PENGARUH VARIETAS KEDELAI, MULSA JERAMI DAN APLIKASI PGPR TERHADAP PENYAKIT PUSTUL BAKTERI DAN KELIMPAHAN BAKTERI RIZOSFER TITA WIDJAYANTI

                   

PENGARUH VARIETAS KEDELAI,  MULSA JERAMI DAN APLIKASI PGPR  TERHADAP PENYAKIT PUSTUL BAKTERI  DAN KELIMPAHAN BAKTERI RIZOSFER                       

TITA WIDJAYANTI                                                   

SEKOLAH PASCASARJANA  INSTITUT PERTANIAN BOGOR  BOGOR  2012

             

PERNYATAAN MENGENAI TESIS DAN SUMBER  INFORMASI     

Dengan ini saya menyatakan bahwa tesis Pengaruh Varietas Kedelai, Mulsa  Jerami  dan  Aplikasi  PGPR  terhadap  Penyakit  Pustul  Bakteri  dan  Kelimpahan  Bakteri Rizosfer adalah karya saya dengan arahan dari komisi pembimbing dan  belum  diajukan  dalam  bentuk  apa  pun  kepada  perguruan  tinggi  mana  pun.  Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun  tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan  dalam Daftar Pustaka di bagian akhir tesis ini.     

Bogor,   Februari 2012     

Tita Widjayanti  NRP A352090021

             

ABSTRACT   

TITA  WIDJAYANTI.  Effect  of  Soybean  Variety,  Straw  Mulch  and  PGPR  Application  to  Bacterial  Pustule  Disease  and  The  Abundance  of  Rizhosphere  Bacteria.   Under   direction   of  ABDJAD   ASIH   NAWANGSIH   and   KIKIN  HAMZAH MUTAQIN   

Bacterial pustule caused by Xanthomonas axonopodis pv. glycines is one  of  important  bacterial  diseases  of  soybean  in  Indonesia.  The  development  of  alternative  control  of  the  disease  is  required  to  support  Integrated  Pests  and  Diseases Management for sustainable agriculture. This research was conducted to  observe  the  effect  of  straw  mulch,  Plant  Growth  Promoting  Rhizobacteria  (PGPR)  on  the  incidence  of  bacterial  pustule  disease  and  the  abundance  of  chitinolytic  bacteria,  heat  tolerant  bacteria,  and  fluorescence  bacteria  on  two  soybean varieties. All of the factors as combinations were not significant to affect  the value of total area under disease progress curve (AUDPC) of bacterial pustule.  Factor  that  significantly  affected  the  values  of  AUDPC  was  varieties.  Gepak  Kuning  variety  has  lowest  AUDPC  value  compare  to  Anjasmoro  variety.  In  addition, combination of Gepak Kuning variety and straw mulch showed AUDPC  value. Abundance of fluorescence bacteria on soybean rhizosphere treated with  PGPR is significantly higher compared with those on plants without PGPR. The  other treatments and their combination did not significantly affect the abundance  of rhizosphere bacteria.   

Keyword: 

PGPR,  rhizosphere  bacteria,  soybean  variety,  straw   mulch,  Xanthomonas axonopodis pv. glycines.

             

RINGKASAN   

TITA WIDJAYANTI.  Pengaruh  Varietas  Kedelai,  Mulsa  Jerami  dan  Aplikasi  PGPR  terhadap  Penyakit  Pustul  Bakteri  dan  Kelimpahan  Bakteri  Rizosfer.  Dibimbing   oleh   ABDJAD   ASIH   NAWANGSIH   dan   KIKIN   HAMZAH  MUTAQIN.   

Penyakit pustul bakteri merupakan penyakit penting yang mengakibatkan  rendahnya produksi kedelai di Indonesia. Kehilangan hasil yang diakibatkan oleh  penyakit  ini dapat  mencapai 50%. Penyebab penyakit  pustul ini adalah bakteri  Xanthomonas  axonopodis  pv.  glycine.  Di  Indonesia,  pengendalian  penyakit  pustul  bakteri  yang  bersifat  ramah  lingkungan  diperlukan  untuk  mendukung  sistem pertanian berkelanjutan dan mengurangi ketergantungan terhadap pestisida  sintetik.  Pengendalian  Hama  dan  Penyakit  Terpadu-Biointensif  (PHT-Biointensif)  merupakan  salah  satu  solusi  dari  masalah  hama  dan  penyakit  tanaman  yang  semakin  berat  dari  tahun  ke  tahun.  PHT-Biointensif  merupakan  sistem  pengendalian  hama  dan  penyakit  tanaman  yang  menggabungkan   beberapa  teknik pengendalian  yang   efektif, efisien   dan   ramah   lingkungan   dengan  mengoptimalkan   potensi   sumberdaya   hayati.   Adapun   strategi   yang   dapat  dilakukan  antara  lain,  penggunaan  varietas,  penggunaan  mulsa  organik,  dan  aplikasi biokontrol. Selain itu, salah satu indikator keberhasilan sistem ini adalah  tanah aktif, yaitu tanah yang memiliki kelimpahan dengan mikroorganisme yang  bermanfaat. Kelompok bakteri rizosfer yang banyak dimanfaatkan sebagai agen  antagonis   dan   mampu   meningkatkan   pertumbuhan   tanaman   adalah   bakteri  kitinolitik, Bacillus sp, Pseudomonas fluorescens dan Actinomycetes. Penelitian  ini bertujuan untuk melihat pengaruh penggunaan varietas kedelai, mulsa jerami  dan aplikasi Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR) terhadap penyakit  pustul bakteri dan kelimpahan bakteri kitinolitik, tahan panas dan fluorescence.  Penelitian  ini  dilakukan  di  lapangan  dan  laboratorium.  Pengujian  di  lapangan  menggunakan  Rancangan  Acak  Kelompok  Faktorial  dengan  faktor  perlakuan  pertama   varietas   (Anjasmoro   dan  Gepak   Kuning),   faktor  kedua  pemberian  mulsa  jerami  (dengan  mulsa  dan  tanpa  mulsa)  dan  faktor  ketiga  aplikasi PGPR (dengan PGPR dan tanpa PGPR), percobaan dilakukan dalam 3  kali ulangan. Keparahan penyakit dan perkembangan penyakit berupa Area Under  Disease Progress Curve (AUDPC)  diamati setiap minggu selama 12 minggu.  Penghitungan  kelimpahan  bakteri  rizosfer  dilakukan  di  Laboratorium  dengan  cara  mengisolasi  dari  contoh  tanah  yang  diambil  disekitar  perakaran  tanaman  contoh,  kemudian  dilakukan  pencawanan  pada  tiga  medium  yang  berbeda  medium  Tryptic  Soy  Agar  untuk  mengisolasi  bakteri kelompok  tahan  panas, medium Kings`B Agar untuk mengisolasi bakteri kelompok fluorescence  dan medium kitin untuk mengisolasi bakteri kelompok kitinolitik.  Semua isolat  pada  masing-masing  kelompok  dikarakterisasi  menggunakan  uji  Gram  dengan  Kalium Hidroksida (KOH) 3% dan uji hipersensitifitas pada tanaman tembakau.  Setelah  itu,  lima  isolat  terbanyak  pada  kelompok  bakteri  tahan  panas  dan  fluorescence  dipilih  dan  dikarakterisasi  secara  morfologi  dan  fisiologi  untuk  dibandingkan dengan bakteri PGPR yang diaplikasikan.

             

Hasil  analisis  statistik  menunjukkan  bahwa  perlakuan  faktor  tunggal  varietas menunjukkan pengaruh sangat nyata (p < 0.01) terhadap perkembangan  penyakit. Sedangkan, kombinasi perlakuan antara varietas dan pemberian mulsa  jerami menunjukkan pengaruh nyata (p < 0.05) terhadap perkembangan penyakit.  Penggunaan  varietas  Gepak  Kuning  terbukti  mampu  mengurangi  keparahan  penyakit pustul bakteri (33%) dibandingkan varietas Anjasmoro (60%). Interaksi  antara varietas dan pemberian  mulsa  jerami  juga  menunjukkan pengaruh  yang  berbeda  terhadap  penekanan  perkembangan  penyakit.  Varietas  Gepak  Kuning  yang diberi mulsa jerami menunjukkan perkembangan penyakit yang lebih rendah  dibandingkan jika varietas Gepak Kuning diaplikasikan tunggal. Pemberian mulsa  berperan  dalam  memperbaiki  struktur  dan  aerasi  tanah  sehingga  mendukung  pertumbuhan tanaman menjadi lebih vigor dan lebih tahan terhadap penyakit serta  meningkatkan kelimpahan bakteri rizosfer.  Hasil isolasi bakteri rizosfer menunjukkan kelompok yang mendominasi  adalah bakteri tahan panas (31%), non-fluorescence (30%) dan kitinolitik (24%),  sedangkan   bakteri   kelompok   fluorescence   berjumlah   15%.   Secara   umum,  kombinasi   perlakuan   varietas,   mulsa   jerami   dan   aplikasi   PGPR   mampu  meningkatkan  kelimpahan  bakteri  rizosfer  kelompok  kitinolitik,  tahan  panas,  fluorescence dan non-fluorescence dibandingkan dengan perlakuan kontrol pada  masing-masing varietas.  Dari semua perlakuan hanya perlakuan aplikasi PGPR yang berpengaruh  sangat nyata hanya terhadap kelimpahan kelompok bakteri   fluorescence. PGPR  yang  diaplikasikan  merupakan  kombinasi  antara  B.   subtilis  AB89  dan  P.  fluorescens RH4003. Ada kemungkinan bakteri PGPR tersebut mampu bertahan  dan berkembang pada rizosfer kedelai. Oleh karena itu, dilakukan karakterisasi  secara morfologi dan fisiologi terhadap 5 jenis isolat terbanyak, dengan asumsi  bahwa  bakteri  tersebut  merupakan  bakteri  yang  lebih  dominan  dan  mampu  bertahan dibandingkan dengan bakteri lain. 5  isolat terbanyak untuk kelompok  fluorescence adalah F3, F4, F7, F9 dan F11.  Berdasarkan morfologi ada 2 isolat yang mempunyai karakter koloni yang  sama dengan P. fluorescens RH4003 yaitu isolat F4 dan F7 dengan ciri-ciri koloni  berpendar hijau dengan tingkat fluorescen kuat, bentuk bulat dengan tepi tidak  beraturan, berwarna putih kusam, elevasi datar dan tidak berlendir. Akan tetapi,  hasil  pengujian  secara  fisiologis  dengan  uji  LOPAT  diketahui  bahwa  hampir  semua  isolat  terbanyak  menunjukkan  reaksi  yang  sama  dengan  kontrol  (P.  fluorescens RH4003) kecuali isolat F9.   

Kata kunci:   Bakteri  Rizosfer,  mulsa  jerami,  PGPR,  pustul  bakteri,  varietas  Anjasmoro,  varietas Gepak Kuning.

                                               

© Hak Cipta milik IPB, tahun 2012  Hak Cipta dilindungi Undang-Undang   

Dilarang mengutip sebagian atau seluruh karya  tulis ini tanpa mencantumkan  atau menyebutkan sumbernya.  Pengutipan hanya untuk kepentingan pendidikan,  penelitian,  penulisan  karya  ilmiah,  penyusunan laporan,  penulisan  kritik,  atau  tinjauan suatu masalah; dan pengutipan tersebut tidak merugikan kepentingan  yang wajar IPB  Dilarang mengumumkan dan memperbanyak sebagian atau seluruh Karya tulis  dalam bentuk apa pun tanpa izin IPB

                 

PENGARUH VARIETAS KEDELAI,  MULSA JERAMI DAN APLIKASI PGPR  TERHADAP PENYAKIT PUSTUL BAKTERI  DAN KELIMPAHAN BAKTERI RIZOSFER                             

TITA WIDJAYANTI                     

Tesis  sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar  Magister Sains pada  Program Studi Fitopatologi                       

SEKOLAH PASCASARJANA  INSTITUT PERTANIAN BOGOR  BOGOR  2012

                                                                   

Penguji Luar Komisi pada Ujian Tesis: Dr. Ir. Abdul Munif, MSc

               

Judul Tesis  Nama  NRP 

:   Pengaruh  Varietas  Kedelai,  Mulsa  Jerami  dan  Aplikasi  PGPR Terhadap Penyakit  Pustul Bakteri dan Kelimpahan  Bakteri Rizosfer  :   Tita Widjayanti  :   A352090021 

           

Disetujui   

Komisi Pembimbing                 

               

Dr. Ir. Abdjad Asih Nawangsih, MSi  Ketua 

Dr. Ir. Kikin Hamzah Mutaqin, MSi  Anggota 

       

Diketahui,   

Ketua Program Studi Fitopatologi 

Dekan Sekolah Pascasarjana IPB 

             

Dr. Ir. Sri Hendrastuti Hidayat, MSc 

Dr. Ir. Dahrul Syah, MSc.Agr 

             

Tanggal Ujian: 5 Januari 2012 

Tanggal Lulus: 

             

PRAKATA     

Puji  dan  syukur  penulis  panjatkan  kehadirat  Allah  SWT  yang  telah  melimpahkan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyusun tesis dengan judul  “Pengaruh Varietas Kedelai, Mulsa Jerami dan Aplikasi PGPR Terhadap Penyakit  Pustul Bakteri dan Kelimpahan Bakteri Rizosfer”.  Terima  kasih  penulis  ucapkan  kepada  Dr. Ir. Abdjad Asih Nawangsih, M.  Si   dan Dr. Ir. Kikin Hamzah Mutaqin, M. Si selaku komisi pembimbing yang  telah  mengarahkan  dan  membingbing  penulis  baik  dalam  proses  penelitian  maupun penulisan karya ilmiah ini. Ucapan terima kasih juga penulis sampaikan  kepada Dr. Ir. Sri Hendrastuti Hidayat M.Sc, selaku Ketua Program Studi Mayor  Fitopatologi   yang   telah   memberikan   ijin   dilaksanakannya   penelitian   ini.  Terimakasih  juga  diucapkan  kepada  Dr.  Ir.  Abdul  Munif,  M.Sc  selaku  dosen  penguji.  Penelitian  ini didanai dari proyek  penelitian  “I-MHERE” dari Institut  Pertanian Bogor kepada Dr. Abdjad Asih Nawangsih, M. Si  tahun 2010. Ucapan  terima kasih juga penulis sampaikan pada Tim LPS, bakteri crew, Fitopatologist  2009  dan  Pondok  Cahaya  groups  dalam  membantu  pelaksanaan  penelitian.  Terima kasih juga disampaikan kepada ayah, mamah, adik-adik,  mas Aan serta  keluarga besar atas segala doa dan kasih sayang yang tak pernah putus.  Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.   

Bogor,  Februari 2012   

Tita Widjayanti

             

RIWAYAT HIDUP     

Penulis dilahirkan di Kuningan pada tanggal 19 Agustus 1987 sebagai anak  pertama dari 4 bersaudara dari pasangan Ir. Narsu Wijaya dan Umayati, S.Pd.  Tahun 2005  penulis lulus dari SMA Negeri 5 Tasikmalaya dan pada tahun yang  sama lulus seleksi masuk Universitas Jenderal Soedirman  pada jurusan Hama dan  Penyakit  Tumbuhan  di  Fakultas  Pertanian. 

Gelar  Sarjana  Pertanian  diperoleh 

pada tahun 2009.  Kesempatan untuk melanjutkan ke program magister akhirnya  penulis  dapatkan  dengan  lulus  seleksi  masuk  IPB  pada  mayor  Fitopatologi,  Fakultas Pertanian pada tahun yang sama.  Selama  mengikuti  program  S2,  penulis  pernah  mengikuti  International  Student Symposium yang diikuti oleh mahasiwa pascasarjana dari Jepang dan IPB  di  Bogor  pada  bulan  September  2010.  Selanjutnya,  penulis  berkesempatan  mengunjungi   Jepang   untuk 

menghadiri   International   Joint   Activities   di 

Universitas Ibaraki Jepang pada bulan Desember 2010 sebagai pemrasaran. Karya  ilmiah  yang  dipaparkan  merupakan  bagian  dari  penelitian  S2  penulis.  Karya  ilmiah   ini  juga   pernah  diseminarkan  pada   acara   International  Society  for  Southeast Asian Agricultural Sciences (ISSAAS) pada November 2011 di Bogor.  Penulis  juga  pernah  menjadi  asisten  pada  magang  dari  Balai  Besar  Perbenihan dan Proteksi Tanaman Perkebunan Medan dalam pelatihan Agensia  Hayati pada bulan Mei 2011, Asisten praktikum mata kuliah Fitopatologi kelas  khusus dari Perusahaan BISI pada bulan September 2011, Asisten Praktikum mata  kuliah Bakteriologi Pascasarjana pada bulan Agustus-Desember 2011 dan Asisten  Praktikum mata kuliah Dasar-dasar Perlindungan Tanaman mahasiswa Diploma  pada bulan November-Januari 2012.

             

DAFTAR ISI     

Halaman  DAFTAR TABEL  ..................................................................................xii  DAFTAR GAMBAR ..............................................................................xiii  DAFTAR LAMPIRAN  ..........................................................................x  PENDAHULUAN  Latar Belakang  ..............................................................................1  Tujuan Penelitian  ..........................................................................4  Hipotesis ........................................................................................4   

TINJAUAN PUSTAKA  Kedelai ...........................................................................................5  Penyakit Pustul Bakteri  .................................................................6  Gejala  .....................................................................................6  Organisme Penyebab Penyakit  ................................................7  Siklus Penyakit dan Kisaran Inang ...........................................8  Sistem PHT-Biointensif ..................................................................8  Varietas Tahan................................................................................9  Mulsa Jerami  .................................................................................10  Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR) ............................12  B. subtilis AB89 ......................................................................12  P. fluorescens RH4003 ............................................................13  Kelimpahan Bakteri Rizosfer .........................................................14   

BAHAN DAN METODE  Tempat dan Waktu Penelitian   .......................................................19  Percobaan Pengaruh Varietas Kedelai, Mulsa Jerami dan PGPR  ...19  Pengamatan Percobaan   .................................................................20  Keparahan dan Perkembangan Penyakit................................ 20  Kelimpahan Bakteri Tahan Panas, Kitinolitik dan Fluorescence  21  Karakterisasi Isolat Bakteri Rizosfer ..............................................22  Pengujian Bakteri Secara Umum .................................................23  Ciri dan Morfologi Koloni .....................................................22  Uji Gram ................................................................................23  Uji Hipersensitif .....................................................................24  Karakterisasi Bakteri Tahan Panas ..............................................24  Uji Endospora ........................................................................24  Uji Agar Darah  .....................................................................25  Karakterisasi Bakteri Fluorescence ............................................25  Uji Levan  ..............................................................................25  Uji Oksidase  .........................................................................26

             

Potato Soft Rot .............................................................................26  Hidrolisis Arginin ........................................................................26  Uji Gram ......................................................................................26  Karakterisasi Bakteri Kitinolitik ........................................................26  Analisis Data ......................................................................................27     

HASIL DAN PEMBAHASAN  Pengaruh Varietas Kedelai, Mulsa Jerami dan Aplikasi PGPR terhadap  Penyakit Pustul Bakteri  ........................................................................29  Pengaruh Varietas Kedelai, Mulsa Jerami dan Aplikasi PGPR terhadap  Kelimpahan Bakteri Rizosfer  ...............................................................38  Karakterisasi Morfologi dan Fisiologi Isolat Terbanyak  .....................43  Bakteri Tahan Panas ..............................................................43  Bakteri Fluorescence ....................................................................45  Bakteri Kitinolitik..................................................................48   

KESIMPULAN  ......................................................................................51  SARAN   .................................................................................................51  DAFTAR PUSTAKA  ............................................................................53

               

DAFTAR TABEL     

Halaman  1.  Ringkasan hasil analisis ragam (Anova) perlakuan varietas,  pemberian mulsa dan aplikasi PGPR terhadap perkembangan  penyakit pustule bakteri (AUDPC) dan kelimpahan bakteri kitinolitik,  tahan panas,  fluorescence dan non-fluorescence ...............................31   

2.  Pengaruh varietas, mulsa jerami dan aplikasi PGPR terhadap  keragaman bakteri rizosfer (kelompok kitinolitik, tahan panas,  non-fluorescence dan fluorescence) ..................................................40   

3.  Pengaruh pemberian mulsa jerami terhadap kelimpahan bakteri  rizosfer..............................................................................................40   

4.  Pengaruh perlakuan varietas, mulsa jerami dan aplikasi PGPR  terhadap kelimpahan bakteri rizosfer .................................................43   

5.  Hasil pengujian endospora isolat tahan panas terbanyak ....................44   

6.  Reaksi lisis isolat terbanyak kelompok tahan panas pada medium  agar darah ........................................................................................45   

7.  Morfologi isolat T42, T70 dan B. subtilis AB89   .............................46   

8.  Hasil uji LOPAT isolat kelompok fluorescence terbanyak.................46

                 

DAFTAR GAMBAR     

Halaman  1.  Gejala pustul bakteri pada daun kedelai............................................ 7   

2.  Metode pengambilan sampel metode S............................................. 21   

3.  Seri pengenceran untuk isolasi bakteri dari tanah  .............................22   

4.  Gejala awal penyakit pustul bakteri pada 2 MST (a); Gejala lanjut  penyakit pustul bakteri pada 7MST pada tanaman yang sama(b) .......29   

5.  Rata-rata keparahan penyakit pustul bakteri pada 1 hingga  12 MST dan nilai AUDPC; V1: varietas Anjasmoro; V2: varietas  Gepak Kuning; M1: dengan mulsa jerami; M2:tanpa mulsa jerami;  P1: dengan PGPR; P2: tanpa PGPR ...................................................30   

6.  Pengaruh varietas terhadap keparahan penyakit pustul  bakteri dan nilai AUDPC. .................................................................31   

7. 

