400/800
Phencyclidine Fencyklidin (PCP)
Informace pro objednání COBAS INTEGRA Abuscreen OnLine Phencyclidine Preciset DAT Plus I CAL 1-6 C.f.a.s. DAT Qualitative Plus C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical Control Set DAT I PreciPos DAT Set I PreciNeg DAT Set I Control Set DAT Clinical PreciPos DAT Clinical PreciNeg DAT Clinical
200 testů 6 × 5 mL 6 × 5 mL 3 × 5 mL
Kat. č. 20738042 122 Systémové-ID 07 3804 2 Kat. č. 03304671 190 Kat. č. 03304698 190 Kat. č. 04590856 190 Kat. č. 03312950 190
2 × 10 mL 2 × 10 mL Kat. č. 04500873 190 2 × 10 mL 2 × 10 mL
Systémové informace COBAS INTEGRA Abuscreen OnLine Phencyclidine (PCP) Test PCPS, test-ID 0-510 pro semikvantitativní stanovení Test PCPQL, test-ID 0-610 pro kvalitativní stanovení Test PCPQC, test-ID 0-110 pro kvalitativní stanovení použitím C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical Použití Phencyclidine (PCP) je diagnostický in vitro test pro semikvantitativní a kvalitativní detekci fencyklidinu a jeho metabolitů v lidské moči při koncentraci cut-off 25 ng/mL na systémech COBAS INTEGRA. Mohou být získány semikvantitativní výsledky testu, které umožňují laboratořím určit využití stanovení jako součást programu kontroly kvality. Semikvantitativní stanovení je určeno pro měření vhodného naředění vzorku pro potvrzení konfirmační metody, jako je plynová chromatografie / hmotnostní spektrometrie (GC/MS). Phencyclidine může být použit jen jako předběžný analytický výsledek. Pro získání potvrzeného analytického výsledku musí být použita specifičtější alternativní chemická metoda. Preferovanou konfirmační metodou je GC/MS.1 Výsledky testů uživání drog, zvláště jsou-li předběžně pozitivní, je třeba hodnotit s klinickým zřetelem a odborným úsudkem. Souhrn Fencyklidin (PCP) je arylcyklohexylamin se silnými analgetickými a anestetickými vlastnostmi.1,2,3,4,5,6 Byl vyvinutý původně jako nitrožilní anestetikum, výskyt duševních vedlejších účinků vyloučil jeho možné klinické využití. PCP nebyl nikdy schválen pro použití na lidech kvůli post-anestetickému zmatení a deliriu, které se objevily během klinických studií. PCP je při ilegálním prodeji na ulici známý pod různými jmény jako např. "andělský prach", zatímco pojmenování jako "supergrass" znamená kombinaci s marihuanou. PCP má halucinogenní, CNS (centrální nervový systém)-stimulující a CNS-uklidňující vlastnosti, jejichž projev je závislý na dávce a druhu.4 PCP a jeho strukturální obdoba, ketamin, jsou antagonisté receptoru NMDA (N-metyl-D-aspartát).2,5 Známý jako disociační anestetikum, vytváří změny osobnosti, pocity disociace od prostředí a sebe. Dextrometorfan, prostředek proti kašli, může vyvolat podobné účinky, je-li užíván ve vysokých dávkách.6 Prášek z PCP, rozpustný ve vodě, může být užit orálně, šňupán, podáván nitrožilně nebo kouřen. Typická dávka k dostání na ulici 2012-03, V 7 CS
Vyznačuje analyzátory, na kterých lze sadu cobas c použít
(1-10 mg) může způsobit tachykardii, hypertenzi, halucinace, apatii, letargii, sensorickou izolaci a ztrátu koordinace. Vzrušení a neklid je rovněž průvodním znakem a může vést k bezdůvodné zuřivosti, kombinuje-li se s ostatními halucinogeny. Opakované užívání PCP může způsobit závislost a vyšší dávky mohou vyvolat symptomy podobné schizofrenii a mohou vyústit v křeče a dlouhotrvající nebo smrtelné kóma.2,6 PCP je metabolizován kruhovou hydroxylací a oxidací enzymy cytochromu P450.3,7 Metabolit aminokyseliny PCP se vyskytuje ve významných množstvích v lidské moči.8 U lidí byly pozorovány významné rozdíly v trvání odbourání PCP, nicméně fáze II metabolismu sulface PCP a glukuronidace mohly také přispět k rozdílům při době trvání rozpadu PCP.7 Princip testu Kinetická interakce mikročástic v roztoku (KIMS)9 měřená změnou intenzity procházejícího světla. V případě absence drogy ve vzorku se volné protilátky váží na látku vázanou na mikročástici, a vytváří agregáty. Jak probíhá agregace ve vzorku, který neobsahuje drogu, absorbance roste. Jestliže vzorek moči obsahuje dotyčnou drogu, probíhá kompetice s částicemi s navázaným derivátem látky o volné protilátky. Protilátka vázaná na drogu ve vzorku není již dostupná pro podporu agregace částic a následný vznik struktury částic je inhibován. Přítomnost drogy ve vzorku úměrně snižuje nárůst absorbance vůči koncentraci drogy ve vzorku. Obsah drogy ve vzorku je určen poměrem ke známé hodnotě cut-off koncentrace drogy. Reagencie - pracovní roztoky Diluent vzorku (SD)
Pufr obsahující stabilizátor a 0.09% azid sodný.
