SUMBER BELAJAR PENUNJANG PLPG 2017
MATA PELAJARAN/PAKET KEAHLIAN AGRIBISNIS PERBENIHAN DAN KULTUR JARINGAN TANAMAN
BAB VIII PENGUJIAN MUTU BENIH
KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN KEBUDAYAAN DIREKTORAT JENDERAL GURU DAN TENAGA KEPENDIDIKAN 2017
BAB VIII. PENGUJIAN MUTU BENIH TANAMAN
Kompetensi Inti
: Menguasai materi, struktur, konsep, dan pola piker keilmuan yang mendukung mata pelajaran yang diampu
Indikator Pencapaian Kompetensi (IPK) : 1. Mengambil contoh benih 2. Menetapkan kadar air benih 3. Menganalisis kemurnian fisik benih 4. Menguji viabilitas benih 5. Menguji kesehatan benih 6. Menetapkan berat seribu butir 7. Mengadministrasikan hasil pengujian mutu benih
Uraian Materi Tujuan Pengujian Mutu Benih Pengujian mutu benih di laboratorium bertujuan untuk mengetahui kualitas benih, meliputi kualitas genetis, morfologis/fisik, dan fisiologis benih yang digunakan untuk keperluan penanaman.
Keterangan mutu benih tersebut mungkin diperlukan oleh
produsen, pengawas, pedagang, maupun pemakai benih. Keterangan mutu benih untuk keperluan pengawasan dan sertifikasi benih, pengujian mutunya harus dilakukan di laboratorium Balai Pengawasan Sertifikasi Benih yang terdapat di setiap daerah. Pengujian mutu benih di laboratorium dibedakan menjadi dua kelompok, yaitu pengujian standar dan pengujian khusus. Pengujian standar adalah pengujian untuk keperluan pengisian/pengecekan data label. Pengujian standar umumnya terdiri atas (1) pengujian kadar air, (2) pengujian kemurnian, (3) penetapan varietas lain, dan (4) pengujian daya tumbuh. Pengujian khusus atau spesifik adalah pengujian tentang sifat-sifat benih yang mencirikan mutu spesifik benih atau kelompok benih dan hanya dilakukan atas permintaan khusus dari pengirim/pemilik benih.
Pengujian khusus terdiri atas (1)
1
pengujian viabilitas benih secara biokemis, (2) penetapan bobot 1000 butir, (3) pengujian heterogenitas kelompok benih, (4) pengujian kesehatan benih, (5) pengujian kebenaran/verifikasi jenis/kultivar, dan (6) pengujian vigor. Prosedur pengujian mutu benih menggunakan beberapa standar, yaitu: 1. BPSB (Balai Pengawasan dan Sertifikasi Benih), merupakan lembaga pemerintah Indonesia yang dibentuk berdasarkan SK Mentan 460/KPTS/ORG/I/1971. Meskipun Indonesia tidak menjadi anggota ISTA, tetapi patokan yang digunakan untuk menganalisis benih sama dengan ketentuan yang berlaku di ISTA. 2. ISTA (International Seed Testing Association), merupakan lembaga sertifikasi swasta yang berhak menerbitkan sertifikat benih yang dihasilkan oleh negara-negara anggotanya. Banyak negara di Eropa yang menjadi anggota lembaga ini. 3. AOSCA (Association of Official Seed Certifying Analysts), merupakan lembaga sertifikasi yang berhak menerbitkan sertifikat bagi benih yang akan diperdagangkan di Amerika Serikat. 4. OECD (Organization for Economic Cooperation and Development), merupakan lembaga sertifikasi yang berhak menerbitkan sertifikat bagi benih yang akan diperdagangkan di Eropa. Pengambilan contoh benih Tujuan dari pengambilan contoh adalah untuk mendapatkan contoh dalam jumlah yang sesuai untuk pengujian, dan mempunyai susunan komponen yang sama dengan kelompok benihnya. Kelompok benih ialah sejumlah tertentu dari benih baik dalam bulk, silo, ataupun wadah dengan persyaratan sebagai berikut: 1. setiap bagian mempunyai komposisi dan kualitas yang sama. 2. kuantitas maksimum adalah: (1) benih tanaman pertanian dan hortikultura yang ukuran bijinya lebih besar atau sama dengan biji Triticum spp. adalah 20.000 kg , (2) benih tanaman pertanian yang ukuran bijinya kurang dari biji Triticum spp. adalah 10.000 kg, (3) benih tanaman keras (tree seed) dengan ukuran biji lebih besar atau sama dengan biji Fagus spp. adalah 5.000 kg (4) benih yang ukuran bijinya lebih kecil dari biji Fagus spp. adalah 1.000 kg.
2
Bagi kelompok benih dengan kuantitas melebihi ketentuan di atas, maka kelompok benih tersebut harus dipecah menjadi beberapa bagian dengan kuantitas yang tidak melebihi ketentuan yang ditetapkan.
Contoh benih ialah sejumlah tertentu benih yang mewakili dari suatu kelompok benih yang cara pengambilannya memenuhi ketentuan yang ditetapkan. Contoh primer ialah contoh benih yang didapat dari satu kali pengambilan baik dari bulk, silo, wadah benih ataupun aliran benih. Contoh komposit ialah gabungan dari semua contoh primer. Contoh kiriman ialah contoh benih yang didapat dengan jalan pengurangan yang merata dari contoh komposit untuk dikirim ke laboratorium benih guna keperluan pengujian mutu. Contoh kerja ialah contoh benih yang di dapat dengan jalan pengurangan yang merata dan bertahap dari contoh kiriman sesuai dengan berat yang ditetapakan untuk keperluan salah satu pengujian mutu di laboratorium.
Cara pengambilan contoh kiriman. Petunjuk Umum Pada kenyataannya suatu kelompok benih tidak pernah benar-benar homogen. Oleh karena itu ditetapkan cara-cara pengambilan contoh supaya diperoleh contoh yang mewakili. Dalam rangka sertifikasi dan pengawasan hanya petugas yang diberi wewenang yang dapat melakukan pengambilan contoh benih untuk keperluan pelabelan dan pengecekan label. Cara pengambilannya harus memenuhi ketentuan-ketentuan yang telah ditetapkan. Suatu kelompok benih harus sedemikian rupa sehingga setiap wadah atau bagiannya dapat diambil contohnya. Pemilik benih harus memberi keterangan yang terinci tentang asal benih. Apabila diketahui bahwa kelompok benih tidak seragam, maka petugas pengambil contoh berhak menolak untuk melaksanakan pengambilan contoh. Kelompok benih yang beratnya sama pada setiap wadah, maka contoh akan diambil secara acak dari setiap wadah, atau aliran benih. Pada benih-benih yang lengket pengambilan contoh dilakukan dengan tangan, sedangkan untuk benih lainnya digunakan alat pengambil contoh benih. Bagi benih yang disimpan dalam wadah-wadah kecil seperti kaleng, paket atau wadah yang kedap air, kantong kertas dan lain-lan sebaiknya pengambilan contoh 3
dilakukan sebelum benih tersebut dimasukkan ke dalam wadah. Apabila hal ini tidak mungkin, maka sejumlah wadah yang mewakili harus dibuka kemudian sesudahnya wadah tersebut harus disegel kembali atau dipindahkan ke wadah yang baru. Contoh-contoh primer yang menunjukkan perwujudan yang seragam digabung menjadi contoh komposit. Biasanya contoh tersebut terlalu banyak untuk langsung dikirim ke laboratorium, karenanya diadakan pengurangan sesuai dengan berat yang telah ditetapkan bagi tiap-tiap spesies.
Alat pengambil contoh dan cara penggunaannya 1. Pengambil contoh tipe batang (stick trier) Alat tersebut pada prinsipnya terdiri dari satu tabung dengan selubung penutup, terbuat dari bahan yang tahan karat. Bagian ujungnya meruncing, tidak atau mempunyai beberapa celah dengan jumlah dan ukuran tertentu, sesuai dengan macam benih dan wadahnya. Misal untuk benih serealia dalam karung, panjang tabung 76,2 cm, diameter 2,54 cm dengan 6 celah. Sedangkan yang disimpan dalam silo/bin panjangnya sampai 160 cm, diameter 3,8 cm dengan 6-9 celah. Tongkat pengambilan contoh tanpa celah penggunaannya secara horizontal, vertikal ataupun secara diagonal. Pada saat penusukkan dalam posisi apapun tongkat pengambil contoh harus dalam keadaan tertutup dan bagian yang bercelah menghadap ke bawah. Sesudah itu tongkat diputar sedemikian rupa hingga tiap-tiap celah terisi seluruhnya dengan benih, kemudian ditutup perlahan-lahan agar benih tidak rusak/pecah, lalu ditarik hati-hati dan benihnya ditampung. Bekas-bekas lubang tusukan pada karung dirapihkan kembali.
