Lampiran 3. Identifikasi golongan senyawa metabolit sekunder dari miselium dan filtrat kultur empat isolat L. edodes a.
Uji alkaloid Uji alkaloid dengan teknik KLT dilakukan dengan menggunakan fase diam silica gel GF254, fase gerak metanol – amoniak pekat (200:3). Sampel yang digunakan untuk uji KLT adalah 100 µl. Bercak yang terelusi dideteksi dengan UV 366 nm, serta dengan pereaksi Dragendorff. Adanya alkaloid ditunjukkan oleh terbentuknya bercak berwarna kuning jingga.
b.
Uji terpenoid Uji terpenoid dilakukan dengan menggunakan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak kloroform – metanol – amoniak 25% (100:20:3). Sampel yang digunakan adalah 100 µl. Bercak yang terelusi dideteksi dengan penyemprotan yaitu vanillin-asam sulfat. Adanya terpenoid ditunjukkan oleh terbentuknya bercak berwarna merah atau biru.
c.
Uji flavonoid Uji flavonoid dilakukan dengan menggunakan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak asam asetat glasial - air (15:85). Sampel yang digunakan adalah 100 µl. Bercak yang terelusi dideteksi dengan sinar UV 366 nm akan terbentuk warna kuning, biru atau hijau juga diperiksa setelah disemprot dengan pereaksi AlCl3 kemudian dipanaskan 100 oC selama 5 menit, dilihat pada sinar UV 366 nm.
bio.unsoed.ac.id
24
Lampiran 4. Pembuatan pereaksi golongan senyawa metabolit sekunder empat isolat L. edodes (Harborne, 1987) a.
Pembuatan pereaksi Dragendorff 1. Larutan A : 0,85 g bismuth nitrat dilarutkan dalam 50 ml larutan (air : asam asetat) 40:10 2. Larutan B : 9 g kalium iodide dilarutkan dalam 20 ml air. 3. Larutan stok : larutan A dan B dicampur dengan perbandingan sama banyak kemudian campuran ini disimpan dalam lemari es. 4. Larutan penyemprot : 1 ml larutan stok ditambah 2 ml asam asetat glasial dan 10 ml air sebelum digunakan. 5. Larutan yang sudah jadi dimasukkan kedalam botol penyemprot.
b.
Pembuatan reagen vanillin-HCl Sebanyak 1,25 g vanillin dilarutkan dengan 5 ml HCl pekat, dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml lalu diencerkan dengan etanol absolute hingga tanda batas.
bio.unsoed.ac.id
25
Lampiran 5. Tabulasi data bobot kering miselium empat isolat L. edodes Jenis isolat (t) Yogyakarta LW 26 W4 Jambo
Ulangan (g) 1 2 3 0,31 0,18 0,39 0,95
1,01 0,24 0,34 0,58
0,37 0,47 0,31 0,57
Total (g) 1,69 0,89 1,04 2,1
Rataan (g) 0,56 0,29 0,34 0,7
bio.unsoed.ac.id
26
Lampiran 6. Tabulasi data pH medium YEMR empat isolat L. edodes Perlakuan (t) t1 t2 t3 t4
I 5,2 5,2 5,2 5,2
pH awal Ulangan II 5,2 5,2 5,2 5,2
III 5,2 5,2 5,2 5,2
I 4,0 4,0 4,0 4,0
Ph akhir Ulangan II 4,0 4,0 4,0 4,0
bio.unsoed.ac.id
27
III 4,0 4,0 4,0 4,0
Lampiran 7. Tabulasi data bobot ekstrak filtrat kultur empat isolat L. edodes pada medium YEMR Jenis ekstrak (k) Kloroform
Etil asetat
Jenis isolat (t) Yogyakarta LW 26 W4 Jambo Yogyakarta LW 26 W4 Jambo
Ulangan (g) 1 2 3 0,16 0,08 0,07 0,12 0,10 0,07 0,04 0,09 0,07 0,07 0,04 0,06 0,03 0,02 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,10 0,06 0,03 0,01 0,01
bio.unsoed.ac.id
28
Total 0,31 0,29 0,2 0,17 0,06 0,03 0,17 0,05
Rataan 0,103 0,097 0,067 0,057 0,02 0,01 0,057 0,017
Lampiran 8. Tabulasi data bobot ekstrak miselium empat isolat L. edodes pada medium YEMR Jenis ekstrak (k) Kloroform
