ISOLASI SENYAWA TURUNAN BENZOFENON DARI KULIT BATANG Garcinia balica Miq

TUGAS AKHIR ISOLASI SENYAWA TURUNAN BENZOFENON DARI KULIT BATANG Garcinia balica Miq RETNO PURBOWATI NRP. 1412 100 040 Dosen Pembimbing Prof. Dr. Taslim Ersam DEPARTEMEN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT TEKNOLOGI SEPULUH NOPEMBER SURABAYA 2017

TUGAS AKHIR

ISOLASI SENYAWA TURUNAN BENZOFENON DARI KULIT BATANG GarciniabalicaMiq RETNO PURBOWATI NRP. 1412 100 040 Dosen Pembimbing Prof. Dr. Taslim Ersam DEPARTEMEN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT TEKNOLOGI SEPULUH NOPEMBER SURABAYA 2017

i

FINAL PROJECT

ISOLATION OF ABENZOFENONDERIVATIVE FROMSTEM BARK OF GarciniabalicaMiq RETNO PURBOWATI ID NUMBER 1412 100 040 Supervisor Prof. Dr. Taslim Ersam DEPARTMENT OF CHEMISTRY FACULTY OF MATHEMATICS AND NATURAL SCIENCES INSTITUTTEKNOLOGI SEPULUH NOPEMBER SURABAYA 2017

ii

ISOLASI SENYAWA TURUNANBENZOFENON DARI KULIT BATANGGarciniabalicaMiq

TUGAS AKHIR

DisusunUntuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Sains Pada Program Studi S-1 Departemen Kimia FakultasMatematikadanIlmuPengetahuanAlam InstitutTeknologiSepuluhNopember Surabaya

Oleh:

RETNO PURBOWATI NRP 1412 100 040

Surabaya, 19Januari 2017

DEPARTEMEN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT TEKNOLOGI SEPULUH NOPEMBER SURABAYA

2017

iii

LEMBAR PENGESAHAN ISOLASI SENYAWA TURUNANBENZOFENON DARI KULIT BATANGGarciniabalicaMiq TUGAS AKHIR Oleh: RETNO PURBOWATI NRP 1412 100 040 Surabaya, 19Januari 2017 Menyetujui, DosenPembimbing,

Prof. Dr. Taslim Ersam NIP. 19520816 197903 1 004 Mengetahui, Ketua Departemen Kimia,

Prof.Dr. DidikPrasetyoko, S.Si.,M.Sc NIP. 19710616 199703 1 002

iv

Karyainisayapersembahkanuntuk.. BapakDjanoeSoekitodanIbuKasiatiyang tiadahentimemberidukungandandoa, BapakDjokoHartanto yang selalumemberikandukungandandoa, Sahabat, partner, orang terdekat yang selalumembantudanmenemani, Amel, Lita, Ika, Mas Rizal Temanseperjuanganyang selalumendukungdanmembantu, Mbak Novi dan Mas Edwin,pejuangwisuda 115, Teman-temanLaboratoriumKimia BahanAlamdanSintesis

v

ISOLASI SENYAWA TURUNANBENZOFENON DARI KULIT BATANGGarciniabalicaMiq Nama NRP Departemen DosenPembimbing

: RetnoPurbowati : 1412 100 040 : Kimia ITS : Prof. Dr. TaslimErsam

ABSTRAK Penelitianinibertujuanuntukmengisolasisenyawametab olitsekunderdariekstraketilasetatkulitbatangGarciniabalicaMi q.Proses ekstraksidenganpelarutetilasetatdidapatkanfraksikering, kemudiandifraksinasimenggunakanmetodeKromatografiKolo mGravitasi (KKG) dandilanjutkandenganmetodeKromatografiEksklusiUkuran. Senyawa yang diisolasiberupapadatanamorfberwarnakuningkecoklatandenga ntitiklelehsebesar 2150 216 C.Penentuanstruktursenyawadilakukandengananalisis 1 UV, IR, H dan13C NMR.Senyawa yang diisolasidiketahuimerupakansenyawa 2, 4, 6-trihidroksi benzofenon (1). 2'

O 1'

1

OH 2 3

3' 4'

5'

HO 6 5

4 OH

(1) Kata kunci : Garciniabalica, benzofenon vi

ISOLATION OF ABENZOFENONDERIVATIVE FROM STEM BARK OF GarciniabalicaMiq Name ID Number Department Supervisor

: RetnoPurbowati : 1412 100 040 : Chemistry ITS : Prof. Dr. TaslimErsam

ABSTRACT This study was focused on the isolation of secondary metabolites from ethyl acetate extract of GarciniabalicaMiq stem bark. The extraction process was perfomed by ethyl acetate, followed byfractionation using Column Gravitation Chromatography and Size Exclusion Chromatography. The isolated compound was a brownish yellowpowder with melting point at215-2160C. The structure was determined by means of spectroscopy analysis UV, IR, 1H and 13C NMR. The compound was known as 2, 4, 6-trihydroxy benzophenon (1). 2'

O 1'

1

OH 2 3

3' 4'

5'

HO 6 5

4 OH

(1) Keyword :GarciniabalicaMiq, benzophenon

vii

KATA PENGANTAR Alhamdulillahirobbil’alamin. Puji syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan karunia-Nya sehingga naskah skripsi berjudul “Isolasi Senyawa Turunan Benzofenon dari Kulit Batang Garcinia balica Miq” ini dapat diselesaikan dengan baik. Tulisan ini tidak akan terwujud dengan baik tanpa bantuan dan dukungan dari semua pihak. Untuk itu penulis sangat berterima kasih kepada: 1. Prof. Dr. Taslim Ersam, selaku dosen pembimbing yang telah memberikan pengarahan dan bimbingan selama proses penyusunan naskahskripsi ini, 2. Prof.Dr. Didik Prasetyoko, S.Si., M.Sc, selaku Ketua Departemen Kimia atas fasilitas yang telah diberikan hingga naskah skripsi ini dapat terselesaikan, 3. Drs. M. Nadjib Mujahid, M. S., selaku Dosen wali atas pengarahannya, 4. Bapak dan Ibu yang selalu memberikan semangat, dukungan dan doa. 5. Dosen dan teman-teman Laboratorium Kimia Bahan Alam dan Sintesis yang membantu dan memberikan semangat dalam pengerjaan skripsi ini. Penulis menyadari sepenuhnya bahwa penulisan naskah skripsi ini tidak lepas dari kekurangan. Oleh karena itu, penulis terbuka terhadap kritik dan saran yang membangun. Semoga skripsi ini memberikan manfaat bagi penulis dan pembaca. Surabaya,19 Januari 2017

Penulis viii

DAFTAR ISI LEMBAR PENGESAHAN ................................................... iv ABSTRAK ............................................................................. vi ABSTRACT.......................................................................... vii KATA PENGANTAR ......................................................... viii DAFTAR ISI .......................................................................... ix DAFTAR GAMBAR ............................................................. xi DAFTAR TABEL................................................................ xiii BAB I PENDAHULUAN ....................................................... 1 1.2 Rumusan Masalah ............................................................. 2 1.3 Tujuan ..................................................................... 2 BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................ 3 2.1 Tinjauan Garcinia balica Miq .......................................... 3 2.2 Kandungan Kimia G. balica Miq...................................... 4 2.3 Tinjauan Senyawa Benzofenon......................................... 6 2.4 Metode Isolasi dan Pemurnian .......................................... 7 2.4.1 Metode Ekstraksi ................................................... 7 2.4.2 Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ........................... 8 2.4.3 Kromatografi Cair Vakum (KCV) ......................... 9 2.4.4 Kromatografi Eksklusi Ukuran (Size Exclusion Chromatografy, SEC) ................................................... 10 2.5 Tinjauan Spektroskopi Senyawa ..................................... 10 2.5.1 Spektroskopi UV-Vis ................................................... 10 2.5.2 Spektroskopi Inframerah (IR) .............................. 11 2.5.3 Spektroskopi Resonansi Magnetik Inti (NMR) ... 12 BAB IIIMETODOLOGI PENELITIAN .............................. 13 3.1 Alat…………………………………………………. ..... 13 3.2Bahan………………………………………………........ 13 ix

