PRODUKSI PROBIOTIK KOMBINASI Saccharomyces cerevisiae DAN MIKROBA RUMEN TERENKAPSULASI UNTUK DETOKSIFIKASI AFLATOKSIN DAN PENINGKATAN PERFORMA SAPI BALI
LILIS RIYANTI
SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2015
PERNYATAAN MENGENAI TESIS DAN SUMBER INFORMASI SERTA PELIMPAHAN HAK CIPTA Dengan ini saya menyatakan bahwa tesis berjudul Produksi Probiotik Kombinasi Saccharomyces cerevisiae dan Mikroba Rumen Terenkapsulasi untuk Detoksifikasi Aflatoksin dan Peningkatan Performa Sapi Bali adalah benar karya saya dengan arahan dari komisi pembimbing dan belum diajukan dalam bentuk apa pun kepada perguruan tinggi mana pun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir tesis ini. Dengan ini saya melimpahkan hak cipta dari karya tulis saya kepada Institut Pertanian Bogor.
Bogor, Desember 2015
Lilis Riyanti D251130041
RINGKASAN LILIS RIYANTI. Produksi Probiotik Kombinasi Saccharomyces cerevisiae dan Mikroba Rumen Terenkapsulasi untuk Detoksifikasi Aflatoksin dan Peningkatan Performa Sapi Bali. Dibimbing oleh SURYAHADI dan DWIERRA EVVYERNIE. Upaya peningkatan produktivitas dan kualitas ternak sapi pedaging masih terkendala pada permasalahan nutrisi. Suplementasi merupakan salah satu langkah strategis karena mampu mengatasi masalah defisiensi pakan dan meningkatkan kapasitas mencerna dari hewan melalui perbaikan metabolisme dan kemampuan mikroba rumen. Salah satu teknik suplementasi adalah dengan pemberian probiotik. Mikroba yang berpotensi sebagai probiotik adalah isolat MR4 yang merupakan bakteri rumen anaerob sehingga perlu dilakukan enkapsulasi pada saat pemberian dan penyimpanannya. Isolat MR4 ini akan dikombinasikan dengan Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae). Namun demikian kemampuan S. cerevisiae berbeda bergantung pada strain sehingga probiotik perlu diseleksi dan diuji agar diketahui manfaatnya pada ternak. Penelitian terdiri dari tiga percobaan. Percobaan 1 bertujuan menyeleksi tiga strain probiotik S. cerevisiae. Percobaan 2 bertujuan untuk mengevaluasi pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae dan isolat mikroba rumen (MR4) dan kombinasinya terhadap fermentabilitas dan populasi mikroba rumen secara in vitro. Percobaan ketiga bertujuan menguji efek suplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 terhadap palatabilitas dan konsumsi, kecernaan nutrien serta performa sapi Bali. Percobaan 1 dirancang dengan rancangan acak kelompok faktorial 4 x 5 dengan 3 ulangan. Faktor pertama adalah strain S. cerevisiae yang terdiri dari kontrol (tidak disuplementasi dengan S. cerevisiae) NBRC 10217, NRRL Y 567 and NRRL 12618, dan faktor kedua adalah waktu inkubasi yaitu 0, 1, 2, 3 dan 4 jam. Dosis S. cerevisiae yang ditambahkan adalah 5 x 1010 cfu kg-1 ransum. Ransum percobaan in vitro adalah rumput gajah dan konsentrat (TDN 73%, PK 13%) dengan rasio H : K = 60 : 40. Percobaan 2 dirancang dengan rancangan acak kelompok dengan 4 perlakuan, yaitu : P0 = ransum basal untuk sapi feedlot; P1 = P0 + S. cerevisiae; P2 = P0 + MR4 (dosis 5 x 107 cfu kg-1 ransum); dan P3 = P0 + S. cerevisiae dan MR4. Percobaan 3 dirancang dengan rancangan acak kelompok 2 perlakuan dan 8 kelompok sebagai ulangan. Perlakuan terdiri dari : P0= ransum kontrol dan P1 = P0 + probiotik kombinasi S. cerevisiae dan MR4. Dosis probiotik S. cerevisiae yang ditambahkan adalah 2 x 1011 cfu hari-1 dan dosis MR4 adalah 2 x 108 cfu hari-1. Suplementasi S. cerevisiae NRRL 12618 memiliki laju pertumbuhan S. cerevisiae tertinggi (3.3 % jam-1) dan mampu meningkatkan populasi mikroba rumen. Strain S. cerevisiae NRRL 12618 terpilih sebagai probiotik yeast untuk digunakan pada percobaan 2. Hasil percobaan 2 menunjukkan perlakuan suplementasi probiotik tidak mempengaruhi pH rumen yang menunjukkan pH rumen stabil sehingga mampu meningkatkan populasi bakteri rumen (P<0.05) dan meningkatkan konsentrasi NH3 dalam rumen (P<0.05) serta menurunkan populasi protozoa rumen (P<0.05). Perlakuan suplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 mampu meningkatkan konsentrasi volatile fatty acid (VFA) total dan konsentrasi isovalerat (P<0.05). Perlakuan suplementasi kombinasi S. cerevisiae dan MR4
mampu menurunkan konsentratsi aflatoksin B1 (AFB1). Perlakuan kombinasi S. cerevisiae dan MR4 terpilih sebagai perlakuan terbaik untuk diuji pada percobaan 3. Hasil percobaan 3 menunjukkan suplementasi probiotik belum mampu meningkatkan konsumsi BK dan BO ransum. Kecernaan nutrien, TDN, DE dan ME masih menunjukkan hasil yang sama. Suplementasi probiotik memiliki rataan pertambahan bobot badan harian (PBBH) yang tinggi sebesar 440 g ekor-1 hari-1 dibanding perlakuan kontrol sebesar 330 g ekor-1 hari-1. Hal ini menunjukkan pada perlakuan yang disuplementasi probiotik lebih banyak nutrien yang diretensi dalam tubuh dibanding kontrol. Strain S. cerevisiae NRRL 12618 memiliki potensi untuk digunakan sebagai probiotik yeast. Suplementasi dengan strain ini mampu meningkatkan fermentabilitas dan kandungan isoacid dalam rumen serta menurunkan rasio A:P. Kemampuan ini dapat ditingkatkan jika S. cerevisiae dikombinasikan dengan isolat MR4. Suplementasi probiotik kombinasi S. cerevisiae dan MR4 belum mampu meningkatkan konsumsi pakan, PBBH, laju pertumbuhan dan efisiensi pakan sapi Bali. Kata kunci : karakteristik fermentasi, mikroba rumen, probiotik, Saccharomyces cerevisiae, sapi Bali.
SUMMARY LILIS RIYANTI. Production of Saccharomyces cerevisiae and Encapsulated Rumen Microbe Probiotics for Aflatoxin Detoxification and Improving Bali Cattle Performance. Supervised by SURYAHADI and DWIERRA EVVYERNIE. The effort improved productivity and quality beef cattle still constrained on nutrition problem. Supplementation is method that can through feed deficiency. Supplementation with probiotic was aimed to increase the capacity of animal digestion. One of supplementation method was probiotics supplementation. MR4 isolate potential as probiotic for ruminant that have ability to binding aflatoxin in rumen. Encapsulation MR4 was obtained for extending their storage life and converting them into powder form for ease of their use. MR4 probiotic combine with Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae). Both of them define as probiotics could be sellected to examine the purpose for animal. This study consist of three experiments. Experiment 1 was conducted with the aim of selecting of three different strain of probiotic S. cerevisiae. Experiment 2 was designed to evaluate the effect of probiotic supplementation contain S. cerevisiae, rumen bacteria isolate (MR4) and their combination on rumen fermentability, rumen microbial and aflatoxin detoxification in vitro. Experiment 3 was design to examine the effect of probiotic supplementation on intake, digestibility and performance of Bali cattle in vivo. Experiment 1 were designed in factorial randomized block design 4 x 5 and 3 replications. The first factor was S. cerevisiae strain consist of control treatment (without S. cerevisiae supplementation), NBRC 10217, NRRL Y 567 and NRRL 12618, and the second factor was incubation time consist of 0, 1, 2, 3 and 4 hours. The ration consist of roughage and concentrate (TDN 73% and CP 13%) with ratio (60 : 40). Dosage of each treatment with S. cerevisiae was 5 x 1010 cfu kg-1 ration. Experiment 2 were evaluated in randomized block design with 4 treatments : P0 = basal ration of feedlot; P1 = P0 + S. cerevisiae; P2 = P0 + MR4 isolate (5 x 107 cfu kg-1 ration); P3 = P0 + S. cerevisiae and MR4. Experiment 3 were evaluated in randomized block design with 2 treatments : P0 = control ration and P1 = P0 + probiotic S. cerevisiae and MR4. Dossage of S. cerevisiae was 2 x 1011 cfu day-1 and dossage of MR4 was 2 x 108 cfu day-1. Supplementation of S. cerevisiae NRRL 12618 showed the highest growth rate based on S. cerevisiae population in rumen fluid (3.3% hour-1) and tended to increased population of rumen microbes. This strain was selected as probiotic in experiment 2. The result from experiment 2 showed probiotic supplementation stabilize rumen pH and affected the highest NH3 concentration (P<0.05) and bacteria population (P<0.05). As compared with control, all treatment reduced protozoa population (P<0.05). Combination of S. cerevisiae and MR4 produced the highest total volatile fatty acid (VFA), increased isovalerat concentration (P<0.05) and decreased aflatoxin B1 in rumen fluid. Combination of S. cerevisiae and MR4 probiotics was choosen as probiotic for experiment 3. The result of experiment 3 showed that probiotics was not significant in DMI and OMI. Probiotic supplementation not affected nutrient digestibility, TDN, DE and ME. Probiotic supplementation did not increase average daily gain, growth rate and feed eficiency. There was tendency increased of average daily gain with mean
(440 g head-1 day-1) compare control treatment with mean 330 g head-1 day-1. It was concluded that strain S. cerevisiae NRRL 12618 had potential as probiotic yeast. Supplementation with this strain increased fermentability, rumen isoacid and decreased A:P ratio. Those ability could be improved with MR4 probiotic. Probiotic supplementation (S. cerevisiae and MR4) could not increased average daily gain, growth rate and feed eficiency of Bali cattle. Keywords : aflatoxin B1, Bali cattle, probiotic, rumen fermentability, rumen microbe, Saccharomyces cerevisiae.
Hak Cipta Milik IPB, Tahun 2015 Hak Cipta Dilindungi Undang-Undang Dilarang mengutip sebagian atau seluruh karya tulis ini tanpa mencantumkan atau menyebutkan sumbernya. Pengutipan hanya untuk kepentingan pendidikan, penelitian, penulisan karya ilmiah, penyusunan laporan, penulisan kritik, atau tinjauan suatu masalah; dan pengutipan tersebut tidak merugikan kepentingan IPB Dilarang mengumumkan dan memperbanyak sebagian atau seluruh karya tulis ini dalam bentuk apa pun tanpa izin IPB
PRODUKSI PROBIOTIK KOMBINASI Saccharomyces cerevisiae DAN MIKROBA RUMEN TERENKAPSULASI UNTUK DETOKSIFIKASI AFLATOKSIN DAN PENINGKATAN PERFORMA SAPI BALI
LILIS RIYANTI
Tesis Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister Sains pada Program Studi Ilmu Nutrisi dan Pakan
SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2015
Penguji Luar Komisi pada Ujian Tesis: Prof. Dr. Ir. Komang G. Wiryawan
Judul Tesis
Nama NIM
: Produksi Probiotik Kombinasi Saccharomyces cerevisiae dan Mikroba Rumen Terenkapsulasi untuk Detoksifikasi Aflatoksin dan Peningkatan Performa Sapi Bali : Lilis Riyanti : D251130041
Disetujui oleh Komisi Pembimbing
Dr Ir Suryahadi, DEA Ketua
Dr Ir Dwierra Evvyernie A, MS MSc Anggota
Diketahui oleh
Ketua Program studi Ilmu Nutrisi dan Pakan
Dekan Sekolah Pascasarjana
Dr Ir Dwierra Evvyernie A, MS MSc
Dr Ir Dahrul Syah, MscAgr
Tanggal Ujian: 23 Nopember 2015
Tanggal Lulus:
PRAKATA Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah subhanahu wa ta’ala atas segala karunia-Nya sehingga karya ilmiah ini dapat diselesaikan. Tema yang dipilih dalam penelitian yang dilaksanakan sejak bulan September 2014 sampai Agustus 2015 ini adalah ketahanan pangan, dengan judul Produksi Probiotik Kombinasi Saccharomyces cerevisiae dan Mikroba Rumen Terenkapsulasi untuk Detoksifikasi Aflatoksin dan Peningkatan Performa Sapi Bali. Sebagian hasil penelitian ini dipublikasikan di jurnal ilmiah Media Peternakan dengan judul In vitro Fermentation Characteristics and Rumen Microbial Population Supplemented with Saccharomyces cerevisiae and Rumen Microbe Probiotics. Terima kasih penulis ucapkan kepada Dr. Ir. Suryahadi, DEA dan Dr. Ir. Dwierra Evvyernie A, MS. MSc. selaku dosen pembimbing yang telah banyak memberi arahan, bimbingan, saran serta motivasi sehingga penelitian dan tesis ini dapat diselesaikan. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Dr. Ir. Suryahadi, DEA atas bantuan finansialnya melalui dana Hibah BOPTN IPB tahun 2015. Tidak lupa penulis sampaikan terima kasih kepada Prof. Dr. Ir. Komang G. Wiryawan sebagai komisi penguji luar komisi dan Prof. Dr. Ir. Yuli Retnani, MSc atas saran-sarannya untuk perbaikan penulisan tesis ini. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Ibunda, Ayahanda, dan Kakak atas segala doa, kasih sayang, dan dukungan yang selalu memotivasi penulis selama menuntut ilmu. Terima kasih kepada Bu Adriyani, Bu Dian, Saprilian Stya Hapsari, S.Pt, Dea Justia Nurjana, S.Pt, Ide Risentito, S.Pt dan Apdila Safitri, S.Pt yang telah banyak memberikan bantuan dan semangat selama penelitian serta pengurus administrasi Sekretariat Pascasarjana INP (Mas Supri dan Bu Ade). Terima kasih pula penulis ucapkan kepada Pak Simin, Ade, Ponco dkk di CV Anugrah Farm yang telah membantu pelaksanaan penelitian di lapang. Terima kasih atas bantuan semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu. Semoga karya ilmiah ini bermanfaat. Bogor, Desember 2015 Lilis Riyanti D251130041
DAFTAR ISI DAFTAR TABEL
xv
DAFTAR GAMBAR
xv
DAFTAR LAMPIRAN
xv
1 PENDAHULUAN
1
Latar Belakang Tujuan
1 2
2 METODE Waktu dan Tempat Penelitian Materi Metode Rancangan Percobaan Analisis Data 3 HASIL DAN PEMBAHASAN Seleksi Saccharomyces cerevisiae sebagai Probiotik secara in vitro Efek Suplementasi Saccharomyces cerevisiae dan MR4 terhadap Fermentabilitas, Populasi Mikroba dan Detoksifikasi Aflatoksin Efek Pemberian Kombinasi Probiotik Saccharomyces cerevisiae dan MR4 terhadap Kecernaan dan Performa Sapi Bali
2 2 3 4 10 10 11 11 12 16
4 PEMBAHASAN UMUM
19
5 SIMPULAN DAN SARAN
21
Simpulan Saran
21 21
DAFTAR PUSTAKA
22
LAMPIRAN
26
RIWAYAT HIDUP
36
DAFTAR TABEL 1 2 3 4
5 6 7 8 9
Komposisi dan kandungan nutrien ransum percobaan in vitro Kandungan nutrien Hi~fer dan konsentrat percobaan in vivo Jadwal pemberian pakan di peternakan CV Anugrah Farm Karakteristik fermentasi dan populasi mikroba rumen secara in vitro dari ransum sapi pedaging yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 Konsentrasi VFA total dan parsial secara in vitro dari ransum sapi pedaging yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 Konsentrasi AFB1 secara in vitro dari ransum sapi pedaging yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 Konsumsi pakan dan nutrien sapi Bali yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 Kecernaan nutrien ransum sapi Bali yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 Pertambahan bobot badan dan efisiensi pakan sapi Bali yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4
