LAPORAN PRAKTEK KERJA LAPANG
PENGUJIAN KANDUNGAN MELAMIN DALAM SUSU BUBUK DI PT SARASWANTI INDO GENETECH DENGAN METODE MASS SPECTROMETRY
Disusun oleh :
MERISA SURYANI B.1210002
JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI FAKULTAS ILMU PANGAN HALAL UNIVERSITAS DJUANDA BOGOR BOGOR 2015
UNIVERSITAS DJUANDA BOGOR FAKULTAS ILMU PANGAN HALAL JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI
PENGUJIAN KANDUNGAN MELAMIN DALAM SUSU BUBUK DI PT SARASWANTI INDO GENETECH DENGAN METODE MASS SPECTROMETRY
Disusun oleh :
MERISA SURYANI B.1210002
Disetujui oleh : Bogor, Desember 2015
Siti Irma R., S.Pi, M.Agr., PhD.
Anita Carolina, S.Si
Dosen Pembimbing
Pembimbing Instansi
ii
DAFTAR ISI
DAFTAR ISI .......................................................................................................... iii DAFTAR TABEL ................................................................................................... v DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. vi I. PENDAHULUAN ............................................................................................... 1 A.
Latar Belakang ......................................................................................... 1
B.
Tujuan ....................................................................................................... 2
II. KEADAAN UMUM PERUSAHAAN............................................................... 3 A.
Sejarah dan Perkembangan Perusahaan ................................................... 3
B.
Lokasi dan Tata Letak Perusahaan ........................................................... 6
C.
Visi dan Misi Perusahaan ......................................................................... 7
D.
Struktur Organisasi ................................................................................... 7
III. TINJAUAN PUSTAKA DAN KEGIATAN DI LABORATORIUM ............ 16 A.
Susu Bubuk............................................................................................. 16
B.
Melamin.................................................................................................. 16
C.
Isu Melamin dalam Susu Bubuk ............................................................ 17
D.
LC MS/MS .............................................................................................. 18
E.
Penentuan Kandungan Melamin dalam Susu Bubuk ............................. 30
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ...................................................................... 34 V. KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................................ 38 A.
Kesimpulan ............................................................................................. 38
B.
Saran ....................................................................................................... 38
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 39 LAMPIRAN .......................................................................................................... 43 Lampiran 1. Kurva Kalibrasi Standar Melamin untuk Sampel A-H ................. 43 Lampiran 2. Kromatogram Sampel A ............................................................... 43 Lampiran 3. Kromatogram Sampel B dan Sampel C ........................................ 44
iii
Lampiran 4. Kromatogram Sampel D dan Sampel E ........................................ 45 Lampiran 5. Kromatogram Sampel F dan Sampel G ........................................ 46 Lampiran 6. Kromatogram Sampel H ............................................................... 47 Lampiran 7. Kurva Kalibrasi Standar Melamin untuk Sampel I ....................... 47 Lampiran 8. Kromatogram Sampel I ................................................................. 48 Lampiran 9. Kurva Kalibrasi Standar Melamin untuk Sampel J ...................... 48 Lampiran 10. Kromatogram Sampel J .............................................................. 49 Lampiran 11. Kurva Kalibrasi Standar Melamin untuk sampel K .................... 49 Lampiran 12. Kromatogram Sampel K-s .......................................................... 50 Lampiran 13. Kromatogram Sampel K-d dan Sampel K-spk ........................... 50 Lampiran 14. Kurva Kalibrasi Standar Melamin untuk sampel L .................... 51 Lampiran 15. Kromatogram Sampel L.............................................................. 51 Lampiran 17. Kromatogram Sampel M-s.......................................................... 52 Lampiran 18. Kromatogram Sampel M-d dan Sampel M-sp ............................ 53 Lampiran 19. Spektral Massa Standar Melamin dan Sampel. .......................... 54
iv
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Konsentrasi dan Pemipetan Deret Standar .............................................. 31 Tabel 2. Multi Reaction Monitoring ..................................................................... 33 Tabel 3. Hasil Pengujian Kandungan Melamin dalam Susu Bubuk ..................... 34 Tabel 4. Hasil Perolehan Kembali (% Recovery) Spiking Sampel........................ 34
v
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Graha SIG Jalan Rasamala Nomor 46................................................... 4 Gambar 2. Graha SIG Jalan Rasamala Nomor 20................................................... 4 Gambar 3. Keadaan di PT Saraswanti Indo Genetech ............................................ 5 Gambar 4. Peta Lokasi PT Saraswanti Indo Genetech ........................................... 6 Gambar 5. Struktur Melamin ................................................................................ 16 Gambar 6. UPLC Eksigent Expert Ultra LC100 ................................................... 23 Gambar 7. AB SCIEX QTRA 4500 ...................................................................... 23 Gambar 8. Instrumentasi LC MS/MS ................................................................... 25 Gambar 9. Komponen Spektrometer Massa ......................................................... 26 Gambar 10. Quadropole Mass Analyzer ............................................................... 28 Gambar 11. Spektral Massa DEA 2%....................................................................54 Gambar 12. Spektral Massa Standar Melamin 0,5 ppb..........................................54 Gambar 13. Spektral Massa Standar Melamin 1 ppb.............................................54 Gambar 14. Spektral Massa Standar Melamin 2,5 ppb..........................................54 Gambar 15. Spektral Massa Standar Melamin 5 ppb.............................................54 Gambar 16. Spektral Massa Standar Melamin 7,5 ppb..........................................54 Gambar 17. Spektral Massa Standar Melamin 10 ppb...........................................54 Gambar 18. Spektral Massa Standar Melamin 25 ppb...........................................54 Gambar 19. Spektral Massa Standar Melamin 50 ppb...........................................55 Gambar 20. Spektral Massa Sampel A...................................................................55 Gambar 21. Spektral Massa Sampel B...................................................................55 Gambar 22. Spektral Massa Sampel C...................................................................55 Gambar 23. Spektral Massa Sampel D............................................................. ......55 Gambar 24. Spektral Massa Sampel E............................................................. ......55 Gambar 25. Spektral Massa Sampel F................................................................ ...55 Gambar 26. Spektral Massa Sampel G............................................................... ...55 Gambar 27. Spektral Massa Sampel H....................................................................56 Gambar 28. Spektral Massa Sampel I.....................................................................56 Gambar 29. Spektral Massa Sampel J.....................................................................56 vi
Gambar 30. Spektral Massa Sampel K-s................................................................56 Gambar 31. Spektral Massa Sampel K-d................................................................56 Gambar 32. Spektral Massa Sampel K-spk............................................................56 Gambar 33. Spektral Massa Sampel L...................................................................56 Gambar 34. Spektral Massa Sampel M-s...............................................................56 Gambar 35. Spektral Massa Sampel M-d...............................................................57 Gambar 36. Spektral Massa Sampel M-spk...........................................................57
vii
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penyusun panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah memberikan nikmat sehat hingga akhirnya penyusun dapat menyelesaikan laporan ini. Laporan praktek kerja lapang ini dibuat sebagai hasil kegiatan praktek kerja lapang yang dilaksanakan pada tanggal 15 April 2015 hingga 15 Mei 2015, dan sebagai salah satu syarat mengikuti kurikulum perkuliahan di jurusan teknologi pangan dan gizi untuk mencapai persyaratan tugas akhir. Laporan praktek kerja lapang yang berjudul ”Pengujian Kandungan Melamin pada Susu Bubuk di PT Saraswanti Indo Genetech dengan Metode Mass Spectrometry” dilakukan di PT Saraswanti Indo Genetech Bogor yaitu sebuah perusahaan yang bergerak dalam bidang jasa pengujian keamanan pangan. Secara garis besar laporan ini terdiri dari pendahuluan, keadaan umum perusahaan, tinjauan pustaka dan kegiatan di Laboratorium, pembahasan, kesimpulan dan saran. Tidak lupa penyusun mengucapkan terima kasih atas dukungan dan bimbingan yang telah diberikan kepada 1. Ibu Ir. Noli Novidahlia sebagai Ketua Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi Universitas Djuanda Bogor. 2. Ibu Siti Irma Rahmawati, S.Pi, M.Agr., Ph.D. sebagai dosen pembimbing di Universitas Djuanda Bogor. 3. Bapak J. K. Kristiyono, selaku General Manajer PT. Saraswanti Indo Genetech. 4. Dwi Yulianto Laksono, S.Si., selaku Manajer Laboratorium Kimia dan Instrumen PT Saraswanti Indo Genetech. 5. Anita Carolina, S.Si., selaku Asisten Manajer Laboratorium Kimia dan Instrumen PT Saraswanti Indo Genetech dan pembimbing Prakerin. 6. Tak lupa kepada yang tersayang Ibu, Bapak, dan seluruh keluarga atas perhatian, doa, serta dukungan. 7. Insan Patria Tiastadia dan Zachra Resha Shantika, teman yang turut memberikan bimbingan, saran, dan semangat selama penyusunan Laporan Praktik Lapang. viii
8. Seluruh staf PT Saraswanti Indo Genetech atas bimbingan, kritik, dan dorongan yang diberikan. 9. Seluruh teman-teman seperjuangan dalam mengarungi perkuliahan di Universitas Djuanda Bogor. 10. Dan seluruh pihak-pihak yang tidak dapat disebutkan satu per satu. Penulis menyadari bahwa laporan ini masih sangat jauh dari sempurna, oleh karena itu penulis mengharapkan saran dan kritik yang membangun agar lebih baik lagi di masa yang akan datang. Akhir kata, penulis mengharapkan agar semua tugas yang penyusun laksanakan selama ini mendapat pahala dari Allah SWT dan semoga laporan ini dapat bermanfaat bagi kita semua.