Gejala penyakit pustul bakteri pada varietas Anjasmoro (a);  Gejala penyakit pustul bakteri pada varietas Gepak Kuning  pada 7 MST (b) ................................................................................32   

8.  Pengaruh kombinasi antara varietas dan pemberian mulsa  jerami terhadap keparahan penyakit pustul dan nilai AUDPC............33   

9.  Pengaruh pemberian mulsa jerami terhadap keparahan  penyakit pustul dan nilai AUDPC .....................................................35   

10.  Pengaruh aplikasi PGPR terhadap keparahan penyakit pustul  dan nilai AUDPC ..............................................................................36   

11.  Total kelimpahan bakteri (%) pada masing-masing kelompok .........   39   

12.  Kelimpahan masing-masing kelompok bakteri pada  kombinasi perlakuan dibandingkan dengan kontrol pada masing-  masing varietas; V1: varietas Anjasmoro; V2: varietas Gepak Kuning;  M1: Dengan Mulsa Jerami; M2:Tanpa Mulsa Jerami; P1: Dengan  PGPR; P2: Tanpa PGPR....................................................................41   

13.  Endospora T61 (hijau) didalam sel vegetatifnya (merah),  posisi endospora ditengah (a); Endospora T70 (hijau) didalam sel  vegetatifnya (merah), posisi endospora didekat ujung(b) ...................43

             

14.  Reaksi hemolisis pada agar darah isolat bakteri tahan panas  terpilih (tampak depan) (A); Reaksi hemolisis pada agar darah  isolat bakteri tahan panas terpilih (tampak belakang) (B); a) T10,  b)T31, c) T42, d) T46, e) T48, f) T61, g) T67, h) T70, i) B. subtilis  AB89,  j) kontrol (LB) ......................................................................45   

15.  Uji levan isolat fluorescence A); Reaksi positif uji levan. koloni  seperti kubah (cembung jelas). putih. Mucoid B);  Reaksi negatif  uji levan. koloni datar. tidak berkilau dan transparan C) ....................47   

16.  Reaksi oksidase isolat fluorescence A); Reaksi oksidase positif (+)  berwarna ungu (B.a); Reaksi oksidase negatif (-) tidak terjadi  perubahan warna (B.b) ......................................................................47   

17.  Reaksi potato soft rot positif (+) umbi busuk, kecoklatan, berlendir  (A.a); Reaksi potato soft rot negatif (-) umbi segar, tidak terjadi  perubahan warna (A.b); Reaksi potato soft rot pada isolat  fluorescence (B) ................................................................................48   

18.  Aktivitas kitinolitik isolat K17 ..........................................................49

             

DAFTAR LAMPIRAN     

Halaman  1.  Denah lokasi percobaan ....................................................................58   

2.  Hasil analisis ragam (Anova) perlakuan varietas, pemberian mulsa  dan aplikasi PGPR terhadap perkembangan penyakit pustul bakteri  (AUDPC) .........................................................................................59   

3.  Deskripsi varietas kedelai Anjasmoro (Balitkabi 2008) .....................60   

4.  Deskripsi varietas kedelai Gepak Kuning (Balitkabi 2008) ................61   

5.  Daftar bahan media Kings`B Agar (KBA), Trytic Soy Agar (TSA),  kitin agar dan Luria Bertani Broth (LB) ...........................................62   

6.  Morfologi koloni bakteri tahan panas ................................................63   

7.  Morfologi koloni bakteri fluorescence...............................................66   

8.  Morfologi koloni bakteri non-fluorescence........................................67   

9.  Morfologi koloni bakteri kitinolitik ...................................................70

     

1       

PENDAHULUAN     

Latar Belakang   

Penyakit pustul bakteri yang disebabkan oleh Xanthomonas axonopodis pv.  glycines merupakan salah satu penyakit penting pada tanaman kedelai di wilayah  tropis dan sub tropis (Sinclair dan Backman 1989). Penyakit  ini penting selain  karena sebaran geografisnya juga X. axonopodis pv. glycines mempunyai banyak  strain  yang  masing-masing  menunjukkan  genotip  dan  virulensi  yang  berbeda  sehingga  pengendalian  dengan  varietas  tahan  dengan  daya  tahan  vertikal  sulit  dilakukan  (Rukayadi  et  al.  1999).  Kehilangan  hasil  yang  diakibatkan  oleh  penyakit   ini  pada  daerah  sentra  kedelai  di  Indonesia  seperti  Jawa  Barat,  Kalimantan Selatan, Jawa Timur dan Daerah Istimewa Yogyakarta sekitar 15.9%  sampai 50% (Dirmawati 2004).  Selama  ini  upaya  pengendalian  penyakit  pustul  bakteri  yang  disarankan  adalah penanaman varietas resisten, penggunaan benih yang bebas patogen, rotasi  tanaman,  sanitasi  serta  penggunaan  pestisida  sintetik  (Sinclair  dan  Backman  1989). Agarwal dan Sinclair (1997) menyatakan bahwa bakteri X. axonopodis pv.  glycines dapat terbawa benih dan bertahan dengan mekanisme infeksi laten pada  benih  kedelai  selama  2.5  tahun  tanpa  menunjukkan  gejala  sakit.  Sehingga,  penggunaan  benih  kedelai  yang  tidak  menunjukkan  gejala  sakit  belum  tentu  menjamin bahwa benih kedelai tersebut sehat.  Cara pengendalian lain  yang  lebih praktis adalah pengendalian kimiawi  menggunakan bakterisida, namun cara ini memerlukan biaya tinggi dan beresiko  mencemari  lingkungan.  Dilihat  dari beberapa upaya pengendalian sebelumnya,  pustul  bakteri  kurang  efektif  jika  ditekan  dengan  menggunakan  satu  cara  pengendalian.   Oleh   karena   itu,   perlu   adanya   strategi   pengendalian   yang  menggabungkan  beberapa teknik  pengendalian  yang  efektif,  efisien dan ramah  lingkungan.  Wiyono  (2007)  menyatakan  bahwa  Pengendalian  Hama  dan  Penyakit  Terpadu Biointensif (PHT-Biointensif) yang mengoptimalkan sumberdaya hayati  yang ada merupakan salah satu solusi masalah hama dan penyakit  yang makin  berat di Indonesia dari tahun ke tahun. Menurut ATTRA (2001) PHT-Biointensif

     

2 

adalah suatu sistem pendekatan untuk pengelolaan hama dan penyakit tanaman 

     

yang  didasarkan  pada  pemahaman  ekologi  hama  dan  patogen.   Sistem  ini  menggabungkan  beberapa teknik  pengendalian  yang  efektif,  efisien dan ramah  lingkungan  dengan  mengoptimalkan  sumber  daya  hayati  dan  menata  ulang  agroekosistem pertanian yang bermanfaat bagi agens hayati dan merugikan bagi  patogen.  Dirmawati  (2004)  mengkaji  beberapa  komponen  pengendalian  ramah  lingkungan terhadap penyakit pustul bakteri. Hasilnya diketahui  kombinasi  pola  tanam  tumpangsari  kedelai-jagung  dengan  bakteri  biokontrol  efektif  dalam  menekan perkembangan penyakit pustul, akan tetapi, penurunan laju infeksi tidak  terlalu besar. Oleh karena itu, perlu pengujian secara terpadu dengan kombinasi  perlakuan yang berbeda untuk mengendalikan penyakit pustul bakteri.  Beberapa  komponen  PHT-Biointensif  diantaranya:  penggunaan  varietas  tahan,   pemberian   mulsa   jerami   dan   aplikasi   Plant   Growth   Promoting  Rhizobacteria (PGPR). Pengendalian penyakit dengan varietas tahan merupakan  cara  pengendalian  yang  mudah  dilakukan  di  tingkat  petani.  Varietas  kedelai  terbaru  rata-rata  belum  diketahui  tanggapannya  terhadap  penyakit  pustul.  Dua  diantara  varietas  tersebut  diantaranya  varietas  Anjasmoro  dan  varietas  Gepak  Kuning. Balitkabi (2008) melaporkan bahwa kedua varietas tersebut merupakan  varietas yang banyak ditanam petani selain karena produktivitasnya tinggi, kedua  varietas tersebut diketahui tahan terhadap beberapa hama tanaman kedelai.  Komponen  lain  yang  diuji  adalah  pemberian  mulsa  jerami.  Pemberian  mulsa  jerami  merupakan  salah  satu  cara  untuk  merekayasa  lingkungan  untuk  memberikan   lingkungan   tumbuh   yang   optimum   bagi   pertanaman   kedelai.  Menurut Doring et al. (2006) mulsa memberikan keuntungan baik dari segi aspek  fisik maupun kimia tanah. Secara fisik mulsa mampu menjaga suhu tanah lebih  stabil  dan  mampu  mempertahankan kelembapan  di sekitar  perakaran tanaman.  Suhu  tanah  berhubungan  dengan  proses  penyerapan  unsur  hara  oleh  akar,  fotosintesis dan respirasi (Mahmood et al. 2002)  Efek aplikasi mulsa ditentukan oleh jenis bahan mulsa. Bahan yang dapat  digunakan sebagai mulsa di antaranya sisa-sisa tanaman (serasah dan jerami) atau  bahan plastik. Doring et al. (2006) menyatakan bahwa mulsa jerami mempunyai

     

3        daya  pantul  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  mulsa  plastik.  Mahmood  et  al. 

(2002) menambahkan mulsa jerami atau  mulsa yang  berasal dari sisa tanaman  lainnya mempunyai konduktivitas panas rendah sehingga panas yang sampai ke  permukaan tanah akan lebih sedikit dibandingkan dengan tanpa mulsa atau mulsa  dengan konduktivitas panas yang tinggi seperti plastik.  Cara  pengendalian  lain  yang  memungkinkan  untuk  dikembangkan  dan  ramah  lingkungan  adalah  pengendalian  secara   biologi  menggunakan  agens  biokontrol.  PGPR  merupakan  rizobakteria  yang  mampu  meningkatkan  produktivitas dan pertumbuhan tanaman serta berpotensi menjadi agen antagonis  patogen tanaman (Widodo 2006). Pemanfaatan Pseudomonas sp. dan Bacillus sp.  telah  dilaporkan  efektif  mengendalikan  penyakit  tanaman.  Kedua  kelompok  bakteri  tersebut  dapat  dikombinasikan  untuk  meningkatkan  kemampuannya  dalam   menekan   penyakit,   akan   tetapi   tidak   boleh   saling   menghambat.  Suskandini dan Eviyati (2007) melaporkan bahwa bakteri P. flourescens G134  dan  Bacillus  subtilis  BB01  telah  diketahui  efektif  menghambat  pertumbuhan  bakteri X. axonopodis pv. glycines penyebab penyakit pustul bakteri secara in-  vitro.  Nawangsih  (2006)  juga  melaporkan  bahwa  B.  subtilis  AB89  dan  P.  fluorescens  RH4003  dapat  menekan  penyakit  layu  bakteri pada  tomat  sebesar  62%  melalui  percobaan  di  rumah  kaca.  Keberhasilan  tersebut  menunjukkan  bahwa   kombinasi   kedua   bakteri   tersebut   berpotensi   untuk   menjadi   agens  biokontrol.  Indikator keberhasilan sistem PHT-Biointensif salah satunya adalah tanah  aktif.  Hal  ini  sangat  berhubungan  dengan  kelimpahan  bakteri  yang  menguntungkan dalam tanah. Banyak bakteri tanah yang telah diketahui mampu  menghambat  pertumbuhan  patogen  dan  meningkatkan  pertumbuhan  tanaman  diantaranya: kelompok bakteri kitinolitik, Bacillus sp, Pseudomonas fluorescens  dan Actinomycetes (Baker dan Cook 1983).

     

4       

Tujuan   

1. 

Mengetahui  pengaruh  varietas  kedelai,  mulsa  jerami  dan  aplikasi  PGPR  terhadap penyakit pustul bakteri pada tanaman kedelai. 

2. 

Mengetahui  pengaruh  varietas  kedelai,  mulsa  jerami  dan  aplikasi  PGPR  terhadap kelimpahan bakteri rizosfer kelompok kitinolitik, tahan panas, dan  flourescence.     

Hipotesis   

Penggunaan varietas kedelai, pemberian mulsa jerami dan aplikasi PGPR  berpengaruh  terhadap  penekanan  perkembangan  penyakit  pustul  bakteri  dan  peningkatan kelimpahan  bakteri rizosfer  kelompok  kitinolitik,  tahan panas dan  fluorescence.

     

5       

TINJAUAN PUSTAKA     

Kedelai   

Kedelai adalah salah satu tanaman polong-polongan yang menjadi bahan  baku makanan terutama  dari  wilayah  Asia   seperti  kecap,   tahu,   dan  tempe.  Berdasarkan peninggalan arkeologi tanaman ini telah dibudidayakan sejak 3500  tahun yang lalu di Asia Timur. Kedelai putih masuk ke Indonesia dibawa oleh  pedagang  dari  Cina.  Sedangkan  kedelai  hitam  telah  dikenal  sebelumnya  oleh  penduduk Indonesia. Mulai dibudidayakan terutama di daerah Jawa sekitar tahun  1750 (Oarke et al.  1999).  Kedelai  yang  banyak  dibudidayakan  di  Indonesia  terdiri  dari  dua  spesies  yaitu: Glycine max (disebut kedelai putih, biji dapat berwarna kuning, agak putih  atau hijau) dan Glycine soja (disebut kedelai hitam, biji berwarna hitam). G. max  merupakan tanaman asli daerah Asia subtropik seperti RRC dan Jepang Selatan,  sementara  G.  soja  merupakan  tanaman  asli  Asia  tropis  di  Asia  Tenggara.  Tanaman  ini  telah  menyebar  ke  Jepang,  Korea,  Asia  tenggara  dan  Indonesia  (Rukmana dan Yuniarsih 1996).  Faktor penghambat dalam budidaya kedelai salah satunya adalah hama dan  penyakit.  Hama-hama  penting  yang  menyerang  tanaman  kedelai  adalah  1).  perusak  bibit:  Lalat  kacang  (Agromyza  phaseoli),  penggerek  pucuk  kedelai  (Agromyza dolichostigma), penggerek batang kedelai (Melanagromyza sojae);2).  perusak daun: Kumbang kedelai (Phaedononia inclusa), Ulat grayak (Spodoptera  litura),  Ulat  jengkal  (Chrysodeixis  chalcites),  penggulung  daun  (Lamprosema  indicata),   penggulung   daun   (Adoxophyes   Privatana);   3).   Perusak   polong:  Penggerek  polong  (Etiella  zinckenella),  pengisap  polong  (Riptortus  linearis),  kepik hijau (Nezara viridulla); 4). Hama lainnya: Hama yang dapat menularkan  penyakit pada tanaman kedelai (vektor) contoh kutu tebu/lalat putih (Bemisia sp.)  (Balitkabi 2008).  Sedangkan, penyakit penting pada tanaman kedelai adalah: 1). Penyakit  yang  disebabkan  fungi:  Penyakit-karat  dengan  patogen  Phakospora  pachyrhizi  sydow; 2) Penyakit yang disebabkan bakteri: Hawar daun, patogen: Pseudomonas

     

6       

syringae; pustul bakteri oleh  Xanthomonas axonopodis pv. glycines; 3). Penyakit  yang disebabkan virus: Mosaik kedelai (Soybean Mosaic Virus), penyakit Kerdil  kedelai, penyakit Katai kedelai (Soybean Dwarf Virus) (Hartman et al. 1999).       

Penyakit Pustul Bakteri   

Pustul bakteri merupakan penyakit penting pada tanaman kedelai terutama  di Indonesia. Kehilangan hasil akibat penyakit ini mencapai 15.9% sampai 50%  (Dirmawati 2004).   

Gejala   

Gejala awal penyakit pustul bakteri berupa bercak berwarna hijau pucat  kekuningan sebesar  mata jarum, dengan bagian tengah agak  menonjol.  Bercak  nampak   kebasah-basahan   seperti   kebanyakan   infeksi   oleh   bakteri.   Bercak  berkembang  menjadi  lebih  besar  (diameter  3mm)  daripada  bagian  tengahnya,  terutama pada bagian bawah permukaan daun, terdapat tonjolan berwarna coklat  muda,  tonjolan  (pustul/bisul)  terjadi  akibat  hipertropi  dan  hiperplasia.  Bercak  mempunyai ukuran yang bervariasi, dari satu bercak kecil hingga bercak besar  yang   tidak   teratur   yang   terjadi  karena   bersatunya   banyak   bercak.   Bercak  mengering,  mudah  sobek,  dan  gugur  lebih  awal.  Daun  kedelai  yang  gugur  prematur menyebabkan produktivitas tanaman kedelai menurun berkaitan dengan  jumlah polong hampa yang tinggi (Sinclair dan Backman 1989).  Gejala  pustul  hampir  mirip  dengan  gejala  karat  yang  disebabkan  oleh  cendawan P. pachyrhizi Syd. Perbedaannya, pada gejala pustul bakteri terdapat  pada  daun-daun  muda  pada  bagian  atas  tanaman,  sedangkan  penyakit  karat  awalnya terdapat pada daun-daun tua dibagian bawah lalu berkembang ke bagian  daun yang lebih muda di bagian atas. Pada permukaan bawah helai daun kedelai  yang  bergejala karat terdapat urediosorus yang tampak seperti gumpalan tanah  berwarna coklat  yang terasa kasar  jika diraba (Hartman et  al. 1999). Menurut  Sudjono  et  al.  (1985)  menyatakan  bahwa  pada  polong  varietas  yang  rentan,  penyakit  pustul  bakteri  menyebabkan  terjadinya  bercak  kecil  yang  berwarna  coklat kemerahan.

     

7       

Organisme Penyebab Penyakit   

Penyakit  pustul  bakteri  diketahui  disebabkan  oleh  X.  axonopodis  pv.  glycines  (Nakano)  Dye  Vauterin.  Pada  awalnya  menurut  Machmud  (1987)  penyakit bisul bakteri disebabkan oleh X. campestris pv. phaseoli (Smith 1897).  Namun  menurut  Moffet  dan Dye dalam Semangun (1991) di beberapa negara  penyebab penyakit pustul bakteri pada kedelai diidentifikasi sebagai X. campestris  pv.  glycines  (Nakano)  Dye  1978,  yang  dulu  disebut  X.  phaseoli  var.  sojense  (Hedges)  starr  et  Burkh., Pseudomonas glycines  (Nakano)  Mangrou  et  prevot.  Dalam identifikasi terbaru berdasarkan genotipenya, patogen ini diusulkan sebagai  X. axonopodis pv. glycines (Vauterin 1995 dalam CABI 2005).  Schaad  (2001)  mengidentifkasi  bakteri  ini  dengan  ciri-ciri  bakteri  X.  axonopodis  pv.  glycines  berukuran  0.5-0.9  x  1.4-2.3  µm,  berbentuk  batang,  memiliki satu flagel polar dan merupakan bakteri gram negatif. Koloni pada agar  yeast  dextrose  carbonat  (YDC)  berwarna  kuning  pucat  yang  lama  kelamaan  berubah menjadi kuning tua, berukuran kecil, bulat dan tepinya licin.                         

Gambar 1 Gejala pustul bakteri pada daun kedelai   

Bakteri X. axonopodis pv. glycines dapat mencairkan gelatin dalam waktu  6  hari,  membentuk  asam  sitrat  dari  arabinosa,  glukosa,  manosa,  selobiosa,  trehalosa, dan sukrosa dalam 2  hari,  menguraikan protein susu dalam 13  hari,  menghidrolisis pati dalam 2 hari. Suhu optimum untuk pertumbuhan adalah 30-  330C dengan suhu maksimum 380C dan minimum 100C (Schaad 2001). Sinclair  dan Backman (1989) menambahkan bakteri jika ditumbuhkan pada media dapat  menghasilkan auksin, bakteriosin dan eksopolisakarida.

     

8       

Siklus Penyakit dan Kisaran Inang   

Bakteri  masuk  kedalam  jaringan  tanaman  melalui  lubang  alami  seperti  hidatoda dan stomata atau melalui luka mekanik, lalu berkembang dalam ruang  antar  sel.  Bakteri  tersebar  melalui  percikan  air  atau  hujan.  Epidemi  penyakit  pustul bakteri terjadi pada kedelai yang masa pembungaannya bertepatan dengan  cuaca basah. Selain itu, bakteri bertahan dalam biji, permukaan sisa-sisa tanaman,  dan dalam rizosfer tanaman gandum (Sinclair dan Backman 1989).   Bakteri X.  axonopodis pv. glycines memiliki inang lain yaitu kacang buncis, kacang panjang,  dan kecipir selain itu, di Amerika Serikat X. axonopodis pv. glycines dilaporkan  menginfeksi gulma Brunnicia cirrhosa Gaertn (Sinclair dan Backman 1989).  Maraknya  penggunaan  pestisida  sintetik  yang  akhir-akhir  ini  banyak  digunakan petani untuk mengendalikan penyakit ini banyak menimbulkan dampak  negatif  jika  penggunaannya  tidak  bijaksana  baik  terhadap  tanaman  sendiri,  manusia maupun terhadap  lingkungan biotik  lain seperti agens hayati patogen.  Oleh karena itu, perlu stategi pengendaliannya yang efektif, efisien dan ramah  lingkungan.       

Sistem PHT-Biointensif   

Ketergantungan pada penggunaan pestisida sintetik  mendasari munculnya  sistem PHT-Biointensif dalam program perlindungan tanaman di seluruh dunia.  Dampak  negatif  dari  pestisida  sintetik  seperti  terjadinya  resistensi  patogen,  perubahan  virulensi  patogen,  terbunuhnya  patogen  non-target  (agens  hayati)  ataupun pencemaran terhadap lingkungan, tanaman itu sendiri dan manusia.  Sistem  PHT-Biointensif  adalah  suatu  sistem  pendekatan  untuk  pengelolaan  hama  dan  penyakit  tanaman  yang  didasarkan  pada  pemahaman  ekologi hama dan patogen. Diawali dengan langkah-langkah untuk mendiagnosis  sifat dan sumber masalah hama dan penyakit dan pemanfaatan agens hayati untuk  menjaga populasi hama dan patogen dalam batas yang dapat diterima. Manfaat  dari  penerapan  PHT-Biointensif  yaitu  dapat  mengurangi  biaya  input  kimia,  mengurangi  on-farm  dan  off-farm  dampak  lingkungan,  dan  lebih  efektif  dan  manajemen hama dan patogen yang berkelanjutan (ATTRA 2001).

     

9        Tujuan  utama  PHT-biointensif  adalah  untuk  memberikan  panduan  dan 

pilihan bagi manajemen yang efektif dari patogen dan organisme menguntungkan  dalam  konteks  ekologi. Pada  prinsipnya  sistem  PHT-Biointensif  sama  dengan  sistem PHT, perbedaannya pada sistem PHT penggunaan pestisida sintetik masih  digunakan  walaupun  sebagai  alternatif terakhir,  akan  tetapi pada  sistem PHT-  Biointensif pestisida sintetik sama sekali tidak digunakan. Adapun, strategi PHT-  Biointensif  yang  dilakukan  antara  lain  penggunaan  varietas  tahan,  pemberian  mulsa jerami dan aplikasi PGPR.       