3.3 Prosedur Penelitian ......................................................... 13 3.3.1 Uji Pendahuluan................................................... 13 3.3.2 Ekstraksi dan Fraksinasi ...................................... 14 3.3.3 Uji Kemurnian dan Titik Leleh ............................ 15 3.3.4 Penentuan Struktur Senyawa ............................... 15 BAB IV HASIL dan PEMBAHASAN ................................. 19 4.1 Proses Fraksinasi .................................................... 19 4.2 PenentuanStruktur................................................... 24 BABV KESIMPULAN ........................................................37 5.1 Kesimpulan..............................................................37 DAFTAR PUSTAKA ........................................................... 39 LAMPIRAN .......................................................................... 43 BIODATA PENULIS ........................................................... 51

x

DAFTAR GAMBAR Gambar2.1

Sintesisturunankumarindenganreagen a) 4nitrobenzoil klorida, AlCl3, nitrobenzen, 600C, 23-25%; b) etilbenzoilasetat, rt, 28%; c) p-anisoilklorida, AlCl3, nitrobenzen, 600C, 16% ............................................................... 3

Gambar 2.2 Gambar 4.1

Kerangkadasarsenyawabenzofenon .............. 6 UjiEluenmenggunakanetilasetatdiklorometana 50%, etilasetat-n-heksan 70% danmetanol- diklorometana 30% ................ 20 KromatogramPemisahan KKG menggunakaneluenetilasetat-n-heksana 80% .................................................................... 21 Kromatogram Sub fraksi A, B, C, D, dan E menggunakaneluenetilasetat-n-heksana 80% .................................................................... 22 KromatogramHasilPemisahanSephadex LH20 Sub fraksi B menggunakaneluenetilasetatn-heksana 70% ............................................ 22 KromatogramdariUji 3 Eluenmetanoldiklorometana 20%, etilasetat-diklorometana 80% danetilasetat-kloroform 70% ............. 23 Kesetimbanganketo-enoldenganNaOH....... 25 Spektra UV-Vis senyawa1dalam CH3OH dan CH3OH + NaOH ......................................... 25 Spektra UV-Vis senyawa1dalam CH3OH, CH3OH + CH3COONa, CH3 + CH3COONa + H3BO3 ......................................................... 26

Gambar 4.2

Gambar 4.3

Gambar4.4

Gambar4.5

Gambar4.6 Gambar4.7 Gambar4.8

Gambar4.9 Gambar4.10 Gambar4.11

Spektrum IR darisenyawa1 ......................... 29 Spektrum1H-NMR darisenyawa1 ............... 30 Spektrum13CNMRdarisenyawa1.......................................... .........................31 xi

Gambar4.12

Senyawa4-(2,4,6- trihydroxybenzoyl) benzonitrile.………………………………32

Gambar4.13 Struktursenyawa1.………….………. ……………...………35

xii

DAFTAR TABEL Tabel4.1 Tabel4.2

Tabel4.3

UjiKelarutanFraksidalampelarutberbeda .... 19 Data PergeseranSpektrum UV-Vis senyawa1sebelumdansesudahditambahpereak sigeser. ........................................................ 27 Data perbandingan1H-NMR dan13C-NMR senyawa1(500 MHz,Asetond6dengansenyawa 4-(2,4,6trihydroxybenzoyl) benzonitrile (senyawa10). .................................................................... 34

xiii

BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Indonesia memiliki hutan tropis yang sangat luas dan kaya dengan aneka ragam spesies tumbuhan (Steinlin, 1988). Keanekaragaman ekosistem dalam hutan tropis mempunyai hubungan langsung dengan tingginya keanekaragaman hayati dan tingkat endemik (Ersam, 2001). Indonesia merupakan negara tropis yang mempunyai keanekaragaman hayati dan termasuk dalam salah satu dari tujuh negara megabiodiversity seperti Australia, Brazil, Kolombia, Madagaskar, Meksiko, dan Zaire. Sekitar 54% spesies tumbuhan yang hidup pada hutan tropis di dunia, 30.000 spesies di antaranya terdapat di Indonesia. Garcinia merupakan salah satu genus tumbuhan tropis dari famili Clusiaceae. Tumbuhan ini merupakan salah satu genus terbesar dengan 400 spesiesnya tersebar luas di kawasan tropis Asia, Kaledonia Baru dan Polinesia (Merza, 2004). Penelitian mengenai kandungan kimia dari genus Garcinia telah banyak dilakukan, diantaranya adalah guttiferones Q-S (Nguyen dkk., 2011), 5’-bromo-2’-hidroksi4, 4;, 6’- trimetoksi chalkon (Ilyas dkk., 2002), dulcisoflavon (Deachathai dkk., 2005). Genus ini dilaporkan banyak kandungan senyawa santon teroksigenasi dan terprenilasi (Peres, dkk., 2000). Tetapi beberapa diantaranya juga menghasilkan senyawa benzofenon terprenilasi, biflavonoid dan kumarin (Ali, dkk, 2000; Jackson, dkk., 1971; Mudjirahmini dan Ersam, 2006). Garcinia balica Miq, salah satu spesies dari genus Garcinia merupakan tumbuhan endemik yang dapat ditemukan di Taman Nasional Baluran, Situbondo, Jawa Timur. Garcinia balica Miq dikenal dengan nama daerah 1

yaitu mundu alas. Tumbuhan ini digunakan secara tradisional sebagai obat kulit, antibengkak,antimalaria, dan antihipertensi (Sari dan Hanan, 2009). Hasil penelitian sebelumnya mengenai kandungan senyawa metabolit sekunder dari tumbuhan ini diantaranya adalah senyawa 5,7-dihidroksi-8-(1,2-dihidroksi-3-metilbutenil-3)-4-fenilkumarin dari ekstrak etil asetat pada bagian batang yang memiliki aktivitas antioksidan tinggi, 5-hidroksi 4-fenilkumarin dan 7-hidroksi 4-fenilkumarin. Hal ini menunjukkan bahwa tumbuhan G.balica Miq mempunyai banyak kandungan senyawa metabolit sekunder aktif. Bagian-bagian tertentu pada tumbuhan biasanya berpeluang untuk mendapatkan senyawa yang sama atau bahkan berbeda sehingga dibutuhkan penelitian lebih lanjut terhadap G.balica ini. 1.2 Rumusan Masalah Rumusan masalah dari penelitian ini adalah terdapat senyawa metabolit sekunder baru dan turunannya dari ekstrak etil asetat kulit batang G.balica Miq. 1.3 Tujuan Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi senyawa metabolit sekunder baru dan turunannya dari ekstrak etil asetat kulit batang G.balica Miq.

