Omega-3 acidorum esterici ethylici 90 1
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 -
01/2009:1250
OMEGA-3 ACIDORUM ESTERI ETHYLICI 90 Omega-3-sav-etilészterek 90
DEFINÍCIÓ Az alfa-linolénsav (C18:3 n-3), a moroktsav (sztearidonsav; C18:4 n-3), az ejkozatetraénsav (C20:4 n-3), a timnodonsav (ejkozapentaénsav) (C20:5 n-3; EPS), a henejkozapentaénsav (C21:5 n-3), a klupanodonsav (C22:5 n-3) és a cervonsav (dokozahexaénsav) (C22:6 n-3; DHS) etilésztereinek elegye. Az omega-3-savetilésztereket az Engraulidae, Carangidae, Clupeidae, Osmeridae, Salmonidae és Scombridae családokból származó halfajták olajának átészterezésével, majd ezt követő, karbamidos frakcionálást, majd vízgőzdesztillációt is magában foglaló fizikai-kémiai tisztító eljárásokkal állítják elő. Tartalom:
EPS- és DHS-etilészter: legalább 80%; ezen belül legalább 40% EPS-etilészter és legalább 34% DHS-etilészter,
összes omega-3-sav-etilészter: legalább 90%.
Antioxidánsként tokoferolt tartalmazhat. SAJÁTSÁGOK Küllem: világossárga folyadék. Oldékonyság: vízben gyakorlatilag nem oldódik; acetonban, etanolban (96%), heptánban és metanolban nagyon bőségesen oldódik. AZONOSÍTÁS A. Az EPS- és DHS-etilészter kromatogramokat értékeljük.
tartalmi
meghatározása
során
kapott
Értékelés: a vizsgálati oldat kromatogramján az ejkozapentaénsav-etilészternek és a dokozahexaénsav-etilészternek megfelelő csúcsok retenciós ideje és mérete
Omega-3 acidorum esterici ethylici 90 2
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 -
egyezzen meg az összehasonlító oldat kromatogramján látható megfelelő csúcsokéval. B. A vizsgálandó anyag feleljen meg az összes omega-3-sav-etilészter-tartalomra előírt követelménynek.
VIZSGÁLATOK Abszorbancia (2.2.25): legfeljebb 0,55, 233 nm-en. A vizsgálandó anyag 0,300 g-ját R trimetilpentánnal 50,0 ml-re hígítjuk. Az így készített oldat 2,0 ml-ét R trimetilpentánnal 50,0 ml-re tovább hígítjuk. Savszám (2.5.1): legfeljebb 2,0. A vizsgálathoz az anyag 10 g-ját az előírt oldószerelegy 50 ml-ében oldjuk. Anizidin-érték (2.5.36): legfeljebb 20,0. Peroxidszám (2.5.5/A): legfeljebb 10,0. Oligomerek. Méretkizárásos kromatográfia (2.2.30). Vizsgálati oldat. 50,0 mg vizsgálandó anyagot R tetrahidrofuránnal 10,0 ml-re hígítunk. Összehasonlító oldat. 100 ml-es mérőlombikban 50 mg R monodokozahexaenoint, 30 mg R didokozahexaenoint és 20 mg R tridokozahexaenoint R tetrahidrofuránnal 100,0 ml-re oldunk. 1. oszlop:
méretei: l = 0,3 m, Ø = 7,8 mm,
állófázis: R sztirol–divinilbenzol-kopolimer (7 µm), pórusméret 10 nm.
2. és 3. oszlop (az injektorhoz legközelebb):
méretei: l = 0,3 m, Ø = 7,8 mm,
állófázis: R sztirol–divinilbenzol-kopolimer (7 µm), pórusméret 50 nm.
Mozgófázis: R tetrahidrofurán. Áramlási sebesség: 0,8 ml/perc. Detektálás: differenciál-refraktométerrel. Injektálás: 40 µl.