Varietas Tahan   

Penggunaan varietas tahan adalah cara pengendalian penyakit tumbuhan  yang efektif, murah dan ramah lingkungan. Menurut Zadoks dan Schein (1979)  penanaman  varietas tahan  bertujuan untuk  mengurangi  jumlah  inokulum awal.  Ketahanan suatu  varietas terhadap  suatu  penyakit  umumnya tidak  berlangsung  selamanya.  Jika  muncul ras  baru  yang  lebih  virulen,  maka  ketahanan  varietas  tersebut akan patah. Oleh karena itu, adanya varietas-varietas baru kedelai yang  tahan  terhadap  penyakit  pustul  sangat  dibutuhkan  dalam  upaya  pengendalian  penyakit tersebut.  Hasil  penelitian  Anggraini  et  al.  (1995)  yang  menguji  ketahanan  75  genotip yang terdiri dari 29 varietas lokal, 8 varietas nasional, 23 introduksi dan  15  galur  percobaan  terhadap  penyakit  pustul,  diketahui  hanya  1  genotip  yang  menunjukkan reaksi tahan yaitu varietas Si Pinang yang merupakan varietas lokal  dari Langkat, Sumatera Utara dan memiliki ciri-ciri berbiji hitam, berbunga ungu  dan memiliki tinggi sekitar 35 cm. Di Indonesia, kebanyakan petani lebih banyak  menanam  varietas  kedelai  berbiji  kuning.   Oleh  karena   itu,   penting  untuk  mengetahui  ketahanan  varietas-varietas  kedelai  yang  banyak  ditanam  petani  terhadap penyakit pustul bakteri.  Balitkabi  (2008)  melaporkan  terdapat  72  varietas  unggul  kedelai  yang  masing-masing memiliki keunggulan tersendiri. Termasuk dua diantaranya adalah  varietas  Anjasmoro  dan  Gepak  Kuning.  Dari  hasil  sosialisasi  pengembangan  jaringan alih teknologi produksi benih  sumber, diketahui varietas kedelai yang  paling  diminati  pengguna/petani  adalah  varietas  Anjasmoro  (Balitkabi  2008).

     

10 

Selain  memiliki  ukuran  biji  yang  besar,  daya  hasil  varietas  ini  cukup  besar 

     

mencapai 2,03 – 2,25 ton/ha, hal ini menjadi daya tarik tersendiri untuk varietas  ini. Varietas yang dilepas pada tahun 2001 ini memiliki keunggulan lainnya yaitu  memiliki ketahanan  terhadap  penyakit  karat  daun  dan  Cladosporium  sp.,  juga  tahan terhadap rebah dan memiliki sifat polong yang tidak mudah pecah.  Selain varietas Anjasmoro, varietas lain yang baru dilepas pada tahun 2008  yaitu varietas Gepak Kuning juga banyak diminati dan ditanam petani terutama di  wilayah Jawa Timur (Balitkabi 2008). Varietas ini memiliki beberapa keunggulan  diantaranya:  berumur genjah dan toleran terhadap penaungan, selain  itu, tahan  terhadap beberapa hama kedelai diantaranya ulat grayak, Aphis sp., penggulung  daun,  dan  Phaedonia  sp.  dan  agak  tahan  penyakit  karat.  Varietas  ini  baik  beradaptasi di lahan sawah dan tegal, baik pada musim hujan maupun kemarau.     

Mulsa Jerami   

Faktor  lain  selain  penggunaan  varietas  dalam  sistem  PHT-Biointensif  adalah penggunaan mulsa jerami. Menurut WAC (2005) Mulsa adalah semua atau  setiap  bahan yang digunakan menutup  tanah,  bahan tersebut  dapat  berupa sisa  tanaman,  lembar  plastik,  atau  susunan  batu. 

Fungsinya  untuk  melindungi 

permukaan  tanah  dari terpaan  hujan,  erosi,  dan  menjaga  kelembapan,  struktur  serta  kesuburan  tanah,  dan  menghambat  pertumbuhan  gulma.  Ada  berbagai  macam jenis mulsa, salah satunya adalah mulsa jerami. Berbagai penelitian telah  dilakukan  untuk  melihat  pengaruh  penggunaan  mulsa  jerami  terhadap  pertumbuhan dan penekanan penyakit pada berbagai tanaman.  Mulsa dapat memengaruhi kondisi fisik   dan biologi tanah. Pengaruhnya  terhadap kondisi fisik tanah adalah sebagai berikut: (1) mengurangi daya tumbuk  langsung butir-butir hujan; (2) menurunkan jumlah dan jarak percikan tanah kalau  ada;   (3)   menurunkan   dispersi   butir   tanah   permukaan   sehingga   mencegah  pengerasan atau pergerakan permukaan; (4)  memperkecil fluktuasi kelembapan  dan  suhu  tanah;  (5)  mengurangi  aliran  permukaan  dan  erosi  internal  dan  penyumbatan pori tanah; (6)  memperbesar  infiltrasi; (7)  mengurangi terjadinya  evaporasi;  dan  (8)  mempertahankan  kelembapan  tanah  (Kohnke  et  al.  1959).  Sedangkan, pengaruh mulsa terhadap  biologi tanah adalah dapat  meningkatkan

     

11        aktivitas  mikroba,  keberadaan  insekta tanah,  cacing  tanah dan populasi  hewan 

lainnya   yang   dekat   dengan   permukaan   tanah,   dengan   adanya   suhu   dan  kelembapan  yang  seimbang  dan  relatif  stabil  sehingga  dapat  mempermudah  pertumbuhan benih secara maksimal (Varadan dan Rao 1983).  Mulsa  dapat   dibagi  menjadi  tiga   jenis   yaitu   mulsa  organik,   mulsa  anorganik, dan mulsa alamiah. Mulsa organik terbuat dari sisa tanaman atau biasa  disebut mulsa sisa tanaman, sedangkan mulsa anorganik berupa alumunium dan  plastik  dan mulsa alami dapat berupa susunan batu.  Mulsa organik adalah mulsa yang berasal dari bahan organik sisa tanaman  (jerami  padi,  batang  jagung),  pangkasan  dari  tanaman  pagar,  daun-daun  dan  ranting  tanaman.  Bahan  tersebut  disebarkan  secara  merata  di  atas  permukaan  tanah setebal 2-5 cm sehingga permukaan tanah tertutup sempurna. Mulsa sisa  tanaman dapat memperbaiki kesuburan, struktur, dan cadangan air tanah. Mulsa  juga menghalangi pertumbuhan gulma, dan menyangga (buffer) suhu tanah agar  tidak terlalu panas dan tidak terlalu dingin. Selain itu, sisa tanaman dapat menarik  binatang  tanah  (seperti  cacing),  karena  kelembaban  tanah  yang  tinggi  dan  tersedianya  bahan organik  sebagai  makanan cacing.  Adanya cacing  dan  bahan  organik akan membantu memperbaiki struktur tanah.  Mulsa  sisa  tanaman  akan  melapuk  dan  membusuk.  Karena  itu  perlu  menambahkan mulsa setiap tahun atau musim, tergantung kecepatan pembusukan.  Sisa  tanaman  dari  rumput  rumputan,  seperti  jerami  padi,  lebih  lama  melapuk  dibandingkan bahan organik dari tanaman leguminose seperti benguk, Arachis,  dan sebagainya (WAC 2005).  Menurut  Sudriatna  et  al.  (1993),  jerami  padi  dapat  digunakan  sebagai  sumber  bahan  organik  dalam  meningkatkan  hasil  kedelai.  Pernyataan  tersebut  didukung  oleh  Mastur  dan  Sunarlim  (1993)  yang  melaporkan  kenaikan  hasil  kedelai di Mojosari dan karawang   dengan pemberian mulsa   masing-masing 5  ton/ha  dan 6 ton/ha dapat meningkatkan hasil kedelai sebesar 300 kg/ha dan 492  kg/ha. Adapun kombinasi pemberian mulsa 5 ton/ha dan penempatan biji kedelai  di tunggul bekas padi dapat meningkatkan atau memperbaiki pertumbuhan akar  dalam tanah (Sutarto et al. 1988).

     

12       

Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR)   

Strategi biologi dalam sistem PHT-Biointensif meliputi aplikasi agen hayati,  PGPR. Pemanfaatan Agen hayati telah banyak dilakukan untuk menekan penyakit  pustul bakteri dan bersifat memacu pertumbuhan tanaman. Isolat rizobakteri dapat  berfungsi  sebagai  pemacu  pertumbuhan  tanaman  dan  sebagai  agens  antagonis  terhadap patogen tanaman  disebut PGPR. PGPR yang diaplikasikan merupakan  kombinasi antara Bacillus subtilis AB89 dan Pseudomonas fluorescens RH4003.     

B.  subtilis AB89   

Isolat  B.  subtilis  AB89  merupakan  isolat  yang  berasal  dari  rizosfer  tanaman  tomat.   Diketahui,   B.   subtilis   AB89   memiliki  karakteristik   positif  menghasilkan  siderofor  setelah  diinkubasi  selama  3  hari  (Nawangsih  2006).  Siderofor berasal dari bahasa Yunani berarti pembawa ion besi, siderofor akan  muncul pada saat kondisi lingkungan dengan ion Fe3+ terbatas dan mengakibatkan  besi tidak tersedia bagi patogen (bersifat kompetisi dengan patogen). Crosa dan  Walsh  (2002)  melaporkan  bahwa  siderofor  yang  dihasilkan  B.  subtilis  adalah  bacillobactin.  Menurut   Nawangsih   (2006)   B.   subtilis   AB89   memiliki   kelebihan  dibandingkan  dengan  agens  biokontrol  lain  yang  digunakan  dalam  pengujian  antara  lain  yaitu:  menghasilkan  zone  hambatan  dengan  diameter  paling  besar,  menghasilkan penekanan paling tinggi terhadap keparahan penyakit di lapangan  meskipun  kemampuan  mengkolonisasi  perakaran  bibit  lebih  rendah,  mampu  menginduksi aktifitas peroksidase paling tinggi, serta menghasilkan siderofor dan  protease.   Enzim peroksidase merupakan salah satu enzim yang berperan dalam  proses ketahanan tanaman terhadap patogen (Brimecombe et al. 2001).  Lebih  lanjut  Stermer  (1995)  menyatakan  peroksidase  berfungsi  dalam  polimerisasi   oksidatif   hydroxyccinnamyl   alkohol   untuk   membentuk   lignin.  Peranan  peroksidase  yang  lain  adalah  sebagai  sarana  pembentukan  “hydroxyproline-rich structural protein” dalam dinding sel sehingga dinding sel  menjadi lebih tahan terhadap degradasi oleh mikroorganisme. Peroksidase juga  dapat berfungsi secara langsung sebagai senyawa antimikroba.

     

13 

Nawangsih  (2006)  menggunakan  isolat  B.   subtilis   AB89 

     

untuk 

menghambat perkembangan bakteri patogen Ralstonia solanacearum pada tomat.  Aplikasi agens biokontrol di lapangan menunjukkan bahwa isolat AB89 mampu  menekan  perkembangan  penyakit  layu  bakteri. 

Selain  itu, 

Handini  (2011) 

melaporkan kombinasi antara B. subtilis AB89 dan bakteri endofit BL10 mampu  menekan  perkembangan  penyakit  layu  bakteri  pada  tomat  di  lapangan,  dan  mampu meningkatkan tinggi tanaman jika dikombinasikan dengan bakteri endofit  BC10.     

P. fluorescens RH4003   

Sama seperti B. subtilis AB89, isolat P. fluorescens RH4003 merupakan  isolat  yang  berasal dari rizosfer  tanaman  tomat.  Berdasarkan  hasil  sekuensing  parsial 16S rDNA, isolat P. fluorescens RH4003 memiliki kesamaan 98% dengan  P.  fluorescens.  Karakter  fisiologi  P.  fluorescens RH4003  yaitu  gram  negatif,  tidak membentuk spora, menghasilkan senyawa floresen pada medium King’s B  agar,  Levan positif,  reaksi oksidase positif,  Arginine dihydrolase positif,  tidak  menghasilkan reaksi hipersensitif pada tembakau, tidak tumbuh pada 41  0C, tidak  mencairkan gelatin, dan pertumbuhannya positif pada L-arabinosa, D-galaktosa  serta sorbitol.  Produksi asam dari xylose positif, lactose negatif, glukosa positif,  maltosa negatif, dan sukrosa positif lemah (Nawangsih 2006).  Isolat  P.  fluorescens  RH4003  juga  diketahui  tidak  menghasilkan  zona  hambatan  pada  media  NA  tetapi  pada  media  King’s  B  dan  CPMA  –Ca2+  menunjukkan adanya zona hambatan.  Luas zona hambatan dipengaruhi oleh jenis  media.   Media King’s B merupakan media yang  memiliki kandungan Fe yang  sangat  rendah,  hal  tersebut  sangat  cocok  bagi  pembentukan  siderofor  oleh  P.  fluorescens.  Isolat  P.  fluorescens  RH4003  membentuk  zona  hambatan  pada  media  yang  mengandung  glukosa  tetapi  tidak  pada  media  yang  mengandung  mannitol maupun dextrose.  Diketahui juga bahwa Isolat P. fluorescens RH4003  menghasilkan siderofor  dan  mampu  meningkatkan  aktivitas enzim peroksidase  (Nawangsih  2006).  Selanjutnya,  Nawangsih  (2006)  melaporkan  pengujian  di  rumah kaca menunjukkan bahwa isolat P. fluorescens RH4003 mampu menekan

     

14        perkembangan penyakit layu bakteri, indeks penekanan oleh isolat P. fluorescens 

RH4003 yaitu sebesar 62%.       

Kelimpahan Bakteri Rizosfer   

Indikator keberhasilan sistem PHT-Biointensif salah satunya adalah tanah  aktif.  Strategi tanah aktif  sangat  berkaitan dengan  kelimpahan dan keragaman  mikroorganisme  tanah.  Umumnya  jumlah  mikroba  dalam  tanah  lebih  banyak  daripada dalam air ataupun udara. Bahan organik dan senyawa anorganik lebih  tinggi  dalam  tanah  sehingga  cocok  untuk  pertumbuhan  mikroba  heterotrof  maupun autotrof. Keberadaan mikroba di dalam tanah terutama dipengaruhi oleh  sifat kimia dan fisika tanah. Komponen penyusun tanah yang terdiri atas pasir,  debu, lempung dan bahan organik maupun bahan penyemen lain akan membentuk  struktur tanah. Struktur tanah akan menentukan keberadaan oksigen dan lengas  dalam tanah. Dalam hal ini akan terbentuk lingkungan mikro dalam suatu struktur  tanah.  Mikroba  akan  membentuk  mikrokoloni  dalam  struktur  tanah  tersebut,  dengan tempat  pertumbuhan yang sesuai dengan sifat  mikroba dan lingkungan  yang diperlukan. Dalam suatu struktur tanah dapat dijumpai berbagai mikrokoloni  seperti mikroba heterotrof pengguna bahan organik maupun bakteri autotrof,dan  bakteri  aerob  maupun  anaerob.   Untuk  kehidupannya,   setiap   jenis   mikroba  mempunyai  kemampuan  untuk  mengubah  satu  senyawa  menjadi  senyawa  lain  dalam rangka mendapatkan energi dan nutrien. Dengan demikian adanya mikroba  dalam tanah menyebabkan terjadinya daur unsur-unsur seperti karbon, nitrogen,  fosfor dan unsur lain di alam.  Tanah merupakan habitat yang kaya akan mikroorganisme. Mikroorganisme  tersebut ada yang bersifat menguntungkan dan ada yang bersifat merugikan. Salah  satu  mikroba  tanah  yang  banyak  ditemukan  dan  dimanfaatkan  adalah  bakteri  tanah.  Beberapa  kelompok  bakteri  tanah  mampu  menghambat  pertumbuhan  patogen. Contoh bakteri tanah yang diketahui bersifat  antagonis adalah bakteri  kitinolitik, Actinomycetes, P. fluorescens, Bacillus sp (B. subtilis dan B. Cereus)  (Bolan 1991).  Bakteri kitinolitik merupakan bakteri yang kompeten memproduksi enzim  kitinase dan memanfaatkan kitinase untuk asimilasi kitin sebagai sumber karbon

     

15       

dan nitrogen (Wu et al. 2001). Kitinase dapat mendegradasi kitin yang merupakan  komponen penting pada dinding sel cendawan, integumen serangga, dan kerangka  luar  golongan  arthopoda,  moluska,  nematoda  dan protozoa.  Dengan demikian,  aktivitas kitinase mampu menghambat pertumbuhan miselia dan perkecambahan  spora cendawan  serta  merusak  integumen  serangga.   Kitinase  yang  dihasilkan  mikroorganisme memiliki berat molekul yang berkisar antara 20.000-120.000 kda,  pada bakteri berat molekul antara 60.000-110.000 kda dan pada Actinomycetes  berkisar antara 30.000 atau yang lebih rendah (Wang dan Chang 1997).  Sudjono (1997) melapokan bakteri kitinolitik Arthobacter sp. dan Hafnia sp.  telah  diketahui  mampu  mengendalikan  Fusarium  sp.  dan  Sclerotinia  sp  pada  tanaman tomat dan arbei. Selain itu, Wenuganen (1996) berhasil mengklon gen  kitinase  dari  Aeromonas  caviae  isolat  WS7b  yang  diisolasi  dari  kepulauan  Bangka.  Genus bakteri yang telah banyak dilaporkan menghasilkan Kitinase antara  lain   Aeromonas,   Alteromonas,   Chromobacterium,   Enterobacter,   Ewingella,  Pseudoalteromonas,  Pseudomonas,  Serratia  dan  Vibrio  (Chernin  et  al.  1998).  Beberapa spesies yang telah dipelajari antara lain Aeromonas sp, Bacillus cereus,  B. licheformis (Pleban et  al.  1997), Clostridium sp,  Enterobacter liquefaciens,  Flavobacterium 

indolthecium, 

Pseudomonas  sp, 

Serratia 

Klebsiella  marcencens, 

sp, 

Micrococcus 

Vibrio 

colpogenes, 

parahaemaluticus, 

V. 

Alginolyticus, Bacillus dan Pyrococcus (Gao et al. 2003).  Selain  bakteri  kelompok  kitinolitik,  bakteri  tanah  lain  yang  diketahui  mampu  menghambat  pertumbuhan  patogen  adalah  bakteri tahan  panas,  dan  P  fluorescens.  Bakteri  tahan  panas  yang  telah  banyak  diketahui  adalah  bakteri  golongan Bacillus sp. Golongan bakteri ini merupakan bakteri gram postif yang  membentuk  spora.  Spora  berfungsi  untuk  bertahan  hidup  pada  suhu  ekstrim  sekitar 700 sampai 1000 C (Pelchzar dan Chan 1986).  Sebagian  besar  bakteri  genus  Bacillus  sp.  bersifat  saprofitik  (Schaad  2001). 

Bakteri  saprofitik  tidak  memiliki  kemampuan  untuk  menyebabkan 

penyakit atau reaksi hipersensitif pada tanaman tembakau. Hubungan ini hanya  dimiliki  oleh  bakteri patogen  tumbuhan.  Meskipun  biasanya  bakteri  saprofitik  masuk ke ruang antar sel dan mungkin bertahan hidup di sana untuk kurun waktu

     

16        yang lama, populasinya umumnya tetap (Goodman dan Novacky 1996). Bacillus 

sp. memiliki daya tahan hidup yang cukup tinggi khususnya terhadap suhu tinggi  karena  menghasilkan  endospora  tahan  panas  (Compant  et  al.  2005),  sehingga  sangat potensial digunakan sebagai agens pengendali hayati patogen tumbuhan.  Peran Bacillus sp. sebagai agens pengendali hayati sangat bervariasi tergantung  isolat antagonis, patogen dan lingkungannya (Arwiyanto et al. 1999).  Aktivitas  antagonisme  yang  utama  disebabkan  oleh  kemampuan  menghasilkan  antibiotik.  Senyawa  antibiotik  golongan  polipeptida  mempunyai  kemampuan  penghambatan  dengan  melakukan  penghambatan  sintesis  protein,  dinding  sel  dan  membran  sel,  misalnya  pengaruh  batricin  pada  bakteri  yaitu  terhadap  biosintesis  peptidoglikan.  Penghambatan  ini  terjadi  karena  batricin  mampu mengikat poliprenil pirofosfat yang merupakan salah satu materi penting  dalam  sintesis  peptidoglikan.  Pembentukan  antibiotika  terjadi  ketika  proses  sporulasi (Franklin dan Snow 1981 dalam Salamah 1999).  Penggunaan Bacillus spp. sebagai agens pengendalian hayati pada patogen  tanaman telah banyak dilaporkan. Wartono (2010) melaporkan B. subtilis efektif  menekan perkembangan Xanthomonas oryzae pv. oryzae  di lapangan serta efektif  dalam  meningkatkan  bobot  gabah  kering  di  lapangan  mencapai  69.  2  gram/  rumpun.  Arwiyanto  et  al.  (1999)  melaporkan  bahwa  pemanfaatan Bacillus  sp.  strain Ba-118 dapat  menurunkan indeks penyakit layu bakteri sampai 60 % di  percobaan  rumah  kaca.  Yulianti  et  al.  (1999)  melalui  pengujian  laboratorium  maupun pada tanaman di lapangan menghasilkan kesimpulan bahwa B. cereus  mampu  menurunkan serangan patogen R. solanacearum sampai 40%. Menurut  Dropkin  (1996),  B.  penetrans  dapat  menginfeksi  larva  Meloidogyne  incognita  yang masih aktif sehingga mempunyai potensi yang sangat tinggi sebagai agens  pengendalian hayati. Spora mampu bertahan di dalam tanah, tidak dapat di bunuh  oleh  nematisida  dan  dibawah  pengaruh  tanaman  inang  yang  rentan  terhadap  nematoda puru akar secara terus menerus, tanah dapat  menimbun cukup spora  untuk memusnahkan sebagian besar nematoda.  Kelompok bakteri lain yang berpotensi sebagai agens hayati adalah bakteri  P.  fluorescens.  Bakteri  kelompok  ini  dicirikan  dengan  menghasilkan  pigmen  berwarna hijau kuning yang dapat digunakan untuk identifikasi serta klasifikasi.

     

17       

Pigmen  tersebut  berupa  senyawa  flouresein  atau  pyoverdin  yang  berpendar  di  bawah cahaya ultraviolet (panjang gelombang 266 nm) (Misagi et al. 1982 dalam  Khaeruni 1998).  Penggunaan bakteri Pseudomonas kelompok fluorescence sebagai agens  pengendalian  hayati  pada  patogen  tanaman  telah  banyak  dilaporkan.  Mariani  (1995)  mengisolasi 52  isolat  bakteri dari daun  kedelai,  dan  diperoleh 3  isolat  masing-masing  isolat  B29,  B30,  dan  B39  yang  dinyatakan  berpotensi  untuk  dikembangkan  sebagai  agens   biokontrol.   Penelitian  Suwanto  et  al.  (1996)  melaporkan bahwa analisis supernatan bebas sel isolat P. flurescens B29 dan B39  tidak  menghasilkan senyawa bioaktif yang  dapat  menghambat  pertumbuhan X.  campestris pv. glycines secara in-planta.

