INDUKSI KANTONG DENGAN PERLAKUAN BERBAGAI KONSENTRASI MEDIA Murashige & Skoog PADA BEBERAPA UKURAN EKSPLAN KANTONG SEMAR (Nepenthes gracilis Korth.) SECARA IN VITRO
FITRIYANA INSANI
DEPARTEMEN KONSERVASI SUMBERDAYA HUTAN DAN EKOWISATA FAKULTAS KEHUTANAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2013
INDUKSI KANTONG DENGAN PERLAKUAN BERBAGAI KONSENTRASI MEDIA Murashige & Skoog PADA BEBERAPA UKURAN EKSPLAN KANTONG SEMAR (Nepenthes gracilis Korth.) SECARA IN VITRO
FITRIYANA INSANI
Skripsi Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kehutanan pada Departemen Konservasi Sumberdaya Hutan dan Ekowisata Fakultas Kehutanan Institut Pertanian Bogor
DEPARTEMEN KONSERVASI SUMBERDAYA HUTAN DAN EKOWISATA FAKULTAS KEHUTANAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2013
RINGKASAN FITRIYANA INSANI. Induksi Kantong dengan Perlakuan Berbagai Konsentrasi Media Murashige & Skoog pada Beberapa Ukuran Eksplan Kantong Semar (Nepenthes gracilis Korth.) secara In Vitro. Dibimbing oleh EDHI SANDRA dan YUPI ISNAINI.
Kantong semar merupakan salah satu jenis tumbuhan yang digolongkan menjadi tanaman hias unik yang memiliki kemampuan adaptasi terhadap lingkungan yang miskin hara dengan membentuk kantong (Mansur 2007). Salah satu Nepenthes yang memiliki kemampuan adaptasi cukup tinggi adalah Nepenthes gracilis. Nepenthes memiliki manfaat sebagai tanaman obat dan tanaman hias unik. Keunikan ini terletak pada bagian kantong yang merupakan modifikasi dari tulang daun bagian tengah daun Nepenthes. Kantong sebagai bagian yang paling banyak dimanfaatkan merupakan suatu bentuk adaptasi yang dilakukan oleh Nepenthes, dan belum diketahui secara pasti cara induksi pembentukan kantong. Oleh karena itu, penelitian untuk mengetahui hal tersebut perlu dilakukan untuk mempelajari respon pembentukan kantong pada berbagai konsentrasi media dasar Murashige & Skoog dengan beberapa ukuran eksplan N. gracilis Korth. Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari respon pembentukan kantong pada beberapa konsentrasi media dasar Murashige & Skoog (MS) dengan beberapa ukuran eksplan N. gracilis Korth. Penelitian dilaksanakan pada bulan Juni hingga Desember 2012 di Laboratorium Kultur Jaringan, Pusat Konservasi Tumbuhan, Kebun Raya Bogor. Perlakuan dalam penelitian ini adalah konsentrasi media dasar MS dan ukuran eksplan. Konsentrasi media dasar MS yang digunakan adalah 1/2MS, 1/4MS, 1/8MS, 1/16MS dan 1/32MS. Eksplan N. gracilis yang digunakan berukuran < 2 cm, 2-4 cm dan > 4 cm. Pengamatan rutin dilakukan selama 12 MSP dan pengamatan visual dilakukan hingga bulan Desember 2012. Parameter pengukuran yang diamati setiap minggu adalah tinggi tanaman, jumlah daun dan jumlah kantong. Parameter pengukuran yang diamati pada akhir pengamatan yaitu warna daun, warna kantong, persentase planlet hidup dan berkantong. Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi media dasar MS dan ukuran eksplan berpengaruh terhadap pertambahan jumlah daun, tinggi eksplan, dan jumlah kantong. Konsentrasi media 1/2MS, 1/4MS pada ukuran eksplan < 2 cm dan media 1/8MS pada ukuran eksplan 2-4 cm merupakan perlakuan yang memberikan pengaruh paling baik pada pembentukan kantong. Perlakuan tersebut menunjukkan rata-rata pembentukan kantong terbanyak yakni 3,00-3,50 kantong.
Kata kunci : Kantong, Nepenthes gracilis, konsentrasi media MS, ukuran eksplan, In Vitro
SUMMARY FITRIYANA INSANI. Pitcher Induction with Various Concentration Treatments of Murashige & Skoog Medium on Multiple Size of Kantong Semar (Nepenthes gracilis Korth.) Explants using In Vitro Technique. Under Supervision of EDHI SANDRA and YUPI ISNAINI.
Nepenthes is a plant species which is classified as a unique ornamental plant that has the capability of adaptation to environments with poor nutrients by forming pitcher (Mansur 2007). Nepenthes gracilis is an example of Nepenthes species with high capability of adaptation. Nepenthes have benefits as medicinal and unique ornamental plant. This uniqueness lies in the pitcher which is a modification of the center part of the leaf. Pitcher as the most widely used part is a form of adaptation by Nepenthes, and it is not yet known for certain how the induction of the formation of a pitcher. Therefore, the research to know the response of pitcher formation in various concentrations of Murashige & Skoog medium on multiple size of N. gracilis Korth explants is needed. The aim of this research is to study the response of pitcher formation on various concentration of Murashige & Skoog medium on multiple size of N. gracilis Korth explants. This research was conducted on June until December 2012 at the Tissue Culture Laboratory, Center for Plant Conservation, Bogor Botanical Garden. The treatment in this study is the concentration of MS basic medium and explant size. The concentration of MS basic medium which is used are 1/2MS, 1/4MS, 1/8MS, 1/16MS and 1/32MS. The explant size of N. gracilis are < 2 cm, 2-4 cm and > 4 cm. Routine observations was done for 12 MSP and visual observations was done until December 2012. Parameter measurement which is observed every week are plant height, number of leaves and number of pitcher. Parameter measurement which is observed at the end of observation are the color of the leaf, the color of the pitcher, and the percentage of living and pitched planlet. The result shows that the concentration of MS basic medium and explant size influenced the number of leaves, explant height, and the number of pitcher. The concentration of 1/2MS and 1/4MS with the explant size < 2 cm, and 1/8MS with explant size 2-4 cm are treatments that gave the best influence on the formation of pitchers. Those treatments shows the average of the highest pitcher formation which is 3,00 to 3,50 pitchers.
Keywords: Pitcher, Nepenthes gracilis, MS medium concentration, size of explants, In Vitro
PERNYATAAN
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi berjudul Induksi Kantong dengan Perlakuan Berbagai Konsentrasi Media Murashige & Skoog pada Beberapa Ukuran Eksplan Kantong Semar (Nepenthes gracilis Korth.) secara In Vitro adalah benar-benar hasil karya saya sendiri dengan bimbingan dosen pembimbing dan belum pernah digunakan sebagai karya ilmiah pada perguruan tinggi atau lembaga manapun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir skripsi ini.
Bogor, Februari 2013
Fitriyana Insani E34080014
Judul Skripsi
Nama NIM
: Induksi Kantong dengan Perlakuan Berbagai Konsentrasi Media Murashige & Skoog pada Beberapa Ukuran Eksplan Kantong Semar (Nepenthes gracilis Korth.) secara In Vitro : Fitriyana Insani : E34080014
Menyetujui,
Pembimbing I,
Pembimbing II,
Ir. Edhi Sandra, M.Si NIP. 196610 19 199303 1 002
Yupi Isnaini, S.Si, M.Si NIP. 197112 27 200604 2 002
Mengetahui, Ketua Departemen Konsevasi Sumberdaya Hutan dan Ekowisata Fakultas Kehutanan Institut Pertanian Bogor
Prof. Dr. Ir. Sambas Basuni, MS. NIP. 195809 15 198403 1 003
Tanggal Lulus:
KATA PENGANTAR
Penulis memanjatkan puji dan syukur ke hadirat Allah SWT atas segala curahan rahmat dan kasih sayang-Nya sehingga karya ilmiah ini berhasil diselesaikan. Skripsi dengan judul Induksi Kantong dengan Perlakuan Berbagai Konsentrasi Media Murashige & Skoog pada Beberapa Ukuran Eksplan Kantong Semar (Nepenthes gracilis Korth.) secara In Vitro dilaksanakan pada bulan Juni hingga Desember. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Bapak Ir. Edhi Sandra, M.Si dan Ibu Yupi Isnaini, S.Si, M.Si selaku pembimbing. Selain itu, terima kasih juga penulis sampaikan kepada seluruh bapak dan ibu yang terdapat di Laboratorium Kultur Jaringan Kebun Raya Bogor atas bantuannya selama penelitian berlangsung. Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.
