PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL 80% DAUN Spondias pinnata TERHADAP STRUKTUR SKELETON FETUS MENCIT SKRIPSI
IDA AYU MADE KESUMA DEWI 1108505038
JURUSAN FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS UDAYANA 2015
i
Lembar Pengesahan
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL 80% DAUN Spondias pinnata TERHADAP STRUKTUR SKELETON FETUS MENCIT
SKRIPSI Skripsi ini diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi (S.Farm) di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana
OLEH IDA AYU MADE KESUMA DEWI NIM. 1108505038
Menyetujui: Pembimbing I
Pembimbing II
Ni Putu Ariantari, S.Farm., M.Farm., Apt.
Dr. Iriani Setyawati, S. Si., M. Si.
NIP. 198112072005022006
NIP. 197409172000032001
Mengesahkan: Ketua Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt. NIP. 196804201994021001
ii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena atas berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan Skripsi yang berjudul “Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol 80% Daun Spondias pinnata Terhadap Struktur Skeleton Fetus Mencit” tepat pada waktunya, sebagai syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana. Penyusunan Skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada: 1.
Ni Putu Ariantari, S.Farm., M.Farm., Apt., selaku dosen pembimbing I yang telah meluangkan waktu, tenaga, dan pikiran dalam membimbing penyusunan Skripsi ini.
2.
Dr. Iriani Setyawati, S. Si., M. Si., selaku dosen pembimbing II yang meluangkan waktu, tenaga, dan pikiran dalam membimbing penyusunan Skripsi ini.
3.
Ir. Anak Agung Gede Raka Dalem, M.Sc. (Hons), selaku Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
4.
Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
iii
5.
Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis selama penyusunan Skripsi ini.
6.
Orang tua yang sangat saya cintai dan hormati, Ida Bagus Sulastra dan Cok Rai Sukartini yang telah mengasuh dan membesarkan penulis, membimbing dan memberi motivasi dalam penyusunan Skripsi ini.
7.
Kakak kandung saya beserta istri Ida Bagus Widnyana dan Gusti Ayu Melani, adik kandung Ida Ayu Ketut Laksmi Wedayanti, serta keluarga besar di Gria Gede Demayu Batuh, Kecamatan Ubud, Kabupaten Gianyar yang selalu memberi motivasi dan dukungan.
8.
Keluarga di Puri Pengosekan, Kecamatan Ubud, Kabupaten Gianyar yang selalu memberi motivasi dan dukungan.
9.
Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2011 dan Bahan Alam 2011 yang saya banggakan, khususnya Tim seperjuangan penulis: Prima, Redika, Samy, Fatwa, Andre serta para laboran Kak Anggi dan Mbok Dwi yang banyak membantu dan memberikan semangat dalam penyusunan Skripsi ini.
10. Seluruh geng pondok aditya yaitu dayu candra, diah, cipta, suci, sari, intan, dayu tu yang selalu memberi semangat dan mengingatkan saya dalam berbagai hal. Kepada teman-teman kece 2011 yaitu gung sinta, ratu, dan dayu candra yang selalu menemani disaat suka maupun duka.
iv
11. Seluruh mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2010, khususnya kak Adi, kak Wida, kak Nala, kak Era, kak Maha dan kak Eca yang memberikan semangat dan dukungan dalam pembuatan Skripsi ini. 12. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu. Penulis menyadari bahwa penyusunan Skripsi ini masih belum sempurna. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis berharap semoga Skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang memerlukan.