Etil asetat
Jenis isolat (t) Yogyakarta LW 26 W4 Jambo Yogyakarta LW 26 W4 Jambo
Ulangan (g) 1 2 3 0,01 0,02 0,01 0,01 0,01 0,02 0,03 0,02 0,01 0,02 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01
bio.unsoed.ac.id
29
Total 0,04 0,04 0,06 0,04 0,03 0,03 0,03 0,03
Rataan 0,013 0,013 0,02 0,013 0,01 0,01 0,01 0,01
Lampiran 9. Data pengukuran Rf (Retardation Factor) golongan senyawa alkaloid, flavonoid dan terpenoid dengan kromatografi lapis tipis No
Perlakuan
1 2 3 4 5 6 7 8
k1t1 k1t2 k1t3 k1t4 k2t1 k2t2 k2t3 k2t3
Rf Alkaloid (cm) Ekstrak Ekstrak Filtrat miselium 0,31 0,44 0,22 0,34 -
Rf Flavonoid (cm) Ekstrak Ekstrak filtrat miselium 0,40 0,30 0,29 0,29 0,41 0,42 0,41 0,49
Keterangan : k1t1 k1t2 k1t3 k1t4 k2t1 k2t2 k2t3 k3t4
: ekstrak kloroform isolat Yogya : ekstrak kloroform isolat LW 26 : ekstrak kloroform isolat W4 : ekstrak kloroform isolat Jambo : ekstrak etil asetat isolat Yogya : ekstrak etil asetat isolat LW 26 : ekstrak etil asetat isolat W4 : ekstrak etil asetat isolat Jambo
bio.unsoed.ac.id
30
Rf Terpenoid (cm) Ekstrak Ekstrak filtrat miselium 0,51;0,95 0,30;0,95 0,51;0,95 0,28;0,95 0,51;0,95 0,32;0,95 0,51;0,95 0,75;0,95 0,98 0,90 0,98 0,90 0,90 0,90 -
Lampiran 10. Karakterisasi senyawa aktif golongan alkaloid, flavonoid dan terpenoid ekstrak filtrat dan miselium empat isolat L. edodes
Pereaksi AlCl3 Flavonoid Adanya Keterangan golongan senyawa flavonoid +
No
Perlakuan
Warna
1
k1t1
Biru
2
k1t2
Biru
+
Biru
3
k1t3
Biru
+
Biru
4
k1t4
Biru
+
Biru
5
k2t1
Biru
+
Biru
6
k2t2
Biru
+
Biru
7
k2t3
Biru
+
Biru
8
k2t3
Biru
+
Biru
Warna
Biru
Pereaksi Dragendorff Alkaloid Adanya Keterangan golongan senyawa alkaloid Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna
bio.unsoed.ac.id
31
Warna
Kuning Kuning Kuning Kuning Kuning Kuning Kuning Kuning
Pereaksi Vanilin-Asam Sulfat Terpenoid Adanya Keterangan golongan senyawa terpenoid Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna Tidak terelusi dengan sempurna
Lampiran 11. Dokumentasi peremajaan empat isolat L. edodes
Isolat Yogya
Isolat LW 26
Isolat W4
Isolat Jambo
bio.unsoed.ac.id
32
Lampiran 12. Dokumentasi kultivasi miselium empat isolat L. edodes selama 40 hari
Isolat Yogya
Isolat LW 26
Isolat W4
Isolat Jambo
bio.unsoed.ac.id Miselium Basah Isolat LW 26
Miselium Basah Isolat Yogya
33
Miselium Basah Isolat W4
Miselium Basah Isolat Jambo
Menyaring Miselium Dan Filtrat
Filtrat Empat Isolat
bio.unsoed.ac.id Miselium Kering
Menghaluskan Miselium
34
Lampiran 13. Dokumentasi ekstraksi filtrat dan miselium empat isolat L. edodes
Ekstraksi Kloroform
Ekstraksi Etil Asetat
Penguapan ekstrak Etil Asetat
Penguapan ekstrak Kloroform
bio.unsoed.ac.id Ekstraksi Maserasi
35
Lampiran 14. Dokumentasi ekstrak filtrat empat isolat L. edodes pelarut kloroform
Isolat yogya
Isolat LW26
Isolat W4
Isolat Jambo
bio.unsoed.ac.id
36
Lampiran 15. Dokumentasi ekstrak filtrat empat isolat L. edodes pelarut etil asetat
Isolat Yogya
Isolat LW26
Isolat W4
Isolat Jambo
bio.unsoed.ac.id
37
Lampiran 16. Dokumentasi ekstrak miselium empat isolat L. edodes pelarut kloroform
Isolat Yogya
Isolat LW26
Isolat W4
Isolat Jambo
bio.unsoed.ac.id
38
Lampiran 17. Dokumentasi ekstrak miselium empat isolat L. edodes pelarut etil asetat