Omega-3 acidorum esterici ethylici 90 3
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 -
Rendszeralkalmasság: összehasonlító oldat:
elúciós sorrend: monodokozahexaenoin;
csúcsfelbontás: a monodokozahexaenoin és a didokozahexaenoin között legalább 2,0; a didokozahexaenoin és a tridokozahexaenoin között legalább 1,0.
tridokozahexaenoin,
didokozahexaenoin
és
Az oligomerek százalékos mennyiségét az alábbi kifejezés segítségével számítjuk ki: 100
B , A
ahol A
=
a kromatogramon látható összes csúcs területének összege,
B
=
az etilészter-csúcsokénál kisebb retenciós idejű csúcsok területének összege.
A kromatogramon látható legnagyobb csúcsok (1250.-1. ábra) az etilészter-csúcsok, amelyek egy szét nem vált kettős csúcs alakjában lehetnek láthatók. Amennyiben monogliceridek jelenléte miatt a kapott eredmény nem felel meg a követelménynek, a következő módszert kell alkalmazni. Vizsgálati oldat. Egy kvarckémcsőbe 10,0 mg vizsgálandó anyagot mérünk. Az anyagot R nátrium-hidroxid R metanollal készített 20 g/l töménységű oldatának 1,5 ml-ében oldjuk, ezután R nitrogént vezetünk az oldat fölé, majd a kémcsövet egy teflonsapkával szorosan lezárjuk. A folyadékot kevertetés közben vízfürdőn 7 percig melegítjük, majd hagyjuk lehűlni; ezután 2 ml R metanolos bór-triklorid– oldatot adunk hozzá, majd R nitrogént vezetünk az elegy fölé, és a kémcsövet ismét szorosan lezárjuk. A folyadékot kevertetés közben vízfürdőn 30 percig melegítjük, majd hagyjuk 40–50 °C-ra lehűlni, 1 ml R trimetilpentánt adunk hozzá, majd a kémcsövet lezárjuk, és legalább 30 másodpercig erősen rázzuk. Ezután azonnal 5 ml R telített nátrium-klorid–oldatot adunk az elegyhez, majd R nitrogént vezetünk fölé, a kémcsövet lezárjuk, és legalább 15 másodpercig alaposan rázzuk. A felső réteget átöntjük egy másik kémcsőbe. A metanolos réteget R trimetilpentán 1 ml-ével újból kirázzuk. Az oldószert R nitrogén áramoltatásával óvatosan elűzzük, majd a maradékhoz 10,0 ml R tetrahidrofuránt adunk. Az elegyhez R vízmentes nátrium-szulfátot adunk, majd a keveréket megszűrjük. Az oligomerek százalékos mennyiségét az alábbi kifejezés segítségével számítjuk ki: 100
ahol
B , A
Omega-3 acidorum esterici ethylici 90 4
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 -
B’ =
a metilészter-csúcsokénál kisebb retenciós idejű csúcsok területének összege. Követelmény:
oligomerek: legfeljebb 1,0%.
TARTALMI MEGHATÁROZÁS EPS- és DHS-etilészter (2.4.29). A csúcsok azonosításához lásd az 1250.-2. ábrát. Összes omega-3-sav-etilészter (2.4.29). Lásd az 1250.-2. ábrát. ELTARTÁS Inert gáztérben, légmentesen záró tartályban, fénytől védve.
Omega-3 acidorum esterici ethylici 90 5
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 -
Felirat az x tengely végén: perc 1. oligomerek
2. etilészterek
1250.-1. ábra – Kromatogram az oligomerek vizsgálatához: mesterségesen szennyezett minta
Omega-3 acidorum esterici ethylici 90 6
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 -
Felirat az x tengely végén: perc 1. fitánsav
7. C18:4 n-3
13. furánsav 7
19. C22:4
2. C16:3 n-4
8. C18:4 n-1
14. C20:4 n-3
20. furánsav 10
3. C16:4 n-1
9. furánsav 5
15. furánsav 8
21. C22:5 n-6
4. C18:3 n-6
10. C19:5
16. EPS
22. furánsav 11
5. C18:3 n-4
11. C20:3 n-6
17. furánsav 9
23. C22:5 n-3
6. C18:3 n-3
12. C20:4 n-6
18. C21:5 n-3
24. DHS
1250.-2. ábra – A tartalmi meghatározás során kapott kromatogram