3 4 9 13
14 15 16 17 18
DAFTAR GAMBAR 1 2
Pertumbuhan tiga strain S. cerevisiae dalam cairan rumen Pengaruh penambahan probiotik S. cerevisiae terhadap pertumbuhan bakteri rumen total
11 12
DAFTAR LAMPIRAN 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Uji ANOVA suplementasi S. cerevisiae terhadap populasi S. cerevisiae dalam rumen Uji ANOVA pengaruh suplementasi S. cerevisiae terhadap populasi bakteri rumen total Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap pH rumen Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi NH3 rumen Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi VFA total dalam rumen Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi asetat dalam rumen Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi propionat dalam rumen Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi butirat dalam rumen Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi isobutirat dalam rumen
26 26 26 7 27 27 27 28 28
10 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi valerat dalam rumen 11 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi isovalerat dalam rumen 12 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap rasio asetat/propionat dalam rumen 13 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap populasi bakteri rumen total 14 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap populasi protozoa rumen 15 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi Hi~fer 16 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi konsentrat 17 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi BK 18 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi BK metabolis 19 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi abu 20 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi BO 21 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi BO metabolis 22 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi PK 23 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi LK 24 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi SK 25 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi BETN 26 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan BK 27 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan abu 28 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan BO 29 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan PK 30 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan LK 31 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan SK 32 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan BETN 33 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap TDN 34 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap DE 35 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap ME 36 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap bobot badan awal 37 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap PBBH 38 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap bobot badan akhir 39 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap laju pertumbuhan 40 Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap efisiensi pakan
28 28 29 29 29 29 30 30 30 30 31 31 31 31 32 32 32 32 33 33 33 33 34 34 34 34 34 35 35 35 35
1
1 PENDAHULUAN Latar Belakang Upaya peningkatan produktivitas dan kualitas ternak sapi pedaging masih terkendala pada permasalahan nutrisi. Permasahan nutrisi ternak di Indonesia pada umumnya antara lain : (1) Mutu nutrisi pakan yang rendah, baik ditinjau dari kadar zat-zat makanan maupun kecernaannya, (2) Ketersediaan bahan pakan yang sangat fluktuatif sehingga tidak menjamin kesinambungan produksi ternak, dan (3) Sistem produksi pakan belum selaras dengan pola ketersediaan pakan sehingga terjadinya kekurangan pakan di beberapa daerah. Semua permasalahan ini akan berdampak pada status nutrisi ternak yang defisien dan berdaya produksi rendah. Kejadian diatas diperburuk dengan adanya cemaran aflatoksin pada bahan baku pakan untuk konsentrat. Aflatoksin dapat mencemari bahan pakan yang jika dikonsumsi ternak akan menyebabkan ganggunan kesehatan ternak seperti penurunan produksi dan meningkatkan mortalitas. Aflatoksin merupakan kelompok mikotoksin yang bersifat mutagenik, karsinogenik dan immunosupresif (Eaton dan Gallagher 1994) yang diproduksi Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus dan Aspergillus nomius (Kusumaningtyas et al. 2006). Komponen yang paling beracun adalah aflatoksin B1 (AFB1) (Hua et al. 1999). Jika AFB1 dan AFB2 mengkontaminasi bahan pakan yang dikonsumsi ternak maka didalam tubuh ternak dimetabolis menjadi AFM1 dan AFM2 dan diekskresikan pada jaringan, cairan biologis, dan susu pada ternak laktasi (Masoero 2007). Kadar aflatoksin maksimal dalam bahan pakan maupun konsentrat sapi pedaging adalah 200 µg kg-1 (SNI 2009). Suplementasi dipandang sebagai langkah yang strategis karena selain dapat mengatasi masalah defisiensi juga mampu meningkatkan kapasitas mencerna dari hewan, dengan adanya perbaikan metabolisme dan kemampuan mikroba rumen. Salah satu teknik suplementasi adalah dengan pemberian probiotik. Probiotik adalah bakteri hidup yang diberikan sebagai suplemen makanan yang mempunyai pengaruh menguntungkan bagi kesehatan baik pada manusia maupun hewan, dengan memperbaiki keseimbangan mikroflora intestinal (Gibson dan Roberfroid 1995). Salah satu cara untuk dapat meningkatkan efektivitas probiotik adalah meningkatkan daya simpan, sehingga penggunaan mikroenkapsulasi merupakan teknologi alternatif yang dapat diterapkan. Mikroenkapsulasi merupakan proses membungkus (coating) suatu bahan inti, dalam hal ini adalah bakteri probiotik yang digunakan sebagai bahan inti dan diperangkap dengan bahan enkapsulasi tertentu, yang memiliki manfaat untuk melindungi dan mempertahankan probiotik dari pengaruh kondisi lingkungan yang tidak menguntungkan (Wu et al. 2000). Pemberian probiotik selain sebagai suplementasi juga dilakukan untuk detoksifikasi aflatoksin. Beberapa strategi detoksifikasi atau inaktivasi aflatoksin pada bahan pakan dilakukan dengan metode pemisahan fisik, inaktivasi termal, iradiasi, kimia dan biologis. Upadhaya et al. (2010) melaporkan bahwa biotransformasi, pembelahan dan detoksifikasi dari molekul mikotoksin oleh mikroba ataupun enzim adalah sebuah metode yang efektif dan lebih aman dalam mengontrol mikotoksin termasuk aflatoksin. Isolat mikroba rumen (MR4) merupakan probiotik mikroba rumen anaerobik (Suryahadi et al. 2012) yang memiliki kemampuan mendegradasi aflatoksin di dalam rumen lebih dari 55% jam-1. Probiotik mikroba rumen dipilih karena: (1) mampu mendegradasi
2
aflatoksin dalam rumen (Suryahadi et al. 2012), (2) mampu mengikat aflatoksin sehingga mengurangi penyerapannya dalam rumen dan usus halus, dan (3) mampu mendorong pertumbuhan mikroba yang baik dalam saluran pencernaan sehingga mampu meningkatkan kecernaan zat-zat makanan dan juga produksi ternak (Suryahadi dan Tjakradidjaja 2012). Hasil penelitian Suryahadi et al. (2013) menunjukkan bahwa probiotik MR4 dan bakteria asam laktat (BAL) secara terpisah memberikan dampak positif pada penurunan aflatoksin di rumen maupun susu, namun bila dikombinasikan belum memberikan manfaat yang sinergis. Kegiatan penelitian lebih lanjut yang dapat dikembangkan adalah teknologi kombinasi probiotik dari berbagai sumber salah satunya Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae). S. cerevisiae merupakan probiotik yeast aerob yang potensial digunakan sebagai probiotik untuk ruminansia. Beberapa alasan penggunaan S. cerevisiae diantaranya : (1) S. cerevisiae memiliki kemampuan mereduksi O2 dalam rumen sehingga aktivitas mikroba rumen meningkat (Seo et al. 2010), (2) S. cerevisiae dapat memperpendek terjadinya asidosis sehingga dapat mencegah terjadinya asidosis terutama pada sapi pedaging dengan pemberian konsentrat berlebih (Pantaya et al. 2014), (3) S. cerevisiae mengandung glukomanan pada dinding selnya yang dapat mengikat molekul berbeda seperti toksin dan ion metal dengan struktur ikatan kompleks. Beberapa hasil penelitian melaporkan penghilangan mikotoksin ini dengan cara adhesi komponen dinding sel (Santin et al. 2003). Penelitian ini menyeleksi 3 strain S. cerevisiae yang akan digunakan sebagai probiotik yeast, kemudian mengkombinasikannya dengan isolat MR4 untuk diuji secara in vitro dan in vivo. Tujuan 1. Menyeleksi kultur S. cerevisiae terbaik sebagai probiotik yeast dalam pemberian pakan sapi pedaging. 2. Menguji efek suplementasi probiotik S. cerevisiae, MR4 dan kombinasinya terhadap fermentabilitas, populasi mikroba rumen dan detoksifikasi aflatoksin. 3. Menguji efek kombinasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 terhadap konsumsi, kecernaan dan performa sapi pedaging.
2 METODE Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian dilaksanakan pada bulan Oktober 2014 sampai Agustus 2015. Pembuatan probiotik S. cerevisiae dan enkapsulasi isolat MR4 dilaksanakan di Laboratorium Biokimia, Fisiologi, dan Mikrobiologi Nutrisi. Analisa in vitro dilaksanakan di Laboratorium Nutrisi Ternak Perah, Departemen Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan, Fakultas Peternakan, IPB. Analisa kandungan nutrien pakan dan feses di Laboratorium Pusat Penelitian Sumberdaya Hayati dan Bioteknologi, IPB. Analisa proporsi molar VFA di Laboratorium Pusat Studi Pangan dan Gizi, Universitas Gajah Mada. Analisa aflatoksin B1 di Laboratorium Kesehatan Daerah Jakarta. Percobaan pemberian pakan dilakukan di CV Anugrah Farm, Desa Tegal Waru, Kecamatan Ciampea, Kabupaten Bogor.
3
Materi Alat Peralatan yang digunakan antara lain timbangan digital, inkubator, cawan petri, tabung hungate, tabung reaksi, autoclave, botol schott, vortex, magnetic stirer, freezer, shaker water bath, erlenmeyer, oven 60C, oven 105C, tabung fermentor, sentrifuse, pH meter, roller tube, tabung eppendorf, cawan conway, buret, counting chamber, mikroskop cahaya, Gas Chromatography, High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Peralatan kandang yang digunakan antara lain kandang yang dilengkapi bak pakan dan bak minum, kandang jepit, timbangan digital, timbangan pakan, ember, dan sekop. Bahan Kultur Probiotik dan Media Pertumbuhan Mikroba Tiga strain S. cerevisiae yaitu strain S. cerevisiae NBRC 10217 yang diperoleh dari Laboratorium Bioteknologi LIPI , S. cerevisiae NRRL Y. 567 dan S. cerevisiae NRRL 12618 yang diperoleh dari IPB Culture Collection, isolat mikroba rumen anaerobik (MR4). Media pertumbuhan S. cerevisiae adalah Potato Dextrose Agar (PDA), Potato Dextrose Broth (PDB), dan tepung beras. Media pertumbuhan isolat MR4 adalah Brain Heart Infussion (BHI), glukosa, selebiosa, cystein HCl, bacto agar, resazurin dan hemin. Tabel 1 Komposisi dan kandungan nutrien ransum percobaan in vitro Bahan Pakan Jumlah Rasio H : K 60 : 40 Konsentrat Onggok (%) 30 Jagung (%) 17 Dedak padi (%) 28 Bungkil kelapa sawit (%) 12 Bungkil kacang (%) 10 Garam (%) 1 CaCO3 (%) 1.5 Buffer mineral (%) 0.5 Komposisi nutrien* Bahan kering (%) 91.48 Abu (% BK) 9.84 Protein Kasar (% BK) 10.00 Lemak Kasar (% BK) 3.00 Serat Kasar (% BK) 31.54 BETN (% BK) 45.62 Keterangan: Ransum disusun berdasarkan Lalman (2001) pada sapi pedaging dengan BB = 346.5 kg, dan PBBH 1 kg ekor-1 hari-1. *Analisa proksimat Pusat Penelitian Sumberdaya Hayati & Bioteknologi. Bogor (2015)
4
Bahan Kimia Bahan-bahan enkapsulasi isolat MR4 diantaranya Na-alginat, minyak canola, CaCl2, pati/starch, lecithin, gliserol 5%, dan larutan saline (NaCl). Bahanbahan lain diantaranya larutan McDougall, asam borat berindikator, H2SO4 0.005 N, Na2CO3, triphan blue formaline saline (TBFS), carboxy methil cellulose (CMC), gas CO2, larutan formaline 4%. Ternak dan Pakan Komposisi dan kandungan kimia ransum pada percobaan in vitro ditunjukkan pada Tabel 1. Ransum terdiri dari 60% hijauan (rumput gajah) dan 40% konsentrat dengan TDN 73% dan PK 13%. Konsentrat terdiri dari campuran onggok, jagung, dedak padi, bungkil kelapa sawit, bungkil kacang tanah, CaCO3, garam, dan buffer mineral (Ca 15%, P 11%, Cl 12%, Na 8%, Mg 1.7%, Fe 250 ppm, Mn 138 ppm, Cu 100 ppm, Zn 65 ppm, I 15 ppm, Co 2 ppm, vitamin A 80000 IU kg-1, vitamin D 25000 IU kg-1 and vitamin E 1000 IU kg-1). Standar kebutuhan nutrien yang digunakan berdasarkan dengan kebutuhan nutrien sapi potong periode penggemukan menurut Lalman (2001). Sumber cairan rumen berasal dari sapi Peranakan Ongole berfistula yang diambil di Laboratorium Lapang Pusat Penelitian Bioteknologi Peternakan, LIPI Cibinong, Kabupaten Bogor. Percobaan pemberian makanan (feeding trial) menggunakan 16 ekor sapi Bali dengan rataan bobot badan awal 194.25±18.94 kg. Pakan yang diberikan adalah hijauan fermentasi (Hi~fer) dan konsentrat. Kandungan nutrien Hi~fer dan konsentrat ditunjukkan pada Tabel 2. Bahan lain diantaranya obat cacing Flukicide 12.5%. Tabel 2 Komposisi kimia Hi~fer dan konsentrat pada percobaan feeding trial Abu
PK
LK
SK
BETN
TDN*
Pakan
BK (%)
Hi~fer
21.39
11.85
8.01
1.61
26.35
52.18
51.58
Konsentrat 85.76
11.95
8.67
3.38
12.34
63.65
67.28
---------------------------%BK-----------------------
%
Keterangan : Hasil analisa proksimat Pusat Penelitian Sumberdaya Hayati & Bioteknologi. Bogor (2015). Perhitungan TDN dengan rumus (Hartadi 1980). TDN = 92.464 – (3.338 x SK) – (6.945 x LK) – (0.762 x BETN) + (1.115 x PK) + (0.031 x SK 2) – (0.133 x LK2) + (0.036 x SK x BETN) + (0.207 x LK x BETN) + (0.1 x LK x PK) – (0.022 x LK x PK)
Metode Pembuatan Probiotik Saccharomyces cerevisiae Tiga strain S. cerevisiae yang digunakan adalah S. cerevisiae NBRC 10217, S. cerevisiae NRRL Y. 567 dan S. cerevisiae NRRL 12618. Perbanyakan stok cair S. cerevisiae menggunakan media PDB. Sebanyak 1.2 g PDB dilarutkan dalam 50 ml air destilasi dan dipanaskan dengan hot plate. Sebanyak 10 ml media PDB dimasukkan dalam tabung reaksi dan disumbat dengan sumbat kapas dan diautoclave. Tabung PDB yang sudah dingin ditambahkan 2 ujung jarum ose dari stok S. cerevisiae dan dihomogenkan dengan vortex. Tabung ditutup dengan tutup karet dan diisolasi panfix kemudian diinkubasi selama 48 jam pada inkubator atau pada suhu ruangan. S. cerevisiae yang tumbuh ditandai dengan adanya kekeruhan pada media PDB.