     

18

     

19       

BAHAN DAN METODE       

Tempat dan Waktu Penelitian   

Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Bakteriologi Departemen Proteksi  Tanaman, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor, dan Lahan percobaan di  Desa Ciburuy, Kecamatan Cigombong, Sukabumi. Berada pada ketinggian 495 m  dpl,  60,  430  LS,  1060,  48,32  BT.  Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  Agustus  sampai Juni 2011.       

Percobaan Pengaruh Varietas Kedelai, Mulsa jerami dan PGPR   

Percobaan   pengaruh   varietas,   mulsa   jerami   dan   PGPR   di   lapangan  dilakukan dalam Rancangan Acak Kelompok Faktorial yang terdiri dari 3 faktor  perlakuan, masing-masing 2 taraf perlakuan, 3 kali ulangan sebagai berikut:  1. Varietas 

:   Anjasmoro (V1) dan Gepak Kuning (V2) 

2. Mulsa Jerami :   Dengan mulsa jerami (M1) dan Tanpa mulsa jerami  (M2)  3. PGPR 

:   Dengan PGPR (P1) dan Tanpa PGPR (P2) 

Lahan   percobaan   terletak   di   Desa   Ciburuy,   Kecamatan   Cigombong,  Sukabumi, seluas 1344 m2 yang dibagi menjadi 24 petakan berukuran masing-  masing 8 m x 8 m. Di dalam petak dibuat 8 guludan dengan ukuran 0.7 m x 8 m  dan jarak antar guludan 0.3 m. Tiap guludan dibuat 2 baris tanaman dengan jarak  40 cm.  Varietas kedelai (Anjasmoro dan Gepak Kuning) sebagai  faktor perlakuan  pertama  masing-masing  ditanam  dengan  jarak  tanam  20  cm  x  20  cm.  Setiap  lubang tanam diisi 2 butir benih. Disamping guludan dibuat parit kecil untuk alur  pupuk NPK dengan komposisi 1:1:1.  Pemberian  mulsa  jerami  padi  sebagai  faktor  perlakuan  kedua  dilakukan  setelah   penanaman.   Mulsa   dipasang   dengan   cara   menutupi   keseluruhan  permukaan tanah dengan jerami padi.  Perlakuan biokontrol yang merupakan formulasi antara bakteri (B. subtilis  AB 89 dan P. fluorescens RH4003) diberikan 2 minggu setelah tanam. Formulasi  dibuat  dari biakan B. subtilis AB89 dan P. fluorescens RH4003  yang dipanen

     

20       

kemudian  disuspensikan  ke  dalam  1  liter  medium  LB,  dihomogenkan  dengan  inkubator bergoyang selama 24 jam. Apikasi dilakukan dengan cara menyiramkan  50  ml  (konsentrasi  107-108  cfu/ml)  suspensi  disekitar  pertanaman  tanaman  kedelai.  Pengamatan Percobaan   

Peubah pengamatan percobaan pengaruh varietas, mulsa jerami dan PGPR  adalah sebagai berikut.   

Keparahan  dan Perkembangan Penyakit  Keparahan   penyakit   diasumsikan   sebagai   persentase   luasnya   jaringan  tanaman   yang   terserang   patogen   dari   total   luasan   yang   diamati,   dengan  memprediksi nilai skoringnya berdasarkan kriteria skoring (Sinclair et al. 1989)  dan   dihitung   nilai   keparahan   penyakit   berdasarkan   rumus   Townsend   dan  Hueberger (dalam Unterstenhofer 1963) sebagai berikut:   

x 100%   

Keterangan:  KP = Keparahan penyakit  ni = Jumlah tanaman yang terinfeksi pada setiap kategori  vi = Nilai numerik masing-masing kategori serangan  Z = Nilai numerik kategori serangan tertinggi  N = Jumlah tanaman yang diamati  Kriteria penilaian yang digunakan merupakan modifikasi dari gejala penyakit  bercak yang biasanya terjadi pada daun kedelai (Sinclair 1982). Berdasarkan nilai  keparahan penyakit dengan nilai skoring sebagai berikut:  0 = tidak ada serangan  1 = bercak pustul 0 > X > 5% dari total seluruh daun per tanaman  2 = bercak pustul antara 5 < X < 15% dari total seluruh daun per tanaman  3 = bercak pustul antara 15 < X < 30% dari total seluruh daun per tanaman  4 = bercak pustul antara 30 < X < 50% dari total seluruh daun per tanaman  5 = bercak pustul > 50% dari total seluruh daun per tanaman

     

21        Keparahan penyakit diamati tiap minggu mulain 1 minggu setelah tanam (1 

MST) sejak munculnya gejala sampai 12 MST. Selain nilai keparahan penyakit,  dihitung pula nilai Area Under Disease Progress Curve (AUDPC) untuk melihat  perkembangan penyakit.  Rumus  AUDPC dihitung  berdasarkan rumus Van der  Plank (1963):         

Dengan yi+1= Data pengamatan ke-i +1  yi   =  Data pengamatan ke-i  ti +1 = Waktu pengamatan ke-i +1  ti  = Waktu pengamatan ke-i       

Kelimpahan Bakteri Kitinolitik, Tahan Panas dan Fluorescence   

Pengujian diawali dengan pengambilan sampel tanah dari rizosfer tanaman  sampel  di  lahan  percobaan.  Tanah  diambil  pada  kedalaman  +  10  cm  didekat  perakaran tanaman sampel. Pengambilan dilakukan dengan metode pengambilan  sampel metode huruf S (Gambar 4). Sampel tanah diambil setiap satu bulan sekali  selama  pengamatan.  Pengambilan  sampel  tanah  dilakukan  untuk  mengetahui  kelimpahan  dan  keragaman  dan  dari  bakteri  kitinolitik,   tahan  panas,   dan  kelompok fluorescence selama pengamatan.                           

Gambar 2  Metode pengambilan sampel metode S  Penghitungan  kelimpahan  bakteri  kitinolitik,  tahan  panas,  dan  kelompok 

flourescence  dilakukan  tiap  1  bulan  sekali  melalui  teknik  pengenceran  dan  pencawanan.  Tanah diambil  secara acak  dari pertanaman  sebanyak  10  sampel

     

22 

yang mewakili setiap perlakuan. Tanah diambil sekitar 20 cm dekat pertanaman. 

     

Kemudian   dilakukan   isolasi   melalui   pengenceran   dan   pencawanan   untuk  menghitung populasinya.  Bakteri rizosfer  diisolasi dari tanah di  sekitar  perakaran tanaman  contoh  diambil sebanyak 20 gram pada kedalaman + 20 cm. Contoh tanah diambil pada  saat kedelai berada pada fase vegetatif, tanaman berumur 3 minggu setelah tanam  (MST), fase pembungaan (6 MST) dan fase pengisian polong (9 MST). 10 gram  tanah dilarutkan dalam 90 ml aquades, dihomogenkan dengan shaker pada 120  rpm (15 menit). Dilakukan pengenceran berseri dan pencawan pada media KBA  dan kitin. Setelah pengenceran, suspensi diambil sebanyak 0,1 ml (100 µl ) dari  pengenceran bertahap  (10-4,  10-6,  10-8,  10-10)  masing-masing  kemudian disebar  (platting) dengan menggunakan glass beads pada media kitin untuk mengisolasi  bakteri kitinolitik,  KBA untuk  mengisolasi bakteri kelompok flourescence, dan  media TSA untuk  mengisolasi bakteri tahan panas. Khusus untuk media TSA,  pencawanan dilakukan setelah suspensi yang tersisa dipanaskan pada suhu 80 ºC  (15 menit). Diinkubasi selama 2 hari dan dihitung jumlah koloni dan jenis bakteri  pada masing-masing pengenceran.                                 

Gambar 3  Seri pengenceran untuk isolasi bakteri dari tanah     

Karakterisasi Isolat Bakteri Rizosfer   

Karakterisasi isolat  bakteri rizosfer secara umum dilakukan berdasarkan  metode  yang  dikemukakan  oleh  Schaad  (2001).  Karakterisasi  yang  dilakukan  meliputi uji Gram dan uji Hipersensitif. Pengujian tersebut  dilakukan terhadap

     

23 

semua isolat bakteri yang diperoleh.  Setelah itu, dari masing-masing kelompok, 

     

bakteri tahan panas,  fluorescence dan kitinolitik  dipilih  isolat  dengan populasi  terbanyak.   Kemudian   dikarakterisasi   secara   morfologi   dan   fisiologi   yang  bertujuan untuk:  1. Mengetahui apakah populasi bakteri yang melimpah khusunya pada kelompok  tahan  panas  dan  fluorescence  merupakan  bakteri  PGPR  yang  diaplikasikan  sebelumnya.  2. Mendapatkan  informasi  calon  agen  antagonis  untuk  penyakit-penyakit  pada  kedelai     

Pengujian Bakteri Secara Umum   

Ciri  dan  Morfologi  Koloni. 

Pengamatan  koloni  dilakukan  dengan 

mengamati karakter koloni  yang tumbuh pada  masing-masing  medium selektif  yang  digunakan.  Media  TSA  untuk  menyeleksi  bakteri  tahan  panas,  Kings`B  untuk   bakteri  kelompok   fluorescence   dan   media   kitin   agar   untuk   bakteri  kitinolitik. Pengamatan meliputi: bentuk koloni, warna koloni, tepi koloni, elevasi  dan  zona  bening  (khusus  untuk  bakteri  kelompok  kitinolitik). 

Koloni  yang 

tumbuh  pada   masing-masing   media  diamati  bentuk,   warna  dan  jumlahnya  kemudian masing-masing dimurnikan.  Uji  Gram.  Uji  Gram  merupakan  pengujian  bakteri  yang  penting  untuk  mengetahui pengelompokan  bakteri ke dalam gram positif atau  gram   negatif.  Pada praktikum kali ini dilakukan dengan perlakuan kalium hidroksida 3% (KOH  3%). Cara ini sangat mudah dan cepat untuk mengetahui jenis gram pada bakteri  dibandingkan dengan metode pewarnaan gram.  Prosedur  pengujian  gram  bakteri  dengan  KOH  3%,  yaitu  dengan  cara  mengambil masa masing-masing isolat dari medium TSA dengan menggunakan  ose. Kemudian dicampurkan  dengan dua tetes larutan KOH 3% pada gelas objek.  Kemudian diamati perubahan masa bakteri tersebut, berlendir atau tidak, terangkat  dengan  ose  atau  tidak.  Perubahan  masa  bakteri  menjadi  berlendir  dan  terikut  ketika  diangkat  menunjukkan  bahwa  bakteri  tersebut  bersifat  gram  negatif,  begitupun sebaliknya jika pada saat diangkat tidak berlendir dan tidak terikut itu  menunjukkan bahwa bakteri bersifat gram positif.

     

24       

Uji Hipersensitif. Pengujian dilakukan untuk mengetahui sifat patogenisitas  bakteri,  apakah  isolat  tersebut  patogen  tumbuhan  atau  bukan.  Uji  dilakukan  dengan  menyuntikkan  1  ml  suspensi  bakteri  yang  berumur  24-48  jam  pada  jaringan  daun  tembakau.  Suspensi  diinjeksikan  ke  mesofil  pada  helaian  daun  melalui penyisipan (penusukan) jarum ke rongga hipodermis pada bagian lapisan  lateral atau secara langsung ke lapisan daun. Jarum yang digunakan berukuran  sedang  (diameter  0.4  mm).  Suspensi  diinjeksikan  sampai  membasahi  seluruh  bagian  interseluler  (dapat  diketahui  jika  permukaan  jaringan  sudah  kebasah-  basahan). Sebagai kontrol, daun lainnya diinjeksi dengan air steril. Bagian yang  dilukai ditandai dengan menggunakan label. Selanjutnya tanaman diinkubasikan  pada tempat-tempat yang teduh, dengan temperatur berkisar antara 22 0C – 25 0C.  Adanya  bagian  yang  kebasah-basahan (water soaking)  pada  bagian  yang  diinokulasi setelah 24 jam, atau kurang dari 48 jam yang diikuti dengan bercak  nekrosa, adanya lokasi nekrosis yang berwarna coklat muda dalam waktu 3 hari,  menunjukkan bahwa reaksi hipersensitif adalah positif. Adanya warna kekuning-  kuningan atau  kecoklat-coklatan di luar  jaringan  yang  mati,  atau tidak  adanya  reaksi yang kelihatan, maka dapat disimpulkan bahwa reaksinya adalah negatif.       

Karakterisasi Bakteri Tahan Panas   

Karakterisasi bakteri tahan panas dilakukan pengujian-pengujian sebagai  berikut:  Uji Endospora. Pengujian endospora dilakukan pada isolat  bakteri tahan  panas. Masing-masing isolat bakteri diambil secara aseptik dengan menggunakan  jarum  ose.  Bakteri  dioleskan  secara  menyebar  merata  pada  gelas  objek  yang  terlebih dahulu disterilkan dengan alkohol 70% dan diberi aquades. Isolat bakteri  difiksasi di atas nyala bunsen sampai kering. Preparat ditutup dengan kertas yang  mudah menyerap air, kemudian diletakkan diatas air mendidih selanjutnya ditetesi  larutan larutan pewarna malachite green berlebihan selama lebih kurang 10 menit.  Kemudian dicuci dengan air mengalir selama 30 detik. Setelah dikering anginkan  selanjutnya ditetesi larutan safranin selama 1 menit  lalu dibilas dengan air dan  dikering anginkan. Kemudian diamati di bawah mikroskop dengan pembesaran  kuat. Sebagai indikasi terdapatnya endospora akan berwarna hijau, dan bagian sel

     

25 

yang tidak mengandung endospora akan berwarna merah terang (Madigan et al. 

     

1995).  Uji Agar Darah.   Uji agar darah dilakukan dengan menggunakan media  Agar darah yang telah jadi. Ellen et al. (2009) menyatakan media Agar darah  merupakan media differensial, media ini digunakan untuk membedakan bakteri  berdasarkan kemampuan bakteri untuk melisis sel-sel darah merah. Ada tiga tipe  hemolisis yaitu:  a. Beta hemolisis (β-hemolisis) disebut sebagai lisis lengkap sel darah merah dan  hemoglobin.   Darah  secara   lengkap  digunakan  dan  dilisis  oleh  mikroba,  sehingga media yang ada koloninya menjadi tidak berwarna (bening).  b. Alfa  hemolisis  (α-hemolisis)  disebut  sebagai  lisis  parsial/sebagian  dari  sel  darah merah dan hemoglobin. Hal ini menghasilkan perubahan warna disekitar  koloni menjadi abu-abu kehijauan.  c. Gamma hemolisis (γ-hemolisis), tidak terjadi hemolisis, ditandai dengan tidak  adanya perubahan warna dalam medium.  Pengujian  dilakukan  dengan  cara  5  isolat  bakteri  dari  kelompok  tahan  panas masing-masing dibiakan dalam medium LB selama 1 malam, setelah itu,  susun kertas saring pada medium agar darah, kemudian teteskan 5µl suspensi pada  kertas saring, kemudian inkubasi selama 2 hari.     

Karakterisasi Bakteri fluorescensce   

Karakterisasi untuk kelompok bakteri fluorescence dilakukan uji LOPAT  yang merupakan singkatan dari Levan, Oksidase, Potato soft root, Arginin, dan  Tobacco Hypersensitive (Schaad 2001). LOPAT  merupakan salah satu dari uji  fisiologi terutama untuk kelompok Pseudomonas.  Uji Levan. Uji levan dilakukan dengan menumbuhkan bakteri pada medium  levan Pengujian ini bertujuan untuk melihat pembentukan enzim levan sukrase.  Untuk melihat  pembentukan enzim sukrase, bakteri ditumbuhkan dalam cawan  petri  yang  berisi  5-10  ml  NA  yang  telah  ditambahkan  5%  sukrosa  kemudian  diinkubasi pada suhu kamar selama 2 hari. Bakteri yang membentuk enzim levan  sukrase  akan  memperlihatkan  karakter  koloni  yang  transparan  sampai  buram,  bercahaya, berlendir (mucoid) dengan bentuk cembung yang jelas.

     

26        Uji Oksidase. Uji ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas enzim oksidase. 

Enzim oksidase memegang peranan yang penting dalam operasi sistem transport  elektron selama proses respirasi secara aerob. Biakan murni bakteri digoreskan  pada  kertas  saring  yang  sebelumnya  telah  direndam  dengan  larutan  kovac’s  oksidase (tetramethylparaphenylenediamine dihydrochloride).  Kemudian dilihat  reaksi yang terjadi, reaksi dengan warna ungu dalam waktu 10 detik positif dan  reaksi  dengan  warna  ungu  dalam  waktu  60  detik  disebut  positif  terlambat,  sedangkan  reaksi  dengan  warna  ungu  di  atas  60  detik  atau  tidak  ada  reaksi,  disebut negatif.  Potato  Soft  Rot.  Pengujian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  aktivitas  pektolitik  isolat  bakteri yang  diuji  yakni  dalam  menghasilkan enzim pektinase  (Schaad 2001). Pengujian ini dilakukan dengan cara menggoreskan isolat bakteri  pada   irisan   umbi   kentang   yang   telah   disterilisasi   permukaannya   terlebih  dahulu.kemudian diinkubasi selama 48 jam, dan dilihat rekasinya. Reaksi positif  ditandai dengan adanya pembusukan (busuk lunak) berwarna cokelat pada bagian  yang diinokulasi dengan bakteri.  Hidrolisis  Arginin.  Pengujian  reaksi  hidrolisis  arginin  bertujuan  untuk  melihat kerja enzim arginin desmidase di dalam bakteri yang memiliki peranan  sebagai pendegradasi arginin yang sangat dibutuhkan untuk tumbuh pada kondisi  anaerobik.  Pengujian  dilakukan  dengan  cara  menginokulasikan  bakteri  pada  medium arginin setelah itu diberi parafin steril, diinkubasi selama 24-48 jam pada  suhu  ruang  dan  diamati  reaksinya.  Uji  arginin  dinyatakan  positif  jika  terjadi  perubahan warna media dari merah muda menjadi merah tua.     

Karakterisasi Bakteri kitinolitik   

Masing-masing  isolat  kitinolitik  dengan  populasi  terbanyak  kemudian  dilihat aktivitas kitinasenya. Aktivitas kitinase diketahui dengan cara mengukur  diameter zona bening yang dihasilkan oleh masing-masing isolat kitinolitik  pada  medium   kitin.   Aktivitas   kitinase   digolongkan   menjadi   beberapa   kriteria  diantaranya:  1. Sangat Kuat : Diameter zona bening > 2cm  2. Kuat 

: Diameter zona bening 1.5-2 cm

     

27 

3. Sedang 

: Diameter zona bening 0.5-1.5 cm 

4. Rendah 

: Diameter zona bening < 0.5 cm. 

     

   

Analisis Data   

Data-data peubah pengamatan percobaan pengaruh varietas kedelai, mulsa  jerami dan aplikasi PGPR terhadap keparahan dan perkembangan penyakit pustul  bakteri  dan  kelimpahan  bakteri  rizosfer,  dianalisis  ragam  (ANOVA)  menggunakan piranti lunak SAS versi 9.1.3 dilanjutkan dengan Uji Perbandingan  Nilai Tengah metode DMRT pada taraf 1 dan 5 %.

     

28

     

29       

HASIL DAN PEMBAHASAN       

Pengaruh Varietas Kedelai, Mulsa Jerami dan Aplikasi PGPR terhadap  Penyakit Pustul Bakteri     

Gejala pustul bakteri mulai terlihat di lapang pada umur tanaman 1 minggu  setelah  tanam  (MST)  dengan  keparahan  penyakit   yang  masih  rendah  dan  berkembang pada minggu-minggu berikutnya. Gejala awal penyakit pustul banyak  ditemukan pada daun-daun muda bagian atas. dengan gejala pada daun terdapat  bercak  berwarna  hijau  pucat  kekuningan  dengan  ukuran  sebesar  mata  jarum.  dengan bagian tengah agak menonjol (bisul),   bercak nampak kebasah-basahan,  kemudian bercak berkembang seiring dengan pertambahan umur tanaman.  Pada  gejala  lanjut,  bercak  kemudian  berwarna  coklat  muda  sampai coklat  tua,  pada  bagian inti bercak berwarna abu-abu bercak membesar, tepi bercak tidak teratur,  mengering dan mudah sobek (Gambar 4 ).                             

Gambar  4  Gejala awal penyakit  pustul bakteri pada 2  MST  (a); Gejala  lanjut  penyakit pustul bakteri pada 7MST pada tanaman yang sama (b).   

Perkembangan  penyakit  pustul  bakteri  pada  1  MST  sampai  6  MST  mengalami peningkatan yang tidak terlalu  besar rata-rata peningkatan penyakit  sebesar  1.51%.  Akan  tetapi,   pada 7  MST  penyakit  pustul  bakteri  mengalami  peningkatan yang cukup besar dengan rata-rata peningkatan keparahan penyakit  sebesar 4.71% (Gambar 5) hampir pada seluruh kombinasi perlakuan kecuali pada  perlakuan  varietas  Gepak  Kuning,  mulsa  jerami  dengan  atau  tanpa  PGPR  (V2M1P1,V2M1P2).  Pada  saat  7MST  tanaman  berada  dalam  stadium  mulai

     

30 

berbunga  sampai  berbunga  penuh  yang  ditandai  dengan  terbukanya  bunga 

     

pertama pada setiap buku dan terbukanya bunga pada satu dari dua buku diatas  pada batang utama dengan daun terbuka penuh. Dirmawati (2004) menyatakan  bahwa masa pembungaan kedelai merupakan fase kritis tanaman kedelai terhadap  penyakit pustul bakteri.    80  V1M1P1 

KeparahanPenyakit(%) 

70    60 

V1M1P2  AUDPC = 208  AUDPC = 194  AUDPC = 181  AUDPC = 179  AUDPC = 149  AUDPC = 135          AUDPC = 47  AUDPC = 42 

V1M2P1         V1M2P2  V2M1P1         V2M1P2 

50 

V2M2P1         V2M2P2 

40    30    20  10    0  1 

2 

3 

4 

5 

6 

7 

8 

9 

10 

11 

12 

Waktu Pengamatan (Minggu)   

Gambar 5 

Rata-rata keparahan penyakit pustul bakteri pada 1 hingga 12 MST  dan  nilai  AUDPC;  V1:  varietas  Anjasmoro;  V2:  varietas  Gepak  Kuning;  M1:  dengan  mulsa  jerami;  M2:  tanpa  mulsa  jerami;  P1:  dengan PGPR; P2: tanpa PGPR.   

