Papillomaviry a HPV typizace (nejen) v roce 2015 D. Konvalinka, J. Mazurová, I. Urbanovská, R. Měch, B. Kubová, J. Šimová, M. Uvírová, J. Dvořáčková
CGB laboratoř a.s., Ostrava www.pathology.cz
Aktuální otázky gynekologické cytologie, Praha, 28.3. 2015
Papillomaviry (PV) evolučně stará a rozsáhlá skupina virů > 200 PV
nalezeny u lidí, dalších savců, ptáků, plazů klasifikace na základě podobnosti (homologie) ORF sekvence L1 genu v genomu PV 29 rodů (homologie ORF L1: 60%) – druhy (60-70%) – typy (71-89%)
Papillomaviry (PV, pokračování)
Lidské papillomaviry (Human Papillomaviruses, HPV) • více než 130 typů HPV – 5 rodů (α, β, γ, μ, ν)
• druhově specifické • striktně epiteliotropní • tkáňově specifické – typy kožní a slizniční
HPV (pokračování) nízce rizikové typy (low risk, LR) HPV: 6, 11, 42, 43, 44, 54, 61, 70, 72, 81 vysoce rizikové typy (high risk, HR) HPV: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 (73, 82)
α, β, γ, μ, ν – papillomaviry
www: openi.nlm.nih.gov
Leden 2015:
HPV: 5 rodů – 49 druhů – 202 typů
μ ν
HPV typy a asociované tumory
Jak HPV vypadá? „představy“ :
Skutečný vzhled:
Lidský papillomavirus typ 16, kompletní genom (7904 bp)
www.microbiologybytes.com
HPV infekce nejběžnější virová STI incidence: cca 6 *106/rok prevalence: cca 20 *106
celoživotní riziko: 50 – 75 % clearance: 70% po 1 roce, 90% po 2 letech
Infekce HPV v epitelu • infekce kožního epitelu – diferenciace buněk na keratinocyty; virový genom v epizomální formě • infekce slizničního epitelu – vývoj lézí; možná integrace genomu HPV do buněčného genomu
HPV replikace:
Lowy D.R. et Schiller J.T.: Prophylactic human papillomavirus vaccines, J.Clin.Invest. 116:1167-1173 (2006)
Interakce E6 – p53
E 6 protein
Interakce E7 – pRb
E 7 protein
http://www.telemedicine.org/warts/edit_cutmanhpv.htm
HPV a nádory I Skupina LR HPV – benigní nádory: 1. verruca plana, v. plantaris, v. vulgaris – ruce a nohy (chodidla) 2. condylomata accuminata – vulva, vagina, cervix, penis, anální oblast; 3. epiglotis a hlasivky – rekurentní (laryngeální) papilomatóza 4. fokální epiteliální hyperplázie – dutina ústní
HPV a nádory II Skupina HR HPV Skvamocelulární ca (80 – 90 %) hrdlo děložní, vulva, vagina, anus, penis oropharynx (mandle, báze jazyka), jícen
adenokarcinom (10 – 20 %) nejagresivnější HPV 18
HPV a nádory III • IARC a WHO označily HPV za karcinogeny • HR HPV (HR typy 16 a 18) jsou původcem: 25 % nádorů hlavy a krku > 50 % nádorů vulvy a vaginy cca 90 % nádorů anální oblasti a > 70 % karcinomů děložního hrdla Muńoz et al, N. Engl. J. Med. 2003;348:518-527 Bernard H.U. et al, IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans; vol 64
HPV a nádory IV
DNA lidských papillomavirů byla nalezena téměř u všech karcinomů (85 – 99,7 %) a jim předcházejících lézí děložního hrdla
Karcinom děložního hrdla (cervikální karcinom, CxCa) • 2. nejčastější nádorové onemocnění u žen (ihned po nádorech prsu) v EU (věk. skupina 15-44 let) • 57 000 případů ročně / 25 000 úmrtí na CxCa v Evropě • časná stádia jsou většinou asymptomatická • klinické projevy se objevují u pokročilých stádií • cíl: detekce preinvazivních stádií • časná detekce: 5-leté přežívání > 90%
Karcinogeneze „skin to skin“ přenos (sexuální / genitální kontakt) 70% clearance po 1 roce, 90% po 2 letech od inf.
