PEDOMAN UJI MUTU DAN UJI EFIKASI LAPANGAN AGENS PENGENDALI HAYATI (APH)

PEDOMAN UJI MUTU DAN UJI EFIKASI LAPANGAN AGENS PENGENDALI HAYATI (APH)

DIREKTORAT PERLINDUNGAN PERKEBUNAN KEMENTERIAN PERTANIAN 2014

KATA PENGANTAR

Berdasarkan Undang-Undang Nomor 12 Tahun 1992 tentang Sistem Budidaya Tanaman, ditetapkan bahwa pestisida yang akan diedarkan di Indonesia wajib terdaftar, memenuhi standar mutu, terjamin efektivitasnya, aman bagi manusia dan lingkungan hidup serta diberi label. Selanjutnya dalam Peraturan Pemerintah Nomor 7 Tahun 1973 Tentang Pengawasan Atas Peredaran, Penyimpanan, dan Penggunaan Pestisida, hanya pestisida yang telah terdaftar dan atau memperoleh izin Menteri Pertanian yang boleh diedarkan, disimpan dan digunakan dalam wilayah Republik Indonesia. Agens pengendali hayati (APH) seperti cendawan entomopatogen telah banyak dipergunakan secara luas oleh petani sebagai bahan pengendali OPT yang efektif, aman dan ramah lingkungan. Berbagai APH telah dikembangkan oleh Laboratorium Lapangan (LL)/Unit Pelaksana Teknis Dinas (UPTD) dan Unit Pelaksana Teknis (UPT) Pusat, namun sampai saat ini penggunaannya di lapangan masih terkendala dengan masalah legalitas perizinannya, seperti yang disyaratkan oleh Permentan No. 24 tahun 2011, yang mensyaratkan semua jenis bahan pengendali yang dipergunakan harus terdaftar dan mendapatkan izin dari Menteri Pertanian.TahapanAPH dalam mendapatkan izin adalah melakukan uji mutu dan uji efikasi lapangan. Buku pedoman uji efikasi lapangan dan uji mutu APH berisi pedoman uji mutu dan uji efikasi APH golongan cendawan entomopatogen yaitu Metarrhizium anisopliae, Beauveria bassiana dan Trichoderma sp serta feromon Rhynchophorus ferrugineus. Buku ini selanjutnya dapat dijadikan pedoman dalampelaksanaan pengujian mutu dan efikasi APH di lingkup perkebunan. Kami mengucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah membantu dalam penyusunan buku ini, khususnya para pakar dari Institut Pertanian Bogor (IPB), Universitas Gadjah Mada (UGM), Universitas Jenderal Soedirman (Unsoed), Balai Penelitian Tanaman Industri dan Penyegar (Balittri) serta Balai Besar Perbenihan dan Proteksi Tanaman Perkebunan (BBPPTP) Surabaya yang telah memberikan masukan dalam penyusunan pedoman uji mutu dan uji efikasi lapangan APH. Akhirnya kami berharap semoga buku ini bermanfaat bagi pihak yang berkepentingan. Jakarta, Maret 2014 Direktur Perlindungan Perkebunan

i

DAFTAR ISI Halaman KATA PENGANTAR ............................................................................................

i

DAFTAR ISI ......................................................................................................

ii

BAB I. Protokol Uji Efikasi Lapang Agens Pengendali Hayati (APH) .......................

1

I.

Pengujian Lapangan Efikasi Agens Pengendali Hayati Kandungan (Jamur

Trichoderma sp.) Terhadap Penyakit Busuk Buah Kakao (BBK) Phytophthora palmivora Pada Tanaman Kakao ........................................... II.

2


Trichoderma sp.) Terhadap Penyakit VSD (Oncobasidium theobromae) Pada Tanaman Kakao .......................................................................................

7

III. Pengujian Lapangan Efikasi Agens Pengendali Hayati (APH) Trichoderma sp. Terhadap Penyakit Busuk Pangkal Batang (BPB) Phytophthora Capsici Pada Tanaman Lada ..................................................................................

12

IV. Pengujian Lapangan Efikasi Agens Pengendali Hayati Kandungan (Jamur

Trichoderma sp.) Terhadap Penyakit Busuk Pangkal Batang (BPB) Ganoderma boninense Pada Tanaman Kelapa sawit..................................... V.

17


Trichoderma sp.) Terhadap Penyakit Jamur Akar Putih (JAP) Rigidoporus lignosus Pada Tanaman Karet ...................................................................

21

VI. Pengujian Lapangan Efikasi Agens Pengendali Hayati Kandungan (Jamur

Trichoderma sp.) Terhadap Penyakit Jamur Akar Putih (JAP) Rigidoporus lignosus Pada Tanaman Jambu Mete ..........................................................

26

VII. Pengujian Lapangan Efikasi Agens Pengendali Hayati Kandungan (Jamur

Metarhizium anisopliae.) Terhadap Hama Kumbang Nyiur Oryctes rhinoceros Pada Tanaman Kelapa ...............................................................................

31

VIII. Pengujian Lapangan Efikasi Agens Pengendali Hayati Kandungan (Jamur

Metarhizium anisopliae.) Terhadap Hama Kumbang Janur Brontispa longissima Pada Tanaman Kelapa ...............................................................

35 ii

IX. Pengujian Lapangan Efikasi Agens Pengendali Hayati Kandungan (Jamur

Metarhizium anisopliae.) Terhadap Uret Lepitioda stigma Pada Tanaman Tebu .......................................................................................... X.

40


Beauveria bassiana) Terhadap Hama Penggerek Buah Kopi (PBKo) Hypothenemus hampei Pada Tanaman Kopi ................................................

44

XI. Pengujian Lapangan Efikasi Agens Pengendali Hayati Kandungan (Jamur

Beauveria bassiana.) Terhadap Hama Penggerek Buah Kakao (PBK) Conopomorpha cramerella Pada Tanaman Kakao ........................................

49

XII. Pengujian Lapangan Efikasi Agens Pengendali Hayati Kandungan (Jamur

Beauveria bassiana.) Terhadap Hama Penghisap Buah Kakao Helopeltis sp ...

54

XIII. Protokol Pengujian Lapangan Efikasi Feromon Terhadap Hama Kumbang Mocong (Rhynchophorus ferrugineus) pada Tanaman Kelapa ........

58

BAB II. Protokol Uji Mutu Agens Pengendali Hayati (APH)....................................

61

XIV. Agens Pengendali Hayati (APH) Trichoderma spp. .......................................

62

XV. Agens Pengendali Hayati (APH) Metarhizium anisopliae ...............................

85

XVI. Agens Pengendali Hayati (APH) Bagian 1 : Beauveria bassiana ..................... 101

iii

BAB I PROTOKOL UJI EFIKASI LAPANG AGENS PENGENDALI HAYATI (APH)

1

PENGUJIAN LAPANGAN EFIKASI AGENS PENGENDALI HAYATI (Sebutkan nama dagang) KANDUNGAN (JAMURTrichoderma sp.) TERHADAP PENYAKIT BUSUK BUAH KAKAO (BBK) Phytophthora palmivora PADA TANAMAN KAKAO 1. LINGKUP PENGUJIAN Pengujian lapangan yang dimaksud dalam pedoman ini adalah semua percobaan pengujian yang pada prinsipnya dilakukan dalam kondisi lapangan. 2. LOKASI DAN WAKTU Lokasi dan waktu percobaan ditetapkan atas dasar cukup tersedianya sarana dengan memperhatikan faktor fisik dan biologi yang diperkirakan akan mempengaruhi tujuan percobaan antara lain pertanaman kakao dengan tingkat serangan penyakit busuk buah kakao diatas 10% (sebutkan tempat dan waktu pelaksanaan). Pengujian dilakukan di lapangan. 3. PELAKSANA Sebutkan nama institusi pelaksana pengujian yang telah ditunjuk atau disetujui oleh Menteri pertanian. 4. JUMLAH UNIT KEGIATAN Sebutkan jumlah unit kegiatan pengujian yang telah disetujui oleh Komisi Pestisida. 5. BAHAN DAN METODE 5.1.

BAHAN 5.1.1 Contoh APH yang diuji Contoh APH yang diuji harus diuji mutu kadar bahan aktifnya oleh laboratorium yang ditunjuk oleh Menteri Pertanian, bersegel dan berlabel Direktorat Jenderal Prasarana dan Sarana Pertanian. 5.1.2 Varietas Varietas tanaman yang digunakan adalah varietas yang sering digunakan oleh petani setempat atau terdapat di lokasi percobaan (nama varietas disebutkan) dan cukup rentan terhadap serangan hama sasaran.

2

5.1.3 Umur tanaman Tanaman kakao yang digunakan adalah tanaman yang sudah menghasilkan. 5.1.4 Jumlah tanaman per lubang tanam Jumlah tanaman : 1 tanaman per lubang tanam 5.1.5 Pemeliharaan tanaman Pemeliharaan tanaman dilakukan sebaik-baiknya untuk mencapai tujuan percobaan efikasi APH. Apabila untuk pemeliharaan tersebut perlu dipergunakan bahan pengendali lain (pestisida kimia) harus dilakukan dengan hati-hati dan tidak bersamaan waktunya dengan APH yang diuji. 5.1.6 Pemupukan Pemupukan sesuai dengan rekomendasi untuk budi daya kakao. 5.2.

METODE 5.2.1 Rancangan percobaan Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok. 5.2.2 Jumlah perlakuan dan ulangan Banyaknya perlakuan dan ulangan harus memenuhi persyaratan (p-1) (u-1) > 15 dan u > 3; p = jumlah perlakuan, u = jumlah ulangan. 5.2.3 Macam perlakuan yang diuji Untuk pengujian 1 (satu) formulasi APH, digunakan 4 (empat) taraf konsentrasi/dosis yaitu : A, ¾ A, ½ A dan ¼ A dan kontrol dengan taraf konsentrasi tertinggi diharapkan menjadi konsentrasi anjuran penggunaan formulasi APH tersebut (bila permohonan pendaftaran disetujui). 5.2.4 Pola tanam Pola tanam yang digunakan adalah monokultur

3

5.2.5 Jarak tanam Disesuaikan dengan keadaan setempat 5.2.6 Ukuran petak perlakuan Setiap petak perlakuan terdiri dari 16 pohon (empat baris dan setiap baris empat pohon). 5.2.7 Jarak antar petak Jarak antar petak disesuaikan dengan keadaan setempat. 5.2.8 Tata letak perlakuan Pengaturan tata letak perlakuan dan kelompok diusahakan sedemikian rupa sehingga penyebaran Phytophthtora palmivora sasaran merata. 5.2.9 Cara dan alat aplikasi Disesuaikan dengan formulasi produk. 5.2.10 Volume penyemprotan Per tanaman disesuaikan dengan dosis yang tertera pada produk. 5.2.11 Waktu dan banyaknya aplikasi 5.2.11.1 Aplikasi pertama Aplikasi APH pertama dilakukan bila sudah terdapat serangan penyakit sasaran namun masih dalam intensitas yang sangat rendah. 5.2.11.2 Interval aplikasi Disesuaikan dengan informasi produk. 5.2.11.3 Banyaknya aplikasi Disesuaikan dengan informasi produk.

4

5.2.12 Pengamatan 5.2.12.1 Jumlah contoh Jumlah tanaman contoh yang diamati setiap petak percobaan adalah 12 tanaman. 5.2.12.2 Metode pengambilan contoh Penentuan sistematis.

tanaman

contoh

dilakukan

secara

5.2.12.3 Metode pengamatan Tingkat kerusakan tanaman kakao oleh penyakit busuk buah ditentukan dengan rumus :

I

n x100% N

I = tingkat kerusakan tanaman akibat penyakit busuk buah n = jumlah buah yang menunjukkan gejala busuk akibat P.palmivora N = jumlah buah yang diamati 5.2.12.4 Waktu pengamatan a.

Pengamatan dilakukan satu hari sebelum setiap aplikasi dan dua minggu setelah aplikasi terakhir.

5.2.13 Pengolahan data Pengolahan data tingkat kerusakan tanaman oleh patogen sasaran pada petak-petak percobaan yang diberi perlakuan APH uji dan pembanding serta kontrol dilakukan sesuai dengan rancangan percobaan yang digunakan. Demikian juga data produksi tanaman tiap petak percobaan dianalisa sesuai dengan rancangan percobaan yang digunakan. Tingkat perbedaan dinyatakan pada taraf 5%. 5.2.14 Kriteria efikasi Kriteria efikasi didasarkan pada tingkat kerusakan tanaman oleh patogen sasaran apabila pada awal percobaan tingkat kerusakan tanaman pada semua petak percobaan merata. Kriteria efikasi didasarkan pada perkembangan penyakit oleh patogen sasaran apabila pada awal percobaan serangan tidak merata. 5

Tingkat efikasi (TE) APH uji dihitung dari hasil pengamatan terakhir dengan menggunakan rumus : TE = (ISK – ISP) (ISK)-1 x 100%, dimana TE ≥50% Keterangan : TE = tingkat efikasi ISK = intensitas serangan penyakit pada kontrol (tanpa APH) ISP = intensitas serangan penyakit pada perlakuan APH 5.2.15 Data penunjang 5.2.15.1 Serangan OPT lain 5.2.15.2 Produksi biji kering tiap petak pada saat panen.

6

PENGUJIAN LAPANGAN EFIKASI AGENS PENGENDALI HAYATI (Sebutkan nama dagang) KANDUNGAN (JAMURTrichoderma sp.) TERHADAP PENYAKIT VSD (Oncobasidium theobromae) PADA TANAMAN KAKAO

1. LINGKUP PENGUJIAN Pengujian lapangan yang dimaksud dalam pedoman ini adalah semua percobaan pengujian yang pada prinsipnya dilakukan dalam kondisi lapangan. 2. LOKASI DAN WAKTU Lokasi dan waktu percobaan ditetapkan atas dasar cukup tersedianya sarana dengan memperhatikan faktor fisik dan biologi yang diperkirakan akan mempengaruhi tujuan percobaan antara lain pertanaman kakao dengan tingkat serangan VSD diatas 10%. Pengujian dilakukan di lapangan. 3. PELAKSANA Sebutkan nama institusi pelaksana pengujian yang telah ditunjuk atau disetujui oleh Menteri pertanian. 4. JUMLAH UNIT KEGIATAN Sebutkan jumlah unit kegiatan pengujian yang telah disetujui oleh Komisi Pestisida. 5. BAHAN DAN METODE 5.1.

BAHAN 5.1.1 Contoh APH yang diuji Contoh APH yang diuji harus diuji mutu kadar bahan aktifnya oleh laboratorium yang ditunjuk oleh Menteri Pertanian, bersegel dan berlabel Direktorat Jenderal Prasarana dan Sarana Pertanian. 5.1.2 Varietas Varietas tanaman yang digunakan adalah varietas yang sering digunakan oleh petani setempat atau terdapat di lokasi percobaan (nama varietas disebutkan) dan cukup rentan terhadap serangan hama sasaran. 7

5.1.3 Umur tanaman Tanaman kakao yang digunakan adalah tanaman menghasilkan yang memperlihatkan gejala serangan VSD. 5.1.4 Jumlah tanaman per lubang tanam Jumlah tanaman = 1 tanaman per lubang tanam 5.1.5 Pemeliharaan tanaman Pemeliharaan tanaman dilakukan sebaik-baiknya untuk mencapai tujuan percobaan efikasi APH. Apabila untuk pemeliharaan tersebut perlu dipergunakan bahan pengendali lain (pestisida kimia) harus dilakukan dengan hati-hati dan tidak bersamaan waktunya dengan APH yang diuji. 5.1.6 Pemupukan Pemupukan sesuai dengan rekomendasi untuk budidaya kakao. 5.2.

METODE 5.2.1 Rancangan percobaan Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok. 5.2.2 Jumlah perlakuan dan ulangan Banyaknya perlakuan dan ulangan harus memenuhi persyaratan (p-1) (u-1) > 15 dan u > 3; p = jumlah perlakuan, u = jumlah ulangan. 5.2.3 Macam perlakuan yang diuji Untuk pengujian 1 (satu) formulasi APH, digunakan 4 (empat) taraf konsentrasi/dosis yaitu: A, ¾ A, ½ A dan ¼ A dan kontrol dengan taraf konsentrasi tertinggi diharapkan menjadi konsentrasi anjuran penggunaan formulasi APH tersebut (bila permohonan pendaftaran disetujui). 5.2.4 Pola tanam Pola tanam yang digunakan adalah monokultur

8

5.2.5 Jarak tanam Disesuaikan dengan keadaan setempat 5.2.6 Ukuran petak perlakuan Setiap petak perlakuan terdiri dari 16 pohon (empat baris dan setiap baris empat pohon). 5.2.7 Jarak antar petak Jarak antar petak disesuaikan dengan keadaan setempat. 5.2.8 Tata letak perlakuan Pengaturan tata letak perlakuan dan kelompok diusahakan sedemikian rupa sehingga penyebaran VSD sasaran merata. 5.2.9 Cara dan alat aplikasi Disesuaikan dengan formulasi produk. 5.2.10 Volume penyemprotan Per tanaman disesuaikan dengan dosis yang tertera pada produk. 5.2.11 Waktu dan banyaknya aplikasi 5.2.11.1

Aplikasi pertama Aplikasi dilakukan segera setelah ditemukan gejala serangan VSD pada daun dan ranting.

5.2.11.2

Interval aplikasi Interval aplikasi dua minggu sekali.