Bogor, Februari 2013
Penulis
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Palembang pada tanggal 08 Juni 1990 sebagai anak kedua dari tiga bersaudara pasangan Abdullah Sani Asnawi dan Yuli Indrayati. Riwayat pendidikan penulis yaitu pada tahun 2002 lulus dari SD Muhamadiyah 1 Pangkal pinang dan melanjutkan pendidikan di SMP Negeri 1 Pangkal Pinang. Selanjutnya setelah lulus pada tahun 2005, penulis melanjutkan pendidikan di SMA Negeri 1 Pemali dan lulus pada tahun 2008. Pada tahun yang sama penulis lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB dengan program studi Konservasi Sumberdaya Hutan dan Ekowisata, Fakultas Kehutanan. Selama di IPB, penulis aktif di sejumlah organisasi kemahasiswaan. Organisasi tersebut antara lain wakil bendahara Himpunan Mahasiswa Konservasi Sumberdaya Hutan dan Ekowisata (HIMAKOVA) tahun 2009-2010, anggota Biro Kekeluargaan HIMAKOVA (2010-2011), anggota Kelompok Pemerhati Flora (KPF) Raflesia HIMAKOVA, anggota Divisi Kesekretariatan International Forestry Students’ Association (IFSA LC IPB) (2009-2010), Kepala Divisi Kesekretariatan IFSA LC IPB (2010-2011), panitia Bina Corp Rimbawan (BCR) Fakultas Kehutanan tahun 2010, panitia Gebyar HIMAKOVA tahun 2009, dan panitia International Forestry Students’ Symposium (IFSS) IFSA tahun 2009 di Indonesia. Selain itu, penulis mengikuti Praktik Pengenalan Ekosistem Hutan (PPEH) di Jalur Sancang Timur-Papandayan, Praktik Pengelolaan Hutan (PPH) di Hutan Pendidikan Gunung Walat dan Praktik Kerja Lapang (PKL) di Taman Nasional Kelimutu, Ende, Flores, Nusa Tenggara Timur. Untuk memperolah gelar Sarjana Kehutanan IPB, penulis menyelesaikan skripsi dengan judul Induksi Kantong dengan Perlakuan Berbagai Konsentrasi Media Murashige & Skoog pada Beberapa Ukuran Eksplan Kantong Semar (Nepenthes gracilis Korth.) secara In Vitro dibawah bimbingan Ir. Edhi Sandra, M.Si dan Yupi Isnaini, S.Si, M.Si.
UCAPAN TERIMA KASIH
Penulisan skripsi dengan judul Induksi Kantong dengan Perlakuan Berbagai Konsentrasi Media Murashige & Skoog pada Beberapa Ukuran Eksplan Kantong Semar (Nepenthes gracilis Korth.) secara In Vitro ini akhirnya dapat penulis selesaikan dengan baik. Tersusunnya skripsi ini adalah atas bantuan dan dorongan dari berbagai pihak, oleh sebab itu penulis mengucapkan terima kasih kepada: 1. Keluarga tercinta Abdullah Sani Asnawi, Yuli Indrayati, Zahir Insani dan Nia Darniati, Zahrotunissa Insani dan Caesar Fildza Ramadhan yang senantiasa mendukung penulis dengan doa, motivasi dan dukungan. 2. Bapak Ir. Edhi Sandra, M.Si selaku dosen pembimbing I dan ibu Yupi Isnaini, S.Si, M.Si selaku dosen pembimbing II atas bimbingan selama ini. 3. Ibu Eva Rachmawati S.Hut, M.Si selaku moderator pada seminar, bapak Dr. Ir. Tutut Sunarminto, M.Si selaku ketua sidang dan ibu Dr. Ir. Arum Sekar Wulandari, MS selaku dosen penguji atas masukan dan sarannya. 4. Seluruh staf Laboratorium Kultur Jaringan Pusat Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Bogor. 5. Seluruh staf Laboratorium Konservasi Tumbuhan Departemen Konservasi Sumberdaya Hutan dan Ekowisata Fakultas Kehutanan Institut Pertanian Bogor. 6. Teman seperjuangan Tantri Andari atas kebersamaanya selama penelitian. 7. Sahabat-sahabatku Ajeng Miranti Putri, Soraya Nurul Ichwani, Ririn Rihatni, Siti Munawaroh, Nur Sofia Wardani Yahya, Dina Oktavia, Rina Lumbantobing, Rissa Rahmadwiati, Edelweis 45 dan Fahutan 45. 8. Bayu Pradana yang telah mendampingi dan memotivasi selama penelitian serta penulisan skripsi. 9. Serta banyak pihak yang telah membantu penulis dan tidak dapat penulis sebutkan satu-persatu. Semoga tersusunnya skripsi ini dapat bermanfaat bagi penulis dan pihak lain yang memerlukannya. Bogor, Februari 2013 Penulis
DAFTAR ISI
Halaman KATA PENGANTAR .................................................................................
i
DAFTAR ISI ................................................................................................
iv
DAFTAR TABEL .......................................................................................
vi
DAFTAR GAMBAR ...................................................................................
vii
DAFTAR LAMPIRAN ...............................................................................
viii
BAB I
BAB II
BAB III
BAB IV
PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang ......................................................................
1
1.2 Tujuan Penelitian ..................................................................
2
1.3 Hipotesis Penelitian...............................................................
2
TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Botani dan Morfologi ............................................................
4
2.2 Penyebaran dan Habitat ........................................................
6
2.3 Perbanyakan Nepenthes .......................................................
6
2.4 Kultur Jaringan pada Nepenthes ...........................................
7
METODE PENELITIAN 3.1 Lokasi dan Waktu Penelitian ................................................
10
3.2 Alat dan Bahan Penelitian .....................................................
10
3.3 Pelaksanaan Penelitian ..........................................................
11
3.3.1 Sterilisasi alat ...............................................................
11
3.3.2 Pembuatan media tanam ..............................................
11
3.3.3 Penanaman/subkultur ...................................................
12
3.4 Rancangan Percobaan ...........................................................
14
3.5 Analisis Data .........................................................................
14
HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Pertambahan Jumlah Daun ....................................................
17
4.2 Pertambahan Tinggi ..............................................................
19
4.3 Jumlah Kantong yang Terbentuk ..........................................
20
4.3 Persentase Planlet Hidup dan Berkantong ............................
24
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan ...........................................................................
26
5.2 Saran ......................................................................................
26
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................
27
DAFTAR TABEL No. 1 2 3 4 5 6 7
8
Halaman Morfologi warna daun dan kantong dengan bagan warna daun (BWD).......................................................................................... Kombinasi perlakuan konsentrasi media MS dan ukuran eksplan..........................................................................................
13 14
Pengaruh perbedaan konsentrasi media terhadap rata-rata pertambahan jumlah daun N. gracilis...........................................
17
Rata-rata pertambahan jumlah daun (helai/minggu) pada berbagai perlakuan........................................................................
17
Persentase warna daun pada planlet N. gracilis pada MSP 12..................................................................................................
19
Pengaruh ukuran eksplan N. gracilis terhadap rata-rata jumlah kantong yang terbentuk................................................................
21
Rata-rata jumlah kantong yang terbentuk pada berbagai perlakuan......................................................................................
21
Persentase planlet hidup dan berkantong N. gracilis pada setiap kombinasi perlakuan.....................................................................
25
DAFTAR GAMBAR No.
Halaman
1
Batang (A) dan daun N. gracilis (B).............................................
4
2
Bunga jantan N.maxima (A) dan bunga betina N. spathulata (B) (Rice 2006)..............................................................................
5
3
Kantong N. gracilis yang berwarna merah maron dan hijau........
6
4
Buah (A) dan biji Nepenthes (B)..................................................
6
5
Bahan tanam N.gracilis (A) dan komponen media dasar MS yang digunakan (B)......................................................................
11
6
Bagan warna daun (BWD)...........................................................
13
7
Kontaminasi pada botol perlakuan...............................................
17
8
Daun yang tumbuh setelah ditanam pada media perlakuan.........
19
9
Pertambahan tinggi planlet per perlakuan....................................
20
10
Ukuran kantong masing-masing konsentrasi media pada 12 MSP..............................................................................................
23
Kantong dengan ukuran terbesar (A) dan kantong yang telah layu (B).........................................................................................
24
11
DAFTAR LAMPIRAN No.
Halaman
1
Komposisi media Murashige & Skoog........................................
31
2
Sidik ragam pertambahan jumlah daun N. gracilis......................
32
3
Sidik ragam pertambahan tinggi eksplan N. gracilis....................
32
4
Sidik ragam jumlah kantong N. gracilis.......................................
32
5
Nilai uji korelasi bivariat antara pertambahan jumlah daun dengan jumlah kantong.................................................................