Bogor, Oktober 2015
Penulis
ix
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Dalam industri makanan dan minuman, protein adalah salah satu senyawa yang memiliki peranan penting. Protein merupakan sumber pertumbuhan dan perkembangan bagi sel-sel makhluk hidup. Pemenuhan sumber protein yang cukup akan berdampak pada pertumbuhan balita yang baik. Kandungan protein yang tinggi pada susu akan mendapatkan nilai jual yang kompetitif. Hal tersebut menginsiprasi produsen nakal untuk menambahkan zat berbahaya seperti melamin pada prosuk susu seperti yang terjadi di Cina. Berdasarkan informasi dari WHO tahun 2008, bahwa di negara China telah terjadi pencampuran melamin dalam bahan makanan yang mengandung susu seperti susu, biskuit, yogurt dan bahan makanan lainnya. Campuran melamin pada makanan dan minuman dapat mengakibatkan penyakit gagal ginjal, kanker bahkan kematian. Pencampuran melamin sebagai bahan pembuatan makanan dan minuman ditujukan untuk mengelabuhi badan pengecekan kualitas pangan. Sebab, melamin memiliki kadar nitrogen sebesar 66%, sehingga susu yang terkontaminasi melamin diuji menggunakan metode Kjehdahl, akan mendeteksi melamin sebagai protein (Zebua, 2013). Pemerintah Indonesia telah menetapkan peraturan mengenai batas maksimum kandungan melamin pada bahan pangan. Berdasarkan Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia No. 034 Tahun 2012 tentang batas maksimum melamin dalam pangan Bab II Pasal 2 ditetapkan batas maksimum melamin dalam susu bubuk formula bayi adalah 1 mg/kg, dalam susu formula bayi siap konsumsi maksimal 0,15 mg/kg, dan dalam pangan lain maksimal 2,5 mg/kg. Pengawasan pangan perlu didukung oleh laboratorium yang handal. Laboratorium penguji harus dibekali peralatan yang sensitif, memiliki batas deteksi sekecil mungkin. Analisis melamin dan/atau senyawa turunannya (asam sianurat, ammelida dan ammelina) dapat dilakukan menggunakan alat-alat yang sensitive seperti HPLC-UV, GC/MS, dan LC/MS/MS. Penggunaan LC/MS/MS 1
dianggap lebih peka daripada dua alat pertama. Pengujian melamin juga dapat dilakukan secara enzimatik menggunakan Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) (Hariyati et al., 2008). Sensitivitas metode tersebut tentu berbeda-beda tergantung matriks pangannya. Sensitivitas metode dinyatakan dengan batas deteksi atau LOD (Limit of Detection) dan batas kuantifikasi atau LOQ (Limit of Quantification) (Budiarti et al.,2010). Batas deteksi adalah jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat dideteksi yang masih memberikan respon signifikan dibandingkan dengan blanko. Sedangkan batas kuantifikasi merupakan kuantitas terkecil analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama (Harmita, 2004). HPLC-MS/MS dapat digunakan untuk menguji melamin pada formula bayi, susu, yoghurt, dan produk minuman kedelai dengan LOQ (Limit of Quantification) 0,004 mg/kg. Sedangkan GC-MS dapat digunakan untuk menguji melamin dan senyawa analognya (asam sianurat, ammeline dan ammelide) pada gluten gandum, protein beras, gluten jagung dan protein kedelai dengan LOD (Limit of Detection) 2,5–10 mg/kg. Dari beberapa teknik pengujian tersebut, WHO menyebutkan bahwa LC-MS/MS dan GC-MS/MS dapat menjadi pilihan untuk analisis melamin dan senyawa analognya karena lebih selektif dan sensitif (Martoyo, 2011).
B. Tujuan Kegiatan praktek lapang yang dilakukan di PT Saraswanti Indo Genetech ini memiliki tujuan sebagai berikut: 1) Menambah pengetahuan mengenai aplikasi ilmu teknologi pangan dalam dunia industri. 2) Mampu menambah pengetahuan mahasiswa teknologi pangan mengenai pengawasan keamanan pangan. 3) Menumbuhkembangkan sifat mandiri, kreatif, dan inovatif, serta mengetahui prospek mahasiswa teknologi pangan dalam industri kerja.
2
II. KEADAAN UMUM PERUSAHAAN
A. Sejarah dan Perkembangan Perusahaan PT Saraswanti Indo Genetech (SIG) Bogor merupakan salah satu bisnis unit dari Kelompok Usaha Saraswanti Group yang berpusat di Surabaya. PT Saraswanti Indo Genetech Bogor merupakan kolaborasi antara PT Saraswanti Anugerah Makmur Surabaya
dengan Yayasan Indonesian Center for
Biodiversity and Biotechnology (ICBB) Bogor. Bisnis unit yang lainnya di antaranya adalah PT Saraswanti Anugerah Makmur di bidang produsen Pupuk Majemuk Lepas Terkendali (PMLT), PT Saraswanti Mekar Agung di bidang produsen rokok, PT Arya Supra Nugraha di bidang trading, PT Saraswanti Sawit Makmur di bidang perkebunan kelapa sawit di Kalimantan Timur, PT Saraswanti Hasil Makmur di bidang properti di Yogyakarta (PT SIG, 2014). Pada tanggal 7 Juli 2001 PT Saraswanti Indo Genetech didirikan di Bogor. Perusahaan ini merupakan laboratorium jasa deteksi produk hasil rekayasa genetika atau transgenik atau biasa disebut Genetically Modified Organism (GMO) menggunakan PCR, serta jasa identifikasi bakteri. Perusahaan tersebut awalnya berada di Ruko Taman Yasmin Sektor 6 Nomor 150 Bogor (PT SIG, 2014). Pada tanggal 10 Oktober 2003 PT Saraswanti Indo Genetech Bogor diakreditasi Komite Akreditasi Nasional (KAN) berdasarkan ISO/IEC 17025:2000, sebagai laboratorium pertama di Indonesia yang terakreditasi KAN untuk ruang lingkup uji analisis produk hasil rekayasa genetika atau transgenik atau GMO secara kualitatif dan kuantitatif, sehingga PT Saraswanti Indo Genetech memiliki semboyan The First Indonesian Molecular Biotechnology Company. Kemudian, pada bulan Maret 2003, PT Saraswanti Indo Genetech Bogor telah lolos uji profisiensi GMO Analysis yang diadakan oleh GeMMA Scheme Proficiency Testing Group, Central Science Laboratory, Sand Hutton York, United Kingdom dengan predikat “Satisfication Performance” (PT SIG, 2014).
3
Gambar 1. Graha SIG Jalan Rasamala Nomor 46 Pada tanggal 28 April 2004, perusahaan ini lolos uji profisiensi GMO Analysis yang diadakan oleh Asia Pasific Laboratory Acreditation Coorporation (APLAC) dengan predikat “Satisfication Performance”. Pada bulan Agustus 2006, PT Saraswanti Indo Genetech menempati gedung baru yang lebih representatif yaitu Graha SIG di Jalan Rasamala Nomor 46 Taman Yasmin Bogor. Kemudian, tanggal 8-9 Februari 2007 PT Saraswanti Indo Genetech Bogor telah melakukan proses re-akreditasi oleh KAN berdasarkan ISO/IEC 17025:2005 dengan penambahan ruang lingkup antara lain uji analisis GMO, uji mikrobiologi, uji vitamin, uji asam lemak, uji logam berat, dan lain-lain. Proses re-akreditasi untuk laboratorium uji dilaksanakan kembali setiap empat tahun sekali oleh KAN (PT SIG, 2014).
Gambar 2. Graha SIG Jalan Rasamala Nomor 20 4
Gambar 3. Keadaan di PT Saraswanti Indo Genetech PT Saraswanti Indo Genetech memiliki Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi, Laboratorium Analitik Instrumen, Laboratorium Analitik Proksimat, dan Laboratorium Research and Development (R&D). Instrumen Analitik yang dimiliki oleh PT Saraswanti Indo Genetech diantaranya. 1. Sepuluh
HPLC (High Performance Liquid Chromatography) dan dua
UPLC (Ultra Performance Liquid Chromatography) dengan tiga diantaranya mempunyai detektor UV-Vis (Ultra Violet-Visible), dua detektor Flourecscene, lima detektor PDA (Photo Diode Array), dua detektor RI (Refractive Index). 2. Dua UPLC MS/MS (Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry) Triple Quadropole dan UPLC MS/MS QToF (Quadropole Time of Flight). 3. Sembilan GC (Gas Chromatography) dengan : lima detektor ECD (Electron Capture Detector), empat detektor FID (Flame Ionization Detector), satu FPD (Flame Photometric Detector), satu NPD(Nitrogen-Phosphorus Detector). 4. Satu GC MS/MS. 5. Tiga buah AAS (Atomic absorption spectroscopy) yaitu : AAS Flame, AAS Hydride, AAS Graphite Furnace. 6. Satu buah ICP OES (Inductively Coupled Plasma Optical Emission Spectrometry). 7. Dua buah Spektrofotometer. 5
8. Satu buah realtime PCR, PCR, dan ELISA. 9. Satu unit APGC (Atmospheric Pressure Gas Chromatography). 10. Satu unit Karl Fisher. 11. Dua unit Kjeltech, dan satu unit Soxhtech. 12. Tiga unit pH-meter. 13. Satu unit Dissolution Tester dan Desintegration. 14. Colony Counter, dan lain-lain.
B. Lokasi dan Tata Letak Perusahaan Pada awalnya laboratorium PT Saraswanti Indo Genetech menempati sebuah ruko di Taman Yasmin Sektor 6 Nomor 150, Bogor. Kemudian terhitung sejak Agustus 2006, laboratorium PT Saraswanti Indo Genetech menempati Graha SIG yang berlokasi di Jalan Rasamala Nomor 46, Taman Yasmin, Bogor. Laboratorium ini mulai menempati Graha SIG di Jalan Rasamala Nomor 20, Taman Yasmin, Bogor sejak September 2011. Di samping itu sedang dilakukan penyempurnaan terhadap website www.saraswanti.com agar dapat menjadi sarana komunikasi yang lebih baik dengan customer.
Gambar 4. Peta Lokasi PT Saraswanti Indo Genetech
6
C. Visi dan Misi Perusahaan 1. Visi Perusahaan Laboratorium PT Sarawanti Indo Genetech sebagai “One Stop Food Laboratory” yang kredibel, sehingga dapat mendharmabaktikan talenta yang bermanfaat bagi kemajuan dan kesejahteraan negeri tercinta Indonesia. Laboratorium uji analisis yang memiliki kompetensi handal dalam menghasilkan data pengujian yang akurat dan presisi tinggi (PT SIG, 2014).
2. Misi Perusahaan a) Berorientasi
pada
pemenuhan
kepuasan
pelanggan
(customer
satisfactory). b) Menerapkan dan mengembangkan “Good Professional Practice”. c) Menerapkan prinsip kerja “benar sejak awal” sesuai sistem manajemen mutu ISO/IEC 17025:2005 dan meningkatkan efektifitas sistem manajemen mutu secara berkelanjutan (PT SIG, 2014).
D. Struktur Organisasi Uraian tugas dan fungsi serta tanggung jawab masing-masing bagian berdasarkan struktur organisasi pada PT. Saraswanti Indo Genetech secara umum dapat dilihat sebagai berikut:
1. General Manager General Manager merupakan pucuk pimpinan Laboratorium PT Saraswanti Indo Genetech yang mempunyai tanggung jawab penuh terhadap semua kegiatan laboratorium serta memimpin organisasi untuk mencapai tingkat prestasi yang paling baik. Dalam memimpin organisasi laboratorium, General Manager dibantu oleh para manager seperti ditunjukkan dalam gambar. General Manager mempunyai wewenang membuat keputusan terhadap kebijakan maupun sumber daya laboratorium untuk mencapai mutu data pengujian sesuai kebutuhan dan kepuasan pelanggan. General Manager memiliki tugas sebagai berikut : a. Menetapkan dan mengesahkan Panduan Mutu laboratorium 7
b. Menyelenggarakan kaji ulang sistem manajemen mutu laboratorium minimal 1 tahun sekali c. Membuat perencanaan pengembangan bisnis berkaitan dengan laboratorium d. Menjamin
implementasi,
pemeliharaan
dan
peningkatan/
penyempurnaan sistem manajemen mutu e. Mengidentifikasi kejadian penyimpangan dari sistem manajemen dan memulai tindakan untuk mencegah atau meminimalkan penyimpangan tersebut f. Memberikan delegasi kepada direktur teknis/manajer terkait, apabila berhalangan.