2

BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Tinjauan Garcinia balica Miq Tumbuhan Garcinia merupakan jenis tumbuhan berbuah dari famili Guttiferae (Clusiaceace) dengan jumlah spesies yang cukup banyak. Tumbuhan ini dikenal sebagai kelompok manggis-manggisan. Di seluruh dunia, terdapat sekitar 400 spesies Garcinia (Rukmana, 2007). Garcinia pada umumnya berbentuk pohon atau semak dengan daun berhadapan bersilang, tunggal, dengan tulang daun yang menyirip. Pangkal tangkai daunnya berbentuk pelepah. Bunganya beraturan dan berkelamin satu atau bahkan ganda. Kelopak daunnya mudah terlepas. Buahnya berdinding tebal (Steenis, 1975). Taksonomi tumbuhan G.balica Miq menurut Sari dan Hanan, 2009 yaitu: Kingdom Divisi Sub divisi Kelas Sub kelas Ordo Famili Genus Spesies Nama Daerah

: Plantae : Spermatophyta : Angisopermae : Dycotiledonae : Archichlamydeae : Parietales : Clusiaceae : Garcinia : Garcinia balica Miq : Mundu alas

Garcinia balica Miq merupakan salah satu jenis Garcinia dari Jawa Timur. Garcini balica Miq ini dikenal dengan nama mundu alas dan hidup di hutan tropis. Tumbuhan ini dapat ditemukan di Kebun Raya Purwodadi Pasuruan. 3

2.2 Kandungan Kimia G. balica Miq Pada pendekatan kemotaksonomi terdapat empat genus utama yaitu Garcinia, Calophyllum, Mammea, dan Mesua , dari segi afinitas kimiawi, keempatnya berpeluang besar sebagai sumber santon, kumarin, dan benzofenon (Peres dan Nagem, 2000). Senyawa-senyawa tersebut juga dilaporkan mempunyai bioaktivitas seperti antileukimia, hipoglisemik (Iinuma, 1996), sitotoksik, antimikroba, antifungal, antioksidan, antimalaria, dan aktivitas penghambat HIV (Kosela, 2000). Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa ditemukan dua senyawa kumarin, yaitu 5-hidroksi-4fenilkumarin (2) dan 7hidroksi-4-fenilkumarin (3) dari ekstrak etil asetat fraksi non polar batang G. balica Miq (Hartati dan Ersam), dan satu senyawa baru turunan 4-fenilkumarin yaitu senyawa 5,7dihiroksi-8-(1,2-dihiroksi-3-metilbutenil-3)-4-fenilkumarin dari ekstrak etil asetat fraksi polar batang G. balica Miq (4) (Mudjirahmini dan Ersam, 2006).

OH

O

(2)

O

O

HO

O

(3)

4

OH

(

(

1) O

HO HO

2) O

OH

(4) Menurut Chin dkk., dari sintesis turunan kumarin, dapat diperoleh senyawa ethyl benzoylacetate (5) dengan kerangka dasar yaitu benzofenon. OH

O OH

OH

HO

R HO OH phlorogucinol

OAc

O

OAc

OH

O

HO

O

HO

Gambar 2.1 Sintesis turunan kumarin dengan reagen a) 4nitrobenzoil klorida, AlCl3, nitrobenzen, 600C, 23-25%; b) etil benzoilasetat, rt, 28%; c) p-anisoil klorida, AlCl3, nitrobenzen, 600C, 16%

5

Senyawa-senyawa tersebut disintesis untuk diuji aktivitas antibakteri dengan spesies mikrobiologi yaitu E.coli, S.aureus, K.pneuomonia, P.aeruginosia, dan S.typhimurium. 2.3 Tinjauan Senyawa Benzofenon Benzofenon merupakan senyawa metabolit sekunder yang memiliki tingkat oksidatif di bawah senyawa santon. Benzofenon, mempunyai kerangka dasar 2 cincin aromatik yang dihubungkan dengan gugus karbonil (Gambar 2.2). Dari penelitian sebelumnya, disebutkan bahwa isolasi dari G. pseudoguttifera menghasilkan vismiafenon C (6), pseudoguttiafenon A (7), mirtiafenon B (8) (Ali dkk., 2000) dan dari G.cola yaitu kolanon (9). O

Gambar 2.2 Kerangka dasar senyawa benzofenon

OMe

OMe

HO

OH

HO

OH

O O

O

(6)

(7)

6

OH

O

OMe

O

HO

O

(8)

(9)

2.4 Metode Isolasi dan Pemurnian 2.4.1 Metode Ekstraksi Metode ini merupakan metode pemisahan campuran senyawa berdasarkan perbedaan kelarutan zat terlarut dalam suatu pelarut. Prinsip pemisahan ini berdasarkan distribusi komponen zat ke pelarut atau yang lebih dikenal dengan sebutan like dissolve like. Prinsip ini dikarenakan perbedaan kepolaran. Ekstraksi dibagi menjadi dua yaitu berdasarkan wujud sampelnya, ekstraksi cair-cair dan ekstraksi padat –cair. Beberapa metode ekstraksi padat-cair diantaranya adalah a.

Maserasi Metode ini merupakan yang paling sederhana. Bahan dihaluskan (dipotong-potong) direndam dengan bahan pengekstrasi. Selanutnya rendaman tersebut disimpan di tempat yang terlindung dari cahaya matahari (mencegah reaksi yang dikatalis oleh cahaya) dan dikocok kembali. Maserasi berlangsung selama 4-10 hari. Semakin banyak cairan pengekstrasi, maka semakin banyak hasil yang diperoleh (Voight, 1995). 7

b.

Perkolasi Metode ini dilakukan dalam wadah berbetuk silindris yang memiliki jalan masuk dan keluar yang sesuai. Proses kerjanya adalah bahan pengekstraksi yang dialirkan secara terus-menerus dari atas, maka sampel yang turun akan berbentuk serbuk kasar. Dengan dialiri pelarut secara terusmenerus, akan terjadi proses maserasi bertahap yang banyak. Perbedaan dengan maserasi sederhana adalah, pada maserasi sederhana tidak terjadi ekstraksi sempurna karena akan terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan sel dalam cairan sekelilingnya, sedangkan pada perkolasi, perbedaan konsentrasi selalu diperhatikan sehingga memungkinkan terjadi ekstraksi total secara teoritis (Voight, 1995). Ekstraksi cair-cair disebut juga partisi. Prinsipnya adalah distribusi zat terlarut di antara dua pelarut yang tidak saling larut. Campuran yang tidak saling larut tersebut apabila dipisahkan akan terjadi dua lapisan/ fasa (Vogel, 1990). 2.4.2 Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Metode ini termasuk metode pemisahan fisikokimia. Lapisan yang memisahkan (fase diam), ditempatkan pada penyangga berupa pelat atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisah (berupa larutan) akan ditotolkan seperti bercak. Selanjutnya pelat tersebut ditempatkan pada bejana yang berisi larutan pengembang yang sesuai (fase gerak). Selama perambatan kapiler (pengembangan), terjadi pemisahan antara senyawa. Selanjutnya senyawa yang tidak berwarna dideteksi (Stahl, 1985). Metode kromatografi lapis tipis digunakan untuk memisahkan senyawa yang sifatnya hidrofob seperti lipida dan hidrokarbon. Pada fase diam, digunakan senyawa yang tidak mudah bereaksi seperti silica gel atau alumina.Untuk menambah kekuatan pada lapisan dan menambah adhesi,

8

silica gel bisa diberi pengikat. Pengikat yang digunakan adalah kalium sulfat (Sastrohamidjojo, 1991). Terdapat beberapa fase diam pada KLT baik polar maupun non polar, diantaranya : a. Silica gel Untuk fase polar, digunakan Silica gel yang dibebaskan dari air, bersifat sedikit asam. Untuk memperkuat lapisan pendukung, silica gel biasanya ditambah gips (kalsium sulfat). Pendukung lain yang digunakan biasanya berupa lembaran aluminium atau plastic. Silica gel biasanya ditambah senyawa fluoresensi agar berpendar apabila disinari dengan sinar UV. Silica gel non polar dilapisi senyawa non polar misalnya lemak, paraffin. Fase gerak air digunakan sebagai eluen. Fase ini dapat memisahkan banyak senyawa tetapi elusinya sangat lambat dan hasil ujinya kurang bagus. b. Alumina Fase diam alumina ini bersifat sedikit basa sehingga jarang digunakan. Saat akan digunakan, harus dilakukan pemanasan terlebih dahulu untuk pengaktifan. Alumina sebagai fase diam yang digunakan biasanya bebas air sehingga aktivitas penyerapan lebih tinggi. c. Kiselguhr Fase diam yang merupakan asam silika yang amorf. Karena berasal dari kerangka diatomea, maka lebih dikenal dengan nama tanah diatomea. Sifatnya kurang adsorptif dibanding silica gel. 2.4.3 Kromatografi Cair Vakum (KCV) Teknik pemisahan berdasarkan distribusi kelarutan dari daya absorpsi bahan antara fasa gerak dan fasa diam. Fasa diamnya berupa silica gel, sedangkan fasa geraknya yaitu pelarut. Sampel dilarutkan dalam pelar dan diimpregnasi dalam silika impreg, selanjutnya dimasukkan ke dalam kolom, dipadatkan dan divakum. Selanjutnya dielusi dengan pelarut yang berbeda berdasarkan tingkat kepolaran tertentu. 9