33
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Kantong Semar, Pitcher plant atau Nepenthes yang memiliki banyak sebutan di beberapa daerah seperti Periuk Monyet (Riau), Kantong Beruk (Jambi), Ketakung (Bangka), dan Sorok Raja Mantri (Jawa Barat) merupakan salah satu jenis tumbuhan yang digolongkan menjadi tanaman hias unik (Mansur 2007). Kantong semar yang kebanyakan berasal dari Indonesia ini memiliki bentuk, ukuran, dan corak warna kantong yang unik. Nepenthes gracilis merupakan salah satu jenis dengan keunikan berupa bentuk kantong yang langsing (bentuk pinggang) dengan kemampuan adaptasi lingkungan cukup tinggi (Mansur 2007). Kantong semar umumnya hidup di tempat-tempat yang miskin unsur hara dan memiliki kelembapan yang cukup tinggi. N. gracilis dapat hidup di hutan dataran rendah, hutan rawa gambut, dan hutan kerangas pada ketinggian 0-1100 mdpl (Hernawati & Akhriadi 2006; Mansur 2007). Bentuk adaptasi yang dilakukan oleh Nepenthes adalah dengan pembentukan kantong. Kantong yang keluar dari bagian ujung daun menjadi daya tarik tersendiri dalam pemanfaatan tumbuhan tersebut. Hal ini dapat dilihat dari perhatian masyarakat terhadap jenis tersebut lebih besar dibandingkan dengan jenis lain yang dipasarkan. Dari keseluruhan jenis yang dipasarkan secara terbatas di Garden Shop dan Griya Anggrek Kebun Raya Bogor, 25% perhatian masyarakat tertuju pada Nepenthes hasil perbanyakan yang telah dikemas (Isnaini 2011). Selain sebagai tanaman hias, Nepenthes juga dapat dijadikan obat dari penyakit tertentu. Cairan dalam kantong muda yang masih tertutup dapat mengobati batuk, kulit yang terbakar dan sebagai obat mata (Mansur 2007). Air rebusan akar N.gracilis di wilayah Semenanjung Malaysia digunakan untuk mengobati disentri dan sakit perut (Astuti et al. 2003). Batang tumbuhan ini juga biasa digunakan sebagai bahan pengikat dengan kekuatan yang hampir sama dengan rotan (Heyne 1987). Selain manfaat tersebut, sebagai tanaman yang biasa tumbuh merambat di antara semak belukar dan pohon atau dapat juga menyemak di atas permukaan
2
tanah di dalam hutan, Nepenthes dapat berfungsi menjaga kelembaban tanah, mencegah erosi pada lantai hutan, dan juga dapat menjadi naungan bagi anakan tanaman lain yang baru tumbuh. Potensi sebagai tanaman hias dan manfaat lain yang dimiliki oleh Nepenthes menjadikannya tanaman yang cukup banyak dicari. Akibatnya, keberadaannya di alam menjadi terancam karena banyaknya ancaman berupa kebakaran hutan dan lahan, konversi lahan dan pelebaran jalan (Hernawati & Akhriadi 2006). Oleh karena itu, seluruh spesies kantong semar memiliki status perlindungan Appendiks II CITES dan pada PP No. 7 tahun 1999 tentang pengawetan jenis tumbuhan dan satwa termasuk ke dalam jenis tumbuhan yang dilindungi (CITES 2012; DEPHUT 1999). Perbanyakan Nepenthes dapat dilakukan dengan biji, stek batang dan pemisahan anakan (Mansur 2007; Handoyo & Sitanggang 2006). Namun, ketiga cara tersebut memiliki kelemahan pada sedikitnya jumlah anakan yang dihasilkan. Perbanyakan lain yang dapat dijadikan alternatif adalah kultur jaringan. Kultur jaringan (in vitro) memiliki kelebihan yakni dengan sejumlah kecil bahan material awal dapat dihasilkan banyak klon dengan sifat genetik identik antara satu dan lainnya (Zulkarnain 2009). Kantong pada Nepenthes merupakan daya tarik dalam pemanfaatannya, baik sebagai tanaman hias maupun tanaman obat-obatan. Namun, cara induksi pembentukan kantong belum diketahui secara pasti. Penelitian terkait kantong pun lebih kepada cairan yang ada di dalam kantong (Yogiara 2004). Oleh karena itu, diperlukan penelitian untuk mengetahui cara menginduksi kantong pada Nepenthes dengan membuat kondisi seperti habitat aslinya agar kantong terbentuk. 1.2 Tujuan Penelitian Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari respon pembentukan kantong pada berbagai modifikasi konsentrasi media dasar Murashige & Skoog dengan beberapa ukuran eksplan N. gracilis. 1.3 Hipotesis Penelitian Hipotesis dari penelitian ini adalah
3
1. Terdapat pengaruh modifikasi konsentrasi media dasar MS yang diberikan terhadap pembentukan kantong pada kultur N. gracilis. 2. Terdapat pengaruh ukuran eksplan N. gracilis terhadap pembentukan kantong pada kultur N. gracilis. 3. Terdapat interaksi antara modifikasi konsentrasi media dasar MS dan ukuran eksplan terhadap pembentukan kantong pada kultur N.gracilis.
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Botani dan Morfologi Kantong semar merupakan tumbuhan tahunan memanjat yang memiliki kantong berupa periuk di ujung daun-daun sebagai bentuk adaptasi terhadap lingkungannya. Tumbuhan dikotil ini dapat diklasifikasikan sebagai berikut (Suhono et al. 2010): Kingdom
: Plantae
Divisi
: Magnoliophyta
Subdivisi
: Magnoliophyta
Class
: Choripetaleae
Ordo
: Caryophyllales
Famili
: Nepenthaceae
Genus
: Nepenthes
Spesies
: N. gracilis Korth.
Jenis ini merupakan tumbuhan memanjat dengan tinggi 2-5 m. Batang berbentuk segitiga, berdiameter 2-4 mm, dengan sudut daun berbentuk bulat, dengan sayap selebar 1-3,5 mm, dan panjang ruas 2,5-9 cm. Daun tidak bertangkai, posisi duduk, dengan panjang 12-19 cm (Gambar 1). Lebar daun 1,53,7 cm dengan bentuk lanset, panjang sulur 15 cm, ujung daun runcing dan sayap batang agak ramping pada pangkal daun (Cheek & Jebb 2001).
(A) (B) Gambar 1 Batang (A) dan daun N. gracilis (B).
5
Nepenthes termasuk jenis tanaman berumah dua, yaitu tanaman dengan bunga jantan dan bunga betina yang terpisah (Suhono et al. 2010) (Gambar 2). Bunga pada Nepenthes memiliki 4 sepal tetapi tidak memiliki petal. Bunga jantan memiliki sebuah lajur dengan sebuah ulir kepala putik pada bagian ujung, sedangkan bunga betina memiliki sebuah indung telur elipsoid yang terbagi ke dalam empat bilik (Clarke 2001).
Gambar 2 Bunga jantan N.maxima (A) dan bunga betina N. spathulata (B) (Rice 2006). Kantong N.gracilis berwarna hijau, merah maron, atau terkadang coklat kemerah-merahan (Mansur 2007). Kantong bawah berbentuk oval, bagian atas silindris, lebar pada bagian tengah atas dengan ukuran 1,4-2,4 cm, lebar pada bagian tengah bawah dengan ukuran 1,7-3,7 cm, terdapat dua sayap tepi dengan lebar 3-5 mm, panjang struktur tepi 1-2,5 mm, bagian tengah 0,5-2 mm, mulut kantong berbentuk oval, dengan bibir berbentuk silindris, lebar 0,5 mm (Gambar 3). Kantong atas N.gracilis sama dengan kantong bawah namun setengah silindris dan mengecil pada bagian pinggang, dengan panjang 7-14,5 cm dan lebar 1,8-4 cm. Lebar pada bagian basal hampir sampai 1,5-2,9 cm pada bagian pinggang (Cheek & Jebb 2001).
6
Gambar 3 Kantong N. gracilis yang berwarna merah maron dan hijau. 2.2 Penyebaran dan Habitat N. gracilis Korth merupakan salah satu jenis yang tersebar di Thailand, Semenanjung Malaysia, Singapura, Sulawesi, Kalimantan dan Sumatera. Habitat yang dimiliki oleh N. gracilis adalah di hutan dataran rendah, hutan rawa gambut, hutan kerangas, di bagian tepi gambut atau daerah yang sudah terganggu seperti tepi jalan, dan tanah yang miskin hara (Cheek & Jebb 2001). 2.3 Perbanyakan Nepenthes Nepenthes dapat diperbanyak dengan cara pemisahan anakan, stek batang dan juga dengan cara penyemaian biji (Handoyo & Sitanggang 2006). Buah Nepenthes terdiri dari empat bilik dimana terdapat retakan sepanjang garis tepi saat buah masak untuk mengeluarkan biji yang berbentuk seperti kawat (Clarke 2001). Bijinya berukuran kecil dan tipis mirip benang (filamen) (Gambar 4).
(B) (A) Gambar 4 Buah (A) dan biji Nepenthes (B). Selain perbanyakan secara konvensional yang telah disebutkan di atas, Nepenthes juga dapat diperbanyak dengan kultur jaringan.
7
2.4 Kultur Jaringan pada Nepenthes Saat ini, pembudidayaan tumbuhan tidak hanya dilakukan secara konvensional saja namun juga telah menggunakan cara in vitro atau kultur jaringan. Kultur jaringan merupakan suatu metode untuk mengisolasi bagian dari tumbuhan seperti protoplasma, sel, sekelompok sel, jaringan dan organ, serta menumbuhkannya dalam kondisi aseptik, sehingga bagian tersebut dapat beregenerasi menjadi tanaman yang lengkap kembali (Gunawan 1987). Teori yang mendasari kultur jaringan adalah sifat totipotensi yang dimiliki oleh sel tanaman. Totipotensi sel adalah kemampuan sel organ tanaman untuk tumbuh menjadi tanaman yang sempurna dan utuh saat ditempatkan pada lingkungan yang sesuai untuk tumbuh. Kultur jaringan memiliki beberapa keuntungan dan kelebihan jika dibandingkan dengan teknik perbanyakan secara konvensional. Keuntungan tersebut antara lain banyak jumlah klon yang dapat dihasilkan dari sejumlah kecil material awal yang dimiliki, faktor-faktor lingkungan dapat dimanipulasi untuk mengatasi jenis tanaman yang resisten terhadap perbanyakan konvensional, teknik ini tidak bergantung pada musim dan memungkinkan untuk pertukaran bahan tanaman di tingkat internasional. Kelebihan-kelebihan yang dimiliki tersebut tentunya memberikan manfaat tersendiri selain manfaat utama dari aplikasi teknik kultur jaringan tanaman yakni perbanyakan massal dari tanaman yang memiliki sifat genetik identik antara satu dan lainnya (Zulkarnain 2009). Kultur
jaringan
memiliki
banyak
aspek
yang
mempengaruhi
keberhasilannya dan perkembangan tumbuhan yang dikulturkan. Aspek-aspek tersebut antara lain cara budidayanya, eksplan yang digunakan, bahan sterilisasi, kandungan unsur kimia dalam media, hormon yang digunakan, substansi organik yang ditambahkan dan terang gelapnya saat inkubasi. Komposisi media bagi pertumbuhan eksplan merupakan aspek yang paling banyak diteliti dan dicoba (Hendaryono & Wijayani 1994). Perbanyakan Nepenthes dengan kultur jaringan belum banyak dilakukan. Publikasi mengenai penelitian terkait kultur jaringan Nepenthes juga belum banyak ditemukan. Penelitian yang telah ada diantaranya penelitian pada jenis N. khasiana (Rathore et al. 1991; Latha & Seeni 1994; Nongrum et al. 2009), N.