perzistence: predikuje CIN3+ progrese
invaze
Lowy D.R. et Schiller J.T.: Prophylactic human papillomavirus vaccines, J.Clin.Invest. 116:1167-1173 (2006)
Lowy D.R. et Schiller J.T.: Prophylactic human papillomavirus vaccines, J.Clin.Invest. 116:1167-1173 (2006)
Incidence a mortalita na ZN děložního hrdla v ČR
Zastoupení klinických stádií CxCa
10
1
Srbsko a Černá Hora
34.4
20
Dánsko
16.3
2
Rumunsko
30.3
21
Ruská federace
16.1
3
Bosna a Hercegovina
26.6
22
Rakousko
14.8
4
Albánie
25.1
23
Německo
14.7
5
Polsko
24.8
24
Francie
13.6
6
Bulharsko
24.4
25
Norsko
12.9
7
Slovensko
23.6
26
Belgie
12.8
8
Litva
23
27
Itálie
11.6
9
Lotyšsko
22.6
28
Švýcarsko
10.9
10
Česká Republika Česká republika
22.1
22,1
29
Lucembursko
10.7
11
Moldavsko
21.4
30
Švédsko
10.7
12
Estonsko
21.4
31
Řecko
10.7
13
Slovinsko
20.3
32
Velká Británie
10.5
14
Maďarsko
20.2
33
Španělsko
10.3
15
Bělorusko
20.2
34
Nizozemsko
9.4
16
Ukrajina
18.8
35
Island
9.4
17
Portugalsko
18.4
36
Irsko
8.4
18
Chorvatsko
18
37
Malta
6.6
19
Makedonie
16.4
38
Zdroj dat: GLOBOCAN 2002 C53 - Hrdlo děložní – cervix uteri, ženy srovnání incidence v ČR s ostatními zeměmi Evropy, přepočet na 100 000 osob
38
Finsko
Finsko
6,2
6.2
Globocan 2008: incidence CxCa ČR:
11. místo; 18,9 / 100 000 osob
Finsko:
40. místo; 5,6 / 100 000 osob
Globocan 2012: incidence / mortalita CxCa
Ferlay J, Soerjomataram I, Ervik M, Dikshit R, Eser S, Mathers C, Rebelo M, Parkin DM, Forman D, Bray, F. GLOBOCAN 2012 v1.0, Cancer Incidence and Mortality Worldwide: IARC CancerBase No. 11 [Internet]. Lyon, France: International Agency for Research on Cancer; 2013. Available from: http://globocan.iarc.fr, accessed on day/month/year.
Screening CxCa Pap test • identifikuje dysplázie / prekancerózy / CxCa • ↑ specificita / ↓ sensitivita HPV test • identifikuje ženy v riziku • ↑ negativní prediktivní hodnota (CIN, CxCa) • ↑ reproducibilita Kombinovaný přístup • co-testing spolu s cytologií (≥ 30 let) • ASCUS-triage: sledovací interval (≥ 21 let) Am J Clin Pathol 2012; 137:516
2012: Cervical Screening Guidelines
Hlavní body: • žádný každoroční screening • Věk: < 21 let: bez screeningu 21 – 29 let: cytologie 1x 3 roky 30 – 65 let: co-testing 1x 5 let nebo cytologie 1x 3 roky > 65 let: bez CIN2+ během posledních 20 let = STOP > 65 let: CIN2+ během posledních 20 let = rutinní scr. nejméně dalších 20 let
Zdůvodění intervalu pro co-testing:
cytologie 1x rok BMJ 2008;377:a1754
co-testing 1x 5 let
Situace v ČR? Vyhláška č. 70/2012 Sb., § 7 – obsah a časové rozmezí gynekologické preventivní prohlídky v oboru gynekologie a porodnictví – 1x ročně, zpravidla po 11 měsících: a) – k) f) odběr materiálu z děložního čípku k cytologickému, případně bakteriologickému nebo virologickému vyšetření; neprovádí se u virgo žen, 95201 – Vyšetření přítomnosti NK HR HPV v cervikálním stěru pro screening ca děložního hrdla - u žen se sporným cytologickým nálezem (odhad: cca 4 % všech klientek ve screeningu)
Jak zjistit přítomnost původce těchto nádorových onemocnění – lidských
papillomavirů – v lidském organismu?