2. Pengambil contoh Nobbe Alat pengambil contoh Nobbe berbentuk tabung dengan ujung yang meruncing dan mempunyai lubang oval dekat pada ujungnya, dibuat cukup panjang untuk mencapai bagian tengah karung. Panjang keseluruhan dari alat tersebut ± 50 cm, terdiri dari gagang 10 cm, ujung yang lancip 6 cm, hingga bagian yang dapat menampung benih tinggal 34 cm. ini sangat cocok untuk mencapai bagian tengah dari berbagai ukuran karung. Untuk benih serealia, diameter lubang 1,4- cm dan untuk clover atau benih yang sejenis cukup 1 4
cm. Pengambilan contoh nobbe hanya cocok untuk pengambilan contoh benih dalam karung, tetapi tidak dapat digunakan bagi benih yang disimpan dalam bulk/onggokan. Cara penggunaan alat ini adalah dengan jalan menusukkan ke dalam karung dengan sudut 30° (terhadap garis horizontal), lubang menghadap ke bawah hingga mencapai bagian tengah karung. Kemudian diputar 180° agar lubang menghadap ke atas dan alat tersebut lalu ditarik dengan kecepatan yang makin berkurang hingga benih yang jatuh dalam lubang mewakili seluruh bagian sepanjang penusukkan. Apabila pengambil contoh nobbe yang digunakan cukup panjang hingga dapat mencapai bagian sisi yang lain dari karung, maka harus ditarik dengan kecepatan yang tetap. Penusukkan pada karung dilakukan pada bagian atas, tengah dan bawah.
3. Pengambilan contoh dengan tangan Untuk benih yang lengket dan bersekam pengambilan contoh dilakukan dengan tangan. Kelemahannya kedalaman maksimum yang dicapai hanya ± 40 cm, berarti tidak dapat mengambil contoh pada bagian bawah karung atau bin. Untuk hal tersebut digunakan cara khusus, yaitu dengan jalan mengurangi sebagian atau mengosongkan isi karung dan isinya dikembalikan lagi setelah pengambilan contoh dilakukan.
Intensitas pengambilan contoh: Benih dalam karung. Kelompok benih yang terdiri dari satu karung saja, cara pengambilan contohnya harus dilakukan beberapa kali dari berbagai sudut. Kelompok benih yang terdiri dari 1-6 karung pengambilan contohnya dilakukan pada setiap karung. Untuk kelompok benih yang terdiri lebih dari 6 karung pengambilan contohnya dilakukan pada 5 karung ditambah paling sedikit 10% dari jumlah seluruh karung dengan pembulatan ke atas, maksimum 30 karung. Pemilihan karung yang akan diambil contohnya dilakukan secara acak.
Benih dalam bulk Pengambilan contoh dilakukan dengan dasar seolah-olah benih tersebut disimpan dalam karung dengan ukuran standar. Pengambilan dilakukan dari berbagai sudut bulk. 5
Benih dalam wadah kecil Pengambilan contoh dilakukan dengan cara mengambil sejumlah wadah tanpa dibuka yang beratnya diperkirakan dapat memenuhi ketentuan seperti pada tabel 1. Berat isi dari satu atau beberapa wadah dari satu kelompok benih dianggap mewakili isi seluruh wadah.
Berat minimum contoh kiriman Berat minimum contoh kiriman yang diperlukan bagi pengujian benih laboratoris dapat dilihat dari daftar tabel 1, kecuali untuk keperluan penetapan kebenaran species/kultiar/varietas, tempat asal, dan pengujian heterogenitas ditentukan tersendiri. Apabila contoh kiriman tidak memenuhi ketentuan dalam daftar tabel 1 disebabkan harga benih yang sangat mahal, maka dalam laporan hasil pengujian ditulis; berat contoh kiriman hanya ........ gram, tidak memenuhi persyaratan yang ditetapkan.
Pemberian tanda segel dan pengiriman Tiap contoh kiriman hendaklah diberi tanda dan disertai dengan keterangan yang diperlukan hingga diketahui hubungannya dengan kelompok benih dari mana contoh tersebut diambil, kemudian disegel. Sebaiknya contoh tersebut dimasukkan ke dalam kantong kertas, yute, kain, atau plastik untuk menghindari kerusakan dalam perjalanan. Contoh untuk pengujian daya tumbuh sebaiknya jangan dimasukkan ke dalam kantong plastik, sebaliknya untuk penetapan kadar air. Apabila pemilik benih ingin menguji sendiri contoh benihnya, hendaknya merupakan duplikat dari contoh yang dikirim ke laboratorium pemerintah.
Cara mendapatkan contoh kerja Contoh kerja didapatkan dengan jalan pengurangan secara merata dan bertahap dari contoh kiriman sedemikian rupa hingga contoh tersebut mewakili kelompok benihnya. Cara mendapatkan contoh kerja ada 4 macam yaitu; a. Cara membagi mekanis Cara membagi mekanis dapat digunakan untuk segala macam benih, kecuali bagi benih yang lengket atau bersekam. Alat yang digunakan adalah pembagi mekanis 6
(mechanical devider). Prinsip kerja alat tersebut adalah dapat membagi benih yang dimasukan ke dalamnya menjadi 2 bagian yang sama. Untuk mendapatkan contoh kerja yang homogen, kedua bagian tersebut bersama-sama dimasukkan kembali ke dalamnya dan akan terbagi menjadi 2 bagian lagi. Hal tersebut diulang 2 atau 3 kali. Pengurangan dilakukan dengan jalan memasukkan satu bagian kedalam alat tersebut untuk dijadikan 2 bagian yang sama, begitu seterusnya sampai mendapatkan contoh kerja dengan berat sesuai dengan ketentuan dalam tabel 1. Macam alat pembagi mekanis adalah: conical devider, soil devider, dan centrifugal devider (gamet type).
b. Cara mangkok Cara ini digunakan untuk benih-benih kecil (kubis, bayam, tembakau, rumputrumputan dan lain-lain) yang sifatnya tidak mudah melenting dan menggelinding dan berat minimum contoh kerjanya kurang atau sama dengan 10 gram. Prinsip kerjanya adalah 6 atau 8 mangkok diletakkan secara acak di atas sebuah baki, kemudia benih yang telah diaduk terlebih dahulu ditaburkan secara merata di atasnya. Benih yang jatuh ke dalam mangkok setelah dikumpulkan merupakan contoh kerja. Mula-mula ditimbang isi dari 6 mangkok. Apabila belum memenuhi berat minimum, ditambah dengan satu atau dua mangkok berikutnya. Bilamana isi kedelapan mangkok tersebut masih belum memenuhi ketentuan, pekerjaan harus diulang kembali.
c. Cara sendok (spoon methode) Cara ini hanya digunakan untuk benih-benih yang amat kecil dan tidak lengket. Benih diaduk-aduk, lalu ditebarkan merata di atas baki, dengan menggunakan sendok dan spatula sejumlah benih diambil secara acak dari berbagai tempat, hingga tercapai berat minimum contoh kerja. Jumlah pengambilan paling sedikit 5 kali.
d. Cara parohan dan modifikasinya Alat yang digunakan adalah sebuah baki dan sebuah kotak yang terbagi atas beberapa bagian berbentuk kubus dengan ukuran yang sama. Setengah dari jumlah kubus-kubus tersebut bagian bawahnya tidak beralas dan diatur secara berselang seling
7
dengan yang beralas. Prinsip kerjanya adalah kotak tersebut diletakkan di atas baki, kemudian benih yang telah diaduk-aduk sebelumnya ditebarkan merata di atasnya. Dengan mengangkat kotaknya, lebih kurang separuh dari contoh benih akan tertinggal di atas baki. Pekerjaan dapat diulang beberapa kali hingga benih yang tertinggal di baki mencapai jumlah berat contoh kerja yang ditentukan. Modifikasi cara ini adalah sebagai berikut: benih, dituangkan di atas suatu permukaan yang datar dan rata, diaduk-aduk, kemudian dengan suatu alat pipih yang bertepi rata (misalnya spatula), dibagi menjadi 2 bagian. Tiap bagian dibagi lagi menjadi 2 bagian, dan seterusnya hingga didapat 8 bagian yang lebih kurang sama. Dengan mengambil bagian-bagian yang berselang seling secara hati-hati, contoh benih tersebut dapat terbagi contoh kerja yang dikehendaki.
Berat minimum contoh kerja Berat minimum contoh kerja untuk pengujian kemurnian harus memenuhi persyaratan seperti ketentuan dalam daftar 1 dengan beberapa pengecualian, yaitu: a. Benih yang tidak terdapat dalam daftar 1, berat contoh kerja kemurnian dan hal-hal yang sehubungan ditentukan dengan menggunakan daftar 1, yang bijinya mempunyai ukuran dan berat yang sama dengan biji contoh tersebut (dengan jumlah ± 2500 biji). b. Benih dari spesies dengan ukuran ekstra kecil atau besar berat contoh kerja kemurnian didasarkan pada jumlah yang tidak kurang dari 2000 biji tanpa mempertimbangkan daftar 1 (beratnya tidak boleh kurang dari 0,25 gram).
Penyimpanan contoh benih Sebelum pengujian Apabila contoh benih tidak dapat langsung diuji, maka harus disimpan sedemikian rupa sehingga perubahan mutu dapat ditekan sedikit mungkin, misalnya disimpan dalam ruang yang sejuk dan berventilasi cukup. Untuk mempertahankan kadar air benih dapat disimpan dalam wadah kedap udara dan ruangan dengan suhu 20-22°C. Di samping itu penyimpanan jangan sampai menyebabkan bertambahnya jumlah biji keras (pada leguminosae). Oleh karena itu hendaknya diusahakan agar pengujian dilakukan segera setelah contoh benih diterima di laboratorium. 8
Sesudah pengujian Sisa contoh benih dan contoh kerja harus disimpan paling tidak 1 tahun. Hal ini penting karena mungkin harus dilakukan pengujian ulangan baik di laboratorium semula atau laboratorium lain. Penyimpanan harus dilakukan di ruangan yang sejuk, cukup ventilasi dan suhunya dapat diatur. Suhu dan kelembapan nisbi yang tinggi menyebabkan kemunduran viabilitas dengan cepat, dan ini harus dihindari, walaupun tidak bertanggung jawab akan kemunduran daya tumbuh selama penyimpanan. Perlakuan dengan insektisida dan fungisida kadang-kadang diperlukan.