Isolat Yogya
Isolat LW26
Isolat W4
Isolat Jambo
bio.unsoed.ac.id
39
BIODATA PENULIS Dena Rahayu, lahir di Tangerang, 28 Desember 1991 anak dari ayah Tanto Sumartoyo dan Ibu Partinah. Penulis berasal dari Perum Bumi Indah RT 01/02, Kec. Pasar Kemis, Kab. Tangerang. Penulis berhasil menamatkan pendidikannya di TK Pertiwi lulus tahun 1997, SD N Pasar Kemis 2 tahun lulus 2003, SMP N 1 Tangerang lulus tahun 2007, SMA Yuppentek 1 Tangerang lulus tahun 2010, kemudian melanjutkan studi di Fakultas Biologi Universitas Jenderal Soedirman tahun angkatan 2010. Pengalaman organisasi antara lain tergabung dalam kepengurusan Unit Kegiatan Mahasiswa Islam (UKMI) Fakultas Biologi selama empat tahun. Staff Departemen Humas Divisi Infokom 2011, Staff Departemen Kewirausahaan (KWU) Divisi Pengembangan Skill Usaha 2012, Kepala Departemen KWU 2013, Dewan Riset 2014. Penulis juga aktif pada beberapa kegiatan meliputi; Anggota bela diri Bandung Karate Club (BKC) 2011, Panitia OSMB Matriks sebagai Tatib 2011, Panitia OSMB Taksonomi sebagai Humas 2012, Peserta Training Kemuslimahan 2010, Peserta Indigenus 2011, Stadium General UKMI 2011, Peserta Training Kehumasan 2011, Peserta Seminar dan Toefl HIMAPAS 2013, Peserta Talkshow Lentera Jiwa 2013, Peserta Workshop Optimize Your Presentation Skills (OPYS) 2014, peserta Talkshow Dialog Kebangsaan 2014, Peserta Seminar Kewirausahaan 2014, Peserta SIMPOSIUM UKMI 2014. Prestasi yang pernah diraih adalah Juara 1 Ganda Campuran Biology Badminton Cup 2011, Juara 2 Tunggal Putri dan Juara 2 Ganda Campuran Badminton Pekan Olahraga Fakultas Biologi (PORFABI) 2013.
bio.unsoed.ac.id
Purwokerto,
Januari 2015
Penulis
40
BIODATA PENULIS Dena Rahayu, lahir di Tangerang, 28 Desember 1991 anak dari ayah Tanto Sumartoyo dan Ibu Partinah. Penulis berasal dari Perum Bumi Indah RT 01/02, Kec. Pasar Kemis, Kab. Tangerang. Penulis berhasil menamatkan pendidikannya di TK Pertiwi lulus tahun 1997, SD N Pasar Kemis 2 tahun lulus 2003, SMP N 1 Tangerang lulus tahun 2007, SMA Yuppentek 1 Tangerang lulus tahun 2010, kemudian melanjutkan studi di Fakultas Biologi Universitas Jenderal Soedirman tahun angkatan 2010. Pengalaman organisasi antara lain tergabung dalam kepengurusan Unit Kegiatan Mahasiswa Islam (UKMI) Fakultas Biologi selama empat tahun. Staff Departemen Humas Divisi Infokom 2011, Staff Departemen Kewirausahaan (KWU) Divisi Pengembangan Skill Usaha 2012, Kepala Departemen KWU 2013, Dewan Riset 2014. Penulis juga aktif pada beberapa kegiatan meliputi; Anggota bela diri Bandung Karate Club (BKC) 2011, Panitia OSMB Matriks sebagai Tatib 2011, Panitia OSMB Taksonomi sebagai Humas 2012, Peserta Training Kemuslimahan 2010, Peserta Indigenus 2011, Stadium General UKMI 2011, Peserta Training Kehumasan 2011, Peserta Seminar dan Toefl HIMAPAS 2013, Peserta Talkshow Lentera Jiwa 2013, Peserta Workshop Optimize Your Presentation Skills (OPYS) 2014, Peserta Seminar Kewirausahaan 2014, Peserta SIMPOSIUM UKMI 2014. Prestasi yang pernah diraih adalah Juara 1 Ganda Campuran Biology Badminton Cup 2011, Juara 2 Tunggal Putri dan Juara 2 Ganda Campuran Badminton Pekan Olahraga Fakultas Biologi (PORFABI) 2013.
bio.unsoed.ac.id
41