Metody detekce HPV NEPŘÍMÉ - kolposkopie, cytologie, histologie a metody sérologické PŘÍMÉ
- elektronmikroskopické, imunohistochemické a metody molekulárně biologické
Nepřímý průkaz – cytologické potvrzení HPV infekce (v Pap nátěru)
Přímý průkaz – elektronová mikroskopie
Molekulárně biologické metody pro detekci HPV DNA Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test (Qiagen) - přímá hybridizace HPV DNA s RNA sondou cobas 4800 HPV Test (Roche) - izolace DNA a následná real-time PCR; HPV16, HPV18 Cervista HPV HR (Hologic) - Invader; HPV16, HPV18 APTIMA HPV Assay (Gen-Probe / Hologic) - TMA
Hybrid Capture 2 High-Risk HPV DNA Test (Qiagen) • určení HPV pozitivity (HR) nebo HPV negativity • přímá hybridizace virové DNA s RNA sondou, užití protilátek, chemiluminiscenční detekce • amplifikace signálu • 13 HR HPV typů: HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 • bez izolace DNA • bez amplifikace virové DNA • bez interní kontroly (pouze kalibrátory)
cobas 4800 HPV Test (Roche) – specifická detekce HPV 16 a HPV 18 • izolace virové DNA z odebraného vzorku v transportním médiu, real – time PCR • výhoda: možnost genotypizace , tj. stanovení přítomnosti konkrétního typu HR HPV 16 a HR HPV 18 (kromě ostatních HR HPV) • 14 HR HPV typů: HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 • amplifikace virové DNA • interní kontrola (lidský β-globin)
Cervista HPV HR (Hologic) • určení HPV pozitivity (HR) nebo HPV negativity • INVADER technologie, hybridizace virové DNA s FRET sondou • amplifikace signálu • 14 HR HPV typů: HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 • izolace DNA • bez amplifikace virové DNA • interní kontrola (lidský HIST2H2BE)
APTIMA HPV Assay – detekce mRNA E6 a E7 virových onkogenů (detekce exprese) • plně automatická izolace a detekce virové mRNA z odebraného vzorku v transportním médiu • stanovení exprese virových onkogenů E6 a E7, tj. jejich integrace do genomu hostitelské buňky = riziko maligní transformace buňky • 14 HR HPV typů: HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 • interní kontrola • amplifikace cílové RNA • RUO assay: HPV 16 vs. HPV 18/45
Vakcinace • Silgard – vakcína proti vysoce rizikovým typům HPV 16, 18 a nízce rizikovým typům HPV 6, 11 – ženy ve věku 9-26 let, k prevenci CxCa, prekanceróz a genitálních bradavic
– muži ve věku 9-26 let, k prevenci genitálních bradavic
• Cervarix – vakcína proti vysoce rizikovým typům HPV 16, 18 – ženy ve věku 10-25 let, k prevenci CxCa a prekanceróz – není schválená pro použití u mužů k prevenci genitálních bradavic
Prosinec 2014:
Gardasil 9 • vakcína proti typům vysoce rizikovým typům HPV 16, 18, 31, 33, 45, 52, 58 a nízce rizikovým typům HPV 6, 11 – ženy ve věku 9-26 let, k prevenci CxCa, vaginálního, vulvárního a análního ca, prekanceróz a genitálních bradavic – muži ve věku 9-15 let, k prevenci análního ca, prekanceróz a genitálních bradavic
Závěrem: Detekce HPV a jeho vysoce rizikových genotypů NENÍ soupeřem cytologického vyšetření.
Dle názorů expertů a současných poznatků k sobě patří a vzájemně se doplňují.
Děkuji za pozornost
www.pathology.cz