2. Manajer Mutu Manajer Mutu adalah personil independen yang mempunyai akses langsung ke General Manager serta memiliki tanggung jawab dan kewenangan untuk memastikan bahwa sistem manajemen mutu yang sesuai dengan ruang lingkup kegiatan laboratorium dikomunikasikan, dimengerti, diterapkan dan dipelihara oleh seluruh personil pada semua tingkatan organisasi laboratorium dalam setiap waktu. Manajer Mutu mempunyai tugas, sebagai berikut : a. Merencanakan, mengkoordinir dan mengevaluasi penyusunan serta melakukan kaji ulang dokumentasi sistem manajemen mutu laboratorium b. Menetapkan dan mengesahkan dokumen sistem manajemen mutu kecuali panduan mutu c. Merencanakan, mengorganisasikan, dan mengevaluasi pelaksanaan program audit internal laboratorium terhadap semua elemen sistem manajemen mutu termasuk kegiatan pengujian d. Apabila diperlukan, melaksanakan kaji ulang terhadap temuan ketidaksesuaian dan rekomendasi tindakan perbaikan yang dilakukan oleh tim audit internal dalam pelaksanaan program audit internal
8
e. Melaksanakan audit tindak lanjut untuk memverifikasi penerapan dan efektifitas tindakan perbaikan yang dilakukan oleh auditee, apabila diperlukan f. Memberikan delegasi kepada supervisor mutu, apabila berhalangan.
3. Manajer Laboratorium Manajer Laboratorium bertanggung jawab kepada General Manager atas semua aspek operasional teknis dan kelengkapan sumber daya yang dibutuhkan untuk memastikan bahwa mutu data hasil pengujian tercapai sesuai kebutuhan dan kepuasan pelanggan. Manajer Laboratorium mempunyai tugas, sebagai berikut : a. Merencanakan, mengkoordinir dan mengevaluasi kegiatan pengujian baik di lapangan maupun di laboratorium b. Mengkoordinasikan penerapan jaminan mutu dan pengendalian mutu untuk semua jenis pengujian c. Melakukan pengontrolan pelaksanaan validasi data hasil pengujian d. Memilih dan menentukan subkontraktor laboratorium e. Menandatangani laporan hasil pengujian f. Melakukan penelusuran terhadap pengaduan/keluhan dari pelanggan yang berkaitan dengan mutu data hasil pengujian g. Mengontrol pelaksanaan kaji ulang permintaan, lelang pengujian, dan kontrak h. Melaksanakan pengawasan yang cukup terhadap, supervisor maupun analis i. Merencanakan, menyusun dan mengevaluasi program kalibrasi dan perawatan peralatan laboratorium j. Menentukan
laboratorium
kalibrasi
yang
kompeten
untuk
melaksanakan kalibrasi peralatan k. Mengidentifikasi kejadian penyimpangan dari prosedur untuk melaksanakan pengujian dan memulai tindakan untuk mencegah atau meminimalkan penyimpangan tersebut
9
l. Memberikan delegasi kepada asisten manajer laboratorium, apabila berhalangan.
4. Manajer Penelitian dan Pengembangan Manajer Penelitian dan Pengembangan bertanggung jawab kepada General Manager dalam hal penelitian dan pengembangan yang ditetapkan oleh PT Saraswanti Indo Genetech. Manajer Penelitian dan Pengembangan mempunyai tugas, sebagai berikut : a. Mengidentifikasi akar penyebab masalah atas penyimpangan dalam pelaksanaan pengujian b. Melaksanakan tindakan preventif dan meminimalisasi penyimpangan apabila
ketidaksesuaian
yang
berkaitan
dengan
pengujian
teridentifikasi c. Melakukan pengembangan dan validasi metode pengujian termasuk pengambilan contoh uji d. Bertanggung jawab atas partisipasi program uji profisiensi dan/atau uji banding e. Menunjuk
personil
yang menjadi
tanggung jawabnya
untuk
memberikan opini dan interpretasi hasil pengujian apabila diperlukan f. Memberikan delegasi kepada asisten manajer penelitian dan pengembangan, apabila berhalangan.
5. Asisten Manajer Laboratorium Asisten Manajer Laboratorium bertanggung jawab kepada Manajer Laboratorium atas semua aspek operasional teknis dan kelengkapan sumber daya yang dibutuhkan untuk memastikan bahwa mutu data hasil pengujian tercapai sesuai kebutuhan dan kepuasan pelanggan. Asisten Manajer Laboratorium mempunyai tugas sebagai berikut : a. Mengkoordinir dan mengevaluasi kegiatan pengujian baik di lapangan maupun di laboratorium b. Mengkoordinasikan penerapan jaminan mutu dan pengendalian mutu untuk semua jenis pengujian 10
c. Melakukan validasi data hasil pengujian d. Menandatangani laporan hasil pengujian e. Melakukan penelusuran terhadap pengaduan/keluhan dari pelanggan yang berkaitan dengan mutu data hasil pengujian f. Melakukan kaji ulang permintaan, lelang pengujian, dan kontrak. g. Melaksanakan pengawasan yang cukup terhadap penyelia maupun analis h. Membantu merencanakan, menyusun dan mengevaluasi program kalibrasi dan perawatan peralatan laboratorium i. Membantu untuk menentukan laboratorium kalibrasi yang kompeten untuk melaksanakan kalibrasi peralatan j. Mengidentifikasi kejadian penyimpangan dari prosedur untuk melaksanakan pengujian dan memulai tindakan untuk mencegah atau meminimalkan penyimpangan tersebut k. Memberikan delegasi kepada supervisor laboratorium, apabila berhalangan l. Menggantikan tugas supervisor laboratorium, pada saat supervisor tidak ada.
6. Asisten Manajer Penelitian dan Pengembangan Asisten Manajer Penelitian dan Pengembangan bertanggung jawab kepada Manajer Penelitian dan Pengembangan dalam hal penelitian dan pengembangan yang ditetapkan oleh PT. Saraswanti Indo Genetech. Asisten Manajer Penelitian dan Pengembangan mempunyai tugas sebagai berikut : a. Bersama Manajer Penelitian dan Pengembangan mengidentifikasi akar penyebab masalah atas penyimpangan dalam pelaksanaan pengujian b. Bersama Manajer Penelitian dan Pengembangan melaksanakan tindakan
preventif
dan
meminimisasi
penyimpangan
apabila
ketidaksesuaian yang berkaitan dengan pengujian teridentifikasi c. Melakukan pengembangan dan validasi metode pengujian termasuk pengambilan contoh uji 11
d. Bertanggung jawab atas partisipasi program uji profisiensi dan/atau uji banding e. Menunjuk
personil
yang menjadi
tanggung jawabnya
untuk
memberikan opini dan interpretasi hasil pengujian apabila diperlukan f. Memberikan delegasi kepada supervisor Penelitian dan Pengembangan apabila berhalangan g. Menggantikan tugas supervisor Penelitian dan Pengembangan, pada saat supervisor tidak ada.
7. Supervisor Laboratorium Supervisor Laboratorium bertanggung jawab kepada Manajer Laboratorium dalam pelaksanaan pengujian di laboratorium. Supervisor Laboratorium mempunyai tugas sebagai berikut : a. Mengkoordinasikan dan mengawasi penerapan jaminan mutu dan pengendalian mutu sesuai metode yang digunakan untuk semua jenis pengujian yang dilakukan oleh analis b. Melakukan verifikasi terhadap data hasil pengujian c. Meminimalisasi
penyimpangan
yang
dapat
mengakibatkan
menurunnya mutu data hasil pengujian di laboratorium dan melakukan tindakan perbaikan apabila ditemukan ketidaksesuaian d. Bertanggung jawab melaksanakan pengujian ulang terhadap retained sample jika ada keluhan dari pelanggan, apabila memungkinkan e. Melakukan penyeliaan yang memadai kepada maksimum tujuh analis f. Melakukan pelatihan dan mengembangkan profesionalisme analis sehingga mempunyai kompetensi untuk melaksanakan tugas sesuai uraian kerjanya g. Memantau, mengendalikan dan merekam kondisi lingkungan pengujian h. Menunjuk analis senior yang menjadi tanggung jawabnya, apabila berhalangan.
12
8. Supervisor Mutu Supervisor Mutu bertanggung jawab kepada Manajer Mutu dalam dalam hal mengendalikan seluruh dokumentasi sistem manajemen mutu yang diterapkan di laboratorium dan dalam pelaksanaan pelaksanaan sistem manajemen mutu di laboratorium, serta audit internal laboratorium. Supervisor Mutu mempunyai tugas sebagai berikut : a. Menyusun serta melakukan pengontrolan dalam pemelihara dan pengendalian dokumentasi sistem manajemen mutu baik dalam bentuk cetakan maupun elektronik serta mendistribusikannya kepada personil laboratorium yang tepat b. Menyiapkan dan memelihara dokumen yang berhubungan dengan pelaksanaan audit internal c. Melaksanaan program audit internal laboratorium terhadap semua elemen sistem manajemen mutu termasuk kegiatan pengujian d. Melaporkan
hasil
kegiatan
audit
internal
termasuk
temuan
ketidaksesuaian ke manajer mutu e. Memberikan delegasi kepada personil yang menjadi tanggung jawabnya, apabila berhalangan f. Meminimalisasi
penyimpangan
yang
dapat
mengakibatkan
menurunnya mutu data hasil pengujian di laboratorium dan melakukan tindakan perbaikan apabila ditemukan ketidaksesuaian g. Bertanggung jawab melaksanakan pengujian ulang terhadap retained sample jika ada keluhan dari pelanggan, apabila memungkinkan.
9. Pengendali Dokumen Pengendali Dokumen bertanggung jawab kepada Manajer Mutu dalam hal mengendalikan seluruh dokumentasi sistem manajemen mutu yang diterapkan di laboratorium. Pengendali Dokumen mempunyai tugas sebagai berikut : a. Memelihara dan mengendalikan dokumentasi sistem manajemen mutu baik
dalam
bentuk
cetakan
maupun
elektronik
serta
mendistribusikannya kepada personil laboratorium yang tepat 13
b. Menjamin bahwa dokumen yang digunakan oleh seluruh personil laboratorium adalah dokumen mutakhir c. Memusnahkan dokumen laboratorium yang sudah kadaluarsa d. Memelihara sistem komputer yang meliputi perangkat keras dan perangkat lunak yang digunakan di laboratorium termasuk sistem keamanan, back-ups, mail, dan print.
