in the study. Redakční rada potvrzuje, že rukopis práce splnil ICMJE kritéria pro publikace zasílané do bio­­­­medicínských časopisů. The Editorial Board declares that the ma­ nuscript met the ICMJE „uniform require­ ments“ for bio­­­­medical papers.

Doručeno/ Submitted: 7. 7. 2016 Přijato/ Accepted: 8. 8. 2016 MU Dr. Pavel Sychra II. interní klinika –  gastroenterologická a hepatologická LF UP a FN Olomouc I. P. Pavlova 6 779 00 Olomouc [email protected]