5.2.11.3

Banyaknya aplikasi Banyaknya aplikasi dilakukan selama tiga bulan.

5.2.12 Pengamatan 5.2.12.1 Jumlah contoh Dari setiap petak diamati empat pohon. 9

5.2.12.2 Metode pengambilan contoh Metode pengambilan contoh adalah empat pohon yang ada dibagian petak. Sebelum aplikasi dimulai setiap pohon diambil secara acak 4-10 ranting (tergantung jenisnya) yang tumbuh dibagian batang dengan ukuran panjang ranting 7-10 cm dan diberi tanda. 5.2.12.3 Metode pengamatan Intensitas serangan penyakit VSD diamati di lapangan pada tanaman contoh dan dihitung dengan rumus: I=

a x 100% a+b

I = intensitas serangan (%) a = jumlah ranting yang terserang b = jumlah ranting sehat 5.2.12.4 Waktu pengamatan Pengamatan dilakukan satu hari sebelum setiap aplikasi dan dua minggu setelah aplikasi terakhir. 5.2.13 Pengolahan data Pengolahan data dikerjakan sesuai dengan rancangan percobaan yang digunakan. Tingkat perbedaan dinyatakan pada taraf 5%. 5.2.14 Kriteria efikasi -

-

Efikasi APH yang diuji didasarkan pada tingkat kerusakan ranting yaitu apabila pada awal percobaan penyebaran gejala kerusakan ranting pada petak merata, atau perubahan tingkat kerusakan ranting, yaitu apabila pada awal percobaa penyebaran gejala kerusakan ranting pada semua petak merata maupun tidak merata. Bila kerusakan tanaman pada pengamatan pertama (sebelum aplikasi APH) tidak berbeda nyata antar petak perlakuan, tingkat efikasi APH dihitung dengan rumus Abbot: EI =

Ca − Ta x 100% Ca

10

EI =Keefektifan APH yang diuji (%) Ca= Persentase kerusakan tanaman pada petak control setelah aplikasi APH Ta= Persentase kerusakan tanaman pada petak perlakuan setelah aplikasi APH -

Bila kerusakan tanaman pada pengamatan pertama berbeda nyata antar perlakukan, tingkat efikasi insektisida dihitung dengan rumus Henderson dan Tilton: EI = 1 − EI = Ca = Cb = Ta = Tb =

Ta Cb x X 100% Ca Tb

Keefektifan APH yang diuji (%) Kerusakan pada petak control setelah aplikasi APH Kerusakan pada petak control sebelum aplikasi APH Kerusakan pada petak perlakuan setelah aplikasi APH Kerusakan pada petak perlakuan sebelum aplikasi APH

Suatu formulasi APH dikatakan efektif pada sekurangkurangnya (1/2 n + 1) kali pengamatan (n = jumlah total pengamatan setelah aplikasi/infestasi), tingkat efikasi insektisida tersebut (EI). 5.2.15 Data penunjang 5.2.15.1 Serangan OPT lain 5.2.15.2 Produksi biji kering tiap petak pada saat panen.

11

PENGUJIAN LAPANGAN EFIKASI AGENS PENGENDALI HAYATI (APH) Trichoderma sp. (Sebutkan nama dagang dan nama bahan aktifnya) TERHADAP PENYAKIT BUSUK PANGKAL BATANG (BPB) Phytophthora capsici PADA TANAMAN LADA 1. LINGKUP PENGUJIAN Pengujian lapangan yang dimaksud dalam pedoman ini adalah semua percobaan pengujian yang pada prinsipnya dilakukan dalam kondisi lapangan. 2. LOKASI DAN WAKTU Lokasi dan waktu percobaan ditetapkan atas dasar cukup tersedianya sarana dengan memperhatikan faktor fisik dan biologi yang diperkirakan akan mempengaruhi tujuan percobaan antara lain pertanaman lada dengan tingkat serangan penyakit BPB pada tanaman lada diatas 50% (sebutkan tempat dan waktu pelaksanaan). Pengujian dilakukan di lapangan. 3. PELAKSANA Sebutkan nama institusi pelaksana pengujian yang telah ditunjuk atau disetujui oleh Menteri Pertanian. 4. JUMLAH UNIT KEGIATAN Sebutkan jumlah unit kegiatan pengujian yang telah disetujui oleh Komisi Pestisida. 5. BAHAN DAN METODE 5.1.


12

5.1.3 Umur tanaman Tanaman lada yang digunakan adalah tanaman yang sudah menghasilkan. 5.1.4 Jumlah tanaman per lubang tanam Jumlah tanaman : 1 tanaman per lubang tanam 5.1.5 Pemeliharaan tanaman Pemeliharaan tanaman dilakukan sebaik-baiknya untuk mencapai tujuan percobaan efikasi APH. Apabila untuk pemeliharaan tersebut perlu dipergunakan bahan pengendali lain (pestisida kimia) harus dilakukan dengan hati-hati dan tidak bersamaan waktunya dengan APH yang diuji. 5.1.6 Pemupukan Pemupukan sesuai dengan rekomendasi untuk budidaya lada. 5.2.

METODE 5.2.1 Rancangan percobaan Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok. 5.2.2 Jumlah perlakuan dan ulangan Banyaknya perlakuan dan ulangan harus memenuhi persyaratan (p-1) (u-1) > 15 dan u > 3; p = jumlah perlakuan, u = jumlah ulangan. 5.2.3 Macam perlakuan yang diuji Untuk pengujian 1 (satu) formulasi APH, digunakan 4 (empat) taraf konsentrasi/dosis yaitu: A, ¾ A, ½ A dan ¼ A dan kontrol dengan taraf konsentrasi tertinggi diharapkan menjadi konsentrasi anjuran penggunaan formulasi APH tersebut (bila permohonan pendaftaran disetujui). 5.2.4 Pola tanam Pola tanam yang digunakan adalah monokultur

13

5.2.5 Jarak tanam Jarak tanam lada yang direkomendasikan adalah 2,5 x 2,5 m (1600 tanaman/ha) atau 3 x 3 m (1100 tanaman/ha). 5.2.6 Ukuran petak perlakuan Ukuran petak perlakuan tergantung jumlah tanaman sampel yang diambil.Misal: setiap petak perlakuan terdiri dari 16 pohon (empat baris dan setiap baris empat pohon) 5.2.7 Jarak antar petak Jarak antar petak disesuaikan dengan keadaan setempat. 5.2.8 Tata letak perlakuan Pengaturan tata letak perlakuan dan kelompok diusahakan sedemikian rupa sehingga penyebaran Phytophthtora capsici merata. 5.2.9 Cara dan alat aplikasi Disesuaikan dengan yang tertera pada formulasi produk 5.2.10 Volume/dosis Per tanaman disesuaikan dengan dosis dan volume yang tertera pada produk 5.2.11 Waktu dan banyaknya aplikasi Tergantung produk yang diuji 5.2.12 Pengamatan 5.2.12.1 Jumlah contoh Dari setiap petak diamati empat pohon. 5.2.12.2 Metode pengambilan contoh Metode pengambilan contoh adalah empat pohon yang ada dibagian petak.

14

5.2.12.3 Metode pengamatan Untuk satu unit pengamatan, pengamatan dilaksanakan terhadap seluruh tanaman lada dalam kebun milik petani. Pengamatan dilakukan bukan dengan sistem sampel tetapi dengan sistem sensus untuk semua tanaman di kebun. Intensitas serangan dihitung dengan cara sebagai berikut: I=

a x 100% a+b

I = intensitas serangan (%) a = jumlah tanaman terserang BPB lada b = jumlah tanaman lada sehat Hal-hal yang diamati: - Terjadinya kelayuan pada daun dimulai dari daun pucuk di puncak tajuk, kemudian diikuti daun-daun dibawahnya. - Daun-daun layu tersebut akan berwarna hitam, kemudian gugur atau tetap menggantung. - Perubahan warna pada pangkal batang menjadi hitam, kulit batang kadang-kadang mudah terlepas dan tinggal jaringan pembuluh kayu berwarna coklat kehitaman. - Serangan patogen pada daun menyebabkan bercak pada ujung, tengah atau tepi daun. 5.2.12.4 Waktu pengamatan Pengamatan ada/tidaknya serangan penyakit BPB lada pada kebun petani dilaksanakan secara terus menerus dengan interval waktu sebulan sekali pada musim kemarau, dan 15 hari sekali pada musim penghujan. 5.2.13 Pengolahan data Pengolahan data dikerjakan sesuai dengan rancangan percobaan yang digunakan. Tingkat perbedaan dinyatakan pada taraf 5%.

15

5.2.14 Kriteria efikasi -

Efikasi APH yang diuji didasarkan pada pertumbuhan akar baru yang sehat pada tanaman lada setelah diaplikasi dengan jamur Trichoderma sp.

-

Bila kerusakan tanaman pada pengamatan pertama (sebelum aplikasi APH) tidak berbeda nyata antar petak perlakuan, tingkat efikasi APH dihitung dengan rumus Abbot: EI =

Ca − Ta x 100% Ca

EI =Keefektifan APH yang diuji (%) Ca= Persentase kerusakan tanaman pada petak kontrol setelah aplikasi APH Ta= Persentase kerusakan tanaman pada petak perlakuan setelah aplikasi APH -




Suatu formulasi APH dikatakan efektif pada sekurangkurangnya (1/2 n + 1) kali pengamatan (n = jumlah total pengamatan setelah aplikasi/infestasi), tingkat efikasi insektisida tersebut (EI). 5.2.15 Data penunjang 5.2.15.1 5.2.15.2 5.2.15.3 5.2.15.4

Iklim Kemiringan lahan Cara budidaya tanaman lada yang dilakukan petani Sejarah kebun

16

PENGUJIAN LAPANGAN EFIKASI AGENS PENGENDALI HAYATI (Sebutkan nama dagang) KANDUNGAN (JAMURTrichoderma sp.) TERHADAP PENYAKIT BUSUK PANGKAL BATANG (BPB) Ganoderma boninense PADA TANAMAN KELAPA SAWIT 1. LINGKUP PENGUJIAN Pengujian lapangan yang dimaksud dalam pedoman ini adalah semua percobaan pengujian yang pada prinsipnya dilakukan dalam kondisi lapangan. 2. LOKASI DAN WAKTU Lokasi dan waktu percobaan ditetapkan atas dasar cukup tersedianya sarana dengan memperhatikan faktor fisik dan biologi yang diperkirakan akan mempengaruhi tujuan percobaan antara lain kondisi tanah dan bibit yang akan digunakan sebagai bahan uji (sebutkan tempat dan waktu pelaksanaan). Pengujian dilakukan semi lapangan. 3. PELAKSANA Sebutkan nama institusi pelaksana pengujian yang telah ditunjuk atau disetujui oleh Menteri pertanian. 4. JUMLAH UNIT KEGIATAN Sebutkan jumlah unit kegiatan pengujian yang telah disetujui oleh Komisi Pestisida. 5. BAHAN DAN METODE 5.1.


17

5.1.3 Umur tanaman 8-10 bulan di polybag. 5.1.4 Jumlah tanaman per lubang tanam Jumlah tanaman : 1 tanaman per polybag 5.1.5 Pemeliharaan tanaman Pemeliharaan tanaman dilakukan sebaik-baiknya untuk mencapai tujuan percobaan efikasi APH. Apabila untuk pemeliharaan tersebut perlu dipergunakan bahan pengendali lain (pestisida kimia) harus dilakukan dengan hati-hati dan tidak bersamaan waktunya dengan APH yang diuji. 5.1.6 Pemupukan Pemupukan sesuai dengan rekomendasi untuk budidaya kelapa sawit 5.2.

METODE 5.2.1 Rancangan percobaan Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok (RAK) atau Rancangan Acak Lengkap (RAL) disesuaikan dengan situasi dan kondisi tempat uji. 5.2.2 Jumlah perlakuan dan ulangan Banyaknya perlakuan dan ulangan harus memenuhi persyaratan (p-1) (u-1) > 15 dan u > 3; p = jumlah perlakuan, u = jumlah ulangan. 5.2.3 Macam perlakuan yang diuji Untuk pengujian 1 (satu) formulasi APH, digunakan 4 (empat) taraf konsentrasi/dosis yaitu: A, ¾ A, ½ A dan ¼ A dan kontrol dengan taraf konsentrasi tertinggi diharapkan menjadi konsentrasi anjuran penggunaan formulasi APH tersebut (bila permohonan pendaftaran disetujui). 5.2.4 Pola tanam Pola tanam yang digunakan adalah monokultur

18

5.2.5 Jarak tanam Disesuaikan dengan keadaan setempat 5.2.6 Ukuran petak perlakuan Setiap petak perlakuan terdiri dari min 18 petak uji (4 blok dengan 5 perlakuan atau 3 blok dengan 6 perlakuan) 5.2.7 Jarak antar petak Jarak antar petak disesuaikan dengan keadaan setempat. 5.2.8 Tata letak perlakuan Pengaturan tata letak perlakuan dan kelompok diusahakan sedemikian rupa sehingga ada jarak yang jelas antar perlakuan 5.2.9 Cara dan alat aplikasi Disesuaikan dengan formulasi produk. 5.2.10 Waktu dan banyaknya aplikasi Disesuaikan dengan formulasi produk 5.2.11. Pengamatan 5.2.11.1. Pengamatan dilakukan pada seluruh tanaman 5.2.11.2. Metode pengamatan Pengamatan dilakukan terhadap pertumbuhan daun, kondisi pangkal batang tanaman dan pertumbuhan APH pada permukaan tanah 5.2.11.3 Waktu pengamatan Pengamatan dilakukan sebelum aplikasi dan setelah aplikasi. 5.2.12. Pengolahan data Pengolahan data dikerjakan sesuai dengan rancangan percobaan yang digunakan. Tingkat perbedaan dinyatakan pada taraf 5%. 19

5.2.13. Kriteria efikasi -

Jumlah tanaman terserang per satuan luas (dibagi jumlah tanaman yang diamati). Bila kerusakan tanaman pada pengamatan pertama (sebelum aplikasi APH) tidak berbeda nyata antar petak perlakuan, tingkat efikasi APH dihitung dengan rumus Abbot: EI =

Ca − Ta x 100% Ca





Suatu formulasi APH dikatakan efektif pada sekurangkurangnya (1/2 n + 1) kali pengamatan (n = jumlah total pengamatan setelah aplikasi/infestasi), tingkat efikasi insektisida tersebut (EI).

20

PENGUJIAN LAPANGAN EFIKASI AGENS PENGENDALI HAYATI (Sebutkan nama dagang) KANDUNGAN (JAMURTrichoderma sp.) TERHADAP PENYAKIT JAMUR AKAR PUTIH (JAP) Rigidoporus lignosus PADA TANAMAN KARET 1. LINGKUP PENGUJIAN Pengujian lapangan yang dimaksud dalam pedoman ini adalah semua percobaan pengujian yang pada prinsipnya dilakukan dalam kondisi lapangan. 2. LOKASI DAN WAKTU Lokasi dan waktu percobaan ditetapkan atas dasar cukup tersedianya sarana dengan memperhatikan faktor fisik dan biologi yang diperkirakan akan mempengaruhi tujuan percobaan antara lain pertanaman karet dengan tingkat serangan Jamur Akar Putih diatas 5% (sebutkan tempat dan waktu pelaksanaan). Lokasi uji adalah semi lapangan 3. PELAKSANA Sebutkan nama institusi pelaksana pengujian yang telah ditunjuk atau disetujui oleh Menteri pertanian. 4. JUMLAH UNIT KEGIATAN Sebutkan jumlah unit kegiatan pengujian yang telah disetujui oleh Komisi Pestisida. 5. BAHAN DAN METODE 5.1.

BAHAN 5.1.1 Contoh APH yang diuji Contoh APH yang diuji harus diuji mutu kadar bahan aktifnya oleh laboratorium yang ditunjuk oleh Menteri Pertanian, bersegel dan berlabel Direktorat Jenderal Prasarana dan Sarana Pertanian. 5.1.2 Varietas Varietas tanaman yang digunakan adalah varietas yang sering digunakan oleh petani setempat atau terdapat di lokasi percobaan (nama varietas disebutkan) dan cukup rentan terhadap serangan OPT sasaran.

21

5.1.3 Umur tanaman Tanaman karet yang digunakan adalah tanaman yang berumur 8-10 bulan di polybag. 5.1.4 Jumlah tanaman per lubang tanam Jumlah tanaman: 1 tanaman per lubang tanam 5.1.5 Pemeliharaan tanaman Pemeliharaan tanaman dilakukan sebaik-baiknya untuk mencapai tujuan percobaan efikasi APH. Apabila untuk pemeliharaan tersebut perlu dipergunakan bahan pengendali lain (pestisida kimia) harus dilakukan dengan hati-hati dan tidak bersamaan waktunya dengan APH yang diuji. 5.1.6 Pemupukan Pemupukan sesuai dengan rekomendasi untuk budi daya karet. 5.2.