Hasil yang didapatkan adalah pemisahan sampel dalam fraksi yang berbeda berdasarkan tingkat kepolaran (Hardjosudirjo, 1991). 2.4.4 Kromatografi Eksklusi Ukuran (Size Exclusion Chromatografy, SEC) Teknik pemisahan ini didasarkan pada ukuran berat molekulnya. Prinsip kerjanya, analit akan melewati fasa diam yang berpori. Molekul dengan ukuran lebih besar dari pori fasa diam akan terelusi keluar dari kolom untuk pertama kalinya, sedangkan untuk molekul dengan ukuran lebih kecil akan masuk ke dalam pori fasa diam sehingga tertahan oleh kolom tergantung dari ukuran molekulnya. Pemisahan ini dimungkinkanakibat penahanan ukuran yang terjadi dalam partikel gel (Khopkar, 1990). Metode ini dikelompokkan menjadi dua macam yaitu kromatografi permeasi gel yang mengacu pada pemisaham makromolekul yang larut dalam air dan kromatografi filtrasi gel untuk maromolekul yang larut dalam pelarut organik. Untuk bekerja dalam medium tidak berair, gel yang tepat digunakan adalah Sephadex LH-20 (Khopkar, 1990). 2.5 Tinjauan Spektroskopi Senyawa 2.5.1 Spektroskopi UV-Vis Spektrometri UV-Vis merupakan teknik analisis spektroskopik yang memakai sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet dekat (190-380 nm) dan sinar tampak (380-780) dengan memakai instrument spektrofotometer. Karena spektrofotmetri UV-Vis lebih banyak menggunakan energi elektronik cukup besar pada molekul yang dianalisis, sehingga lebih banyak dipakai untuk analisis kuantitatif (Mulja dan Suharman, 1995). Molekul hanya menyerap radiasi elektromagnetik dengan panjang gelombang yang khusus (spesifik untuk molekul 10

tersebut) absorbs cahaya ultraviolet (radiasi berenergi tinggi) mengakibatkan berpindahnya suatu elektron ke orbital yang lebih tinggi (Fessenden dan Fessenden, 1997). Radiasi elektromagnetik yang dipancarkan menyerupai partikel yang disebut foton. Energi foton berbanding terbalik dengan panjang gelombang.Radiasi dengan panjang gelombang lebih pendek mempunyai energi yang lebih tinggi, sehingga foton dari cahaya UV mempunyai energi yang lebih tinggi dibandingkan foton gelombang radio (Fessenden dan Fessenden, 1997). Spektroskopi UV-Vis dapat digunakan untuk mengidentifikasi jenis flavonoid dan menentukan pola oksigenasi. Selain itu, kedudukan gugus hidroksil fenol bebas pada inti flavonoid juga dapat ditentukan dengan menambah pereaksi diagnostik ke dalam larutan cuplikan. 2.5.2 Spektroskopi Inframerah (IR) Metode ini digunakan untuk menganalisis struktur molekul untuk mengidentifikasi gugus fungsi dan jenis ikatan pada suatu molekul. Pada senyawa organik, frekuensi radiasi elektromagnetik pada inframerah akan diserap sebagaian atau seluruhnya. Penyerapan ini berhubungan dengan adanya perubahan momen dipol dari ikatan kovalen pada waktu terjadinya vibrasi (Supriyanto, 1999). Puncak serapan yang khas untuk setiap ikatan molekul diantaranya adalah C-H pada 3300-3500 cm-1, C=C pada 1680-1620 cm-1, C=O pada 1630-1850 cm-1, O-H pada 36503200 cm-1, dan N-H pada 3500-3300 cm-1 (McMurry, 1999). 2.5.3 Spektroskopi Resonansi Magnetik Inti (NMR) Metode ini merupakan metode analisis struktur molekul menggunakan perputaran inti muatan yang menghasilkan medan magnetik, dimana inti suatu unsur akan menghasilkan 11

medan magnet yang dapat memberikan gambaran jumlah atom, jenis atom maupun lingkungan atom hidrogen (1HNMR) ataupun atom karbon (13C-NMR). Spektrum 13C-NMR menunjukkan sejumlah karbon yang terdapat dalam molekul dengan semua pergeseran kimia (Hart, 1983).

12

BAB III METODOLOGI PENELITIAN 3.1 Alat Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain labu ukur, erlenmeyer, gelas ukur, gelas piala, pipet, kaca arloji, pengaduk kaca, pipa kapiler, bejana pengembang (chamber), pinset, botol vial, kromatografi kolom cair vakum (KCV), rotary evaporator vakum BUCHI, seperangkat alat destilasi, lampu ultraviolet (UV) dengan panjang gelombang 254 nm dan 366 nm, alat uji titik leleh Fisher-John, spektrofotometer FTIR Shimadzu, spektrofotometerUV-Vis GENESYS 10S, dan spektrometer NMR AGILENT (500 MHz untuk 1H-NMRdan 125 MHz untuk 13C-NMR). 3.2 Bahan Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah sampel berupa fraksi kering G. balica yang diperoleh dari Kebun Raya Purwodadi Pasuruan Jawa Timur yang telah dipindahkan ke Laboratorium Kimia Bahan Alam dan Sintesis Institut Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya, Aluminium sheets 20x20 cm silika gel Merck 60 F254 untuk kromatografi lapis tipis, silika gel 60 G untuk kolom kromatografi, silika gel 60 (70-230 mesh) untuk impregnasi, serium sulfat (Ce(SO4)2) 1,5% dalam H2SO4 2N, KBr untuk plat IR, pelarut aseton-d6 untuk uji NMR, n-heksana (C6H12), diklorometana (CH2Cl2), etil asetat (EtOAc), metanol (CH3), aluminium foil, plastik wrap, kertas saring whatmann, reagen geser UV antara lain NaOH, AlCl3, HCl, CH3COONa dan H3BO3.

13

3.3 Prosedur Penelitian 3.3.1 Uji Pendahuluan Pada uji yang pertama dilakukan uji kelarutan untuk mengetahui larut atau tidaknya suatu fraksi pada pelarut yang akan digunakan. Pada uji ini, pelarut yang digunakan yaitu metanol, etil asetat, diklorometana, dan n-heksana. Sebanyak + 1mg sampel diletakkan pada plat tetes bersih, kemudian ditetesi metanol dan diamati sambil diaduk dengan spatula kecil, hasilnya dicatat, ditunggu sampai pelarut menguap. Setelah pelarut pertama menguap, dan sampel menjadi kering, selanjutnya ditetesi dengan etil asetat dan diamati sambil diaduk dengan spatula kecil, hasilnya dicatat, ditunggu sampai pelarut menguap. Uji kelarutan selanjutnya menggunakan pelarut diklorometana. Sampel ditetesi sambil diaduk dan diamati kemudian dicatat hasilnya. Uji kelarutan yang terakhir menggunakan pelarut n-heksana. Sampel pada plat tetes yang sudah kering ditetesi n-heksana sambil diaduk dan diamati, kemudia hasilnya dicatat. Setelah dilakukan uji kelarutan, selanjutnya dilakukan uji eluen untuk mengetahui eluen yang dapat memisahkan senyawa-senyawa dalam fraksi secara baik. Uji ini dilakukan dengan cara membuat eluen, baik eluen tunggal atau campuran dengan perbandingan tertentu. 3.3.2 Ekstraksi dan Fraksinasi Sebanyak 603.0 mg fraksi kering ekstrak etil asetat kulit batang G. balica dilakukan pemisahan menggunakan metode kromatografi kolom gravitasi. Pemisahan menggunakan pelarut etil asetat: n-heksana dengan peningkatan kepolaran sebesar 40%, 50%, 70%, etil asetat 100% dan metanol 100%. Hasil dari pemisahan ini ditampung pada vial 100 mL sebanyak 27 vial dengan volume tampungan sekitar 50 mL. Selanjutnya dilakukan pemantauan noda pada semua vial