5
Setelah diperbanyak dalam media cair, kultur S. cerevisiae dicampurkan dengan tepung beras sebagai carrier. Tepung beras disangrai untuk mengurangi kandungan air yang ada di bahan. Kultur murni S. cerevisiae yang sudah ditumbuhkan dalam media PDB ditambahkan dengan perbandingan 20 g tepung beras untuk 5 ml kultur murni S. cerevisiae. Campuran diaduk sampai homogen dan diinkubasi pada suhu 30C atau suhu kamar selama 24 jam. Tepung S. cerevisiae dihitung populasinya menggunakan metode total plate count (TPC) (Fardiaz 1992). Pembuatan Probiotik MR4 Terenkapsulasi (Modifikasi Krasaekoopt et al. 2003) Bahan-bahan yang digunakan untuk membuat media pertumbuhan isolat MR4 antara lain : BHI 3.7 g, glukosa 0.1 g, selebiosa 0.1 g, pati (starch) 0.1 g, cystein-HCl 0.1 g, hemin 0.5 ml, resazurin 0.05 ml dan ditambahkan aquadest sampai 100 ml. Campuran media dipanaskan sampai homogen dan dialiri CO2 sampai terjadi perubahan warna dari kuning menjadi merah dan berubah kembali menjadi kuning bening. Setelah dingin, ditambahkan cystein-HCl sambil dialiri CO2 agar tetap dalam keadaan anaerob. Kemudian, disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121oC selama 15 menit. Kultur isolat MR4 diinokulasikan pada media BHI sebanyak 0.1% setelah itu diinkubasi selama 24 jam. Kultur ini digunakan untuk enkapsulasi. Sebanyak 100 ml larutan Na-alginat 2% ditambahkan dengan larutan pati 2% sebanyak 100 ml. Larutan diatas dicampurkan dengan 200 ml kultur mikroba rumen sambil dialiri CO2. Setelah itu ditambahkan 200 ml canola oil yang mengandung lecitin 0.2 ml dan dihomogenkan dengan magnetic stirrer selama 20 menit. CaCl2 0.1 M 200 ml ditambahkan secara perlahan melalui dinding Erlenmeyer dan didiamkan selama 30 menit. Minyak dan air dipisahkan dengan labu seperator. Proses pemisahan ini dilakukan pada laminar air flow untuk mencegah kontaminasi dari lingkungan. Hasil enkapsulasi dicuci dengan 0.9% larutan saline yang mengandung 5% gliserol dan ditambahkan susu skim. Setelah itu dilakukan perhitungan populasi mikroba sesuai metode Ogimoto dan Imai (1981). Percobaan 1. Seleksi Saccharomyces cerevisiae sebagai Probiotik Yeast in vitro Percobaan ini bertujuan menyeleksi beberapa strain S. cerevisiae sebagai probiotik yeast terbaik. Seleksi probiotik berdasarkan pada S. cerevisiae yang pertumbuhannya paling baik dalam media cairan rumen dan mampu merangsang pertumbuhan bakteri rumen. Inkubasi in vitro menurut metode Tilley dan Terry (1963). Tabung fermentor yang telah diisi dengan 500 mg sampel ransum (60% hijauan dan 40% konsentrat). Ditambahkan 10 ml cairan rumen dan 40 ml larutan Mc Dougall. Dosis S. cerevisiae yang ditambahkan adalah 5 x 1010 cfu kg-1 ransum. Cairan rumen diambil pada pagi hari dari sapi Peranakan Ongole berfistula setelah 3 jam pemberian pakan kemudian disaring dengan kain kasa. Tabung fermentor dialiri gas CO2 selama 30 detik (pH 6.5-6.9) dan ditutup dengan karet berventilasi. Tabung diinkubasi ke dalam shaker water bath pada suhu 39 oC. Pada jam ke 0, 1, 2, 3 dan 4 diambil filtrat sebanyak 5 ml untuk analisis populasi S. cerevisiae dan 0.5 ml untuk analisis bakteri rumen total. Peubah yang diukur pada percobaan 1 antara lain : populasi S. cerevisiae dengan
6
menggunakan metode total plate count (Fardiaz 1992), laju pertumbuhan S. cerevisiae (Pt= Po.ekt, dengan Pt adalah populasi pada jam ke-t, Po adalah populasi pada jam ke-0, k adalah konstanta laju pertumbuhan dan t adalah waktu inkubasi) dan populasi bakteri rumen total (Ogimoto dan Imai 1981). Perhitungan Populasi Saccharomyces cerevisiae Perhitungan populasi S. cerevisiae menggunakan media PDA pada cawan petri. Sebanyak 7.8 g PDA dilarutkan dalam 200 ml air destilasi dan dipanaskan dengan hot plate setelah itu di sterilisasi dengan autoclave. Stok S. cerevisiae cair diencerkan menggunakan larutan pengencer NaCl fisiologis 0.4%. Satu tabung stok cair divortex dan diambil 1 ml dan dimasukkan pada 9 ml media pengencer dan dihomogenkan dengan vortex. Tabung pengencer pertama diencerkan kembali dengan proses yang sama hingga tabung ke-5. Perhitungan populasi S. cerevisiae yang digunakan adalah seri pengenceran ke-2 sampai ke-5. Sebanyak 1 ml tiap seri pengenceran dimasukkan dalam cawan petri. Larutan PDA yang telah disterilisasi pada kondisi hangat dituang sebanyak 15 ml kedalam cawan petri berisi 1 ml S. cerevisiae yang telah diencerkan. Proses ini dilakukan secara duplo. Cawan petri berisi S. cerevisiae diinkubasi selama 48 jam pada suhu ruang. Koloni putih yang terdapat pada media PDA dihitung dengan metode bacteriological analitycal manual (BAM) pada jumlah koloni 25-250 dengan rumus: Populasi (cfu ml-1)= C/ [(n x 1/10n-1) x 10-k] Keterangan : C = jumlah koloni pada seluruh seri pengenceran n = urutan cawan pada seri pengencer (1, 2, 3 dan seterusnya) k = seri pengenceran pertama koloni dengan rentang 25-250 koloni Perhitungan Populasi Bakteri Total (Ogimoto dan Imai 1981) Media yang digunakan untuk menghitung populasi bakteri total adalah media BHI. Media BHI terdiri dari campuran BHI 3.7 g, glukosa 0.05 g, CMC 1 ml, pati (starch) 0.05 g, cystein-HCl 0.05 g, hemin 0.5 ml, resazurin 0.05 ml dan ditambahkan aquadest sampai 100 ml. Campuran media dipanaskan sampai homogen dan dialiri CO2 sampai terjadi perubahan warna dari kuning menjadi merah dan berubah kembali menjadi kuning bening. Medium dimasukkan ke dalam tabung Hungate sebanyak 5 ml dan tambahkan Bacto agar sebanyak 0.15 g. Medium disterilisasi dalam autoclave pada suhu 121C selama 15 menit. Sampel diencerkan terlebih dahulu dengan medium pengencer. Pengenceran dilakukan dengan cara berikut : 0.05 ml cairan rumen dimasukkan ke dalam 4.95 ml media pengencer pertama. Selanjutnya diambil kembali 0.05 ml lalu dimasukkan ke dalam media pengencer kedua. Dari pengencer kedua diambil kembali 0.05 ml lalu dimasukkan ke media pengencer tiga. Hal yang sama juga dilakukan pada pengencer keempat. Seluruh pengenceran ini diikuti dengan homogenisasi. Dengan demikian di dalam pengenceran satu sampai empat masing-masing mengandung bakteri 102, 104, 106, 108 cfu ml-1. Pengenceran tersebut dilakukan sampai 4 kali (4 seri tabung). Dari masing-masing seri tabung pengenceran diambil sebanyak 0.1 ml lalu diinokulasikan ke medium agar dan dihomogenkan dengan roller tube, sehingga medium dapat memadat secara
7
merata. Tabung yang telah diinokulasi lalu diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 39C selama 24 jam. Populasi bakteri total dapat dihitung dengan rumus : Populasi bakteri (cfu ml-1 cairan rumen) = n 0.5 x 10x x 0.1 n = jumlah koloni yang terdapat pada tabung seri pengenceran ke-x Percobaan 2. Efek Suplementasi Saccharomyces cerevisiae dan MR4 terhadap Fermentabilitas, Populasi Mikroba dan Detoksifikasi Aflatoksin Percobaan ini bertujuan menguji efek tunggal serta kombinasi dua jenis probiotik terdiri dari: 1) kultur S. cerevisiae hasil percobaan 1, dan 2) Isolat MR4. Kedua probiotik dikombinasikan dalam suatu percobaan in vitro. Bahan pakan diinkubasi in vitro menurut metode Tilley dan Terry (1963) seperti pada percobaan 1. Dosis S. cerevisiae yang ditambahkan adalah 5 x 1010 cfu kg-1 ransum, dan dosis MR4 yang ditambahkan adalah 5 x 107 cfu kg-1 ransum. Pada inkubasi 0 dan 4 jam supernatan diambil sebanyak 2 ml untuk analisis aflatoksin. Selain itu juga pada inkubasi 4 jam diukur pH dan supernatan diambil untuk analisa NH3, vollatile fatty acid (VFA) total dan parsial. Sebanyak 1 ml supernatan diambil untuk analisis protozoa dan 0.5 ml untuk analisa bakteri rumen total. Peubah yang diukur diantaranya nilai pH, konsentrasi NH3 (General Laboratory Procedure 1966), konsentrasi VFA parsial menggunakan alat Gas Chromatography, populasi protozoa total (Ogimoto dan Imai 1981), populasi bakteri total dalam rumen (Ogimoto dan Imai 1981) dan konsentrasi AFB1 (AOAC 1990) dengan menggunakan alat High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Pengukuran pH Cairan Rumen Pengukuran pH dengan cara mencelupkan alat detektor pH meter ke dalam supernatan, kemudian dibaca dimonitor angka yang menunjukkan nilai pH tersebut. Pengukuran Konsentrasi NH3 (General Laboratory Procedure 1966) Konsentrasi NH3 diukur menggunakan teknik Mikrodifusi conway. Bibir cawan conway dan tutupnya diolesi dengan vaselin, kemudian supernatan yang dihasilkan dari pencernaan fermentatif diambil sebanyak 1 ml dan ditempatkan pada salah satu ruang sekat cawan. Larutan Na2CO3 jenuh ditempatkan pada ruang sekat yang lain. Larutan asam borat berindikator sebanyak 1 ml ditempatkan dalam cawan kecil yang terletak di tengah cawan conway. Selanjutnya cawan conway ditutup rapat agar udara tidak dapat masuk. Supernatan dan larutan Na2CO3 jenuh dicampur hingga merata dengan menggoyang-goyangkan cawan dan memiringkannya. Setelah itu cawan dibiarkan selama 24 jam pada suhu kamar, dan setelah 24 jam cawan dibuka. Pada bagian asam borat selanjutnya dititrasi dengan larutan H2SO4 0,005 N sampai terjadi perubahan warna biru ke warna asam borat (merah jambu). Konsentrasi NH3 diukur dengan rumus: NH3 (mM) = ml H2SO4 x N H2SO4 x 1000 Sampel (g) x BK sampel
8
Pengukuran Konsentrasi VFA (General Laboratory Procedure 1966) Sampel hasil fermentasi dengan inkubasi 4 jam dimasukkan dalam tabung eppendorf dan diturunkan pHnya sampai pH 3 dengan menambahkan larutan H2SO4 pekat sebanyak 1 tetes pada masing-masing sampel di tabung eppendorf. Penambahan asam pekat bertujuan untuk menstabilkan sampel yang akan diukur gasnya. Pengukuran produksi VFA total dan parsial (asam asetat, propionat, butirat, isobutirat, valerat dan isovalerat menggunakan alat Gas Chromatography dengan spesifikasi GC 8A, Shimadzu Crop, Kyoto, Japan dengan kolom berisi 10% SP-1200, 1% H3PO4 on 80/100 Cromosorb WAW. Secara berturut-turut sebanyak 1 µl larutan standar diinjeksikan pada GC setelah itu diinjekkan sampel hasil inkubasi dengan volume yang sama. Hasil analisa nilai VFA standar dan sampel dibaca dalam kromatogram. Konsentrasi VFA sampel dihitung dengan rumus: mM sampel VFA = Area sampel x 10 mM Area standar Perhitungan Populasi Protozoa (Ogimoto dan Imai 1981) Sebanyak 1 ml sampel hasil inkubasi ditambah 1 ml larutan triphan blue formaline saline (TBFS). Larutan TBFS dibuat dari campuran formalin 4% ditambah dengan larutan NaCl fisiologis 0.9% dalam 100 ml larutan. Sebanyak ± 2 tetes campuran tersebut lalu ditempatkan pada counting chamber dengan ketebalan 0.1 mm, luas kotak terkecil 0.0625 mm2 yang terdapat 16 kotak dan jumlah kotak yang dibaca sebanyak 16 kotak. Perhitungan populasi protozoa dilakukan dengan menggunakan mikroskop pada pembesaran 10 x 10. Populasi protozoa dapat dihitung dengan rumus : Populasi protozoa ml-1 cairan rumen = 1000 x C x FP 0.1 x 0.0625 x 16 x 16 C = jumlah protozoa terhitung FP = faktor pengencer Pengukuran Aflatoksin Cairan Rumen (AOAC 1990) Prinsip dari metode ini adalah senyawa aflatoksin yang telah di ekstrak dalam pelarut organik, dipisahkan dengan menggunakan kromatografi lapis tipis dan diidentifikasi di bawah sinar UV. Pada metode ini dibagi dua tahap yaitu persiapan sampel dan tahap kedua penetapan kadar aflatoksin dengan teknik kromatografi lapis tipis dan identifikasi fuloresensi di bawah lampu UV. Pada tahap persiapan sampel dilakukan dengan penjenuhan bejana TLC dengan fase gerak (kloroform:aseton = 9:1). Persiapan lempeng TLC dilakukan dengan mendiamkan lempeng Thin Layer Chromatography (TLC) dalam oven dengan suhu 80°C selama satu jam. Tahap selanjutnya yakni tahap identifikasi analisis aflatoksin yakni dilakukan dengan menggunakan TLC satu dimensi dengan fase gerak (kloroform:aseton = 9:1). Plat TLC yang digunakan adalah plat dengan fase diam silika gel. Ekstrak aflatoksin yang dihasilkan ditotolkan pada lempeng dan selanjutnya diamati dibawah UV pada panjang gelombang 365 nm. Kandungan aflatoksin (ng l-1) = S x Y x V x FP WxZ