METODE 5.2.1 Rancangan percobaan Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok (RAK) atau Rancangan Acak Lengkap (RAL) disesuaikan dengan situasi dan kondisi tempat uji. 5.2.2 Jumlah perlakuan dan ulangan Banyaknya perlakuan dan ulangan harus memenuhi persyaratan (p-1) (u-1) > 15 dan u > 3; p = jumlah perlakuan, u = jumlah ulangan. 5.2.3 Macam perlakuan yang diuji Untuk pengujian 1 (satu) formulasi APH, digunakan 4 (empat) taraf konsentrasi/dosis yaitu: A, ¾ A, ½ A dan ¼ A dan kontrol dengan taraf konsentrasi tertinggi diharapkan menjadi konsentrasi anjuran penggunaan formulasi APH tersebut (bila permohonan pendaftaran disetujui). 5.2.4 Pola tanam Pola tanam yang digunakan adalah monokultur

22

5.2.5 Jarak tanam Disesuaikan dengan keadaan setempat 5.2.6 Ukuran petak perlakuan Setiap petak perlakuan terdiri dari 16 pohon (empat baris dan setiap baris empat pohon). 5.2.7 Jarak antar petak Jarak antar petak disesuaikan dengan keadaan setempat. 5.2.8 Tata letak perlakuan Pengaturan tata letak perlakuan dan kelompok diusahakan sedemikian rupa sehingga penyebaran JAP sasaran merata. 5.2.9 Cara dan alat aplikasi Disesuaikan dengan formulasi produk. 5.2.10 Volume Pertanaman sesuai dengan dosis dan volume yang tertera pada produk APH . 5.2.11 Waktu dan banyaknya aplikasi Tergantung produk yang diuji 5.2.12 Pengamatan 5.2.12.1 Jumlah contoh Semua tanaman uji 5.2.12.2 Metode pengambilan contoh Semua tanaman uji diamati. 5.2.12.3 Metode pengamatan Intensitas serangan penyakit JAP diamati di lapangan pada tanaman contoh dan dihitung dengan rumus:

23

I=

a x 100% a+b

I = intensitas serangan (%) a = jumlah tanaman yang terserang b = jumlah tanaman sehat 5.2.12.4 Waktu pengamatan a.

Pengamatan dilakukan 2 minggu sebelum aplikasi, satu minggu setelah aplikasi (untuk mengetahui perkembangan Trichoderma sp. di sekitar tanaman sakit) dan 2 bulan setelah aplikasi (untuk melihat kesembuhan tanaman).

5.2.13 Pengolahan data Pengolahan data dikerjakan sesuai dengan rancangan percobaan yang digunakan. Tingkat perbedaan dinyatakan pada taraf 5%. 5.2.14 Kriteria efikasi -

-

Tingkat signifikan perlakuan terhadap kontrol, jumlah tanaman terserang per satuan luas dibagi jumlah tanaman yang diamati. Bila kerusakan tanaman pada pengamatan pertama (sebelum aplikasi APH) tidak berbeda nyata antar petak perlakuan, tingkat efikasi APH dihitung dengan rumus Abbot: EI =

Ca − Ta x 100% Ca


Bila kerusakan tanaman pada pengamatan pertama berbeda nyata antar perlakukan, tingkat efikasi insektisida dihitung dengan rumus Henderson dan Tilton: EI = 1 −

Ta Cb x X 100% Ca Tb 24

EI = Ca = Cb = Ta = Tb =


Suatu formulasi APH dikatakan efektif pada sekurangkurangnya (1/2 n + 1) kali pengamatan (n = jumlah total pengamatan setelah aplikasi/infestasi), tingkat efikasi insektisida tersebut (EI). 5.2.15 Data penunjang 5.2.15.1 Serangan OPT lain 5.2.15.2 Produksi lateks pada saat penyadapan. 5.2.15.3 Data kesembuhan tanaman (yang ditandai dengan): Hilangnya rhizomorfa JAP yang menempel pada kulit akar, pulihnya luka pada akar, munculnya akar halus di sekitar leher akar atau di ujung akar yang semula membusuk.

25

PENGUJIAN LAPANGAN EFIKASI AGENS PENGENDALI HAYATI (Sebutkan nama dagang) KANDUNGAN (JAMURTrichoderma sp.) TERHADAP PENYAKIT JAMUR AKAR PUTIH (JAP) Rigidoporus lignosus PADA TANAMAN JAMBU METE 1. LINGKUP PENGUJIAN Pengujian lapangan yang dimaksud dalam pedoman ini adalah semua percobaan pengujian yang pada prinsipnya dilakukan dalam kondisi lapangan. 2. LOKASI DAN WAKTU Lokasi dan waktu percobaan ditetapkan atas dasar cukup tersedianya sarana dengan memperhatikan faktor fisik dan biologi yang diperkirakan akan mempengaruhi tujuan percobaan antara lain pertanaman jambu mete dengan tingkat serangan Jamur Akar Putih diatas 5% (sebutkan tempat dan waktu pelaksanaan). Lokasi uji adalah semi lapangan 3. PELAKSANA Sebutkan nama institusi pelaksana pengujian yang telah ditunjuk atau disetujui oleh Menteri Pertanian. 4. JUMLAH UNIT KEGIATAN Sebutkan jumlah unit kegiatan pengujian yang telah disetujui oleh Komisi Pestisida. 5. BAHAN DAN METODE 5.1.

BAHAN 5.1.1 Contoh APH yang diuji Contoh APH yang diuji harus diuji mutu kadar bahan aktifnya oleh laboratorium yang ditunjuk oleh Menteri Pertanian, bersegel dan berlabel Direktorat Jenderal Prasarana dan Sarana Pertanian. 5.1.2 Varietas Varietas tanaman yang digunakan adalah varietas yang sering digunakan oleh petani setempat atau terdapat di lokasi percobaan (nama varietas disebutkan) dan cukup rentan terhadap serangan OPT sasaran. 26

5.1.3 Umur tanaman Tanaman jambu mete yang digunakan adalah tanaman yang berumur 8-10 bulan di polybag. 5.1.4 Jumlah tanaman per lubang tanam Jumlah tanaman : 1 tanaman per lubang tanam 5.1.5 Pemeliharaan tanaman Pemeliharaan tanaman dilakukan sebaik-baiknya untuk mencapai tujuan percobaan efikasi APH. Apabila untuk pemeliharaan tersebut perlu dipergunakan bahan pengendali lain (pestisida kimia) harus dilakukan dengan hati-hati dan tidak bersamaan waktunya dengan APH yang diuji. 5.1.6 Pemupukan Pemupukan sesuai dengan rekomendasi untuk budi daya jambu mete. 5.2.

METODE 5.2.1 Rancangan percobaan Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok (RAK) atau Rancangan Acak Lengkap (RAL) disesuaikan dengan situasi dan kondisi tempat uji. 5.2.2 Jumlah perlakuan dan ulangan Banyaknya perlakuan dan ulangan harus memenuhi persyaratan (p-1) (u-1) > 15 dan u > 3; p = jumlah perlakuan, u = jumlah ulangan. 5.2.3 Macam perlakuan yang diuji Untuk pengujian 1 (satu) formulasi APH, digunakan 4 (empat) taraf konsentrasi/dosis yaitu: A, ¾ A, ½ A dan ¼ A dan kontrol dengan taraf konsentrasi tertinggi diharapkan menjadi konsentrasi anjuran penggunaan formulasi APH tersebut (bila permohonan pendaftaran disetujui).

27

5.2.4 Pola tanam Pola tanam yang digunakan adalah monokultur 5.2.5 Jarak tanam Disesuaikan dengan keadaan setempat 5.2.6 Ukuran petak perlakuan Setiap petak perlakuan terdiri dari 16 pohon (empat baris dan setiap baris empat pohon). 5.2.7 Jarak antar petak Jarak antar petak disesuaikan dengan keadaan setempat. 5.2.8 Tata letak perlakuan Pengaturan tata letak perlakuan dan kelompok diusahakan sedemikian rupa sehingga penyebaran JAP sasaran merata. 5.2.9 Cara dan alat aplikasi Disesuaikan dengan formulasi produk. 5.2.10 Volume Pertanaman (sesuai dosis yang tertera pada produk APH) . 5.2.11 Waktu dan banyaknya aplikasi Tergantung produk yang diuji 5.2.12 Pengamatan 5.2.12.1 Jumlah contoh Semua tanaman uji 5.2.12.2 Metode pengambilan contoh Semua tanaman uji diamati. 5.2.12.3 Metode pengamatan

28

Intensitas serangan penyakit JAP diamati di lapangan pada tanaman contoh dan dihitung dengan rumus:

I=

a x 100% a+b

I = intensitas serangan (%) a = jumlah tanaman yang terserang b = jumlah tanaman sehat 5.2.12.4 Waktu pengamatan a.

Pengamatan dilakukan 2 minggu sebelum aplikasi, satu minggu setelah aplikasi (untuk mengetahui perkembangan T.koningii di sekitar tanaman sakit) dan 2 bulan setelah aplikasi (untuk melihat kesembuhan tanaman).


-

Tingkat signifikan perlakuan terhadap kontrol, jumlah tanaman terserang per satuan luas dibagi jumlah tanaman yang diamati. Bila kerusakan tanaman pada pengamatan pertama (sebelum aplikasi APH) tidak berbeda nyata antar petak perlakuan, tingkat efikasi APH dihitung dengan rumus Abbot: EI =

Ca − Ta x 100% Ca


Bila kerusakan tanaman pada pengamatan pertama berbeda nyata antar perlakukan, tingkat efikasi insektisida dihitung dengan rumus Henderson dan Tilton: 29

EI = 1 − EI = Ca = Cb = Ta = Tb =



Suatu formulasi APH dikatakan efektif pada sekurangkurangnya (1/2 n + 1) kali pengamatan (n = jumlah total pengamatan setelah aplikasi/infestasi), tingkat efikasi insektisida tersebut (EI). 5.2.15 Data penunjang 5.2.15.1 Serangan OPT lain 5.2.15.2 Produksi lateks pada saat penyadapan. 5.2.15.3 Data kesembuhan tanaman (yang ditandai dengan): Hilangnya rhizomorfa JAP yang menempel pada kulit akar, pulihnya luka pada akar, munculnya akar halus di sekitar leher akar atau di ujung akar yang semula membusuk.

30

PENGUJIAN LAPANGAN EFIKASI AGENS PENGENDALI HAYATI (Sebutkan nama dagang) KANDUNGAN (JAMUR Metarhizium anisopliae.) TERHADAP HAMA KUMBANG NYIUR Oryctes rhinoceros PADA TANAMAN KELAPA 1. LINGKUP PENGUJIAN Pengujian lapangan yang dimaksud dalam pedoman ini adalah semua percobaan pengujian yang pada prinsipnya dilakukan dalam kondisi lapangan. 2. LOKASI DAN WAKTU Lokasi dan waktu percobaan ditetapkan atas dasar cukup tersedianya sarana dengan memperhatikan faktor fisik dan biologi yang diperkirakan akan mempengaruhi tujuan percobaan antara lain pertanaman kelapa dengan tingkat serangan kumbang janur kelapa diatas 50% (sebutkan tempat dan waktu pelaksanaan). Pengujian dilakukan semi lapang. 3. PELAKSANA Sebutkan nama institusi pelaksana pengujian yang telah ditunjuk atau disetujui oleh Menteri pertanian. 4. JUMLAH UNIT KEGIATAN Sebutkan jumlah unit kegiatan pengujian yang telah disetujui oleh Komisi Pestisida. 5. BAHAN DAN METODE 5.1.

BAHAN 5.1.1 Contoh APH yang diuji Contoh APH yang diuji harus telah diuji mutu kadar bahan aktifnya oleh laboratorium yang ditunjuk oleh Menteri Pertanian, bersegel dan berlabel Direktorat Jenderal Prasarana dan Sarana Pertanian. 5.1.2 Varietas Varietas tanaman yang digunakan adalah varietas yang sering digunakan oleh petani setempat atau terdapat di lokasi percobaan (nama varietas disebutkan) dan cukup rentan terhadap serangan hama sasaran. 31

5.1.3 Umur tanaman Pengujian dilakukan pada larva Oryctes rhinoceros 5.1.4 Jumlah bibit per lubang tanam 5.1.5 Pemeliharaan tanaman 5.1.6 Pemupukan 5.2.

METODE 5.2.1 Rancangan percobaan Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap. 5.2.2 Jumlah perlakuan dan ulangan Banyaknya perlakuan dan ulangan harus memenuhi persyaratan (p-1) (u-1) > 15 dan u > 3; p = jumlah perlakuan, u = jumlah ulangan. 5.2.3 Macam perlakuan yang diuji Untuk pengujian 1 (satu) formulasi APH, digunakan 4 (empat) taraf konsentrasi/dosis yaitu: A, ¾ A, ½ A dan ¼ A dan kontrol dengan taraf konsentrasi tertinggi diharapkan menjadi konsentrasi anjuran penggunaan formulasi APH tersebut (bila permohonan pendaftaran disetujui). 5.2.4 Pola tanam 5.2.5 Jarak tanam 5.2.6 Ukuran petak perlakuan 32

5.2.7 Jarak antar petak 5.2.8 Tata letak perlakuan Pengaturan tata letak perlakuan dan kelompok diusahakan sedemikian rupa agar pada awal percobaan penyebaran hama sasaran merata. 5.2.9 Cara dan alat aplikasi Disesuaikan dengan formulasi produk 5.2.10 Waktu dan banyaknya aplikasi Tergantung produk yang diuji 5.2.11 Volume dan dosis Disesuaikan dengan volume/dosis yang tertera pada produk 5.2.12 Pengamatan 5.2.12.1 Jumlah contoh Seluruh larva yang diberi perlakuan 5.2.12.2 Metode pengamatan Menghitung jumlah larva yang mati 5.2.12.3 Waktu pengamatan Satu minggu setelah aplikasi. 5.2.13 Pengolahan data Pengolahan data dikerjakan sesuai dengan rancangan percobaan yang digunakan. Tingkat perbedaan dinyatakan pada taraf 5%.

5.2.14 Kriteria efikasi 33

Efikasi Metharizium anisopliaeyang diuji didasarkan pada jumlah larva yang mati. Jumlah larva yang mati pada perlakuan APH dibandingkan dengan petak kontrol.

34

PENGUJIAN LAPANGAN EFIKASI AGENS PENGENDALI HAYATI (Sebutkan nama dagang) KANDUNGAN (JAMURMetarhizium anisopliae.) TERHADAP HAMA KUMBANG JANUR Brontispa longissima PADA TANAMAN KELAPA 1. LINGKUP PENGUJIAN Pengujian lapangan yang dimaksud dalam pedoman ini adalah semua percobaan pengujian yang pada prinsipnya dilakukan dalam kondisi lapangan. 2. LOKASI DAN WAKTU Lokasi dan waktu percobaan ditetapkan atas dasar cukup tersedianya sarana dengan memperhatikan faktor fisik dan biologi yang diperkirakan akan mempengaruhi tujuan percobaan antara lain pertanaman kelapa dengan tingkat serangan kumbang janur kelapa diatas 50% (sebutkan tempat dan waktu pelaksanaan). Pengujian dilakukan semi lapangan. 3. PELAKSANA Sebutkan nama institusi pelaksana pengujian yang telah ditunjuk atau disetujui oleh Menteri Pertanian. 4. JUMLAH UNIT KEGIATAN Sebutkan jumlah unit kegiatan pengujian yang telah disetujui oleh Komisi Pestisida. 5. BAHAN DAN METODE 5.1.


5.1.3 Umur bibit Tanaman kelapa yang digunakan adalah tanaman kelapa yang berumur 2 tahun. 5.1.4 Jumlah bibit per lubang tanam Jumlah bibit: 1 bibit per lubang tanam 5.1.5 Pemeliharaan tanaman Pemeliharaan tanaman dilakukan sebaik-baiknya untuk mencapai tujuan percobaan efikasi APH. Apabila untuk pemeliharaan tersebut perlu dipergunakan bahan pengendali lain (pestisida kimia) harus dilakukan dengan hati-hati dan tidak bersamaan waktunya dengan APH yang diuji. 5.1.6 Pemupukan Pemupukan sesuai dengan rekomendasi untuk budi daya kelapa. 5.2.

METODE 5.2.1 Rancangan percobaan Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok (RAK) atau Rancangan Acak Lengkap (RAL) sesuai situasi dan kondisi tempat uji. 5.2.2 Jumlah perlakuan dan ulangan Banyaknya perlakuan dan ulangan harus memenuhi persyaratan (p-1) (u-1) > 15 dan u > 3; p = jumlah perlakuan, u = jumlah ulangan. 5.2.3 Macam perlakuan yang diuji Untuk pengujian 1 (satu) formulasi APH, digunakan 4 (empat) taraf konsentrasi/dosis yaitu: A, ¾ A, ½ A dan ¼ A dan control dengan taraf konsentrasi tertinggi diharapkan menjadi konsentrasi anjuran penggunaan formulasi APH tersebut (bila permohonan pendaftaran disetujui). 5.2.4 Pola tanam Pola tanam yang digunakan adalah monokultur

36

5.2.5 Jarak tanam Jarak tanam : 6 x 6 m 5.2.6 Ukuran petak perlakuan Setiap plot percobaan terdiri atas 6 x 6 pohon (36 pohon) yang diperlakukan dan diambil pohon contoh sebanyak 4 x 4 pohon (16 pohon) untuk diamati. Pada setiap plot pohon contoh dipilih 5 helai janur yang masih bebas serangan hamaBrontispa longissima. 5.2.7 Jarak antar petak Jarak antar petak adalah 5 larik pohon. 5.2.8 Tata letak perlakuan Pengaturan tata letak perlakuan dan kelompok diusahakan sedemikian ruma sehingga penyebaran hama sasaran merata. 5.2.9 Cara dan alat aplikasi Disesuaikan dengan formulasi produk 5.2.10 Volume penyemprotan Per tanaman sesuai volume dan dosis yang tertera pada produk APH. 5.2.11 Waktu dan banyaknya aplikasi Tergantung produk yang diuji 5.2.12 Pengamatan 5.2.12.1 Jumlah contoh Pengamatan dilakukan terhadap intensitas serangan Brontispayang dinyatakan dalam persen janur terserang Dengan cara mengambil 5 helai janur untuk dilihat apakah janur tersebut membuka dengan sempurna atau mengkerut dan berwarna cokelat.