Reagencie s protilátkou (AB)
Protilátka proti PCP (monoklonální myší) v pufru, stabilizátor a 0.09 % azid sodný. Mikročástice s konjugovaným derivátem PCP v pufru a 0.09 % azid sodný.
Reagencie s mikročásticemi (MP)
SD je v pozici A, AB je v pozici B a MP je v pozici C.
1/5
PCP
Stanovení drog
4 0 0 /8 0 0 Pipetovací sekvence Analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus R1 = AB R2 = SD R3 (SR) = MP Analyzátor COBAS INTEGRA 800
R1 = SD R2 = AB R3 (SR) = MP
Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v části 1 / Úvod této Příručky metod. Zacházení s reagenciemi Analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus Všechny nové (nepropíchnuté) cobas c packy musí být míchány 1 minutu použitím mixéru kazet před umístěním na palubu přístroje. Všechny cobas c packy, které jsou již v užívání, musí být na počátku každého týdne (jednou týdně) promíchány stejným způsobem. Analyzátor COBAS INTEGRA 800 Reagencie je automaticky promíchána 1 minutu po propíchnutí cobas c packu a půl minuty při sekvenci Begin of Day.
Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny, uvedené v dokumentaci pro analyzátory. Instrukce, specifické pro jednotlivé analyzátory, vyhledejte v uživatelské příručce. Aplikace pro moč COBAS INTEGRA 400/400 plus definice testu Způsob měření Způsob výpočtu abs. Způsob reakce Směr reakce Start reakce Vlnová délka A Rozsah testu
Semikvantitativní Absorbance Koncový bod R1-R2-S-SR Nárůst SR 520 nm 0-50 ng/mL
Kvalitativní Absorbance Koncový bod R1-R2-S-SR Nárůst SR 520 nm 0-3000
s následným ředěním Faktor postdiluce Výpočet první/posl. Jednotka
0-500 ng/mL 10 doporučenoa 49/67 ng/mL
Ne 49/67
Uskladnění a stabilita
a) Používat, pokud se jedná o předběžný výsledek pro analýzu GC/MS.
Doba skladování při 2-8 °C
Pipetovací parametry
V přístroji při použití při 10-15 °C Analyzátor COBAS INTEGRA 800 V analyzátoru při použití při 8 °C
R1 R2 Vzorek SR Celkový objem
Viz datum exspirace na štítku obalu cobas c. Analyzátory COBAS INTEGRA 400/400 plus 69 dní 89 dní
Doba stability reagencie v analyzátoru při použití začíná od momentu napíchnutí cobas c packu. Reagencie nemrazit. Reagencie, které byly zamraženy, je nutné odstranit. Odběr vzorků a příprava Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou přijatelné: Moč: Vzorky moče odebírejte do čistých skleněných či plastových nádobek. Vzorky čerstvé moče nepotřebují zvláštní předúpravu nebo zacházení, ale měly by být ochráněny před kontaminací při pipetování. pH vzorků by mělo být ve fyziologickém rozmezí 5 až 8. Aditiva a konzervans nejsou potřebné. Doporučujeme uchovávat vzorky při teplotě 2-8 °C a zpracovat je do 5 dnů od odběru.10 Při delším skladování doporučujeme vzorky zamrazit. Velmi zakalené vzorky před analýzou zcentrifugujte. Příměs či naředění vzorků může způsobit chybný výsledek. Při podezření, že byl vzorek znehodnocen, proveďte nový odběr. Testování validity vzorku je vyžadováno jen u vzorků odebíraných podle Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs.11 Varování: Ředění vzorku by mělo být použito jen při jejich přípravě pro GC/MS, ale jinak není vhodné. Postup ředění, je-li použit, by měl být validován.