8
mirabilis (Khompat et al. 2007), N. rafflesiana (Rahayu & Isnaini 2009; Kunita 2011),
N. macfarlanei (Chua & Henshaw 1999) dan N. gracilis (Isnaini &
Handini 2007; Fong 2008). Penelitian jenis N. khasiana yang dilakukan oleh Rathore et al. (1991) sebanyak 80% tunas dalam kultur in vitro memiliki akar pada media MS dengan penambahan 2 mg/l NAA dan 0,1 mg/l kinetin. Penelitian yang dilakukan Latha & Seeni (1994) menghasilkan kantong pada ujung daun jenis tersebut dari tunas yang ditanam pada media WPM (Woody Plant Medium) ditambah 2.7 μM NAA. Menurut Nongrum et al. (2009), kantong N. khasiana ditemukan baru berkembang pada 150 hari setelah penanaman dalam botol kultur yang disemai pada media 1/4MS tanpa penambahan zat pengatur tumbuh. Kantong yang sehat dan berkembang dengan baik terlihat pada hari ke-120 kultur pada media 1/4MS ditambah 2.68 μM NAA. Bagian yang diteliti pada jenis N. mirabilis adalah biji yang telah dewasa dan tunasnya. Menurut Khompat et al. (2007), biji N. mirabilis yang dikulturkan pada media padat MS dengan 3 mg/l BA di bawah lampu inkubasi menghasilkan kecambah terbanyak yakni 26% dengan perkembangan semaian yang baik. Multiplikasi tunas dapat dikembangbiakan pada semua konsentrasi BA (1, 3 dan 5 mg/l) setelah 6 minggu pemindahan dan semakin tinggi konsentrasi BA maka tunas yang dihasilkan semakin banyak. Media dasar 1/2MS dengan penambahan 5 μM BAP digunakan untuk multiplikasi tunas N. macfarlanei dari semaian kotiledonnya. Semaian dari kotiledon menghasilkan tunas lebih banyak dibandingkan dengan menggunakan tunas apikal dan bagian nodal (Chua & Henshaw 1999). Chua dan Henshaw (1999) juga menyebutkan bahwa media 1/2MS ditambah dengan berbagai konsentrasi NAA baik digunakan untuk pertumbuhan akar pada pucuk. Pada jenis N. rafflesiana telah dilakukan penelitian mengenai induksi kantong dengan perlakuan perbedaan konsentrasi media dengan ukuran wadah (Rahayu & Isnaini 2009) dan modifikasi konsentrasi media dengan pH yang digunakan (Kunita 2011). Rahayu dan Isnaini (2009) menyebutkan bahwa pada media dasar 1/2MS menghasilkan jumlah daun dan kantong yang paling banyak dibandingkan dengan konsentrasi media dasar lainnya. Namun, pada media
9
dengan konsentrasi 1/4MS dan 1/8MS kantong yang terbentuk memiliki ukuran yang lebih besar. Perbedaan ukuran wadah yang digunakan dalam penelitian tersebut tidak terlalu memberikan dampak yang signifikan terhadap jumlah daun dan kantong. Penelitian Kunita (2011) juga menunjukan hasil yang sama yakni pada media 1/2MS dan 1/8MS dengan perlakuan pH pada media yang digunakan. Penelitian jenis N.gracilis yang telah dilakukan yakni perkecambahan biji, perbesarannya dan induksi poliploid. Hasil penelitian Isnaini dan Handini (2007) menunjukan bahwa media terbaik untuk perkecambahan biji dan pembesaran N.gracilis adalah media dasar 1/4MS. Penelitian induksi poliploid yang dilakukan oleh Fong (2008) menunjukkan dampak awal yang mungkin terjadi pada N.gracilis adalah pertumbuhan tunas yang terhambat dan penyimpangan morfologi. Ukuran panjang dan lebar stomata yang terbentuk pada tetraploid lebih besar dibandingkan dengan diploidnya. Namun, jumlah stomata pada tetraploid lebih sedikit dibandingkan dengan diploidnya. Fong (2008) juga menyebutkan bahwa kromosom N.gracilis yang terbentuk memiliki ukuran yang kecil namun jumlahnya banyak (mendekati 80).
BAB III METODE PENELITIAN
3.1 Lokasi dan Waktu Penelitian Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan, Pusat Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Bogor. Penelitian dilakukan dari bulan Juni-Desember 2012. Pengamatan rutin dilakukan selama 4 (empat) bulan yakni bulan JuniSeptember 2012. Namun, pengamatan visual tetap dilakukan hingga bulan Desember 2012. 3.2 Alat dan Bahan Penelitian Alat yang digunakan untuk pembuatan media antara lain gelas piala, gelas ukur biasa, pipet volumetrik, neraca analitik, pH meter, panci, pengaduk, autoclave, karet gelang, timbangan analitik, magnetic stirer, labu erlenmeyer, botol kultur, dan alumunium foil. Proses penanaman menggunakan alat-alat antara lain scalpel, tisu, cawan petri, pisau, pinset, lampu Bunsen, laminar air flow cabinet,dan wrap plastic. Alat untuk pengamatan diantaranya alat tulis, tally sheet, dan kamera. Bahan tanam (eksplan) yang digunakan adalah kultur kantong semar (Nepenthes gracilis Korth) koleksi Laboratorium Kultur Jaringan, Pusat Konservasi Tumbuhan, Kebun Raya Bogor, yang berasal dari pulau Batam dan telah disubkultur secara in vitro dengan ukuran < 2 cm, 2-4 cm dan > 4 cm pada media dasar 1/2MS (Gambar 5a). Media dasar yang digunakan adalah media Murashige & Skoog dengan berbagai konsentrasi yakni 1/2MS, 1/4MS, 1/8MS, 1/16MS dan 1/32MS. 1/2MS berarti bahwa seluruh komponen unsur yang terkandung dalam media dasar seperti unsur makro, mikro, vitamin (Gambar 5b) dan gula berjumlah setengah dari konsentrasi keseluruhan pada media dasar MS penuh.
11
(B) (A) Gambar 5 Bahan tanam N.gracilis (A) dan komponen media dasar MS yang digunakan (B). 3.3 Pelaksanaan Penelitian 3.3.1 Sterilisasi alat Peralatan berupa botol kultur, cawan petri, scalpel, pinset dicuci dengan menggunakan detergen untuk menghilangkan kotoran yang masih melekat pada peralatan tersebut. Setelah dicuci dan dibersihkan kemudian botol dan peralatan dibilas dengan air. Peralatan tersebut kemudian ditiriskan untuk menghilangkan sisa air dengan posisi terbalik (mulut botol berada di bawah). Khusus unttuk peralatan berbahan besi, setelah pembilasan sebaiknya langsung dikeringkan dengan menggunakan tisu untuk menghindari timbulnya karat. Sterilisasi selanjutnya menggunakan autoclave. Peralatan dimasukkan ke dalam autoclave dengan penataan yang sesuai. Botol kultur disusun dengan rapi dan rapat dalam kondisi terbalik. Sterilisasi peralatan dilakukan selama satu jam pada suhu 121ºC dan tekanan 1 atm. Kemudian peralatan tersebut disimpan di dalam oven. 3.3.2 Pembuatan media Media dasar Murashige & Skoog (MS) dibuat menjadi beberapa modifikasi konsentrasi tanpa penambahan zat pengatur tumbuh (ZPT) (Lampiran 1). Pembuatan media modifikasi konsentrasi sebanyak 1 liter pada masing-masing modifikasi dilakukan dengan cara pengenceran bertingkat. Pertama-tama dibuat media MS penuh dengan mencampurkan seluruh komponen unsur makro, mikro, vitamin dan gula misalnya didapatkan volume larutan sebanyak 500 ml. Volume tersebut kemudian dibagi menjadi dua bagian masing-masing 250 ml yang kemudian salah satunya ditambahkan aquades hingga mencapai volume total 1
12
liter. Media tersebut merupakan media dengan konsentrasi 1/2 MS. Volume media sebanyak 250 ml yang masih tersisa dibagi lagi menjadi dua bagian menjadi 125 ml yang kemudian salah satunya ditambah aquades hingga volume total 1 liter. Media tersebut merupakan media dengan konsentrasi 1/4 MS. Volume yang masih tersisa diencerkan kembali hingga didapat keseluruhan modifikasi konsentrasi. Modifikasi konsentrasi media yang telah didapat kemudian diukur pH dengan menggunakan pH meter. Tingkat keasaman yang digunakan adalah 5,7. Jika pH pada pengukuran awal lebih tinggi maka larutan ditetesi dengan HCL 0,1 N, sedangkan apabila pH awal lebih rendah maka larutan ditetesi dengan KOH 0,1 N hingga didapat pH yang digunakan pada penelitian. Sebelum
pemanasan,
masing-masing
modifikasi
konsentrasi
media
ditambahkan terlebih dahulu agar gelrite sebanyak 2,01 mg/l. Setelah mendidih, larutan dituang ke dalam botol kecil masing-masing sebanyak 20 ml kemudian ditutup dengan alumunium foil berukuran 10 cm × 10 cm dan diikat dengan karet gelang. Langkah sterilisasi media dasar dan perlakuan hampir sama dengan sterilisasi alat. Sterilisasi dilakukan dengan autoclave pada suhu 121ºC dan tekanan 1 atm selama 15 menit. Media yang telah steril kemudian disimpan di dalam ruang media dan dibiarkan selama 3 hari untuk memastikan tidak terjadi kontaminasi pada media tanam. 3.3.3 Penanaman/subkultur Bahan dan alat penanaman disiapkan dalam laminar air flow cabinet. Bahan tanam (eksplan) berupa planlet N.gracilis dikeluarkan dari botol kultur dan dipindahkan ke cawan petri untuk dibersihkan akar tanaman dengan menggunakan gunting kultur. Eksplan tersebut kemudian ditanam pada media perlakuan. Sebelum botol ditutup, bagian bibir botol dan tutup aluminium foil terlebih dahulu dibakar dengan lampu bunsen untuk mencegah kontaminasi. Proses penanaman dilakukan dengan cepat dan hati-hati karena semakin lama botol terbuka, semakin besar pula peluang kontaminan masuk ke dalam botol. Selain itu, Nepenthes mudah layu sehingga semakin singkat proses penanaman semakin baik. Botol-botol yang telah berisi tanaman diletakkan di ruang kultur.