37

5.2.12.2 Metode pengambilan contoh Metode pengambilan contoh secara sistematik 5.2.12.3 Metode pengamatan Intensitas serangan hamaBrontispa diamati di lapangan pada tanaman contoh dan dihitung dengan rumus: I=

a x 100% a+b

I = intensitas serangan (%) a = jumlah janur yang terserang b = jumlah janur sehat 5.2.12.4 Waktu pengamatan Pengamatan pendahuluan intensitas serangan dilakukan pada waktu sebelum aplikasi pertama 5.2.13 Pengolahan data Pengolahan data dikerjakan sesuai dengan rancangan percobaan yang digunakan. Tingkat perbedaan dinyatakan pada taraf 5%. 5.2.14 Kriteria efikasi -

Efikasi dinyatakan dengan banyaknya larva Brontispa yang mati. Bila kerusakan tanaman pada pengamatan pertama (sebelum aplikasi APH) tidak berbeda nyata antar petak perlakuan, tingkat efikasi APH dihitung dengan rumus Abbot: EI =

Ca − Ta x 100% Ca

EI =Keefektifan APH yang diuji (%) Ca= Persentase kerusakan tanaman pada petak control setelah aplikasi APH Ta= Persentase kerusakan tanaman pada petak perlakuan setelah aplikasi APH

38

-




Suatu formulasi APH dikatakan efektif pada sekurangkurangnya (1/2 n + 1) kali pengamatan (n = jumlah total pengamatan setelah aplikasi/infestasi), tingkat efikasi insektisida tersebut (EI). 5.2.15 Data penunjang 5.2.15.1 Serangan OPT lain 5.2.15.2 Produksi tanaman

39

PENGUJIAN LAPANGAN EFIKASI AGENS PENGENDALI HAYATI (Sebutkan nama dagang) KANDUNGAN (JAMUR Metarhizium anisopliae) TERHADAP URET Lepidiota stigma PADA TANAMAN TEBU 1. LINGKUP PENGUJIAN Pengujian lapangan yang dimaksud dalam pedoman ini adalah semua percobaan pengujian yang pada prinsipnya dilakukan dalam kondisi lapangan 2. LOKASI DAN WAKTU Lokasi dan waktu percobaan ditetapkan atas dasar cukup tersedianya sarana dengan memperhatikan faktor fisik dan biologi yang diperkirakan akan mempengaruhi tujuan percobaan antara lain pertanaman kelapa dengan tingkat serangan kumbang janur kelapa diatas 50% (sebutkan tempat dan waktu pelaksanaan). Pengujian dilakukan semi lapangan. 3. PELAKSANA Sebutkan nama institusi pelaksana pengujian yang telah ditunjuk atau disetujui oleh Menteri pertanian. 4. JUMLAH UNIT KEGIATAN Sebutkan jumlah unit kegiatan pengujian yang telah disetujui oleh Komisi Pestisida. 5. BAHAN DAN METODE 5.1.


5.1.3 Pemeliharaan tanaman Pemeliharaan tanaman dilakukan sebaik-baiknya untuk mencapai tujuan percobaan efikasi APH. Apabila untuk pemeliharaan tersebut perlu dipergunakan bahan pengendali lain (pestisida kimia) harus dilakukan dengan hati-hati dan tidak bersamaan waktunya dengan APH yang diuji. 5.1.4 Pemupukan Pemupukan sesuai dengan rekomendasi untuk budi daya tebu. 5.2.

METODE 5.2.1 Rancangan percobaan Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok (RAK) atau Rancangan Acak Lengkap (RAL). 5.2.2 Jumlah perlakuan dan ulangan Banyaknya perlakuan dan ulangan harus memenuhi persyaratan (p-1) (u-1) > 15 dan u > 3; p = jumlah perlakuan, u = jumlah ulangan. 5.2.3 Macam perlakuan yang diuji Untuk pengujian 1 (satu) formulasi APH, digunakan 4 (empat) taraf konsentrasi/dosis yaitu: A, ¾ A, ½ A dan ¼ A dan kontrol dengan taraf konsentrasi tertinggi diharapkan menjadi konsentrasi anjuran penggunaan formulasi APH tersebut (bila permohonan pendaftaran disetujui). 5.2.4 Pola tanam Pola tanam yang digunakan adalah monokultur 5.2.5 Jarak tanam Jarak tanam : 1,25 m 5.2.6 Ukuran petak perlakuan Terdiri dari tanaman tebu 5.2.7 Jarak antar petak Jarak antar petak 2 meter. 41

5.2.8 Tata letak perlakuan Pengaturan tata letak perlakuan dan kelompok diusahakan sedemikian rupa agar pada awal percobaan penyebaran hama sasaran merata. 5.2.9 Cara dan alat aplikasi Cara aplikasi Metharizium sp. dan alat yang digunakan disesuaikan dengan sifat, cara kerja dan bentuk formulasi Metharizium yang diuji. 5.2.10 Waktu dan banyaknya aplikasi Tergantung produk yang diuji 5.2.11 Volume Penyemprotan Per tanaman sesuai dengan volume dan dosis yang tertera pada produk. 5.2.12 Pengamatan 5.2.12.1 Jumlah contoh Seluruh tanaman, kecuali 2 baris tanaman pinggir 5.2.12.2 Metode pengamatan Menghitung jumlah tanaman yang mati dan yag sehat pada petak perlakuan, kecuali 2 baris tanaman pinggir dengan menggunakan rumus : I = a x 100 % a+b Keterangan : I = tingkat kerusakan tanaman a = Jumlah tanaman contoh mati b = jumlah tanaman contoh sehat 5.2.12.3 Waktu pengamatan Pengamatan dilakukan tiga kali : a. Pengamatan pertama dilakukan 2 minggu setelahtanam. b. Pengamatan kedua dilakukan 4 minggu setelah tanam. 42

c.

Pengamatan ketiga dilakukan 6 minggu setelah tanam.


Efikasi Metharizium anisopliaeyang diuji didasarkan pada jumlah larva yang mati.

-

Bila kerusakan tanaman pada pengamatan pertama (sebelum aplikasi APH) tidak berbeda nyata antar petak perlakuan, tingkat efikasi APH dihitung dengan rumus Abbot: EI =

Ca − Ta x 100% Ca





Suatu formulasi APH dikatakan efektif pada sekurangkurangnya (1/2 n + 1) kali pengamatan (n = jumlah total pengamatan setelah aplikasi/infestasi), tingkat efikasi insektisida tersebut (EI). 5.2.15 Data penunjang Produksi tebu 43

PENGUJIAN LAPANGAN EFIKASI AGENS PENGENDALI HAYATI (Sebutkan nama dagang) KANDUNGAN (JAMUR Beauveria bassiana) TERHADAP HAMA PENGGEREK BUAH KOPI (PBKo) Hypothenemus hampei PADA TANAMAN KOPI 1. LINGKUP PENGUJIAN Pengujian lapangan yang dimaksud dalam pedoman ini adalah semua percobaan pengujian yang pada prinsipnya dilakukan dalam kondisi lapangan. 2. LOKASI DAN WAKTU Lokasi dan waktu percobaan ditetapkan atas dasar cukup tersedianya sarana dengan memperhatikan faktor fisik dan biologi yang diperkirakan akan mempengaruhi tujuan percobaan antara lain pertanaman kopi dengan tingkat serangan penggerek buah kopi diatas 10% (sebutkan tempat dan waktu pelaksanaan). 3. PELAKSANA Sebutkan nama institusi pelaksana pengujian yang telah ditunjuk atau disetujui oleh Menteri Pertanian. 4. JUMLAH UNIT KEGIATAN Sebutkan jumlah unit kegiatan pengujian yang telah disetujui oleh Komisi Pestisida. 5. BAHAN DAN METODE 5.1.


44

5.1.3 Umur tanaman Tanaman kopi yang digunakan adalah tanaman yang sudah menghasilkan. 5.1.4 Jumlah tanaman per lubang tanam Jumlah tanaman: 1 tanaman per lubang tanam. 5.1.5 Pemeliharaan tanaman Pemeliharaan tanaman dilakukan sebaik-baiknya untuk mencapai tujuan percobaan efikasi APH. Apabila untuk pemeliharaan tersebut perlu dipergunakan bahan pengendali lain (pestisida kimia) harus dilakukan dengan hati-hati dan tidak bersamaan waktunya dengan APH yang diuji. 5.1.6 Pemupukan Pemupukan sesuai dengan rekomendasi untuk budidaya kopi. 5.2.

METODE 5.2.1 Rancangan percobaan Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok. 5.2.2 Jumlah perlakuan dan ulangan Banyaknya perlakuan dan ulangan harus memenuhi persyaratan (p-1) (u-1) > 15 dan u > 3; p = jumlah perlakuan, u = jumlah ulangan. 5.2.3 Macam perlakuan yang diuji Untuk pengujian 1 (satu) formulasi APH, digunakan 4 (empat) taraf konsentrasi/dosis yaitu: A, ¾ A, ½ A dan ¼ A dan kontrol dengan taraf konsentrasi tertinggi diharapkan menjadi konsentrasi anjuran penggunaan formulasi APH tersebut (bila permohonan pendaftaran disetujui). 5.2.4 Pola tanam Pola tanam yang digunakan adalah monokultur 5.2.5 Jarak tanam Jarak tanam : 4 x 4 m 45

5.2.6 Ukuran petak perlakuan Setiap plot percobaan terdiri atas 6 x 6 pohon (36 pohon) yang diperlakukan dan diambil pohon contoh sebanyak 4 x 4 pohon (16 pohon) untuk diamati. Pada setiap plot pohon contoh dipilih 100 buah kopi yang diperkirakan masih bebas serangan hamaPBKo. 5.2.7 Jarak antar petak Jarak antar petak adalah 5 larik pohon. 5.2.8 Tata letak perlakuan Pengaturan tata letak perlakuan dan kelompok diusahakan sedemikian rupa sehingga penyebaran hama sasaran merata. 5.2.9 Cara dan alat aplikasi Disesuaikan dengan formulasi produk. 5.2.10 Volume penyemprotan Disesuaikan dengan formulasi produk. 5.2.11 Waktu dan banyaknya aplikasi 5.2.11.1 Aplikasi pertama Aplikasi dilakukan pada saat buah masak susu. 5.2.11.2 Interval aplikasi Aplikasi dilakukan dengan interval 10 hari sekali. 5.2.11.3 Banyaknya aplikasi Banyaknya aplikasi dilakukan minimal sebanyak 5 (lima) kali. 5.2.12 Pengamatan 5.2.12.1 Jumlah contoh

46

Pengamatan dilakukan terhadap intensitas serangan PBKo yang dinyatakan dalam persen buah terserang pada: - Setiap putaran panen sebelum dan sesudah aplikasi APH selama 4 bulan. - Pengamatan dilakukan terhadap 20 pohon contoh. Dari setiap pohon diambil 5 ranting, dari setiap ranting diambil 25 biji kopi. 5.2.12.2 Metode pengambilan contoh Metode pengambilan contoh secara sistematik 5.2.12.3 Metode pengamatan Intensitas serangan hama PBKo diamati di lapangan pada tanaman contoh dan dihitung dengan rumus: I=

a x 100% a+b

I = intensitas serangan (%) a = jumlah buah yang terserang b = jumlah buah sehat 5.2.12.4 Waktu pengamatan Pengamatan intensitas serangan dilakukan pada waktu sebelum aplikasi pertama 5.2.13 Pengolahan data Pengolahan data dikerjakan sesuai dengan rancangan percobaan yang digunakan. Tingkat perbedaan dinyatakan pada taraf 5%. 5.2.14 Kriteria efikasi -

Kriteria efikasi dinilai berdasarkan jumlah buah yang terserang. Bila kerusakan tanaman pada pengamatan pertama (sebelum aplikasi APH) tidak berbeda nyata antar petak perlakuan, tingkat efikasi APH dihitung dengan rumus Abbot: EI =

Ca − Ta x 100% Ca 47






48

PENGUJIAN LAPANGAN EFIKASI AGENS PENGENDALI HAYATI (Sebutkan nama dagang) KANDUNGAN (JAMUR Beauveria bassiana.) TERHADAP HAMA PENGGEREK BUAH KAKAO (PBK) Conopomorpha cramerella PADA TANAMAN KAKAO 1. LINGKUP PENGUJIAN Pengujian lapangan yang dimaksud dalam pedoman ini adalah semua percobaan pengujian yang pada prinsipnya dilakukan dalam kondisi lapangan. 2. LOKASI DAN WAKTU Lokasi dan waktu percobaan ditetapkan atas dasar cukup tersedianya sarana dengan memperhatikan faktor fisik dan biologi yang diperkirakan akan mempengaruhi tujuan percobaan antara lain pertanaman kakao dengan tingkat serangan penggerek buah kakao diatas 10% (sebutkan tempat dan waktu pelaksanaan). Pengujian dilakukan di lapangan. 3. PELAKSANA Sebutkan nama institusi pelaksana pengujian yang telah ditunjuk atau disetujui oleh Menteri Pertanian. 4. JUMLAH UNIT KEGIATAN Sebutkan jumlah unit kegiatan pengujian yang telah disetujui oleh Komisi Pestisida. 5. BAHAN DAN METODE 5.1.


49

5.1.3 Umur tanaman Tanaman kakao yang digunakan adalah tanaman yang sudah menghasilkan. 5.1.4 Jumlah tanaman per lubangtanam Jumlah tanaman : 1 tanaman per lubang tanam 5.1.5 Pemeliharaan tanaman Pemeliharaan tanaman dilakukan sebaik-baiknya untuk mencapai tujuan percobaan efikasi APH. Apabila untuk pemeliharaan tersebut perlu dipergunakan bahan pengendali lain (pestisida kimia) harus dilakukan dengan hati-hati dan tidak bersamaan waktunya dengan APH yang diuji. 5.1.6 Pemupukan Pemupukan sesuai dengan rekomendasi untuk budidaya kakao. 5.2.

METODE 5.2.1 Rancangan percobaan Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok. 5.2.2 Jumlah perlakuan dan ulangan Banyaknya perlakuan dan ulangan harus memenuhi persyaratan (p-1) (u-1) > 15 dan u > 3; p = jumlah perlakuan, u = jumlah ulangan. 5.2.3 Macam perlakuan yang diuji Untuk pengujian 1 (satu) formulasi APH, digunakan 4 (empat) taraf konsentrasi/dosis yaitu : A, ¾ A, ½ A dan ¼ A dan control dengan taraf konsentrasi tertinggi diharapkan menjadi konsentrasi anjuran penggunaan formulasi APH tersebut (bila permohonan pendaftaran disetujui). 5.2.4 Pola tanam Pola tanam yang digunakan adalah monokultur 5.2.5 Jarak tanam Jarak tanam : 4 x 4 m 50

5.2.6 Ukuran petak perlakuan Setiap plot percobaan terdiri atas 6 x 6 pohon (36 pohon) yang diperlakukan dan diambil pohon contoh sebanyak 4 x 4 pohon (16 pohon) untuk diamati. Pada setiap plot pohon contoh dipilih 100 buah kakao berukuran panjang 8-10 cm yang diperkirakan masih bebas serangan hama penggerek buah kakao. 5.2.7 Jarak antar petak Jarak antar petak adalah 5 larik pohon. 5.2.8 Tata letak perlakuan Pengaturan tata letak perlakuan dan kelompok diusahakan sedemikian rupa sehingga penyebaran hama sasaran merata. 5.2.9 Cara dan alat aplikasi Disesuaikan dengan formulasi produk. 5.2.10 Volume penyemprotan Per tanaman sesuai dengan volume dan dosis yang tertera pada produk APH. 5.2.11 Waktu dan banyaknya aplikasi 5.2.11.1 Aplikasi pertama Aplikasi dilakukan pada saat buah kakao berukuran 810 cm. 5.2.11.2 Interval aplikasi Aplikasi dilakukan dengan interval 10 hari sekali. 5.2.11.3 Banyaknya aplikasi Banyaknya aplikasi dilakukan minimal sebanyak 5 (lima) kali. 5.2.12 Pengamatan 5.2.12.1 Jumlah contoh

51

Pengamatan dilakukan terhadap intensitas serangan PBK yang dinyatakan dalam persen buah terserang pada: - Setiap putaran panen sebelum dan sesudah aplikasi APH selama 4 bulan. - 100 buah contoh setelah dipanen. 5.2.12.2 Metode pengambilan contoh Metode pengambilan contoh secara sistematik 5.2.12.3 Metode pengamatan Intensitas serangan hama PBK diamati di lapangan pada tanaman contoh dan dihitung dengan rumus: I=

a x 100% a+b

I = intensitas serangan (%) a = jumlah buah yang terserang b = jumlah buah sehat 5.2.12.4 Waktu pengamatan a.