14

dengan mengelusi plat KLT menggunakan pelarut etil asetat: n-heksana 80% dengan memilih vial bernomor genap. Proses selanjutnya dilakukan penggabungan vial berdasarkan gabungan Rf yang sama pada plat KLT. Hasilnya didapatkan lima fraksi yaitu A, B, C, D dan E. Setelah didapatkan lima fraksi, dilakukan pemisahan fraksi B menggunakan metode sephadex LH-20 dengan eluen metanol: diklorometana 1:1 menghasilkan 10 subfraksi yaitu B1-B10. Selanjutnya dilakukan pemantauan noda senyawa menggunakan KLT.Profil noda dengan Rf yang sama digabungkan menghasilkan BG1(0.7 mg), BG2(2 mg), BG3(.3 mg), BG4(4 mg) dan BG5(10.5 mg). Dari hasil KLT, BG5 menunjukkan spot noda tunggal yang mengindikasikan bahwa subfraksi tersebut sudah murni. 3.3.3 Uji Kemurnian dan Titik Leleh Hasil KLT sebelumnya menunjukkan bahwa BG5 mempunyai noda tunggal yang mengindikasikan senyawa tersebut sudah murni. Untuk menguatkan hipotesa tersebut maka dilakukan uji tiga eluen yang berbeda untuk mendapatkan spot noda tunggal. Pada proses uji kemurnian, dilakukan pengujian 3 eluen berbeda dengan menggunakan perbedaan kepolaran eluen. Proses ini menggunakan campuran eluen yaitu metanol: diklorometana 20%, etil asetat: n-heksana 80%, dan etil asetat:klorofom 70%. Proses ini untuk mengetahui profil noda tunggal pada posisi atas, tengah, dan bawah. 3.3.4 Penentuan Struktur Senyawa Senyawa hasil isolasi selanjutnya dikarakterisasi menggunakan spektrometer UV-Vis, IR, dan NMR. Pada pengukuran UV-Vis, yang pertama dilakukan adalah preparasi sampel. Sebanyak 1 mg sampel dilarutkan dalam 10 mL metanol p.a. dan digunakan sebagai larutan stok pada 15

pengukuran. Pengukuran yang pertama yaitu mengukur blanko dengan memasukkan metanol p.a. ke dalam kuvet dan diukur absorbansi pada panjang gelombang 200-600 nm. Disimpan data hasil absorbansinya. Selanjutnya disiapkan kuvet kedua dan diisi dengan sampel atau larutan stok, diukur absorbansi sampel pada panjang gelombang yang sama. Disimpan data hasil absorbansinya. Kuvet yang berisi larutan stok dikeluarkan kemudian ditambahkan 3 tetes NaOH ke dalam kuvet dan diukur kembali absorbansinya pada panjang gelombang 200-600 nm. Disimpan data hasil absorbansi. Kuvet dikeluarkan, kemudian larutan dalam kuvet dibuang. Disiapkan larutan stok baru dengan ditambahkan 3 tetes AlCl3 dan diukur abosorbansi untuk panjang gelombang yang sama. Data hasil disimpan. Kemudian kuvet dikeluarkan, ditambahkan 3 tetes HCl ke dalam kuvet dan kembali diukur absorbansinya. Data hasil disimpan. Perlakuan yang terakhir yaitu disiapkan larutak stok baru ke dalam kuvet dengan ditambahkan + 100 mg (satu sendok spatula kecil) CH3COONa sambil dikocok atau diaduk dengan spatula kecil agar terlarut sempurna dan diukur absorbansinya pada panjang gelombang yang sama. Data hasil absorbansi disimpan. Kuvet dikeluarkan dan ditambahkan + 100 mg ( satu sendok spatula kecil) H3BO3 sambil diaduk dengan spatula kecil dan diukur absorbansi pada panjang gelombang 200-600 nm. Disimpan data hasil absorban, sehingga didapatkan enam data hasil absorbansi untuk pengukuran spektrometer UV-Vis. Untuk pengukuran IR, preparasi sampel dilakukan dengan menyiapkan 1 mg senyawa dan digerus dengan KBr pada penggerus yang sudah bersih hingga homogen. Selanjutnya dibuat pelet dengan ketebalan + 1 mm dan diukur pada bilangan gelombang 400-4000 cm-1 . Disimpan data hasil IR. Karakterisasi yang terakhir yaitu menggunakan spektrometer NMR. Preparasi sampel dilakukan dengan 16

melarutkan 7-9 mg senyawa ke dalam aseton-d6. Selanjutnya sampel yang sudah dilarutkan tersebut diinjeksikan ke dalam tabung NMR dan dianalisis untuk mendapatkan data spektra 1 H-NMR dan 13C-NMR. Disimpan data spektra.

17

“Halaman ini sengaja dikosongkan”

18

BAB IV HASIL dan PEMBAHASAN 4.1 Proses Fraksinasi Fraksi kering berbentuk serbuk kasar berwarna kuning dengan massa yaitu 601.0 mg. Sebelum dilakukan proses pemisahan, terlebih dahulu dilakukan uji eluen untuk mengetahui eluen yang tepat pada proses pemisahan. Fraksi kering diambil + 1 mg dan diuji kelarutannya.Dari hasil uji kelarutan, diketahui bahwa fraksi ini larut pada metanol dan etil asetat dan tidak larut pada diklorometana dan nheksana.Tabel kelarutan dapat dilihat pada tabel 4.1.Selanjutnya, fraksi yang larut dipindahkan ke dalam vial berukuran 10 ml dan ditambahkan metanol sampai konsentrasinya tidak terlalu pekat.Dilakukan pengujian eluen dengan tingkat kepolaran yang berbeda yaitu etil asetatdiklorometana 50%, etil asetat-n-heksana 70%, dan metanoldiklorometana 50%. Pemisahan yang bagus didapat dengan menggunakan eluen etil asetat-n- heksana 70% (Gambar 4.1), maka untuk proses pemisahan selanjutnya akan digunakan eluen tersebut dengan tingkat kepolaran yang bervariasi dimulai dari kepolaran yang rendah.Hal ini bertujuan agar senyawa-senyawa di bagian atas dapat terelusi terlebih dahulu. Tabel 4.1 Uji Kelarutan Fraksi dalam pelarut berbeda Fraksi

Metanol

1

√

Etil asetat √

Diklorometana nHeksan x x

19

Gambar 4.1 Uji Eluen menggunakan etil asetat-diklorometana 50% (kiri), etil asetat-n-heksan 70% (tengah), dan metanoldiklorometana 30% (kanan) Proses pemisahan menggunakan metode kromatografi kolom gravitasi untuk mendapatkan hasil pemisahan yang baik, karena senyawa target berjarak sangat dekat dengan senyawa lainnya. Eluen yang digunakan yaitu etil asetat: nheksana 40%, 50%, 70%, etil asetat 100%, dan metanol 100%. Pemisahan ditampung pada vial 100 ml dengan menampung sekitar 70% volume. Setiap peningkatan kepolaran, dilakukan monitoring terlebih dahulu apakah noda yang muncul sudah mulai berkurang intensitasnya.Dari hasil tersebut, didapatkan sebanyak 27 vial.Selanjutnya, semua hasil tampungan tersebut dilakukan uji KLT untuk mengetahui profil noda. Pengujian dilakukan pada vial bernomor genap. Hasil KLT dapat dilihat pada gambar 4.2.