10. Tim Audit Internal Tim Audit Internal bertanggung jawab kepada Manajer Mutu/QA dalam hal pelaksanaan audit internal laboratorium. Tim Audit Internal mempunyai tugas sebagai berikut : a. Menyiapkan dokumen yang berhubungan dengan pelaksanaan audit internal b. Melaksanakan audit internal laboratorium c. Melaporkan
hasil
kegiatan
audit
internal
termasuk
temuan
ketidaksesuaian ke Manajer Mutu.
11. Analis Laboratorium Analis Laboratorium bertanggung jawab kepada Supervisor Laboratorium dalam hal pelaksanaan pengujian di laboratorium. Analis Laboratorium mempunyai tugas sebagai berikut : a. Melakukan pengujian terhadap sampel dari pelanggan b. Meminimisasi
penyimpangan
yang
dapat
mengakibatkan
menurunnya mutu data hasil pengujian di laboratorium dan melaporkannya kepada penyelia laboratorium agar diambil tindakan perbaikan apabila ditemukan ketidaksesuaian c. Melaksanakan pengujian ulang terhadap retained sample jika ada keluhan dari pelanggan, apabila memungkinkan d. Memantau, mengendalikan dan merekam kondisi lingkungan pengujian e. Membuat administrasi terhadap penerimaan dan pemakaian bahan kimia, bahan habis pakai dan bahan laboratorium lain 14
f. Menjaga kebersihan lingkungan kerja sebelum, pada saat dan setelah pelaksanaan kegiatan pengujian.
12. Petugas Pengambil Contoh Petugas Pengambil Contoh bertanggung jawab kepada Supervisor Laboratorium dalam hal pelaksanaan pengambilan contoh uji. Petugas Pengambil Contoh mempunyai tugas, sebagai berikut : a. Melakukan pengambilan contoh uji dan melaksanakan Good Sampling Practice b. Menerapkan jaminan mutu dan pengendalian mutu di lapangan c. Memantau, mengendalikan dan merekam kondisi lingkungan pada saat sampling d. Meminimisasi
penyimpangan
yang
dapat
mengakibatkan
menurunnya mutu data di lapangan dan melakukan tindakan perbaikan apabila ditemukan ketidaksesuaian e. Membuat administrasi terhadap dokumen yang digunakan pada saat sampling f. Menjaga kebersihan lingkungan sebelum, pada saat dan setelah pelaksanaan kegiatan sampling dilakukan (Anonimus, 2012).
15
III. TINJAUAN PUSTAKA DAN KEGIATAN DI LABORATORIUM
A. Susu Bubuk Susu bubuk merupakan suatu hasil olahan yang terbuat dari bahan dasar susu sapi segar yang telah mengalami proses pengeringan melalui spray drying. Setelah itu dilakukan penambahan bahan lain, terutama untuk menggantikan zat gizi yang telah mengalami kerusakan selama proses pengeringan (Winarno, 1993; Spreer dan Mixa, 1998). Syarat mutu untuk susu bubuk yang telah ditetapkan berdasarkan SNI 01-2970-2006 adalah kadar air maksimal 5% b/b, kadar lemak min. 26% b/b susu bubuk berlemak, 1,5% - 26,0% b/b untuk susu bubuk kurang lemak, dan maksimal 1,5%b/b untuk susu bubuk bebas lemak. Kadar protein minimal 23% b/b untuk susu bubuk berlemak dan susu bubuk kurang lemak, sedangkan untuk susu bubuk bebas lemak minimal 30% b/b.
B. Melamin Melamin dengan nama kimia melamina adalah senyawa dengan rumus kimia C3H6N6 dan memiliki nama IUPAC 1,3,5-triazina-2,4,6- triamina. Ia hanya sedikit larut dalam air (3,1 g/L pada suhu 20°C). Kebanyakan berbentuk kristal putih atau tepung putih yang kaya nitrogen. Melamin adalah trimer dari sianamida, dan seperti sianamida, ia mengandung 66% nitrogen (berdasarkan massa). Istilah "melamin" digunakan pula untuk merujuk pada resin melamin, yakni plastik yang dibuat dari melamin dan formaldehida (Hariyati et al., 2008).
Gambar 5. Struktur Melamin
16
Melamin juga dapat dideskripsikan sebagai penggabungan dari trimer sianiamida yakni tiga unit sianiamida dalam satu cincin. Melamin juga suatu metabolit dari siromazin (suatu pestisida). Senyawa ini terbentuk dalam tubuh mamalia yang telah memakan siromazin (cyromazine) dan dapat terkonversi menjadi melamin pada tanaman. Melalui proses metabolisme pada hewan tikus, kambing, domba, dan ayam betina, senyawa siromazin tersebut diubah menjadi melamin, metil siromazin, dan hidroksi siromazin (Jonathan et al., 2008; Michael dan Alexander, 2008) Melamin berbahaya jika terminum, terhirup, atau terserap melalui kulit. Paparan secara kronis dapat menyebabkan efek kanker dan kerusakan sistem reproduksi. Para ahli FDA (Food Drug Administration) menjelaskan ketika melamin dan asam sianurat daalam darah, maka akan terkonsentrasi dan berinteraksi di dalam saluran ginjal saat pengisian urin, lalu akan mengkristal menjadi kristal kuning yang dapat menghambat dan merusak sel kelenjar ginjal sehingga menyebabkan malfungsi ginjal. Negara Uni Eropa menyusun suatu standar untuk keberadaan melamin yang mengkontaminasi manusia pada 0,5 mg per kg dari berat badan. Kanada memberikan batasan pada 0,35 mg per kg dari berat badan (WHO, 2008).
C. Isu Melamin dalam Susu Bubuk Berdasarkan informasi dari WHO tahun 2008, bahwa di negeri China telah terjadi pencampuran melamin dalam bahan makanan yang mengandung susu seperti susu, biskuit, yogurt dan bahan makanan lainnya. Campuran melamin pada makanan dan minuman dapat mengakibatkan penyakit gagal ginjal, kanker bahkan kematian. Pencampuran melamin sebagai bahan pembuatan makanan dan minuman ditujukan untuk mengelabuhi badan pengecekan kualitas pangan. Sebab, melamin memiliki kadar nitrogen sebesar 66%, sehingga susu yang terkontaminasi melamin diuji menggunakan metode Kjehdahl, akan mendeteksi melamin sebagai protein (Zebua, 2013). Kasus ini cukup mengkhawatirkan mengingat melamin tidak dapat dimetabolisme tubuh, meskipun sifat racunnya rendah (LD50 terhadap tikus/ melalui saluran cerna = 3,161 mg/kg berat badan) dan secara cepat diekskresikan 17
melalui urin (waktu paruh di dalam plasma sekitar 3 jam). Data penelitian menunjukkan bahwa senyawa kimia tersebut dapat menimbulkan gangguan fatal pada organ ginjal. Tingginya kasus kegagalan ginjal pada bayi yang mengkonsumsi susu yang mengandung melamin di Cina dianggap merupakan salah satu fakta dampak negatif keberadaan melamin dalam makanan (WHO, 2008). Menurut WHO (2008), belum ada data penelitian melamin terhadap manusia secara langsung, tetapi baru terhadap hewan percobaan. Melamin menyebabkan batu kandung kemih hewan percobaan. Melamin juga penyebab kanker hewan percobaan, sedangkan pada manusia belum ada diteliti, sehingga efek karsinogeniknya masih samar. Potensial kronik lainnya adalah mutagenik untuk bakteri dan/atau khamir (yeast). Proteksi dan legalisasi penambahan melamin dalam pangan tidak dibenarkan Codex Alimentarius FAO/WHO ataupun oleh banyak negara. Codex menetapkan Standar Internasional dan dokumen terkait untuk digunakan oleh 183 negara anggota untuk melindungi kesehatan konsumen dan perdagangan internasional. Standar ini diakui sebagai tolok ukur internasional bagi banyak negara maju dan berkembang (Harrington, 2010). Perhatian masyarakat Uni Eropa terhadap kasus ini tertera pada Pernyataan EFSA (The European Food Safety Authority) (Hariyati et al., 2008).
D. LC MS/MS 1. Sejarah dan Prinsip Kromatografi Kromatografi merupakan salah satu teknik pemisahan yang dapat memisahkan komponen senyawa satu sama lain yang berada dalam suatu campuran. Pemisahan dapat terjadi karena adanya perbedaan kecepatan gerak suatu komponen senyawa dengan senyawa lainnya akibat perbedaan sifat yang dimiliki masing-masing senyawa terhadap fasa diam maupun fasa gerak yang ada dalam sistem kromatografi (Day dan Underwood, 1988). Penemu Kromatografi adalah Tswett yang pada tahun 1903, mencoba memisahkan pigmen-pigmen dari daun dengan menggunakan suatu kolom yang berisi kapur (CaSO4). lstilah kromatografi diciptakan oleh Tswett 18
untuk melukiskan daerah-daerah yang berwarna yang bergerak ke bawah kolom. Pada waktu yang hampir bersamaan, D.T. Day juga menggunakan kromatografi untuk memisahkan fraksi-fraksi petroleum, namun Tswett lah yang pertama diakui sebagai penemu dan yang menjelaskan tentang proses kromatografi (Scott, 2003). Perkembangan tentang kromatografi agak lambat untuk beberapa tahun sampai digunakan suatu teknik dalam bentuk kromatografi padatan cair (LSC). Kemudian pada akhir tahun 1930 an dan permulaan tahun 1940an, kromatografi mulai berkembang. Dasar Kromatografi Lapisan Tipis (KLT) diletakkan pada tahun 1938 oleh Izmailov dan Schreiber, dan kemudian diperhalus oleh Stahl pada tahun 1958. Hasil karya yang baik sekali dari Martin dan Synge pada tahun 1941 (untuk ini mereka memenangkan Nobel) tidak hanya mengubah dengan cepat kromatografi cair tetapi seperangkat umum langkah untuk pengembangan kromatografi gas dan kromatografi kertas. Pada tahun 1952 Martin dan James mempublikasikan makalah pertama mengenai kromatografi gas. Diantara tahun 1952 dan akhir tahun 1960-an kromatografi gas dikembangkan menjadi suatu teknik analisis yang canggih. Mekanisme pemisahan dominan yang terjadi
dalam
sistem
kromatografi cair ditentukan oleh jenis kolom yang digunakan. Mekanisme pemisahan yang mungkin adalah adsorpsi, partisi, penukar ion dan kromatografi eksklusi (Kartasasmita et al, 2004). a. Adsorpsi Kromatografi adsorpsi (sering dinyatakan sebagai kromatografi padat-cair atau fase normal). Istilah fase normal menunjukkan digunakannya fase diam polar dan fase gerak nonpolar. Pada kromatografi adsorpsi, terjadi interaksi pada sisi aktif fase diam berdasarkan perbedaan polaritas. Molekul yang lebih polar akan diadsorpsi lebih kuat dibandingkan molekul yang kurang polar sehingga terelusi lebih lama.