Bukit Jimbaran, Agustus 2015
Penulis
v
DAFTAR ISI
Halaman HALAMAN JUDUL . ................................................................................. i LEMBAR PENGESAHAN ........................................................................ ii KATA PENGANTAR ................................................................................ iii DAFTAR ISI ............................................................................................... vi DAFTAR TABEL ....................................................................................... x DAFTAR GAMBAR .................................................................................. xi DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH .................................................. xii DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... xvii ABSTRAK .................................................................................................. xix ABSTRACT ................................................................................................ xx BAB I. PENDAHULUAN .......................................................................... 1 1.1. Latar Belakang .............................................................................. 1 1.2. Rumusan Masalah ......................................................................... 5 1.3. Tujuan Penelitian .......................................................................... 5 1.4. Manfaat Penelitian ........................................................................ 5 BAB II. TINJAUAN PUSTAKA................................................................ 6 2.1. Tanaman Spondias pinnata ........................................................... 6 2.1.1. Klasifikasi Tanaman.......................................................... 6 2.1.2. Deskripsi Tanaman............................................................ 6 2.1.3. Kandungan Kimia dan Bioaktivitas Tanaman .................. 7
vi
2.1.4. Studi Keamanan yang Pernah Dilakukan .......................... 8 2.2. Ekstraksi ........................................................................................ 10 2.3. Uji Teratogenik ............................................................................. 11 2.3.1. Teratologi dan Teratogen .................................................. 12 2.3.2. Proses Perkembangan Fetus .............................................. 14 2.4. Pemeriksaan Perkembangan Skeleton .......................................... 15 2.4.1. Skeleton ............................................................................. 15 2.4.2. Proses Perkembangan Skeleton......................................... 17 2.4.3. Bentuk Kelainan Skeleton ................................................. 18 2.4.4. Metode Pemeriksaan Perkembangan Fetus dengan Pewarnaan Alcian Blue-Alizarin Red ................................ 22 BAB III. METODE PENELITIAN............................................................. 23 3.1. Rancangan Penelitian .................................................................... 23 3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian ........................................................ 24 3.3. Hewan Coba .................................................................................. 24 3.4. Bahan Penelitian ........................................................................... 25 3.4.1. Bahan Tanaman ................................................................. 25 3.4.2. Bahan Kimia...................................................................... 25 3.5. Alat Penelitian ............................................................................... 25 3.6. Prosedur Penelitian ....................................................................... 25 3.6.1. Preparasi Sampel ............................................................... 25 3.6.2. Pembuatan Ekstrak Etanol 80% Daun S. pinnata ............. 26 3.6.3. Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Simplisia ............... 26
vii
3.6.4. Penetapan Susut Pengeringan Ekstrak Daun S. pinnata ... 27 3.6.5. Uji Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol 80% Daun S. pinnata terhadap Struktur Skeleton Fetus Mencit......... 28 A. Pembuatan CMC-Na 0,5% ........................................... 28 B. Pembuatan Suspensi Ekstrak ........................................ 28 C. Persiapan Hewan Coba ................................................. 28 D. Mencit Siap Kawin ....................................................... 29 E. Perkawinan Mencit ....................................................... 31 F. Perlakuan Ekstrak Etanol 80% Daun S. pinnata .......... 31 G. Pembedahan Mencit ..................................................... 32 H. Pewarnaan Skeleton Fetus Mencit Menggunakan Pewarna Alizarin Red-Alcian Blue ............................... 32 3.7. Pengamatan ................................................................................... 33 3.8. Analisis Data ................................................................................. 33 3.9. Skema Kerja Penelitian ................................................................. 35 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................... 36 4.1. Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Daun S. pinnata ................ 36 4.2. Pembuatan Ekstrak Etanol 80% Daun S. pinnata ......................... 37 4.3. Penetapan Susut Pengeringan Ekstrak Etanol 80% Daun S. pinnata....................................................................................... 37 4.4. Hasil Uji Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol 80% Daun S. pinnata Terhadap Struktur Skeleton Fetus Mencit ................... 38 4.4.1. Sternebrae .......................................................................... 39
viii