20

Gambar 4.2 Kromatogram Pemisahan KKG menggunakan eluen etil asetat-n-heksana 80% Profil noda yang sama kemudian digabung dan diperolehtkan subfraksi A (98.3 mg), B (110 mg), C (150.33 mg), D (81.5 mg), E (98.9 mg) (Gambar 4.3). Dilakukan proses pemisahankembali menggunakan sephadex LH-20 pada subfraksi B yang menghasilkan B1 (0.2 mg), B2(0.5 mg), B3 (0.99), B4 (1.01 mg), B5 (0.09 mg), B6 (0.21 mg), B7 (1.35 mg), B8 (2.65 mg), B9 (9.5 mg), B10 (1 mg). Dari hasil pemisahan menggunakan sephadex LH-20, dilakukan uji KLT untuk mengetahui profil noda dengan Rf yang sama. Berdasarkan hasil monitoring KLT, subfraksi B1-B10 digabung menghasilkan subfraksi BG1 (0.7 mg), BG2 (2 mg), BG3 (0.3 mg), BG4 (4 mg) dan BG5 (10.5 mg).Dilakukan pemantauan kembali untuk mengetahui profil noda.Hasilnya didapat bahwa profil noda BG5 tunggal.Karena noda terlihat tunggal, maka dilakukan uji tiga eluen dengan tingkat kepolaran berbeda untuk mendapatkan hasil noda tunggal pada tiga titik yaitu atas, tengah dan bawah.Hasil uji tiga eluen dapat dilihat pada gambar 4.4.

21

Gambar 4.3 Kromatogram Sub fraksi A, B, C, D, dan E menggunakan eluen etil asetat-n-heksana 80%

Gambar 4.4 Kromatogram Hasil Pemisahan Sephadex LH-20 Sub fraksi B menggunakan eluen etil asetat-n-heksana 70% 4.2. Uji Kemurnian dan Titik Leleh Uji kemurnian senyawa dilakukan dengan uji tiga eluen dengan kepolaran berbeda.Kepolaran ini harus membuat noda berada pada posisi atas, tengah dan bawah.Untuk uji 22

kemurnian dilakukan dengan eluen dapat dilihat di gambar 4.5.

Gambar 4.5 Kromatogram dari Uji 3 Eluen metanoldiklorometana 20% (kiri), etil asetat-diklorometana 80% (tengah), etil asetat-kloroform 70% (kanan) Dari uji tiga eluen, untuk noda tunggal posisi atas didapat dengan menggunakan eluen metanol-diklorometana 20%. Noda tunggal pada posisi atas menunjukkan bahwa sudah tidak terdapat senyawa lain di posisi bawah senyawa tersebut. Untuk noda tunggal posisi tengah, didapat dengan eluen etil asetat-diklorometana 80%. Posisi noda tunggal di tengah menunjukkan bahwa sudah tidak terdapat senyawa lain di posisi atas dan bawah senyawa tersebut. Pada posisi noda tunggal bawah, eluen yang digunakan yaitu etil asetatkloroform 70%. Posisi noda tunggal bawah menunjukkan bahwa tidak terdapat senyawa lain di atas senyawa tersebut. Setelah dilakukan uji 3 eluen, maka dilakukan uji titik leleh.Padatan hasil isolasi senyawa berbentuk serbuk halus kecoklatan dengan massa sebesar 10.5 mg. Uji titik leleh mendapatkan hasil yaitu sebesar 215-216OC. Hasil tersebut sesuai dengan indikator senyawa murni yang mulai meleleh sampai meleleh seluruhnya dengan rentang + 10C. 23

4.2 Penentuan Struktur Pada penentuan struktur senyawa, dilakukan analisis data UV-Vis, IR, 1H NMR dan 13C NMR. Pada gambar 4.4, menunjukkan spektrum UV-Vis dengan dua puncak serapan pada 290 nm (pita II) dan 325 nm (pita I). Pada penelitian ini, spektrum pada pita II berada pada panjang gelombang 290 nm. Hal ini mengindikasikan adanya eksitasi elektron dari π → π* yang merupakan kromofor khas sistem ikatan rangkap terkonjugasi (-C=C-C=C-) pada cincin aromatik. Pada pita I dengan panjang gelombang 325 nm menunjukkan adanya eksitasi elektron dari n → π* yang merupakan kromofor khas untuk sistem terkonjugasi dari heteroatom dengan ikatan rangkap terkonjugasi (-C=C=C=O). Pada pengujian selanjutnya, ditambahkan pereaksi geser untuk mengetahui ada tidaknya gugus hidroksi yang tersubtitusi pada posisi orto maupun para.Setelah ditambahkan NaOH terjadi pergeseran batokromik pada pita I sebesar 15 nm dari panjang gelombang 325 nm menjadi 340 nm.Hal ini terjadi karena pengaruh auksokrom. Auksokrom merupakan gugus fungsi yang tidak menyerap energi cahayanya sendiri akan tetapi dapat meningkatkan intensitas warna yang diserap kromofor karena terdapat ikatan rangkap terkonjugasi, seperti gugus –OH (Cairns, 2008). Gugus hidroksi merupakan pendorong elektron yang kemudian mengalami kesetimbangan keto-enol dengan gugus karbonil yang terletak pada posisi para(Gambar 4.6) (Ito, dkk, 1997). Pada penambahan basa NaOH, pita I bergeser. Hal tersebut menunjukkan bahwa pada senyawa terdapat gugus penarik elektron (C=O) yang terletak pada posisi para dengan gugus pendorong elektron (-OH) dan mengalami kesetimbangan keto-enol. Karena terjadi kesetimbangan ketoenol, maka peristiwa tersebut menunjukkan adanya suatu senyawa fenolat (Ito dkk, 1997; Sen dkk, 1982). 24

O

O

Na+ O

R

+ NaOH

OH

R R

+ OH2

O O

Gambar 4.6 Kesetimbangan keto-enol dengan NaOH

Gambar 4.7 Spektra UV-Vis senyawa 1dalam CH3OH (merah) dan CH3OH + NaOH (biru) Pada saat penambahan AlCl3 tidak terjdi pergeseran batokromik maupun hipsokromik. Tetapi ketika ditambahkan HCl terjadi pergeseran batokromik sebesar 50 nm pada pita I. Dari data tersebut dapat diketahui bahwa senyawa ini mempunyai gugus OH khelat tapi tidak tersubtitusi posisi orto. Ketika ditambahkan CH3COONa tidak menunjukkan adanya pergeseran batokromik tetapi pada saat ditambahkan H3BO3 terjadi pergeseran batokromik. Hal ini dapat disimpulkan bahwa senyawa ini tidak memiliki subtituen hidroksi pada posisi orto(Gambar 4.8).Tabel 4.2 menunjukkan

25

perubahan spektrum UV-Vis pada saat sebelum dan sesudah ditambah dengan reagen geser.