A. Penetapan Kadar Air Kadar air benih ialah berat air yang hilang karena pemanasan, atau air yang dapat dikumpulkan karena destilasi (dengan cara yang ditetapkan) yang dinyatakan dalam persen terhadap berat asli contoh benih. Tujuan penetapan kadar air benih adalah untuk mengetahui kadar air benih dengan menggunakan metode yang sesuai bagi keperluan rutin. Prinsip dalam penetapan kadar air benih adalah mengusahakan penguapan air sebanyak mungkin tetapi dapat menekan terjadinya oksidasi, decomposisi atau hilangnya zat-zat yg mudah menguap. Alat yang diperlukan untuk penetapan kadar air terdiri dari (1) Alat penghancur benih (seed grinder dan atau alat penumbuk), (2) Oven dan pelengkapannya yaitu desicator/cawan porselin bertutup, tang asbes, sarung tangan asbes, (3) Alat destilasi, (4) Saringan dengan ukuran lubang 0,50 mm, 1,00 mm dan 4,00 mm, (5) Timbangan analitik.
Prosedur Contoh kiriman yang dapat diterima di laboratorium adalah yang memenuhi persyaratan, yaitu dimasukkan dalam wadah kedap udara. Selama penetapan sedikit mungkin contoh berhubungan dengan udara luar. Untuk spesies yang tidak memerlukan penumbukan, contoh benih tidak boleh lebih dari 2 (dua) menit berasa di luar sebelum
9
dimasukkan ke dalam oven/alat distilasi/alat pengukur kadar air. Penimbangan dilakukan dalam gram dengan ketelitian 3 desimal.
Contoh kerja Penetapan kadar air dilakukan dengan menggunakan 2 ulangan yang pengambilan contoh kerjanya dilakukan secara terpisah. Berat yang ditetapkan tergantung dari metoda yang dipakai dan ukuran wadah (crucible). Pada metoda oven contoh kerja yang diperlukan adalah 4-5 gram (bila digunakan wadah dengan diameter < 8 cm) atau 10 gram (bagi wadah dengan diameter 8 cm), sedangkan untuk metoda distilasi tidak ditentukan asal dapat diperoleh air 2-5 ml. Cara mengambil contoh kerja dari contoh kiriman adalah dengan jalan mengaduk terlebih dahulu contoh kiriman atau memasukkan contoh kiriman ke dalam kedua wadah tersebut, agar diperoleh contoh kerja yang representatif dan homogen. Waktu yang diperlukan untuk mengambil contoh kerja tidak boleh lebih 30 detik.
Menghancurkan benih Benih yang besar harus dijadikan partikel/butir-butir yang lebih kecil dengan cara digiling atau ditumbuk. Pengecualian berlaku bagi yang kandungan minyaknya sangat tinggi hingga sulit digiling atau minyaknya mengandung yodium tinggi (contohnya benih limun), karena akan terjadi oxidasi. Menggiling/menumbuk benih dilakukan pada subsample sebelum contoh kerja diambil. Persyaratan besarnya partikel/butir-butir hasil tumbukan tidak sama, tergantung dari spesiesnya, yaitu: (a). Bagi benih serealia (termasuk jagung, padi, dan sorghum) dan kapas minimum 50% dari partikel harus dapat melewati saringan dengan mesh 0,50 mm dan tidak lebih dari 10% tertinggal pada saringan dengan mash 1,00 mm. (b). Bagi benih leguminosa (ficia, phaseolus, pisum, dan lupinus) dan tanaman keras (tree seed) seperti quercus dan fagus, minimum 50% dari partikel harus melewati saringan dengan mesh 4,00 mm.
10
Pengeringan pendahuluan Pada benih yang memerlukan penghancuran apabila kadar airnya diperkirakan cukup tinggi (dicek dengan alat pengukur kadar air), yaitu untuk benih kedele > 10% benih padi > 13% atau > 17% untuk serealia lainnya, maka perlu dilakukan pengeringan pendahuluan sebagai berikut: 1. Untuk benih dengan kadar air > 20% Ambil contoh seberat 50 gram yang ditimbang dengan ketelitian 3 desimal. Hamparkan benih tersebut secara merata pada wadah yang bersih dan kering dan sudah diketahui beratnya. Ketebalan lapisan benih tidak boleh lebih dari 22 mm. lakukan tahap pengeringan sebagai berikut: a. Untuk benih jagung dengan kadar air > 25%, pengeringan pendahuluan dengan memasukkan benih ke dalam oven pada suhu 70°C selama 2-5 jam. b. Untuk beberapa spesies dengan kadar air > 30%, hamparan benih tersebut dibiarkan selama satu malam ditempat yang hangat, misalnya: di atas oven yang dipanaskan. c. Untuk beberapa benih dapat juga pengeringan dengan memasukkan ke dalam oven pada suhu 130°C selama 5-10 menit.
2. Untuk benih dengan kadar air ≤ 20% Ambil contoh kerja secara duplo masing-masing seberat 10 gram dengan ketelitian 3 desimal. Tempatkan secara merata dalam petridish yang telah diketahui beratnya, keringkan dalam oven dengan suhu 130°C selama 5-10 menit tergantung kadar air benihnya.
Setelah selesai proses pengeringan pendahuluan, benih dibiarkan dalam keadaan terbuka pada suhu ruang selama 1-2 jam supaya dingin. Kemudian benih tersebut ditimbang dengan ketelitian 3 desimal. Dari hasil pengeringan pertama ini akan diperoleh Sp. Untuk mendapatkan S2 lakukan penetapan kadar air dengan metoda oven seperti yang akan diuraikan.
11
Metoda Pengujian yang digunakan tergantung pada spesies yang akan diuji kadar airnya. 1. Metoda oven dengan suhu rendah konstan untuk spesies seperti tercantum pada tabel 8.1. Bagi benih yang memerlukan penghancuran/penumbukan/penggilingan harus dilakukan pengeringan dua tahap (pengeringan pendahuluan) apabila diperkirakan kadar airnya 18% (untuk benih leguminosae 20%) 2. Metoda oven suhu tinggi konstan (130°C + 3°C), untuk spesies seperti tercantum pada tabel 8.2. 3. Metoda destilasi bagi spesies seperti tercantum pada tabel 8.3. Cara kerja masingmasing metoda adalah sebagai berikut:
Cara kerja metoda oven dengan suhu rendah konstan Contoh kerja dimasukkan ke dalam wadah (cawan porselin crusibles petridish + tutup), timbang cawan + tutup sebelum dan sesudah benih dimasukkan. Segera wadah tersebut dimasukkan ke dalam oven yang sudah mencapai panas 105°C dalam keadaan terbuka selama 17 + 1 jam selama pengeringan suhu oven harus dijaga sekitar 105°C ± 2°C setelah pengeringan selesai, wadah ditutup dan diletakkan dalam desikator, untuk pendinginan selama 30-45 menit. Sesudah dingin wadah + isi + tutup ditimbang, saat mengerjakan penetapan kadar air ini, kelembaban udara nisbi laboratorium harus di bawah 70%.
Cara kerja metoda oven dengan suhu tinggi konstan Prosedur sama dengan di atas, kecuali suhu diatur 130°C + 3°C, selama 4 jam untuk jagung (zee mays), 2 jam untuk serealia lainnya dan 1 jam untuk spesies lainnya. Pada saat pelaksanaan tidak memerlukan persyaratan kelembaban nisbi tertentu di laboratorium.
Metoda destilasi Sebelum digunakan alat kondensasi dan gelas dicuci dengan larutan kalium dickromate dalam asam belerang. Bilas dengan air lalu dengan alkohol dan dikeringkan dalam oven sampai tidak ada lagi air yang menempel. Contoh kerja ± 35 gram ditumbuk/digiling masukkan dalam tabung distilasi + larutan Tolnen (± 75 ml keseluruhannya) hingga seluruh contoh terendam dalam larutan tersebut. 12
Alat dipasang, maka mulailah proses distilasi hingga seluruh air telah habis ditampung dalam gelas penampung, sedang kelebihan toluen kembali ke tabung semula. Dalam proses tersebut kadang-kadang dapat pula terjadi dikomposisi dari bahan organik yang menghasilkan CO2 dan H2O hingga menyebabkan terjadinya hasil penetapan kadar air yang tinggi. Proses distilasi tersebut relatif lambat karena memerlukan waktu ± 1-4 jam.
Perhitungan a. Apabila menggunakan metoda oven, kadar air dinyatakan dalam % terhadap berat semula dengan ketelitian satu desimal. Cara menghitungnya ialah dengan menggunakan rumus sebagai berikut:
(M2 – M3) x
M1 = berat wadah + tutup dalam gram. M2 = berat wadah + isi + tutup dalam gram sebelum dikeringkan M3 = berat wadah + isi + tutup dalam gram sesudah dikeringkan
b. Apabila memerlukan pengeringan pendahuluan, maka penghitungan kadar air menggunakan rumus sebagai berikut:
(S1 + S2) S1 = kadar air pada pengeringan I S2 = kadar air pada pengeringan II S1 + S2 dihitung dengan rumus (M2 – M3) x
13
c. Apabila menggunakan metoda distilasi maka rumusnya:
V = volume air yang ditampung dalam cc (ml) M = berat contoh kerja dalam gram.
Toleransi Toleransi, antara kedua contoh kerja tersebut maximum 0,2%, apabila lebih dari 0,2%, maka penetapan kadar air harus diulangi, dengan menggunakan contoh kerja yang baru.