4.4.2. Vertebrae ........................................................................... 41 4.4.3. Costae ................................................................................ 43 4.4.4. Metakarpus dan Metatarsus............................................... 46 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ..................................................... 50 5.1. Kesimpulan ................................................................................... 50 5.2. Saran ............................................................................................. 50 DAFTAR PUSTAKA ................................................................................. 51
ix
DAFTAR TABEL
Halaman Tabel 3.1. Deskripsi Siklus Estrus terhadap Pengamatan Apusan Vagina di bawah Mikroskop .................................................................. 30 Tabel 4.1. Hasil Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Daun S. pinnata .... 36 Tabel 4.2. Hasil Penetapan Susut Pengeringan Ekstrak Etanol 80% Daun S. pinnata ........................................................................ 38 Tabel 4.3. Hasil Pengamatan Skeleton yang Mengalami Kelainan Sternebrae .................................................................................. 39 Tabel 4.4. Hasil Pengamatan Skeleton yang Mengalami Kelainan Vertebrae ................................................................................... 42 Tabel 4.5. Pengamatan Skeleton yang Mengalami Kelainan Costae .......... 43 Tabel 4.6. Hasil Pengamatan Skeleton yang Mengalami Kelainan Jumlah Ruas Costae ................................................................... 45 Tabel 4.7. Hasil Pengamatan Skeleton yang Mengalami Kelainan Jumlah Ruas Metakarpus ........................................................... 46
x
DAFTAR GAMBAR
Halaman Gambar 2.1. Tanaman Kedongdong Hutan (S. pinnata)............................. 6 Gambar 2.2. Penampakan Struktur Skeleton Normal pada Mencit ............ 18 Gambar 2.3. Penampakan Struktur Skeleton Normal pada Tulang Rusuk (Costae) dan Tulang Dada (Sternebrae) ..................... 19 Gambar 2.4. Penampakan Struktur Skeleton Normal pada Tulang Telapak Kaki (Metatarsus)..................................................... 20 Gambar 2.5. Bentuk Costae Fetus ............................................................... 21 Gambar 3.1. Tampilan Siklus Estrus terhadap Pengamatan Apusan Vagina di bawah Mikroskop .................................................. 31 Gambar 3.2. Skema Kerja Penelitian Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Daun S. pinnata terhadap Struktur Skeleton Fetus Mencit .................................................................................... 35 Gambar 4.1. Hasil Pengamatan Skeleton yang Mengalami Kelainan Sternebrae .............................................................................. 40 Gambar 4.2. Hasil Pengamatan Skeleton yang Mengalami Kelainan Vertebrae ................................................................................ 43 Gambar 4.3. Hasil Pengamatan Skeleton yang Mengalami Kelainan Bentuk Costae ........................................................................ 45 Gambar 4.4. Hasil Pengamatan Skeleton yang Mengalami Kelainan Jumlah Metakarpus dan Metatarsus ....................................... 48
xi
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH
Abortus
: terhentinya proses kehamilan yang sedang berlangsung sebelum janin mampu bertahan.
Aksial
: rangka tubuh yang berfungsi menjaga organ-organ utama tubuh.
Apendikular
: rangka yang menyusun alat gerak.
Ad libitum
: menurut keinginan.
BB
: berat badan
BUN
: Blood Urea Nitrogen
cAMP
: Adenosina monofosfat siklik
Costae
: Tulang rusuk
CMC-Na
: Carboxymethyl Cellulose-Natrium
Degenerasi
: kerusakan jaringan atau organ secara struktural maupun fungsional
Embriotoksik
: zat yang bersifat toksik pada perkembangan embrio.
Ekstrak
: sediaan kering, kental, atau cair dibuat dengan menyari simplisia nabati atau hewani menurut cara yang cocok, dil.uar pengaruh cahaya matahari langsung
Estrus
: keadaan fisiologi hewan betina yang siap menerima perkawinan dengan jantan.
Fetus
: mamalia yang berkembang setelah fase embrio yang masih berada dalam kandungan induknya
xii
Fiksasi
: usaha untuk mempertahankan elemen-elemen sel atau jaringan agar tetap pada tempatnya dan tidak mengalami perubahan bentuk maupun ukuran.
Fertilisasi
: suatu proses pembuahan sel telur (ovum) oleh sel mani (sperma) untuk menghasilkan zigot, yang kemudian berkembang menjadi embrio atau janin.
Fitofarmaka
: sediaan obat bahan alam yang telah dibuktikan keamanan dan khasiatnya secara ilmiah dengan uji praklinis dan uji klinis
bahan
baku
serta
produk
jadinya
telah
terstandarisasi. Hidrosefalus
: suatu kondisi yang ditandai oleh volume intrakranial cairan serebrospinal yang berlebihan.
Implantasi
: perlekatan dan penetrasi oleh telur yang telah dibuahi di dinding rahim.
INH
: Isonikotinilhidrazid.
Kalsifikasi
: atau disebut pengapuran adalah akumulasi kalsium garam dalam jaringan tubuh.
Kartilago
: tulang rawan
Kolagen
: protein yang membentuk unsur utama dari jaringan ikat dan tulang, dan memberikan kekuatan dan daya tahan kulit.
Kalsium
: mineral penting yang paling banyak dibutuhkan tubuh yang berperan dalam membantu pembentukan tulang dan
xiii
gigi dan diperlukan untuk pembekuan darah, transmisi sinyal pada saraf, dan kontraksi otot. Kondrosit
: sel tulang rawan dewasa
LD50
: dosis letal median, yaitu dosis suatu zat yang secara statistik diharapkan akan membunuh 50% hewan coba.
MDR
: Multi-Drug
Resistant
yaitu
strain
Mycobacterium
tuberculosis yang resisten setidaknya terhadap isoniazid dan rifampisin. Malformasi
: perkembangan abnormal suatu organ atau jaringan
Mesenkim
: jaringan ikat yang masih bersifat embrional
Metakarpus
: tulang di bagian tengah pada kerangka tangan yang terletak di antara tulang jari dan karpus yang membentuk hubungan dengan lengan bawah.
Metatarsus
: lima tulang panjang di kaki terletak di antara tulangtulang tarsal dari belakang, pertengahan dan falang jari kaki.
