ISOLASI SENYAWA GOLONGAN TRITERPENOID DAN UJI TOKSISITAS EKSTRAK N-HEKSANA BATANG PRANAJIWA (Euchresta horsfieldii (Lesch) Benn) TERHADAP LARVA UDANG (Artemia salina Leach) YANG BERPOTENSI SEBAGAI ANTIKANKER
SKRIPSI
Oleh:
I PUTU GEDE SUWINDRA PUTRA NIM. 1008105045
JURUSAN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS UDAYANA BUKIT JIMBARAN 2015
ISOLASI SENYAWA GOLONGAN TRITERPENOID DAN UJI TOKSISITAS EKSTRAK ETANOL BATANG PRANAJIWA ( Euchresta horsfieldii (Lesch) Benn) TERHADAP LARVA UDANG (Artemia salina Leach) YANG BERPOTENSI SEBAGAI ANTIKANKER
SKRIPSI
Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains (S1) di Jurusan Kimia F.MIPA Universitas Udayana
Oleh : I PUTU GEDE SUWINDRA PUTRA 1008105045
Menyetujui
Pembimbing I
Pembimbing II
( Dr. I Wayan Gede Gunawan,S.Si,M.Si ) ( Oka Ratnayani,S.Si,M.Si,Ph.D ) NIP. 19650410 199412 1 001
NIP. 19730105 199903 2 002
Mengesahkan,
Ketua Jurusan Kimia-FMIPA
Drs. I Gusti Agung Gede Bawa, M.Si. NIP. 19730105 199903 2 002
ii
ISOLASI SENYAWA GOLONGAN TRITERPENOID DAN UJI TOKSISITAS EKSTRAK ETANOL BATANG PRANAJIWA ( Euchresta horsfieldii (Lesch) Benn) TERHADAP LARVA UDANG (Artemia salina Leach) YANG BERPOTENSI SEBAGAI ANTIKANKER
Oleh : I PUTU GEDE SUWINDRA PUTRA 1008105045 Sekripsi ini disidangkan di Bukit Jimbaran pada tanggal 7 Januari 2015 Team Penguji Sidang Skripsi
Pembimbing I
Pembimbing II
( Dr. I Wayan Gede Gunawan,S.Si,M.Si ) ( Oka Ratnayani,S.Si,M.Si,Ph.D ) NIP. 19650410 199412 1 001
NIP. 19730105 199903 2 002
Anggota
Dr. Ir. Sri Wahyuni, M.Kes. NIP. 19590621198603 2 002
Drs. I Wayan Suarsa, M.Si. NIP. 19650419199103 1 001
Dra. Wiwik Susanah Rita, M.Si. NIP. 19690323199203 2 002
iii
ABSTRAK Isolasi dan identifikasi senyawa toksik berpotensi sebagai antikanker dari batang pranajiwa (Euchresta horsfieldii (Lesch) Benn) telah dilakukan pada penelitian ini. Kurang lebih 800 g batang pranajiwa diekstraksi dengan 5000 mL etanol 96% menghasilkan 40,19 g ekstrak pekat etanol, dan hasil uji toksisitasnya terhadap larva udang Artemia salina Leach menunjukkan LC50=79,43 ppm. Partisi ekstrak etanol dengan n-heksana, kloroform, air menghasilkan 1,50 g ekstrak nheksana (LC50=50,11 ppm), 1,20 g ekstrak kloroform (LC50=630,95 ppm), dan 30,06 g ekstrak air (LC50=158,48 ppm). Ekstrak n-heksana bersifat paling toksik selanjutnya dipisahkan, dimurnikan, dan diidentifikasi. Pemisahan ekstrak n-heksana secara kromatografi kolom dengan fase diam silika gel 60 dan fase gerak n-heksana-kloroform (5:5) menghasilkan empat fraksi (F1, F2, F2, F3, dan F4). Fraksi F1 dengan noda tunggal pada kromatografi lapis tipis bersifat paling toksik (LC50=79,43 ppm). Identifikasi fraksi F1 dengan uji fitokimia, spektrofotometer UV-Vis, dan spektrofotometer IR, diduga positif mengandung senyawa golongan triterpenoid. Kata kunci : batang pranajiwa, Euchresta horsfieldii (Lesch) Benn., toksisitas, Artemia salina Leach.