Penyakit  lain  yang ditemukan di Lapangan selain pustul bakteri adalah  karat,  busuk  pangkal  batang  (Sclerotium  rolfsii)  dan  penyakit  yang  diduga  disebabkan  oleh  virus.  Karat  merupakan  penyakit  yang  dominan  selain  pustul  yang ditemui di lapangan. Sedangkan penyakit busuk pangkal batang dan penyakit  yang diduga disebabkan oleh virus hanya sedikit ditemukan menginfeksi tanaman  kedelai di lapangan.  Hasil  analisis   statistik   menunjukkan   bahwa   perlakuan   faktor  tunggal  varietas menunjukkan pengaruh sangat nyata (p < 0.01) terhadap perkembangan  penyakit.  Kombinasi  perlakuan  antara  varietas  dan  pemberian  mulsa  jerami  menunjukkan pengaruh nyata (p < 0.05) terhadap perkembangan penyakit (Tabel  1). 

     

31       

Tabel 1 Ringkasan hasil analisis ragam (Anova) perlakuan varietas, pemberian  mulsa dan aplikasi PGPR terhadap perkembangan penyakit pustul bakteri  (AUDPC) dan kelimpahan bakteri kitinolitik, tahan panas,   fluorescence  dan non-fluorescence   

 

AUDPC 

Perlakuan  Varietas  Mulsa  PGPR  Varietas XMulsa  Varietas X PGPR  MulsaXPGPR  VarietasXMulsa  X  PGPR 

Tahan  panas  TN  TN  TN 

**  TN  TN  *  TN  TN  TN 

 

    Kelimpahan bakteri Kitinolitik     fluorescence          Non- 

fluorescence 

TN  TN  TN  TN  TN  TN  TN  **  TN  TN            TN                 TN                  TN  TN            TN                 TN                  TN  TN            TN                 TN                  TN  TN            TN                 TN                  TN 

Ket: *) Nyata (5%), **) Sangat Nyata(1%), TN (Tidak Nyata)   

Penggunaan   varietas   Gepak   Kuning   terbukti   mampu 

mengurangi 

keparahan penyakit  pustul bakteri.  Berdasarkan  hasil  analisis  ragam,  diketahui  bahwa   keparahan   penyakit 

pada   varietas   Gepak 

Kuning  lebih   rendah 

dibandingkan varietas Anjasmoro. Nilai keparahan pada akhir pengamatan untuk  varietas Anjasmoro  adalah 60%  sedangkan untuk  varietas Gepak  Kuning  nilai  keparahan  penyakit  jauh  lebih  kecil  dibandingkan  dengan  varietas  Anjasmoro  yaitu  33%.  Selain  itu,  perkembangan  penyakit  pada  varietas  Anjasmoro  lebih  besar dibanding pada varietas Gepak Kuning dilihat dari nilai AUDPC masing-  masing sebesar 199 dan 99 unit (Gambar 6). Hal ini menunjukkan bahwa varietas  Gepak Kuning lebih mampu menekan perkembangan penyakit pustul dibanding 

Keparahanpenyakit 

varietas Anjasmoro.  80    60  40    20 

Anjasmoro  Gepak Kuning 

    35a    23a    18a 15b  22b  9a8a  12a12a  14a12a  11b     

    4a4a    6a6a 

  54a    61a    60a     AUDPC = 199a    45a  36b    30b     35b    33b 

AUDPC = 99b 

0  1 

2 

3 

4 

5  6  7  8  Umur Tanaman (Minggu) 

9 

10 

11 

12 

Gambar 6  Pengaruh varietas terhadap keparahan penyakit pustul bakteri dan nilai  AUDPC.  Agrios (2005) menyatakan bahwa banyak faktor yang dapat memengaruhi  ketahanan tanaman. Ketahanan tanaman inang, dapat bersifat : (1) genetik, sifat 

     

32 

tahan diatur oleh sifat genetik yang dapat diwariskan, (2) morfologik, sifat tahan 

     

yang  disebabkan  oleh  sifat  morfologi  tanaman  yang  tidak  menguntungkan  patogen,  dan  (3)  kimiawi,  ketahanan  yang  disebabkan  oleh  zat  kimia  yang  dihasilkan oleh tanaman.  Hasil pengamatan di Lapangan, diketahui bahwa karakter daun pada varietas  Gepak  Kuning  berbentuk  lonjong,  agak  meruncing,  tidak  begitu  lebar  dan  berwarna  hijau  gelap.  Sedangkan,  varietas  Anjasmoro  memiliki  daun  yang  berbentuk oval, lebar dan warnanya lebih terang dibandingkan dengan varietas  Gepak Kuning (Gambar 7). Diduga, adanya perbedaan morfologi tersebut menjadi  salah satu faktor ketahanan terhadap penyakit pustul bakteri. Hal ini sesuai dengan  penelitian  Fanani et  al.  (1981),  mengemukakan bahwa tanaman kedelai   yang  agak  tahan  terhadap  penyakit  daunnya  lebih  kaku  dan  warnanya  lebih  gelap  sedangkan pada yang peka daunnya agak lemas dan warnanya lebih terang. Lebih  lanjut dijelaskan bahwa daun yang memiliki karakter lebih gelap dan kaku lebih  sulit untuk diinfeksi patogen secara langsung dan cenderung lebih tahan terhadap  luka  mekanik  (Sharma  1993).  Semakin  kecil  terjadinya  luka  mekanik,  maka  memperkecil kemungkinan X. axonopodis pv. glycines masuk dan menginfeksi  tanaman.                         

Gambar 7   Gejala penyakit pustul bakteri pada varietas Anjasmoro (a); Gejala  penyakit pustul bakteri pada varietas Gepak Kuning pada 7 MST (b).   

Singh (1986) menambahkan terhindarnya daun-daun dari serangan penyakit,  kemungkinan disebabkan karena adanya ketahanan morfologis yaitu terdapatnya  bulu-bulu daun (trichoma) pada permukaan daun, sedikitnya jumlah stomata dan  ketidaksesuaian membuka dan menutupnya stomata dengan proses infeksi oleh  patogen.  Bakteri  penyebab  pustul  (X.  axonopodis  pv.  glycines)  menginfeksi

     

33 

tanaman kedelai melalui secara pasif melalui lubang alami seperti hidatoda dan 

     

stomata atau melalui luka mekanik. Oleh karena itu, diduga jumlah hidatoda dan  stomata,  lebar  sempitnya  hidatoda  dan  stomata  serta  frekuensi  membuka  dan  menutupnya  stomata  berpengaruh  dalam  ketahanan  tanaman  kedelai  terhadap  penyakit  pustul.  Akan  tetapi,  informasi  mengenai  hal  tersebut  pada  varietas  Anjasmoro dan Gepak Kuning belum diketahui.  Selain dari karakter morfologi, sifat genetik tanaman juga mempengaruhi  ketahanan  tanaman.  Agrios  (2005)  menyatakan  bahwa  adanya  variasi  dalam  kerentanan  tanaman  terhadap  patogen  disebabkan  adanya  perbedaan  gen  yang  mengendalikan ketahanan, tingkat patogenesitas dan faktor lingkungan. Pengaruh  setiap gen ketahanan bervariasi mulai dari yang sangat besar sampai sangat kecil,  tergantung pada fungsi yang dikendalikannya.  Interaksi antara varietas dan pemberian mulsa jerami juga mempengaruhi  terhadap penekanan perkembangan penyakit (Tabel 1). Kombinasi antara varietas  Gepak Kuning yang diberi mulsa (V2M1) diketahui mampu menekan keparahan  penyakit   pustul  dilihat   dari   nilai   AUDPC   yang   sangat   kecil   (16.3   unit)  dibandingkan dengan nilai pada perlakuan kontrol untuk varietas yang mencapai  114.3  unit.  Diduga  terjadi  interaksi  yang  kompatibel  antara  varietas  Gepak  Kuning dengan pemberian mulsa (Gambar 8).    80 

KeparahanPenyakit(%) 

70  60  50 

Anjasmoro dengan mulsa  Anjasmoro tanpa mulsa  Gepak Kuning dengan mulsa  Gepak Kuning tanpa mulsa 

40  30  20 

AUDPC= 172.7  AUDPC= 151.7  AUDPC= 114.3        AUDPC= 16.3 

10  0     

Umur tanaman (minggu)  Gambar  8 

Pengaruh  kombinasi  antara  varietas  dan  pemberian  mulsa  jerami  terhadap keparahan penyakit pustul dan nilai AUDPC. 

     

34 

Berdasarkan hasil analisis sebelumnya diketahui varietas Gepak  Kuning 

     

lebih  mampu  menekan  perkembangan  penyakit  pustul  dibandingkan  dengan  varietas Anjasmoro. Pada Gambar 7 diketahui bahwa varietas Gepak Kuning yang  diaplikasikan tunggal memiliki nilai perkembangan penyakit (AUDPC) sebesar 99  unit, sedangkan jika varietas Gepak Kuning yang diberi tambahan mulsa jerami  maka  menurunkan  nilai  AUDPC  sebesar  16.3.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  varietas  Gepak  Kuning  akan  lebih  optimum  dalam  menekan  perkembangan  penyakit pustul jika diberi mulsa jerami.  Penambahan  mulsa  jerami  memberikan  sumbangan  bahan  organik  pada  tanah.  Lebih  lanjut  Mustaha  (1999)  menjelaskan  bahwa  penambahan  bahan  organik  akan  membentuk  agregat  tanah  menjadi  lebih  baik  sehingga  aerasi,  permeabilitas  dan  infiltrasi  menjadi  lebih  baik.  Kondisi  ini  akan  mendorong  perkembangan akar, sehingga kemampuan akar menyerap air dan unsur hara juga  meningkat. Peningkatan serapan hara dan air akan berdampak pada peningkatan  aktifitas  fotosintesis  yang  secara  langsung  akan  meningkatkan  metabolisme  tanaman sehingga tanaman menjadi lebih vigor, dan lebih tahan terhadap infeksi  penyakit.  Bahan organik juga berpengaruh langsung maupun tidak langsung terhadap  ketersediaan hara. Bahan organik secara langsung merupakan sumber hara N, P,  S, unsur mikro maupun unsur hara esensial lainnya. Secara tidak langsung bahan  organik  membantu  menyediakan unsur  hara N melalui fiksasi N2  dengan cara  menyediakan  energi  bagi  bakteri  penambat  N2,   membebaskan  fosfat   yang  difiksasi secara kimiawi maupun biologi dan menyebabkan pengkhelatan unsur  mikro sehingga tidak mudah hilang dari zona perakaran (Sharma 2002).  Varietas Gepak Kuning diketahui sebelumnya lebih tahan terhadap pustul  dibandingkan dengan varietas Anjasmoro. Varietas tanaman yang tahan diduga  menghasilkan eksudat akar dengan kandungan senyawa yang cocok dibutuhkan  oleh  mikroorganisme  tanah  yang  bermanfaat,  sehingga  mikroorganisme  tanah  lebih   banyak  tertarik  pada  perakaran  varietas   Gepak   Kuning  dan  mampu  berkembang secara optimal.  Brimecombe et al. (2001) menjelaskan bahwa tingkat kolonisasi suatu agens  biokontrol sangat dipengaruhi oleh eksudat tanaman. Pergerakan bakteri di dalam

     

35 

rizosfer  dipengaruhi  antara  lain  oleh  kandungan  bahan  kimia  dalam  eksudat 

     

perakaran. Kandungan senyawa kimia yang ada dalam eksudat akar dipengaruhi  oleh beberapa faktor antara lain jenis dan umur tanaman. Komposisi mikroba dan  kelimpahan  spesies pada  tanah  yang  berdekatan  dengan  tanaman  berhubungan  secara  langsung  maupun  tidak  langsung  dengan  eksudat  akar  dan  beragam  tergantung pada faktor lingkungan yang sama yang mempengaruhi eksudasi.  Salah satu cara mengatasi kekurangan bahan organik di tanah adalah dengan  pemberiam  mulsa  jerami.  Hasil  analisis  statistik  diketahui  bahwa  pemberian  mulsa jerami tidak berpengaruh nyata terhadap penekanan penyakit pustul bakteri  (Tabel 1).   Data hasil pengamatan keparahan penyakit pustul bakteri pada petak  yang  diberi  mulsa  dan  tanpa  mulsa  ditampilkan  pada  Gambar  9.  Pada  awal  pengamatan  mulai  1  MST-  3MST  dan  8  MST  pemberian  mulsa  berpengaruh  nyata terhadap keparahan penyakit dibandingkan dengan petak yang tidak diberi  mulsa. Akan tetapi,  secara umum dilihat dari nilai keparahan penyakit, pemberian  mulsa  tidak  terlalu   berbeda  nyata  dengan  petak  yang  tidak  diberi  mulsa.  Walaupun   tidak   berbeda   nyata,   perlakuan   pemberian   mulsa   menghasilkan  keparahan penyakit pustul bakteri yang lebih rendah dibandingkan dengan yang  tanpa mulsa dilihat dari nilai AUDPC dengan nilai masing-masing untuk mulsa  dan tanpa mulsa adalah 112 unit dan 154 unit. Aplikasi mulsa jerami dilakukan  satu kali pada awal penanaman setelah penanaman benih. Diduga,   mulsa jerami  yang  diberikan ke tanah secara umum hanya dapat  bertahan pada  3-4  minggu  setelah aplikasi.  60 

KeparahanPenyakit(%) 

50  40 

  Tanpa Mulsa  Mulsa 

AUDPC = 154    AUDPC = 112 

30  20  10  0      Waktu Pengamatan (Minggu) 

Gambar 9  Pengaruh pemberian mulsa jerami terhadap keparahan penyakit pustul  dan nilai AUDPC. 

     

36 

Hasil analisis ragam,  aplikasi tunggal PGPR menunjukkan bahwa aplikasi 

     

PGPR yang berasal dari kombinasi B. subtilis AB89 dan P. fluorescens RH4003  belum mampu mengendalikan penyakit pustul bakteri dilihat dari nilai keparahan  penyakit dan AUDPC yang tidak berbeda nyata dengan petak kontrol (Gambar  10). Banyak faktor yang dapat mempengaruhi keberhasilan aplikasi agens PGPR  di lapangan. Agens PGPR diaplikasikan pada perakaran tanaman kedelai dengan  konsentrasi yang cukup besar  + 107-108 cfu/ml. Harapannya, dengan jumlah yang  besar, peluang agens PGPR dalam mengkolonisasi perakaran juga semakin besar.  Kemungkinan, agens PGPR yang diaplikasikan tidak dapat  beradaptasi dengan  lingkungan  yang  baru  dan  harus  bersaing  dengan  mikroorganisme  lain  yang  sebelumnya telah ada di lapangan.   Selain itu, aplikasi PGPR hanya dilakukan  sekali pada awal penanaman.    60   

   

KeparahanPenyakit(%) 

50  40 

      PGPR  AUDPC=128.7  AUDPC=123.4 Kontrol                                                    

30    20    10    0        Waktu Pengamatan (Minggu)     

Gambar 10  Pengaruh aplikasi PGPR terhadap keparahan penyakit pustul dan nilai  AUDPC.   

Frekuensi  juga diduga  berpengaruh terhadap  keberhasilan  agen PGPR di  lapangan.  Hal  ini  berhubungan  dengan  kompetisi  antara  agens  PGPR  yang  diaplikasikan  dengan  mikroorganisme  asli.  Nawangsih  (2006)  menambahkan  bahwa walaupun  inokulasi agens  biokontrol biasa dalam jumlah  besar,  namun  setelah  beberapa  bulan  hanya  sedikit  yang  berhasil  diisolasi  kembali.  Dalam 

     

37       

jangka  waktu  tertentu  strain  yang  diintroduksikan  populasinya  lebih  dominan,  akan tetapi secara perlahan akan digantikan oleh mikroorganisme penghuni asli.  Oleh  karena  itu,  aplikasi  agens  antagonis  tidak  cukup  hanya  sekali,  harus  dilakukan berulang.  Dalam  epidemiologi,  langkah  awal  untuk  mencegah  terjadinya  epidemi  adalah   dengan   mengurangi   inokulum   awal.   Salah   satu   caranya   dengan  perendaman  benih  menggunakan  PGPR.  Aplikasi  melalui  perendaman  benih  dilakukan untuk mempertahankan populasi dengan harapan B. subtilis AB89 dan  P. fluorescens RH4003 mampu mengkolonisasi perakaran saat pertama muncul  dari benih sebagai langkah langkah awal untuk perlindungan. Nawangsih (2006)  melaporkan aplikasi melalui perendaman benih mampu mempertahankan populasi  P.  fluorescens  RH4003  tetap  tinggi (+ 108  cfu/g  akar)  hingga  25  hari  setelah  aplikasi.  Hasil isolasi  bakteri rizosfer  diketahui bahwa keragaman  bakteri rizosfer  cukup tinggi pada lahan percobaan dilihat dari nilai keragaman pada petak kontrol  untuk masing-masing varietas (V1M2P2 dan V2M2P2) (Tabel 3). Menurut Cook  dan Baker (1996) keragaman mikroorganisme tanah juga akan sangat berpengaruh  terhadap  agen  PGPR  dalam  pemanfaatan  bahan  makanan,  ruang  dan  udara.  Semakin  banyak  mikroorganisme  saprofit  di dalam tanah  maka  akan  semakin  tinggi persaingan antara PGPR dengan mikroorganisme saprofit lainnya terutama  dalam pengambilan nutrisi/makanan.  Nawangsih (2006) menyatakan bahwa untuk mengendalikan suatu penyakit,  agens biokontrol dituntut tidak hanya terdapat dalam jumlah yang banyak tetapi  harus dapat aktif mengekspresikan kemampuan antagonismenya dan tepat sasaran.  Agens PGPR dengan mekanisme antagonis akan lebih efektif jika memiliki niche  yang  sama dengan patogen.  Diketahui  bahwa  agens PGPR  yang  diaplikasikan  merupakan bakteri rizosfer yang diisolasi dari rizosfer tanaman tomat, sedangkan  bakteri penyebab penyakit  pustul hidup  di daerah  filloplane.  Sehingga,  diduga  mekanisme yang berperan adalah induksi ketahanan untuk meningkatkan aktivitas  enzim peroksidase. Diduga, agen PGPR yang diaplikasikan kurang mampu dalam  menginduksi ketahanan tanaman, atau kemungkinan ada agen PGPR indigenous

     

38 

(PGPR  yang  sebelumnya  telah  ada/PGPR  asli)  yang  lebih  berperan  dalam 

     

menginduksi ketahanan tanaman terhadap penyakit pustul.  Penelitian  sebelumnya,  diketahui  bahwa  P.  fluorescence  RH4003  dan  B.  subtilis  AB89  dapat  menekan  penyakit  layu  bakteri  yang  disebabkan  oleh  Ralstonia   solanacearum   di   tomat   masing-masing   sebesar   22%   dan   35%  (Nawangsih  2006).  Ketidakberhasilan  P.  fluorescence  RH4003  dan  B.  subtilis  AB89 dalam menekan perkembangan pustul bakteri pada kedelai dapat dikaitkan  dengan hubungan antara jenis tanaman dengan agens PGPR yang diaplikasikan.  Glick   (1999) 

mengemukakan   bahwa   hubungan   antara   tanaman   dengan 

mikroorganisme  tanah  dapat  bersifat  kompatibel  atau  tidak.  Kompatibel,  jika  senyawa  dan  asam  organik  yang  dikeluarkan  oleh  tanaman  cocok  dengan  kebutuhan mikroorganisme tersebut sehingga dapat tumbuh secara optimal dan  bersimbiosis  mutualisme  dengan  tanaman. 

Bakteri  PGPR  (P.  fluorescence 

RH4003  dan  B.  subtilis  AB89)  diisolasi  dari  tanaman  tomat,  sehingga  ketika  diaplikasikan kembali pada  perakaran tomat  cocok  dengan  habitat  asal bakteri  tersebut,   sehingga   bakteri   PGPR   tersebut 

berkembang   dengan   optimal. 

Kemungkinan, tidak terjadi kompatibilitas jika bakteri PGPR diaplikasikan pada  tanaman kedelai karena senyawa dan asam organik yang dikeluarkan oleh akar  tanaman  kedelai  kurang  cocok  dengan  kebutuhan  nutrisi  bakteri  PGPR  yang  diaplikasikan.       

Pengaruh Varietas Kedelai, Mulsa Jerami dan Aplikasi PGPR terhadap  Kelimpahan Bakteri Rizosfer   

Koloni bakteri diperoleh dari hasil isolasi contoh tanah yang diambil tiga  kali  selama  musim  tanam,  yaitu  pada  saat  pertumbuhan  tanaman  pada  fase  vegetatif, pembungaan dan pengisian polong. Dari hasil isolasi diperoleh empat  kelompok bakteri. Koloni bakteri tahan panas diperoleh dari medium TSA, bakteri  kitinolitik  diperoleh  dari  medium  kitin.  Dari  medium  KBA  diperoleh  dua  kelompok bakteri,   jika diamati dibawah lampu  UV berpendar  maka termasuk  kelompok  bakteri fluorescence,  sedangkan  jika tidak  tergolong  kelompok  non-  fluorescence.

     

39        Pertumbuhan bakteri pada medium TSA dan KBA lebih cepat (24-48 jam) 

dibandingkan dengan pertumbuhan bakteri kitinolitik pada medium kitin (96-120  jam).  Secara umum,   jumlah koloni  bakteri tahan panas  banyak  dibandingkan  dengan bakteri lainnya (Gambar 11).    15%    31 %   

Tahan panas  Non-fluorescence  Kitinolitik  24% 

fluorescence 

          30%   

Gambar 11 Total kelimpahan bakteri (%) pada masing-masing kelompok.   

Secara umum,  kombinasi perlakuan  varietas,  mulsa  jerami dan aplikasi  PGPR  mampu  meningkatkan kelimpahan  bakteri rizosfer  kelompok  kitinolitik,  tahan panas, fluorescence dan non-fluorescence dibandingkan dengan perlakuan  kontrol  pada  masing-masing  varietas  (V1M2P2  dan  V2M2P2)  (Gambar  12).  Menurut  Graham  (2005)  mengemukakan  bahwa  keseimbangan  biologi  pada  rizosfer  untuk  mengendalikan  patogen  dapat  diciptakan  dengan  memanipulasi  lingkungan  yaitu  dengan  cara  integrasi  pengendalian  hayati dan  kultur  teknis.  Keseimbangan  mikroorganisme  selain  dapat  melindungi  akar  tanaman  inang  namun  juga  terdapat  beberapa  keuntungan  yaitu  produksi  senyawa  pemacu  pertumbuhan  tanaman  atau  peningkatan  pengambilan  hara  dan  air  oleh  akar  tanaman.  Kombinasi perlakuan varietas Gepak  Kuning, dengan mulsa jerami dan  dengan aplikasi PGPR (V2M1P1) menunjukkan nilai kelimpahan bakteri terbesar  hampir   pada   semua   kelompok   bakteri,   kecuali   kelompok   bakteri   non-  fluorescence.  Selain  itu,  diketahui  juga  bahwa  keragaman  kelompok  bakteri  terbanyak terdapat   pada kombinasi perlakuan Gepak Kuning yang diberi mulsa 

     

40 

jerami   dan   diaplikasikan   PGPR   (V2M1P1)   (Tabel   2).   Semakin   beragam  mikroorganisme 

dalam 

tanah 

makan  akan 

     

semakin  banyak  peluang 

mengendalikan patogen secara biologi.   