Pengamatan pendahuluan intensitas serangan dilakukan pada waktu sebelum aplikasi pertama


Kriteria efikasi dinilai berdasarkan gejala buah terserang dan tingkat kerusakan buah (biji lengket). Bilakerusakantanamanpadapengamatanpertama (sebelumaplikasi APH) tidakberbedanyataantarpetakperlakuan, tingkatefikasi APH dihitungdenganrumus Abbot: EI =

Ca − Ta x 100% Ca

52

EI = Keefektifan APH yang diuji (%) Ca = Persentase kerusakan tanaman pada petak control setelah aplikasi APH Ta = Persentase kerusakan tanaman pada petak perlakuan setelah aplikasi APH -




Suatu formulasi APH dikatakan efektif pada sekurangkurangnya (1/2 n + 1) kali pengamatan (n = jumlah total pengamatan setelah aplikasi/infestasi), tingkat efikasi insektisida tersebut (EI).

5.2.15 Data penunjang 5.2.15.1 Serangan OPT lain 5.2.15.2 Produksi tanaman

53

PENGUJIAN LAPANGAN EFIKASI AGENS PENGENDALI HAYATI (Sebutkan nama dagang) KANDUNGAN (JAMUR Beauveria bassiana) TERHADAP HAMA PENGHISAP BUAH KAKAO Helopeltis sp. 1. LINGKUP PENGUJIAN Pengujian lapangan yang dimaksud dalam pedoman ini adalah semua percobaan pengujian yang pada prinsipnya dilakukan dalam kondisi lapangan. 2. LOKASI DAN WAKTU Lokasi dan waktu percobaan ditetapkan atas dasar cukup tersedianya sarana dengan memperhatikan faktor fisik dan biologi yang diperkirakan akan mempengaruhi tujuan percobaan antara lain pertanaman kakao dengan tingkat serangan penghisap buah kakao diatas 50% (sebutkan tempat dan waktu pelaksanaan). Pengujian dilakukan di lapangan (dengan kurungan). 3. PELAKSANA Sebutkan nama institusi pelaksana pengujian yang telah ditunjuk atau disetujui oleh Menteri Pertanian. 4. JUMLAH UNIT KEGIATAN Sebutkan jumlah unit kegiatan pengujian yang telah disetujui oleh Komisi Pestisida. 5. BAHAN DAN METODE 5.1.


54

5.1.3 Umur tanaman Tanaman kakao yang digunakan adalah tanaman yang sudah menghasilkan. 5.1.4 Jumlah tanaman per lubang tanam Jumlah tanaman: 1 tanaman per lubang tanam 5.1.5 Pemeliharaan tanaman Pemeliharaan tanaman dilakukan sebaik-baiknya untuk mencapai tujuan percobaan efikasi APH. Apabila untuk pemeliharaan tersebut perlu dipergunakan bahan pengendali lain (pestisida kimia) harus dilakukan dengan hati-hati dan tidak bersamaan waktunya dengan APH yang diuji. 5.1.6 Pemupukan Pemupukan sesuai dengan rekomendasi untuk budi daya kakao. 5.2.

METODE 5.2.1 Rancangan percobaan Rancangan percobaan yang digunakan adalah Rancangan Acak Kelompok. 5.2.2 Jumlah perlakuan dan ulangan Banyaknya perlakuan dan ulangan harus memenuhi persyaratan (p-1) (u-1) > 15 dan u > 3; p = jumlah perlakuan, u = jumlah ulangan. 5.2.3 Macam perlakuan yang diuji Untuk pengujian 1 (satu) formulasi APH, digunakan 4 (empat) taraf konsentrasi/dosis yaitu: A, ¾ A, ½ A dan ¼ A dan kontrol dengan taraf konsentrasi tertinggi diharapkan menjadi konsentrasi anjuran penggunaan formulasi APH tersebut (bila permohonan pendaftaran disetujui). 5.2.4 Pola tanam Pola tanam yang digunakan adalah monokultur 5.2.5 Jarak tanam Jarak tanam : 4 x 4 m 55

5.2.6 Ukuran petak perlakuan Setiap petak perlakuan terdiri dari 2 pohon. Pada tiap pohon digantungkan empat kurungan, satu diantaranya berisi 10 ekor Helopeltis spp. Instar kelima. 5.2.7 Jarak antar petak Jarak antar petak adalah 2 pohon. 5.2.8 Tata letak perlakuan Letak petak percobaan tidak penting karena populasi awal diketahui dan penyebaran hama sasaran diketahui atau ditetapkan. 5.2.9 Cara dan alat aplikasi Disesuaikan dengan formulasi produk 5.2.10 Volume penyemprotan Per tanaman disesuaikan dengan volume dan dosis yang tertera pada produk APH. 5.2.11 Waktu dan banyaknya aplikasi Tergantung produk APH yang diuji 5.2.12 Pengamatan 5.2.12.1 Metode pengamatan Menghitung gejala bekas tusukan dan mortalitas nimfa instar 3 5.2.12.2 Waktu pengamatan a.

b.

Pengamatan awal dilakukan sesaat sebelum aplikasi, dan apabila ada Helopeltis spp. Yang mati, diganti dengan Helopeltis spp. Dari kelompok umur yang sama. Pengamatan akhir Pengamatan akhir dilakukan 72 jam setelah aplikasi APH.

56


-

Efikasi APH yang diuji didasarkan pada tingkat populasi yaitu banyaknya nimfa instar 3 yang mati dan gejala bekas tusukan. Bila kerusakan tanaman pada pengamatan pertama (sebelum aplikasi APH) tidak berbeda nyata antar petak perlakuan, tingkat efikasi APH dihitung dengan rumus Abbot: EI =

Ca − Ta x 100% Ca






57

PROTOKOL Pengujian Lapangan Efikasi Feromon (Sebutkan Nama Dagang) Terhadap Hama Kumbang Mocong (Rhynchophorus ferrugineus) pada Tanaman Kelapa 1.

PEMILIK FORMULASI:

2.

LINGKUP PENGUJIAN: Pengujian Lapangan

3.

PELAKSANA: Institusi: Pelaksana Pengujian:

4.

JUMLAH UNIT KEGIATAN: 1 unit percobaan

5.

LOKASI DAN WAKTU 5.1. 5.2.

6.

Lokasi: Waktu:

BAHAN DAN METODE PENELITIAN 6.1.

Bahan 6.1.1 Jenis: Feromon (Nama Dagang) yang telah dilegalisir oleh Komisi Pestisida 6.1.2 Luas Areal: 6.1.3 Komoditi: Kelapa 6.1.4 Tahun Tanam: yang ada di lapangan 6.1.5 Jarak tanam: yang ada di lapangan 6.1.6 Pemupukan: Sesuai dengan anjuran

58

6.2.

Metode 6.2.1 Rancangan Percobaan: rancangan acak kelompok (RAK) 6.2.2 Perlakuan yang diuji:     

Kontrol Feromon Feromon Feromon Feromon

dengan dengan dengan dengan

kepadatan kepadatan kepadatan kepadatan

1 2 3 4

perangkap/hektar perangkap/hektar perangkap/hektar perangkap/hektar

6.2.3 Ulangan: 5 (lima) 6.2.4 Plot percobaan:

Plot percobaan adalah hamparan tanaman kelapa yang mempunyai serangan hama penggerek kumbang moncong di atas 20%.

6.2.5 Cara dan alat aplikasi Disesuaikan dengan formulasi produk

6.2.6 Tata letak percobaan Pengaturan tata letak plot percobaan dilakukan secara acak. Setiap plot percobaan berupa hamparan tanaman kelapa seluas 1 ha, antar plot dipisahkan dengan jarak minimal 100 m, sedangkan antar blok sekitar 500 m. Dengan demikian jumlah plot percobaan sebanyak (5)(5) = 25 plot.

6.3.

Kriteria Efikasi Efikasi senyawa feromon yang diuji didasarkan pada jumlah hama penggerek kumbang moncong yang tertangkap. Hasil trapping pada perlakuan feromon yang diuji akan dibandingkan dengan petak kontrol.

59

6.4.

Pengamatan Pengamatan dilakukan terhadap jumlah penggerek kumbang moncong yang tertangkap setiap 5 hari sekali selama empat kali pengamatan. Data tambahan berupa tingkat serangan hama penggerek kumbang moncong, sebelum dan sesudah pemasangan perangkap juga akan diamati.

6.5.

Analisis Data Analisis data jumlah hama penggerek kumbang moncong yang tertangkap dilakukan dengan menggunakan analysis of variance (ANOVA) (P=0.05). Sedangkan untuk menentukan perbedaan nilai rata-rata akan menggunakan uji Duncan taraf 5%. Analisis data dilakukan dengan menggunakan program statistik SAS.

60

BAB II PROTOKOL UJI MUTU AGENS PENGENDALI HAYATI (APH)

61

Agens pengendali hayati (APH) Trichoderma spp.

1. Ruang lingkup Standar ini menetapkan syarat mutu, pengambilan contoh, pengujian, pengemasan dan penandaan Agens Pengendali Hayati(APH)Trichoderma spp

2. Acuan normatif SNI 19-0428, Petunjuk pengambilan contoh padatan SNI 19-0429, Petunjuk pengambilan contoh cairan dan semi padat

3. Istilah dan definisi 3.1 agens pengendali hayati (APH) mikroorganisme atau organisme yang mempunyai kemampuan untuk menekan, menghambat, atau mematikan jasad sasaran melalui mekanisme tertentu dan berpotensi diigunakan dalam pengendalian. APH dapat sebagai parasit, predator atau patogen. 3.2

Trichoderma spp

jamur Imperfecti, kelas Deuteromycetes, genus Trichoderma,meskipun ada beberapa diantaranya yang mampu berkembangbiak secara seksual CATATANTrichoderma spp. memiliki aktivitas antifungal atau dekomposer sehingga dimanfaatkan sebagai APH.Di alam, jamur Trichoderma spp. banyak ditemukan di hutandan lahan pertanian atau pada sisa-sisa kayu lapuk. Jamur Trichoderma spp. termasuk jamur tanah (soil fungus).

62

3.3 konidium organ atau alat perkembangbiakan jamur secara aseksual yang mempunyai bermacam-macam bentuk dan umumnya berkembang dengan membentuk buluh kecambah,berupa sel tunggal atau majemuk, bening (hialin) atau mengandung pigmen (zat warna) cokelat, hijau, atau biru. 3.4. kerapatan konidium jumlah konidum dalam suspensi per satuan volume tertentu. 3.5. viabilitas konidium Kemampuan konidium untuk bertahan hidup pada keadaan tertentu yang dapat dilihat dari perkecambahan atau kondisi dinding konidium yang tidak berkerut. 3.6 patogenesitas kemampuan relatif suatu patogen atau entomopatogen untuk menimbulkan penyakit pada inang yang biasanya dinyatakan dalam LD50 dan LT50. 3.7 antagonisme kejadian pada organisme atau mikroorganisme (termasuk jamur) berupa tertekannya aktivitas organisme atau mikroorganisme jika dua atau lebih jasad tersebut diletakkan berdekatan. 3.8 antibiosis peristiwa terjadinya penghambatan satu patogen oleh jasad antagonistik dengan terbentuknya zona bening. 3.9 mikoparasitisme peristiwa terjadinya penghambatan satu patogen oleh jasad antagonistik dengan jalan organ patogen dibelit oleh hifa jasad antagonistik

63

3.10 penghambatan proses terhambatnya pertumbuhan patogen oleh jasad antagonistik melalui proses kompetisi ruang dan nutrisi.

4. Persyaratan mutu Persyaratan mutu APH Trichoderma spp dilihat pada Tabel 1.

Tabel 1- Persyaratan mutu APHTrichoderma spp Parameter Kerapatan konidium Viabilitas konidium Patogenisitas terhadap tanaman tembakau Antagonisme - Antibiosis - Mikoparasitisme - Penghambatan

Satuan per ml % -

% CATATAN bila salah satu parameter antagonisme terpenuhi syarat

Nilai ≥ 106 ≥ 60 Negatif

Positif Positif ≥ 50% berarti telah memenuhi

5. Pengambilan contoh 5.1 Pengambilan contoh dalam bentuk padat sesuai dengan SNI 19-0428 dan pengambilan contoh APH dalam bentuk cair sesuai dengan SNi 19-0429.

5.2 Pengambilan contoh dilakukan oleh petugas pengmabil contoh yang berkompeten.

6. Pengujian 6.1Pengujian dilakukan oleh petugas yang kompeten

64

6.2 Persiapan contoh pengujian dalam bentuk padat sesuai dengan lampiran A dan dalam bentuk cair sesuai dengan lampiran B 6.3 Jenis pengujian 6.3.1Uji kerapatan konidium Cara uji kerapatan konidium dapat dilihat pada lampiran C 6.3.2Uji viabilitas konidium Cara uji viabilitas konidium dapat dilihat pada lampiran D 6.3.3Uji patogenisitas pada tanaman tembakau Cara uji patogenisitas dapat dilihat pada lampiran E 6.3.4 Uji Antagonisme 6.3.4.1cara uji antibiosis dapat dilihat pada lampiran F 6.3.4.1cara uji mikoparasitisme dapat dilihat pada lampiran G 6.3.4.1cara uji penghambatan dapat dilihat pada lampiran H

7. Pengemasan 7.1APH dikemas dalam bentuk padat (tepung, serbuk, granul) atau cair 7.2Kemasan APH dibuat dari bahan yang tidak mudah rusak dan aman sehingga APH tidak mengalami penurunan mutu. 8. Penandaan atau pelabelan Penandaan atau pelabelan ditulis dengan bahan yang tidak luntur dan mudah dibaca. Pelabelan sekurang-kurangnya mencatumkan informasi tentang:       

Nama dan alamat produsen Jenis APH Bentuk produk Sasaran OPT Kerapatan konidium Tanggal kadaluwarsa Kode produksi

65

Lampiran A (Normatif) Pengambilan contoh APH Trichoderma spp dalam bentuk padat

A.1 Prinsip Mengambil contoh Trichoderma sppdalam bentuk padat. A.2 Bahan a. Contoh APH Trichoderma spp b. Aluminium foil A.3 Peralatan a. Timbangan analitik; b. Sendok sampling;

c. Magnetic strirer

A.4 Prosedur pengambilan contoh APH a. Homogenkan contoh APHTrichoderma spp dalam bentuk padatan dengan cara dikocok. b. Ambil contoh APH Trichoderma spp letakkan di atas aluminium foil. c. Timbang 1 g contoh bahan uji dengan menggunakan aluminium foil dan masukkan ke Erlenmeyer 100 ml. d. Tambahkan akuades hingga volume mencapai 100 ml. e. Homogenkan larutan dengan menggunakan magneticstirrer selama lebih kurang 15 menit. f. Contoh siap digunkan sebagai bahan uji.

66

Lampiran B (Normatif) Pengambilan contoh APH Trichoderma sppdalam bentuk cair

B.1 Prinsip Mengambil contoh APHTrichoderma sppdalam bentuk cair. B.2 Bahan Contoh APH Trichoderma spp B.3 Peralatan a. Pipet ukur 10 ml; b. Erlenmeyer 100 ml;

c. Magnetic stirer

B.4 Prosedur pengambilan contoh APH a. Homogenkan contoh APHTrichoderma spp dalam bentuk cair dengan cara dikocok. b. Ambil contoh APH Trichoderma spp sebanyak 10 ml dengan menggunakan pipet ukur. c. Masukkan ke dalam Erlenmeyer. d. Tambahkan akuades hingga volume mencapai 100 ml. e. Homogenkan larutan dengan menggunakan magnetic stirrer selama lebih kurang 15 menit. f. Contoh siap digunakan sebagai bahan uji.

67

Lampiran C (Normatif) Uji kerapatankonidium

C.1 Prinsip Menghitung kerapatan konidium dengan menggunakan Haemacytometer tipe Neubauer Improve dan mikroskop sesuai prosedur.

C.2 Bahan a. b. c. d.

Sampel APH Trichoderma spp; Akuades 100ml; Aluminium foil; Alkohol 70%.

C.3 Peralatan a. b. c. d. e. f. g.

Mikroskop;

Haemacytometer tipe Neubauer improve; Handcounter; Gelas penutuphaemacytomete; Alat timbang analitik;

Magnetic stirrer;

Erlenmeyer 100 ml;

h. Syringe atau pipet 1 ml; i. Sendok sampling.

C.4 Prosedur perhitungan kerapatan konidium a) Siapkan haemacytometer tipe Neubauer Improve, letakkan pada meja benda mikroskop. Tutup dengan gelas penutup haemacytometer seperti Gambar 1.

Gambar 1- Penutupan haemacytometermenggunakan gelaspenutup.

68

b) Amati dengan perbesaran 100x, untuk mendapatkan bidang hitung pada haemacytometer. c) Ambil 0,2 ml contoh uji menggunakan syringe atau pipet d) Teteskan suspensi konidium secara perlahan pada bidang hitung dengan syringeatau pipet melalui kedua kanal pada sisi atas dan bawah hingga bidang hitung terpenuhi suspensi secara kapiler. Diamkan satu menit agar posisi stabil (Gambar 2).

Gambar 2 - Penetesan suspensi pada bidang hitung e) Ulangi pengamatan untuk memperoleh fokus pada konidium dan pada bidang hitung. f) Hitung kerapatan konidium yang terdapat pada kotak hitung (a+b+c+d+e) dengan perbesaran 400x dengan menggunakan hand counter. Lakukan pengecekan penghitungan untuk tiap kotak hitung.