19
b. Partisi Kromatografi fase terikat dapat digunakan untuk sistem kromatografi fase normal ataupun terbalik. Pada sistem fase terbalik, fase diam yang digunakan bersifat nonpolar, sedangkan fase gerak polar digunakan untuk mengelusi komponen dalam kolom. Senyawa yang paling umum digunakan sebagai fase diam adalah oktadesilsilan. Fase diam ini biasanya diikatkan pada fase penunjang silika dengan membentuk ikatan silieter atau ikatan siloksan. Keuntungan fase terikat dibandingkan sistem adsorpsi adalah kemungkinan dilakukannya elusi gradien. c. Penukar Ion Kromatografi penukar ion memanfaatkan perbedaan tingkat afinitas ion-ion dalam larutan terhadap kumpulan ion bermuatan yang terdapat dalam kolom. Gugus fungsi yang menjadi sisi aktif penukar ion adalah amonium kuartener untuk anion dan asam sulfonat untuk kation. Sebagai penunjang sisi aktif digunakan penukar ion yang berasal dari senyawa berikatan silang dari polistiren, polidekstran, dan silika. d. Eksklusi Kromatografi
eksklusi
kromatografi gel, filtrasi gel
dikenal
juga
dengan
sebutan
atau permeasi gel. Mekanisme
pemisahan terjadi berdasarkan pemilihan ukuran partikel molekul. Molekul akan terdifusi dalam pori dengan ukuran tertentu. Molekul yang lebih kecil dari ukuran pori akan masuk dan mengalami pemisahan berdasarkan ukurannya (Kealey dan Haines, 2002). Semakin
banyak
usaha
dilakukan
untuk
pengembangan
kromatografi cair. Kromatografi cair, dalam praktek ditampilkan dalam kolom gelas berdiameter besar, pada dasarnya dibawah kondisi atmosfer. Waktu analisis lama dan segala prosedur biasanya sangat membosankan. Pada akhir tahun 1960 an, sebagai suatu teknik mengimbangi kromatografi gas. High Performance Liquid Chromatography (HPLC) atau Kromatografi Cair Kinerja Tinggi telah berhasil dikembangkan dari usaha ini. Kemajuan 20
dalam keduanya instrumentasi dan pengepakan kolom terjadi dengan cepat, sehingga sulit untuk mempertahankan suatu bentuk hasil keahlian membuat instrumentasi dan pengepakan kolom dalam keadaan tertentu. Tentu saja, saat ini dengan teknik yang sudah matang dan dengan cepat, KCKT mencapai suatu keadaan yang sederajat dengan kromatografi gas. Prinsip kerja KCKT yaitu dengan bantuan pompa fase gerak cair dialirkan melalui kolom ke detektor. Cuplikan dimasukkan ke dalam fase gerak melalui penyuntikan. Di dalam kolom terjadi pemisahan komponenkomponen campuran, karena perbedaan kekuatan interaksi antara molekul yang terlarut dalam fase gerak terhadap fase diam maka terjadilah pemisahan. Komponen yang lemah interaksinya dengan fase diam akan lebih dulu keluar dari kolom. Setiap komponen campuran yang keluar dari kolom akan dideteksi oleh detektor. Kemudian direkam dalam bentuk kromatogram. Seperti pada kromatografi gas, jumlah peak menyatakan jumlah komponen, sedangkan luas peak menyatakan konsentrasi komponen dalam campuran. KCKT dapat menganalisis cuplikan yang labil (terurai) oleh pemanasan, karena KCKT dilakukan pada suhu kamar. KCKT tidak terbatas untuk senyawa organik saja tapi juga dapat menganalisis cuplikan yang berasal dari senyawa anorganik. Keuntungan lain dibandingkan dengan kromatografi gas, KCKT dapat menganalisis cuplikan yang mempunyai berat molekul yang tinggi seperti polimer.
2. Prinsip UPLC (Ultra Performance Liquid Chromatography) Kromatografi ini meningkatkan di tiga bidang yaitu resolusi kromatografi, kecepatan, dan sensitivitas analisis. Alat ini menggunakan ukuran partikel kolom yang lebih kecil sehingga dapat menghemat waktu dan mengurangi konsumsi pelarut tanpa mengurangi resolusi. Ideologi kausal kemajuan ini diatur oleh apa yang disebut persamaan Van Deemter. Teknologi ini mengambil manfaat penuh dari prinsip-prinsip kromatografi untuk mendorong pemisahan memanfaatkan kolom sesak penuh partikel mungil dan/atau laju aliran yang unggul untuk kecepatan yang lebih tinggi 21
dengan resolusi yang luar biasa dan sensitivitas yang sangat baik (Reddy et al., 2012). Liquid Chromatography diperkenalkan oleh Perusahaan Waters ketika mereka memperkenalkan sistem Acquity LC mereka. Perubahan terbesar adalah penggunaan sub-2 µm partikel, yang dioperasikan pada laju alir yang lebih tinggi dan tekanan dari sistem konvensional. Konsep ini mengakibatkan waktu analisis secara signifikan menjadi lebih pendek (Reddy et al., 2012). Kromatografi Cair Kinerja Ultra Tinggi menggunakan fase diam (kolom) dengan ukuran partikel kurang dari 2 μm (sementara kolom KCKT biasanya menggunakan partikel berukuran 3 sampai 5 μm). Prinsip-prinsip yang mendasari evolusi ini diatur oleh persamaan Van Deemter, yang menggambarkan hubungan antara kecepatan linear (laju aliran) dan jarak plat teoritis (HETP (Height Equivalent to Theoretical Plate) /JSPT (Jarak Setara Plat Teori) atau efisiensi kolom). Kurva Van Deemter digambarkan dalam suatu persamaan dengan tiga komponen yang menunjukkan bahwa kisaran aliran yang digunakan untuk menghasilkan puncak dengan nilai efisiensi yang baik diperoleh dengan penggunaan partikel fase diam yang berukuran lebih kecil dibandingkan partikel fase diam yang berukuran lebih besar, seperti dalam persamaan berikut.
H = A+B/v+Cv dengan A, B, dan C adalah konstanta dan v adalah kecepatan linear atau laju aliran gas pembawa (pada kromatografi gas). Konstanta A merupakan kecepatan yang mewakili efek difusi “Eddy”. Konstanta ini memiliki nilai terkecil saat partikel dalam kolom dikemas berukuran kecil dan seragam. Konstanta B mewakili difusi aksial atau difusi alami yang dimiliki molekul. Efek ini berkurang pada laju alir tinggi dan konstanta ini dibagi oleh besaran v. Konstanta C disebabkan hambatan inetik yang dibutuhkan untuk mencapai keseimbangan dalam proses pemisahan (Srivastata et al., 2010).
22
Oleh karena itu, peningkatan kecepatan analisis tanpa mempengaruhi kinerja analisis kromatografi sangatlah mungkin dilakukan. Munculnya Kromatografi Cair Kinerja Ultra merupakan perkembangan bidang kromatografi cair, yang menguntungkan pada proses pemisahan (dengan mengurangi dead volume) dan memiliki tekanan konstan yang tinggi (sekitar 8000 sampai 15.000 Psi, dibandingkan dengan 2500-5000 Psi pada KCKT). Efisiensi sebanding dengan panjang kolom dan berbanding terbalik dengan ukuran partikel. Dengan demikian, kolom dapat dibuat lebih pendek tanpa harus mengorbankan resolusi antar puncak.
Gambar 6. UP LC Eksigent Expert Ultra LC100
Gambar 7. AB SCIEX QTRA 4500
23
Beberapa keuntungan yang dimiliki sistem Kromatografi Cair Kinerja Ultra dibandingkan sistem KCKT adalah sebagai berikut. a. Mempersingkat waktu analisis dan meningkatkan sensitivitas. b. Memiliki nilai selektivitas, sensitivitas, dan daya analisis yang luas pada sistem analisis kromatografi. c. Memiliki nilai resolusi yang tinggi. d. Mengurangi biaya operasional. e. Mengurangi penggunaan pelarut sebagai fase gerak. f. Dapat menganalisis sampel dengan jumlah yang lebih banyak karena waktu analisis yang relatif lebih pendek dibandingkan KCKT (Yandamuri et al., 2013).
3. Instrumentasi LC MS/MS (Liquid Chromatography Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry) Instrumen yang digunakan pada sistem kromatografi adalah LCMS/MS,
yaitu
seperangkat
UPLC
(Ultra
Performance
Liquid
Chromatography) atau Kromatografi Cair Kinerja Ultra Tinggi yang dihubungkan dengan sistem deteksi Mass Spectrometry. Dengan menggunakan ukuran partikel yang lebih kecil dibanding sistem HPLC (High Performance Liquid Chromatography) atau Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT), kecepatan elusi dan kapasitas puncak (jumlah puncak yang dihasilkan per satuan waktu pada pemisahan secara gradien) pada analisis dengan UPLC dapat ditingkatkan. Teknologi ini menggunakan kolom yang dikemas dengan partikel yang berukuran lebih kecil dan/atau tingkat aliran tinggi untuk meningkatkan kecepatan dengan resolusi dan sensitivitas yang tinggi (Swartz, 2005). Kromatografi Cair Kinerja Ultra memiliki beberapa bagian-bagian penting untuk menjamin tercapainya peningkatan kecepatan, resolusi, dan sensitivitas yang diperoleh dari penggunaan ukuran partikel yang kecil. Dibutuhkan suatu desain khusus pada bagian pompa, autosampler, detektor, dan sistem pengolah data untuk memenuhi tujuan tersebut. Bagian-bagian
24
dasar sebuah instrumen Kromatografi Cair Kinerja Ultra adalah sebagai berikut (Reddy et al., 2012).