13
3.3.4 Pengamatan Pengamatan dilakukan setiap minggu selama dua belas minggu setelah penanaman (MSP) untuk parameter tinggi tanaman, jumlah daun, dan jumlah kantong. Parameter lain berupa warna daun dan kantong, persentase planlet hidup dan persentase planlet berkantong dilakukan pada minggu terakhir pengamatan. a. Tinggi tanaman (cm): diukur dari pangkal sampai titik tumbuh b. Jumlah daun (helai): dihitung jumlah daun yang terbentuk pada setiap eksplan c. Jumlah kantong (buah): dihitung jumlah kantong yang terbentuk pada setiap eksplan d. Warna daun dan kantong diamati secara kualitatif seperti pada Tabel 1. Tabel 1 Morfologi warna daun dan kantong dengan bagan warna daun (BWD) Warna Daun
Warna Kantong
Morfologi Hijau tua Hijau Hijau muda Hijau Kekuningan Hijau tua Hijau muda Merah maron Coklat kemerahan
BWD 5 4 3 2 5 3
Pengukuran warna daun dilakukan dengan menggunakan bagan warna daun (BWD) seperti pada Gambar 6.
Sumber: Anonim (2012)
Gambar 6 Bagan warna daun (BWD). e. Persentase planlet hidup (%): dihitung dari total eksplan yang hidup per total keseluruhan eksplan setiap kombinasi perlakuan kemudian dikali 100%
14
f. Persentase planlet berkantong (%): dihitung dari total eksplan yang berkantong per total keseluruhan eksplan setiap kombinasi perlakuan kemudian dikali 100%. 3.4 Rancangan Percobaan Rancangan percobaan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Rancangan Faktorial dengan Acak Lengkap (RAL-F). Jumlah faktor dalam penelitian ini terdiri dari konsentrasi media dasar dan ukuran planlet. Kombinasi perlakuan digunakan sebanyak 15 kombinasi dengan 3 ulangan sehingga didapat 45 unit percobaan. Satu unit percobaan terdapat 4 botol yang masing-masing botol ditanam 1 planlet. Jumlah total botol kombinasi yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebanyak 180 botol. Kombinasi perlakuan dapat dilihat pada Tabel 2. Tabel 2 Kombinasi perlakuan konsentrasi media MS dan ukuran eksplan Media MS
< 2 cm (1) A1 B1 C1 D1 E1
1/2MS (A) 1/4MS (B) 1/8MS (C) 1/16MS (D) 1/32MS (E)
Ukuran eksplan 2-4 cm (2) A2 B2 C2 D2 E2
˃ 4 cm (3) A3 B3 C3 D3 E3
3.5 Analisis Data Adapun model umum faktorial tersebut adalah sebagai berikut (Mattjik & Sumertawijaya 2002) : Yijk = µ + Ai + Pj + (AP)ij + Ɛijk Dengan : i = 1, 2, 3, 4, 5 j = 1, 2, 3 k = 1, 2, 3 Keterangan : Yijk
: Pengaruh faktor perbedaan modifikasi konsentrasi media dasar MS ke-i dan ukuran eksplan ke-j pada ulangan ke-k
µ
: Rataan nilai tengah populasi
Ai
: Pengaruh faktor perbedaan modifikasi konsentrasi media dasar MS ke-i
Pj
: Pengaruh ukuran eksplan ke-j
15
(AP)ij : Pengaruh interaksi antara perbedaan modifikasi konsentrasi media dasar MS ke-i dan ukuran eksplan ke-j Ɛijk
: Nilai galat/error percobaan pada modifikasi konsentrasi media dasar MS ke-i dan ukuran eksplan ke-j pada ulangan ke-k
Data yang diperoleh dari hasil pengamatan diolah dengan menggunakan uji F pada SAS (Statistical Analysis System) dan SPSS 17.0. Perlakuan yang berpengaruh nyata pada uji F diuji lanjut dengan menggunakan DMRT (Duncan Multiple Range Test) pada taraf 5%.
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemilihan media yang tepat untuk kultur jaringan dipengaruhi oleh komponen penyusun media tersebut yang disesuaikan dengan pertumbuhan tanaman yang dikulturkan. Media yang digunakan dalam penelitian ini adalah media MS (Murashige & Skoog) dengan berbagai perbedaan konsentrasi media. Media MS merupakan jenis media yang digunakan untuk hampir semua jenis kultur, terutama tanaman herbaceus (Gunawan 1987). Pada proses membuatan media tanam, media dengan konsentrasi 1/8 MS, 1/16MS dan 1/32MS tidak mengalami pemadatan. Hal ini terjadi terkait dengan sifat yang dimiliki oleh agar gelrite dengan jumlah unsur yang terdapat dalam media. Gunawan (1987) menyebutkan bahwa gelrite memiliki sifat yang berlainan dengan agar. Kekerasan gel pada gelrite dipengaruhi oleh kehadiran garam-garam seperti NaCl, KCl, MgCl2.6H2O dan CaCl2. Garam NaCl dan KCl menurunkan kekerasan gel sedangkan MgCl2 dan CaCl2 meningkatkan kekerasan gel. Komposisi media MS (Lampiran 1) mengandung unsur makro berupa CaCl2.2H2O yang mempengaruhi kekerasan gel. Diduga pada konsentrasi media 1/8MS, kurangnya jumlah CaCl2 mulai mempengaruhi kekerasan gel pada media tanam. Media yang tidak mengalami pemadatan tersebut tetap digunakan dalam penelitian ini dan hingga akhir pengamatan eksplan yang ditanam pada media tersebut tetap dapat tumbuh dengan baik. Hasil penelitian menunjukkan bahwa planlet tumbuh dengan baik hingga akhir pengamatan (12 minggu setelah penanaman). Namun, terdapat kontaminasi sebesar 1,67% yang terjadi pada minggu kedua setelah penanaman (Gambar 7). Terjadinya kontaminasi diduga karena beberapa hal, antara lain kurang sterilnya ruang tanam maupun laminar air flow cabinet saat digunakan, dan kurangnya kebersihan penanam pada saat penanaman. Kontaminasi yang ditemukan selama penelitian adalah jamur (cendawan). Kultur yang terkontaminasi ini ditandai dengan munculnya benang-benang hifa pada media. Menurut Gunawan (1992) inisiasi kultur yang bebas kontaminasi merupakan tahapan yang penting. Media
17
yang mengandung gula, vitamin dan mineral dapat mendukung pertumbuhan kontaminan dengan cepat apabila faktor penyebab kontaminasi tidak dihilangkan.