Laporan Dalam laporan, kecuali menulis % kadar air, hendaknya disebut pula metoda yang digunakan, misalnya metoda oven 130 °C berdasarkan berat basah.
Keterangan Metoda penetapan kadar air yang telah diterangkan di atas adalah merupakan metoda standar. Metoda tersebut sangat akurat, tetapi memerlukan waktu yang lama dan ketelitian dalam pelaksanaannya. Metoda lain yang lebih praktis dan dapat memberikan hasil cepat adalah menggunakan alat-alat pengukur kadar air (moisture meter); alat tersebut mengukur kadar air benih secara tidak langsung, yaitu dengan mengukur sifat fisika benih yang langsung dipengaruhi oleh kandungan airnya (daya hantar listrik dan atau dielektrik konstan). Alat pengukur kadar air yang baik dapat memberikan hasil yang cukup akurat. Untuk menjaga ketelitian angka-angka pengukuran tersebut secara periodik perlu diadakan kalibrasi dengan metoda standar.
14
Tabel 8.1. Jenis benih dengan metode oven suhu rendah konstan (103°C ± 2°C) No Nama Latin 1. Allium cepa 2. Gapsium spp. 3. Clycine max * 4. Solanum melongena 5 Arachis hypogea * 6. Brasicca spp. 7. Gossypium spp. * 8. Ricinus Communis * 9. Riphanus satiuus 10. Sesamun indicum * Benih harus digiling/dihancurkan
Nama Indonesia Bawang Cabe Kedelai Terong Kacang tanah Kol, Petai, Sawi Kapas Japrak Lobak Wijen
Tabel 8.2. Jenis benih dengan metode oven suhu 130°C. No 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19.
Nama Latin Asparagus sp. Beta vulgaris Citrullus vulgaris * Cucumis Cucurbis Dancus carota Vicia Faba Hordeum vulgare * Lactuca sativa Lycopersicum escultum Nicotiana tabacum Oryza sativa * Pisum sativum * Phaseolus spp. * Panicum sp. Spinacia oleracea Sorghum spp.* Zea mays * Triticum spp. *
Nama Indonesia Asparagus Bit gula Semangka Ketimun Waluh Wortel Kacang merah Jelai Krop selada Tomat Tembakau Padi Kacang kapri Buncis Rumput gajah Spinach Sorgum Jagung Gandum
15
Tabel 8.3. Jenis Benih dengan metoda destilasi toluen
No Nama Latin
Nama Indonesia
1.
Abies spp.
-
2.
Cedrus spp.
-
3.
Fagus spp.
-
4.
Picea spp.
-
5.
Pinus
Pinus
* Benih harus digiling atau ditumbuk.
16
Tambahan Peralatan dan Persyaratan
1. Alat penumbuk biji (seed grinder) Persyaratan a. Bahan yang digunakan tidak mengabsorpsi air disekitarnya. b. Pada saat menumbuk/menggiling sedikit mungkin berhubungan dengan udara luar. c. Kecepatan putaran yang tinggi dari alat hendaknya jangan menimbulkan panas. d. Kecepatan putaran dapat diatur hingga besar partikel yang dihasilkan sesuai dengan ketetapan dalam butir 9, bab penumbukan
2. Oven dan perlengkapannya 2.1. Oven Oven digunakan ialah oven listrik yang dilengkapi dengan termostat dan termometer dengan ketelitian 0,5°C. Termostat mempunyai fungsi mengontrol suhu sesuai dengan yang dikehendaki. Kapasitas pemanasan ialah 103°C ± 2°C, dengan sifat sedemikian rupa yaitu sesudah pemanasan pendahuluan sampai mencapai suhu yang diperlukan, kemudian apabila dibuka karena akan memasukakan wadah-wadah ke dalamnya, maka dalam waktu 15 menit sesudah semua wadah dimasukkan oven harus dapat mencapai suhu semula.
2.2. Wadah Bahan yang digunakan ialah yang tahan karat atau bahas porselin gelas dengan tebal 0,5 mm, mempunyai tutup yang rapat untuk menghindari kehilangan dan penambahan uap air dari udara. Bagian sisi dari wadah tersebut bundar dan bagian bawahnya datar. Sebelum digunakan wadah harus dikeringkan pada suhu 130°C selama 1 jam dan didinginkan dalam desikator. Wadah dan tutup harus diberi nomor yang sama supaya jangan salah pasangannya, karena pada waktu dimasukkan dalam oven wadah harus dibuka (wadah + tutup keduanya dimasukkan ke dalam oven).
17
2.3. Desikator Diameter desikator berkisar antara 20-30 cm. Desikator yang digunakan ialah Phesphorus pentoxida atau alumina aktif atau kapur tohor atau silica gel.
3. Alat distilasi Terdiri dari botol distilasi dengan kapasitas 250 ml yang dihubungkan oleh alat kondensasi libig dengan gelas penampung hasil distilasi type Bidwell dan Sterling yang mempunya ukuran dalam ml. setelah proses distilasi selesai, alat tersebut hendaknya dibersihkan dengan larutan kalium diochromat dalam asal sulfat, dibilasi dengan air lalu alkohol dan dikeringkan dalam oven.
18
B. Pengujian Viabilitas Benih Secara Biokimia (Uji cepat viabilitas benih dengan tetrazolium)
1. Tujuan Tujuan dari pengujian benih secara biokimia adalah untuk mengetahui viabilitas (daya hidup) benih secara cepat. Cara ini terutama sangat berguna bagi benih-benih yang memerlukan jangka waktu lama untuk perkecambahannya, atau bagi benih-benih dorman yang sangat sulit pematahan dormansinya. Dalam kasus pengujian daya tumbuh uji biokimia ini kadang-kadang digunakan untuk memeriksa apakah sisa benih yang tidak tumbuh pada akhir pengujian masih hidup atau sudah mati (terutama bagi benih-benih yang mempunyai sifat dorman, misal padi).
2. Prinsip Dalam pengujian biokimia, hidup dan matinya benih didasarkan atas zat pewarnaan dari jaringan sel hidup suatu indikator. Zat yang digunakan sebagai indikator biasanya adalah 2.3.5. Triphenil Tetrazolium Chlorida/bromide yang berupa tepung berwarna putih kekuningan dan bersifat larut dalam air. Apabila larutan garam tetrazolium tersebut diimbibisi oleh benih, maka dengan bantuan enzim dihidrogenase yang terdapat dalam sel-sel hidup, akan terjadi proses reduksi, hingga terbentuk zat triphenil formazan yang mengendap dan berwarna merah. Endapan merah ini sangat stabil hingga tidak larut dalam pencucian. Dengan demikian jaringan yang hidup akan berwarna merah sedang jaringan mati akan berwarna putih atau tidak berwarna. Sebagai tambahan dapat disebutkan selain benih hidup dengan pewarnaan yang sempurna/seluruhnya merah, dan benih mati yang seluruhnya tidak berwarna, terdapat benih-benih dengan pewarnaan sebagian-sebagian. Perbandingan antara bagian yang merah dan bagian yang tidak berwarna serta daerah dimana necrotic itu terdapat menentukan hidup/matinya benih.
19
3. Bahan yang dibutuhkan -
Benih yang diuji: 4 x 100 butir
-
Zat kimia 2.3.5. Triphenyl Tetrazolium Chlorida/ Bromida
-
Kertas media
-
Air bersih: untuk meredam kertas media dan benih
-
Air destilasi/aquadest: untuk melarutkan garam tetrazolium.
4. Peralatan yang dibutuhkan -
Oven
-
Pinset
-
Scalpel
-
Jarum
-
Beaker Glass
-
Saringan teh
-
Timbangan analitik (untuk menimbang garam tetrazolium)
-
Stereo Microscope/ kaca pembesar.
5. Cara pelaksaan 1. Membuat larutan 1,0 %, 1 gram garam Tetrazolium dilarutkan dalam 100 ml aquades. 2. Membuat larutan 0,5 %, 1 gram garam Tetrazolium dilarutkan dalam 200 ml aquades. Keterangan: Apabila pH air destilasi/aquades tidak diantara 6,5-7,0 , harus digunakan larutan buffer. Pelaksanaan pengujian: Benih yang telah dipersiapkan diletakkan di antara kertas media yang basah selama satu malam (+ 16 jam ), atau direndam air dalam gelas piala (beaker glass) selama 1820 jam. Pemilihan cara pelaksanaan tahap pertama (pelunakan) ini tergantung dari jenis benihnya (Tabel 8.4).
20
Tahap kedua: Perlakuan terhadap benih agar penyerapan larutan Tetrazolium mudah mencapai lembaga. -
Perlakuan dengan cara ditusuk, dibelah longitudinal, diiris sejajar/segaris dengan embrio dan lain-lain. Penilaian cara perlakuan tergantung dari jenis benihnya (lihat daftar). Untuk benih Leguminoceae dengan ukuran kecil dan benih Brassicaceae hanya dikupas kulit bijinya saja. Selama pelaksanaan pemasukkan/pembelahan/pengikisan/pengupasan benih harus dijaga jangan sampai kering. Kertas alas untuk mengiris harus basah dan benih yang telah diperlakukan dimasukkan dalam beaker glass berisi air.
-
Setelah benih sejumlah 400 selesai diperlakukan, tuangkan air perendam dengan jalan ditiriskan pada saringan/kasa plastik (saringan teh).
-
Rendam kembali benih tersebut dengan larutan Tetrazolium secukupnya sampai benih terendam seluruhnya. Lama perendaman tergantung pada jenis benih yang diuji, jagung 2-6 jam pada suhu 30 0C.