Gambar 8. Instrumentasi LC MS/MS a. Pompa Pompa Kromatografi Cair Kinerja Ultra memiliki kemampuan untuk mengalirkan fase gerak pada tekanan tinggi, yaitu mencapai 18000 psi pada UPLC Eksigent Expert Ultra LC 100 untuk laju alir optimum dengan efisiensi maksimal melewati kolom berukuran 15 cm dengan ukuran partikel 1.7 μm. Pompa UPLC juga memiliki katup inbuilt solvent selector, yang memiliki kemampuan untuk mengatur perbandingan fase gerak (hingga 2 macam fase gerak) pada saat pencampuran secara akurat. b. Sample Manager Sistem UPLC dengan desain Sample Manager Flow Through Needle (pada Merk Waters) ditujukan untuk menghasilkan kinerja yang dapat diandalkan yaitu stabilitas needle (jarum) pada tekanan tinggi. Hal tersebut meminimalkan lebarnya extra column-band pada peak yang tajam, dan menghasilkan proses injeksi bebas denyut untuk menjaga kolom dari perubahan tekanan yang fluktuatif. Ketika proses injeksi dimulai, katup injeksi membelokkan aliran dari jarum injeksi untuk mengambil sampel dari vial. Jarum injeksi masuk ke dalam vial untuk mengambil larutan sampel dengan volume yang tepat sesuai kebutuhan, kemudian jarum injeksi akan kembali lagi ke tempat semula (injection port). Lalu, jarum akan 25
terdorong melawan permukaan bagian dalam injection port, katup injeksi berputar, dan larutan sampel akan terdorong masuk ke injection port. Penyebaran (dispersi) sampel dapat diminimalkan dengan menjaga jarak tetap kecil antara injection port dan katup injeksi. Setelah proses injeksi sampel selesai, jarum injeksi akan dibilas dengan sejumlah larutan pembilas needle dan syringe selama waktu tertentu untuk meminimalkan terjadinya kontaminasi (carryover). c. Kolom Kolom Kromatografi Cair Kinerja Ultra terbuat dari partikelpartikel yang berukuran kurang dari 2 μm. Kolom akan ditempatkan pada sebuah bagian yang dapat mengontrol suhu kolom hingga 65˚C. d. Ion Source Teknik ionisasi pada tekanan atmosfer (atmospheric pressure ionization/API) memperluas jumlah senyawa yang dapat dianalisis dengan LC-MS/MS. Pada teknik ionisasi tekanan atmosfer, molekul analit terionisasi terlebih dahulu pada tekanan atmosfer. Ion-ion analit tersebut kemudian secara mekanis dan elektrostatis terpisah dari inti molekul. Teknik ionisasi tekanan atmosfer umumnya adalah 1) Ionisasi elektrospray (Electro Spray Ionization/ESI) 2) Ionisasi kimia tekanan atmosfer (Atmospheric Pressure Chemical Ionization/APCI) 3) Fotoionisasi tekanan atmosfer (Atmospheric Pressure Photo Ionization/APPI).
Gambar 9. Komponen Spektrometer Massa
26
Dalam setiap pengukuran, silfat analit dan kondisi pemisahan memiliki pengaruh yang tinggi untuk memberikan hasil pembacaan terbaik dalam setiap teknik ionisasi elektrospray, APCI, maupun APPI. Teknik ionisasi yang paling efektif terhadap suatu analit tidak selalu dengan mudahnya dapat diprediksi (Anonim, 2001). Dalam analisis melamin pada sampel, digunakan teknik ionisasi ESI (Electro Spray Ionization). Pada teknik ESI, larutan yang mengandung molekul-molekul sampel disemprotkan keluar dari ujung probe (kapiler) ke daerah dengan keadaan tekanan atmosfer. Kapiler yang dilalui larutan sampel memiliki tegangan potensial tinggi di permukaannya, sehingga terbentuklah tetes-tetes partikel bermuatan. Tetes-tetes partikel bermuatan tersebut diarahkan dengan bantuan aliran gas nitrogen, sehingga pelarut terevaporasi. Kemudian, massa yang bermuatan pada setiap tetes partikel meningkat hingga tegangan elektrostatik melebihi tegangan permukaan dari tetes-tetes partikel bermuatan. Proses ini berlanjut hingga seluruh pelarut teruapkan (Pavia et al., 2009) e. Mass Analyzer Penganalisis massa (mass analyzer), komponen alat yang memisahkan campuran ion-ion yang dihasilkan selama proses ionisasi berdasarkan massa per muatan atau m/z-nya untuk menghasilkan spektrum, Mass Analyzer merupakan bagian penting dari setiap spektrometer massa terdapat beberapa jenis penganalisis massa dengan karakteristik yang berbeda sebagai berikut. 1) Magnetic Sector Mass Spectrometry Jenis penganalisis massa ini menggunakan prinsip medan magnet untuk membiaskan perpindahan ion-ion di sebuah lintasan lengkung. Pemisahan ion-ion terjadi berdasarkan perbandingan massa/muatan (m/z) dengan ion-ion yang memiliki massa molekul ringan
dibiaskan/dibelokkan
ke
tingkat
yang
lebih
besar
dibandingkan ion-ion yang memiliki massa molekul besar.
27
2) Quadropole Penganalisis massa quadropole lebih kecil dan murah dibandingkan penganalisis massa jenis pertama. Quadropole terdiri dari empat tabung silinder yang terhubung paralel satu sama lain. Arus DC konstan diaplikasikan ke dalam tabung-tabung silinder tersebut Hanya ion-ion dengan nilai m/z tertentu yang dapat melewati quadropole hingga sampai ke detektor. Quadropole dapat beroperasi dengan dua mode: a) Memindai (Scanning) b) Pemantauan ion terpilih (Selected Ion Monitoring/SIM atau Multi Reaction Monitoring/MRM) (Silverstein, 2005).
Gambar 10. Quadropole Mass Analyzer Pada mode memindai, quadropole memantau m/z ion-ion pada rentang massa tertentu. Pada mode pemantauan ion terpilih, quadropole hanya memantau beberapa m/z ion-ion yang diinginkan. Mode pemantauan ion terpilih lebih sensitif daripada mode memindai, namun mode ini hanya memberikan informasi berupa ion-ion tertentu yang dipilih. Mode memindai biasanya digunakan untuk tujuan analisis kualitatif atau analisis kuantitatif ketika seluruh massa analit tidak diketahui secara pasti. Mode pamantauan ion terpilih digunakan untuk analisis kuantitatif dan memantau keberadaan senyawa yang diinginkan (Anonim, 2001) 28
3) Ion Trap Ion Trap, terkadang dianggap sebagai
varian dari
quadropole, karena keduanya memiliki bentuk dan mode operasi yang berhubungan. Pada umumnya Ion Trap terdiri dari tiga elektroda. Satu cincin elektroda dengan permukaan dalam berbentuk hiperbola dan dua elektroda hiperbola pada ujungnya. Cincin elektroda dioperasikan dengan medan Rf (Radio Frequency) sinusoidal, sedangkan dua elektroda lainnya dioperasikan dengan 3 jenis mode operasi, yaitu pada potensial dasar, kondisi tegangan AC, atau kondisi tegangan DC.
f. Detektor Detektor adalah bagian dari instrumen yang berfungsi mendeteksi sinyal hasil pembacaan analit. Detektor yang digunakan adalah spektroskopi massa. Konsep spektrometri massa relatif sederhana, senyawa hasil elusi pada kromatografi cair diionisasi, lalu dipisahkan dan dideteksi berdasarkan rasio massa/muatan (m/z), dan jumlah ion-ion yang menggambarkan satuan-satuan m/z digambarkan sebagai spektrum senyawa (Silverstein et al., 2005). Metode kromatografi cair–spektrometri massa ini memiliki beberapa kelebihan, diantaranya adalah sebagai berikut. 1) Spesifisitas Hasil analisis yang khas dan spesifik diperoleh dari penggunaan spektrometri massa sebagai detektor 2) Aplikasi yang luas dengan sistem praktis, tidak terbatas untuk molekul mudah menguap (volatil) seperti GC MS, persiapan sampel cukup sederhana tanpa proses derivatisasi, dan mampu mengukur analit yang sangat polar. 3) Pengujian yang berbeda dapat dikembangkan dengan tingkat fleksibilitas yang tinggi dan waktu yang singkat. 4) Sejumlah data kuantitatif dan kualitatif dapat diperoleh. Hal ini disebabkan seleksi ion yang sangat cepat dengan banyak parameter (Vogeser dalam Ginting, 2012). Spektrometer massa bekerja dengan 29
molekul pengion yang kemudian akan memilah dan mengidentifikasi ion menurut massa, sesuai fragmentasi massa/muatan (m/z). Dua komponen kunci dalam proses ini adalah sumber ion (ion source) yang akan menghasilkan tegangan, dan penganalisis massa (mass analyzer) yang menyeleksi ion. Sistem LC-MS/MS umumnya menggunakan beberapa jenis ion source dan mass analyzer yang dapat disesuaikan dengan polaritas senyawa yang akan dianalisis (Anonim, 2001).
E. Penentuan Kandungan Melamin dalam Susu Bubuk 1. Peralatan a. Labu ukur 50 ml b. Labu ukur 10 ml c. Botol Schoot 250 ml (untuk fase gerak) d. Ultrasonik e. Centrifuge f. Vial g. UPLC Eksigent Expert Ultra LC 100 h. AB SCIEX QTRA 4500
2. Bahan a. Standar Melamin b. Ammonium asetat c. Asetonitril d. Dietil Amina (DEA) 2% dalam aquabidest e. Aquabidest f. Membran filter PTFE 0,2 µm
3. Pembuatan fase gerak a. Solvent A : Ammonium asetat 10 mM dalam Asetonitril 10% 1) Ditimbang 157,5 mg Ammonium asetat. 2) Dilarutkan dengan Asetonitril 10% hingga larut. 3) Ditambahkan Asetonitril 10% hingga volume 250 ml. 30
4) Disaring dengan membran filter PTFE 0,2 µm. b. Solvent B : Ammonium asetat 10 mM dalam Asetonitril 95% 1) Ditimbang 157,5 mg Ammonium asetat. 2) Dilarutkan dengan Asetonitril 95% hingga larut. 3) Ditambahkan Asetonitril 95% hingga volume 250 ml. 4) Disaring dengan membran filter PTFE 0,2 µm
4. Pembuatan standar melamin a. Larutan standar induk melamin 1000 mg/L 1) Ditimbang 10 mg standar melamin ke dalam labu ukur 10 ml. 2) Dilarutkan dengan Asetonitril sebanyak 5 ml. 3) Ditambahkan aquabidest hingga tanda tera. b. Standar antara melamin 1000 µg/L 1) Dipipet 50 µl standar melamin 1000 ppm ke labu 50 ml. 2) Ditambahkan Dietil Amina (DEA) 2% hingga tanda tera. c. Standar antara melamin 100 µg/L 1) Dipipet 1 ml standar melamin 1000 ppb ke labu 10 ml. 2) Ditambahkan Dietil Amina (DEA) 2% hingga tanda tera. d. Standar antara melamin 10 µg/L 1) Dipipet 1 ml standar melamin 100 ppb ke labu 10 ml. 2) Ditambahkan Dietil Amina (DEA) 2% hingga tanda tera. e. Deret standar melamin 1) Dibuat deret standar melamin dengan konsentrasi 0,1; 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 7,5; 10,0; 25,0; 50,0 ppb dengan pemipetan larutan standar ke dalam labu ukur 10 ml sebagai berikut:
Tabel 1. Konsentrasi dan Pemipetan Deret Standar Konsentrasi deret standar (µg/L)
Volume Labu (ml)
0.1 0.5
10 10
Konsentrasi Volume standar pemipetan yang standar dipipet (ml) (µg/L) 10 0.1 10 0.5 31
1.0 2.5 5.0 7.5 10.0 25.0 50.0
10 10 10 10 10 10 10
10 100 100 100 1000 1000 1000
1 0.25 0.5 0.75 0.1 0.25 0.5
2) Ditambahkan Dietil Amina (DEA) 2% hingga tanda tera.