Gambar 7 Kontaminasi pada botol perlakuan. 4.1 Pertambahan Jumlah Daun Perbedaan konsentrasi media sebagai faktor tunggal memberikan pengaruh terhadap pertambahan jumlah daun N. gracilis (Tabel 3). Tabel 3 Pengaruh perbedaan konsentrasi media terhadap rata-rata pertambahan jumlah daun N. gracilis Media Pertambahan jumlah daun (helai/minggu) 1/2MS 2,556a 1/4MS 2,3144ab 1/8MS 2,1389ab 1/16MS 1,7967ab 1/32MS 1,4633b Keterangan: Nilai yang diikuti oleh huruf yang sama menunjukan tidak beda nyata pada taraf 95%
Kombinasi perlakuan antara perbedaan konsentrasi media dengan ukuran eksplan berpengaruh terhadap pertambahan jumlah daun. Jika dilihat secara keseluruhan, semakin kecil konsentrasi media MS maka semakin sedikit pertambahan jumlah daunnya (Tabel 4). Nilai pertambahan daun terendah sebesar 1,06 helai/minggu yakni pada media 1/16MS ukuran eksplan > 4 cm dan tertinggi adalah 3,00 helai/minggu yakni media 1/2MS dengan ukuran eksplan < 2 cm. Tabel 4
Rata-rata pertambahan jumlah daun (helai/minggu) pada berbagai perlakuan
Pertambahan jumlah daun (helai/minggu) pada ukuran eksplan Rata-rata < 2 cm 2-4 cm ˃ 4 cm 2,17ab 2,50ab 2,56 1/2MS 3,00a ab ab 2,75 2,25 1,94ab 2,32 1/4MS 2,08ab 2,58ab 1,75ab 2,14 1/8MS 1,92ab 2,42ab 1,80 1/16MS 1,06b 1,33ab 1,14b 1,92ab 1,46 1/32MS Rata-rata 2,22 2,11 1,83 Keterangan: Nilai yang diikuti oleh huruf yang sama menunjukan tidak beda nyata pada taraf 95% Media
18
Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa pada media MS dengan konsentrasi ½ (1/2MS) pada keseluruhan ukuran eksplan memiliki pertambahan jumlah daun yang tidak berbeda jauh yakni 2,1-3 helai/minggu (Tabel 4). Hasil yang sama juga dapat terlihat pada rata-rata pertambahan jumlah daun pada faktor tunggal konsentrasi media (Tabel 3). Hal ini mengindikasikan bahwa 1/2MS cukup sesuai untuk pertumbuhan vegetatif pada N. gracilis. Hasil ini sesuai dengan hasil penelitian Khompat et al. (2007) pada jenis N. mirabilis (Lour.) Druce. Media 1/2MS memberikan hasil pertumbuhan daun terbaik jika dibandingkan dengan konsentrasi media lain yang juga diteliti. Penelitian pada jenis Nepenthes yang sama oleh Jala (2012) juga menunjukkan hasil yang sama namun dengan penambahan BA (Benzyladenine) sebanyak 1, 2 dan 3 mg/l. Hasil penelitian Chua dan Henshaw (1999) juga menunjukkan hal yang sama pada N. macfarlanei yang menunjukkan pertumbuhan tunas terbaiknya terdapat pada media 1/2MS. Secara keseluruhan, semakin kecil konsentrasi media MS maka semakin sedikit pertambahan jumlah daun. Hal ini diduga terjadi karena konsentrasi unsur yang semakin sedikit dapat mempengaruhi proses fotosintesis pada tanaman tersebut. Santoso dan Nursandi (2001) menyebutkan bahwa terdapat beberapa unsur yang memiliki peran dalam proses fotosintesis. Unsur tersebut antara lain Mangan (Mn) dan Tembaga (Cu). Jumlah unsur hara pendukung fotosintesis yang semakin berkurang tentunya memberikan pengaruh pertumbuhan vegetatif pada tanaman yang digambarkan dengan pertambahan daun. Jumlah unsur hara yang sedikit maka pertambahan jumlah daun yang terbentuk pada tanaman juga sedikit. Warna daun yang diamati selama penelitian menunjukkan perbedaan antara daun yang tumbuh sebelum ditanam dalam media perlakuan dengan daun yang tumbuh setelah ditanam dalam media perlakuan. Perbedaan warna tersebut diamati dengan mencocokan daun dengan bagan warna daun (BWD). Bagan warna dengan nomor 5 menunjukkan warna hijau tua, nomor 4 warna hijau, nomor 3 warna hijau muda dan nomor 2 menunjukkan warna hijau kekuningan. Secara keseluruhan, pada minggu akhir pengamatan (12 minggu setelah penanaman) warna daun yang baru tumbuh didominasi oleh daun berwarna hijau tua sebesar 79,77% dan warna hijau-hijau muda sebesar 20,33% (Tabel 5).
19
Namun, jika dibandingkan antara daun yang tumbuh setelah dan sebelum perlakuan, persentase warna hijau - hijau muda pada daun setelah perlakuan lebih besar. Hal ini menunjukkan bahwa media perlakuan yang memiliki jumlah unsur hara yang lebih sedikit dibandingkan dengan keadaan media tanam yang sebelumnya membuat warna daun yang muncul kurang hijau. Hal ini diduga dipengaruhi oleh jumlah unsur hara pembentuk klorofil yang sedikit. Santoso dan Nursandi (2001) menyebutkan bahwa terdapat 6 (enam) unsur yang berpengaruh dalam pembentukan klorofil antara lain Nitrogen (N), Magnesium (Mg), Besi (Fe), Mangan (Mn), Zink (Zn), dan Tembaga (Cu). Kurangnya unsur tersebut dapat menyebabkan warna daun yang terbentuk tidak berwarna hijau. Tabel 5 Persentase warna daun pada planlet N. gracilis pada MSP 12 Warna Daun
Hijau Muda Hijau
Persentase warna daun (%) Daun yang tumbuh sebelum Daun yang tumbuh setelah perlakuan perlakuan 8.09 20.23 91.91 79.77
Selain warna daun, pada akhir pengamatan (12 MSP) juga terlihat bahwa terdapat perbedaan ukuran daun antara daun yang tumbuh sebelum dan setelah pemberian perlakuan. Daun yang tumbuh setelah ditanam pada media perlakuan memiliki ukuran yang lebih besar dan lebar, namun lebih tipis dibandingkan dengan daun yang telah ada sejak awal digunakan sebagai eksplan (Gambar 8). Perbedaan ukuran daun ini terjadi hampir pada keseluruhan eksplan berukuran > 4 cm dengan media 1/8, 1/16 dan 1/32MS.
Gambar 8 Daun yang tumbuh setelah ditanam pada media perlakuan.
20
4.2 Pertambahan Tinggi Hasil analisis ragam menunjukkan bahwa kombinasi konsentrasi media dan ukuran eksplan berpengaruh terhadap pertambahan tinggi eksplan (Gambar 9). Secara umum, nilai rata-rata pertambahan tinggi eksplan berkisar antara 0,04-0,43 cm/minggu. Hal ini diduga terjadi karena tinggi pada eksplan tetap bertambah seiring tersedianya hara yang menunjang pertambahan tinggi tersebut. Perlakuan perbedaan konsentrasi diduga masih berada dalam batas minimum unsur hara
Pertambahan Tinggi eksplan (cm/minggu)
yang diperlukan sehingga pertumbuhan eksplan Nepenthes tidak terganggu. 1 0.8 0.6
a
Eksplan < 2 cm
0.4 0.2
bc bc
bc
bc bc
b bc
b bc
c
bc c
c
Eksplan 2-4 cm Eksplan > 4 cm
c
0 1/2MS
1/4MS
1/8MS
1/16MS
1/32MS
Media MS
Gambar 9 Pertambahan tinggi planlet per perlakuan. Tinggi tanaman berkaitan dengan proses metabolisme yang ada pada tanaman. Pertambahan tinggi pada tanaman merupakan salah satu bentuk terjadinya
proses
pertumbuhan
vegetatif
dan
berjalannya
metabolisme.
Bertambahnya tinggi pada tanaman mengindikasikan adanya pertumbuhan vegetatif berupa pertambahan jumlah sel pada bagian batang. Pertambahan tersebut didukung oleh unsur yang memiliki peran dalam pembentukan sel. Hendaryono dan Wijayani (1994) menyebutkan bahwa Nitrogen (N) bagi tanaman berfungsi sebagai pembentuk protein sehingga unsur tersebut berguna terutama untuk pertumbuhan vegetatif tanaman termasuk didalamnya pertambahan tinggi tanaman. Unsur Mangan (Mn) juga merupakan unsur yang berperan aktif dalam proses fotosintesis dan metabolisme protein (Santoso & Nursandi 2001). Hasil penelitian Jala (2012) pada N.mirabilis menunjukkan bahwa ujung tunas yang dikulturkan pada media MS konsentrasi ½ (1/2MS) ditambah 2 mg/l
21
BA (Benzyladenine) menunjukkan hasil yang terbaik pada tinggi tanaman. Tinggi rata-rata tanaman yang dihasilkan adalah sebesar 0,3 cm/minggu. 4.3 Jumlah Kantong yang Terbentuk Perbedaan konsentrasi media dan ukuran eksplan secara tunggal memberikan pengaruh terhadap rata-rata jumlah kantong yang terbentuk pada N. gracilis. Kombinasi perlakuan perlakuan perbedaan konsentrasi media MS dengan ukuran eksplan berpengaruh terhadap jumlah kantong yang terbentuk. Tabel 6 Pengaruh ukuran eksplan N. gracilis terhadap rata-rata jumlah kantong yang terbentuk Ukuran eksplan Jumlah kantong yang terbentuk (kantong) 2,8667a < 2 cm 2,1947b 2-4 cm 0,7167c > 4 cm Keterangan: Nilai yang diikuti oleh huruf yang sama menunjukan tidak beda nyata pada taraf 95%
Secara umum, jumlah kantong yang terbentuk berkisar antara 0,33-3,50 kantong (Tabel 7). Jumlah kantong terendah terdapat pada media 1/8MS dengan ukuran eksplan > 4 cm dan tertinggi terdapat pada media 1/2MS dengan ukuran eksplan < 2 cm. Tabel 7 Rata-rata jumlah kantong yang terbentuk pada berbagai perlakuan Rata-rata jumlah kantong yang terbentuk pada ukuran eksplan (kantong) < 2 cm 2-4 cm ˃ 4 cm 1,33cd 0,83d 1/2MS 3,50a ab bcd 3,00 1,50 0,50d 1/4MS abc a 2,67 3,17 1/8MS 0,33d abc abc 2,75 2,58 1,25cd 1/16MS abc abc 2,42 2,39 0,67d 1/32MS Keterangan: Nilai yang diikuti oleh huruf yang sama menunjukan tidak beda nyata pada taraf 95% Media MS
Jumlah kantong yang terbentuk dapat dikaitkan dengan jumlah daun yang ada. Kantong Nepenthes muncul dari bagian ujung daun sehingga daun yang baru tumbuh memberikan pengaruh pada jumlah kantong yang terbentuk. Keterkaitan antara jumlah daun dan kantong kemudian diuji korelasinya dengan uji korelasi bivariat. Hasil uji tersebut menunjukan bahwa korelasi antara pertambahan jumlah daun dengan jumlah kantong adalah sebesar 0,377* dengan signifikan atau probabilitas 0,011 (Lampiran 5). Nilai probabilitas ini lebih kecil dari 0,05 sehingga dapat dikatakan bahwa hubungan keduanya sangat erat. Hal ini terjadi karena kantong merupakan modifikasi tulang daun bagian tengah yang tumbuh memanjang lalu membentuk kantong seperti periuk (Suhono et al. 2010) sehingga
22
kantong berhubungan sangat erat dengan daun. Nilai 0,377* menunjukkan hubungan pertambahan jumlah daun dengan jumlah kantong adalah tinggi (yang ditunjukan dengan tanda *). Hal ini terjadi karena ada faktor-faktor lain yang mempengaruhi pembentukkan kantong pada Nepenthes. Faktor tersebut adalah kondisi tempat tumbuh yang miskin hara, kelembaban dan intensitas cahaya. Kantong merupakan bentuk adaptasi yang dilakukan oleh Nepenthes pada kondisi yang miskin hara agar kebutuhan nutrisi tetap dapat terpenuhi. Kantong tersebut berasal dari tulang daun bagian tengah yang tumbuh memanjang lalu membentuk kantong seperti periuk (Suhono et al. 2010). Hasil penelitian menunjukkan bahwa MS dengan konsentrasi 1/8, 1/16, dan 1/32 (1/8MS, 1/16MS, dan 1/32MS) mempengaruhi jumlah kantong yang terbentuk. Konsentrasi tersebut merupakan konsentrasi yang lebih rendah dibandingkan dengan konsentrasi lain yang digunakan. Hal ini diduga karena ada kaitan antara kondisi lingkungan yang miskin hara dengan kemampuan N.gracilis dalam membuat kantong. Menurut Hernawati dan Akhriadi (2006), kantong yang terbentuk dimanfaatkan untuk mendukung kehidupan Nepenthes. Proteolase atau yang juga disebut dengan nepenthesin merupakan enzim yang dikeluarkan oleh Nepenthes (Mansur 2007). Enzim tersebut dikeluarkan oleh kelenjar yang terdapat pada dinding kantong yang berfungsi sebagai enzim pengurai. Protein yang terdapat pada serangga atau hewan kecil yang terperangkap kemudian diuraikan menjadi zat-zat yang lebih sederhana seperti nitrogen, fosfor, kalium, dan garam-garam mineral lain (Mansur 2007). Penelitian Nepenthes lain juga menunjukkan bahwa pada konsentrasi yang lebih rendah, pertumbuhan Nepenthes terlihat cukup baik. Nongrum et al. (2009) menyebutkan bahwa semai N. khasiana menghasilkan kantong pada media 1/4MS tanpa penambahan zat pengantur tumbuh dibandingkan dengan konsentrasi lain yang digunakan dalam penelitian tersebut yakni 1/2MS. Latha dan Seeni (1994) menyebutkan bahwa dari berbagai jenis media yang digunakan yakni Woody Plant Medium (WPM), Murashige & Skoog (MS), dan Knudson-C (KC), tunas N.khasiana menghasilkan kantong pada media WPM (Woody Plant Medium) dengan penambahan 2,7 μM NAA (Naphthalenacetic acid).