69

0,2 mm 1 mm

a

0,2 mm b c

1 mm

d

e

CATATANKotak no. 5 dengan luas 1mm x 1mm = 1 mm2 di bagi menjadi 25 kotaksehingga kotak a, b, c, d, e masing-masing memiliki luas 0,2 mm x 0,2 mm = 0,04 mm2 Gambar 3 - Kotak perhitungan pada haemacytometer g) Alur perhitungan kerapatan konidium seperti tercantum dalam gambar 4.

Gambar 4 - Alur perhitungan konidium

70

h) Konidiumyang terletak pada garis batas kotak hitung hanya dihitung pada sisi kiri dan atas kotak hitung tersebut, sedangkan proses perhitungannya seperti Gambar 5.

A B

Keterangan gambar: A : Konidium yang dihitung B : Konidium yang tidak dihitung Gambar 5 - Perhitungan konidium

i)

Ulangi langkah C.4.i pada bidang hitung 2 A B C D

Keterangan : A B C D

: : : :

Kanal 1 Bidang hitung 1 Bidang hitung 2 Kanal 2 Gambar 6 - Kanal pada haemacytometer

j) Bersihkan haemacytometer. k) Ulangi langkah C.4 a dan C.4 b, kemudian kocok suspensi konidium dengan menggunakan magnetik strirer selama 3 menit. 71

l) Ulangi langkah C.4 f hingga C.4 l sebanyak 2 kali. m) Setelah diketahui banyaknya konidium pada kotak perhitungan, hitung jumlah konidium/ml dengan cara sebagai berikut : S=

L

mm2

X x 103 x t mm xd

Keterangan : S adalah kerapatan konidium/ml X adalahjumlah konidium pada kotak a,b,c,d,e L adalah luas kotak hitung 0,04 mm2 T adalah kedalaman bidang hitung 0,1 mm D adalah faktor pengenceran 103 adalah volume suspensi yang dihitung ( 1 ml = 10 3 mm3)

CATATAN Rumus ini digunakan apabila Haemacytometer yang dipakai Neubauer Improve.Apabila menggunakan jenis yang lain, maka penghitungan disesuaikan dengan kondisi Haemacytometer. n) Hitung rerata kerapatan konidium pada kedua ulangan.

72

Lampiran D (Normatif) Uji viabilitas konidium

D.1

Prinsip

Menghitung persentase jumlah konidium yang berkecambah.

D.2 Bahan a. b. c. d. e.

SampelAPH Trichoderma spp.; Akuades; Kapas gulung; Alkohol 70%; Medium PDA atau SDA.

D.3 Peralatan a. b. c. d. e. f. g. h. i. j.

Mikroskop;

Handcounter;

Gelas benda (object glass) Gelas penutup;

Magnetic stirrer;

Skalpel; Lampu spiritus Syringeatau pipet tetes 1 ml; Cawan petri diameter 9 cm; Bor gabus(cork borer) diameter 0,5 cm.

D.4 Prosedur pengujian viabilitas konidium a) Cairkan medium PDA atau SDA tegak diatas lampu spiritus. b) Tuangkan PDA atau SDA cair kedalam cawan petri berdiameter 9 cm, ratakan dan biarkan sampai padat. c) Potong medium PDA atau SDA menggunakan bor gabus diameter 0,5 cm. d) Letakkan potongan medium PDA atau SDA menggunakan skalpel diatas gelas benda (object glass). Tiap gelas benda berisi 3(tiga) potongan medium PDA atau SDA sebagai ulangan. e) Teteskan suspensi konidium yang akan diuji sebanyak 1(satu) tetes (kerapatan 106ml) dengan menggunakan syringeataupipet volume 1 ml. f) Tutup tiap-tiap potongan medium PDA atau SDA dengan menggunakan gelas penutup.

73

g) Amati dibawah mikroskop apakah konidium tampak jelas dan nantinya dapat diamati. h) Siapkan cawan petri berdiameter 9 cm dan isidengan 1 gulung kapas yang beratnya lebih kurang 0,45 g. Tiap gulung kapas dibasahi dengan 5 tetes akuades menggunakan pipet tetes. i) Letakkan gelas benda kedalam cawan petri dan diinkubasikan selama 8 jam, 16 jam atau 24 jam pada suhu kamar. j) Amati menggunakan mikroskop dengan perbesaran 400x. Hitung jumlah konidium yang berkecambah dan yang tidak berkecambah. k) Hitung daya kecambah konidium dengan rumus sebagai berikut : VK =

KB x 100% KB + KTB

Keterangan : VK adalah viabilitas konidium KB adalah konidium yang berkecambah KTB adalah konidium yang tidak berkecambah

l) Ulangi langkah D.4 j dan D.4 k untuk kedua potongan medium yang lain. m) Hitung rerata viabilitas dari ketiga potongan medium tersebut.

74

LAMPIRAN E (normatif) Pengujian Patogenisiatas terhadap Tanaman Tembakau E.1Prinsip Mengamati terjadinya patogenisitas berupa timbulnya bercak nekrotik pada daun yang diinokulasi APH Trichoderma spp. E.2 Bahan a. Tanaman tembakau (Nikotiana tabacum) berumur 3-4 minggu; b. Sampel APH Trichoderma spp; c. Air steril. E.3 Peralatan a. Erlenmeyer 250 ml b. Syringe. E.4 Prosedur pengujian patogenisitas a. Siapkan bibit tembakau berumur 3-4 minggu dalam polibag, dan siramlah dengan air secukupnya. b. Siapkan syringeyang sudahdisterilkan. c. Buat suspensi konidium APH Trichoderma spp dalam Erlenmeyer dengan kerapatan konidium sesuai standar. d. Suntikan secara aseptik tulang daun tembakaupada permukaan bawah dengan suspensi konidium APH Trichodermaspp . e. Amati ada tidaknya bercak nekrotik pada bagian yang disuntik. Pengamatan dilakukan setiap hari selama 5 hari. f. Bilatidaktimbul bercak nekrotik, berarti reaksinya negatif atau tidak patogenik.

75

Lampiran F (Normatif) Cara uji penghambatan F.1 Prinsip Menghitung penghambatan pertumbuhan patogen oleh APH Trichoderma spp.

F.2 Bahan a. Sampel APH Trichoderma sp;. b. Patogen Fusarium spp atau patogen yang lain. F.3 Peralatan a. Cawan petri diameter 9 cm; b. Erlenmeyer 100 ml; c. Bor gabus (cork borrer) diameter 0,5 cm. F.4 Prosedur pengujian penghambatan a) Siapkan medium PDA dalam cawan petri b) Ambil isolat Trichoderma spp. yang berumur 7 hari-9 hari menggunakan bor gabus berdiameter 0.5 cm dari bagian tepi koloni. c) Letakkan potongan isolat Trichoderma spp. pada medium PDA dengan jarak 2 cm dari tepi cawan petri kemudian beri tanda T. d) Ambil isolat Fusarium spp. (atau patogen lain) yang sudah disiapkan dengan bor gabus berdiameter 0.5 cm dari bagian tepi koloni. e) Letakkan potongan isolatFusarium spp pada medium PDA dalam cawan petri dengan jarak 2 cm dari tepi cawan petri pada sisi yang berseberangan dengan Trichoderma spp kemudian beri tanda P. f) Sebagai kontrol letakkan isolat patogen pada medium PDA tanpa Trichoderma spp

76

Perlakuan

Kontrol 1

P

Kontrol 2

P

A

A 2cm

2cm

4cm

6,5cm

2 cm

2cm

6,5cm

Keterangan A : Trichoderma spp B : Fusarium spp atau patogen lain

Gambar 7- Antagonisme Trichoderma spp.

g) Amati pertumbuhan koloni untuk masing-masing jamur hingga terjadi kontak antara Trichoderma spp dengan Fusarium spp. h) Ukur jari-jari koloni jamur patogen (Fusarium spp.) pada cawan petri perlakuan dan kontrol.

A R 2

2

2

R 1 R

1

1 perlakuan

kontrol

Gambar 8 - Pertumbuhan koloni pada proses antagonisme

77

i)

Hitung persentase penghambatan dengan rumus sebagai berikut : Z=

(r1 − r2) x 100% r1

Keterangan : Z adalah Persentase penghambatan r1 adalah Jari-jari Fusarium spp tanpa Trichoderma spp (kontrol) r2adalah Jari-jari Fusarium spp dengan Trichoderma spp j.

Perlakuan uji penghambatan dilakukan minimum sebanyak tiga ulangan.

78

Lampiran G (Normatif) Uji antibiosis G.1Prinsip Mengamati terjadinya antibiosis pada Fusarium spp atau patogen lain oleh APHTrichoderma spp

G.2 Bahan a. Sampel APHTrichoderma sp;. b. Patogen Fusarium spp atau patogen yang lain. G.3 Peralatan a. Cawan petri diameter 9 cm; b. Erlenmeyer 100 ml; c. Bor gabus (cork borer) diameter 0,5 cm. G.4 Prosedur pengujian antibiosis a) Siapkan medium PDA dalam cawan petri

A

2cm

P

4cm

Keterangan A : Trichoderma spp. B : Patogen

Gambar9 - Proses antibiosis 79

b) Ambil isolat Trichoderma spp. yang berumur 7 hari-9 hari menggunakan bor gabus berdiameter 0.5 cm dari bagian tepi koloni. c) Letakkan potongan isolatTrichoderma spp. pada medium PDA dengan jarak 2 cm dari tepi cawan petri kemudian beri tanda T d) Ambil isolat Fusarium spp. (atau patogen lain) yang sudah disiapkan dengan bor gabus berdiameter 0,5 cm dari bagian tepi koloni. e) Letakkan potongan isolatFusarium spp pada medium PDA dalam cawan petri dengan jarak 2 cm dari tepi cawan petri pada sisi yang berseberangan dengan Trichoderma spp kemudian beri tanda P. f) Ulangi langkah c dan d pada medium PDA yang berbeda sebagai kontrol. g) Amati adanya zona bening yang tidak ditumbuhi oleh koloni jamur pada area di antara koloni jamur Trichoderma spp dengan Fusarium spp. sebagai salah satu indikator adanya aktifitas antibiosis. h) Ukur zona bening yang terbentuk antara koloni jamur Trichoderma spp dengan patogen (Fusarium spp) pada cawan petri. i) Pengujian dilakukan minimum sebanyak tiga ulangan.

80

Lampiran H (Normatif) Uji mikoparasitisme H.1 Prinsip Peristiwa terjadinya penghambatan satu patogen oleh jasad antagonistik dengan terbentuknya zona bening.

H.2 Bahan a. Sampel APHTrichoderma sp;. b. Patogen jamur Fusarium spp atau patogen yang lain. H.3 Peralatan a. Cawan petri diameter 9 cm; b. Erlenmeyer 100 ml; c. Bor gabus(cork borer) diameter 0,5 cm. H.4 Prosedur pengujian mikoparasitisme a) Gelas benda dicelupkan dalam alkohol 70% kemudian panaskan di atas api lampu spiritus. b) Cairkan medium PDA dalam tabung reaksi sampai medium cair. c) Teteskan sebanyak 1 tetes -2 tetes medium PDA di atas gelas benda sambil diratakan. d) Inokulasi medium PDA dengan isolat jamur Trichoderma spp. dan jamur patogen uji pada dua sisi yang berbeda dengan jarak 1 cm -2 cm.

A

B

Keterangan A = Trichoderma spp. B = jamur patogen Gambar 10 - Proses mikoparasitik 81

e) Apabila kedua koloni sudah saling bertemu, dilakukan pengamatan di bawah mikroskop untuk melihat adanya aktifitas mikoparasitisme yang ditunjukkan dengan adanya hifa Trichoderma spp. yang melilit pada hifa jamur patogen dan kemudian akan diikuti dengan terjadinya lisis pada hifa jamur patogen.

82

Lampiran I (informatif) Pembuatan media agar I.1 Prinsip Membuat Medium agar

I.2 Bahan a. Medium potato dextrose agar (PDA) instan b. Medium sauboraud dextrose agar (SDA) instan I.3 Peralatan a. b. c. d.

Cawan petri dengan diameter 15 cm; Erlenmeyer 250 ml; Pipet tetes. Syringe

I.4 Prosedur pembuatan media agar a. b. c. d. e.

Timbang medium PDA sebanyak 39 g atau 65 g untuk medium SDA. Masukkan medium tersebut kedalam gelas piala 1000 ml. Tuang akuades ke dalam gelas piala tersebut sampai 1000 ml. Tuangkan air kedalam panci kecil dan letakkan diatas nyala api kompor. Letakkan gelas piala kedalam panci tersebut, kemudian aduk terus sampai medium PDA atau SDA didalamnya agak mengental (kurang lebih 1j am -2 jam) f. Siapkan tabung reaksi pada rak atau erlenmeyer yang telah disteril, serta syringe5ml. g. Setelah medium PDA atau SDA agak mengental kompor dimatikan. h. Ambil PDAatau SDA dengan menggunakan syringesebanyak 5 ml dan tuangkan kedalam tabung reaksi, kemudian ditutup kapas dan aluminium foil. Sebagai stok, tuangkan medium PDA atau SDA kedalam erlenmeyer sesuai dengan yang kita inginkan, kemudian ditutup dengan kapas dan aluminium foil. i. Tabung reaksi dan erlenmeyer yang telah terisi PDA atau SDA kemudian dibungkus plastik dan disteril dengan menggunakan autoklaf. j. Setelah proses sterilisasi menggunakan autoklaf selesai, medium yang menggunakan tabung reaksi kemudian dimiringkan. k. Inkubasikan media tersebut selama 1hari -2 hari, pisahkan media yang terkontaminasi. l. Medium dapat digunakan untuk perhitungan viabilitas konidium, maupun untuk perbanyakan jamur. m. Apabila medium tersebut belum digunakan sebaiknya disimpan dalam lemari es dengan suhu 5°C. 83

Lampiran J (Informatif) Morfologi Trichoderma spp J.1 Morfologi makroskopis Pada awal pertumbuhan,koloni mula-mula bening atau putih, kemudian berubah menjadi kehijauan.Seringkali koloni membentuk lingkaran konsentris.

J.2 Morfologi mikroskopis Jamur Trichoderma spp. memiliki konidiofor tegak, hialin dan bercabang-cabang. Fialidnya tunggal atau lebih. Konidium berbentuk bulat telur, berukuran (2,8 - 3,2) x (2,5 x 2,8) µm. Konidium terbentuk secara kelompok di ujung fialid.

A

B C

Keterangan: A : Konidium B : Kodidiofor C : Konidiospora Gambar 11- Morfologi mikroskopis Trichoderma spp.

84

Agens pengendali hayati (APH)

Metarhizium anisopliae

1. Ruang lingkup Standar ini menetapkan syarat mutu, pengambilan contoh, pengujian, pengemasan dan penandaan Agens Pengendali Hayati (APH)Metarhizium anisopliae.

2. Acuan normatif SNI 19-0428 Petunjuk pengambilan contoh padatan SNI 19-0429 Petunjuk pengambilan contoh cairan dan semi padat. 3. Istilah dan definisi 3.1 Agens Pengendali Hayati (APH) Mikroorganisme atau organisme yang mempunyai kemampuan untuk menekan, menghambat, mematikan atau menyebabkan penyakit jasad sasaran melalui mekanisme tertentu dan berpotensi digunakan dalam pengendalian. APH dapat sebagai parasit, predator, atau pathogen. 3.2

Metarhizium anisopliae Salah satu jamur terbawa tanah yang dapat digunakan sebagai agens pengendali hayati, biasa disebut green muscardine. CATATAN 1 Metarhizium anisopliae termasuk jamur kelas Deuteromycetes yang dapat menyebabkan penyakit pada serangga. Kemampuan untuk menginfeksi inang disebabkan adanya aktivitas toksin yang dihasilkan yaitu cyclopeptida, destruxin A, B, C, D, E dan desmethyldestruxin B.

3.3 konidium organ atau alat perkembangbiakan jamur secara aseksual yang mempunyai bermacam-macam bentuk dan umumnya berkembang dengan membentuk buluh

85

kecambahberupa sel tunggal atau majemuk, bening (hialin) atau mengandung pigmen (zat warna) cokelat, hijau, atau biru. 3.4 kerapatan konidium jumlah konidium dalam suspensi per satuan volume tertentu.

3.5 viabilitas konidium kemampuankonidium untuk bertahan hidup pada keadaan tertentu yang dapat dilihat dari perkecambahan atau kondisi dinding konidium yang tidak berkerut. 3.6 patogenisitas kemampuan relatif suatu patogen atau entomopatogen untuk menimbulkan penyakit pada inang yang biasanya dinyatakan dalam LD 50& LT 50. 3.7 lethal dosage (LD50) dosistunggal APH Metarhizium anisopliae yang dapat menyebabkan kematian 50%serangga uji.

3.8 lethal time (LT50) waktu yang diperlukan APH Metarhizium anisopliae untuk mematikan 50% serangga uji dalam kondisi tertentu. 3.9 Serangga uji Serangga yang digunakan sebagai objek dalam uji patogenisitas. 4. Persyaratan mutu Persyaratan mutu APH Metarhizium anisopliaedilihat dalam Tabel 1.