-
Segera diletakkan di ruangan gelap/oven dengan suhu 30°C Untuk mempercepat proses pewarnaan dapat digunakan suhu 40°C
-
Lama proses pewarnaan tergantung dari jenis benihnya (Tabel 8.4). Tahap Ketiga: Evaluasi/pengamatan Setelah proses pewarnaan biji harus segera diamati:
-
Tuang larutan Tetrazolium dengan menggunakan saringan teh, cuci benih di air mengalir sampai bersih (bebas dari larutan Tetrazolium).
-
Rendam dalam air bersih.
-
Amati benih satu persatu dengan kaca pembesar, klasifikasikan sesuai dengan gambar kriteria standar ISTA (terlampir)
-
Apabila perlu gunakan mikroskop stereo
-
Laporan hasil pengamatan diisi pada kartu uji cepat viabilitas.
21
Tabel 8.4. Perlakuan dan lama pelunakan serta pewarnaan pada uji cepat viabilitas/tetrazolium tes. Lama perendaman dalam larutan Pengamatan untuk tetrazolium (jam)
Metode Pelunakan Benih
Padi
Dilembapkan antara kertas (jam) 5-15
Metode perlakuan Dirend proses pewarnaan am (jam) 2 Diiris diagonal diatas embrio
Pada 30°C
Pada 40°C
Cara
3-6
2-4
Kupas kulit biji, embrio dibelah dua
Jagung
5-15
2
Dibelah dua longitudinal tepat 2-6
1,5 - 4
ditengah embrio Sorgum
5-15
2
10-15
2-4
Dibelah dua longitudinal tepat 2-6
Langsung
1,5 - 4
10-15
2-4
Langsung
direndam 3-6
2-4
10 -15
4
Teruskan
belas irisan
yang
Kupas kulit biji, amati plamula dengan dibelah dua
direndam 3-6
2-4
tetrazodium Kacang tanah
yang
sudah ada sampai putus
tetrazodium Kacang hijau
belas irisan
sudah ada sampai putus
ditengah embrio Kedelai
Teruskan
Kupas kulit biji, amati plamula dengan dibelah dua
Kupas kulit biji, direndam 4-7
3-6
Langsung diamati
direndam 5-8
4-8
Kupas kulit biji
Tusuk dengan jarum bagian 5-8
4-8
Dibelah lateral
tetrazolium Kol/ sawi/ petai
5-15
-
Langsung tetrazolium
Wortel
5-15
-
dekat di bawah embrio 22
Terong/ tomat/ 5-15
-
lombok Centrocema/ siratro/
Tusuk dengan jarum bagian 7
6-8
Dibelah lateral
2-4
Amati plumula + kotaledon +
dekat di bawah embrio 15-20
-
Kupas
kulit
tetrazolium
direndam 3-6
radicle
Colopogonium/ Crotalaria/ Lamtoro*)
Keterangan: -
Konsentrasi larutan Tetrazolium 0,5% untuk benih berukuran kecil dan 1% untuk benih berukuran besar.
-
Sebelum drendam dalam larutan tetrazolium, benih harus sudah imbibisi/membengkak sempurna
-
Pemilihan metode pelunakan/imbisi berdasarkan tebal/tipisnya kulit biji. Untuk biji berkulit keras *) seperti Centrocema, siratro, colopogonium, crotalaria, lamtoro dan sebagainya biji harus dilukai (perlakuan pendahuluan) sebelum dilunakan.
- Proses pewarnaan harus berlangsung di ruang gelap. Apabila digunakan suhu 30°C (sama dengan suhu kamar di Negara tropis), maka bilamana belum tersedia oven, beaker glass dapat ditempatkan di ruangan gelap (missal dalam kardez, laci meja, dan sebagainya).
23
C. Penetapan Berat 1000 Butir 1. Tujuan : Untuk mengetahui mutu/kualitas suatu benih berdasarkan beratnya. 2. Prinsip : Berat 1000 butir ditetapkan dengan mengambil 100 butir untuk setiap ulangan yang berasal dari fraksi benih murni ditimbang dan ditetapkan beratnya. 3. Bahan-bahan : Benih yang diuji (dari fraksi benih murni), kantong kertas Perlatan
: Pinset, timbangan analitik untuk menimbang benih, petridish.
4. Cara : - Dari fraksi benih murni ambil secara acak 100 butir dengan 8 ulangan - Timbang tiap-tiap ulangan dalam gram dengan ketelitian seperti menimbang contoh kerja analisa kemurnian. - Hitung variance (ragam), standar deviasi dan koefisen variasi dengan menggunakan rumus seperti di bawah ini:
a. V = variance (ragam) X = berat masing-masing ulangan (dalam gram) n = jumlah ulangan b. S = Standar deviasi V = variance c.
Koefisien variasi :
x = berat rata-rata 100 butir Penetapan berat 100 butir boleh dihitung apabila: Koefisien variasi ≤ 6 untuk benih chaffygrass dan ≤ 4 untuk benih lainnya.
Apabila koefisien variasi melebihi dari limit yang ditetapkan seperti tersebut di atas, maka timbang 8 ulangan lagi, lalu hitung standar deviasi dari 16 ulangan. Apabila masih melampaui limit, buang ulangan yang menyimpang dari berat rata-rata.
24
Berdasarkan berat 100 butir 8 ulangan atau lebih maka berat 1000 butir adalah 10 × x dengan ketelitian sama dengan contoh kerja analisa kemurnian.
Contoh: Berat 1000 butir gabah adalah: X
X2
X1
2,542
6,541
X2
2,549
6,047
X3
2,376
5,645
X4
2,378
6,175
X5
2,495
6,225
X6
2,397
5,746
X7
2,382
5,674
X8
2,542
6,462
∑x = 19,673
∑ x2 = 48,44
x = 2,460
Harga koefisien variasi ≤ 4,0
maka berat 1000 butir : 10 × x = 10 × 2,460 = 24,60 gram
25
D. Pengujian Daya Berkecambah Perkecambahan benih merupakan salah satu kriteria yang berkaitan dengan kualitas benih. Di pihak lain perkecambahan benih juga merupakan salah satu tanda dari benih yang telah mengalami proses penuaan. Tujuan Uji Perkecambahan Tujuan Uji Perkecambahan dapat dibedakan menjadi beberapa macam, antara lain 1. Untuk memperoleh informasi yang berkaitan dengan nilai pernanaman benih: - Untuk usaha tani, benih merupakan masukan utama yang tidak dapat diganti dengan masukan lain - nilai
penanaman
yang
dimaksudkan
adalah
kemampuan/persentase
perkecambahan dan jumlah kecambah yang dapat nongol ke permukaan lahan, karena bagi petani yang amat penting adalah berapa persen dari jumlah benih yang dapat ditanam dapat tumbuh.
2. Untuk membandingkan antar seed lot: - salah satu kriteria yang dapat dipakai untuk menilai kualitas benih dalam suatu seed lot adalah berapa persen tingkat viabilitasnya (perkecambahan), karena semakin tinggi nilai persentasenya, semakin baik kualitas seed lotnya. - jika memiliki lebih dari satu seed lot benih dari varietas yang sama, maka seed lot yang harus dipakai terlebih dahulu adalah seed lot yang memiliki persentase perkecambahan yang lebih rendah, dan yang nilai persentase perkecambahannya lebih tinggi dipakai untuk musim tanam mendatang karena seed lot ini memiliki storabilitas yang lebih lama.
3. Untuk menghitung kebutuhan benih dalam usaha tani: - dengan mengetahui persentase viabilitas benih, berat seribu butir, jarak tanam dan jumlah benih per lubang, dapat dihitung jumlah benih yang dibutuhkan untuk usaha tani dengan luas areal tertentu.
26
4. Menilai kualitas benih: - salah satu parameter yang dapat dipakai untuk menilai kualitas benih adalah persentase viabilitas. Semakin tinggi nilai persentase viabilitas berarti semakin baik kualitas benih, terlebih bila parameter yang lain mendukung.
5. Untuk mengetahui tingkat/lanjut deteriorasi: - benih merupakan suatu kehidupan sehingga akan mengalami proses menua, baik terjadi secara kronologis maupun secara fisiologis yang disebabkan oleh deraan alam. - derajat laju deteriorasi ditentukan oleh besarnya penyimpangan yang terjadi. Salah satu parameternya adalah nilai persentasi viabilitas benih, karena semakin besar penyimpangan yang terjadi, persentase viabilitas benih akan menurun.
6. Untuk menduga storabilitas: - tidak semua benih setelah selesai diproses langsung dipakai untuk usaha tani. Ada sebagian yang harus disimpan lebih dahulu untuk menanti musim tanam yang tepat, baru kemudian dipakai. - selama dalam penyimpanan benih akan mengalami proses menua dan hal ini dapat dilihat dari turunnya nilai persentase viabilitas yang diperoleh. - semakin tinggi persentase viabilitas pada awal penyimpanan, jika faktor lain selama penyimpanan mendukung, maka storabilitas benih semakin panjang.
7. Untuk menentukan apakah nilai persentase viabilitas memenuhi batas nilai ambang yang sesuai dengan peraturan: - salah satu persyaratan yang harus dipenuhi agar suatu benih dapat diberi sertifikat adalah nilai persentasi viabilitas harus sama atau lebih tinggi dari nilai ambang yang ditentukan oleh peraturan untuk kelas benih tertentu yang diberlakukan oleh negara penghasil benih. - jika nilai persentase viabilitas benih di bawah batas minimal maka benih tidak akan diberi sertifikat.