R1 R2 Vzorek SR Celkový objem
PCP
µL µL µL µL µL
Diluent (H2O) 6 µL 15 µL 6 µL 12 µL
COBAS INTEGRA 800 definice testu Způsob měření Způsob výpočtu abs. Způsob reakce Směr reakce Start reakce Vlnová délka A Rozsah testu s následným ředěním Faktor postdiluce Výpočet první/posl. Jednotka
Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky".
53 42 10 15 159
Semikvantitativní Absorbance Koncový bod R1-R2-S-SR Nárůst SR 520 nm 0-50 ng/mL 0-500 ng/mL 10 doporučenob 44/78 ng/mL
Kvalitativní Absorbance Koncový bod R1-R2-S-SR Nárůst SR 520 nm 0-3000 Ne 44/78
b) Používat, pokud se jedná o předběžný výsledek pro analýzu GC/MS.
Pipetovací parametry
2/5
42 53 10 12 141
µL µL µL µL µL
Diluent (H2O) 6 µL 6 µL 6 µL 6 µL
2012-03, V 7 CS
Stanovení drog
4 0 0 /8 0 0 Kalibrace Kalibrátory Semikvantitativní aplikace PCPS, 0-510 Preciset DAT Plus I calibrators, CAL 1-4 0, 12,5, 25, 50 ng/mL fencyklidin (DATS9, systémové-ID 07 6798 0) Kvalitativní aplikace PCPQL, 0-610 Preciset DAT Plus I calibrators, CAL 1 0 ng/mL nebo deionizovaná voda a Preciset DAT Plus I calibrators, CAL 3c nebo C.f.a.s. DAT Qualitative Plus 25 ng/mL (DATQ1, systémové-ID 07 6744 1)
Koncentrace drog v Control Set DAT I a Clinical byly verifikovány GC/MS. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí definované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výsledky Systémy COBAS INTEGRA vydávají výsledky s následujícím označením: Semikvantitativní hodnocení výsledků Označení Bez označení
TEST RNG POS 25
PCPQC, 0-110 Kalibrátory Preciset DAT Plus I či IId, CAL 1 0 ng/mL nebo deionizovaná voda a C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical 25 ng/mL (DATQ5, systémové-ID 07 6880 4) Pro kvalitativní aplikace je určená hodnota cut-off 1000.
Semikvantitativní aplikace Lineární interpolace Kvalitativní aplikace Lineární regrese
Opakování kalibrace Doporučen duplikát Kalibrační interval COBAS INTEGRA 400/400 plus: Každá šarže, každých 70 dní a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality COBAS INTEGRA 800: Každá šarže, každých 30 dní a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Kalibrační křivka je vytvářena použitím kalibrátorů. Kalibrátory musí být umístěny podle hodnot koncentrace od nejvyšší po nejnižší do CAL/QC stojánku. Vytvořená křivka je uložena v paměti systému COBAS INTEGRA a podle potřeby znovu vyvolána. Návaznost: Tato metoda byla standardizována dle primární referenční metody (GC/MS). Kontrola kvality Kontrola kvality
Control Set DAT I PreciPos DAT Set I (DAT1P, systémové-ID 07 6753 0) PreciNeg DAT Set I (DAT1N, systémové ID 07 6754 9) nebo Control Set DAT Clinical PreciPos DAT Clinical (DATCP, systémové-ID 07 6879 0) PreciNeg DAT Clinical (DATCN, systémové-ID 07 6878 2)
Pořadí kontrol Kontrola po kalibraci
Určeno uživatelem Doporučena
Rozmezí hodnot < 25 ng/mL < 0 ng/mL > 50 ng/mL ≥25 ng/mL
Výše uvedená rozmezí hodnot jsou založena na hladině cut-off 25 ng/mL. Kvalitativní hodnocení výsledků Označení Bez označení TEST RNG POS 1000
c) Nepoužívejte Preciset DAT Plus I, CAL 3, kalibrujete-li Opiates 300/2000 kvalitativním stanovením 2000 ng/mL (test OP2QL, test-ID 0-410). d) Preciset DAT Plus II, CAL 1, nejsou obecně vyžadovány pro kalibraci fencyklidinu, mohou být ovšem použity jako alternativní hladina 0 ng/mL pro DATQ5, systémové-ID 07 6880 4.