Tabel 2 Pengaruh varietas, mulsa jerami dan aplikasi PGPR terhadap keragaman  bakteri rizosfer (kelompok kitinolitik, tahan panas, non-fluorescence dan  fluorescence)  Keragaman bakteri (jumlah jenis)  Perlakuan 

Tahan  panas             Kitinolitik        fluorescence      Non-fluorescence  15  3                        1                           10  V1M1P1  5  7                        1                            9  V1M1P2  20  12                       3                           14  V2M1P1  7  19                       1                           11  V2M1P2  4  7                        1                            4  V1M2P1  10   9                        2                            3  V1M2P2  6  6                        1                            6  V2M2P1  4  3                        1                            6  V2M2P2  Ket : V1: varietas Anjasmoro; V2: varietas Gepak Kuning; M1: Dengan Mulsa  Jerami; M2:Tanpa Mulsa Jerami; P1: Dengan PGPR; P2: Tanpa PGPR.   

Hasil isolasi tanah diketahui bahwa kelimpahan bakteri rizosfer (kitinolitik, 

tahan panas, fluorescence dan non-fluorescence) lebih banyak terdapat pada petak  yang diberi mulsa jerami (Tabel 3).  Oke dan Ologun (2005) menyatakan bahwa  pemberian mulsa merupakan sumber energi bagi mikroorganisme yang hidup di  dalam  tanah  yang  selanjutnya  akan  didekomposisisi  dari  senyawa  kompleks  menjadi senyawa sederhana. Sehingga, hasil dekomposisisi dapat dimanfaatkan  langsung oleh tanaman. Adanya interaksi yang kompatibel antara mikroorganisme  dalam tanah dengan varietas Gepak Kuning memungkinkan terjadinya penekanan  terhadap perkembangan penyakit pustul bakteri.   

Tabel 3 Pengaruh pemberian mulsa jerami terhadap kelimpahan bakteri rizosfer   

Kelimpahan bakteri kelompok-(log cfu/g)  Perlakuan  Mulsa Jerami  Tanpa Mulsa jerami 

Tahan panas    Kitinolitik    fluorescence          Non-  fluorescence  12.09 a  7.94 a  6.36 a  11.70 a  11.90 a  7.10 a  5.02 a  11.37A 

Ket : Angka yang diikuti huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan hasil yang tidak  berbeda nyata (uji selang ganda Duncan 5%). 

Tahan Panas 

Kitinolitik  9.4a  8.3a      6.0a 

    6.5a 

4    2    0 

                8.4 ab   

        10  fluorescence       8  6.4 ab  6.3 ab  5.8 ab  6  Kelimpahanbakteri(logcfu/g) 

    7.5a   7.1a 

Kelimpahanbakteri(logcfu/g) 

8    6 

7.1a  7.6a 

4  2  0 

  4.9 a 5.6 a  3.1 a 

12.4a 

12,4 

                    4.9 a 

   

 

12,2 

12.0a 12.0a 

12  11,8 

 

 

  11.9a     

  12.1a    12.0a      11.8a 

11.7a 

11,6  11,4  11,2 

           

Non-fluorescence  12 Kelimpahanbakteri(logcfu/g) 

Kelimpahanbakteri(logcfu/g) 

10 

11,5 

 

11.8a   

     

      11.9a    11.8a   11.7a 

          11.6a 

11.3a  11.1a   11.0a 

11 

  10,5 

Gambar 12 Diagram kelimpahan masing-masing kelompok bakteri pada kombinasi perlakuan dibandingkan dengan kontrol pada  masing-masing  varietas; V1:  varietas Anjasmoro; V2:  varietas Gepak Kuning; M1: dengan mulsa jerami; M2:tanpa  mulsa jerami; P1: dengan PGPR; P2: tanpa PGPR. 

     

42 

Semua  isolat  yang  diperoleh   selanjutnya, 

      di   uji   Gram   dengan 

menggunakan KOH 3%, diketahui bahwa rata-rata pada kelompok bakteri tahan  panas dan  non-fluorescence sebagian  besar  merupakan kelompok bakteri gram  positif. Sedangkan semua isolat bakteri fluorescence  yang diperoleh termasuk ke  dalam  kelompok  bakteri  gram  negatif.  Dan  hanya  satu  dari  97  isolat  bakteri  kelompok  kitinolitik  yang  termasuk  gram  negatif,  sisanya  termasuk  kelompok  gram  positif.  Ciri  khas  pengelompokkan  kelompok  bakteri  berdasarkan  gram  positif  dan  negatif  terutama  didasarkan  pada  perbedaan  lapisan  peptidoglikan  yang menyusun dinding sel bakteri. Menurut Pelchzar dan Chan (1986) bakteri  gram  positif  memiliki  lapisan  peptidoglikan  yang  tebal  berupa  asam  teiokat,  sedangkan bakteri gram negatif memiliki lapisan peptidoglikan pada dinding sel  yang tipis. Sehingga, perlakuan KOH 3% terhadap massa bakteri gram negatif  akan  menyebabkan  rusaknya  dinding   sel  bakteri  dan  melepas  DNA  yang  merupakan komponen yang bersifat viscid (seperti lendir).  Selain  pengujian  gram,   karakteristik   yang  dilakukan  lainnya   adalah  pengujian hipersensitif. Uji ini dilakukan untuk mengetahui apakah isolat tersebut  patogen tumbuhan atau bukan. Hasil pengujian diketahui bahwa, sebanyak 85%  dari total semua populasi  bakteri bukan  merupakan  bakteri patogen tumbuhan  yang ditandai dengan reaksi negatif dari uji hipersensitif. Hal ini, menunjukkan  bahwa   kelompok   bakteri   tahan   panas,   kitinolitik 

fluorescence   dan   non 

fluorescence   yang ada pada petak yang diberi perlakuan lebih banyak bakteri  yang menguntungkan terhadap tanaman.  Hasil  analisis  statistika  diketahui  bahwa  aplikasi  PGPR  berpengaruh  terhadap peningkatan kelimpahan bakteri kelompok fluorescence (Tabel 4). PGPR  yang  diaplikasikan  merupakan  kombinasi  antara  B.   subtilis  AB89  dan  P.  fluorescens RH4003. Ada kemungkinan bakteri fluorescence yang diaplikasikan  terisolasi kembali. Oleh karena itu, dilakukan karakterisasi secara morfologi dan  fisiologi terhadap 5 jenis isolat terbanyak, dengan asumsi bahwa bakteri tersebut  merupakan  bakteri  yang  lebih  dominan  dan  mampu  bertahan  dibandingkan  dengan bakteri lain. 5 isolat terbanyak untuk kelompok fluorescence adalah F3,  F4, F7, F9 dan F11.

     

43       

Tabel 4  Pengaruh perlakuan varietas, mulsa jerami dan aplikasi PGPR terhadap  kelimpahan bakteri rizosfer   

Kelimpahan bakteri(log cfu/g tanah)  Kitinolitik  Tahan panas   fluorescence  Non-fluorescence  Anjasmoro  7.26 a  11.97 a  5.42 a  11.31 a  Gepak Kuning  7.78 a  12.03 a  5.96 a  11.77 a  Mulsa Jerami  7.94 a  12.09 a  6.36 a  11.70 a  Tanpa Mulsa  7.10 a  11.90 a  5.02 a  11.37 a  jerami  PGPR  8.02 a  12.02 a  6.69 a  11.63 a  Tanpa PGPR  7.02 a  11.97 a  4.69 b  11.45 a  Perlakuan 

Ket : Angka yang diikuti huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan hasil yang tidak  berbeda nyata (uji selang ganda Duncan 5%).     

Karakterisasi Morfologi dan Fisiologi Isolat Terbanyak   

Bakteri  Tahan Panas   

Hasil isolasi diketahui lima isolat terbanyak untuk kelompok bakteri tahan  panas yaitu T31, T42, T48, T61 dan T70. Karakterisasi fisiologi yang dilakukan  adalah uji endospora dan uji pada medium agar darah. Hasil pengujian endospora  melalui  pewarnaan  malachite  green  dan  pewarna  lawan  safranin  pada  semua  isolat yang diuji menunjukkan endospora berwarna hijau dengan sel vegetatifnya  berwarna merah muda seperti tampak pada Gambar 13.     

a                           

b 

Gambar  13  Endospora  T61  (hijau)  didalam  sel  vegetatifnya  (merah),  posisi  endospora   ditengah   (a);   Endospora   T70   (hijau)   didalam   sel  vegetatifnya  (merah),  posisi  endospora  didekat  ujung  (b);  Insert:  Endospora ditengah sel (kiri), endospora diujung sel (kanan)

     

44 

Tabel 5  Hasil pengujian endospora isolat tahan panas terbanyak 

     

 

 

No  1  2  3  4  5  6     

Kode isolat  T31  T42  T48  T61  T70  B. subtilis AB89 

Ada/tidaknya  endospora  Ada  Ada  Ada  Ada  Ada  Ada 

Posisi endospora  Dekat ujung  Dekat ujung  Tengah  Tengah  Dekat ujung  Dekat ujung 

Hasil pengujian, seperti tersaji pada Tabel 5 diketahui bahwa semua isolat 

tahan panas yang diuji memiliki endospora, akan tetapi, diketahui ada tiga isolat  yang memiliki posisi endospora yang sama dengan B. subtilis AB89 diantaranya  adalah T31, T42 dan T70. Menurut Pelczar dan Chan (1986) endospora berfungsi  sebagai struktur bertahan. Dibandingkan dengan sel vegetatif, endospora sangat  resisten terhadap kondisi-kondisi fisik yang kurang menguntungkan seperti suhu  tinggi  dan  kekeringan  juga  terhadap  bahan-bahan  kimia  seperti  desinfektan.  Beberapa ahli telah menghubungkan resistensi ini dengan selubung spora yang  impermeable,   yang   berkaitan   dengan   kompleks   asam   dipikolinatkalsium-  peptidoglikan.  Keadaan  ini  menjadi penting  bagi ketahanan  hidup  Bacillus sp.  khususnya  sebagai  agensia  pengendalian  hayati.  Beberapa  jenis  bakteri  yang  memiliki endospora selain Bacillus sp, adalah Clostridium sp dan Sporosarcina  sp.  Hasil  pengamatan  diketahui  posisi  endospora  dapat  terletak  ditengah  dan  didekat ujung sel. Menurut Salle (1973)  masing-masing spesies Bacillus memiliki  karakteristik tersendiri baik ukuran, bentuk dan posisi spora walaupun variasi ini  bisa berubah dalam lingkungan yang berbeda.  Selain endospora, uji lain yang dilakukan adalah uji pada medium agar  darah.  Pengujian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui sifat  lisis  dari  isolat  bakteri  terhadap medium agar darah. Hasil pengujian diketahui bahwa B. subtilis AB89  menunjukkan   reaksi   lisis   yang   bersifat   β-hemolisis,   ada   3   isolat   yang  menunjukkan reaksi yang sama dengan B. subtilis AB89 yaitu isolat T42, T48 dan  T70 (Tabel 6 dan Gambar 14). 

     

45 

Tabel 6   Reaksi lisis isolat terbanyak kelompok tahan panas pada medium agar  darah 

     

No  1 

Kode isolat  T31 

Sifat lisis  γ-hemolisis 

Keterangan  Tidak adanya perubahan warna 

 

2 

T42 

β-hemolisis 

Terlisis sempurna. warna lisis  bening 

3 

T48 

β-hemolisis 

Terlisis sempurna. warna lisis  bening  Tidak adanya perubahan warna 

 

4 

T61 

γ-hemolisis 

 

5 

T70 

β-hemolisis 

Terlisis sempurna. warna lisis  bening 

6 

B. subtilis AB89 

β-hemolisis 

Terlisis sempurna. warna lisis  bening 

                                       

Gambar 14   Reaksi hemolisis pada agar darah isolat bakteri tahan panas terpilih  (tampak depan) (A); Reaksi hemolisis pada agar darah isolat bakteri  tahan panas terpilih (tampak belakang) (B); a)T31, b) T42, c) T48, d)  T61,   e)  T70,  f)  B.  subtilis  AB89,   g)  kontrol (LB); γ-hemolisis  (tanda panah biru), β-hemolisis (tanda panah kuning).   

Hasil uji endospora dan uji pada medium agar darah, diketahui isolat T42,  T48 dan T70 memiliki kesamaan dengan isolat B. subtilis AB89. Akan tetapi,  dilihat  secara  morfologi  terdapat  perbedaan  antara  isolat  T42,  T48  dan  T70  dengan  isolat   B.  subtilis AB89  (Tabel 7).  Hal ini  menunjukkan bahwa  isolat  tersebut  diduga  bukan  merupakan B.  subtilis  AB89.  Diduga,  B.  subtilis AB89  kurang   mampu   bertahan   dan   bersaing   dengan   mikroorganisme   lain   yang  sebelumnya telah ada di lapangan. Simon et al  (2001) menyatakan bahwa strain  Bacillus pertumbuhannya relatif terbatas dibanding strain Pseudomonas.

     

46       

Tabel 7 Morfologi isolat T42, T48, T70 dan B. subtilis AB89   

 

Kode  Isolat  T42  T48 

Bentuk      Warna             Tepian                 Elevasi         Berlendir/  Tidak  Bundar  Putih kusam   Licin  Cembung  Tidak  Bundar  Putih kusam   Berombak  Cembung  Tidak 

T70  Bundar  B.subtilis  Bentuk  AB89  L 

Putih kusam   Seperti benang  Timbul  Tidak  Putih kusam   Berombak           Datar            Tidak 

 

Bakteri Fluorescence  Kelompok yang kedua yang dikarakteristik adalah kelompok fluorescence.  Isolat terbanyak pada kelompok ini adalah F3, F4, F7, F9 dan F11.   Hasil uji  LOPAT,  diketahui  hanya  isolat  F9  yang  berbeda  dengan  bakteri  PGPR  yang  diaplikasikan (P. fluorescens RH4003). Sedangkan, isolat lainnya menunjukkan  karakter yang sama dengan bakteri PGPR yang diaplikasikan (Tabel 8).  Tabel 8  Hasil uji LOPAT isolat kelompok fluorescence terbanyak   

Uji LOPAT  Kode isolat 

   

Levan    Oksidase      Potato  Soft  rot 

 

Arginin              Tobacco  hyper-  NonBer-  sensitive  parafin parafin  +  +  - 

F3 

+ 

+ 

- 

F4  F7  F9  F11  P. fluorescens  RH4003 

+  +  -  + 

+  +  -  + 

-  -  +  - 

+  +  -  + 

+  +  -  + 

-  -  -  - 

+ 

+ 

- 

+ 

+ 

- 

   

Hasil uji levan, diketahui hanya isolat F9 yang bereaksi negatif (Tabel 8). 

Sedangkan isolat lainnya menunjukkan reaksi yang positif. Reaksi positif ditandai  dengan koloni yang cembung, membentuk kubah (Gambar 15). Levan terbentuk  sebagai akibat aktifitas enzim dari levan sukrase dalam sukrosa (disakarida yang  terdiri   dari   glukosa   dan   fruktosa).   Glukosa   dimetabolisme   dan   fruktosa  dipolimerasi (Schaad 2001). 

     

47                               

Gambar  15  Uji  levan  isolat  fluorescence  (A);  Reaksi  positif uji  levan,  koloni  seperti kubah (cembung jelas), putih, mucoid (B); Reaksi negatif uji  levan, koloni datar, tidak berkilau dan transparan (C).   

Pengujian  yang  kedua  adalah  uji  oksidase.  Enzim  oksidase  memegang  peranan  yang  penting  dalam  operasi  sistem  transport  elektron  selama  proses  respirasi   secara   aerob.   Cytocrom   oksidase,   mengkatalisis   oksidasi   dengan  mereduksi molekul oksigen (O2), menyebabkan atau menghasilkan bentuk H2O  atau  H2O2.  Bakteri  yang  anaerobik,  sebagiamana  beberapa  yang  fakultatif  anaerobik dan mikro aerophilik, memperlihatkan aktifitas oksidase (Salle 1973).                             

Gambar 16 Reaksi oksidase isolat fluorescence (A); Reaksi oksidase positif (+)  berwarna  ungu  (B.a);  Reaksi  oksidase  negatif  (-)  tidak  terjadi  perubahan warna (B.b).  Pengujian  yang  ketiga  adalah  Potato  Soft  Root.  Pengujian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  aktivitas  pektolitik  isolat  bakteri  yang  diuji  yakni  dalam  menghasilkan  enzim  pektinase  (Schaad  2001).  Diketahui  bahwa  hanya  isolat  bakteri  F9  yang  bereaksi  positif,  artinya  hanya  isolat 

bakteri  tersebut  yang 

mampu  menghasilkan  enzim  pektinase  (Gambar  17).  Sedangkan,  pengujian  terakhir yaitu reaksi hidrolisis arginin. Hasilnya diketahui bahwa isolat F3, F4, F7

     

48       

dan F11 bereaksi positif. Hal ini menunjukkan bahwa isolat-isolat tersebut bersifat  anaerob. Fahl dan Hayward (1983) menyatakan bahwa enzim arginin desmidase  di  dalam  bakteri  memiliki  peranan  sebagai  pendegradasi  arginin  yang  sangat  dibutuhkan   untuk   tumbuh   pada   kondisi   anaerobik.   Enzim-enzim   tersebut  (generate)  ATP  dengan  cara  mengubah  arginin  menjadi  ornitin  dengan  cara  menggenerasi CO2 dan NH3. Perubahan warna terjadi karena reaksi yang bersifat  alkalin merupakan reaksi yang bersifat alkalin dari produksi NH3 pada lingkungan  yang anaerob.                                     

Gambar 17  Reaksi potato soft rot positif (+) umbi busuk. Kecoklatan, berlendir  (A.a);  Reaksi  potato  soft  rot  negatif (-)  umbi  segar,  tidak  terjadi  perubahan   warna   (A.b);  Reaksi   potato   soft   rot   pada   isolat  fluorescence (B).   

Dari  hasil  semua  pengujian  karakterisasi  pada  kelompok 

fluorescens, 

diketahui hampir semua isolat bakteri yang diuji menunjukkan karakteristik yang  sama  dengan  bakteri  PGPR  yang  diaplikasikan  yaitu  P.  fluorescens  RH4003,  kecuali  isolat  F9.  Dilihat  dari  morfologi  koloni  isolat  yang  mirip  dengan  P.  fluorescens   RH4003   adalah   isolat   F4   dan   F7.   Untuk   lebih   meyakinkan,  seharusnya  dilakukan  analisis  secara  molekuler  untuk  mengetahui  kemiripan  isolat tersebut.   

Bakteri Kitinolitik  Karakterisasi juga dilakukan pada kelompok bakteri kitinolitik. Berdasarkan  hasil pengujian diketahui 5 isolat bakteri kitinolitik dengan populasi terbanyak,  memiliki  aktifitas  zona  bening  yang  beragam.  Mulai  dari  sangat  kuat  sampai

     

49 

rendah.  Isolat  kitinolitik  terbanyak  adalah  K17, 

     

K21,  K29,  K31  dan  K37. 

Hasilnya diketahui bahwa isolat  kitinolitik  K17  mempunyai aktifitas kitinolitik  yang sangat kuat sebesar 2.1 cm (Gambar 18). Bakteri  penghasil enzim kitinolitik  banyak berada pada habitat yang memiliki kandungan kitin tinggi, seperti kompos  yang mengandung kitin (Sakai et al. 1998), eksosskeleton crustaceae (Vogan et al.  2002), air laut, sedimen laut (Brzezinska dan Donderski 2001) dan tanah (Chernin  et al. 1995)                                     

Gambar 18 Aktivitas kitinolitik isolat K17 pada medium kitin.   

Adanya aktifitas zona bening pada medium kitin, menunjukkan bahwa bakteri  mempunyai  kemampuan  untuk  menghasilkan  enzim  kitinolitik  yang  mampu  mendegradasi  kitin.   Lebih   lanjut   dijelaskan  Patil  (2004)   Enzim  kitinolitik  merupakan  enzim  ekstraseluler  untuk  pengambilan  nutrisi  dan  parasitisme.  Brzezinska  dan  Donderski  (2001)  menambahkan,  bakteri  memproduksi  enzim  kitinolitik  untuk  mendegradasi  kitin  sehingga  memperoleh  N-asetilglukosamin  sebagai nutrisi karbon dan nitrogen untuk proses hidup bakteri. Thompshon et al  (2001) melaporkan bahwa degradasi kitin oleh enzim kitinolitik  bakteri adalah  untuk  memperoleh  N-asetilglukosamin  yang  selanjutnya  akan  dimetabolisme  sehingga menghasilkan energi, CO2, H2O dan NH3. Menurut Metclaf et al (2002)  peranan  bakteri  kitinolitik  penting  dalam  mempertahankan  siklus  karbon  dan  nitrogen dari degradasi kitin dalam ekosistem. Hasil isolasi kelompok bakteri ini  dapat  dijadikan  koleksi untuk  kemudian  dapat  dijadikan  calon  agen  antagonis  untuk penyakit-penyakit pada kedelai.

     

50

     

51       

KESIMPULAN   

Varietas, pemberian mulsa jerami dan aplikasi PGPR secara bersama-sama  tidak mempengaruhi perkembangan penyakit pustul bakteri pada kedelai. Tetapi,  hanya faktor varietas dan interaksi antara varietas dengan pemberian mulsa jerami  yang  memberikan  pengaruh  terhadap  perkembangan  penyakit 

pustul. 

Perkembangan penyakit pustul bakteri pada varietas Gepak Kuning lebih rendah  dibandingkan  dengan  pada  varietas  Anjasmoro.  Kombinasi  perlakuan  varietas  Gepak  Kuning  dan  pemberian  mulsa  jerami  mampu  menekan  perkembangan  penyakit  pustul  bakteri  dibandingkan  dengan  kombinasi  perlakuan  yang  lain.  Aplikasi PGPR hanya meningkatkan kelimpahan bakteri kelompok fluorescence,  sedangkan perlakuan lainnya tidak mempengaruhi kelimpahan bakteri rizosfer.   

SARAN   

1.  Perlu dilakukan pengujian aplikasi PGPR di lapangan dengan frekuensi dan  dosis yang berbeda.  2.  Perlu  adanya  identifikasi  secara  molekuler  untuk  mengkonfirmasi  hasil  identifikasi.