9
Keterangan : S
: Volume aflatoksin standar (nl) yang memberikan perpendaran setara dengan Z nl sampel Y : Konsentrasi aflatoksin standar aflatoksin dalam μg ml-1 Z : Volume ekstrak sampel (nl) yang dibutuhkan untuk memberikan perpendaran setara S nl standar aflatoksin W : Berat aflatoksin yang diekstrak (g) V : Volume pelarut yang dibutuhkan (nl) FP : Faktor pengenceran Percobaan 3. Efek Pemberian Kombinasi Probiotik Saccharomyces cerevisiae dan MR4 terhadap Performa dan Kecernaan Sapi Bali Percobaan ini bertujuan menguji efek kombinasi probiotik S. cerevisiae dan isolat MR4 terhadap performa dan kecernaan sapi Bali. Percobaan dilaksanakan di peternakan sapi pedaging CV Anugerah Farm di Ciampea, Kabupaten Bogor. Sebanyak 24 ekor sapi bali berumur 2-3 tahun dengan kisaran bobot badan awal 290-340 kg. Pemeliharaan Pemeliharaan dilakukan selama 47 hari yang terdiri dari tahap preliminary atau adaptasi ransum penelitian selama 10 hari, tahap percobaan pemberian pakan selama 30 hari dan tahap collecting feses selama 7 hari. Pada tahap awal dilakukan penimbangan bobot badan menggunakan timbangan digital dengan cara menempatkan sapi pada kandang jepit dan masing-masing ternak diberikan obat cacing. Setelah itu dilakukan pengelompokkan sapi berdasarkan bobot badan awal sebanyak 8 kelompok. Masing-masing kelompok terdiri dari 3 ekor sapi kemudian dilakukan pengacakan untuk perlakuan dan ulangan. Pemberian pakan mengikuti petunjuk atau kebiasaan di CV Anugerah Farm. Tabel 3 menunjukkan jadwal pemberian pakan di CV Anugerah Farm. Probiotik S. cerevisiae yang diberikan adalah 2 x 1011 cfu hari-1 sedangkan probiotik isolat MR4 yang diberikan adalah 2 x 108 cfu hari-1. Probiotik tersebut dicampurkan dengan konsentrat dan diberikan pada pemberian pakan pukul 07.00. Collecting feses dilakukan di akhir penelitian selama 7 hari. Pada tahap ini dipilih 8 ekor sapi untuk ditambung fesesnya, ditimbang, dicatat bobotnya serta diambil sampel untuk dianalisa kandungan kimianya. Tabel 3. Jadwal pemberian pakan di peternakan CV Anugrah Farm Jam
Jenis Pakan/Air Minum
Jumlah
07.00
Konsentrat
1-2 kg
09.00
Air minum
ad libitum
10.00
Hi~fer
2 kg
13.00
Konsentrat
1-2 kg
14.00
Air minum
ad libitum
15.00
Hi~fer
2-3 kg
19.00
Air Minum
ad libitum
10
Pengukuran Pertambahan Bobot Badan Pengukuran bobot badan dilakukan setiap 10 hari selama 30 hari. Pertambahan bobot badan harian (PBBH) dihitung dengan cara mengurangi bobot badan akhir dengan bobot badan awal lalu dibagi dengan lamanya waktu (10 hari). Pengukuran Laju Pertumbuhan (Brody 1945) Laju pertumbuhan (%/hari) = (BB 30 hari – BB 0 hari)/BB 0 hari x 100% 30 hari Pengukuran Konsumsi Nutrien Konsumsi ransum diperoleh dari jumlah ransum yang diberikan dikurangi sisa ransum yang tidak dimakan oleh sapi dalam satu hari. Demikian pula dilakukan pengukuran terhadap konsumsi zat-zat makanan seperti: bahan kering (BK), bahan organik (BO), protein kasar (PK), serat kasar (SK), lemak kasar (LK) dan bahan ekstrak tanpa nitrogen (BETN). Kecernaan Nutrien, TDN, DE dan ME Kecernaan zat makanan mencerminkan efisiensi penggunaan suatu ransum sebagai akibat perlakuan yang diberikan. Secara umum kecernaan dinyatakan sebagai berikut: Kecernaan nutrien (%) = Konsumsi nutrien (g) – ekskresi dalam feses (g) x 100% Konsumsi nutrien (g) TDN (%) = (PKt + 2.25LKt +SKt + BETNt) x 100% (Sutardi 1980) DE (Mcal kg-1) = TDN x 0.04409 (NRC 2001) ME (Mcal kg-1) = (1.01 x DE) – 0.45 (NRC 2001) Rancangan Percobaan Percobaan 1 dirancang menggunakan rancangan acak kelompok faktorial 4 x 5 dan 3 kelompok berdasarkan waktu pengambilan cairan rumen. Faktor A adalah strain S. cerevisiae yang terdiri dari kontrol, S. cerevisiae NBRC 10217, S. cerevisiae NRRL Y. 567 dan S. cerevisiae NRRL 12618. Faktor B adalah waktu inkubasi terdiri dari 0, 1, 2, 3 dan 4 jam. Percobaan 2 dirancang menggunakan rancangan acak kelompok dengan 4 perlakuan dan 5 kelompok berdasarkan waktu pengambilan cairan rumen. Perlakuan terdiri dari P0= ransum kontrol, P1= P0 + probiotik S. cerevisiae terpilih, P2= P0 + probiotik MR4 dan P3= P0 + probiotik S. cerevisiae + probiotik MR4. Percobaan 3 dirancang menggunakan rancangan acak kelompok dengan 2 perlakuan dan 8 kelompok berdasarkan bobot badan. Perlakuan terdiri dari P0= ransum basal, P1= P0 + probiotik S. cerevisiae dan MR4. Analisis Data Data yang diperoleh dianalisa secara statistik menggunakan analisis ragam (ANOVA). Percobaan 1 diuji lanjut dengan uji Duncan dan percobaan 2 diuji lanjut dengan kontras ortogonal (Mattjik dan Sumertajaya 2002). Data aflatoksin dianalisa secara deskriptif.
11
3 HASIL DAN PEMBAHASAN
Populasi SC (log cfu ml-1 cairan rumen)
Seleksi Saccharomyces cerevisiae sebagai Probiotik secara in vitro Hasil percobaan 1 menunjukkan adanya interaksi antara strain S. cerevisiae dengan waktu inkubasi (P<0.05) terhadap populasi S. cerevisiae dalam rumen. Ketiga strain S. cerevisiae memiliki perbedaan pertumbuhan dalam cairan rumen. Strain dengan pertumbuhan terbaik dalam rumen adalah strain NRRL 12618 dengan laju pertumbuhannya 3.3% jam-1, sedangkan strain NBRC 10217 dan NRRL Y 567 memiliki pertumbuhan yang hampir sama (Gambar 1) dengan laju pertumbuhan masing-masing 2.2% jam-1 dan 2.3% jam-1. Perlakuan kontrol (tanpa suplementasi S. cerevisiae) tidak ditemukan pertumbuhan S. cerevisiae dalam media cairan rumen. Hal ini menunjukkan bahwa S. cerevisiae yang dihitung merupakan S. cerevisiae yang ditambahkan. Ketiga strain S. cerevisiae memiliki pertumbuhan yang semakin meningkat sejalan dengan lamanya waktu inkubasi. Namun, peningkatan kelajuan pertumbuhan S. cerevisiae setelah 4 jam belum diketahui. Menurut Koul et al. (1998) yeast menunjukkan efek stimulasi selama 2-4 jam dan aktivitasnya akan menurun pada 12 jam. Hal ini menunjukkan setelah 24 jam aktivitas S. cerevisiae akan hilang, sehingga suplementasi S. cerevisiae diberikan setiap hari pada hewan ternak untuk merangsang aktivitas mikroba rumen. Hasil Penelitian Harrison et al. (1988) menyatakan ransum yang disuplementasi S. cerevisiae sebanyak 2.4 x 106 cfu g-1 setelah inkubasi 4 jam menunjukkan pertumbuhan S. cerevisiae sebesar 5.67 log cfu ml-1 cairan rumen, lebih tinggi dibandingkan pada percobaan ini dengan populasi 3.04-3.75 log cfu ml-1 cairan rumen. Semakin meningkatnya populasi S. cerevisiae dalam cairan rumen dapat disebabkan oleh konsentrasi oksigen dalam media, karena salah satu faktor yang berpengaruh terhadap pertumbuhan S. cerevisiae dalam rumen adalah ketersediaan oksigen dalam rumen. Beberapa strain S. cerevisiae mampu beradaptasi dalam kondisi anaerob. Hal ini menunjukkan ketiga strain S. cerevisiae yang digunakan bersifat anaerob fakultatif. Perbedaan strain S. cerevisiae menyebabkan kemampuan konsumsi oksigen yang berbeda sehingga berbeda pula aktivitas metabolisnya Jurkovich et al. (2014). 3.8 3.7 3.6 3.5 3.4 3.3 3.2 3.1 3
NBRC 10217 NRRL Y 567 NRRL 12618 0
2
4
6
Waktu inkubasi (jam) Gambar 1. Pertumbuhan tiga strain S. cerevisiae dalam cairan rumen
Pengaruh S. cerevisiae terhadap pertumbuhan bakteri rumen total pada ransum diperlihatkan pada Gambar 2. Tidak ada interaksi antara strain S.
12
Populasi Bakteri Rumen Total (log cfu ml-1 cairan rumen)
cerevisiae dengan waktu inkubasi (P>0.05) terhadap populasi bakteri rumen total. Semua perlakuan tidak menunjukkan pola pertumbuhan secara linier, kuadratik maupun kubik (P>0.05). Berdasarkan rataan waktu bergerak maka terdapat kecenderungan populasi bakteri rumen total meningkat jika disuplementasi dengan S. cerevisiae, sedangkan perlakuan kontrol yang tidak disuplementasi S. cerevisiae mengalami penurunan populasi bakteri rumen total. Perlakuan suplementasi strain S. cerevisiae NRRL 12618 memiliki pertumbuhan populasi bakteri rumen total yang paling baik dibanding dengan strain S. cerevisiae NBRC 10217 dan strain S. cerevisiae NRRL Y 567. Berdasarkan kelajuan pertumbuhannya yang tinggi dalam cairan rumen serta kemampuannya dalam menstimulasi pertumbuhan bakteri rumen maka strain S. cerevisiae NRRL 12618 terpilih sebagai probiotik yeast terbaik yang akan digunakan pada percobaan kedua. Semakin meningkatnya populasi bakteri rumen pada perlakuan suplementasi S. cerevisiae disebabkan oleh S. cerevisiae mampu menghilangkan oksigen dalam rumen untuk mempertahankan aktivitas metabolismenya (Rose 1987). Oksigen merupakan komponen toksik bagi bakteri anaerob dalam rumen dan dapat menghambat pelekatan bakteri selulolitik terhadap selulosa (Roger et al. 1990). Hasil penelitian Chaucheryas-Durand et al. (2008) menyatakan suplementasi S. cerevisiae mampu menurunkan potensial redoks yang memberikan kondisi ekologis yang lebih baik untuk pertumbuhan dan aktivitas mikrooganisme anaerob. Faktor lain yang menyebabkan tingginya populasi bakteri rumen pada perlakuan penambahan S. cerevisiae karena S. cerevisiae mempunyai kemampuan menyediakan faktor tumbuh seperti asam organik dan vitamin sehingga mampu menstimulasi populasi bakteri rumen. 7.3 7.2 7.1 7
Kontrol
6.9
NBRC 10217
6.8
NRRL Y 567
6.7
NRRL 12618
6.6 0
1
2
3
4
Waktu Inkubasi (jam) Gambar 2. Pengaruh penambahan probiotik S. cerevisiae terhadap pertumbuhan bakteri rumen total
Efek Suplementasi Saccharomyces cerevisiae, MR4 terhadap Fermentabilitas, Populasi Mikroba dan Detoksifikasi Aflatoksin Karakteristik fermentasi dan populasi mikroba rumen dapat diperlihatkan pada Tabel 4. Suplementasi probiotik tidak memberikan pengaruh pada nilai pH. Hal ini menunjukkan suplementasi probiotik masih dapat mempertahankan pH rumen secara normal yaitu sebesar 5.5-7.0 (Dehority 2005). Suplementasi probiotik S. cerevisiae pada P1 cenderung memiliki rataan nilai pH yang paling tinggi yaitu 6.96 diikuti dengan pemberian kombinasi S. cerevisiae dan probiotik
13
MR4 sebesar 6.92. pH rumen yang normal mendukung ekosistem pertumbuhan bakteri rumen dan aktivitas fermentasinya menjadi lebih optimal. Beberapa hasil penelitian menunjukkan suplementasi S. cerevisiae mampu meningkatkan pH rumen. Hal ini disebabkan oleh yeast mampu bersaing dengan bakteri pencerna pati (amilolitik) sehingga dapat mencegah akumulasi asam laktat dalam rumen (Lynch dan Martin 2002) sehingga dapat meningkatkan pH rumen. Selain itu hasil penelitian Thrune et al. (2009) sapi perah yang disuplementasi yeast berupa S. cerevisiae memiliki lama waktu pH rendah yang lebih singkat (pH<5.6) dibanding dengan perlakuan kontrol yang tidak disuplementasi yeast. Tabel 4 Karakteristik fermentasi dan populasi mikroba rumen secara in vitro dari ransum sapi pedaging yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 Parameter
Perlakuan P0
P1
P2
P3
pH
6.88±0.04
6.96±0.15
6.88±0.04
6.92±0.11
NH3 (mM)
5.73±0.3c
5.95±0.77b
6.49±0.23a
6.26±0.18b
Bakteri rumen (log cfu 7.04±0.76c ml-1)
7.29±0.81b
7.97±0.47a
7.67±0.66b
Protozoa (log sel ml-1)
3.79±0.13b
3.80±0.14b
3.78±0.23b
3.98±0.11a
Keterangan : P0 (pakan kontrol); P1 (P0 + probiotik S. cerevisiae), P2 (P0 + MR4); P3 (P0 + probiotik S. cerevisiae + MR4). Superscript berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaaan nyata (P<0.05).