iv
ABSTRACT Isolation and identification of toxic compounds potential for anticancer from pranajiwa stem (Euchresta horsfieldii (Lesch) Benn) has been carried out in this research. About 800 g sample of pranajiwa stem was extracted with 5000 mL of 96% ethanol resulted in 40.19 g viscous ethanol extract and the its toxiaty was tested against brine shrimp larvae showed the value of LC50 = 79.43 ppm. Partition of the ethanol extract with n-hexane, chloroform and water gained 1.50 g n-hexane extract (LC50 = 50.11 ppm), 1.20 g chloroform extract (LC50 = 630.95 ppm) and 30.06 g water extract (LC50 = 158.48 ppm). The n-hexane extract as the most toxic one was then separated, purified and identified. Separation of n-hexane extract by column chromatography with silica gel 60 as stationary phase and n-hexane-chloroform (5:5) as mobile phase yielded four fraction (F1, F2, F3, and F4). Fraction F1 with single spot on the thin layer chromatography showed the most toxic among others (LC 50 = 79.43 ppm). Identification of fraction F1 by using phytochemical test, UV-Vis, spectrophotometer and IR spectrophotometer suggested that it contained triterpenoids group of compounds. Keywords: pranajiwa rod, Euchresta horsfieldii (Lesch) Benn, toxicity, Artemia salina Leach
v
KATA PENGANTAR Puji syukur penulis panjatkan kehadapan ida Sang Hyang Widhi Wasa karena berkat rahmatNyalah penulis dapat menyelesaikan usulan penelitian yang berjudul “ISOLASI SENYAWA GOLONGAN TRITERPENOID DAN UJI TOKSISITAS
EKSTRAK
N-HEKSANA
BATANG
PRANAJIWA
(
Euchresta horsfieldii (Lesch) Benn) TERHADAP LARVA UDANG (Artemia salina Leach) YANG BERPOTENSI SEBAGAI ANTIKANKER” tepat pada waktunya, sebagai salah satu syarat untuk menyelesaikan studi sesuai dengan kaidah-kaidah ilmiah dan sasaran jenjang program pendidikan S1 pada jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengatahuan Alam, Universitas Udayana. Dengan segala hormat dan kerendahan hati, pada kesempatan ini penulis menghaturkan terimakasi kepada semua pihak yang telah membantu. Maka dari itu penulis ingin mengucapkan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada : 1.
Drs. I Gusti Agung Gede Bawa, M.Si., selaku Ketua Jurusan Kimia, Fakultas MIPA Universitas Udayana.
2.
Bapak Dr. I Wayan Gede Gunawan, S.Si., M.Si, selaku pembimbing I, yang telah memberi bimbingan dan dukungan moral pada penulis dalam menyusun skripsi ini.
3.
Ibu Oka Ratnayani, S.Si.,M.Si., Ph.D, selaku pembimbing II, yang telah memberi bimbingan dan dukungan moral pada penulis dalam menyusun skripsi ini.
4.
Seluruh staf dosen dan pegawai di Jurusan Kimia F.MIPA Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis selama penyelesaian skripsi ini.
5.
Bapak I Wayan Sujadra dan Ni Wayan Wirayanti selaku orang tua yang memberi segala doa, nasihat, dukungan, dan bantuan, baik moral maupun materiil.
6.
Seluruh teman-teman di Kimia angkatan 2010, terimakasih atas segala bantuan dan dukungan yang telah diberikan pada proses penyusunan skripsi ini.
vi
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih jauh dari sempurna. Penulis sangat mengharapkan kritik dan saran konstruktif dari semua pihak sehingga dapat menjadi evaluasi dan penyempurnaan di massa yang akan datang. Penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pembaca dan pihak yang membutuhkan.
Bukit Jimbaran, 10 Desember 2014
Penulis
vii
DAFTAR ISI Halaman HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................... ii TEAM PENGUJI SIDANG SKRIPSI ...................................................................... iii ABSTRAK ................................................................................................................ iv ABSTRACT .............................................................................................................. v KATA PENGANTAR ............................................................................................. vi DAFTAR ISI ............................................................................................................. viii DAFTAR TABEL ..................................................................................................... xi DAFTAR GAMBAR ................................................................................................ xii DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................. xiii BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang ............................................................................... 1 1.2 Rumusan Masalah .......................................................................... 2 1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................... 3 1.4 Manfaat Penelitian ......................................................................... 3 BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Pranajiwa (Euchresta hosrfieldii (Lesch) Benn) ........................... 4 2.1.1 Morfologi tumbuhan pranajiwa............................................. 4 2.1.2 Klasifikasi tumbuhan pranajiwa ............................................ 5 2.2 Triterpenoi ...................................................................................... 5 2.3 Uji Toksisitas Terhadap Larva Udang (Artemia salina L.)............ 8 2.4 Metode Analisis Tananman............................................................ 9 2.4.1 Ekstraksi ............................................................................... 9 2.4.2 Pemisahan dan pemurnian..................................................... 10 2.4.2.1 Partisi (fraksionasi) ................................................... 11 2.4.2.2 Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ............................. 11 2.4.2.3 Kromatografi kolom ................................................. 12 2.5 Metode Identifikasi ........................................................................ 13 2.5.1 Identifikasi dengan uji fitokimia ........................................... 14 2.5.2 Identifikasi senyawa dengan spektrofotometer ultravioletsinar tampak (UV-Vis) .......................................................... 14 2.5.3 Identifikasi senyawa dengan spektrofotometer inframerah (IR) ........................................................................................ 15 BAB III