Gambar 4.8 Spektra UV-Vis senyawa 1dalam CH3OH (merah), CH3OH + CH3COONa (Hijau), CH3 + CH3COONa + H3BO3 (biru)

26

Tabel 4.2 Data Pergeseran Spektrum UV-Vis senyawa 1 sebelum dan sesudah ditambah pereaksi geser

Sampel Senyawa 1 + CH3OH Senyawa 1 + CH3OH + NaOH Senyawa 1 + CH3OH + AlCl3 Senyawa 1 + CH3OH + AlCl3 + HCl Senyawa 1 + CH3OH + CH3COONa Senyawa 1 + CH3OH + CH3COONa + H3BO3

Panjang Gelombang λmaks (nm) Pita II Pita I 290 325

Selisih Pergeseran λmaks (nm) Pita II Pita I -

300

340

+10

+15

290

330

-

+5

295

375

+5

+50

290

325

-

-

295

330

+5

+5

Analisis selanjutnya adalah spektrofotometer IR pada bilangan gelombang 400-4000 cm-1 (Gambar 4.9) yang menunjukkan beberapa pita khas dari suatu gugus fungsi. Pita-pita serapan yang khas diantaranya adalah 3383 cm1 ,2926 cm-1, 2856 cm-1, 1726 cm-1 dan 1639 cm-1. Pada bilangan gelombang 3100-3500 cm-1 melebar menunjukkan adanya gugus hidroksi (-OH). Bilangan gelombang 1639 cm-1 menunjukkan adanya gugus karbonil terkhelat dengan didukung bilangan gelombang pada 3383 cm-1 yang mencirikan gugus hidroksi yang terikat (Jung dkk, 27

2006).Selanjutnya bilangan gelombang 2926 cm-1 dan 2856 cm-1 menunjukkan C-H alifatik. Sedangkan serapan pada panjang gelombang 1512 cm-1 merupakan serapan khas untuk ikatan cincin aromatik, dimana data ini menguatkan data dari spektrum UV (Kitanov dan Nedialkov, 2001). Berdasarkan analisis data spektrum UV Vis dan IR, senyawa 1 diketahui mempunyai gugus karbonil yang terkhelat dengan OH, terdapat gugus hidroksi dengan posisi para dengan karbonil.

28

Gambar 4.9 Spektrum IR senyawa1 29

Gambar 4.10 Spektrum 1H-NMRsenyawa 1

30

Gambar 4.11 Spektrum 13C-NMRsenyawa 1

31

Selanjutnya dilakukan analisis 1H-NMR (Gambar 4.10) dan 13C-NMR (Gambar 4.11) untuk penentuan struktur senyawa. Pada spektrum 1H-NMR, diketahui terdapat sinyal proton pada pergeseran (𝛿, ppm) 12,34 ppm (1H, brs) menunjukkan gugus OH yang terkhelat dengan karbonil. Data ini menguatkan analisis spektrum UV-Vis bahwa terdapat gugus karbonil terkhelat. Sinyal-sinyal proton pada 7,07 ppm dan 6,74 ppm (1H, d, J=7,6 Hz) menunjukkan sinyal proton aromatis. Pada 12,34 ppm menunjukkan adanya gugus karbonil terkhelat, sedangkan pada sinyal 6,90 ppm menunjukkan gugus OH bebas. Analisis selanjutnya yaitu spektrum13C-NMR. Pada gambar 4.10 menunjukkan terdapat sinyal-sinyal pada pergeseran kimia (𝛿 C, ppm)yaitu Pergeseran pada 197,6 ppm menunjukkan adanya gugus karbonil terkhelat dari suatu benzofenon(Chin dkk., 2011). Data tersebut menguatkan data analisis spektra UV- Vis dan IR pada pembahasan sebelumnya. Data spektrum1H-NMR dan 13C-NMR dari senyawa 1 kemudian dibandingkan dengan 4-(2,4,6- trihydroxybenzoyl) benzonitrile (Gambar 4.12). Dari data perbandingan spektrum, diketahui bahwa senyawa pembanding mempunyai gugus CN dengan pergeseran 13C-NMR pada 114,35 ppm sedangkan pada senyawa 1tidak muncul pada pergeseran tersebut sehingga dapat disimpulkan bahwa senyawa 1 tidak mempunyai subtituen CN. Perbandingan kedua senyawa tersebut dapat dilihat pada tabel 4.3.

32

O

CN

Gambar 4.12 benzonitrile

Senyawa

OH

HO

4-(2,4,6-

OH

trihydroxybenzoyl)

33

Tabel 4.3 Data perbandingan 1H-NMR dan 13C-NMR senyawa 1(500 MHz,Aseton-d6dengan senyawa 4-(2,4,6- trihydroxybenzoyl)benzonitrile (senyawa 10)(500 MHz, DMSO-d6) (Chin dkk., 2011) δH (ppm)

NO

1 2 3 4 5 6 1’ 2’ 3’ 4’ 5 6’ C=O

Senyawa 1

Senyawa 10

12,34 (s) 5,92 (s)

10,59 (s, IH) 5,83 (s, 2H)

5,98 (s)

5,83 (s, 2H)

6,74 (d, J=7,6 Hz) 5,71 (d, J=11,8 Hz)

7,68 (d, J=8,2 Hz, 2H) 7,89 (d, J=8,2 Hz, 2H)

δC (ppm)

Senyawa 1 101,96 161,00 94,89 164,25 96,01 163,33 145,59 129,02 128,71 84,12 119,89 128,71 197,76

Senyawa 10 105,83 161,71 95,75 164,37 95,75 161,71 145,13 129,47 133,17 114,35 119,53 133,17 197,09

34

Sesudah membandingkan data spektrum1H-NMR dan 13CNMR antara senyawa 1 dengan senyawa 10, maka senyawa 1 dianalisis mempunyai bentuk struktur seperti gambar 4.13 di bawah ini yaitu 2, 4, 6-trihidroksi benzofenon. 2'

O 1'

1

OH 2

3' 4'

5'

HO 6 5

3 4 OH

Gambar 4.13 Struktur senyawa 1

35

“Halaman ini sengaja dikosongkan”

36

BAB V KESIMPULAN 5.1 Kesimpulan Dari isolasi ekstrak etil asetat batang Garcinia balica Miq didapatkan senyawa 2, 4, 6-trihidroksi benzofenon (1). Senyawa ini berupa powder berwarna kuning kecoklatan dengan titik leleh sebesar 215-216OC.

37

“Halaman ini sengaja dikosongkan”

38

DAFTAR PUSTAKA Ali, S., Goundar, R., Sotheeswaran, S., Beaulieu, C., Spine, C. (2000). Benzophenones of Garcinia pseudoguttifera. Phytochemistry. 53. 281-284. Chairns, D. (2008). Essential of Pharmaceutical Chemistry. Third Edition. London: Pharmaceutical Press. Chin, Yi-Ping, Huang, Wei-Jan, Hsu, Feng-Lin, Lin, YuhLing, Ling, Mei-Hsuang. (2011). Synthesis and Evaluation of Antibacterial Activities of 5,7Dihidroxycoumarin Derivatives. Arch. Pharm. Chem. Life Sci. 11. 386-393. Deachathai, S., Mahabusakaraman, W., Phongpaichit, S., Taylor, W.C. (2005). Phenolic Compounds from Garcinia dulcis. Phytochemistry. 23. 130-137 Ersam, T. (2001). Senyawa Kimia Mikromolekuler Beberapa Tumbuhan Artocarpus Hutan Tropika Sumatera Barat. Disertasi, PPs,ITB, Bandung. Fesseneden, Ralph J., Fessenden, Joan S. (1997). Dasar-dasar Kimia Organik. Jakarta: Bina Aksara Jakarta. Hart H. (1983). Organic Chemistry AShort Course. Sixth Edition. Boston: Houghton Miffin Company. Hartati, Sri dan Ersam, T. (2006). Dua Senyawa 4- Fenil Kumarin Pada Fraksi Non Polar dari Ekstrak Etil Asetat Batang Garcinia balica Miq Mundu Alas. Kelompok Penelitian Kimiawi Tumbuhan-ITS Jurusan Kimia, FMIPA ITS Surabaya. 39