Suplementasi probiotik mampu meningkatkan konsentrasi amonia (NH3) rumen (P<0.05). Kemampuan probiotik tunggal dalam memproduksi NH3 rumen sama dengan perlakuan kombinasi, sedangkan perlakuan suplementasi probiotik MR4 memiliki rataan konsentrasi NH3 rumen yang lebih tinggi dibandingkan suplementasi probiotik S. cerevisiae dengan rataan berturut-turut 6.49 mM dan 5.95 mM. Rataan konsentrasi NH3 pada perlakuan kontrol dan pemberian S. cerevisiae tidak berada di kisaran normal (6-21 mM) (McDonald et al. 2002). Rendahnya nilai NH3 dalam rumen dipengaruhi oleh kelarutan protein dalam ransum. NH3 digunakan sebagai sumber nitrogen untuk sintesis protein mikroba (Bach et al. 2005) sehingga bakteri dapat tumbuh dalam rumen. Konsentrasi NH3 pada penelitian ini sejalan dengan populasi bakteri rumen total. Suplementasi probiotik mampu meningkatkan populasi bakteri rumen total (P<0.05). Kemampuan probiotik tunggal dalam merangsang pertumbuhan bakteri rumen sama dengan perlakuan kombinasi, sedangkan perlakuan P2 memiliki rataan populasi bakteri rumen yang lebih tinggi dibandingkan P1 dengan rataan berturutturut 7.97 log cfu ml-1 dan 7.29 log cfu ml-1. Tingginya populasi bakteri rumen pada P2 ini disebabkan oleh probiotik MR4 itu sendiri merupakan bakteri rumen. Hal ini menunjukkan pemberian probiotik secara tunggal maupun kombinasinya mampu meningkatkan suplai NH3 dalam rumen untuk disintesis menjadi protein mikroba sehingga terjadi peningkatan suplai asam amino pasca rumen yang bermanfaat untuk ternak. Suplementasi probiotik berpengaruh terhadap penurunan populasi protozoa pada inkubasi 4 jam (P<0.05). Rendahnya populasi protozoa pada perlakuan suplementasi probiotik menunjukkan pemberian probiotik meningkatkan populasi bakteri rumen sehingga populasi protozoa menurun. Hal ini yang menunjukkan penambahan probiotik hidup mampu mendefaunasi protozoa. Hasil penelitian Kowalik et al. (2012) menunjukkan suplementasi S. cerevisiae hidup mampu
14
menurunkan protozoa rumen, sedangkan suplementasi metabolit S. cerevisiae dapat meningkatkan protozoa rumen karena pada S. cerevisiae mati berfungsi sebagai prebiotik sebagai sumber nutrien mikroba rumen. Strain S. cerevisiae mengandung faktor-faktor terlarut (vitamin B, asam amino, asam organik seperti fumarat, malat dan aspartat), selain itu kandungan membran sel S. cerevisiae berupa mannan dan β-glukan dapat menstimulasi pertumbuhan Entodinium. Nutrien-nutrien inilah yang dapat diutilisasi bakteri maupun protozoa untuk kelangsungan hidupnya sehingga pemberian S. cerevisiae mati mampu meningkatkan populasi. Hasil penelitian Dobicki et al. (2006) menunjukkan bahwa metabolit S. cerevisiae mampu meningkatkan populasi Diplodinium spp. dibandingkan dengan kontrol. Tabel 5 Konsentrasi VFA total dan parsial secara in vitro dari ransum sapi pedaging yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 Parameter
Perlakuan P0
P1
P2
P3
101.05± 5.41b
115.53± 17.88a
110.36± 0.88a
119.89± 5.41a
Asetat (mM)
50.46±3.39
58.15±7.12
52.80±0.85
55.82±2.49
Propionat (mM)
34.71±3.54
43.31±7.42
36.17±1.75
38.93±2.39
Butirat (mM)
9.60±0.43
12.51±2.01
10.77±0.42
12.16±1.06
Isobutirat (mM)
6.13±1.14
6.50±1.04
6.66±0.45
7.26±0.74
Valerat (mM)
0.66±0.21
1.04±0.63
0.71±0.25
1.03±0.05
Isovalerat (mM)
1.98±0.87
c
1.89±0.52
d
2.79±0.96
b
3.93±0.65a
Asetat : Propionat
1.46±0.05
1.35±0.10
1.46±0.08
1.43±0.05
VFA total (mM)
Keterangan : P0 (pakan kontrol); P1 (P0 + probiotik S. cerevisiae), P2 (P0 + MR4); P3 (P0 + probiotik S. cerevisiae + MR4). Superscript berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaaan nyata (P<0.05).
Konsentrasi VFA total dan parsial diperlihatkan pada Tabel 5. Suplementasi probiotik berpengaruh terhadap peningkatan konsentrasi VFA total pada rumen (P<0.05) namun tidak mempengaruhi proporsi molar asetat, propionat, butirat dan isobutirat. Suplementasi probiotik S. cerevisiae yang dikombinasikan dengan isolat MR4 memiliki kemampuan yang sama dengan suplementasi probiotik secara tunggal dengan rataan konsentrasi VFA berturut-turut 119.89 mM dan 112.94 mM. Kosentrasi VFA total ini masih berada dalam kisaran normal yaitu 70-150 mM atau setara dengan 5-10 g l-1 (McDonald et al. 2002). Ternak sapi yang diberi ransum dengan rasio hijauan 60% dan konsentrat 40% menghasilkan VFA 96 mM dengan proporsi asetat (C2) 61%, propionat (C3) 18%, butirat (C4) 13% dan 8% isoacid lainnya (McDonald et al. 2002). Proporsi VFA pada penelitian ini adalah 47.72% asetat (C2), 33.51% propionat (C3), 9.86% butirat (C4) dan 8% isoacid. Suplementasi probiotik tidak mempengaruhi rasio asetat : propionat. Semua perlakuan memiliki rasio A:P rendah yang menunjukkan bahwa produksi propionat dalam rumen yang tinggi. Kandungan propionat yang tinggi menunjukkan aktivitas propiogenik yang lebih dominan dalam merombak pakan. Kandungan propionat yang tinggi disebabkan oleh tingginya Propionibacteria seperti Meganosphera elsdenii dan Selenomonas ruminantium yang mengubah asam laktat menjadi propionat (Silberberg et al. 2013). Proporsi propionat yang tinggi sangat cocok untuk sapi pedaging. Propionat merupakan prekursor utama dalam proses glukoneogenesis, sehingga kenaikan produksi propionat didalam rumen dapat meningkatkan produksi glukosa di dalam hati (Stein et al. 2006).
15
Kandungan isobutirat tidak dipengaruhi oleh suplementasi probiotik sedangkan isovalerat dipengaruhi oleh suplementasi probiotik (P<0.05). Kandungan isovalerat meningkat pada perlakuan yang disuplementasi probiotik. Suplementasi MR4 dalam pakan memiliki konsentrasi isovalerat yang tinggi dibanding suplementasi S. cerevisiae (P<0.05), namun jika keduanya dikombinasikan maka konsentrasi isovalerat akan tinggi dibandingkan perlakuan tunggal. Produksi isoacid (isobutirat dan isovalerat) oleh mikroba rumen berhubungan dengan pelepasan asam amino dan deaminasi dari protein di rumen dan dapat terjadi pada saat protein degradabel dapat dimanfaatkan (Yang et al. 2004). Bakteri selulolitik lebih dominan menggunakan N-NH3 sementata bakteri amilolitik menggunakan asam amino sebagai aktivitas proteolitik. Konsentrasi isobutirat dan isovalerat yang tinggi pada perlakuan P3 menunjukkan peningkatan aktivitas proteolitik dengan S. cerevisiae sehingga bakteri pendegradasi protein dapat memanfaatkan asam amino rantai cabang sebagai sumber energi sehingga menghasilkan asam lemak rantai cabang sebagai produk akhirnya. Asam amino dan peptida hasil degradasi bakteri yang memiliki aktivitas proteolitik dapat diinkorporasi menjadi protein mikroba atau dapat dideaminasi menjadi VFA jika energi dibutuhkan oleh bakteri rumen (Bach et al. 2005). El Hassan et al. (1996) menyatakan terjadi peningkatan jumlah protein di rumen pada saat yeast ditambahkan, hal ini berhubungan dengan peningkatan inkorporasi N-NH3 menjadi protein mikroba. Suplementasi yeast dapat menstimulasi bakteri amilolitik yang mendegradasi protein murni (asam amino) dan menghasilkan peningkatan konsentrasi isoacid dan valerat (Dawson et al. 1990). Sebagian besar bakteri selulolitik membutuhkan isoacid dari deaminasi protein untuk meningkatkan pertumbuhannya dan mendegradasi serat (Yang 2002). Konsentrasi isovalerat dapat dipengaruhi oleh nilai pH rumen, bila pH rumen stabil seperti pada penelitian ini maka konsentrasi isovalerat dapat meningkat. Tabel 6 Konsentrasi AFB1 secara in vitro dari ransum sapi pedaging yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 Konsentrasi AFB1 -1
0 jam (ng l ) -1
4 jam (ng l )
Perlakuan P0
P1
P2
P3
------------------------------16.67---------------------------16.67
33.33
16.67
ttd
Keterangan : P0 (pakan kontrol); P1 (P0 + probiotik S. cerevisiae ), P2 (P0 + MR4); P3 (P0 + probiotik S. cerevisiae + MR4). Ttd = tidak terdeteksi
Konsentrasi aflatoksin B1 (AFB1) dalam rumen pada inkubasi 0 jam dan 4 jam ditunjukkan pada Tabel 6. Konsentrasi AFB1 dalam rumen pada inkubasi 0 jam sebesar 16.67 ng l-1. Setelah inkubasi 4 jam konsentrasi AFB1 pada perlakuan P0 dan P2 masih sama sebesar 16.67 ng l-1 yang menunjukkan belum terjadinya perombakan AFB1. Isolat MR4 ini mampu menekan degradasi AFB1 sehingga tidak terjadi peningkatan konsentrasi AFB1. Perlakuan P1 dengan suplementasi S. cerevisiae terjadi peningkatan konsentrasi AFB1 menjadi 33.33 ng l-1. Peningkatan konsentrasi AFB1 ini disebabkan oleh AFB1 diserap oleh dinding sel S. cerevisiae sehingga dapat ditransformasikan menjadi metabolit AFB1 lain dalam rumen. Selain itu tingginya konsentrasi AFB1 juga disebabkan pada percobaan in vitro tidak terjadi penyerapan, sehingga terjadi akumulasi AFB1. Penggunaan S. cerevisiae sebagai agen detoksifikasi aflatoksin optimal pada pH 4 (Dawson et al. 2001) sedangkan pada penelitian ini inkubasi dalam media cairan rumen memiliki rataan pH 6.96. Perlakuan P3 dengan suplementasi probiotik S. cerevisiae dan probiotik MR4 tidak terdeteksi konsentrasi AFB1 dalam rumen.