27
8. Untuk menentukan batas kadaluwarsa sertifikat: - sertifikat dari benih memiliki batas kadaluwarsa (expire date) masa berlakunya sertifikat. Hal ini berkaitan dengan kondisi benih. - lamanya batas kadaluwarsa dari suatu benih ditentukan antara lain oleh kualitas benih. Salah satu parameter yang dipakai untuk menentukan kualitas benih adalah nilai persentase viabilitas. - jika faktor lain mendukung, maka semakin besar nilai persentase viabilitas, semakin lama pula batas waktu kadaluwarsa masa berlakunya sertifikat yang diterbitkan.
Prosedur Beberapa hal yang berkaitan dengan prosedur pengujian perkecambahan benih di laboratorium sertifikasi benih. 1. Working sample: -
secara teoritis working sample untuk pengujian perkecambahan benih merupakan sebagian dari hasil pengujian kemurnian benih; karena yang ingin diketahui nilai persentase viabilitasnya adalah benih murni.
-
dalam prakteknya, jika hasil pengujian kemurnian benih memiliki persentasi tinggi, maka sample dapat diambil langsung dari submitted sample.
2. Besarnya working sample: -
berdasarkan ketentuan ISTA, besarnya working sample untuk setiap varietas dapat berbeda, tetapi untuk benih cerealia dan hortikultura besarnya ditentukan minimal 400 butir.
-
working sample ini dalam pengujian dapat dipecah menjadi empat, delapan dan enam belas, tergantung dari ukuran benih.
3. Pengamatan: hasil pengamatan pada waktu melakukan pengujian perkecambahan dibagi menjadi beberapa macam; antara lain: a. Kecambah normal: * pada uji perkecambahan, yang dihitung sebagai kecambah adalah kecambah yang normal.
28
* kecambah normal yang ada masih perlu diteliti apakah kecambah tersebut terserang penyakit atau tidak. * pengamatan terhadap jumlah kecambah normal dilakukan pada periode tertentu dan diakhiri setelah waktu tertentu sesuai dengan ketentuan. b. kecambah abnormal. c. benih keras (hard seed). d. benih segar tidak berkecambah. e. benih mati.
Definisi 1. Berkecambah: - benih dikatakan berkecambah jika dari benih tersebut telah muncul plumula dan radikula dari embrio. - plumula dan radikula yang tumbuh diharapkan dapat menghasilkan kecambah yang normal, jika faktor lingkungan mendukung.
2. Kecambah normal: - kecambah yang memiliki kemampuan untuk tumbuh menjadi tanaman yang normal jika ditanam dengan lingkungan yang mendukung, memiliki hypocotyl, epicotyl yang berkembang biak, tanpa kerusakan terutama pada jaringan pendukung (contact tissue) dan bagi dicotyledoneae plumula normal. - untuk Graminae, perkembangan daun pertama baik dan dapat muncul dari coleoptyl. - kecambah yang memiliki satu cotykedone bagi monocotyledoneae dan dua cotyledone bagi dicotyledoneae. - kecambah dengan sedikit kerusakan, tetapi tampak kuat dan menujukkan keseimbangan pertumbuhan dari bagian-bagian kecambah: *
pada Zea, Malvaceae, Cucurbitaceae, Leguminosae, kerusakan pada primary root, tetapi telah tumbuh akar-akar cabang lateral yang banyak dan panjang yang diperkirakan dapat menopang pertumbuhan kecambah selanjutnya.
29
*
kecambah dengan kerusakan superficial, busuk pada bagian-bagian kecambah tetapi kerusakannya terbatas dan tidak pada jaringan penghubung.
*
kecambah dari dicotyledoneae yang memiliki satu cotyledone yang sehat dan kuat.
- kecambah dari tanaman parenial, jika panjang hypocotyl dan primary root empat kali panjang benih dengan bagian lain tampak normal. - kecambah yang membusuk sebagai akibat serangan cendawan/bakteria tetapi semua bagian kecambah, yaitu plumula, radikula, dan cotyledone, ada dan diyakini bahwa sumber penyakit tidak berasal dari benih.
3. Kecambah abnormal: (a) kecambah yang rusak: *
tanpa cotyledone.
*
kecambah yang mengalami penyempitan.
*
kecambah yang terbelah.
*
kecambah yang bagian-bagiannya terputus atau patah.
*
kecambah tanpa primary root.
(b) kecambah yang berubah bentuk (deformed) *
kecambah yang lemah dan pertumbuhan bagian-bagiannya tidak seimbang.
*
kecambah yang pertumbuhannya spiral.
*
kecambah yang plumula dan radikulanya tidak berkembang.
*
kecambah yang pucuk atau taruknya membusuk.
*
coleoptyl tidak berdaun.
*
kecambah yang sukulen atau transparan.
*
kecambah yang tidak berkembang lebih lanjut.
(c) kecambah yang membusuk: * kecambah yang bagian-bagiannya membusuk sehingga tidak dapat berkembang lebih lanjut/menghambat pertumbuhannya, kecuali dapat dipastikan bahwa sumber penyakit bukan berasal dari benih (seed born disease). 30
4. Benih keras (hard seed): - benih Leguminosae dan Malvaceae yang sampai batas akhir pengamatan tetap keras karena tidak terjadi proses imbibisi karena kulit benih yang impermeabel terhadap air. Berdasarkan pengujian dengan tetrazolium benih tersebut masih hidup.
5. Benih segar tidak berkecambah (fresh ungerminated seed): - benih yang sampai batas akhir pengamatan tidak berkecambah, karena dorman atau sebab lain, meskipun benih tersebut berimbibisi dan berdasarkan hasil pengujian dengan tetrazolium benih tersebut hidup.
6. Benih mati (dead seed): - benih yang sampai batas akhir pengamatan tidak berkecambah, dan tidak dapat digolongkan ke dalam hard seed maupun fresh ungerminated seed, dan pada pengujian dengan tetrazolium benihnya terbukti bahwa benih tersebut mati.
7. persentase perkecambahan: - persentase perkecambahan dihitung dari benih yang berkecambah normal, dibagi dengan jumlah benih yang dikecambahkan dikalikan 100.
Persentase daya berkecambah dihitung dengan rumus: KN 1 + KN 2 + KN a DB = ---------------------------------------- x 100% Jumlah benih yang dikecambahkan DB
= Daya berkecambah
KN 1
= Jumlah kecambah normal pada pengamatan pertama
KN 2
= Jumlah kecambah normal pada pengamatan kedua
KN a = Jumlah kecambah normal pada pengamatan terakhir
31
Pelaksanaan Pengujian Pengujian perkecambahan selalu dilaksanakan di laboratorium. Hal ini dilakukan atas dasar beberapa pertimbangan, antara lain:
1. Kondisi lingkungan dapat dimanipulasi: - selama periode pengujian itu faktor lingkungan dapat dibuat seoptimal mungkin sesuai dengan persyaratan perkecambahan benih yang diuji sehingga benih memperoleh peluang yang maksimal untuk berkecambah. - hasil pengujian perkecambahan dapat menggambarkan kondisi benih yang sesungguhnya dan bukan disebabkan oleh faktor lingkungan. - agar pengujian dapat diulang dengan kondisi lingkungan yang relatif sama.
2. Memberi peluang benih untuk berkecambah: - pengujian yang dilakukan di laboratorium dengan metode pengujian tertentu akan memberi peluang yang sama bagi semua benih untuk dapat berkecambah.
3. Lama waktu pengujian: - karena kondisi lingkungan yang memadai, maka waktu yang dibutuhkan untuk berkecambah relatif lebih singkat.
Pengujian benih di laboratorium dengan faktor lingkungan yang dibuat memadai untuk perkecambahan benih seringkali dipermasalahkan oleh petani pengguna benih. Alasannya antara lain sebagai berikut:
1. Hasil pengujian hanya menggambarkan viabilitas benih, sedangkan daya tumbuh benih tidak, sehingga kemampuan benih untuk bersaing atau beradaptasi dengan kondisi lahan tidak terlihat. 2. Karena faktor lingkungan selama periode perkecambahan dibuat seoptimal mungkin maka hasil perkecambahan di laboratorium selalu lebih tinggi daripada kenyataan di lapangan. Hal ini karena kondisi di lapangan tidak seoptimal di laboratorium sehingga benih, meskipun dapat berkecambah tetapi sering kali tidak mampu nongol ke 32
permukaan lahan karena daya tumbuhnya tidak baik. Hal ini tentu sangat merugikan petani pengguna benih. 3. Mengacaukan perhitungan jumlah benih yang dibutuhkan persatuan luas sehingga petani harus membeli benih dengan jumlah yang lebih banyak dari jumlah benih berdasarkan persentase viabilitas yang tercantum dalam sertifikat. Akibat benih tidak dapat berkecambah atau dapat berkecambah tetapi tidak mampu keluar ke permukaan lahan, maka petani harus melakukan penyulaman.
Salah satu jalan keluar untuk mempertemukan kedua kepentingan tersebut, pemerintah kemudian mendirikan Balai Pengujian Benih di beberapa daerah, terutama disentra produksi suatu komoditi dengan harapan hasil pengujiannya dapat mendekati kenyataan karena kondisi lingkungan hampir sama. Hal ini sangat terasa di Indonesia yang memiliki areal yang sangat luas dengan kondisi lingkungan yang sangat beragam, dan waktu tanaman yang tidak sama.