23
Kantong yang terbentuk pada media perlakuan memiliki perbedaan pada ukuran kantongnya. Media dengan konsentrasi lebih rendah memiliki ukuran kantong yang lebih besar dibandingkan dengan media dengan konsentrasi lebih tinggi (Gambar 10). Hal ini sesuai dengan pernyataan Hernawati dan Akhriadi (2006) bahwa Nepenthes yang tumbuh dan berkembang pada tanah miskin nutrisi pada umumnya memiliki ukuran kantong yang besar dengan warna mencolok. Namun, pada tanah yang subur, kantong yang terbentuk pada umumnya berukuran kecil. Nongrum et al. (2009) menyebutkan bahwa semai N. khasiana menghasilkan kantong pada media 1/4MS tanpa penambahan zat pengatur tumbuh dengan hasil kantong yang kurang sehat. Kantong yang baik dan sehat dihasilkan dari semai pada media 1/4MS ditambah 2,68 μM NAA. Jenis N. rafflesiana yang diteliti oleh Rahayu dan Isnaini (2009) menghasilkan kantong dengan ukuran yang besar pada media tanam 1/4MS dan 1/8MS tanpa zat pengatur tumbuh.
(A) 1/2MS
(B) 1/4MS
(D) 1/16MS
(C) 1/8MS
(E) 1/32MS
Gambar 10 Ukuran kantong masing-masing konsentrasi media pada 12 MSP. Ukuran kantong yang diamati pada pengamatan visual yakni pada 25 MSP terlihat bahwa media yang memiliki ukuran kantong yang paling besar adalah
24
kantong pada media 1/8MS (Gambar 11a). Selain itu, pada pengamatan tersebut juga teramati kantong yang telah layu dan berubah warna menjadi cokelat (Gambar 11b). Kondisi tersebut diduga terjadi karena usia kantong pada N.gracilis yang berkisar antara 1-2 bulan. Kantong yang telah berusia lebih dari 2 bulan tersebut kemudian akan layu dan berubah warna menjadi kecokelatan.
(A)
(B)
Gambar 11 Kantong dengan ukuran terbesar (A) dan kantong yang telah layu (B). 4.4 Persentase Planlet Hidup dan Berkantong Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada keseluruhan perlakuan rata-rata persentase planlet yang hidup hingga akhir pengamatan adalah sebesar 98,33%. Planlet yang mati sebesar 1,67% disebabkan oleh kontaminasi oleh jamur yang terjadi pada minggu kedua setelah penanaman. Walaupun perlakuan berupa perbedaan konsentrasi media dilakukan hingga konsentrasi yang semakin sedikit kandungan nutrisinya, namun pertumbuhan planlet tetap tinggi. Nilai persentase planlet yang berkantong secara umum pada keseluruhan perlakuan berkisar antara 27,27% hingga 91,67% (Tabel 8). Persentase tertinggi terdapat pada kombinasi perlakuan media 1/2MS dengan eksplan < 2 cm, media 1/4MS dengan eksplan < 2 cm, media 1/8MS dengan eksplan < 2 cm dan 2-4 cm, dan media 1/16MS dengan eksplan 2-4 cm yakni sebesar 91,67%. Persentase terendah terdapat pada kombinasi perlakuan media 1/4MS dengan eksplan > 4 cm sebesar 27,27%. Hal ini diduga terjadi karena eksplan dengan ukuran > 4 cm menggunakan unsur hara dari media untuk menunjang pertumbuhan tubuh planlet tersebut.
25
Tabel 8
Persentase planlet hidup dan berkantong N. gracilis pada setiap kombinasi perlakuan
Kombinasi Perlakuan Media Ukuran eksplan (cm) 1/2MS <2 2-4 >4 1/4MS <2 2-4 >4 1/8MS <2 2-4 >4 1/16MS <2 2-4 >4 1/32MS <2 2-4 >4
Planlet Hidup (%)
Planlet Berkantong (%)
100 100 100 100 100 91.67 100 100 100 100 100 91.67 100 91.67 100
91.67 58.33 50 91.67 83.33 27.27 91.67 91.67 41.67 83.33 91.67 45.45 83.33 81.81 58.33
Persentase planlet berkantong yang berbeda-beda diduga terjadi karena tendril gagal berkembang menjadi kantong. Tendril atau sulur pada daun yang muncul berasal dari perpanjangan tulang daun utama dan pada akhirnya akan membentuk kantong (Hernawati & Akhriadi 2006). Tendril akan berkembang menjadi kantong apabila fungsi fisiologisnya aktif sehingga tidak semua kuncup daun pada tanaman ini berubah menjadi kantong. Pada perkembangannya, kuncup dapat gagal berkembang apabila kekurangan intensitas cahaya dan kelembaban. Selain itu, kerusakan pada fisik tendril juga dapat menyebabkan tendril gagal berkembang menjadi kantong (Clarke 2001). Pada penelitian ini, tendril yang muncul diduga gagal berkembang karena tendril mengalami kerusakan fisik. Kerusakan tersebut terjadi karena sebagian besar media perlakuan yang tidak membeku membuat kondisi planlet yang ditanam tidak berdiri kokoh seperti pada media tanam yang beku dan padat. Tendril diduga membentur kaca dinding botol sehingga gagal berkembang.
26
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan Perlakuan yang memberikan pengaruh paling baik pada pembentukan kantong N. gracilis adalah media dengan konsentrasi 1/2MS, 1/4MS pada ukuran eksplan < 2 cm dan media 1/8MS dengan ukuran eksplan 2-4 cm. Perlakuan tersebut menunjukkan rata-rata pembentukan kantong terbanyak yakni 3,00-3,50 buah. Jumlah kantong terendah terdapat pada media 1/8MS dengan ukuran eksplan > 4 cm dan tertinggi terdapat pada media 1/2MS dengan ukuran eksplan < 2 cm. Hasil tersebut dapat menjadi pertimbangan konsentrasi media yang akan digunakan dalam kultur jaringan Nepenthes dengan menyesuaikan pada hasil yang ingin dicapai. 5.2 Saran Penelitian selanjutnya perlu dimodifikasi konsentrasi media dengan tingkat kandungan unsur hara yang lebih sedikit dari konsentrasi telah yang digunakan dalam penelitian ini hingga pada media yang hanya mengandung bahan pemadat dan gula saja untuk mengetahui perkembangan kantong Nepenthes. Disarankan pula penelitian yang memodifikasi konsentrasi unsur makro pada konsentrasi media tertentu untuk mengetahui unsur yang memperngaruhi dalam pembentukan kantong Nepenthes.