86

Tabel 1 -Persyaratan mutu APH Metarhizium anisopliae

Parameter

Satuan

Kerapatan konidium Viabilitas konidium Patogenisitas terhadap serangga uji - LD50 - LT50

per ml %

Nilai ≥ 106 ≥ 60

per ml hari

≥106 ≤4

-

Negatif

Patogenisitas terhadap tanaman tembakau

5. Pengambilan contoh 5.1Pengambilan contoh dalam bentuk padat sesuai dengan SNI 19-0428 dan pengambilan contoh APH dalam bentuk cair sesuai dengan SNI 19-0429. 5.2 Pengambilan contoh dilakukan oleh petugas pengambil contoh yangkompeten. 6. Pengujian 6.1Pengujian dilakukan oleh petugas yang kompeten. 6.2Persiapan contoh pengujian dalam bentuk padat sesuai dengan lampiran A dan dalam bentuk cair sesuai dengan lampiran B. 6.3 Jenis pengujian 6.3.1 Uji kerapatan konidium Cara uji kerapatan konidium dapat dilihat pada lampiran C. 6.3.2 Uji viabilitas konidium Cara uji viabilitas konidium dapat dilihat dalam lampiran D. 6.2.3 uji patogenisitas pada serangga uji Cara uji patogenisitas pada serangga ujii dapat dilihat dalam lampiran E. 6.2.4 uji patogenisitas pada tanaman tembakau Cara uji patogenisitas pada tanaman dapat dilihat dalam lampiran F. 87

7. Pengemasan 7.1APH dikemas dalam bentuk padat (tepung, serbuk, granul) atau cair. 7.2Kemasan dibuat dari bahan yang tidak mudah rusak dan aman sehingga APH tidak mengalami penurunan mutu. 8. Penandaan atau pelabelan Penandaanatau pelabelan ditulis dengan bahan yang tidak luntur dan mudah dibaca. Pelabelan sekurang-kurangnya mencantumkan informasi tentang : -

Nama dan alamat produsen Jenis APH Bentuk produk Sasaran OPT Kerapatan konidium Tanggal kadaluwarsa Kode produksi

88

Lampiran A (normatif)

Pengambilan contoh APHMetarhizium anisopliae dalam bentuk padat A.1 Prinsip Mengambil contoh APHMetarhizium anisopliae dalam bentuk padat.

A.2 Bahan a. ContohAPHMetarhizium anisopliae; b. Aluminium foil; A.3 Peralatan a. Alat timbang analitik; b. Sendok sampling;

c. Magnetic stirer.

A.4 Prosedur pengambilan contohAPH a) Homogenkan contoh APH Metarhizium anisopliaedalam bentuk padat dengan cara dikocok. b) Ambil contoh APH Metarhizium anisopliae, letakkan diatas aluminium foil. c) Timbang 1 g contoh bahan uji dengan menggunakan aluminium foil dan masukkan kedalam erlenmeyer 100 ml. d) Tambahkan akuades hingga volume mencapai 100 ml. e) Homogenkan larutan dengan menggunakan magnetic stirrer selama lebih kurang 15 menit. f) Contoh siap digunakan sebagai bahan uji.

89

Lampiran B (normatif)

Pengambilan contoh APH Metarhizium anisopliae dalam bentuk cair B.1 Prinsip Mengambil contoh APH Metarhizium anisopliae dalam bentuk cair. B.2 Bahan Contoh APHMetarhizium anisopliae. B.3 Peralatan a. Pipet ukur 10 ml; b. Erlenmeyer 100 ml; c. Magnetic stirer. B.4 Prosedur pengambilan contoh APH a) Homogenkan contohAPH Metarhizium anisopliaedalam bentuk cair dengan cara dikocok. b) Ambil contoh APH Metarhizium anisopliae sebanyak 10 ml dengan menggunakan pipet ukur. c) Masukkan ke dalam erlenmeyer. d) Tambahkan akuades hingga volume mencapai 100 ml. e) Homogenkan larutan dengan menggunakan magnetic stirrerselama lebih kurang 15 menit. f) Contoh siap digunakan sebagai bahan uji.

90

Lampiran C (normatif) Uji kerapatan konidium C.1 Prinsip Menghitung kerapatan konidium dengan menggunakan Haemacytometer tipe Neubauer Improve dan mikroskop sesuai prosedur. C.2 Bahan a. b. c. d.

Sampel jamur Metarhizium anisopliae; Akuades 100 ml; Aluminium foil; Alkohol 70%.

C.3 Peralatan a. b. c. d. e. f. g.

Mikroskop;

Haemacytometer tipe Neubauer improve ; Handcounter; Gelas penutuphaemacytometer; Alat timbang analitik;

Magnetic stirrer;

Erlenmeyer 100 ml; h. Syringe atau pipet 1 ml; i. Sendok sampling. C.4 Prosedur perhitungan kerapatan konidium a) Siapkan haemacytometer tipe Neubauer Improve, letakkan pada meja benda mikroskop. Tutup dengan gelas penutuphaemacytometer seperti Gambar 1.

Gambar 1- Penutupan haemacytometer menggunakan gelaspenutup. 91

b) Amati dengan perbesaran 100x, untuk mendapatkan bidang hitung pada haemacytometer. c) Ambil 0,2 ml contoh uji menggunakan syringe atau pipet. d) Teteskan suspensi konidium secara perlahan pada bidang hitung dengan syringeatau pipet melalui kedua kanal pada sisi atas dan bawah hingga bidang hitung terpenuhi suspensi secara kapiler. Diamkan satu menit agar posisi stabil (Gambar 2).

Gambar 2 - Penetesan suspensi pada bidang hitung e) Ulangi pengamatan untuk memperoleh fokus pada konidium dan pada bidang hitung. f) Hitung kerapatan konidium yang terdapat pada kotak hitung (a+b+c+d+e) dengan perbesaran 400x dengan menggunakan hand counter. Lakukan pengecekan penghitungan untuk tiap kotak hitung.

92

0,2 mm 1 mm

a

0,2 mm b c

1 mm

d

e

CATATAN 2Kotak pada Gambar 3 dengan luas 1mm x 1mm = 1 mm2 di bagi menjadi 25 kotaksehingga kotak a, b, c, d, e masing-masing memiliki luas 0,2 mm x 0,2 mm = 0,04 mm2 Gambar 3 - Kotak perhitungan pada haemacytometer g) Alur perhitungan kerapatan konidium seperti tercantum dalam Gambar 4.

Gambar 4 - Alur perhitungan konidium h) Konidium yang terletak pada garis batas kotak hitung hanya dihitung pada sisi kiri dan atas kotak hitung tersebut, sedangkan proses perhitungannya seperti Gambar 5.

A B

Keterangan gambar: A : Konidium yang dihitung B : Konidium yang tidak dihitung Gambar 5 - Perhitungan konidium 93

i)

Ulangi langkahC.4 i pada bidang hitung 2 A B C D

Keterangan gambar : A : Kanal 1 B : Bidang hitung 1 C : Bidang hitung 2 D : Kanal 2 Gambar 6 - Kanal pada haemacytometer j) Bersihkan haemacytometer. k) Ulangi langkah C.4 a dan C.4 b, kemudian kocok suspensi konidium dengan menggunakan magnetic stirer selama 3 menit. l) Ulangi langkah C.4 f hingga C.4 l sebanyak 2 kali. m) Setelah diketahui jumlah konidium pada kotak perhitungan, hitung kerapatan konidium/ml dengan cara sebagai berikut : S=

𝑋 × 103 L ×t ×d

Keterangan : S adalah kerapatan konidium/ml 𝑋 adalah rerata jumlah konidium pada kotak a,b,c,d,e L adalah luas kotak hitung 0,04 mm2 T adalah kedalaman bidang hitung 0,1 mm D adalah faktor pengenceran 3 10 adalah volume suspensi yang dihitung (1 ml = 10 3 mm3) CATATAN 2Rumus ini digunakan apabila haemacytometeryang dipakai Neubauer Improve.Apabila menggunakan jenis yang lain, maka penghitungan disesuaikan dengan kondisi Haemacytometer. n) Hitung rerata kerapatan konidium pada kedua ulangan.

94

Lampiran D (normatif) Uji viabilitas konidium D.1 Prinsip Menghitung persentase jumlah konidium yang berkecambah.

D.2 Bahan a. b. c. d. e.

Sampel APHMetarhizium anisopliae; Akuades; Kapas gulung; Alkohol 70%; Medium PDA atau SDA.

D.3Peralatan a. b. c. d. e. f. g. h. i. j.

Mikroskop;

Handcounter;

Gelas benda (object glass); Gelas penutup;

Magnetic stirrer;

Skalpel; Lampu spiritus; Syringe atau pipet tetes 1 ml; Cawan petri diameter 9 cm; Bor gabus(cork borer) diameter 0,5 cm.

D.4 Prosedur pengujian viabilitas konidium a) Cairkan medium PDA atau SDA tegak diatas lampu spiritus. b) Tuangkan PDA atau SDA cair kedalam cawan petriberdiameter 9cm, ratakan dan biarkan sampai padat. c) Potong medium PDA atau SDA menggunakan bor gabus diameter 0,5 cm. d) Letakkan potongan medium PDA atau SDA menggunakan skalpel diatas gelas benda (object glass). Tiap gelas benda berisi 3 (tiga) potongan medium PDA/SDA sebagai ulangan. e) Teteskan suspensi konidium yang akan diuji sebanyak 1(satu) tetes (kerapatan 106/ml) dengan menggunakan syringeatau pipet volume 1ml. f) Tutup tiap-tiap potongan medium PDA atau SDA dengan menggunakan gelas penutup. g) Amati dibawah mikroskop apakah konidium tampak jelas dan nantinya dapat diamati. 95

h) Siapkan cawan petri berdiameter 9 cm dan isi dengan 1 gulung kapas yang beratnya lebih kurang 0,45 g. Tiap gulung kapas dibasahi dengan 5 tetes akuades menggunakan pipet tetes. i) Letakkan gelas benda tersebut kedalam cawan petri dan inkubasikan selama 8 jam, 16 jam atau 24 jam pada suhu kamar. j) Amati menggunakan mikroskop pada perbesaran 400x. Hitung jumlah konidium yang berkecambah dan yang tidak berkecambah. k) Hitung daya kecambah konidium dengan rumus sebagai berikut : VK =

KB x 100 % KB + KTB

Keterangan : VK adalah viabilitas konidium KB adalah konidium yang berkecambah KTB adalah konidium yang tidak berkecambah l) Ulangi langkahD.4 j dan D.4 k untuk kedua potongan medium yang lain. m) Hitung rerata viabilitas dari ketiga potongan medium tersebut.

96

Lampiran E (normatif) Uji patogenesitas APHMetarhizium anisopliae E.1 Prinsi Menghitung larva atau serangga uji yang mati akibat terinfeksi APHMetarhizium

anisopliae. E.2 Bahan a. SampelAPHMetarhizium anisopliae; b. Larva atau serangga uji. E.3 Peralatan a. Cawan petri dengan diameter 15 cm; b. Erlenmeyer 250 ml; c. Pipet tetes. E.4 Prosedur pengujian patogenesitas a) Siapkan larva atau serangga uji di cawan petri yang telah disediakan. Dalam 1 cawan petri diisi sebanyak minimal 20 ekor serangga uji. b) Siapkan pakannya. Pakan dari serangga uji tersebut sebaiknya disterilkan terlebih dahulu untuk menghindari kontaminasi dengan organisme lain. c) Masukkan pakan tersebut kedalam penyungkup plastik yang telah diisi dengan serangga uji. d) Buat suspensi konidium APHMetarhizium anisopliae dalam erlenmeyer dengan kerapatan konidium sesuai standar e) Semprotkan suspensi konidium ke larva atau serangga uji di dalam cawan petri yang sudah disiapkan. f) Amati setiap hari jumlah larva atau serangga ujiyang mati. g) Persen kematian larva atau serangga dihitung dengan rumus sebagai berikut : PK =

SM x 100 % SU

Keterangan : PK adalah persentase kematian serangga uji SM adalah serangga uji terinfeksi SU adalah total serangga uji yang diamati h) Perlakuan uji patogenesitas dilakukan minimal sebanyak tiga ulangan

97

LAMPIRAN F (normatif) Pengujian Patogenisitas terhadap tanaman tembakau F.1 Prinsip Mengamati terjadinya patogenisitas berupa timbulnya bercak nekrotik pada daun yang diinokulasi APH Metarhizium anisopliae.

F.2 Bahan a. Bibit tembakau (Nicotiana tabacum) berumur 3-4 minggu; b. Sampel APH Metarhizium anisopliae; c. Air steril. F.3Peralatan a. Erlenmeyer 250 ml; b. Syringe. F.4 Prosedur pengujian patogenisitas a) Siapkan bibittembakau berumur 3-4 minggu dalam polibag, dan siramlah dengan air secukupnya. b) Siapkan syringeyang sudah disterilkan. c) Buat suspensi konidium APH Metarhizium anisopliae dalam erlenmeyer dengan kerapatan konidium sesuai standar. d) Suntikan secara aseptik tulang daun tembakau pada permukaan bawah dengan suspensi konidium APH Metarhizium anisopliae. e) Amati ada tidaknya bercak nekrotik pada bagian yang disuntik. Pengamatan dilakukan setiap hari selama 5 hari. f) Bila tidak timbul bercak nekrotik, berarti reaksinya negatif, atau tidak patogenik.

98

LampiranG (informatif) MorfologiAPH Metarhizium anisopliae G.1

Morfologi makroskopis

Pada awal pertumbuhan APH akan membentuk koloni berwarna putih, selanjutnya koloni akan menebal dan berwarna hijau olive.

G.2

Morfologi mikroskopis

APH Metarhizium anisopliae mempunyai konidiofor tersusun tegak dalam suatu kumpulan yang kompak, dan berlapis. Konidium berbentuk silinder, lonjong, panjangnya mencapai 6-16 µm. Konidium bersel satu, hialin dan tidak bersekat.

Keterangan : A &C : Konidiofor (pendukung konidium) B &D : Konidium Gambar 7 - Morfologi mikroskopik jamur Metarhizium anisopliae

99

Lampira n H (informatif) Pembuatan media agar H.1 Prinsip Membuat medium agar H.2 Bahan a. Medium Potato Dextrose Agar (PDA) instan; b. Medium Sauboroud Dextrose Agar (SDA) instan. H.3 Peralatan a. b. c. d. e.

Cawan petri dengan diameter 15 cm; Erlenmeyer 250 ml; Piper tetes.

Syringe Otoklaf

H.4 Prosedur pengujian patogenesitas a. b. c. d. e. f. g. h.

i. j. k. l. m.

Timbang medium PDA sebanyak 39 g atau 65 g untuk medium SDA. Masukkan medium tersebut kedalam gelas piala 1000 ml. Tuang akuades ke dalam gelas piala tersebut sampai 1000 ml. Tuangkan air kedalam panci kecil dan letakkan diatas nyala api kompor. Letakkan gelas piala kedalam panci tersebut, kemudian aduk terus sampai medium PDA atau SDA didalamnya agak mengental (kurang lebih 1jam). Siapkan tabung reaksi pada rak atau erlen meyer yang telah disterilkan, serta syringe 5ml. Setelah medium PDA atau SDAhomogen dan agak mengental kompor dimatikan. Ambil PDA atau SDA dengan menggunakan syringesebanyak 5 ml dan tuangkan kedalam tabung reaksi, kemudian ditutup kapas dan aluminium foil. Sebagai stok, tuangkan medium PDAatau SDA kedalam erlenmeyer sesuai dengan yang kita inginkan, kemudian ditutup dengan kapas dan aluminium foil. Tabung reaksi dan erlenmeyer yang telah terisi PDA atau SDA kemudian dibungkus plastik dan disteril dengan menggunakan otoklaf. Setelah proses sterilisasi menggunakan otoklaf selesai, medium yang menggunakan tabung reaksi kemudian dimiringkan. Inkubasikan medium tersebut selama 1hari -2 hari, pisahkan medium yang terkontaminasi. Medium dapat digunakan untuk perhitungan viabilitas konidium, maupun untuk perbanyakan jamur. Apabila medium tersebut belum digunakan sebaiknya disimpan dalam lemari es dengan suhu 5°C.

100

Agens pengendali hayati (APH) Bagian 1:Beauveria bassiana 1. Ruang lingkup Standar ini menetapkan syarat mutu, pengambilan contoh, pengujian, pengemasan dan penandaan Agens Pengendali Hayati(APH)Beauveria bassiana. 2. Acuan normatif SNI 19-0428. Petunjuk pengambilan contoh padatan, SNI 19-0429. Petunjuk pengambilan contoh cairan dan semi padat, 3. Istilah dan definisi 3.1 Agens Pengendali Hayati (APH) mikroorganisme atau organisme yang mempunyai kemampuan untuk menekan, menghambat, mematikan atau menyebabkan penyakit jasad sasaran melalui mekanisme tertentu, dan berpotensi digunakan dalam pengendalian. APH dapat sebagai parasit, predator, atau patogen 3.2

Beauveria bassiana jamur imperfecti, klas Deuteromycetes, genus Beauveria, meskipun ada beberapa diantaranya yang mampu berkembangbiak secara seksual

CATATAN 1 Beauveria bassiana termasuk jamur entomopatogen yaitu jamur yang dapat menimbulkan penyakit pada serangga karena memiliki kemampuan untuk menghasilkan racun (toksin) antara lain beauvericine, beauverolide, bassianolide dan

isorolide

3.3 konidium organ atau alat perkembangbiakan jamur secara aseksual yang mempunyai bermacam-macam bentuk dan umumnya berkembang dengan membentuk buluh kecambah berupa sel tunggal atau majemuk, bening (hialin) atau mengandung pigmen (zat warna) cokelat, hijau, atau biru 3.4 kerapatan konidium jumlah konidium dalam suspensi per satuan volume tertentu

101

3.5 viabilitas konidium kemampuankonidium untuk bertahan hidup pada keadaan tertentu yang dapat dilihat perkecambahan atau kondisi konidium yang tidak berkerut 3.6 patogenisitas kemampuan relatif suatu patogen atau entomopatogen untuk menimbulkan penyakit pada inang. Biasanya dinyatakan dalam LD50 dan LT50 3.7 lethal dosage (LD50) dosis tunggal APH Beauveria bassiana yang dapat menyebabkan kematian 50% populasi serangga uji 3.8 lethal time (LT50) waktu yang diperlukan APH Beauveria bassiana untuk mematikan 50% populasi serangga uji dalam kondisi tertentu 3.9 serangga uji serangga yang digunakan sebagai objek dalam uji patogenisitas 4. Persyaratan mutu Persyaratan mutu APH Beauveria bassianadilihat dalam Tabel 1.