16
Hal ini diduga terjadi penurunan konsentrasi AFB1 akibat kombinasi suplementasi S. cerevisiae dan MR4. Probiotik S. cerevisiae berperan dalam mengurangi penyerapan AFB1 dalam rumen dengan terjadinya penyerapan molekul toksin pada dinding sel S. cerevisiae, sementara MR4 dapat menekan perombakan AFB1 menjadi metabolit lainnya. Pengukuran konsentrasi AFB1 pada penelitian ini berasal dari satu sampel (tidak ada ulangan), hal ini yang menyebabkan terjadinya ketidak konsistenan pada hasil yang diperoleh. Upadhaya et al. (2009) menyatakan bahwa aktivitas perombakan AFB1 pada ternak sapi yang dilakukan secara in vivo menurun pada 3 jam inkubasi, setelah itu mengalami peningkatan sampai 12 jam inkubasi. Perbedaan kemampuan degradasi dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya kemampuan masing-masing spesies, rasio hijauan dan konsentrat, jenis dan populasi mikroba rumen, dan waktu inkubasi. Penelitian lain yang menggunakan strain S. cerevisiae dalam mendetoksifikasi AFB1 adalah Shetty et al. (2006) menyatakan bahwa kemampuan S. cerevisiae mendetoksifikasi AFB1 sebesar 40-70%. Efek Pemberian Kombinasi Probiotik Saccharomyces cerevisiae dan MR4 terhadap Kecernaan dan Performa Sapi Bali Sapi Bali merupakan hasil domestikasi dari Banteng. Sapi Bali biasa dipelihara secara ekstensif di daerah asalnya di Nusa Tenggara Timur, sehingga pada penelitian ini sapi Bali harus diadaptasikan dengan kondisi lingkungan, kandang dan pakan yang diberikan. Adaptasi terhadap pakan penelitian dilakukan selama 10 hari. Tingkat palatabilitas atau kesukaan terhadap ransum dapat terlihat dari konsumsi segar dan konsumsi nutrien sapi Bali. Tabel 7 menunjukkan konsumsi pakan dan nutrien sapi Bali yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan isolat MR4. Suplementasi probiotik belum mampu meningkatkan konsumsi Hi~fer dan konsumsi konsentrat. Tabel 7 Konsumsi pakan dan nutrien sapi Bali yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 Parameter
Perlakuan P0
P1
Konsumsi segar Hi~fer (kg ekor-1 hari-1) Konsentrat (kg ekor-1 hari-1) Konsumsi nutrien BK (kg ekor-1 hari-1) BK metabolis (g kg-1 BB0.75 hari-1) Abu (g ekor-1 hari-1) BO (kg ekor-1 hari-1) BO metabolis (g kg-1 BB0.75 hari-1) PK (g ekor-1 hari-1) LK (g ekor-1 hari-1) SK (g ekor-1 hari-1) BETN (kg ekor-1 hari-1)
4.62±4.86 3.69±31.37
4.63±2.48 3.72±11.49
4.15±27.94 77.15±6.38 495±3.34 3.66±24.60 67.95±5.62 353±2.42 123±0.93 651±3.59 2.53±17.69
4.18±9.56 76.83±5.65 498±1.14 3.68±8.42 67.66±4.98 356±0.83 124±0.33 654±1.14 2.55±6.12
Keterangan : P0 = ransum basal, P1 = P0 + probiotik S. cerevisiae dan MR4. Superscript berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan nyata (P<0.05)
17
Peningkatan palatabilitas dan konsumsi ransum dapat dilihat dari peubah konsumsi BK metabolis dan BO metabolis. Pada penelitian ini belum menunjukkan adanya peningkatan konsumsi BK metabolis dan BO metabolis (P>0.05) yang menunjukkan suplementasi probiotik belum mampu meningkatkan palatabilitas dan konsumsi ransum. Hasil penelitian Vyas et al. (2014) menyatakan suplementasi S. cerevisiae dengan dosis 4 x 1010 cfu hari-1 dalam ransum yang mengandung 40% silase barley, 10% hay dan 50% barley belum mampu meningkatkan konsumsi BK. Pinos-Rodriguez et al. (2008) menyatakan bahwa pemberian S. cerevisiae dengan dosis 2 x 1010 cfu hari-1 pada ransum mampu meningkatkan konsumsi BK. Respon pemberian yeast dalam hal ini S. cerevisiae dalam ransum tidak konsisten pada beberapa penelitian. Hal ini diduga karena karakteristik S. cerevisiae yang berbeda antara masing-masing strain, dosis atau jumlah S. cerevisiae yang ditambahkan dalam pakan, hewan ternak percobaan, dan komposisi ransum yang berbeda. Probiotik S. cerevisiae yang diberikan merupakan probiotik padat dan tidak memiliki aroma yang dapat meningkatkan serea makan ternak serta probiotik diberikan dalam jumlah sedikit. Lee et al. (2009) menyatakan konsumsi pakan dapat dipengaruhi oleh rasa dan aroma pakan. Suplementasi probiotik juga belum memberikan pengaruh terhadap konsumsi nutrien (BK, abu, BO, PK, SK, LK dan BETN). Kearl (1982) menyatakan sapi dengan BB 200 kg dan PBBH 0.5 kg ekor-1 -1 hari memiliki kebutuhan konsumsi BK sebesar 5.2 kg BK atau 2.6% bobot hidup, sedangkan pada penelitian ini konsumsi BK sapi Bali berkisar 4.12-4.19 kg ekor-1 hari-1 atau sekitar 2.08% bobot hidup. Selain itu kebutuhan PK pada sapi tersebut juga kurang, Kearl (1982) menyatakan kebutuhan protein sapi tersebut seharusnya 554 g ekor-1 hari-1 sedangkan konsumsi PK pada penelitian ini adalah 353-356 g ekor-1 hari-1. Hal ini menunjukkan konsumsi BK dan PK sapi Bali pada penelitian ini perlu ditingkatkan agar optimal pertumbuhannya. Tabel 8 Kecernaan nutrien ransum sapi Bali yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 Parameter
Perlakuan P0
P1
BK
60.36±2.15
62.45±5.56
BO
68.16±1.07
67.55±0.90
Abu
26.13±7.11
19.67±4.69
PK
63.65±2.54
64.16±1.87
LK
89.76±2.10
91.39±2.53
SK
44.80±3.25
43.85±1.15
BETN
73.93±2.19
69.27±1.15
TDN (%)
63.3±1.0
62.8±0.9
DE (Mcal kg-1)
2.79±0.04
2.77±0.04
ME (Mcal kg-1)
2.37±0.04
2.35±0.04
Kecernaan (%)
Keterangan : P0 = ransum basal, P1 = P0 + probiotik S. cerevisiae dan MR4
18
Kecernaan menunjukkan tinggi rendahnya kualitas bahan pakan. Kandungan nutrien yang mudah dicerna akan memiliki nilai gizi yang tinggi, sehingga nutrien tersebut dapat dimanfaatkan oleh hewan. Kecernaan juga digunakan sebagai penduga mutu ransum. Tabel 8 menunjukkan kecernaan nutrien ransum sapi Bali yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan isolat MR4. Secara umum tidak terdapat perbedaan yang nyata efek suplementasi terhadap kecernaan nutrien (BK, BO, abu, PK, LK, SK, BETN). Hal ini sejalan dengan konsumsi nutrien yang tidak berbeda antara perlakuan kontrol dan suplementasi probiotik. Efek suplementasi probiotik pada penelitian ini adalah pada performa sapi Bali (Tabel 9) tanpa mengganggu konsumsi pakan dan kecernaan nutrien. Suplementasi probiotik belum memberikan efek pada kecernaan TDN, DE dan ME (P<0.05). Sapi Bali memiliki efisiensi penggunaan ME untuk peningkatan PBBH yang rendah. Karakteristik ini membuat sapi Bali tidak sesuai dengan sistem pemeliharaan high input-high output. Sapi Bali lebih sesuai dengan sistem pemeliharaan low input-low output yang biasa dilakukan oleh petani (Quigley et al. 2014). Tabel 9
Pertambahan bobot badan dan efisiensi pakan sapi Bali yang disuplementasi probiotik S. cerevisiae dan MR4 Perlakuan
Parameter
P0
P1
197±18.98
200±16.43
330±180
440±220
207±21.66
213±13.81
Laju pertumbuhan (% hari )
4.97±2.56
6.69±3.48
Efisiensi pakan (%)
7.95±4.33
10.43±5.27
-1
-1
Bobot badan awal (kg ekor hari ) Pertambahan bobot badan harian (g ekor-1 hari-1) Bobot badan akhir (kg ekor-1 hari-1) -1
Keterangan : P0 = ransum basal, P1 = P0 + probiotik S. cerevisiae dan MR4
Pengaruh suplementasi probiotik terhadap pertambahan bobot badan dan efisiensi pakan ditunjukkan pada Tabel 9. Hasil pengukuran BB awal sapi Bali menunjukkan tidak terdapat perbedaan nyata, artinya bobot badan awal tidak menjadi pembatas jika diberikan perlakuan. Suplementasi probiotik tidak berpengaruh pada peningkatan pertambahan bobot badan harian (PBBH), bobot badan akhir, laju pertumbuhan dan efisiensi pakan sapi Bali. Rataan PBBH sapi perlakuan yang disuplementasi probiotik (P1) memiliki kecenderungan lebih tinggi dibanding perlakuan kontrol (P0), dengan rataan PBBH P1 dan P0 masingmasing sebesar 440 g ekor-1 hari-1 dan 330 g ekor-1 hari-1. Hal ini menunjukkan pemberian probiotik memiliki retensi pakan yang tinggi dibanding kontrol meskipun konsumsi dan kecernaannya sama. Nilai PBBH yang tidak berbeda ini diduga karena keragaman individu ternak dalam merespon pakan yang diberikan. Berdasarkan pengukuran TDN, DE dan ME maka perlakuan P0 memiliki kecenderungan nilai TDN, DE dan ME yang tinggi dibanding P1, namun tingginya nilai tersebut tidak mampu memperbaiki performa, terutama pada PBBH sapi Bali. Tingginya nilai DE dan ME pada perlakuan P0 seharusnya dapat dimanfaatkan untuk utilisasi nutrien dalam tubuh ternak sehingga meningkatkan produksi daging, dalam hal ini disertai dengan kenaikan bobot badan. Sapi Bali masih memiliki tingkah laku yang masih liar dan lebih cocok dipelihara secara
19
ekstensif di padang penggembalaan, sehingga apabila dipelihara secara intensif masih belum optimal pertumbuhannya. Hasil penelitian Mastika (2001) menunjukkan sapi Bali steer yang dipelihara feedlot diberi pakan berupa rumput gajah dan 4 kg konsentrat memiliki PBBH 851 g ekor-1 hari-1. Nilai ini jauh berbeda dengan hasil penelitian ini. Hasil pengukuran laju pertumbuhan menunjukkan rataan laju pertumbuhan sapi Bali pada perlakuan P0 dan P1 masing-masing sebesar 4.97% hari-1 dan 6.69% hari-1. Nilai ini menunjukkan semua sapi penelitian masih mengalami pertumbuhan, namun laju pertumbuhan sapi P0 dan P1 masih sama. Tingginya nilai PBBH pada perlakuan P1 diiringi dengan tingginya nilai efisiensi pakan yaitu sebesar 10.43%, lebih tinggi dibandingkan P0 efisiensi pakan sebesar 7.95%. Efisiensi pakan yang sama pada perlakuan P0 dan P1 diduga karena mutu konsentrat yang ada di peternakan tersebut kurang baik. Berdasarkan hasil analisa proksimat, kandungan PK konsentrat sebesar 8.67% dan TDN 67.28%. Kandungan PK konsentrat tidak jauh berbeda dengan kandungan PK Hi~fer yaitu selisih sebesar 0.67%. Hal ini menunjukkan perlu adanya perbaikan kualitas konsentrat yang diproduksi peternakan tersebut, terutama pada peningkatan TDN dan PK konsentrat. Sapi Bali merupakan sapi lokal yang memiliki laju pertumbuhan rendah dibandingkan sapi impor lainnya. Beberapa hasil penelitian menunjukkan kualitas pakan menjadi faktor penting dalam peningkatan performa sapi Bali, tentu berhubungan dengan manajemen pemberiannya. Pada penelitian ini perlakuan kontrol (P0) cenderung memiliki performa yang sama dengan perlakuan suplementasi probiotik (P1). Rendahnya performa perlakuan P0 dan P1 disebabkan oleh penggunaan molases yang tinggi pada konsentrat. Pemberian molases yang tinggi mampu meningkatkan selera makan ternak, namun jika penggunaannya terlalu banyak dapat menyebabkan konsentrat berair yang menyebabkan mutu konsentrat menurun dan menyebabkan konsentrat mudah berjamur serta daya simpannya rendah.
4 PEMBAHASAN UMUM Probiotik pada ruminansia merupakan suplemen mikroba hidup yang berfungsi memodifikasi ekosistem mikroorganisme rumen sehingga mempengaruhi karakteristik fermentasi rumen. Probiotik ini dapat berupa bakteri asam laktat, Propionibacteria, maupun yeast. Pada penelitian ini digunakan mikroba rumen (MR4) hasil isolasi dari rumen yang memiliki kemampuan mendetoksifikasi aflatoksin. Isolat ini kemudian dikombinasikan dengan yeast berupa S. cerevisiae yang merupakan probiotik yang mampu merangsang aktivitas fermentatif melalui reduksi oksigen dalam rumen. Hasil penelitian ini menunjukkan S. cerevisiae mampu hidup dalam kondisi anaerob sampai 4 jam inkubasi dan semakin meningkat sejalan dengan waktu inkubasi. Perlakuan kontrol yang tanpa disuplementasi S. cerevisiae tidak terdeteksi populasinya dan terjadi penurunan populasi bakteri rumen. Hal ini menunjukkan S. cerevisiae dapat berperan dalam peningkatan populasi bakteri rumen. Strain NRRL 12618 memiliki populasi tertinggi dan merangsang pertumbuhan bakteri rumen total. Peningkatan populasi bakteri total ini disebabkan oleh S. cerevisiae mampu mereduksi oksigen dalam rumen, sehingga aktivitas bakteri rumen meningkat.
20
Suplementasi probiotik tidak mempengaruhi pH dalam rumen. Hal ini menunjukkan pH masih tetap stabil sehingga aktivitas fermentatif dalam rumen tidak terganggu. Nilai pH yang stabil mengarah pada peningkatan populasi bakteri rumen total dan konsentrasi NH3 pada perlakuan suplementasi MR4. Probiotik MR4 merupakan bakteri rumen, sehingga jika disuplementasikan maka populasinya akan meningkat dalam rumen dan meningkatkan populasi bakteri total. Suplementasi S. cerevisiae juga mempengaruhi ekosistem mikroorganisme dalam rumen. Probiotik S. cerevisiae mampu bertahan hidup sementara (2-4 jam) dalam rumen dan mempengaruhi aktivitas mikroba rumen melalui penurunan konsentrasi oksigen dalam rumen yang akan menyebabkan kondisi ekologis dalam rumen berubah dan menjadi semakin anaerob jika disuplementasi dengan S. cerevisiae. Hal inilah yang mendukung aktivitas fermentatif dalam rumen sehingga meningkatkan populasi mikroba rumen serta terjadi penurunan populasi protozoa rumen pada 4 jam inkubasi. Peningkatan aktivitas fermentatif juga berdampak pada peningkatan konsentrasi VFA total dan parsial. Kondisi ini disebabkan oleh aktivitas fermentatif yang cepat pada perlakuan yang disuplementasi probiotik. Nilai pH yang stabil menunjukkan produksi asam laktat rendah karena asam laktat ini dikonversi menjadi asam propionat. Hal ini terlihat pada rasio A:P yang rendah pada penelitian. Rasio A:P yang rendah menunjukkan aktivitas Propionibacteria yang dominan. Selain itu kondisi pH yang stabil juga mampu meningkatkan konsentrasi isovalerat pada perlakuan yang disuplementasi probiotik. Peningkatan konsentrasi isovalerat berkaitan dengan utilisasi SK dalam rumen, karena bakteri selulolitik membutuhkan isoacid untuk meningkatkan pertumbuhannya dan mendegradasi serat (Yang 2002). Suplementasi probiotik kombinasi S. cerevisiae dan MR4 juga mampu menurunkan konsentrasi AFB1, yang ditunjukkan dengan tidak terdeteksinya konsentrasi AFB1 pada media cairan rumen. Kejadian ini diduga karena S. cerevisiae berperan dalam mengurangi penyerapan AFB1 melalui absorbsi toksin pada dinding sel S. cerevisiae, sementara MR4 menekan perombakan AFB1 menjadi metabolit lainnya atau dapat ditransformasi menjadi komponen non toxic atau less toxic. Pada perlakuan P1 terjadi peningkatan konsentrasi AFB1 karena AFB1 diserap dan dapat ditransformasi menjadi metabolit AFB1 lainnya. Penyerapan AFB1 pada yeast ini adalah melalui adhesi komponen dinding sel. Yeast mempunyai kemampuan mengikat AFB1. Komponen dinding sel yeast yaitu oligomanan yang setelah dimodifikasi secara kimiawi, diesterifikasi dapat mengikat AFB1 sampai 95% (Devegowda 1996). Secara umum konsentrasi AFB1 pada perlakuan ini relatif kecil karena tidak ditambahkan aflatoksin pada pakan uji, hal ini menunjukkan AFB1 yang diukur berasal dari pakan yang sudah terkontaminasi aflatoksin. Berdasarkan pada kemampuannya dalam meningkatkan fermentabilitas maka perlakuan kombinasi S. cerevisiae dan MR4 terpilih sebagai probiotik pada percobaan 3. Secara umum hasil kajian in vivo belum menunjukkan adanya perbaikan pada peningkatan konsumsi maupun kecernaan nutrien sapi Bali. Hal ini menunjukkan probiotik kurang palatabel dan belum mampu merangsang selera makan ternak, karena probiotik yang diberikan dalam jumlah sedikit dan tidak mempengaruhi aroma pakan. Namun hal ini juga menunjukkan efek suplementasi probiotik tidak mengganggu konsumsi dan palatabilitas. Kecernaan nutrien juga
21
sejalan dengan konsumsi nutrien, yaitu belum menunjukkan adanya perbedaan kecernaan pada perlakuan yang disuplementasi probiotik. Hal ini ditunjukkan dari nilai TDN juga menunjukkan nilai yang sama antara P0 dan P1. Dosis probiotik S. cerevisiae sebesar 2 x 1011 cfu hari-1 dan dosis MR4 sebesar 2 x 108 cfu hari-1 belum mampu meningkatkan kecernaan nutrien sehingga dosis pemberian probiotik pada percobaan in vivo perlu ditambahkan. Perlakuan P1 yang memiliki rataan PBBH lebih tinggi dibanding P0 masing-masing sebesar 440 kg ekor-1 hari1 dan 330 kg ekor-1 hari-1. Peningkatan PBBH juga diikuti dengan peningkatan laju pertumbuhan dan efisiensi pakan pada perlakuan P1. Tingginya PBBH pada perlakuan yang ditambahkan probiotik diduga karena retensi pakan yang tinggi pada sapi-sapi yang diberi probiotik.