27
DAFTAR PUSTAKA [Anonim]. 2012. Gambar BWD (Bagan Warna Daun). http://cms.1mbio.com/bagan-warna-daun-bwd/bwd-single-2/. [ Juli 2012] Astuti IP, Kalsom YU, Taha RM. 2003. Nepenthes L. Dalam : Brink M, Escobin RP (Editor). Plant Resources of South-East Asia 17 Fibre Plant. Bogor: PROSEA. Hal 196. Clarke C. 2001. Nepenthes of Sumatra and Peninsulas Malaysia. Kota Kinabalu: Natural History Publications (Borneo). Cheek M, Jebb M. 2001. Flora Malesiana Series-I Seed Plants. Vol 15: 67-69. Foundation Flora Malesiana. Chua LSL, Henshaw G. 1999. In vitro propagation of Nepenthes macfarlanei. Jurnal of Tropical Forest Science 11 (3): 631-638. CITES. 2012. The CITES Appendices. http://www.cites.org/eng/resources/ species.html. [31 Juli 2012]. [DEPHUT] Departemen Kehutanan. 1999. Peraturan Pemerintah RI Nomor 7 tahun 1999 tentang pengawetan jenis tumbuhan dan satwa. http://www.dephut.go.id/files/LAMPIRAN%20PERATURAN%20PEM ERINTAH%20REPUBLIK%20INDONESIA%20NOMOR%207%20TA HUN%201999.pdf [31 Juli 2012]. Fong SW. 2008. In vitro induction of polyploidy in Nepenthes gracilis [abstrak]. University Malaya. Gunawan LW. 1987. Teknik Kultur Jaringan. Laboratorium Kultur Jaringan Tanaman. Pusat Antar Universitas (PAU). Bioteknologi. Institut Pertanian Bogor. __________. 1992. Teknik Kultur Jaringan Tanaman. Departemen Pendidikan Tinggi. Pusat Antar Universitas (PAU). Bioteknologi. Institut Pertanian Bogor. Handoyo F, Sitanggang M. 2006. Petunjuk Praktis Perawatan Nepenthes. Jakarta: Agromedia Pustaka. Hendaryono DPS, Wijayani A. 1994. Teknik Kultur Jaringan. Jakarta: Penerbit Kanisius. Hernawati, Akhriadi P. 2006. A Field Guide to The Nepenthes of Sumatra. Padang: PILI-NGO Movement Nepenthes Team, BP Conservation Programme.
28
Heyne K. 1987. Tumbuhan Berguna Indonesia Jilid II. Jakarta: Badan Litbang Kehutanan. Isnaini Y, Handini E. 2007. Perkecambahan biji kantong semar (Nepenthes gracilis Korth.) secara in vitro. Buletin Kebun Raya Indonesia 10 (2): 40-46. Isnaini Y. 2011. Penelitian dan pengembangan tanaman hias unik kantong semar (Nepenthes spp.) secara in vitro di Kebun Raya Bogor. Di dalam: Prosiding Seminar Nasional Perhorti; Lembang, 23-24 November 2011. Bogor: hal 1170-1177. Jala A. 2012. Types of media for seeds germination and effect of BA on mass propagation of Nepenthes mirabilis Druce. American Transactions on Engineering & Applied Sciences. 1(2): 163-171. Khompat K, Tokhao W, Jantasilp A. 2007. Factors affecting in vitro seed germination and shoot multiplication of a pitcher plant (Nepenthes mirabilis (Lour.)Druce). Songklanakarin J.Sci. Technol. 29(2): 253-260. Kunita LY. 2011. Pertumbuhan tanaman Kantong Semar (Nepenthes rafflesiana Jack.) dengan modifikasi konsentrasi media dan pH secara in vitro [skripsi]. Serang: Fakultas Pertanian. Universitas Sultan Ageng Tirtayasa. Latha PG, Seeni S. 1994. Multiplication of the endangered Indian pitcher plant (Nepenthes khasiana) through enhanced axillary branching in vitro. Plant Cell, Tissue and Organ Culture 38: 69-71. Mansur M. 2007. Nepenthes Kantong Semar yang Unik. Jakarta: Penebar Swadaya. Mattjik AA, Sumertasijaya M. 2002. Perancangan Percobaan dengan Aplikasi SAS dan Minitab Jilid I. IPB Press. Bogor. Nongrum I, Kumaria S, Tandon P. 2009. Multiplication through in vitro seed germination and pitcher development in Nepenthes khasiana Hook. F., a unique insectivorous plant of India. The Jurnal of Horticultural Science & Biotechnology 84(3): 329-332. abstrak [pdf]. Rahayu EMD, Isnaini Y. 2009. Induksi pembentukan kantong tanaman Nepenthes rafflesiana Jack pada berbagai konsentrasi media dan ukuran wadah kultur. Di dalam: Prosiding Seminar Peranan Konservasi Flora Indonesia Dalam Mengatasi Dampak Pemanasan Global. UPT BKT Kebun Raya Eka Karya Bali-LIPI dan PTTI, FMIPA Universitas Udayana dan BLH Prov Bali hal:436-441. Rathore TS, Tandon P, Shekhawat NS. 1991. In vitro regeneration of pitcher plant (Nepenthes khasiana Hook.f.)- a rare insectivorous plant of India. Journal of Plant Physiology 139 (2) : 246-248. Abstrak [pdf].
29
Rice BA. 2006. Growing Carnivorous Plants. Portland: Timber Press. Santoso U, Nursandi F. 2001. Kultur Jaringan Tumbuhan. Malang: Penerbit Universitas Muhamadiyah Malang. Suhono B, Yuzammi, Witono JR, Hidayat S, Handayani T, Sugiarti, Mursidawati S, Triono T, Astuti IP, Sudarmono, Wawangningrum H. 2010. Ensiklopedia Flora. Bogor: PT Kharisma Ilmu. Yogiara. 2004. Analisis Komunitas Bakteri Cairan Kantong Semar (Nepenthes spp.) Menggunakan Teknik Terminal Restriction Fragment Length Analysis (ARDRA) [tesis]. Sekolah Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Zulkarnain. 2009. Kultur Jaringan Tanaman. Jakarta: Bumi Aksara.
30
LAMPIRAN
31
LAMPIRAN Lampiran 1 Komposisi Media Murashige and Skoog No Nama Bahan Konsentrasi Konsentrasi dalam Media dalam larutan (mg/l) stok 50x (g/500ml)
1 2 3 4 5
1 2 3 4 5 6 7 1 2 3 4 5
Unsur Makro NH4NO3 KNO3 MgSO47H2O KH2PO4 CaCl22H2O FeSO47H2O Na2EDTA Unsur Mikro H2BO3 MnSO4H2O ZnSO47H2O KI Na2MoO47H2O CuSO45H2O CoCl2.6H2O Vitamin Niacin Pyridoxine Thiamin Glycine Myo-Inositol
1650 1900 370 170 440 27,8 37,3
82.5 95 18,5 8,5 22 1,39 1,865
Volume larutan stok yang dibutuhkan per liter media (ml) 10 10 10 10 10 10 10
6,2 16,9 8,6 0,83 0,25 0,025 0,025
0,310 0,845 0,430 0,041 0,0125 0,00125 0,00123
0,5 0,5 0,4 2 100
0,025 0,025 0,02 0,1 5
10
32
Lampiran 2 Sidik ragam pertambahan jumlah daun N. gracilis SK db F Hit Pr > F Media 4 (2,17) (0,0967) Ukuran eksplan 2 (0,76) (0,4744) Media*Ukuran eksplan 8 (0,93) (0,5037) Galat 30 Total koreksi 44 Keterangan: Media : Konsentrasi Media MS Ukuran Eksplan : Ukuran Eksplan N. gracilis KK : Koefisien Keragaman : Hasil transformasi √(x+0,5) (...) Lampiran 3 Sidik ragam pertambahan tinggi eksplan N. gracilis SK db F Hit Pr > F Media 4 (1.34) (0,2783) Ukuran eksplan 2 (2,91) (0,0698) Media*Ukuran eksplan 8 (6,43) (0,0001)** Galat 30 Total koreksi 44 Keterangan: Media : Konsentrasi Media MS Ukuran Eksplan : Ukuran Eksplan N. gracilis KK : Koefisien Keragaman (...) : Hasil transformasi √(x+0,5) ** : Sangat nyata pada uji F 5%
Lampiran 4 Sidik ragam jumlah kantong N. gracilis SK db F Hit Pr > F Media 4 (0,57) (0,6830) Ukuran eksplan 2 (27,63) (0,0001)** Media*Ukuran eksplan 8 (1,73) (0,1328) Galat 30 Total koreksi 44 Keterangan: Media : Konsentrasi Media MS Ukuran Eksplan : Ukuran Eksplan N. gracilis KK : Koefisien Keragaman (...) : Hasil transformasi √(x+0,5) ** : Sangat nyata pada uji F 5%
KK(%) (42,715)
KK(%) (58,081)
KK(%) (42,075)
33
Lampiran 5 Nilai uji korelasi bivariat antara pertambahan jumlah daun dengan jumlah kantong Descriptive Statistics Pertambahan Jumlah Daun Pertambahan Jumlah Kantong
Mean 2.0538 1.9260
Std. Deviation .91315 1.23009
N 45 45
Correlations parametric Pertambahan Jumlah Daun Pearson 1 Correlation Sig. (2-tailed) N 45 Pearson Pertambahan .377* Correlation Jumlah Kantong Sig. (2-tailed) .011 N 45 *. Correlation is significant at the 0.05 level (2-tailed). Pertambahan Jumlah Daun
Correlations Non-parametric (Spearman’rho) Pertambahan Jumlah Daun Correlation 1.000 Coefficient Sig. (2-tailed) . N 45 Correlation .355* Pertambahan Coefficient Jumlah Kantong Sig. (2-tailed) .017 N 45 *. Correlation is significant at the 0.05 level (2-tailed). Pertambahan Jumlah Daun
Pertambahan Jumlah Kantong .377* .011 45 1 45
Pertambahan Jumlah Kantong .355* .017 45 1.000 . 45