     

52

     

53       

DAFTAR PUSTAKA     

[ATTRA]  Appropiate  Technology  Transfer  for  Rural  Areas.  2001.  Biointensive  Integrated Pest Management (IPM) fundamentals of sustainable agriculture. NCAT Agr  Specialist   [On-line]   .http://attra.ncat.org/attra-pub/ipm.html. [15  Juli  2010].  Agarwal VK, Sinclair JB. 1997. Principles of Seed Pathology 2nd Ed. Boca Rotan,  Florida: CRC Press Inc.  Agrios GN. 2005. Plant Pathology 5th Ed. San Diago: Elsivier Academic Press.  Anggraeni  DK,  Tjahyono  B,  Suwanto  A,  Aswidinnor  H.  1995.  Pengujian  ketahanan genotip kedelai terhadap penyakit bisul bakteri. Bul Agron 23  (3) 14-19.  Arwiyanto   T,   Sudarmadi,   Hartana   I.   1999.   Deteksi   strain   Pseudomonas  solanacearum penghasil bakteriosin. J Perlintan Indonesia. 2 (2): 60 - 65.  Baker KF, Cook RJ.  1983.  Biological Control of Plant Pathogen. San Fransisco:  Freeman and Co.  Balitkabi [Balai Penelitian Tanaman Kacang-kacangan dan Umbi-umbian]. 2008.  Hama  dan  Penyakit  Penting  pada  Tanaman  Kedelai  [On-line].  http://balitkabi.litbang.deptan.go.id. [10 April 2011].  Bolan NS.  1991.  A critical review of the role of mycorrhizae fungi in the uptake  of phosphorus by plants. J Plant and Soil 134: 189-207.  Brimecombe  MJ,  Leij  FA,  Lynch  JM.  2001.  The  effect  of  root  exudates  on  rhizosphere   microbial  populations.   Di  dalam:   Pinton  R,   Varanini   Z,  Nannipieri P. Editors. The Rhizosphere: Biochemistry and organic subtances  at the soil plant interface. New York: Marcel Dekker, Inc. 95-140.  Brzezinska MS, Donderski W. 2001. Occurance and activity of the chitinolytic  bacteria of Aeromonas genus. Polish J of Enviro Studies 10 (1): 27 – 31.  Chernin LS, Michael KW, Jacquelyn MT,   Shoshan H, Barrie WB, Cheat  W,  Gordon  SAB,  Stewart.  1998.  Chitinolytic  activity  in  Chromobacterium  violaceum. J. Bacteriol 18: 435-441.  Compant S, Duffy B, Nowak J, Clement C, Barka EA. 2005. Mini review: Use of  plant  growth-promoting  rhizobacteria  for  biocontrol  of  plant  diseases:  principles,   mecanism   of   action   and   future   prospect.   Appl   Environ  Microbiol 71: 4951-4959.  Cook RJ, Baker KF.   1996.   Biological Control of Plant Patogen 2nd Ed. San  Fransisco: Freeman and Co.  Crosa   JH,   Walsh  CT.   2002.   Genetics   and   assembly  line   enzymology  of  siderophore biosynthesis in bacteria microbiology and molecular biology  review. 66:223-249.

     

54       

Dirmawati SR. 2004. Kajian keefektifan beberapa komponen pengendalian ramah  lingkungan  terhadap  penyakit  pustul  bakteri  kedelai  [disertasi].  Departemen Proteksi Tanaman; Institut Pertanian Bogor; Bogor.  Doring T, Heimbach U, Thieme T, Finckch M, Saucke H. 2006. Aspect of straw  mulching  in  organic  potatoes-I,  effects  on  microclimate,  Phytophtora  infestans, and Rhizoctonia solani. Nachrichtenbl. Deut. Pflanzenschutzd.  58 (3):73-78.  Dufour R. 2001. Biointensive Integrated  Pest Management (IPM). NCAT Agri  Specialist  [On-line].  http://www.attra.org/attra-pub/PDF/ipm.pdf.[15  Juli  2010].  Ellen Yeh, Benjamin A. Pinsky, Niaz Banaei, Ellen Jo Baron. 2009. Hair Sheep  Blood,Citrated or Defibrinated, Fulfills All Requirements of Blood Agar  for Diagnostic Microbiology Laboratory Tests. J Med  4(7): 6141.  Fahl  R,   Hayward  AC.   1983.   Systematic   and   Phylogeny  of  Pseudomonas  solanacearum and related Bacteria.Di dalam: Hayward, A. C. and G. L.  Hartman.   Bacterial   Wilt.   The   Disease   and   The   Causative   Agents  Pseudomonas solanacearum (Eds). Wallingford: CABInternational. 123 –  136.  Fanani FA,   Nurdin,   Djafaruddin. 1981. Uji Ketahanan Beberapa Varietas dan  Galur Kedelai Terhadap infeksi Secara alamiah dari Penyakit Karat Daun  (Phakopsora pachyrhizi Syd.). Kongres Nasional PFI ke VI. Padang.  40-  46.  Franklin  dan  Snow.  1981.  Di  dalam:  Salamah.  1999.  Pengendalian  Hayati  Penyakit Layu Fusarium Pada Tanaman Semangka Dengan Bacillus spp.  [tesis]. Yogyakarta: Program Pascasarjana:  Universitas Gadjah Mada.  Gao  JMW,   Bauer  KR,   Shockley  MA,   Pysz  RM,   Kelly.  2003. Growth of  Hiperthermophilic Archaeon Pyrococcus furiosus on Chitin Involves Two  Family 18 Chitinases. J Appl Environ Microbiol. 69:319-3128.  Glick Br, Patten CL, Holguin G, Penrose DM. 1999. Biochemical and Genetic  Mechanism Used by Plant Growth Promoting Bacteria. Ontario: Imperial  Collage Press.  Goodman  RN,  Novacky  AJ.  1996.  The  Hypersensitive  Reaction  in  Plant  to  Pathogens, A Resisten Phenomenon. St. Paul. Minnesota:  APS Press.  Graham   Jh.   2005.   Biological   Control   of   Soilborne   Plant   Pathogens   and  Nematodes 2nd Ed. New Jerse: Pearson Education Inc.  Hafizah F. 2009. Introduksi Bakteri Rizosfer Indigenous dan Penggunaan Mulsa  Jerami  pada  Tanaman  Bawang  Merah  (Allium  ascal  onicum  L)  untuk  Menekan  Laju  Perkembangan  Penyakit  Hawar  Daun  Bakteri  [tesis].  Padang: Program Pascasarjana, Universitas Andalas.  Handini  ZVT.   2011.  Keefektifan  Bakteri Endofit  dan Plant Growth  Promoting  Rhizobacteria  dalam  Menekan  Penyakit  Layu  Bakteri  (Ralstonia  solanacearum) pada Tomat [skripsi]. Departemen Proteksi Tanaman: Institut  Pertanian Bogor: Bogor.

     

55     

Hartman GL, Sinclair JB, Rupe JC. 1999. Compendium of Soybean Diseases 4 Ed.  United  State  Of  America:  The  American  Phytopathology  Society  Press.  th 

Khaeruni AR. 1998. Pengaruh Bakteri Kitinolitik dan Fotosintetik Anoksigenik  terhadap Kemampuan Pseudomonas flourescens B29 sebagai Biokontrol  Penyakit   Bisul   Bakteri   pada   Kedelai   [Tesis].   Departemen   Proteksi  Tanaman, Institut Pertanian Bogor; Bogor.  Kohnke H, Bertrand AR. 1959. Soil Conservation. New York: McGraw Hill.  Machmud  M.  1987.  Pengamatan  penyakit  pustul  bakteri  dan  hawar  bakteri  kedelai.  Di  dalam:  Gatra  penelitian  penyakit  tumbuhan  dalam  pengendalian secara terpadu. Perhimpunan Fitopatologi Indonesia. p35-37.  Madigan MT, Martinko JM, Parker J. 2000. Brock Biology of Microorganisms.  New Jersey: Prentice-Hall. International Edition.  Mahmood M, Farroq K, Hussain A, Sher R. 2002. Effect of mulching on growth  and yield of potato crop. Asian J. of Plant Scie. 1(2):122-133.  Mariani.   1995.   Isolasi  dan   seleksi   bakteri   filosfer   yang   berpotensi  untuk  biokontrol  Xanthomonas  campestris  pv.  glycines  8  Ra  pada  tanaman  kedelai dengan esei nukleasi es. Bogor: Jurusan Biologi, Fakultas MIPA  IPB.  Mastur, Sunarlim N. 1993. Pengaruh drainase/irigasi dan pemberian mulsa jerami  padi  terhadap  sifat   fisik  tanah  dan  keragaan  kedelai.   Risalah  hasil  Penelitian tanaman Pangan I. Bogor:BPPT 67-74.   

Metcalf  AC,  Krsek  M,  Gooday  GW,  Prosser  JI,  Wellington  EMH.  2002.  Molecular  analysis  of  a  bacterial  chitinolytic  community  in  an  upland  pasture. J Appl Environ Microbiol. 68:5042–5050.  Mustaha MA. 1999. Studi aplikasi mulsa jerami padi dan cara pengolahan tanah  terhadap  pertumbuhan  dan  produksi  tanaman  jagung  serta  dinamika  populasi gulma.  [tesis].  Bogor:  program Pascasarjana,  Institut  Pertanian  Bogor.  Nawangsih   AA.   2006.   Seleksi   dan   karakterisasi   bakteri   biokontrol   untuk  mengendalikan  penyakit  layu  bakteri  (Ralstonia  solanacearum)  pada  tomat. [disertasi]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.  Oerke EC, Dehne HW, Schonbeck F, Weber A. 1999. Crop Production and Crop  Protection: estimated losses in major food and cash crops. Netherlands:  Elseiver Science B.V.  Oke DO, Ologun. 2005. Effect of mulch from four agroforestry species on the  moisture content, temperature and microbial population in a humid tropical  soil. J of Microbiol Scie 5(3): 326-329.  Patil  NN,  Nawani  NN,  Thakkar  AP,  Kapadnis  BP.  2004:  Diversity  of  chitinolytic systems of bacteria. Di dalam:  Biotechnological approaches  for sustainable development. India: Allied Publishers.

     

56       

Pelczar  MJJr,  Chan  ECS.  1986.  Dasar-dasar  Mikrobiologi.  Volume  ke-1,2..  Hadioetomo RS, Imas T,  Tjitrosomo SS, Angka SL, penerjemah. Jakarta  :UI Pr; 1986. Terjemahan dari: Elements of Microbiology.  Pleban S, Chernin L, Chet I. 1997. Chitinolytic enzymes of an endophytic strain  of Bacillus cereus. Lett. J Appl Microbiol. 25: 284-288.  Porter, J. R. 1946. Bacterial Chemistry And Physiology. New York: John Wiley  and Sons Inc.  Rukayadi Y, Suwano  A, Tjahono  B, Harling  R. 1999. Survival and Epiphytic  fitness  of  a  Non  Pathogenic  Mutant  of  Xanthomonas  campestris  pv.  glycines. J App Environ Microbiol. 66 (3), 1183-1189. 

Rukmana  R,   Yuniarsih  Y.   1996.   Kedelai:   Budidaya   dan   Pasca   Panen.  Yogyakarta:Kanisius.  Sakai  K,  Yokota  A,  Kurokawa  H,   Wakayama  M,  Moriguchi  M.  1998.  Purification and characterization of three thermostable endochitinases of a  noble Bacillus strain, MH-1,  isolated from chitin-containing compost. J  Appl Environ Microbiol 64: 3397–3402.  Salle  A J. 1973. Fundamental Principles of Bacteriology. 7th edition. New Delhi:  Tata McGraw-Hill Publishing Company.  Schaad  NW.  2001.  Laboratory  Guide  for  Identification  of  PlantPathogenic  Bacteria 3rd Ed. St. Paul. Minnesota: APS Press.  Semangun  H.  1991.  Penyakit-penyakit  Tanaman  Pangan   di   Indonesia.  Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.   

Sharma AK. 2002. Organic Farming. India: Central Arid Zone Research institute  Jodhpur, Agrobios.  Sharma O P, 1993. Plant Taxonomy. New Delhi:  Tata McGraw Hill Poblishing  Company Limited.  Sigh  DP.  1986.  Breeding  for  Resistance  to  Disease  and  Insect  Pest.  Berlin:  Springer, Verlag.  Simon HM.  2001.  Influence of tomato  genotype on growth of inoculated  and  indigenous bacteria in the spermosphere. J Appl Environ Micro 67:514-  520.  Sinclair JB, Backman BA. 1989. Compendium of Soybean Disease. 3rd Ed. United  States of America: The APS.  Sinclair  JB,  Juli WA,   Dyer RJ, Larson AO. 1989.  Sampling  and  histological  procedures for diagnosis of ash yellows Plant Dis. 73:432-842.  Sinclair JB. 1982. A Compendium of Soybean Disease 2nd Ed. St. Paul Minnesota,  USA: Ac. Press

     

57        Stermer  BA.  1995.  Molecular  regulation  of  systemic  induced  resistance.  Di 

dalam:Hammers chmidf R, Kuc J. Editors: Induced resistance to disease in  plants. Netherlands: Klower Academic Publishers. 111-140.  Sudjono   MS,   Amir   M,   Martoatmodjo   R.   1985.   Penyakit   Kedelai   dan  Penanggulangannya.   Bogor:  Pusat   Penelitian   dan   Pengambangan  Tanaman Pangan. 331-356.  Sudjono MS. 1997. Karakteristik Mikroba Penghasil Kitinase dan Kloning Gen  Kitinase dan gen Cry dari Mikroba di Indonesia. Bogor: Balai Penelitian  Bioteknologi Tanaman Pangan.  Sudriatna U, Damanhuri R, Partohardjono S. 1993. Pemanfaatan jerami padi pada  tanaman  kedelai  dalam  pola  padi-padi-kedelai  di  lahan  sawah.  Risalah  seminar  Hasil  penelitian  Sistem  Usahatani  dan  Sosial-Ekonomi.  Bogor:BPPT.  Suskandini R, Eviyati R. 2007. Pestisida organik berbahan aktif bakteri agensia  hayati yang efektif mengendalikan pustul bakteri pada kedelai. J. Agrijati  6 (1) 37-42.  Sutarto VI, Bangun P, Subakti. 1988. Penampilan pertumbuhan dan hasil kedelai  terhadap pengolahan tanah minimum, pemberian mulsa dan penempatan  biji  setelah  padi  sawah.  Di  dalam  Utomo  IH,  Wiroatmodjo  J,  editor.  Prosiding Seminar BPD TOT. Bogor: IPB. 53-68.  Suwanto A, Friska H, Sudirman I. 1996. Karakteristik Pseudomonas fluorescens  B29 dan B39: profil DNA genom, uji hipersensitivitas, dan asal senyawa  bioaktif. J Hayati 3: 15-20.  Thompson HC, Willey WC. 1972. Vegetable Crops. New York: Mc Graw Hill  Book Company.  Thompson  SE,  Smith  M,  Wilkinson  MC,  Peek  K.  2001.  Identification  and  characterization  of  a  chitinase  antigen  from  Pseudomonas  aeruginosa  strain 385. J Appl Environ Microbiol. 67 (9): 4001-4008.  Towsend dan Hueberger. 1943. Di dalam: Unterstenhofer, G. 1963. The basic  principles  of  crop  protection  field  trials.  Pp.  155.  In  Pflanzerschutz  Nachtichten Bayer Vol. XXIX. No. 2, Bayer Pflanzerschutz –Leverkusen.  Van  der  Plank,  JE.  1963.  Plant  Disease:  Epidemics  an  Control.  London:  Academic press.  Varadan  KM,  Rao  AS.  1983.  Effect  of  mulch  on  soil  temperature  in  humid  tropical latosol under coconut and banana. J Agric Meteor 28:375-386.  Vauterin .1995. Di dalam: CAB International 2005. Crop Protection Compendium  [CD-ROM]. America: CAB International. CD dan buku petunjuk. ISSBN:  0 85 199 086 X.  Vogan CL, Costa RC, Rowley AF, 2002. Shell Disease Syndrome in the edible  crab,  Cancer  pagurus  –  isolation,  characterization  and  pathogenicity  of  chitinolytic bacteria. J Microbiol 148:743–754.

     

58       

WAC [ World Agroforestry Center]. 2005. Mulsa: Cara mudah untuk konservasi  tanah [On-line]. http://epetani.deptan.go.id/cara-mudah-konservasi-tanah-  815. [28 Juli 2011].  Wang   SL,   Chang   WT.   1997.   Purification   and   Characterization   of   Two  Bifunctional   Chitinases/Lisozymes   Extracellularly   Produced  by   P.  aeruginosa K-187 in Shrimp and Scrab Shell Powder Medium. J Appl and  Environ Microbiol. 63: 380–386.  Wartono.  2010.  Studi  Keefektifan  Formulasi  Spora  Bacillus  subtilis  sebagai  Agens  Pengendali  Hayati  Penyakit  Hawar  Daun  Bakteri  dan  Hawar  Pelepah Serta Pemicu  Pertumbuhan pada Tanaman Padi [tesis].  Bogor:  Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.  Wenuganen S. 1996. Pengklonan Gen Kitinase Bakterial Menggunakan Teknik  Mutagenesis  Transposon  dan  DNA Pelacak  Heterologus  [tesis].  Bogor:  Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.  Widodo. 2006. Peran Mikroba Bermanfaat dalam Pengelolaan Terpadu Hama  dan  Penyakit  Tanaman.  Makalah  disampaikan  pada  Apresiasi  Penanggulangan Tanaman Sayuran, Nganjuk 3-6 Oktober 2006.  Wiyono S. 2007.   Perubahan Iklim dan Ledakan Hama dan Penyakit Tanaman.  Seminar  Sehari  tentang  Keanekaragaman  Hayati  Ditengah  Perubahan  Iklim: Tantangan Masa Depan Indonesia, KEHATI. Jakarta.  Wu ML, Chuang YC, Chen JP,   Chen CS, Chang MC. 2001. Identification &  characterization of three Chitin-Binding Domains within the Multidomain  Chitinase  Chi92  from  Aeromonas  hydrophila  jp  101.  J  Appl  Environ  Microbiol. 67: 5100-5106.  Yulianti T,  Ibrahim N,  Dalmadiyo  G.  1999.  Pemanfaatan  Mikrobia  Antagonis  untuk Mengendalikan Penyakit Lincat. Prosiding Konggres Nasional XV  dan Seminar Ilmiah PFI I: 632 – 650.  Zadoks JC, Schein RD. 1979. Epidemiology and Plant Diseases Management.  New York: Oxford Univ Press.

Lampiran 1 Denah lokasi percobaan 

IBa3            IIAb3  IIBc2 

IIAc3    IIBa3 

IAb3  IBa2 

B   

   

T 

IAd3        IAa3        IBd3        IBc3        IIBb3              IIAa3                                                                        IIAd3 IBb3  IAc3IIBd IIAb2  IIAd2  IBb2  IIBd2  IAb2  IAc2 

IIBb2 

IIBa2 

IAd2 

IIAc2 

IAa2 

IBa1 

IBd1 

IAd1 

IIAd1 

IAb1 

IIAb1 

IAa1 

IBc1 

IIBb1 

IIBd1 

IIAc1 

CIBURUY 

IIBc3 

IIBc3 

IIBc1        IIAa2  IIBa1 

IAc1 

MUARA JAYA 

IBb1 

 

IBd2    IIAa1 

     

59 

Lampiran 2 

     

Hasil analisis ragam (Anova) perlakuan varietas, pemberian mulsa  dan aplikasi PGPR terhadap perkembangan penyakit pustul bakteri  (AUDPC)   

 

Sumber Keragaman 

Db 

Jumlah  Kuadrat  F-hitung     Nilai-p  kuadrat  tengah  1  56260.17  56260.17  11.58**  0.004  1  8893.50  8893.50  1.83  0.197  1  459.37  459.37  0.09  0.763  1  21241.50  21241.50  4.37*  0.053  1  2.04  2.04  0.00  0.984  1  2.04  2.04  0.00  0.984  1         165.37           165.37        0.03            0.856 

Varietas  Mulsa Jerami  Hayati  Varietas*Mulsa Jerami  Varietas*PGPR  Mulsa Jerami*PGPR  Varietas*Mulsa  jerami*PGPR  Kelompok 

2 

42666.75 

21333.38 

4.39** 

0.033 

     

60 

Lampiran 3 Deskripsi varietas kedelai Anjasmoro (Balitkabi 2008) 

     

 

Dilepas tahun  SK Mentan  Nomor galur  Asal  Daya hasil  Warna hipokotil  Warna epikotil  Warna daun  Warna bulu  Warna bunga  Warna kulit biji  Warna polong masak  Warna hilum  Bentuk daun  Ukuran daun  Tipe tumbuh  Umur berbunga  Umur polong masak  Tinggi tanaman  Percabangan  Jml. buku batang utama  Bobot 100 biji  Kandungan protein  Kandungan lemak  Kerebahan  Ketahanan thd penyakit  Sifat-sifat lain  Pemulia 

: 22 Oktober 2001  : 537/Kpts/TP.240/10/2001  : Mansuria 395-49-4  : Seleksi massa dari populasi galur murni Mansuria  : 2,03–2,25 t/ha  : Ungu  : Ungu  : Hijau  : Putih  : Ungu  : Kuning  : Coklat muda  : Kuning kecoklatan  : Oval  : Lebar  : Determinit  : 35,7–39,4 hari  : 82,5–92,5 hari  : 64 - 68 cm  : 2,9–5,6 cabang  : 12,9–14,8  : 14,8–15,3 g  : 41,8–42,1%  : 17,2–18,6%  : Tahan rebah  : Moderat terhadap karat daun  : Polong tidak mudah pecah  :Takashi  Sanbuichi,  Nagaaki  Sekiya,  Jamaluddin  M., Susanto, Darman M.A., dan M. Muchlish Adie.