Typ kalibrace
COBAS INTEGRA Negativní Negativní Pozitivní Pozitivní
COBAS INTEGRA Negativní Negativní Pozitivní Pozitivní
Rozmezí hodnot < 1000 <0 > 3000 ≥ 1000
Uvedená rozmezí jsou založena na přiřazení hodnoty 1000 ke cut-off 25 ng/mL. Semikvantitativní hodnocení výsledků Semikvantitativní předběžně pozitivní výsledky by měly být použity v laboratořích pro měření vhodného naředění vzorku potvrzením konfirmační metody jako je GC/MS. Rovněž umožňuje laboratoři zřídit kontrolní postupy a stanovit využití kontroly. Upozornění: Při použití funkce následného ředění (ředění 1:10) musí mít ředěný výsledek hodnotu alespoň poloviny hodnoty cut-off analytu x10, aby se zaručilo, že vzorek nebyl příliš naředěn. Pokud klesne ředěný výsledek pod polovinu hodnoty cut-off analytu x10, opakujte vzorek s menším naředěním. Ředění, která mají výsledky v blízkosti cut-off, poskytují nejpřesnější stanovení. Chcete-li určit koncentraci předběžně pozitivního vzorku, vynásobte výsledek odpovídajícím faktorem ředění. Ředění by mělo být použito jen při přípravě hodnot pro GC/MS. Omezení - interference Informace o látkách testovaných tímto stanovením jsou uvedeny v kapitole "Specifické údaje o využití" tohoto dokumentu. Možné však je, že mohou interferovat i jiné komponenty nebo faktory, které mohou negativně ovlivnit výsledek (např. technická chyba, nebo chyba postupu). Předběžný pozitivní výsledek dosažený touto metodou indikuje přítomnost PCP v moči. Nestanoví však míru intoxikace. POTŘEBNÝ KROK Programování speciálního mytí: Použití speciálních mycích cyklů je nutné při zpracovávání určitých kombinací testů na analyzátorech COBAS INTEGRA. Pro další pokyny čtěte Návody metod, Úvod, Extra mycí cykly. Tam, kde je to vyžadováno, musí být před vydáním výsledků provedeno programování speciálního mytí/zamezení přenosu mezi vzorky (carry-over).
Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. 2012-03, V 7 CS
3/5
PCP
Stanovení drog
4 0 0 /8 0 0 Specifické údaje o využití Reprezentativní údaje o využití pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. Výsledky, získané v různých laboratořích, se mohou lišit. Preciznost Preciznost byla stanovena podle interního postupu zpracováním sérií kontrol ve 40 replikátech, jednou denně, po dobu 5 dnů. Následující výsledky byly získány analyzátorem COBAS INTEGRA 700: Semikvantitativní preciznost Opakovatelnoste Level 1 Level 2 Level 3 Level 4 Mezilehlá preciznostf Level 1 Level 2 Level 3 Level 4
Průměr ng/mL 12 20 24 31
SD ng/mL 1.1 0.8 1.1 1.6
VK % 9.6 4.3 4.6 5.2
Průměr ng/mL 12 20 24 31
SD ng/mL 1.2 1.1 1.4 2.2
VK % 10.0 5.5 5.7 7.1
Analytická specifičnost Specifičnost stanovení COBAS INTEGRA Phencyclidine byla zjištěna vytvořením inhibiční křivky pro jednu každou uvedenou sloučeninu a určením přibližného množství každé sloučeniny, která by byla ekvivalentní reaktivitě PCP při hodnotách cut-off 25 ng/mL. Přibližné ng/mL odpovídající 25 ng/mL PCP
Přibl. % křížové reaktivity
30
83
92857 137787
0.03 0.02
Sloučenina Thienylcyklohexylpiperidin (TCP) Chlorprothixen Dextromethorfan
e) opakovatelnost = preciznost v sérii f) mezilehlá preciznost= celková preciznost/preciznost mezi sériemi/preciznost mezi dny
Kvalitativní preciznost cut-off (x) 0.8x 1.2x
Počet testovaných
Správný výsledek
Hladina spolehlivosti
200 200
200 200
>95% negativní odečet >95% pozitivní odečet