5 SIMPULAN DAN SARAN Simpulan Kemampuan tumbuh dan merangsang pertumbuhan bakteri rumen bergantung pada strain S. cerevisiae. Salah satu strain yang berpeluang untuk dijadikan sebagai probiotik yeast adalah S. cerevisiae NRRL 12618. Suplementasi dengan S. cerevisiae NRRL 12618 akan meningkatkan fermentabilitas, produksi isoacid dan menurunkan rasio A:P. Kemampuan tersebut akan dapat ditingkatkan jika S. cerevisiae dikombinasikan dengan isolat MR4. Suplementasi probiotik kombinasi S. cerevisiae dengan dosis 2 x 1011 cfu hari-1 dan isolat MR4 dengan dosis 2 x 108 cfu hari -1 belum mampu meningkatkan PBBH, dan efisiensi pakan. Saran Strain S. cerevisiae NRRL 12618 merupakan probiotik yeast yang mudah diperoleh, diproduksi dan diberikan pada ternak. Pada percobaan in vivo penggunaan dosis probiotik untuk pakan ternak perlu ditingkatkan. Konsentrat yang diproduksi CV Anugrah Farm juga perlu ditingkatkan mutunya melalui peningkatan kandungan PK dan TDN.
22
DAFTAR PUSTAKA [AOAC] Association of Official Analytical Chemists. 1990. Official Methods of Analyses of the Association of Official Analytical Chemists International. 15th edition. Arlington, VA, USA. Bach A, Calsamiglia S, Stern MD. 2005. Nitrogen metabolism in the rumen. J. Dairy Sci. 88 (E. Suppl): E9-E21. Brody S. 1945. Bioenergetics and growth. New York: Hafner. Chaucheyras-Durand F, Walker ND, Bach A. 2008. Effect of active dry yeast on the rumen microbiol ecosystem: past, present and future. J. Anim Fed Sci and Technol. 145 : 5-26. Dawson KA, Newman KE, Boling JA. 1990. Effect of microbial supplements containing yeast and Lactobacilli on roughage-fed ruminal microbial activities. J. Anim Sci. 62 : 43-48. Dawson KA, Evans J, Kudupoje M. 2001. Understanding the adsorption characteristics of yeast cell wall preparations associated with mycotoxin binding. In: Lyons TP and Jacques KA (eds.) Science and Technology in the Feed Industry. Nottingham University Press, Nottingham, UK, pp 169181. Dehority BA. 2005. Rumen Microbiology. Nottingham University Press. UK. Devegowda G, Arvind BR, Morton MG. 1996. Saccharomyces cerevisiae and mannanoligosacharides to counteract aflatoxicosis in broilers. Proc. Aust. Poult. Sci. Symp. Sydney. 8: 103-106. Dobicki A, Pres J, Zachwieja A, Kwasnicki R. 2006. Saccharomyces cerevisiae preparations in the feeding of cows and their effect on milk yield and composition as well as rumen microorganisms. J Polish Agric Univ. 9, 4. Eaton DL, Gallagher EP. 1994. Mechanism of aflatoxin carcinogenesis. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 34: 135-172. El Hassan SM, Newbold CJ, Edwards IE, Topps JH, Wallace RJ. 1996. The effect of yeast culture on rumen fermentation, microbial protein flow from the rumen and live-weight gain in bulls given high cereal diets. J. Anim Sci. 62: 43-48. Fardiaz S. 1992. Mikrobiologi Pangan. PT Gramedia Pustaka Utama. Jakarta. General Laboratory Procedures. 1966. Department of Dairy Science. University of Wisconsin, Madison. Gibson GR, Roberfroid M. 1995. Dietary modulating of the human colonic microbiota: introducing the concept of prebiotics. J Nutr Sci. 125: 14011412. Harrison GA, Hemken RW, Dawson KA, Harmon RJ. 1988. Influence of addition of yeast culture supplement to diets of lactating cows on ruminal fermentation and microbial population. J Dairy Sci. 71: 2967-2975. Hartadi H, Reksohadiprodjo S, Lebdosukojo S, Tillman AD. 1980. Tabel Komposisi Pakan untuk Indonesia. Yogyakarta (ID): Gajah Mada University Press.
23
Hua ST, Baker JL, Flores-Espiritu M. 1999. Interactions of saprophytic yeasts with a nor mutant of Aspergillus flavus. Appl. Environ. Microbiol . 65 : 2738-2740. Jurkovich VE, Brydl, Kutasi J, Harnos A, Kovacs P, Konyves L, Muravolgyi Z, Febel H. 2014. The effect of Saccharomyces cerevisiae strains on the rumen fermentation in sheep fed with diets of different forage to concentrate rations. App Anim Research [Internet]. [diunduh 2014 Feb 15]. Tersedia pada http://www.tandfonline.com/loi/taar20. Kearl LC. 1982. Nutrient requirement of ruminants in developing countries. International Feedstuff Utah Agricultural Experiment Station. 1st Edition. Utah State University, Logan. Koul V, Kumar U, Sareen VK, Singh S. 1998. Mode of action of yeast culture (YEA-SACC 1026) for stimulation of rumen fermentation in buffalo calves. J. Sci. Food Agric. 77 : 407-413. Kowalik B, Skomial J, Pajak JJ, Taciak M, Majewska M, Belzecki G. 2012. Population of ciliates, rumen fermentation indicators and biochemical parameters of blood serum in heifers fed diets supplemented with yeast (Saccharomyces cerevisiae) preparation. Animal Science Paper and Report. 30 : 329-338. Krasaekoopt WB, Bhandari, Deeth H. 2003. Evaluation of encapsulation techniques of probiotics for yoghurt. International Dairy Journal. 13: 3-13. Kusumaningtyas E, Widiastuti R, Maryam R. 2006. Reduction of aflatoxin B1in chicken feed by using Saccharomyces cerevisiae, Rhizopus oligosporus and their combination. Mycopathologia. 162: 307-311. Lalman D. 2001. Nutrient Requirement of Beef Cattle. Oklahoma State University. USA. Lee SJ, Shin NH, Ok JU, Jung HS, Chu GM, Kim JD, Kim IH, Lee SS. 2009. Effects of dietary synbiotics from anaerobic microflora on growth performance, noxious gas emission and fecal pothogenic acteria population in weaning pigs. Asian-Aust. J. Anim. Sci. 22(8):1202-1208. Lynch HA, Martin SA. 2002. Effects of Saccharomyces cerevisiae culture and Saccharomyces cerevisiae live cells on in vitro mixed ruminal microorganism fermentation. J. Dairy Sci. 85: 2603-2608. Mattjik AA, Sumertajaya M. 2006. Perancangan Percobaan dan Aplikasi SAS dan Minitab. Jilid I. Edisi ke 2. Bogor (ID): IPB Press. McDonald P, Edwards RA, Greenhalgh JFD, Morgan CA. 2002. Animal Nutrition.. 6th Edition. New York (US) : Scientific and Tech John Willey & Sons. Inc. Masoero F, Gallo A, Moschini M, Piva G, Diaz D. 2007. Carryover of aflatoxin from feed to milk in dairy cows with low or high somatic cell counts. J. Anim Sci 9:1344-1350. Mastika LM. 2001. Prospek peternakan sapi Bali dalam mendukung pendapatan asli daerah. Seminar Nasional Peternakan Universitas Udayana Denpasar, Bali.
24
[NRC] National Research Council. 2001. Nutrient Requirements of Beef Cattle. 7th Ed. Washington DC (US) : National Research Council. Ogimoto K, Imai S. 1981. Atlas of Rumen Microbiology. Japan Scientific Societies Press, Tokyo, 231 p. Pantaya D, Morgavi DP, Silberberg M, Martin C, Suryahadi, Wiryawan KG, Boudra H. 2014. Low pH enhances rumen absorption of aflatoxin B1 and Ochratoxin A in sheep. Global Veterinaria. 13 (2): 227-232. Pinos-Rodriguez JM, Robinson PH, Ortega ME, Berry SL, Medoza G, Barcena R. 2008. Performance and rumen fermentation of dairy calves supplemented with Saccharomyces cerevisiae or Saccharomyces boulardii. J Anim Feed Sci. Technol. 140 : 223-232. Quigley SP, Dahlanuddin, Marsetyo, Pamungkas D, Priyanti A, Saili t, McLennan SR, Poppi DP. 2014. Metabolisable energy requirements for maintance and gain of liveweight of Bali cattle (Bos javanicus). Anim Product Sci. 54: 1311-1316. Roger V, Fonty G, Komisarczuk-Bony S, Gouet P. 1990. Effects of physicochemical factors on the adhesion to cellulose Avicel of the rumen bacteria Ruminococcus flavefaciens and Fibrobacter succinogenes ssp. Appl. Environ. Microbiol. 56: 3081-3087. Rose AH. 1987. Responses to the chemical environment. In: The Yeasts (Ed. Rose AH and Harrisson JS) Vol. 2, Academic Press, London (1987), pp. 540. Santin E, Paulilo AC, Maiorka A, Nakaghi LSO, Macan M, de Silva AVF, Alessi CA. 2003. Evaluation of the efficiency of Saccharomyces cerevisiae cell wall to ameliorate the toxic effects of aflatoxin in broilers. J. Poultry Sci. 2: 241-344. Seo JK, Kim SW, Kim MH, Upadhaya SD, Kam DK, Ha JK. 2010. Direct-fed microbials for ruminant Animals. Asian-Aust. J. Anim. Sci. 23 (12): 16571667. Shetty PH, Jespersen L. 2006. Saccharomyces cerevisiae and lactic acid bacteria as potential mycotoxin decontaminating agents. J Food. Sci. Tech. 17: 4855. Silberberg M, Chaucheyras-Durand F, Commun L, Mialon MM, Monteils V, Mosoni P, Morgavi DP, Martin C. 2013. Repeated acidosis challenges and live yeast supplementation shape rumen microbiota and fermentations and modulate inflammatory status in sheep. J Anim Feed Sci. Technol. 7: 1910– 1920. SNI. 2009. Standar Nasional Indonesia tentang Pakan Konsentrat Bagian 2 : sapi potong. Badan Standardisasi Nasional. Stein DR, Allen DT, Perry EB, Bruner JC, Gates KW, Rehberger TG, Mertz K, Jones D, Spicer LJ. 2006. Effects of feeding propionibacteria to dairy cows on milk yield, milk components, and reproduction. J. Dairy Sci. 89:111-125.
25
Suryahadi, K.G. Wiryawan, D. Evvyernie, D. Pantaya, & D. Sisriyeni. 2012. Penggunaan probiotik sebagai agen detoksifikasi mikotoksin pada ruminansia. Makalah Seminar Hasil-Hasil Penelitian Institut Pertanian Bogor. LPPM IPB Bogor. Suryahadi, Tjakradidjaja AS. 2012. Pengujian mutu dan efikasi probiotik BAL Biofeed dan Turrimavita. Laporan penelitian kerjasama Centras LPPM IPB dengan CV Sinar Aras. Suryahadi, Tjakradidjaja AS. 2013. Pengembangan teknologi probiotik untuk detoksifikasi aflatoksin dan peningkatan produktivitas sapi perah. Laporan Akhir Penelitian Unggulan sesuai Mandat Pusat. Sutardi T. 1980. Ikhtisar Ruminologi. Bahan penataran kursus peternakan sapi perah di Kayu Ambon. Bogor(ID) : Puslit Bioteknologi LIPI. Thrune MA, Bach, Ruiz-Moreno M, Stern MD, Linn JG. 2009. Effect of Saccharomyces cerevisiae on Ruminal pH and microbial fermentation in dairy cows. Livestock Science. 124: 261-265. Tilley JMA, Terry RA. 1963. A two-stage technique for the in vitro digestion of forage crops. J. British Grasslan Soc. 18: 104-111. Upadhaya SD, Sung HG, Lee CH, Lee SY, Kim SW, Jo KJ, Ha JK. 2009. Comparative study on the aflatoxin B1 degradation ability of rumen fluid from Holstein steers and Korean native goats. J. Vet. Sci. 10(1): 29-34. Upadhaya SD, Park MA, Jong K. 2010. Mycotoxins and their biotransformation in the rumen: A review. Asian-Aust. J. Anim. Sci. 23(9):1250-1260. Vyas D, Uwizeye A, Mohammed R, Yang WZ, Walker ND, Beauchemin KA. 2014. The effect of active dried and killed dried yeast on subacute ruminal acidosis, ruminal fermentation, and nutrient digestibility in beef heifers. J Anim Sci. 92 : 724-732. Wu SJ, Men X, Chen SJ. 2000. The analysis and evaluation of main nutrient components for herse bilineata tsingtauica. J Huaihai Technol. 9: 58-61. Yang CMJ. 2002. Response of forage fiber degradation by ruminal microorganism to brached-chain volatile fatty acids, amino acids, and dipeptides. J. Dairy Sci. 85: 1183-1190. Yang WZ, Beauchemin KA, Vedres DD, Ghorbani GR, Colombatto D, Morgavi DP. 2004. Effect of direct-fed microbial supplementation on ruminal acidosis, digestibility, and bacterial protein synthesis in continuous culture. J. Anim Feed Sci. Technol. 114: 179-193.