Persiapan Media Perkecambahan Untuk pengujian perkecambahan dapat dipakai berbagai media perkecambahan. Untuk melakukan pengujian ini Anda dapat memilih media yang sesuai untuk suatu benih. Media perkecambahan yang digunakan akan mempengaruhi hasil pengujian. Media perkecambahan yang biasa dipakai untuk pengujian antara lain: 1. Kertas substrat: Kertas substrat yang dapat dipakai sebagai media perkecambahan harus memenuhi syarat-syarat sebagai berikut: a. tidak mengandung bahan yang bersifat racun, zat penghambat bagi perkecambahan. b. dapat menyediakan air yang cukup untuk proses perkecambahan (imbibisi) untuk periode tertentu yang relatif lama atau selama periode perkecambahan sehingga tidak setiap waktu harus diberikan tambahan air. c. homogen, artinya kertas substrat harus dapat menyediakan SOF secara merata, sehingga dapat memberi peluang yang sama bagi benih yang dikecambahkan.
33
d. kertas substrat harus cukup kuat, tidak mudah rusak oleh pertumbuhan akar atau plumula, tetapi juga tidak menghambat pertumbuhan kecambah. e. kertas substrat tidak boleh mengandung mikroorganisme patogen.
2. Pasir: - karena pertimbangan ekonomis, seringkali untuk pengujian benih varietas tertentu digunakan media perkecambahan pasir; karena ukuran benih yang relatid besar dan pasir dapat dipakai lebih dari satu kali. - jika akan menggunakan pasir sebagai media perkecambahan maka pasir itu harus memenuhi persyaratan, yaitu antara lain: a. pasir yang akan dipakai harus diayak dahulu dengan ayakan yang memiliki mata dengan diameter 0,05 – 0,8 mm, tergantung jenis benihnya. b. setelah diayak pasir harus dicuci dan disterilkan. c. perbandingan pasir dengan air tergantung jenis benihnya. d. jika campuran air dan pasir dikepal tidak ada lagi air yang menetes, maka secara umum jumlah kandungan air sudah memadai untuk proses imbibisi. Hal ini berarti bahwa jumlah air sudah memadai dan jumlah oksigen yang tersedia juga cukup.
3. Tanah: Pengujian
perkecambahan
seringkali
juga
memakai
tanah
sebagai
media
perkecambahannya, atau campuran tanah dengan kompos, atau bahkan seringkali hanya memakai kompos saja. Hal ini dilakukan jika tampak adanya gejala keracunan jika memakai media lain. Penambahan kompos pada media tanah digunakan untuk meningkatkan WHC dan untuk meningkatkan erasi. Perbandingan antara tanah dan kompos tergantung pada jumlah air yang dibutuhkan untuk perkecambahan dan kondisi tanahnya. Secara umum media tanah dikatakan cukup memadai apabila media tersebut dikepal makan kepalan ini akan hancur jika ditekan dengan jari. Hambatan penggunaan media tanah untuk pengujian perkecambahan, antara lain sukar dilakukan pengamatan terhadap struktur pertumbuhan akar.
34
Persiapan Benih Sebelum Dikecambahkan Persiapan benih dan penentuan benih yang akan diuji sangat menentukan validitas hasil pengujian.
1. Penentuan benih yang akan diuji Benih yang akan diuji harus benar-benar dapat mewakili populasi dan dipilih secara acak serta harus dilakukan seobjektif mungkin. Untuk menghindari subjektivitas analis, ada beberapa cara untuk menentukan benih yang akan diuji: a. Dipilih dengan tangan (hand counting): -
working sample yang jumlahnya lebih dari 400 butir dihamparkan di meja serata mungkin, kemudia dibagi sesuai dengan ulangan (4, 8, 16). Dari masing-masing bagian tersebut diambil benih yang akan dikecambahkan.
-
dengan metode ini seringkali faktor subjektivitas masih masuk, karena ada kecenderungan bagi analis untuk memilih benih yang baik untuk diuji.
b. Papan penghitung (counting board): - memiliki lubang sesuai dengan ulangan (100, 50, 25), kemudian dilihat apakah setiap lubang telah berisi benih (setiap lubang satu butir), sisa benih disingkirkan. - papan penghitung diletakkan di atas media perkecambahan, kemudian alas papan penghitung ditarik keluar sehingga benih yang ada pada setiap lubang jatuh ke media perkecambahan. - dengan metode ini objektivitas sangat tinggi, karena analis tidak dapat memilih. c. Vacuum counting: -
alat ini biasanya hanya dipakai untuk benih yang relatif kecil dan dengan metode perkecambahan uji di atas kertas/uji antar keras.
-
alat ini terdiri dari dua bagian, yaitu bagian kepala yang biasa berbentuk bulat, berlubang sesuai dengan jumlah benih yang dibutuhkan, sedangkan bagian kedua berupa alat penghisap, seperti penghisap debu.
-
cara kerjanya sebagai berikut: bagian kepala ditaburi working sample, kemudian kran dibuka sehingga benih akan terhisap ke setiap lubang.
35
-
perlu diperhatikan apakah setiap lubang sudah terisi maka bagian kepala tersebut kemudian dibalik sehingga sisa working sample tumpah.
-
letakkan bagian kepala di atas media perkecambahan dan kran kemudian ditutup. Bagian kepala diketok perlahan agar benih jatuh ke media perkecambahan.
-
dengan metode ini objektivitas pemilihan benih yang akan diuji tinggi.
2. Persiapan benih dalam rangka pematahan dormansi Seringkali benih yang akan diuji perkecambahannya sedang dalam keadaan dormansi. Kadangkala diperlukan pula suatu perawatan yang dapat merangsang perkecambahan, antara lain: a. efek cahaya: -
sebelum dikecambahkan benih seringkali dijemur dalam jangka waktu tertentu, terutama benih yang memiliki pigmen pada kulit benihnya, karena pigmen tersebut dapat berfungsi sebagai fotosel yang dapat mengubah cahaya menjadi energi yang dapat dipakai untuk perkecambahan benih.
b. efek suhu: -
sebelum dikecambahkan benih seringkali perlu mendapat perawatan suhu tinggi atau rendah untuk merangsang perkecambahannya.
c. penyimpanan kering atau basah selama jangka waktu tertentu sebelum benih dikecambahkan. d. predrying: -
benih dikeringkan dengan suhu < 40°C selama periode tertentu, maksimum 7 hari, dengan sirkulasi udara yang baik. Setelah itu benih ditempatkan pada suhu ruangan.
e. prechilling: -
benih diletakkan di tempat basah/lembab, dengan suhu antara 5-10°, selama 1 sampai 7 hari.
-
dipindahkan ke suhu ruangan.
f. prewashing:
36
-
benih direndam kemudian dicuci untuk menghilangkan inhibitor yang terdapat pada permukaan benih.
-
suhu air 20-25°C.
g. potasium nitrat: -
kertas substrat dibasahi dengan larutan KNO3.
h. giberellic acid (GA-3) 500 ppm. i. modifikasi kulit benih dan struktur lain: -
menggunting kulit benih (clipping)
-
menusuk kulit benih (piercing)
-
menggores kulit benih (scratching)
-
membuang pulp yang membungkus benih.
Metode Uji Perkecambahan Untuk mengecambahkan benih dapat dipakai beberapa metode. Pemilihan metode ini harus disesuaikan dengan benih yang akan diuji, karena metode pengujian dapat mempengaruhi hasil pengujian.
Metode pengujian yang sering dipakai adalah: a. Uji di atas kertas: - ambil kertas substrat yang telah dibasahi dua atau tiga lembar. Letakkan di cawan petridis atau cawan persegi. Benih yang akan dikecambahkan kemudian di atur di atas kertas. b. Uji di atas kertas dimiringkan: - perlakuannya sama dengan di atas, tetapi peletakannya di dalam seed germinator dimiringkan. c. Uji antar kertas: - ambil dua atau tiga lembar kertas substrat berukuran 20 x 30 cm yang telah dibasahi. Lipat di tengahnya. - lipatan dibuka kembali dan benih kemudian diatur pada salah satu bagian. Kertas kemudia dilipat kembali. Demikian juga bagian tepinya sehingga jadi sepeti amplop. 37
d. Uji antar kertas dimiringkan: - sama dengan di atas, tetapi peletakannya di dalam seed germinator dimiringkan. e. Uji kertas digulung didirikan: - ambil dua atau tiga lembar kertas substrat berukuran 20 x 30 cm yang telah dibasahi. Benih kemudian diatur dua atau tiga cm dari sisi memanjang, ditutup dengan satu lembar kertas dan digulung. - gulungan ini diletakkan dalam seed germinator dalam posisi berdiri. - uji ini sering dimodifikasi dengan pemberian plastik untuk memperkuat kertas substratnya. Catatan 1.
untuk uji viabilitas working sample diambil dari hasil uji kemurnian benih.
2.
jika hasil uji kemurnian benih > 98%, working sample dapat diambil dari submitted sample.
3.
jumlah benih yang diuji 400 dengan ketentuan pada waktu mengecambahkan dapat dibagi 4, 8, 16.
4.
benih tidak diberi perlakuan sebelum diuji, kecuali dalam kasus tertentu.
5.
jika sebelum pengujian dilakukan perawatan, maka perawatan yang dilakukan dicantumkan pada waktu memberikan/menerbitkan sertifikat.
6.
pada waktu mengecambahkan, jarak antar benih harus cukup lebar.
7.
tempat perkecambahan harus dapat menyediakan SOF yang mendukung proses perkecambahan dan perkembangan kecambah.
8.
media perkecambahan harus homogen dan dapat menyediakan cukup air selama periode perkecambahan.