Spodní detekční limit testu 5.0 ng/mL Spodní detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 2 standardní odchylky nad nulovým kalibrátorem (nulový kalibrátor + 2 SD, opakovatelnost, n = 40). Správnost 100 vzorků moče získaných v klinických laboratořích, kde byly stanoveny jako negativní v panelu látek jinou technologií, bylo hodnoceno na PCP na systému COBAS INTEGRA. Všech 100 klinických vzorků bylo negativních vůči cut-off 25 ng/mL. 50 vzorků moče s předběžně pozitivním výsledkem, stanoveným komerčně dostupnou enzymoimunoanalýzou a potvrzených metodou GC/MS na PCP, bylo rovněž vyhodnoceno na analyzátoru COBAS INTEGRA 700. Všech 50 vzorků bylo pozitivních stanovením COBAS INTEGRA Phencyclidine vůči cut-off 25 ng/mL. GC/MS +
-
+
50
0
-
0
0
Analyzátor COBAS INTEGRA 700
PCP
4/5
2012-03, V 7 CS
Stanovení drog
4 0 0 /8 0 0 Interference léčiv Následující sloučeniny byly přidány k alikvotům poolované normální lidské moči v koncentraci 100000 ng/mL. Žádná z těchto sloučenin při testování soupravou nevykázala křížovou reaktivitu větší nebo rovnou 0.5 %. Acetaminofen Kys. acetylsalicylová Aminopyrin Amitriptylin Amobarbital d-Amfetamin l-Amfetamin Ampicilin Kys. askorbová Aspartam Atropin Benzokain Benzoylecgonin (metabolit kokainu) Benzfetamin Butabarbital Kofein Chlornan vápenatý Karbamazepin Chlordiazepoxid Chlorochin Chlorfeniramin Chlorpromazin Kokain Kodein Cyklobenzaprin Dextropropoxyfen Diazepam Difenhydramin
Ibuprofen Imipramin Izoproterenol Ketamin Lidokain LSD MDA MDMA Melanin Meperidin Metadon d-Metamfetamin Metaqualon Metylfenidat Metyprylon Morfin Naloxon Naltrexon Naproxen Niacinamid Nordoxepin Noretindron l-Norpseudoefedrin Ofloxacin Oxazepam Penicilin G Pentobarbital β-Fenethylamin Fenobarbital
Dopamin Doxepin Doxylamin Ecgonin Ecgonin metylester d-Efedrin d,l-Efedrin l-Efedrin Epinefrin Erythromycin Estriol Fenoprofen Furosemid Kys. gentisová Glutethimid Guajakol glyceroléter Hydrochlorotiazid p-Hydroxyamfetamin Hydroxyzin
Fenothiazin Fentermin Fenylbutazon d-Fenylpropanolamin d,l-Fenylpropanolamin Prokain Promethazin d-Pseudoefedrin l-Pseudoefedrin Quinidin Chinin Sekobarbital Sulindac Tetracyklin Δ9THC-9-karboxylová kys. Tetrahydrozolin Trifluoperazin Tyramin Verapamil
Odkazy 1. Karch SB, ed. Drug Abuse Handbook. Boca Raton, FL: CRC Press LLC 1998. 2. Hardman JG, Limbird LE, Gilman A, eds. Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics. 10th ed. New York, NY: McGraw Hill Pub Co 2001. 3. Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man. 7th ed. Foster City, CA: Biomedical Publications 2004. 4. Clouet DH, ed. Phencyclidine: An Update. NIDA Research Monograph 64. National Institute on Drug Abuse 1986. 5. De Souza EB, Clouet D, London ED, eds. Sigma, PCP, and NMDA receptors. Research Monograph 133. National Institute on Drug Abuse 1993. 6. Leshner AI. Hallucinogens and dissociative, including LSD, PCP, Ketamine, dextromethorphan. NIH Publication Number 01-4209, NIDA Research Report Series 2001. 7. Laurenzana EM, Owens SM. Metabolism of phencyclidine by human liver microsomes. Drug Metab Dispos 1997;25:557-663. 8. ElSohly MA, Little TL Jr, Mitchell JM, et al. GC/MS analysis of phencyclidine acid metabolite in human urine. J Anal Toxicol 1988;12:180-182. 9. Armbruster DA, Schwarzhoff RH, Pierce BL, et al. Method comparison of EMIT II and ONLINE with RIA for drug screening. J Forensic Sci 1993;38:1326-1341. 10. Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory; Approved Guideline. 2nd ed. (C52-A2). Clinical and Laboratory Standards Institute 2007;27:33. 11. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs (Revised Specimen Validity Testing). Fed Regist 2004;69:19643-19673. Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla. Oddělení tisíců se nepoužívá. Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu. © 2012 Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com
Jakákoliv modifikace přístroje, jak je zde uvedeno, vyžaduje validaci laboratoří.
2012-03, V 7 CS
5/5
PCP