26
LAMPIRAN Lampiran 1. Pengaruh suplementasi S. cerevisiae terhadap populasi S. cerevisiae dalam rumen Sumber keragaman (sk) Total Strain SC Waktu inkubasi Strain SC*waktu inkubasi Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 44 2 4
Jumlah kuadrat (jk) 1.63 0.72 0.81
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 0.03 0.36 0.20
44.00 426.93 240.99
1.81 3.34 2.71
2.33 5.45 4.07
8
0.06
0.008
10.25
2.29
3.22
2 28
0.006 0.02
0.003 0.0008
4.09
3.34
5.45
Lampiran 2. Uji ANOVA pengaruh suplementasi S. cerevisiae terhadap populasi bakteri rumen total Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman bebas kuadrat tengah (kt) (sk) (db) (jk) Total 59 32.60 0.55 1.08 1.65 2.05 Strain SC 3 0.48 0.16 0.31 2.85 4.34 Waktu 4 2.65 0.66 1.29 2.61 3.85 inkubasi Strain 12 3.18 0.26 0.52 2.01 2.69 SC*waktu inkubasi Kelompok 2 6.83 3.41 6.57 3.24 5.21 Eror 38 19.45 0.51 Lampiran 3. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap pH rumen Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 19 3 4 12
Jumlah kuadrat (jk) 0.19 0.02 0.10 0.05
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 0.009 0.007 0.025 0.004
2.12 1.66 5.83
2.55 3.49 3.26
3.88 5.95 5.41
27
Lampiran 4. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi NH3 rumen Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman (sk) bebas kuadrat tengah (kt) (db) (jk) Total 19 4.81 0.25 2.79 2.55 3.88 Perlakuan 3 1.72 0.57 6.35 3.49 5.95 P0 vs P1,P2,P3 1 0.97 0.97 10.71 4.74 9.33 P1 vs P2 1 0.75 0.75 8.30 4.74 9.33 P3 vs P1,P2 1 0.004 0.004 0.05 4.74 9.33 Kelompok 4 1.99 0.49 5.53 3.25 5.41 Eror 12 1.08 0.09 Lampiran 5. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi VFA total dalam rumen Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman (sk) bebas kuadrat tengah (kt) (db) (jk) Total 19 2501.16 131.64 1.51 2.55 3.88 Perlakuan 3 984.68 328.22 3.78 3.49 5.95 P0 vs P1,P2,P3 1 757.11 757.11 8.72 4.75 9.33 P1 vs P2 1 66.85 66.85 0.77 4.75 9.33 P3 vs P1, P2 1 160.71 160.71 1.85 4.75 9.33 Kelompok 4 475.05 118.76 1.36 3.26 5.41 Eror 12 1041.43 86.78 Lampiran 6. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi asetat dalam rumen Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman bebas kuadrat tengah (kt) (sk) (db) (jk) Total 11 240.51 21.86 1.26 4.03 7.79 Perlakuan 3 102.41 34.14 1.97 4.76 9.78 Kelompok 2 34.03 17.01 0.98 5.14 10.92 Eror 6 104.07 17.34 Lampiran 7. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi propionat dalam rumen Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman bebas kuadrat tengah (kt) (sk) (db) (jk) Total 11 281.39 25.58 1.21 4.03 7.79 Perlakuan 3 128.62 42.87 2.03 4.76 9.78 Kelompok 2 26.32 13.16 0.62 5.14 10.92 Eror 6 126.44 21.07
28
Lampiran 8. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi butirat dalam rumen Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman bebas kuadrat tengah (kt) (sk) (db) (jk) Total 11 27.18 2.47 1.42 4.03 7.79 Perlakuan 3 16.16 5.39 3.09 4.76 9.78 Kelompok 2 0.56 0.28 0.16 5.14 10.92 Eror 6 10.46 1.74 Lampiran 9. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi isobutirat dalam rumen Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman bebas kuadrat tengah (kt) (sk) (db) (jk) Total 11 8.23 0.75 3.59 4.03 7.79 Perlakuan 3 1.99 0.66 3.19 4.76 9.78 Kelompok 2 4.99 2.49 11.97 5.14 10.92 Eror 6 1.25 0.21 Lampiran 10. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi valerat dalam rumen Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman bebas kuadrat tengah (kt) (sk) (db) (jk) Total 11 1.38 0.12 1.12 4.03 7.79 Perlakuan 3 0.37 0.12 1.11 4.76 9.78 Kelompok 2 0.34 0.17 1.49 5.14 10.92 Eror 6 0.67 0.11 Lampiran 11. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap konsentrasi isovalerat dalam rumen Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman (sk) bebas kuadrat tengah (kt) (db) (jk) Total 11 12.73 1.16 17.87 4.03 7.79 Perlakuan 3 8.01 2.67 41.24 4.76 9.78 P0 vs P1,P2,P3 1 1.76 1.76 27.12 5.99 13.74 P1 vs P2 1 1.21 1.21 18.65 5.99 13.74 P3 vs P1, P2 1 5.05 5.05 77.95 5.99 13.74 Kelompok 2 4.33 2.16 33.44 5.14 10.92 Eror 6 0.39 0.06
29
Lampiran 12. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap rasio asetat/propionat dalam rumen Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman bebas kuadrat tengah (kt) (sk) (db) (jk) Total 11 0.07 0.006 0.93 4.03 7.79 Perlakuan 3 0.02 0.008 1.19 4.76 9.78 Kelompok 2 0.004 0.002 0.31 5.14 10.92 Eror 6 0.04 0.006 Lampiran 13. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap populasi bakteri rumen total Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman (sk) bebas kuadrat tengah (kt) (db) (jk) Total 19 10.10 0.53 3.00 2.55 3.88 Perlakuan 3 2.52 0.84 4.74 3.49 5.95 P0 vs P1,P2,P3 1 1.38 1.38 7.77 4.75 9.33 P1 vs P2 1 1.14 1.14 6.43 4.75 9.33 P3 vs P1, P2 1 0.006 0.006 0.03 4.75 9.33 Kelompok 4 5.45 1.36 7.69 3.26 5.41 Eror 12 2.12 0.18 Lampiran 14. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik S. cerevisiae, isolat MR4 dan kombinasinya terhadap populasi protozoa rumen Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman (sk) bebas kuadrat tengah (kt) (db) (jk) Total 19 0.56 0.03 4.29 2.55 3.88 Perlakuan 3 0.14 0.05 6.91 3.49 5.95 P0 vs P1,P2,P3 1 0.14 0.14 20.56 4.75 9.33 P1 vs P2 1 0.00013 0.00013 0.02 4.75 9.33 P3 vs P1, P2 1 0.001 0.001 0.14 4.75 9.33 Kelompok 4 0.33 0.08 12.18 3.26 5.41 Eror 12 0.08 0.006 Lampiran 15. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi Hi~fer Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 7 7
Jumlah kuadrat (jk) 485.85 250.69 130.38 77.78
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 30.59 250.69 18.62 11.11
2.75 22.56 1.67
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
30
Lampiran 16. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi konsentrat Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 7 7
Jumlah kuadrat (jk) 11514.41 3700.69 2012..32 5801.39
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 767.63 3700.69 287.47 828.77
0.93 4.46
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 17. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi BK Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 7 7
Jumlah kuadrat (jk) 9192.86 3086.70 1638.85 4467.30
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 612.86 3086.70 234.12 638.19
0.96 4.84 0.37
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 18. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi BK metabolis Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 7 7
Jumlah kuadrat (jk) 509.20 0.42 470.02 38.75
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 33.95 0.42 67.15 5.53
6.13 0.08 12.13
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 19. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi abu Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 7 7
Jumlah kuadrat (jk) 131.23 44.05 23.39 63.79
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 8.75 44.05 3.34 9.11
0.96 4.83 0.37
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
31
Lampiran 20. Uji ANOVA pengaruh BO Sumber Derajat Jumlah keragaman bebas kuadrat (sk) (db) (jk) Total 15 7127.40 Perlakuan 1 2393.29 Kelompok 7 1270.66 Eror 7 3463.44
suplementasi probiotik terhadap konsumsi
Lampiran 21. Uji ANOVA pengaruh BO metabolis Sumber Derajat Jumlah keragaman bebas kuadrat (sk) (db) (jk) Total 15 394.98 Perlakuan 1 0.33 Kelompok 7 364.59 Eror 7 30.06
suplementasi probiotik terhadap konsumsi
Lampiran 22. Uji ANOVA pengaruh PK Sumber Derajat Jumlah keragaman bebas kuadrat (sk) (db) (jk) Total 15 68.76 Perlakuan 1 23.01 Kelompok 7 12.24 Eror 7 33.50
suplementasi probiotik terhadap konsumsi
Lampiran 23. Uji ANOVA pengaruh LK Sumber Derajat Jumlah keragaman bebas kuadrat (sk) (db) (jk) Total 15 10.07 Perlakuan 1 3.31 Kelompok 7 1.78 Eror 7 4.99
suplementasi probiotik terhadap konsumsi
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 475.16 2393.29 181.52 494.77
0.96 4.84 0.37
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 26.33 0.33 52.08 4.29
6.13 0.08 12.13
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 4.58 23.01 1.75 4.79
0.96 4.81 0.36
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 0.67 3.31 0.25 0.71
0.94 4.64 0.36
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
32
Lampiran 24. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi SK Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 7 7
Jumlah kuadrat (jk) 153.21 53.71 27.91 71.59
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 10.21 53.71 3.99 10.23
0.99 5.25 0.39
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 25. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap konsumsi BETN Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 7 7
Jumlah kuadrat (jk) 3670.68 1223.35 652.09 1795.24
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 244.71 1223.35 93.15 256.46
0.95 4.77 0.36
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 26. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan BK Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 3 3
Jumlah kuadrat (jk) 115.33 8.76 76.46 30.11
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 16.47 8.76 25.49 10.04
1.64 0.87 2.54
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 27. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan abu Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 3 3
Jumlah kuadrat (jk) 301.39 83.56 168.17 49.66
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 43.06 83.56 56.04 16.55
2.60 5.04 3.39
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
33
Lampiran 28. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan BO Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 3 3
Jumlah kuadrat (jk) 6.59 0.74 2.85 2.99
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 0.94 0.74 0.95 0.99
0.94 0.75 0.95
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 29. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan PK Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 3 3
Jumlah kuadrat (jk) 30.33 0.52 18.61 11.21
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 4.33 0.52 6.20 3.74
1.16 0.14 1.16
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 30. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan LK Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 3 3
Jumlah kuadrat (jk) 37.75 5.35 14.99 17.40
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 5.39 5.35 4.99 5.80
0.93 0.92 0.86
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 31. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan SK Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 3 3
Jumlah kuadrat (jk) 37.47 1.81 10.54 25.12
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 5.35 1.81 3.51 8.37
0.64 0.22 0.42
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
34
Lampiran 32. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap kecernaan BETN Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 3 3
Jumlah kuadrat (jk) 18.86 1.24 7.91 9.71
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 2.69 1.24 2.64 3.24
0.83 0.38 0.81
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 33. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap TDN Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 3 3
Jumlah kuadrat (jk) 5.78 0.45 2.61 2.71
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 0.82 0.45 0.87 0.90
0.91 0.50 0.96
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 34. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap DE Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 3 3
Jumlah kuadrat (jk) 0.011 0.001 0.005 0.005
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 0.0012 0.001 0.002 0.002
0.91 0.50 0.96
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 35. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap ME Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 3 3
Jumlah kuadrat (jk) 0.011 0.0009 0.005 0.005
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 0.001 0.0009 0.001 0.001
0.91 0.50 0.96
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 36. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap bobot badan awal Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 7 7
Jumlah kuadrat (jk) 4112.23 6.89 3128.61 976.73
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 274.15 6.89 446.94 139.53
1.96 0.05 3.20
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
35
Lampiran 37. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap pertambahan bobot badan harian (PBBH) Sumber keragaman (sk) Total Perlakuan Kelompok Eror
Derajat bebas (db) 15 1 7 7
Jumlah kuadrat (jk) 1299900 6400 577700 715800
Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 86660 6400 82528.6 102257
0.85 0.06 0.81
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
Lampiran 38. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap bobot badan akhir Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman bebas kuadrat tengah (kt) (sk) (db) (jk) Total 15 5657.48 377.17 4.13 3.51 6.31 Perlakuan 1 26.26 26.26 0.29 5.59 12.25 Kelompok 7 4992.11 713.16 7.81 3.79 6.99 Eror 7 639.11 91.30 Lampiran 39. Uji ANOVA pengaruh suplementasi probiotik terhadap laju pertumbuhan Sumber Derajat Jumlah Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 keragaman bebas kuadrat tengah (kt) (sk) (db) (jk) Total 15 304.50 20.3 0.80 3.51 6.31 Perlakuan 1 1.97 1.97 0.08 5.59 12.25 Kelompok 7 126.02 18.00 0.71 3.79 6.99 Eror 7 176.51 25.22 Lampiran 40. Uji ANOVA pengaruh pakan Sumber Derajat Jumlah keragaman bebas kuadrat (sk) (db) (jk) Total 15 743.90 Perlakuan 1 3.88 Kelompok 7 331.35 Eror 7 408.68
suplementasi probiotik terhadap efisiensi Kuadrat Fhitung F0.05 F0.01 tengah (kt) 49.59 3.88 47.33 58.38
0.85 0.07 0.81
3.51 5.59 3.79
6.31 12.25 6.99
36
RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Brebes, Jawa Tengah pada tanggal 23 April 1990. Penulis merupakan anak kedua dari dua bersaudara dari pasangan Bapak Jauri dan Ibu Taswi. Penulis menyelesaikan program sarjana pada Mayor Nutrisi dan dan Teknologi Pakan dengan Minor Budidaya dan Pengolahan Hasil Ternak Unggas pada tahun 2012 di Departemen Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan (INTP), Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor. Penulis diterima sebagai mahasiswa Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor melalui program Beasiswa Pendidikan Pascasarjana dalam Negeri (BPPDN) tahun 2013. Selama mengikuti perkuliahan di Sekolah Pascasarjana IPB penulis aktif dalam kegiatan kemahasiswaan. Penulis mengikuti program International Summer Course di Bogor yang diselenggarakan pada tanggal 18 - 24 September 2014 oleh Institut Pertanian Bogor dan kolaborasi beberapa Universitas di Jepang (Ibaraki University, University of the Ryukyus, Kagawa University, Tokyo University of Agriculture and Technology dan Ehime University) dengan tema “Practical Agriculture Sciences toward Regional Sustainability (PARS)”. Pada kegiatan tersebut penulis mempresentasikan proposal penelitiannya dengan judul “Production of Encapsulated Rumen Microbe probiotic and Saccharomyces cerevisiae for Improving Productivity of Beef Cattle”. Penulis menjadi asisten praktikum mata kuliah Nutrisi Ternak Perah pada tahun 2014 dan asisten praktikum Mikrobiologi Nutrisi pada tahun 2015. Penulis dan tim berhasil meraih juara 2 lomba vocal group pada kegiatan kesenian Dekan Cup 2014 yang diselenggarakan oleh BEM Fakultas Peternakan Institut Pertanian Bogor. Penulis menjadi panitia pada kegiatan International Seminar on Animal Industri (ISAI) tahun 2015 dengan tema “Sustainable Animal Production for Better Human Welfare and Environment”. e-mail :
[email protected]