METODE PENELITIAN 3.1 Bahan dan Alat Penelitian .............................................................. 18 3.1.1 Bahan penelitian ................................................................... 18 3.1.2 Bahan kimia ........................................................................ 18 3.1.3 Alat penelitian ....................................................................... 18 3.2 Tempat Penelitian........................................................................... 18 3.3 Penyiapan sampel ........................................................................... 19 3.4 Ekstraksi metabolit sekunder ........................................................ 19 3.5 Uji toksisitas terhadap larva udang (Artemia salina Leach) .......... 20 3.5.1 Penyiapan larva udang (Artemia salina Leach) ................... 20 3.5.2 Pengujian toksisitas ............................................................... 20
viii
3.5.3 Pemisahan dan Pemurnian .................................................... 21 3.5.3.1 Kromatografi lapis tipis............................................. 21 3.5.3.2 Kromatografi kolom .................................................. 22 3.5.4 Identifikasi isolat aktif........................................................... 23 3.5.5 Uji fitokimia .......................................................................... 23 3.5.6 Analisis dengan spektrofotometer UV-Vis .......................... 23 3.5.7 Analisis dengan spektrofotometer IR ................................... 23 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Identifikasi dan Penyiapan Bahan .................................................. 25 4.2 Ekstraksi Batang Pranajiwa............................................................ 25 4.3 Pemisahan dan Pemurnian ............................................................. 26 4.3.1 Fraksionasi (partisi) ............................................................... 26 4.3.2 Hasil pemisahan ekstrak n-heksana batang pranajiwa dengan kromatografi kolom .................................................. 28 4.4 4.5
Uji Pemurnian ................................................................................ 31 Identifikasi Isolat Aktif .................................................................. 32 4.5.1 Identifikasi isolat dengan uji fitokimia ................................. 32 4.5.2 Identifikasi isolat dengan Spektrofotometer IR .................... 33 4.5.3 Identifikasi isolat dengan Spektrofotometer UV-Vis............ 34 BAB V SIMPULAN DAN SARAN 5.1 Simpulan ........................................................................................ 36 5.2 Saran............................................................................................... 36 DAFTAR PUSTAKA .............................................................................................. 37 LAMPIRAN ............................................................................................................. 39
ix
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 4.1 Hasil uji toksisitas ekstrak pekat etanol terhadap larva Artemia salina Leach ........................................................................... 25 Tabel 4.2 Perolehan berat ekstrak pekat hasil fraksionasi ekstrak etanol ........... 26 Tabel 4.3 Hasil uji toksisitas ekstrak n-heksana, ekstrak kloroform, dan ekstrak air hasil fraksionasi terhadap larva Artemia salina Leach ...... 27 Tabel 4.4 Hasil pemisahan komponen ekstrak n-heksana dengan KLT ............. 29 Tabel 4.5 Hasil pemisahan komponen fraksi n-heksana dengan kromatografi .. 29 Tabel 4.6 Hasil uji toksisitas fraksi-fraksi hasil pemisahan ekstrak n-heksana terhadap larva Artemia salina Leach ................................................... 30 Tabel 4.7 Hasil pemisahan komponen fraksi satu (F1) dengan KLT ................. 32 Tabel 4.8 Hasil uji triterpenoid pada keempat klompok fraksi (F1-F4) ............. 32 Tabel 4.9 Data spektrum inframerah isolate F1 .................................................. 33
x
DAFTAR GAMBAR
Halaman Gambar 2.1 Tanaman pranajiwa ......................................................................... 5 Gambar 2.2 Struktur skualen............................................................................... 6 Gambar 2.3 Struktur α-amirin dan β-amirin ....................................................... 6 Gambar 4.1 Profil kromatogram lapis tipis ekstrak n-heksana dengan beberapa eluen .................................................................................................. 28 Gambar 4.2 Profil kromatogram uji pemurnian fraksi satu (F1) hasil pemisahan kromatografi kolom dengan menggunakan beberapa eluen ................................................................................................ 31 Gambar 4.3 Spektrum Inframerah isolat F1 ........................................................ 33 Gambar 4.4 Spektrum UV-Vis dari isolat F1...................................................... 34
xi
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1 Hasil Uji Determinasi ...................................................................... 39 Lampiran 2 Skema kerja ekstraksi dan partisi senyawa triterpenoid batang pranajiwa ............................................................................. 40 Lampiran 3 Skema kerja pemisahan, pemurnian, dan identifikasi golongan senyawa batang pranajiwa ............................................................... 41 Lampiran 4 Perhitungan Rf hasil KLT (mencari eluen terbaik) ......................... 42 Lampiran 5 Perhitungan Rf hasil KLT penggabungan ....................................... 45 Lampiran 6 Perhitungan Rf hasil KLT pemurnian ............................................. 46 Lampiran 7 Pembuatan larutan untuk uji toksisitas terhadap larva udang (Artemia salina Leach)....................................................................... 47 Lampiran 8 Perhitungan nilai LC50 dari ekstrak pekat etanol ............................. 49 Lampiran 9 Perhitungan nilai LC50 dari ekstrak pekat n-heksana, kloroform, dan air hasil fraksionasi........................................................................... 51 Lampiran 10 Perhitungan nilai LC50 dari fraksi-fraksi hasil kromatografi kolom ............................................................................................ 54
xii