Heyne, K. (1987). Tumbuhan Berguna Indonesia, Jilid 3. Jakarta: Departemen Kehutanan Iinuma, M., Tosa, H., Tanaka, T., Riswan, S. (1996). Three New Xanthon from bark of Garcinia dioica. Chem. Pharm. Bull. 44 (1). 232-234 Iilyasa*, M., Perveena, Mehtab, Shafiullahb, Ahmada, Syed M. (2002). A novel chalcone from Garcinia nervosa. J. Chem. Research (S). 231-233 Ito, C., Miyamoto, Y., Nakayama, M., Kawai, Y. (1997).A Novel Depsidone and Some New Xanthones from Garcinia Spesies.Chemical and Pharmaceutical Bulletin.45(9).1403-1413 Jackson, B., Locksley, H.D., Schellnmann, F. (1971). Extractives from Gutiferae Part XXII. The Isolation and Structure of Four Novel Biflavones from heartwood of Garcinia buchananii and Garcinia eugeniifolia Wall. J. Chem. Soc. 3791-3804 Jung, H. A., Su, B. N., Keller, W. J., Mehta, R. G., Kinghorn A. D. (2006). Antioxidant Xanthones from The Pericarp of Garcinia mangostana. J. Agric. Food. Chem. 54. 6. 2077-2088 Khopkar, S. M. 1990. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta: Universitas Indonesia Press. Kosela, S., Hu, L.H., Yio, S.C., Rachmatia, T., Hanafi, M., Sim, K.Y. (2000).Dulxanthones F-H, Three New Pyranoxanthones from Garcinia dulcis. J. Nat. Prod. 63. 406-407.

40

McMurry, J. (1998). Organic Chemistry. Australia: Cornell University. Merza, J. (2004). Prenylated Xanthon and Tocotrienol from Garcinia virgate. Phytochemistry. 65: 2915-2920. Mudjirahmini, D., Ersam, T. (2006). 4-Fenilkumarin pada Fraksi Polar Ekstrak Etil Asetat dari Batang Garcinia balica Miq. Prosiding Seminar Nasional Kimia VIII. ITS. Surabaya. Mulja, M., & Suharman. (1995). Analisis Instrumental. Surabaya: Airlangga University Press. Nedialkov, P.T. Kitanov, G.M. (2000). Two benzophenone0arabinosides and a Chromone from Hypericum annulatum. Phytochemistry. 59. 867-871 Nguyen, Hiep D., Trinh, Bihn T.D., Nguyen*, Lien-Hoa D. (2011). Guttiferones Q-S, cytotoxic polyisoprenylated benzophenones from the pericarp of Garcinia cochinchinensis.Phytochemistry Letters 4. 129-133. Peres, V., Nagem, T.J. Oliveira, F.F. (2000), Trioxygenated Naturally Occuring Xanthones.Phytocemistry.55.684710. Rukmana. 2007. Penuntun Praktikum Dasar Agronomi. Bengkulu: Universitas Bengkulu. Sari, R. dan Hanan, A. (2000). Garcinia (Clussiaceae) di Kebun Raya Bogor: Fisiognomi, Keanekaragaman dan Potensi. Prosiding Seminar Hari Cinta Puspa dan Satwa Nasional. Kebun Raya Bogor

41

Sastrohamidjojo, H. (1991). Kromatografi. Yogyakarta: Liberty. Sen, A. K., Dutta, P. K, Sarkar, K.K., Banerji, N. (1987). Acid-Catalysed Cyclisations of Xanthone from Garcinia rigida. Fitoterapia. 79. 182-184. Stahl, E. (1985). Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi. Bandung: InstitutTeknologi Bandung. Steenis, G.G.J.V., Hoed, D., Bloembergen, S., Eyma, P. J. (1975). Flora untuk Sekolah di Indonesia. Jakarta: Pradnya Paramita. Steinlin dkk. 1988. Menuju Kelestarian Hutan Edisi Pertama. Jakarta: Yayasan Obor Indonesia. Supriyanto, R. (1999). Buku Ajar Kimia Analitik III. Bandar Lampung: Universitas Lampung. Vogels, A. I. (1989). Textbook of Practical Chemistry. Fifth Edition. England: Pearson-Prentice Hall. Voight, R.1995. Buku Pelajaran Yogyakarta: UGM.

Teknologi

Farmasi.

42

LAMPIRAN A.

Skema Kerja

Uji Kelarutan

1 mg sampel -

diletakkan pada plat tetes bersih ditetesi pelarut (CH3OH, etil asetat, diklorometana, nheksana)

hasil

43

Ekstraksi dan Fraksinasi

603.0 mg fraksi kering ekstrak etil asetat

-

-

difraksinasi dengan metode Kromatografi Kolom Gravitasi dengan eluen etil asetatn-heksana 40%, 50%, 70%, etil asetat 100%, CH3OH 100% ditampung pada vial 100 ml

Vial1-27

-

diuji KLT pada vial nomor genap digunakan eluen etil asetatn-heksana 80%

hasil

44

hasil

-

A

B

dikelompokkan menjadi fraksi gabungan

C

-

E

D

dilakukan pemisahan menggunakan sephadex L-20 digunakan eluen CH3OHdiklorometana 1:1

Subfraksi B110

-

diuji KLT pada semua subfraksi digunakan eluen CH3OHdiklorometana 1:1 digabung untuk Rf yang sama

Hasil (BG 1-5) 45

BG5 10.5 mg -

diuji tiga eluen yaitu CH3OHdiklorometana 20%, atil asetat- diklorometana 80%, etil asetat- kloroform 70%

-

diuji titik leleh

hasil

hasil

46

Penentuan Struktur IR 1 mg serbuk BG5

-

dibuat pelet menggunakan pelarut KBr diuji pada instrumen IR

Hasil UV

1 mg serbuk BG5 -

dilarutkan pada 10 mL CH3OH PA

Larutan stok

47

Larutan stok -

dipipet pada kuvet diukur absorbansi pada bilangan gelombang 200-600 nm

Hasil

Larutan stok -

dipipet pada kuvet ditambah satu sendok spatula kecil NaOH diaduk diukur absorbansi pada bilangan gelombang 200-600 nm

Hasil

48

Larutan stok - dipipet pada kuvet - ditambah satu sendok spatula kecil AlCl3 - diaduk - diukur absorbansi pada bilangan gelombang 200-600 nm Hasil

Larutan stok -

dipipet pada kuvet ditambah satu sendok spatula kecil AlCl3 + HCl diaduk diukur absorbansi pada bilangan gelombang 200-600 nm

Hasil

49

Larutan stok -

dipipet pada kuvet ditambah satu sendok spatula kecil CH3COONa diaduk diukur absorbansi pada bilangan gelombang 200-600 nm

Hasil

Larutan stok - dipipet pada kuvet - ditambah satu sendok spatula kecil CH3COONa + H3BO3 - diaduk - diukur absorbansi pada bilangan gelombang 200600 nm

Hasil

50

BIODATA PENULIS Penulis bernama Retno Purbowati. Lahir di Tulungagung pada 13 Oktober 1993. Anak kedua dari tiga bersaudara. Pendidikan formal yang telah ditempuh yaitu TK Darmawanita Jarakan, SDN 1 Wonokromo, SMPN 1 Kauman, SMAN Gondang dan diterima tes tulis SNMPTN di Kimia ITS pada tahun 2012 dengan NRP 1412100040. Selama di Kimia ITS, penulis aktif dalam organisasi himpunan yaitu sebagai staff Departemen Sosial 2013-2014, staff mengajar HIMKA Goes to School 2013-2014, bendahara Laboratorium Kimia Bahan Alam 2016-2017. Penulis pernah menempuh kerja praktek selama satu bulan di PT SMART, Tbk di bagian Quality Control dan Research and Development pada Agustus 2015. Untuk menyelesaikan Tugas Akhir, penulis memilih bidang Kimia Organik Bahan Alam. Penulis dapat dihubungi pada [email protected].

51