Mitosis
: pembelahan sel yang terjadi pada sel tubuh
Morula
: pada proses perkembangan embrio, morula merupakan suatu bentukan sel seperti bola (bulat) akibat pembelahan sel terus menerus.
Nekrosis
: kematian sel pada jaringan tubuh yang disebabkan oleh pengaruh dari luar yang merusak jaringan tersebut dan oleh berkurangnya darah yang mengalir ke tempat
xiv
tersebut. Osteoblas
: sel penyusun tulang keras yang masih muda
Organogenesis
: proses pembentukan organ
Osifikasi
: proses pembentukan tulang
Osteogenesis
: proses pembentukan tulang
Resisten
: mikroorganisme yang mampu menahan efek obat yang mematikan terhadap sebagian besar anggota spesiesnya.
Resorpsi
: berupa gumpalan merah yang tertanam pada uterus.
Simplisia
: bahan alam yang digunakan sebagai obat yang belum mengalami pengolahan apapun juga, kecuali dinyatakan lain, berupa bahan yang dikeringkan.
Skeleton
: serangkaian
tulang
yang
menyusun
tubuh
dan
mempunyai fungsi yang sangat penting Skrotum
: kantung kulit yang membungkus testis
Somit
: salah satu dari untaian segmen longitudinal seperti blok dimana mesoderma di kedua sisi tulang belakang embrio melakukan diferensiasi.
Spermatozoa
: sel kelamin pria atau gamet yang membuahi sel telur wanita atau ovum pada organisme yang bereproduksi secara seksual.
Sternebrae
: tulang dada
Strain
: kelompok organisme dalam suatu spesies yang ditandai dengan beberapa sifat yang khas.
xv
Suspensi
: sediaan yang mengandung bahan obat padat dalam bentuk halus dan tidak larut, terdispersi dalam cairan pembawa
Vertebrae
: tulang belakang
Zigot
: sel yang terbentuk sebagai hasil bersatunya dua sel kelamin yaitu sel ovum dan sel sperma yang telah masak.
xvi
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman Lampiran 1. Surat Kelaikan Etik Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol 80% Daun Spondias pinnata Terhadap Struktur Skeleton Fetus ..................................................................................... 56 Lampiran 2. Perhitungan Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol 80% Daun S. pinnata dan Perhitungan Jumlah Ekstrak yang diterima per Mencit ............................................................... 57 Lampiran 3. Hasil Analisis Data Kelainan Sternebrae Masih Tulang Rawan Kontrol Negatif Vs 5 g/kgBB ................................... 60 Lampiran 4. Hasil Analisis Data Kelainan Sternebrae Tulang Keras Kecil-kecil Kontrol Negatif Vs 5 g/kgBB ............................. 61 Lampiran 5. Hasil Analisis Data Kelainan Vertebrae 2 Somit Bergabung Menjadi 1 Kontrol Negatif Vs 2 g/kgBB ............ 62 Lampiran 6. Hasil Analisis Data Kelainan Vertebrae 2 Somit Bergabung Menjadi 1 Kontrol Negatif Vs 5 g/kgBB ............ 63 Lampiran 7. Hasil Analisis Data Kelainan Costae Bergelombang Kontrol Negatif Vs 0,2 g/kgBB ............................................. 64 Lampiran 8. Hasil Analisis Data Kelainan Costae Bergelombang Kontrol Negatif Vs 1 g/kgBB ................................................ 65 Lampiran 9. Hasil Analisis Data Kelainan Costae Bergelombang Kontrol Negatif Vs 2 g/kgBB ................................................ 66
xvii
Lampiran 10. Hasil Analisis Data Kelainan Costae Bergelombang Kontrol Negatif Vs 5 g/kgBB .............................................. 67 Lampiran 11. Hasil Analisis Data Kelainan Jembatan Costae Kontrol Negatif Vs 5 g/kgBB............................................................ 68 Lampiran 12. Hasil Analisis Data Kelainan Ruas Costae Tidak Berpasangan Kontrol Negatif Vs 5 g/kgBB ........................ 69 Lampiran 13. Hasil Analisis Data Ruas Penulangan Metakarpus Kontrol Negatif Vs 0,2 g/kgBB ........................................... 70 Lampiran 14. Hasil Analisis Data Ruas Penulangan Metakarpus Kontrol Negatif Vs 1 g/kgBB .............................................. 71 Lampiran 15. Hasil Analisis Data Ruas Penulangan Metakarpus Kontrol Negatif Vs 2 g/kgBB .............................................. 72 Lampiran 16. Hasil Analisis Data Ruas Penulangan Metakarpus Kontrol Negatif Vs 5 g/kgBB .............................................. 73 Lampiran 17. Hasil Analisis Data Ruas Penulangan Metatarsus Kontrol Negatif Vs 0,2 g/kgBB ........................................... 74 Lampiran 18. Hasil Analisis Data Ruas Penulangan Metatarsus Kontrol Negatif Vs 1 g/kgBB .............................................. 75 Lampiran 19. Hasil Analisis Data Ruas Penulangan Metatarsus Kontrol Negatif Vs 2 g/kgBB .............................................. 76 Lampiran 20. Hasil Analisis Data Ruas Penulangan Metatarsus Kontrol Negatif Vs 5 g/kgBB .............................................. 77
