„Az élettudományi-klinikai felsőoktatás gyakorlatorientált és hallgatóbarát korszerűsítése a vidéki képzőhelyek nemzetközi versenyképességének erősítésére” TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001
KOAGULÁCIÓS FAKTOROK BIOTECHNOLÓGIAI ELŐÁLLÍTÁSA 12. előadás PÉCSI TUDOMÁNYEGYETEM ÁLTALÁNOS ORVOSTUDOMÁNYI KAR GYÓGYSZERÉSZI BIOTECHNOLÓGIA TANSZÉK
TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001
KOAGULÁCIÓS FAKTOROKRÓL ÁLTALÁBAN
Vérzés (hemorrhagia) vagy baleset vagy valamilyen patológiás folyamat következménye A véralvadást számos koagulációs faktor és fehérje befolyásolja, amelyek a fibrinek polimerizációját szabályozzák a hemosztázis fenntartása érdekében Hibás véralvadás: hemofília
TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001
KOAGULÁCIÓS FAKTOROK – WHO LISTA
WHO elnevezés
Megnevezés
Hiányállapot (vérzéssel járó betegség)
I. II.
fibrinogén * protrombin *
afibrinogenaemia protrombinhiány
(III.)
trombokináz, tromboplasztin**, avagy “szöveti faktort” (TF)
(IV.)
Kalcium (Ca2+)
V.
proakcelerin, Owren-faktor
parahemofília, V. faktor hiány
VII.
szérum protrombin konverzió akcelerátor (SPCA), prokonvertin
VII. faktor hiány (SPCA hiány)
VIII.
antihemofíliás faktor A
hemofília A
IX.
Christmas-faktor, antihemofíliás faktor B, plazmatromboplasztin komponens (PTC)
hemofília B (Christmas-betegség)
X.
Stuart–Prower-faktor
X. faktor hiány, (Stuart-faktor-betegség)
XI.
Plazmatromboplasztin antecedens (PTA), antihemofíliás faktor C
hemofília C
XII. XIII.
Hageman-faktor fibrinstabilizáló faktor, transzglutamináz Laki-Lóránt faktor
(nincs véralvadási zavar) XIII. faktor hiány
TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001
VÉRALVADÁSI FOLYAMATOK Belső véralvadási út
Aktivációs út Külső/belső út XI
XIa
IXa
IX Protombináz komplex: Xa-II-VA-PL-Ca2+ II
IIa
(protrombin)
(trombin)
Belső tenáz komplex: IXa-X-VIIIa-PL-Ca2+
Külső tenáz komplex: TF-VIIIa-X-Ca2+
XIII X
Xa Fibrin monomer XIIIa
Fibrin polimer
Fibrin polimer hálózat (keresztkötött)
Fibrinogén
TF VIIa
VII Külső véralvadási út
TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001
KOAGULÁCIÓS FAKTROROK TRANDICIONÁLIS ELŐÁLLÍTÁSA
Vérplazmából Eredeti tisztítási procedúra: 1946 – Cohn frakcionálási módszer A frakciók szeparálásához etil alkoholt, sókat és hűtést alkalmaztak, mely után a frakciókat centrifugálással választották el
TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001
KOAGULÁCIÓS FAKTOROK BIOTECHNOLÓGIAI ELŐÁLLÍTÁSA
Rekombináns humán koagulációs faktorok IX (rFIX), VIII (rFVIII), VIIa (rFVIIa) az USA-ban az 1990-es évek óta elérhetőek Expressziós rendszer: CHO sejtek rFVIII stabilizálására pl. humán albumint használnak
TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001
KLÓNOZÁS ÖSSZEFOGLALÓ LÉPESEI:
Beillesztett rekombináns koagulációs faktor DNS
Plazmid DNS
A plazmid DNS szekvencia Felnyitása endonukleázzal
A DNS szekvencia beillesztése, ligálása
A plazmid a baktériumban felszaporodik Baktérium transzformálás
Számos DNS kópia Baktérium kolóniák
Expressziós rendszer!
TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001
REKOMBINÁNS KOAGULÁCIÓS FAKTOROK
Recombináns véralvadási faktorok jobban tisztíthatók és nem veszélyeztetik a beteget különféle virális fertőzéssel, ellentétben a vérből tisztított termékekkel Használatuk egyre az 1990-es évek óta egyre gyakoribb A jelenleg forgalomban lévő FVIII termékeket viszont kapcsolatba hozták inhibitor kialakulásával a súlyos A típusú hemofiliában szenvedő fiúknál (kiterjedt, több évtizedes klinikai vizsgálat – 2013 összegzés) Az inhibitorok kialakulása a jelenlegi ismeretek alapján nem magyarázható
TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001
KOAGULÁCIÓS FAKTOROK ÉS GÉNTERÁPIA
FVIII gén kiváló génterápiás alkalmazásra is, mivel egy génes (monogenic) betegség A beteg bőréből fibroblasztokat izolálnak, amelyekbe bejuttatják a FVIII-t hordozó plazmidot A rFVIII-t termelő fibroblasztokat kiszelektálják, és a klónt karakterizálják A tesztelt fibroblasztokat bejuttatják a beteg hasi zsírrétegébe (omentum)
KÖSZÖNÖM A FIGYELMET
JELEN MUNKA AZ EURÓPAI UNIÓ TÁMOGATÁSÁVAL, AZ EURÓPAI SZOCIÁLIS ALAP TÁRSFINANSZÍROZÁSÁVAL VALÓSUL MEG, „AZ ÉLETTUDOMÁNYI-KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE” CÍMŰ, TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 AZONOSÍTÓSZÁMÚ PROJEKT KERETÉBEN.