5. Pengerjaan contoh a) Ditimbang 1 gram sampel ke dalam labu ukur 50 ml. b) Dilarutkan dengan 25 ml Asetonitril 80 %. c) Disonikasi selama 30 menit. d) Ditambahkan Asetonitril 80 % hingga tanda tera. e) Disentrifugasi dengan kecepatan 14000 rpm selama 3 menit. f) Disaring dengan membran PTFE 0,2 µm, kemudian dimasukkan ke dalam vial.
6. Kondisi UPLC MS/MS a) Kondisi UPLC Kolom Fase gerak
= Acquity BEH HILIC 2,1 x 100 mm, 1,7um = A : 10 mM Ammonium Asetat dalam Asetonitril 10% B : 10 mM Ammonium Asetat dalam Asetonitril 95%
Perbandingan FG = A : B = 80 : 20 Laju alir = 0,3 ml/menit Suhu kolom
= 40oC
Volume injeksi
= 5 µL
Run Time
= 4 menit
b) Kondisi MS/MS Polaritas CUR
= ESI (+) = 30 Psi 32
CAD Ionspray Voltage
= Medium = 4500
Temperatur GS1
= 400 0C = 50 Psi
GS2
= 60 Psi
Tabel 2. Multi Reaction Monitoring
DP
EP
CE
CXP
85
Dwell Time (ms) 145
66,12
8,15
23,39
12,70
127,1
67,9
145
66,12
8,15
33,78
17,40
Melamine
127,1
60,0
145
66,12
8,15
24,47
16,66
Melamine
127,1
110
145
66,12
8,15
23,37
28,82
Compound
Q1 (amu)
Q3 (amu)
Melamine
127,1
Melamine
Parameter MS
* Hasil trial laboratorium RnD PT Saraswanti Indo Genetech 7. Perhitungan 𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑀𝑒𝑙𝑎𝑚𝑖𝑛 (𝜇𝑔/𝐾𝑔) =
𝐴𝑟𝑒𝑎 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑎𝑘ℎ𝑖𝑟 𝑥 𝐹𝑎𝑘𝑡𝑜𝑟 𝑃𝑒𝑛𝑔𝑒𝑛𝑐𝑒𝑟𝑎𝑛 𝑥 𝑆𝑙𝑜𝑝𝑒 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑜ℎ
33
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil
Tabel 3. Hasil Pengujian Kandungan Melamin dalam Susu Bubuk
Slope
Konsentrasi Injeksi (µg/L; µg/Kg)
Kadar (µg/L; µg/Kg)
Kadar Rata-Rata (µg/L; µg/Kg)
0.00
4730
0.00
ttd
ttd
50
0.00
4730
0.00
ttd
ttd
1.1046
50
0.00
4730
0.00
ttd
ttd
Sampel D
1.1266
50
0.00
4730
0.00
ttd
ttd
Sampel E
1.0325
50
0.00
4730
0.00
ttd
ttd
6
Sampel F
1.0512
50
0.00
4730
0.00
ttd
ttd
7
Sampel G
1.3346
50
0.00
4730
0.00
ttd
ttd
8
Sampel H
1.3267
50
0.00
4730
0.00
ttd
ttd
9
Sampel I
1.4822
50
0.00
8130
0.00
ttd
ttd
10
Sampel J
1.0699
50
0.00
8330
0.00
ttd
ttd
11
Sampel K simplo Sampel K duplo Sampel K spike
1.3113
50
0.00
2910
0.00
ttd
1.2901
50
0.00
2910
0.00
ttd
1.5122
50
31856.39
2910
10.63
351.51
351.51
Sampel L
1.2233
50
0.00
4870
0.00
ttd
ttd
Sampel M 1.0839 simplo Sampel M 1.0900 duplo Sampel M 1.0558 spike Keterangan : ttd = tidak terdeteksi FP = faktor pengenceran
50
0.00
3020
0.00
ttd
50
0.00
3020
0.00
ttd
50
39103.69
3020
11.34
536.99
Nama Sampel
Bobot Sampel (gram)
FP
Area
1
Sampel A
1.2279
50
2
Sampel B
1.041
3
Sampel C
4 5
No.
12 13
ttd
ttd 536.99
Tabel 4. Hasil Perolehan Kembali (% Recovery) Spiking Sampel
Nama Sampel
Bobot Sampel yang Akan dispike (g)
Konsentrasi Rata-Rata Sampel (ppb)
Volume Standar yang ditambahkan (ml)
Konsentrasi Standar yang ditambahkan (ppb)
Konsenstrasi Spike Teoritis (ppb)
Konsentrasi Spike Perolehan (ppb)
% Recovery
Sampel K
1.5122
0.00
0.05
9963
329.42
351.51
106.70
Sampel M
1.0558
0.00
0.05
9963
471.82
535.93
113.59
34
B. Pembahasan Kasus yang terjadi di Cina pada tahun 2008 cukup menggemparkan dunia. Terjadi pencampuran melamin dalam bahan makanan yang mengandung susu seperti susu, biskuit, yogurt dan bahan makanan lainnya yang dapat mengakibatkan penyakit gagal ginjal, kanker bahkan kematian. Pencampuran melamin sebagai bahan pembuatan makanan dan minuman ditujukan untuk mengelabuhi badan pengecekan kualitas pangan. Karena pengujian protein dengan menentukan unsur nitrogen di dalam produk pangan dapat diketahui dengan metode Kjeldahl. Namun metode Kjeldahl memiliki kelemahan tidak bisa membedakan apakah nitrogen dalam produk pangan tersebut benar-benar protein atau terdapat pemalsuan protein seperti pada kasus penambahan melamin atau kontaminasi melamin karena lingkungan. Sehingga pengujian adanya melamin dalam produk pangan sebaiknya menggunakan metode analisa secara kromatografi (HPLC dan LC-MS). Menurut kepala BPOM, LC MS/MS merupakan metode yang paling dapat dipercaya berdasarkan standar WHO. Metode ini dapat mendeteksi bahan yang benar-benar mengandung melamin secara tepat, sehingga terjamin keakuratannya. Oleh sebab itu Badan POM merekomendasikan LC MS/MS untuk mendeteksi adanya melamin dalam produk-produk pangan yang diedarkan di Indonesia. Dari 13 sampel susu bubuk yang diuji kandungan melaminnya di PT Saraswanti Indo Genetech menggunakan metode LC MS/MS tidak ada yang menunjukkan hasil positif. Dari hasil pengujian tersebut tidak terdeteksi kandungan melamin, dilihat dari perbandingan waktu retensi peak yang muncul dan spektral massa antara standar melamin dan sampel susu bubuk. Namun belum dapat kita anggap bahwa susu bubuk yang beredar di sekitar kita masih aman dari kontaminasi melamin karena pengujian ini bukan merupakan survey, melainkan hanya pada sampel dari customer laboratorium ini. Pengujian melamin dilakukan simplo pada masing-masing sampel, namun pada setiap kali pengujian dipilih secara acak satu sampel yang akan dijadikan kontrol. Sampel tersebut diuji duplo dan satu lagi ditambahkan sejumlah standar ke dalam sampel (spiking). Spiking bertujuan untuk 35
mengetahui seberapa banyak jumlah analit diperoleh kembali setelah proses analisis dengan melihat % Recovery dari melamin pada sampel tersebut, yaitu membandingkan kadar zat yang didapat dari analisis dengan kadar zat yang ditambahkan. Hasil perolehan kembali standar yang ditambahkan ke dalam sampel (% Recovery) yaitu 106,70% dan 113,59%. Nilai % Recovery yang baik menurut acuan validasi adalah yang mendekati 70-120% (Eurecham, 2014). Dari nilai recovery tersebut, maka data pengujian melamin pada Tabel 3 dapat dikatakan akurat dan menjamin bahwa metode ini dapat mendeteksi melamin. Walaupun dari ketigabelas sampel susu yang diujikan, tidak satupun sampel susu bubuk yang menunjukkan hasil positif terhadap melamin. Di Indonesia telah ditetapkan batas maksimum kandungan melamin pada bahan pangan. Berdasarkan Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia No. 034 Tahun 2012 tentang batas maksimum melamin dalam pangan Bab II Pasal 2 ditetapkan batas maksimum melamin dalam susu bubuk formula bayi adalah 1 mg/kg, dalam susu formula bayi siap konsumsi maksimal 0,15 mg/kg, dan dalam pangan lain maksimal 2,5 mg/kg. Tiap negara memiliki regulasi yang berbeda-beda, misalnya di Negara Uni Eropa maksimal kandungan melamin dalam pangan sebesar 0,5 mg per kg dari berat badan. Sedangkan di Kanada dibatasi lebih ketat lagi yaitu 0,35 mg per kg dari berat badan. Apabila melamin terdeteksi dalam jumlah kecil pada produk berbasis susu dan susu bubuk, belum tentu terjadi kecurangan karena penambahan melamin yang disengaja. Hal tersebut mungkin saja terjadi akibat adanya migrasi dari peralatan pada saat proses produksi dan kemasan selain dari lingkungan. Karena sebesar 97% melamin digunakan dalam pembuatan resin melamin dan digunakan untuk pembuatan plastik, peralatan makan, pelapis. Selain itu juga, trichloromelamine digunakan sebagai bahan pembersih dan di Amerika penggunaan larutan pembersih melamin tersebut diizinkan untuk digunakan pada pengolahan makanan. Melamin juga bisa terdapat di lingkungan sebagai hasil degradasi dari pestisida (cyromizin) dan pupuk. Senyawa ini terbentuk dalam tubuh mamalia 36
yang telah memakan siromazin (cyromazine) dan dapat terkonversi menjadi melamin pada tanaman. Melalui proses metabolisme pada hewan tikus, kambing, domba, dan ayam betina, senyawa siromazin tersebut diubah menjadi melamin, metil siromazin, dan hidroksi siromazin. Penambahan melamin pada pupuk untuk menambah unsur nitrogen sehingga tanaman tumbuh subur. Apabila tanaman tersebut dikonsumsi sapi, maka susu yang diproduksi berpotensi mengandung melamin. Kasus penambahan melamin juga dilakukan pada pakan hewan sehingga faktor lain adanya melamin didalam susu dapat disebabkan oleh pakan ternak yang terkontaminasi melamin. Pada pakan ternak yang mengandung melamin 15 ppm (15000 ppb), setelah 5 jam diabsorpsi ternak, ternyata susunya mengandung melamin dengan konsentrasi 2% dari total melamin pada pakan (300 ppb) (Rachmawati, 2013).