xviii
ABSTRAK Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi pengaruh pemberian ekstrak etanol daun Spondias pinnata pada periode organogenesis terhadap struktur skeleton fetus mencit. Pada pengujian ini mencit betina yang sudah bunting dibagi secara acak menjadi 5 kelompok, masing-masing terdiri dari 7 ekor. Tiap kelompok diberikan perlakuan yang berbeda, kontrol diberikan suspensi CMC-Na 0,5%, kelompok perlakuan diberikan ekstrak dosis 0,2; 1; 2; dan 5 g/kgBB. Ekstrak diberikan pada hari ke 6-15 kebuntingan dengan menggunakan alat sonde. Pada hari ke 17 mencit dikorbankan kemudian dibedah dan diambil fetusnya. Fetus dipreparasi dan diwarnai dengan larutan pewarna Alizarin red-Alcian blue. Pengamatan skeleton meliputi perkembangan kerangka aksial (costae, sternebrae, dan vertebrae) dan perkembangan kerangka apendikular (metakarpus dan metatarsus). Analisis data dilakukan dengan SPSS versi 17 menggunakan uji crosstab dan uji gamma. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol 80% daun S. pinnata yang diberikan pada mencit betina bunting pada masa organogenesis dapat mempengaruhi skeleton fetus mencit. Pengaruh ekstrak ini terhadap skeleton berupa penghambatan penulangan ruas metakarpus dan metatarsus yang terjadi dari pemberian ekstrak dosis 0,2; 1; 2; dan 5 g/kgBB. Kelainan costae (costae bergelombang dan costae bengkok), kelainan sternebrae (sternebrae masih dalam bentuk tulang rawan dan tulang keras kecil-kecil), dan kelainan vertebrae (dua somit bergabung menjadi satu) terjadi paling banyak pada dosis 5 g/kgBB. Ekstrak etanol daun S. pinnata pada dosis 0,2; 1; 2; dan 5 g/kgBB perlu dipertimbangkan penggunaannya terutama pada periode organogenesis mengingat pengaruhnya terhadap perkembangan skeleton fetus. Kata kunci : Daun Spondias pinnata, ekstrak etanol, organogenesis, skeleton, fetus.
xix
ABSTRACT The purpose of this study was to evaluate the effect of the ethanol extract of Spondias pinnata leaves during the period of organogenesis on skeleton structure of mice fetus. In this test, the pregnant mice were divided into 5 groups randomly, each group consist of 7 animals. Control group was given 0,5% CMCNa suspension, treatment groups were given ethanol extract of S. pinnata leaves orally at dose of 0,2; 1; 2; and 5 g/kgBW. Extract was given on 6-15 days of gestation. On day 17, mice were sacrificed, dissected and fetuses were taken. Fetuses were prepared and stained with Alizarin red-Alcian blue dye solution. Observations of skeleton includes the development of the axial skeleton (costae, sternebrae, and vertebrae) and development of appendicular skeleton (metakarpus and metatarsus). Data analysis was performed with SPSS version 17, using the crosstab and gamma test. The results showed that 80% ethanol extract of S. pinnata leaves administered to pregnant mice during organogenesis can affect the skeleton of fetuses. The effect of extract in skeleton such as inhibition of ossification metakarpus and metatarsus which occurred from the extract dose of 0,2; 1; 2; and 5 g/kgBW. Abnormalities costae (wavy and crooked costae), abnormalities sternebrae (sternebrae still in the form of cartilage and small hard bone), and abnormalities of the vertebrae (two somites merged into one) occurs mostly at dose of 5 g/kgBW. The usage of ethanol extract of S. pinnata leaves at dose of 0,2; 1; 2; and 5g/kgBW should be considered, especially during the period of organogenesis because of its effect on the development of the fetus skeleton. Keywords : Spondias pinnata leaves, ethanol extract, organogenesis, skeleton, fetus.
xx