9.
batas waktu pengujian cukup lama (sesuai dengan ISTA) sehingga dapat dipilah antara yang berkecambah normal dan yang abnormal.
10. perhitungan pertama dilakukan jika sebagian besar kecambah telah berkembang sedemikian rupa sehingga dapat dipilah antara kecambah normal dan abnormal. 11. kecambah normal, abnormal, membusuk, benih busuk, mati, diambil pada hitungan pertama. 12. pengamatan dilakukan beberapa kali sampai batas waktu pengujian.
38
13. jika pada akhir batas waktu pengamatan terdapat benih yang mulai berkecambah, maka dimungkinkan perpanjangan waktu batas akhir. 14. jika kulit benih menghambat perkembangan kecamah, maka kulit benih harus dilepas. 15. jika hasil perhitungan antara ulangan melampaui batas maka uji perkecambahan harus diulang.
Persyaratan Seed Germinator Persyaratan alat pengecambah antara lain: 1. diusahakan suhu dalam germinator dapat diatur antara 10-35°C. 2. selisih suhu tidak boleh lebih dari 1°C. 3. perubahan suhu tidak boleh lebih dari 1 jam antara suhu 10-30°C 4. kelembaban udara diusahakan 100% 5. jika dibutuhkan cahaya, maka cahaya yang masuk jangan mempengaruhi suhu dan kelembaban dalam germinator. 6. pengaturan suhu dan kelembaban dalam germinator sedapat mungkin dilakukan secara otomatis. 7. mudah diganti komponen-komponennya. 8. mudah dibersihkan.
Alat Perkecambahan Untuk mengecambahkan benih dapat dipakai germinator, antara lain: 1. Jacobson atau Copenhagen Table: - alat ini terdiri dari lempeng tempat meletakkan kertas substrat dan benih. - kertas substrat diusahakan selalu basah dengan mencelupkan kertas substrat tersebut ke dalam waterbath. - untuk mencegah kekeringan, seed bad ditutup dengan tutup yang memiliki lubang kecil untuk ventilasi, tetapi tidak menyebabkan terjadinya evaporasi. - pengaturan suhu dilakukan dengan mengatur suhu waterbath atau suhu ruangan. - alat ini ditempatkan di ruangan dengan cahaya alami atau buatan.
39
2. Germinator cabinet: - alat pengecambah dengan suhu tetap atau suhunya dapat diubah, dan cahaya matahari dapat masuk atau tidak. - alat ini biasa disebut sebagai alat pengecambah kering, di mana perkecambahan harus dilakukan ditempat tertutup atau tempat yang basah agar benih tidak menjadi kering dan berkecambah. - pengaturan suhu dan cahaya diatur secara otomatis.
3. Walking chamber atau ruang perkecambahan: - suhu dalam ruang perkecambahan konstan dengan suhu tertentu. - dapat berupa ruangan kering atau basah, dengan atau tanpa cahaya. - pada prinsipnya tempat pengecambah benih dapat dipindah-pindah dari satu ruangan ke ruangan lain yang berbeda suhunya.
E. Pengujian Kemurnian Benih
Tujuan dari pengujian kemurnian benih adalah untuk mengetahui komposisi dari contoh benih yang diuji yang akan mencerminkan komposisi dari kelompok benih darimana contoh itu diambil dengan cara-cara yang sudah ditetapkan. Pada prinsipnya pengujian kemurnian benih di laboratorium ialah melakukan analisis kemurnian fisik (berdasarkan identitas yang telah ditetapkan) dengan jalan memisah contoh benih ke dalam 3 komponen yaitu (1) komponen benih murni, (2) benih tanaman lain, dan (3) kotoran benih. Namun untuk benih padi dipisahkan ke dalam 4 komponen yaitu (1) benih murni, (2) benih varietas lain, (3) benih tanaman lain dan biji gulma, dan (4) kotoran benih. Benih murni meliputi varietas dari setiap spesies yang diakui sebagaimana yang diakui oleh pengirim atau yang ditemui dalam pengujian di laboratoriun. Yang dikelompokkan kedalam benih murni adalah: (1) benih matang dan tidak rusak, (2) benih yang ukurannya kurang /pecah tapi lebih dari setengah ukuran asalnya, (3) berkerut, 40
kurang matang, dan sudah berkecambah (bagi benih tertentu) tapi dalam keadaan dapat ditentukan dengan pasti sebagai spesies yang diakui. Pada biji dari Leguminose, Cruciverae, Conmiverae, apabila kulit bijinya lepas seluruhnya maka biji tersebut dianggap sebagai kotoran benih. Benih tanaman lain atau benih varietas lain meliputi tanaman pertanian yang tidak termasuk jenis/kultivar yang namanya ditentukan pada label. Yang termasuk ke dalam biji gulma adalah biji, bublet, dan tuber dari tumbuh-tumbuhan yang dinyatakan sebagai gulma menurut undang-undang, peraturan resmi atau pendapat umum. Ke dalam benda mati (kotoran benih) termasuk antara lain : tanah, pasir, sekam, biji hampa, batu, batang, daun, bunga, potongan kulit kayu dan bentuk-bentuk lain yang menyerupai benih tanaman dan gulma. Perbedaan varietas pada benih yang diuji dapat dilihat dari ukuran, bentuk, warna, panjang/pendeknya rambut, bulu pada ujung lemma, warna pada ujung gabah. Pada jagung dapat dilihat pada tipe kernel (mutiara, gigi kuda, dsb.), warna biji, ukuran biji, panjang, lebar, ketebalan dan bentuk biji. Pada kedelai dapat dilihat dari bentuk biji, ukuran biji, warna hilum, dan warna biji. Bobot minimum contoh kerja untuk pengujian kemurnian harus memenuhi persyaratan yang ditentukan (standard ISTA), misalnya padi 60-75 gram, jagung 900 g, kedelai 500 g, bayam 2g, cabe besar 15g, kangkung 100g, tomat 7g, kacang panjang 100g. Analisis kemurnian benih merupakan analisis tunggal dengan menggunakan contoh keja standar ISTA. Apabila hendak melakukan analisa ganda maka digunakan ½ contoh kerja dengan 2 kali ulangan. Hasil pengujian kemurnian dinyatakan dalam persen dengan 2 desimal. Apabila bobot contoh kerja kurang dari 25 g, persentase bobot dari masing-masing komponen dihitung, terhadap total bobot semua komponen dan bukan terhadap bobot awal contoh kerja. Meskipun demikian total bobot tersebut harus dibandingkan dengan bobot awal untuk mengecek adanya kehilangan atau kesalahan lain (toleransi 1%). Apabila bobot contoh kerja lebih besar dari 25 gram, persentase bobot dari benih tanaman lain dan kotoran benih dihitung terhadap bobot awal contoh kerja. Komponen benih murninya tidak perlu
41
ditimbang tetapi dihitung dengan mengurangi angka 100% dengan jumlah persentase bobot kedua komponen lainnya.
F. Pengujian Kesehatan Benih Untuk mencegah atau menguragi timbulnya penyakit yang terbawa oleh benih, sebaiknya digunakan benih yang bebas dari jasad yang bersifat patogenik. Semua golongan patogen tanaman seperti cendawan, bakteri, virus, dan nematoda dapat terbawa oleh benih. Untuk mengetahui adanya patogen yang terbawa benih dapat dilakukan pengujian kesehatan benih. Maksud dari pengujian kesehatan benih adalah untuk : 1. Mengetahui inokulum yang patogenik, sehingga dapat ditentukan kondisi kesehatan dari kelompok benih. 2. Mempelajari penyebab dari rendahnya persentase daya tumbuh atau jeleknya pertumbuhan bibit di lapang. Pengujian kesehatan benih penting dilakukan karena : 1. Penyakit pada benih dapat mengganggu perkecambahan dan pertumbuhan benih dengan demikian menurunkan kualitas dan kuantitas hasil. 2. Benih dapat menjadi pengantar baik hama maupun penyakit ke daerah lain dimana hama dan penyakit itu tidak ada sebelumnya. Ada berbagai metode yang dapat dipergunakan untuk mendeteksi patogen yang terbawa benih antara lain pemeriksaan benih kering, pemeriksaan secara perendaman benih, dan pemeriksaan secara inkubasi. Pemeriksaan secara inkubasi ada 2 metode yaitu metode kertas atau agar.
Pada metode kertas, pengujian didasarkan pada
pertumbuhan inokulum dan kecambah. Dengan ini dapat dilihat macamnya patogen yang menyerang benih. Pengamatan benih dan kecambah dilakukan setelah diinkubasikan pada medium kertas. Untuk benih yang sangat mudah terkontaminasi oleh 42
mikroorganisme yang bersifat saprofit perlu diberikan perlakuan dengan larutan klorin 12% sebelum diuji. Pemeriksaan dengan metode kertas ini dapat digunakan untuk memeriksa adanya Helminthosporium, Fusarium, Phoma, Stemphylium spp, Pennicillium, Aspergillus, Drechsclera, Botrytis, Colletotrichum, dan lain-lain. Metode pengujian untuk virus dapat dilakukan dengan: 1. Metode growing on test 2. Metode test plant inoculation 3. Metode serologi Metode serologi didasarkan pada reaksi antigen dengan antibody yang terdapat dalam serum dari binatang yang disuntik dengan antigen. Metode ini dikembangkan menjadi metode immunofluoresence microscopy (IF) dan enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) yang lebih sensitif. Prinsip kerja metode elisa adalah terjadi konyugasi dari enzym pada antibodi. Enzim yang semula tidak berwarna menjadi berwarna.
43