37
V. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan Pengujian kandungan melamin yang direkomendasikan oleh Badan POM yaitu menggunakan metode LC-MS/MS karena lebih selektif dan sensitif untuk analisis melamin dan senyawa analognya menurut WHO. Metode ini dapat mendeteksi kandungan melamin pada formula bayi, susu, yoghurt, dan produk minuman kedelai dengan LOQ (Limit of Quantification) 0,004 mg/kg. Pengujian kandungan melamin di PT Saraswanti Indo Genetech sudah menggunakan metode LC MS/MS dan dari hasil pengujian beberapa sampel susu bubuk di PT Saraswanti Indo Genetech tidak terdapat satu pun susu bubuk yang mengandung melamin. Hal ini sudah dikonfirmasi dari spektral massa pada peak yang muncul pada sampel yang memiliki waktu retensi yang sama dengan standar melamin.
B. Saran Pengawasan pangan terhadap kontaminasi melamin pada bahan pangan sebaiknya tetap dilakukan terhadap industri pangan berbahan baku susu. Pengujian ini dapat menjadi sistem deteksi dalam menentukan kecurangan pada produk Jika dilihat dari keempat belas sampel di atas, dapat dikatakan aman karena tidak terdeteksi kontaminasi melamin. Namun, kenakalan produsen bisa saja terjadi ketika kita lengah. Selain itu kontaminasi melamin dapat terjadi dari berbagai sumber seperti migrasi dari peralatan pada saat proses produksi dan kemasan, dari lingkungan, ataupun dari hewan ternak yang mengkonsumsi melamin atau siromazin.
38
DAFTAR PUSTAKA
Anonim. 2001. Basics of LC/MS. Agilent Technologies. Anonimus. 2012. “Judul Bagian Organisasi”. Panduan Mutu. Bogor: PT Saraswanti Indo Genetech.
Anonimus. 2015. Susu Bubuk. SNI 01-2970-2006. Badan Standardisasi Nasional. http://sisni.bsn.go.id/index.php?/sni_main/sni/detail_sni/7591
Budiarti, Aqnes dan Ibrahim Arifin. 2010.Optimasi dan Validasi Metode Analisis Sukrosa untuk Menentukan Keaslian Madu Perdagangan Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik Vol. 7 No. 2. http://publikasiilmiah.unwahas.ac.id/index.php/ilmuFarmasi danklinik /article/viewFile/1212/1321. [diakses tanggal 6 Desember 2015]
Day, R. A dan Underwood. 1994. Analisis Kimia Kuantitatif. Edisi 6. Jakarta: Erlangga
Eurachem, 2014. Fitness for purpose. Eurachem Guide Ginting, Maris Karisma. 2012. “Validasi Metode LC MS/MS untuk Penentuan Senyawa Asam Trans, Trans-Mukonat, Asam Hippurat, Asam-2-Metil Hippurat, Asam-3-Metil Hippurat, Asam-4-Metil Hippurat dalam Urin Sebagai Biomarker Paparan Benzena, Toluena, dan Xilena”. Skripsi. Depok : Universitas Indonesia.
Hariyati, Sri, Elza Rosita, Sylvia NU. 2008. Infopom : Vol. 9, No. 6, November 2008, ISSN 1829-9334. Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia.
http://perpustakaan.pom.go.id/KoleksiLainnya/
Buletin%20Info%20POM/0608.pdf. [diakses tanggal 6 Maret 2015] 39
Harmita. 2004. Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian, Vol. I Departemen Farmasi FMIPA-UI. Harrington, Rory. 2010. “Global Melamine Standard Would Protect Consumers, Lower
Trade
Barriers”.
Food
Production
Daily.com.
http://www.foodproductiondaily.com/Safety-Regulation/Global-melaminestandard-would-protect-consumers-lower-trade-barriers. [diakses tanggal 6 Maret 2015] Jonathan, et al. 2008. “GC-MS Screen for the Presence og Melamine, Ammeline, and Cyanuric Acid”. Laboratory Information Bulletin (LIB) No. 4423. Vol. 24. U.S Food and Drug Administration
Kartasasmita, Rahmana Emran., Mulja, Muhammad., Satiadarma, kosasih., Tjahjono, Daryono Hadi. 2004. Asas Pengembangan Prosedur Analisis. Cetakan 1. Edisi 1. Surabaya : Airlangga University Press.
Kealey, D. dan P. J. Haines 2002. Analytical Chemistry. Farnham :Bios Scientific Publisher Limited. Martoyo, Pratiwi Yuniarti. 2011. “Cemaran Melamin dalam Pangan”. Food Review Indonesia. http://foodreview.co.id/preview.php?view2&id=55841. [diakses tanggal 6 Maret 2015] Michael, S. And Alexander, J.K. 2008. “Interim Method for Determination of Melamine and Cyanuric Acid Residues in Foods using LC-MS/MS: Version 1”. 0 Laboratory Information Buletin (LIB) No. 422. U.S Food and Drug Administration
Pavia, Donald L., Gary M. Lampman, George S. Kriz dan James A. Vyvyan. 2009. Introduction to Spectroscopy, USA : Brooks/Cole Cengage Learning
40
PT SIG. 2014. “History”. SIG Laboratory. http://www.siglaboratory.com/about/ added-values/. [diakses tanggal 25 Mei 2015] PT SIG. 2014. “Services”. SIG Laboratory. http://www.siglaboratory.com/ services/. [diakses tanggal 25 Mei 2015]. PT SIG. 2014. “Vision & Mission”. SIG Laboratory. http://www.siglaboratory.com/ about/vision-mission/. [diakses tanggal 25 Mei 2015].
Rachmawati S dan Widiyanti PM. 2013. Kadar Melamin pada Produk Berbahan Susu dan Susu Bubuk yang Dianalisis secara Liquid Chromatography Mass Spectrometry (LC-MS). Bogor. Balai Besar Penelitian Veteriner. Reddy, T. Sunil Kumar, G. Balammal, and A. Saravana Kumar. 2012. “Ultra Performance Liquid Chromatography: An Introduction and Review”. International Journal of Pharmaceutical Vol 2 : 24-31. Chennai-600 017, India. Scott, Raymond P. W. 2003. “Principles and Practice of Chromatography”. Book 1
Chrom-Ed
Book
Series.
Libraryforscience,
Llc.
http://www.library4science.com/. [diunduh tangga 30 Mei 2015]
Silverstein, Robert M., et. al. 2005. Spectrometric Identification of
Organic
Compounds. USA : John Wiley & Sons, Inc.
Spreer E dan A Mixa. 1998. Milk and Dairy Product Technology. New York: CRC Press.
Srivastava, B., B. K. Sharma, Uttam Singh Baghel, Yashwant, and Neha Sethi. 2010. “Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC) : A Chromatography Technique”. International Journal of Pharmaceutical Quality Assurance 2010; 2(1): 19-25. Jagatpura : Jaipur National University. 41
http://ijbar.impactfactor.org/IJPQA/2/IJPQA,Vol2,Issue1,Article5.pdf. [diunduh tanggal 31 Mei 2015].
Swartz, Michael E. 2005. Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC): An Introduction. Massachusetts : Waters Corporation.
Winarno FG. 1993. Pangan, Gizi, Teknologi, dan Konsumen. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
World Health Organization. 2008. Melamine and Cyanuric Acid: Toxicity, Preliminary Risk Assessment and Guidance on Levels in Food. Geneva: WHO.
www.who.int/foodsafety/fs_management/Melamine.pdf.
[diakses
tanggal 20 Maret 2015].
Yandamuri, Narayudu, K. R. Srinivas Nagabattula, Subrahmanya S. Kurra, Sahana Batthula, L. P. S. Nainesha Allada, dan Poojitha Bandam. 2013. Comparative Study of New Trends in HPLC: A Review. India : Department of Pharmaceutical Analysis, Aditya Institute of Pharmaceutical Science & Research.
Zebua, Dian Novita. 2013. Validasi Metode dan Penentuan Cemaran Melamin dalam
Susu
Formula
Menggunakan
High
Performance
Liquid
Chromatography Hitachi D7000. Universitas Pendidikan Indonesia. repository.upi.edu.
http://repository.upi.edu/10401/2/s_kim_0800652_
chapter1.pdf. [diakses tanggal 20 Maret 2015]
42
LAMPIRAN
Lampiran 1. Kurva Kalibrasi Standar Melamin untuk Sampel A-H
Lampiran 2. Kromatogram Sampel A
43
Lampiran 3. Kromatogram Sampel B dan Sampel C
44
Lampiran 4. Kromatogram Sampel D dan Sampel E
45
Lampiran 5. Kromatogram Sampel F dan Sampel G
46
Lampiran 6. Kromatogram Sampel H
Lampiran 7. Kurva Kalibrasi Standar Melamin untuk Sampel I
47
Lampiran 8. Kromatogram Sampel I
Lampiran 9. Kurva Kalibrasi Standar Melamin untuk Sampel J
48
Lampiran 10. Kromatogram Sampel J
Lampiran 11. Kurva Kalibrasi Standar Melamin untuk sampel K
49
Lampiran 12. Kromatogram Sampel K-s
Lampiran 13. Kromatogram Sampel K-d dan Sampel K-spk
50
Lampiran 14. Kurva Kalibrasi Standar Melamin untuk sampel L
Lampiran 15. Kromatogram Sampel L
51
Lampiran 16. Kurva Kalibrasi Standar Melamin untuk sampel M
Lampiran 17. Kromatogram Sampel M-s
52
Lampiran 18. Kromatogram Sampel M-d dan Sampel M-sp
53
Lampiran 19. Spektral Massa Standar Melamin dan Sampel.
Gambar 11. Spektral Massa DEA 2%
Gambar 12.. Spektral Massa Standar Melamin 0,5 ppb
Gambar 13. Spektral Massa Standar Melamin 1 ppb Gambar 14. Spektral Massa Standar Melamin 2,5 ppb
Gambar 15. Spektral Massa Standar Melamin 5 ppb Gambar 16. Spektral Massa Standar Melamin 7,5 ppb
Gambar 17. Spektral Massa Standar Melamin 10 ppb Gambar 18. Spektral Massa Standar Melamin 25 ppb
54
Gambar 19. Spektral Massa Standar Melamin 50 ppb
Gambar 20. Spektral Massa Sampel A Y
Gambar 21. Spektral Massa Sampel B
Gambar 22. Spektral Massa Sampel C
Gambar 23.Spektral Massa Sampel D
Gambar 24. Spektral Massa Sampel E
Gambar 25. Spektral Massa Sampel F
Gambar 26. Spektral Massa Sampel G
55
Gambar 27. Spektral Massa Sampel H
Gambar 29. Spektral Massa Sampel J
Gambar 28. Spektral Massa Sampel I
Gambar 30. Spektral Massa Sampel K-s
Gambar 31. Spektral Massa Sampel K-d
Gambar 32. Spektral Massa Sampek K-spk
Gambar 33. Spektral Massa Sampel L
Gambar 34. Spektral Massa Sampel M-s
56
Gambar 35. Spektral Massa Sampel M-d
Gambar 36. Spektral Massa Sampel M-spk
57