     

61 

Lampiran 4 Deskripsi varietas Gepak Kuning (Balitkabi 2008) 

     

 

Dilepas Tahun  Nama Calon Varietas  Asal  Tipe Pertumbuhan  Warna hipokotil  Warna epikotil  Warna daun  Warna bulu batang  Warna bunga  Warna kulit biji  Warna polong tua  Warna hilum biji  Bentuk daun  Percabangan  Umur berbunga  Umur polong masak  Tinggi tanaman  Bobot 100 biji  Rata-rata hasil  Potensi hasil  Kandungan protein  Kandungan lemak  Ketahanan terhadap hama  dan penyakit 

: 2008  : Gepak Kuning  : Seleksi varietas lokal Gepak Kuning  : Determinite  : Ungu  : Hijau  : Hijau  : Coklat  : Ungu  : Kuning muda-kehijauan  : Coklat  : Coklat  : Lonjong  : Agak tegak  : 28 hari  : 73 hari  : 55 cm  : 8,25 gram  : 2,22 ton/ha  : 2,86 ton/ha  : 35,38%  : 15,10%  :  - Hama : - Agak tahan terhadap ulat grayak,  Aphis sp., penggulung daun, Phaedonia sp.  - Penyakit : -  Daerah  sebaran/adaptasi  :  Beradaptasi  baik  di  lahan  sawah dan tegal,  baik  pada musim hujan maupunkemarau  Sifat-sifat lain  : - Kadar rendemen tahu tinggi  Pemulia  : M. Muchlish Adie  Peneliti  : Soenardi, Mohammad Maksum, Soepriyanto, Yudi  Nasrul,   Suparman   Yudi   Hartono,   Soni   Sapta  Mawardi,   Susanto,   Paulus   Iwan   Sutadi,   Noor  Sasongko, Romodhon.  Pengusul  : Pemerintah daerah Kabupaten Ponorogo, Jawa Timur

     

62 

Lampiran 5 

Daftar bahan media Kings`B Agar (KBA), Trytic Soy Agar (TSA),  kitin agar dan Luria Bertani Broth (LB)   

Kings`B Agar (KBA)   

Protease peptone no. 3  K2HPO4  MgSO4. 7H2O  Agar  Gliserol  Aquadest 

20  g  1.5 g  1.5 g  15  g  15 ml  1L 

   

Trytic Soy Agar (TSA)   

Pancreatic Digest of Casein  15  g  Enzymatic Digest of Soybean Meal  5  g  Sodium Chloride  15  g  Agar  15  g  Aquadest  1  L     

Kitin Agar   

Koloidal kitin  K2HPO4  MgSO4. 7H2O  KH2PO4  FeSO4.7H2O  MnCl2. 4H2O  ZnSO4.7H2O  Agar  Aquadest 

4  g  0.7   g  0.5   g  0.3   g  0.01 g  0.001 g  0.001 g  20  g  1  L 

     

Luria Bertani Broth (LB)   

Tryptone  NaCl  Yeast Extract  Aquadest 

10 g  5g  5g  1L 

     

     

63 

Lampiran 6 Morfologi koloni bakteri tahan panas 

     

 

Karakter morfologi  Kode  Bentuk                Warna               Tepian              Elevasi         Mucoid/  tidak  T1  Bundar  Putih kusam  Licin  Cembung  Mucoid  T2  Bundar  Kuning  Licin  Cembung  Mucoid  T3  Bundar  Putih kusam  Licin  Timbul  Tidak  T4  Bundar  Putih kusam  Tak beraturan   Timbul  Tidak  Bundar dgn  T5  tepian timbul  Putih kusam  Tak beraturan   Timbul  Tidak  Tak beraturan  T6  dan menyebar  Putih kusam  Tak beraturan   Timbul  Tidak  T7  Bentuk L  Putih kusam  Licin  Cembung  Tidak  bundar dgn  T8  tepian  kuning  menyebar  kecoklatan        Bercabang         Timbul              Tidak    Berbukit-  T9  Keriput                Putih kusam      Berlekuk  bukit                  Tidak  T10  Keriput  Putih kusam  Tak beraturan   Timbul  Tidak  T11  Bundar  Orange  Licin  Cembung  Mucoid  T12  Bundar  Putih kusam  Berombak  Timbul  Tidak  seperti   BerbenangT13    benang  Putih kusam  benang              Timbul              Tidak  T14  Tak beraturan  dan menyebar  Putih kusam  Berlekuk  Datar  Tidak  BerbenangT15    benang  Putih kusam  Tak beraturan   Timbul  Tidak  T16  Bundar  Putih kusam  berombak  Timbul  Tidak  T17  Bundar  Kuning  Berombak  Cembung  Mucoid  T18  Bundar  Putih kusam  Tak beraturan   Timbul  Mucoid  T19  Bundar  Ungu tua  Licin  Cembung  Mucoid  T20  Bundar  Putih kusam  Licin  Timbul  Tidak  T21  Bundar  Putih susu  Licin  Timbul  Tidak  T22  Bundar  Kuning tua  Licin  Cembung  Mucoid  T23  Bundar  Kuning tua  Tak beraturan   Timbul  Mucoid  Kuning    T24  Bundar  kehijauan          Tak beraturan   Timbul              Mucoid  T25  Bentuk L  Putih kusam  Licin  Timbul  Mucoid  Berbukit  T26  Tak beraturan  bukit                  Tidak  dan menyebar  Putih kusam  Berlekuk  T27  Bundar  Kuning muda  Licin  Cembung  Mucoid  T28  Bundar  Kuning muda  Licin  Cembung  Tidak  T29  Berbenang-  benang  Kuning  Bercabang  Timbul  Tidak  T30  Bundar  Putih kusam  Licin  Cembung  Tidak    seperti  T31  Bundar                Putih kusam  benang              Timbul              Mucoid 

     

64 

Lanjutan Lampiran 6  T32  Bentuk L  T33   

T34  T35  T36  T37  T38  T39  T40  T41  T42  T43  T44  T45  T46  T47  T48  T49  T50  T51  T52  T53  T54  T55  T56  T57  T58  T59  T60  T61  T62  T63  T64 

     

Putih kusam 

Licin 

 

Keriput                Putih kusam      Berlekuk  Bundar dgn  tepian  menyebar  Putih kusam  Licin  Bundar  Hijau muda  Licin  Bundar  Hijau tua  Licin   

Cembung  Mucoid  Berbukit-  bukit                  Tidak  Timbul  Cembung  Cembung 

Tidak  Mucoid  Mucoid  *semi  mucoid 

Bundar                Putih kusam      Licin                 Cembung    Seperti  Bundar                Hijau muda       Licin  tombol              Mucoid  Bundar  Putih susu  Licin  Cembung  Mucoid  Bundar  Putih kusam  Licin  Cembung  Mucoid  Bentuk L  Putih kusam  Bercabang  Timbul  Mucoid  kuning    Bundar  kecoklatan        Bercabang         Timbul              Mucoid  Bundar  Coklat muda  Licin  Cembung  Mucoid  Bundar  Hijau muda  Licin  Cembung  Mucoid    Seperti  Bundar                Putih kusam      Licin  tetesan               Mucoid  Bundar  Kuning muda  licin  Cembung  Mucoid  Berbenang-  benang  Kuning tua  Bercabang  Timbul  Mucoid  Keriput  Putih kusam  Berlekuk  Timbul  Tidak  Keriput  Putih kusam  Tak beraturan   Timbul  Tidak    Seperti  Bentuk L             Putih kusam      Licin  tombol              Mucoid  Bundar  Putih kusam  Licin  Cembung  Mucoid  Bundar  Putih kusam  Berombak  Timbul  Tidak  Bundar  Kuning muda  Licin  Cembung  Mucoid  Bundar  Putih kusam  Tak beraturan   Timbul  Tidak    Berbukit-  Keriput                Putih kusam      Berombak  bukit                  Tidak  Tak beraturan  dan menyebar  Putih kusam  Tak beraturan   Timbul  Tidak  Bundar  Putih kusam  Tak beraturan   Timbul  Mucoid  Bentuk L  Putih susu  Licin  Cembung  Mucoid  Bundar  Putih kusam  Berombak  Cembung  Mucoid  Bundar dgn  tepian  menyebar  Putih kusam  Seperti wol  Timbul  Tidak  Bundar  Peach  Licin  Cembung  Mucoid    Berbukit-  Keriput                Putih kusam      Berombak  bukit                  Tidak  Bundar  Putih kusam  Tak beraturan   Timbul  Tidak  Bundar  Putih kusam  Siliat  Timbul  Tidak 

     

65       

Lanjutan Lampiran 6  T65  Bentuk L  T66  Berbenang-  benang  T67  Konsentris  T68  Bundar  T69  Bentuk L  T70  Bundar 

Putih susu 

Licin 

Timbul 

Putih kusam  Putih kusam  Putih kusam  Putih susu  Putih susu 

Licin  Timbul  Licin  Cembung  Licin  Cembung  Tak beraturan   Timbul  Licin  Cembung 

Tidak  Tidak  Mucoid  Mucoid  Tidak  Tidak

     

66 

Lampiran 7 Morfologi koloni bakteri fluorescence 

     

 

Kode  F1  F2  F3  F4   

F5  F6  F7  F8  F9  F10  F11 

Karakter morfologi  Bentuk                Warna                Tepian              Elevasi      Mucoid/  tidak  Tak beraturan  dan menyebar  Putih kusam  Tak beraturan  Timbul  Mucoid  Bundar  Putih kusam  Berombak  Cembung  Mucoid  Bundar  Putih kusam  Bergelombang  Cembung  Mucoid    Tidak  Bundar           Putih kusam  beraturan              Datar           Tidak    Tidak  Bundar            Hijau muda  beraturan          Cembung       Tidak  Bundar  Putih kusam  Berombak  Cembung  Tidak    Tidak  Bundar           Putih kusam  beraturan              Datar           Tidak  Bundar  Putih kusam  Berombak  Timbul  Tidak  Bundar  Putih kusam  Licin  Cembung  Tidak  Bundar  Putih kusam  Licin  Timbul  Tidak  Bundar  Putih kusam  Bergelombang  Datar  Tidak 

     

67       

Lampiran 8 Morfologi koloni bakteri Non-fluorescence   

Kode  NF1  NF2  NF3  NF4  NF5  NF6  NF7  NF8  NF9  NF10  NF11  NF12   

NF13  NF14  NF15  NF16  NF17  NF18  NF19  NF20   

NF21  NF22  NF23  NF24  NF25  NF26  NF27  NF28  NF29  NF30  NF31  NF32 

Karakter morfologi  Bentuk                Warna               Tepian              Elevasi       Mucoid/  tidak  Bundar  Putih kusam  Licin  Cembung  Mucoid  Bundar  Orange  Licin  Cembung  Mucoid  Bundar  Putih kusam  Licin  Cembung  Tidak  Bundar  Kuning  Licin  Cembung  Mucoid  Bentuk L  Putih kusam  Licin  Cembung  Tidak  Berbenang    rambut  Cembung  Tidak  Bundar  Orange muda  Licin  Cembung  Mucoid  Tak beraturan  Putih kusam  Berlekuk  Timbul  Tidak  Berbenang-  benang  Putih kusam  Bercabang  Datar  Mucoid  Bundar  Putih kusam  Berombak  Timbul  Mucoid  Bundar  Putih kusam  Tak beraturan  Cembung  Mucoid  Seperti Bundar  Merah muda  Licin    tombol  Tidak  Seperti  Tak beraturan  Putih susu  Licin  tombol  Tidak  Tak beraturan  Putih kusam  Berombak  Cembung  Mucoid  Bundar dgn  tepian  Putih kusam       Bercabang         Cembung         Tidak  menyebar  Bundar  Putih kusam  Tak beraturan  Cembung  Mucoid  Bundar  Putih kusam  Licin  Cembung  Mucoid  Filiform  Putih kusam  Berombak  Timbul  Mucoid  Bundar  Putih kusam  Berombak  Timbul  Mucoid  Bundar  Putih susu  Berombak  Timbul  Tidak  Tak beraturan  dan menyebar  Bundar  Bundar  Bundar  Bundar dgn  tepian  menyebar  Bundar  Bentuk L  Bundar  Bundar  Bundar  Bundar  Bentuk L 

Putih kusam  Tak beraturan  Kuning muda  Berombak  Kuning muda  Licin  Kuning muda  Berombak 

Cembung  Cembung  Cembung  Cembung 

Mucoid  Mucoid  Mucoid  Mucoid 

Putih kusam       Bercabang           Timbul         Mucoid  Kuning  Licin  Kuning tua  Licin  Hijau muda  Licin  Kuning muda  Berlekuk  Hijau muda  Berombak  Salem  Tak beraturan  Hijau muda  Licin 

Cembung  Cembung  Cembung  Cembung  Cembung  Cembung  Cembung 

Mucoid  Mucoid  Mucoid  Mucoid  Mucoid  Mucoid  Mucoid 

     

68 

Lanjutan Lampiran 8  Bundar dgn  NF33  tepian  menyebar  NF34  Filiform  NF35  Filiform  NF36  Bundar   

NF37  NF38  NF39  NF40  NF41  NF42  NF43 

Orange muda           Licin              Cembung 

Mucoid 

Bening  Bening  Putih kusam 

Tak beraturan  Licin  Licin 

Cembung  Cembung  Cembung 

Mucoid  Mucoid  Mucoid 

Berbenang-  benang  Bundar  Bundar  Bentuk L  Bundar  Bundar  Bundar 

Putih kusam  Putih kusam  Putih susu  Putih susu  Hijau muda  Hijau muda  Hijau tua 

Licin  Licin  Licin  Licin  Tak beraturan  Licin  Licin 

Timbul  Timbul  Timbul  Cembung  Cembung  Cembung  Cembung 

Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Mucoid  Mucoid  Mucoid 

Keriput 

Putih kusam 

Berombak 

Berbukit-  bukit 

Tidak 

 

NF44  NF45  NF46 

Bundar dgn  tepian  menyebar  Bundar 

 

 

NF47 

Bundar 

NF48 

Serabut 

NF49  NF50  NF51  NF52 

Bundar  Bundar  Bundar  Bundar  Bundar dgn  tepian  menyebar 

NF53  NF54 

     

 

Bundar 

Bening                Licin                Timbul         Mucoid  Putih kusam  Putih kusam  inti putih  susu 

berombak 

Licin                Seperti  tombol 

Kuning muda   Tak beraturan  Putih kusam  Kuning muda  Kuning muda  Kuning muda 

Cembung 

Tidak 

 

Licin  Licin  Berombak  Licin 

Berbukit-  bukit  tetesan  Cembung  Cembung  Datar 

Tidak  Mucoid  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak 

putih kusam       Berombak             Datar            Tidak  Kuning agak  Tak beraturan muda      Putih Kusam  Licin  Putih kusam  Licin  Kuning muda  Licin 

NF55  NF56  NF57 

Bentuk L  Bundar  Bundar 

NF58 

Keriput 

Putih kusam 

NF59 

Bundar 

Kuning muda   Tak beraturan 

NF60 

Bundar 

Putih kusam 

NF61 

Bundar 

Putih kusam 

Seperti ikal  rambut  Berlekuk 

NF62 

Bundar 

Putih kusam 

Licin 

Licin 

 

Datar  Datar  Cembung  Cembung  Berbukit-  bukit 

Mucoid  Tidak  Tidak  mucoid  Tidak 

Seperti Mucoid  tombol   Berbukit-  bukit           Mucoid  tumbuh ke  dalam  tidak  timbul  Tidak 

     

69       

Lanjutan Lampiran 8  Bundar dgn  NF63  tepian  menyebar  NF64  Tak beraturan  dan menyebar  NF65  Bundar  NF66  Bundar  Berbenang-  NF67  benang 

Kuning muda      Berombak          Cembung       Mucoid  Putih kusam  Peach  Hijau muda 

Berombak  Berombak  Licin 

Timbul  Timbul  Cembung 

Mucoid  Mucoid  Mucoid 

Kuning muda 

Bercabang 

Timbul 

Mucoid 

     

70       

Lampiran 9 Morfologi koloni bakteri kitinolitik   

Karakter morfologi  Kode  K1  K2  K3  K4  K5  K6  K7  K8  K9  K10  K11  K12  K13  K14  K15  K16  K17  K18  K19   

K20  K21  K22  K23  K24  K25  K26  K27  K28  K29  K30  K31  K32  K33  K34  K35  K36 

Zona  Bentuk            Warna                Tepian             Elevasi     Mucoid/  bening(cm)   tidak  Bundar  Putih kusam  Tak beraturan  Timbul  Tidak  0.5  Bundar  Putih susu  Licin  Timbul  Tidak  0.6  Bundar  Bening  Licin  Cembung  Tidak  1  Bundar  Coklat  Tak beraturan  Timbul  Tidak  0.5  Bundar  Putih kusam  Licin  Timbul  Tidak  0.8  Bundar  Putih susu  Tak beraturan  Timbul  Tidak  1.3  Bundar  Putih kusam  Licin  Timbul  Tidak  0.2  Bundar  Putih kusam  Licin  Timbul  Tidak  0.3  Bundar  Peach  Licin  Cembung  Tidak  0.5  Bundar  Putih kusam  Berombak  Timbul  Tidak  0.05  Bundar  Putih kusam  Licin  Timbul  Tidak  0.03  Coklat  Bundar  kehijauan  Berombak  Timbul  Tidak  0.6  Bentuk L  Putih susu  Licin  Timbul  Tidak  1  Bundar  Peach  Licin  Timbul  Tidak  1  Bundar  Putih kusam  Licin  Cembung  Tidak  0.2  Bundar  Putih kusam  Licin  Timbul  Tidak  0.1  Bundar  Coklat  Berlekuk  Timbul  Tidak  2.1  Bundar  Coklat tua  Tak beraturan  Timbul  Tidak  0.6  Bundar  Putih kusam  Licin  Timbul  Tidak  0.3  Berbenang  -benang  Konsentris  Konsentris  Konsentris  Bundar  Bundar  Bentuk L  Bentuk L  Bundar  Bentuk L  Bentuk L  Bundar  dgn tepian  menyebar  Konsentris  Konsentris  Konsentris  Bentuk L  Berbenang  -benang 

Coklat kusam  Coklat kusam  Putih kusam  Coklat kusam  Coklat tua  Merah muda  Coklat tua  Coklat muda  Coklat muda  Hitam  Orange 

Licin  Licin  Tak beraturan  Tak beraturan  Licin  Licin  Licin  Licin  Licin  Licin  Licin 

Timbul  Timbul  Timbul  Timbul  Cembung  Cembung  Cembung  Cembung  Cembung  Cembung  Cembung 

Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak 

Putih susu          Bercabang          Timbul        Tidak 

0.2  0.6  0.1  0.1  0.2  0.05  0.05  0.1  0.2  0.6  0.2   

Putih kusam  Putih kusam  Putih kusam  Putih kusam 

Licin  Berombak  Licin  Licin 

Datar  Timbul  Timbul  Datar 

Tidak  Tidak  Tidak  Tidak 

0.2  0.1  0.1  0.01  0.1 

Putih kusam 

Licin 

Timbul 

Tidak 

0.01 

     

71       

Lanjutan Lampiran 9  K37 

Bundar 

Bening 

Licin 

K38  K39  K40  K41  K42  K43  K44  K45  K46  K47  K48  K49  K50  K51  K52  K53 

Bundar  Bundar  Bundar  Konsentris  Bundar  Bundar  Bundar  Bundar  Bundar  Bundar  Konsentris  Bundar  Konsentris  Bundar  Bundar  Bundar 

Licin  Licin  Licin  Berombak  Licin  Licin  Licin  Licin  Licin  Licin  Berombak  Licin  Berombak  Licin  Licin  Licin 

K54 

Bentuk L 

Putih susu  Putih susu  Putih kusam  Coklat  Peach  Putih kusam  Hitam  Peach  Putih kusam  Putih kusam  Putih kusam  Merah muda  Putih kusam  Coklat tua  Coklat tua  Putih kusam  Inti putih  susu, tepi  bening  Coklat muda  Inti hitam,  tepi coklat  muda  Abu-abu  Putih kusam  Putih kusam  Putih kusam  Putih kusam  Coklat muda  Putih kusam  Hitam  Putih kusam  Putih kusam  Putih kusam  Bening  Bening  Putih kusam  Putih kusam  Putih kusam  Coklat muda  Coklat muda   Inti hitam, 

K55 

Konsentris 

K56 

Konsentris 

K57  K58  K59  K60  K61  K62  K63  K64  K65  K66  K67  K68  K69  K70  K71  K72  K73  K74 

Bundar  Bundar  Konsentris  Konsentris  Konsentris  Konsentris  Bentul L  Konsentris  Bundar  Bentuk L  Bundar  Bundar  Bundar  Bundar  Bundar  Bundar  Bundar  Bentuk L 

K75 

Bentuk L 

Tumbuh  ke dalam  medium  Timbul  Cembung  Timbul  Timbul  Timbul  Timbul  Timbul  Timbul  Cembung  Cembung  Datar  Cembung  Datar  Datar  Cembung  Cembung 

Tidak 

 

Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak 

0.01  0.1  0.1  0.01  0.1  0.15  0.12  0.2  0.3  0.2  0.3  0.15  0.2  0.3  0.2  0.15  0.05 

Licin             Cembung      Tidak 

 

Licin 

0.05  0.001 

Datar 

Tidak 

Licin                Datar         Tidak  Licin  Licin  Licin  Tak beraturan  berombak  Licin  Licin  Licin  Licin  Licin  tidak beraturan  tidak beraturan  Licin  tidak beraturan  Licin  Licin  tidak beraturan  Licin 

 

Cembung  Datar  Datar  Datar  Datar  Datar  Datar  Datar  cembung  Datar  Datar  Datar  Datar  Datar  cembung  Datar  Timbul  Datar 

Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak  Tidak 

0.2  0.1  0.1  0.1  0.1  0.1  0.1  0.3  0.2  0.1  0.05  0.05  0.1  0.2  0.1  0.2  0.2  0.05  0.1 

tombol 

Tidak 

0.05 

     

72       

Lanjutan Lampiran 9   

K76 

Bentuk L 

  Inti abu-abu,  

K77 

Konsentris 

K78 

Bentuk L 

K79 

Bentuk L 

K80 

Serabut 

K81 

Bentuk L 

K82  K83 

Bundar  Bundar 

Putih kusam  Inti kuning,  tepi bening  Inti putih  susu, tepi  putih kusam  Putih  Inti hitam,  tepi putih  kusam  Abu-abu  Orange  Inti coklat  muda, tepi  bening  Coklat muda  Putih susu  Hitam  Peach  Inti hitam,  tepi bening  Inti coklat  tua, tepi  bening 

 

K84 

 

Bentuk L 

K85  K86  K87  K88 

Bundar  Konsentris  Bundar  Bundar 

K89 

Bentuk L 

K90 

Bentuk L 

K91 

Bentuk L 

K92 

Konsentris 

   

K93  K94 

Bundar  Bundar 

Inti hitam,  tepi bening  Inti coklat  muda, tepi  bening  Putih, bag  belakang  kuning  Putih kusam 

Licin 

tombol  Cembung 

Tidak  Tidak 

0.2  0.1 

tidak beraturan 

Cembung 

Tidak 

0.05 

Licin             Cembung      Tidak  tidak beraturan 

Timbul 

Tidak 

 

0.001  0.4 

Licin               Timbul        Tidak  tidak beraturan  Licin 

Timbul  Cembung 

Tidak  Tidak 

 

Licin               Seperti  tombol 

Tidak 

 

0.1  0.2  0.05     

Licin  Berombak  Licin  Licin 

Cembung  Datar  Cembung  Cembung 

Tidak  Tidak  Tidak  Tidak 

0.01  0.1  0.1  0.05  0.1 

Licin 

Cembung 

Tidak 

0.1 

Licin             Cembung      Tidak 

 

0.1  Licin 

Timbul 

Tidak 

0.2 

Berombak          Timbul        Tidak 

 

0.05 

   

Licin             Cembung      Tidak  Licin 

Cembung 

Tidak 

   

0.5  0.5