Tabel 1 –Persyaratan mutu APH Beauveria bassiana Parameter Kerapatan konidium Viabilitas konidium Patogenisitas terhadap serangga uji - LD50 - LT50 Patogenisitas terhadap tanaman tembakau

Satuan per ml %

Nilai ≥106 ≥ 60

per ml hari -

≥106 ≤4 Negatif

102

5. Pengambilan contoh 5.1Pengambilan contoh APH dalam bentuk padat sesuai dengan SNI 19-0428 dan pengambilan contoh APH dalam bentuk cair sesuai dengan SNI 19-0429. 5.2 Pengambilan contoh dilakukan oleh petugas pengambil contoh yang kompeten 6. Pengujian 6.1Pengujian dilakukan oleh petugas yang kompeten 6.2Persiapan contoh pengujian dalam bentuk padat sesuai dengan Lampiran A dan dalam bentuk cair sesuai dengan Lampiran B 6.3Jenis Pengujian 6.3.1 Uji kerapatan konidium Cara uji kerapatan konidium dapat dilihat dalamlampiran C. 6.3.2 Uji viabilitas konidium Cara uji viabilitas konidiumdapat dilihat dalam lampiran D. 6.3.3 Uji patogenisitaspada serangga uji Cara uji patogenisitaspada serangga uji dapat dilihat dalamlampiran E. 6.3.4 Uji patogenisitas pada tanaman tembakau Cara uji patogenisitaspada tanaman tembakaudapat dilihat dalam lampiran F. 7. Pengemasan 7.1APH dikemas dalam bentuk padat (tepung, serbuk, dan granul) atau cair 7.2Kemasan APH dibuat dari bahan yang tidak mudah rusak dan aman sehinggaAPH tidakmengalami penurunan mutu. 8. Penandaan atau pelabelan Penandaan atau pelabelan ditulis dengan bahan yang tidak luntur dan mudah dibaca. Pelabelan sekurang-kurangnya mencantumkan informasi tentang: -

Nama dan alamat produsen, Jenis APH, Bentuk produk, OPT sasaran, Kerapatan konidium, Tanggal kadaluwarsa, Kode produksi

103

LampiranA (normatif) Pengambilan contoh APH Beauveria bassiana dalam bentuk padat A.1 Prinsip Mengambil contoh Beauveria bassianadalam bentuk padat

A.2 Bahan a. Contoh APHBeauveria bassiana; b. Aluminium foil. A.3 Peralatan a. Alat timbang analitik; b. Sendok sampling;

c. Magnetic stirrer.

A.4 Prosedur pengambilan contoh APH a) Homogenkan contoh APHBeauveria bassina dalam bentuk padat dengan cara dikocok. b) Ambil contoh APH Beauveria bassina,selanjutnyaletakkan di atas aluminium foil. c) Timbang 1 g contoh bahan uji dengan menggunakan aluminium foil dan masukkan ke dalam erlenmeyer 100 ml. d) Tambahkan akuades hingga volume mencapai 100 ml e) Homogenkan larutan dengan menggunakan magnetic stirrer selama lebih kurang 15 menit. f) Contoh siap digunakan sebagai bahan uji

104

Lampiran B (normatif) Pengambilan contoh Beauveria bassiana dalam bentuk cair B.1 Prinsip Mengambil contoh APH Beauveria bassiana dalam bentuk cair B.2 Bahan Contoh APH Beauveria bassiana; B.3 Peralatan a. Pipet ukur 10 ml; b. Erlenmeyer 100 ml;

c. Magnetic stirrer

B.4 Prosedur pengambilan contoh APH a) Homogenkan contoh APH Beauveria bassina dalam bentuk cair dengan cara dikocok. b) Ambil contoh APH Beauveria bassina sebanyak 10 ml dengan menggunakan pipet ukur. c) Masukkan ke dalam erlenmeyer. d) Tambahkan akuades hingga volume mencapai 100 ml. e) Homogenkan larutan dengan menggunakan magnetic stirrerselama lebih kurang 15 menit. f) Contoh siap digunakan sebagai bahan uji

105

Lampiran C (normatif) Uji kerapatan konidium C.1Prinsip Menghitung kerapatan konidium dengan menggunakan Haemacytometer tipe Neubauer Improve dan mikroskop sesuai prosedur. C.2Bahan a. b. c. d.

Sampel APHBeauveria bassiana; Akuades 100 ml; Aluminium foil; Alkohol 70%.

C.3Peralatan a. b. c. d. e. f. g.

Mikroskop;

i.

Sendok sampling.

Haemacytometer tipe Neubauer improve ; Handcounter; Gelas penutuphaemacytometer; Alat timbang analitik;

Magnetic stirrer;

Erlenmeyer 100 ml;

h. Syringe atau pipet 1 ml; C.4 Prosedur penghitungan kerapatan konidium a) Siapkan haemocytometer tipe Neubauer Improve, letakkan pada meja benda mikroskop. Tutup dengan gelas penutuphaemacytometerseperti Gambar 1

Gambar 1- Penutupan haemacytometer menggunakan gelaspenutup. b) Amati dengan perbesaran 100x, untuk mendapatkan bidang hitung pada haemacytometer. c) Ambil 0,2 ml contoh uji menggunakan syringe atau pipet. d) Teteskan suspensi konidium secara perlahan pada bidang hitung dengan syringeatau pipet melaluikeduakanal pada sisi atas dan bawah, hingga bidang hitung terpenuhi suspensi secara kapiler.Diamkan satu menit agar posisi stabil (Gambar 2).

106

Gambar 2 - Penetesan suspensi pada bidang hitung e) Ulangi pengamatan untuk memperoleh fokus pada konidium dan pada bidang hitung. f)

Hitung kerapatan konidium yang terdapat pada kotak hitung (a+b+c+d+e) dengan perbesaran 400x dengan menggunakan hand counter. Lakukan pengecekan penghitungan untuk tiap kotak hitung.

107

0,2 mm

1 mm

0,2 mm

a b c

1 mm

d e

CATATAN 2Kotak pada Gambar 3 dengan luas 1mm x 1mm = 1 mm2 dibagi menjadi 25 kotaksehingga kotak a, b, c, d, e masing-masing memiliki luas 0,2 mm x 0,2 mm = 0,04 mm2 Gambar 3 - Kotak perhitungan pada haemacytometer g) Alur perhitungan kerapatan konidium seperti tercantum pada gambar 4.

Gambar 4 - Alur perhitungan konidium h) Konidiumyang terletak pada garis batas kotak hitung hanya dihitung pada sisi kiri dan atas kotak hitung tersebut, sedangkan proses penghitungannya seperti Gambar 5.

A B

Keterangan gambar: A : Konidium yang dihitung B : Konidium yang tidak dihitung Gambar 5 - Perhitungan konidium 108

i)

Ulangi langkah C.4 f pada bidang hitung 2 A B C D

Keterangan gambar : A : Kanal 1 B : Bidang hitung 1 C : Bidang hitung 2 D : Kanal 2 Gambar 6 - Kanal pada haemacytometer j) Bersihkan haemacytometer. k) Ulangi langkah C.4 a dan C.4 b, kemudianhomogenkan suspensi konidium dengan menggunakan magnetic stirrer selama 3 menit. l) Ulangi langkah C.4 c hingga C.4 i sebanyak 2 kali. m) Setelah diketahui banyaknya konidium pada kotak perhitungan, hitung jumlah konidium/ml dengan cara sebagai berikut : S=

x × 103 L ×t ×d

Keterangan : S adalah kerapatan konidium/ml X adalah rerata jumlah konidium pada kotak a,b,c,d,e L adalah luas kotak hitung 0,04 mm2 t adalah kedalaman bidang hitung 0,1 mm d adalah faktor pengenceran 103 adalah volume suspensi yang dihitung ( 1 ml = 10 3 mm3) CATATAN 2Rumus ini digunakan apabila Haemocytometer yang dipakai Neubauer Improve.Apabila menggunakan jenis yang lain, maka penghitungan disesuaikan dengan kondisi Haemacytometer. n) Hitung rerata kerapatan konidium pada kedua ulangan.

109

Lampiran D (normatif) Uji viabilitaskonidium D.1 Prinsip Menghitung persentase jumlah konidium yang berkecambah. D.2Bahan a. b. c. d. e.

SampelAPH Beauveria bassiana; Akuades; Kapas gulung; Alkohol 70%; Medium PDA atau SDA

D.3 Peralatan a. b. c. d. e. f. g. h. i. j.

Mikroskop;

Hand t counter; Gelas benda (object glass) Gelas penutup;

Magnetic stirrer;

Skalpel; Lampu spiritus Syringe atau pipet tetes 1 ml; Cawan petri (petridish) diameter 9 cm; Bor gabus(cork borrer) diameter 0,5 cm.

D.4 Prosedur pengujian viabilitas konidium a) Cairkan medium PDA atau SDA tegak diatas lampu spiritus. b) Tuangkan PDA atau SDA cair kedalam cawan petri berdiameter 9cm, ratakan dan biarkan sampai padat. c) Potong mediumPDA atau SDA menggunakan bor gabus diameter 0,5 cm. d) Letakkan potongan medium PDA atau SDA menggunakan skalpel diatas gelas benda (object glass).Tiap gelas benda berisi 3 (tiga) potongan medium PDA atau SDA sebagai ulangan. e) Teteskan suspensi konidium yang akan diuji sebanyak 1 tetes (kerapatan 106/ml) dengan menggunakan syringe atau pipet volume 1 ml. f) Tutup tiap-tiap potongan medium PDA atau SDA dengan menggunakan gelas penutup. g) Amati dibawah mikroskop apakah konidium tampak jelas dan nantinya dapat diamati.

110

h) Siapkan cawan petri berdiameter 9 cm dan isi dengan 1 gulung kapas yang beratnya lebih kurang 0,45 g. Tiap gulung kapas dibasahi dengan 5 tetes akuades. i) Letakkan gelas benda tersebut kedalam cawan petri dan inkubasikan selama 8, 16 atau 24 jam pada suhu kamar. j) Amati menggunakan mikroskop pada perbesaran 400x. Hitung jumlah konidium yang berkecambah dan yang tidak berkecambah. k) Hitung daya kecambah konidium dengan rumus sebagai berikut : VK =

KB x 100 % KB + KTB

Keterangan : VK adalah viabilitas konidium KB adalah konidium yang berkecambah KTB adalah konidium yang tidak berkecambah l) Ulangi langkah D.4 j dan D.4 k untuk kedua potongan medium yang lain. m) Hitung rerata viabilitas dari ketiga potongan medium tersebut.

111

Lampiran E (normatif) Ujipatogenesitas APH Beauveria bassiana E.1 Prinsip Menghitung larva atau serangga uji yang mati akibat terinfeksi APHBeauveria

bassiana E.2 Bahan a. b.

SampelAPH Beauveria bassiana; Larva atau serangga uji.

E.3 Peralaan a. Cawan petri dengan diameter 15 cm; b. Erlenmeyer 250 ml; c. Pipet tetes. E.4 Prosedur pengujian patogenesitas a) Siapkan larva atau serangga uji di cawan petri yang telah disediakan. Dalam 1 (satu)cawan petri diisi sebanyak minimal 20 ekor serangga uji. b) Siapkan pakannya. Pakan tersebut sebaiknya disterilkan terlebih dahulu untuk menghindari kontaminasi dengan organisme lain. c) Masukkan pakan tersebut kedalam penyungkup plastik yang telah diisi dengan serangga uji. d) Buat suspensi konidiumBeauveria bassianadalam erlenmeyer dengan kerapatan konidium sesuai standar e) Semprotkan suspensi konidium ke larva atau serangga uji di dalam cawan petri yang sudah disiapkan. f) Amati setiap hari jumlah larva atau serangga ujiyang mati. g) Persentase kematian larva atau serangga dihitung dengan rumus sebagai berikut : PK =

SM x 100 % SU

Keterangan : PK adalah persentase kematian serangga uji SMadalah serangga uji terinfeksi SU adalah total serangga uji yang diamati h) Perlakuan uji patogenisitas dilakukan minimal sebanyak tiga ulangan 112

Lampiran F (normatif) Pengujian patogenisitas terhadap tanaman tembakau F.1 Prinsip Mengamati terjadinya patogenisitas berupa timbulnya bercak nekrotik pada daun yang diinokulasiAPH Beauveria bassiana F.2 Bahan a. Bibittembakau (Nicotiana tabacum) berumur 3-4 minggu; b. Sampel APH Beauveria bassiana; c. Akuades. F.3 Peralatan a. Erlenmeyer 250 ml; b. Syringe. F.4 Prosedur pengujian patogenisitas

a) Siapkan bibit tembakau berumur 3-4 minggu dalam polibag dan siramlah dengan air secukupnya. b) Siapkan syringe yang sudah disterilkan. c) Buat suspensi konidium APH Beauveria bassiana dalam erlenmeyer dengan kerapatan konidium sesuai standar d) Suntikkan secara aseptik tulang daun tembakau pada permukaan bawah dengan susupensi konidium APH Beauveria bassiana e) Amati ada tidaknya bercak nekrotik pada bagian yang disuntik. Pengamatan dilakukan setiap hari selama 5 hari f) Bila tidak timbul bercak nekrotik, berarti reaksinya negatif atau tidak patogenik

113

Lampiran G (informatif) Morfologi APHBeauveria bassiana G.1Morfologi Makroskopis

APHBeauveria bassiana memiliki tipe pertumbuhan apikal, pada awal pertumbuhannya koloni berwarna putih, dan selanjutnya koloni akan tampak menebal, kadang-kadang berubah menjadi agak kekuningan. G.2

Morfologi Mikroskopis

APHBeauveria bassiana memiliki konidium berbentuk oval agak bulat sampai bulat telur, bersel satu, hialin dengan diameter 2-3 µm. Konidium Beauveria bassiana dihasilkan secara aseksual. Konidium ini terbentuk pada ujung dan sisi-sisi konidiofor dan melekat pada sterigma yang pendek. Konidiumterbentuk secara tunggal, pertumbuhannya mengikuti pola berselang seling, sehingga setelah konidium masak dan terlepas dari konidiofornya tampak berbentuk zig-zag

A C

B

Keterangan : A : konidium B :konidiosporabentuk zig-zag C : konidispora Gambar 7 - Morfologi mikroskopikAPHBeauveria bassiana 114

Lampiran H (informatif) Pembuatan medium agar H.1 Prinsip Membuat medium agar H.2 Bahan a. Medium Potato Dextrose Agar (PDA) instan b. Medium Sauboraud Dextrose Agar (SDA) instan H.3 Peralatan a. Cawan petri berdiameter 15 cm; b. Erlenmeyer 250 ml; c. Pipet tetes. d. Otoklaf H.4 Prosedur pengujian patogenesitas a. b. c. d. e.

f. g. h.

i. j. k. l. m.

Timbang medium PDA sebanyak 39 g atau 65 g untuk medium SDA. Masukkan medium tersebut kedalam gelas piala 1000 ml. Tuang akuades ke dalam gelas piala tersebut sampai volume mencapai 1000 ml. Tuangkan air kedalam panci kecil dan letakkan diatas nyala api kompor. Letakkan gelas pialakedalam panci tersebut, kemudian aduk terus sampai medium PDA atau SDA didalamnya homogen dan agak mengental (kurang lebih 1jam) Siapkan tabung reaksi pada rak atau erlenmeyer yang telah disteril, serta syringe5ml. Setelah medium PDA atau SDA homogen dan agak mengental kompor dimatikan. Ambil PDA atau SDA dengan menggunakan syringesebanyak 5 ml dan tuangkan kedalam tabung reaksi, kemudian ditutup kapas dan aluminium foil. Sebagai stok, tuangkan medium PDA atau SDA kedalam erlenmeyer sesuai dengan yang kita inginkan, kemudian ditutup dengan kapas dan aluminium foil. Tabung reaksi dan erlenmeyer yang telah terisi PDA atau SDA kemudian dibungkus plastik dan disteril dengan menggunakan otoklaf. Setelah proses sterilisasi menggunakan otoklaf selesai,medium yang menggunakan tabung reaksi kemudian dimiringkan. Inkubasikan media tersebut selama 1 hari -2 hari, pisahkan medium yang terkontaminasi. Medium dapat digunakan untuk perhitungan viabilitas konidium, maupun untuk perbanyakan jamur. Apabila medium tersebut belum digunakan sebaiknya disimpan dalam lemari es dengan suhu 5°C. 115

PEDOMAN UJI MUTU DAN UJI EFIKASI LAPANGAN AGENS PENGENDALI HAYATI (APH)

Recommend Documents