Indonesia) (Pharmachim)

ADLN - PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

BAB III METODE PENELITIAN

1. B a h a n Amoksisilin trihidrat

(P.T. Sa nd o z

Biochemie Farma

Indonesia) A m p i s i l i n t r ih id ra t

(P.T. M e d i f a r m a

Laboratories

I n c .) Kloksasilin Natrium

(P.T. M e i j i I n d o n e s i a n

Phar

m a c e u t i c a l I nd u s t r i e s ) Flukloksasilin Natrium

(P.T. Smith

Kline

Beecham

Pharmaceuticals) Dikloksasilin Natrium

(P h a r m a c h i m )

n - O k t a n o l p.a

(E .M e r c k )

E t e r p .a

(E. Me rc It)

M e t a n o l p.a

(E.M er ck )

N a t r i u m d i h i d r o g e n fosfat p.a (E.Mer ck ) D i n a t r i u m h id ro g e n fosfat p . a (E.Mer ck ) Hidroksilamin hidroklorid Natrium hidroksida Asam hidroklorid Ferri klorida K a l i u m kupri t artrat Air s u l i n g

27

SKRIPSI

STUDI HUBUNGAN ANTARA NILAI ...

FENNY SOEDARMADJI


28

2. A la t H e r a c a a n a l i t i s S a r t o r i u s 2472 S p e c t r o p h o t o m e t e r H i t a c h i dual

wavelength double

beam

type 557 P e r a l a t a n p e n e n t u a n t i t i k leleh ( E l e c t r o t h e r m a l ) Bejana kromatografi

,

L e m p e n g k r o m a t o g r a f i s i l i k a gel 60 GF 254 (E.Me rc k) L a mp u UV T op c o n PUV-1 A l a t - a l a t g elas pH m e t e r F i s h e r A cc u m e t m o d e l 230 A

3. M e t o d e P e n e l i t i a n 3.1. A n a l i s i s k u a l i t a t i f t e r h a d a p b a h a n p e n e l i t i a n 3.1.1. P e m e r i k s a a n o r g a n o l e p t i s M e l i p u t i p e m e r i k s a a n bentuk, warna, ban dan rasa.

3.1.2. A n a l i s i s r e a k s i w a r n a U n t u k m e n e n t u k a n a d a ny a turunan p e n i s i l i n d a p a t d i lakukan a n a l i s i s reaksi w a r n a s e b a ga i b e r i k u t (32): a. D i l a r u t k a n 5,0 mg sat d a l a m 3,0 ml air, d i t a m b a h 0 , 1 g h i d r o k s i l a m i n h i d r o k lo ri d,

h i d r o k s i d a (80 g/1)

1 , 0 ml

natrium

dan d i b i a r k a n s e l a m a 5

nit. K e m u d i a n d i t a m b a h k a n 1,3 ml asam

me-

hidroklo

rid (70 g/1) dan 10 tetes ferri klorid (25 g/1). b. D i l a r u t k a n

10

mg

d i t a m b a h k a n 2 , 0 ml

SKRIPSI

zat

dalam

1,0

ml

ca mp u r a n dari 2 , 0 ml


air

dan

k al i u m

FENNY SOEDARMADJI


29

kupri t a r tr at dan 6 , 0 ml air. c. D i l a r u t k a n

5

mg

zat

dalam

1,0

ml

air

dan

d i t a m b a h k a n 1- 2 tetes ferri klorid (25 g / 1 ). Untuk membedakan

m a s i n g - m a s i n g t urunan

penisilin,

s e l a n j u t n y a d i l a k u k a n p e n e n t u a n t i t i k lebur m a s i n g masing b a h a n .

3.1.3. P e n e n t u a n t i t i k l ebur S e d ik it b ahan d i g e r u s halus k em ud i a n d i m a s u k k a n dalam

pipa

tertutup,

k a p il er

yang

selanjutnya

d a l a m alat p e n e n t u a n dan

diamati

suhu

salah

satu

pi pa k a p i le r t i ti k lebur

dimana

bahan

ke

ujungnya

dimasukkan

ke

(Electrothermal) te rs e b u t

m u la i

m e l e b u r satnpai s e mu a bahan melebur.

3.2. P e n e n t u a n n i l a i

log

P

dalan

sistem

oktanol-dapar

f o s f a t pH 7,4 ( 1 0 , 1 2 , 1 3 ) 3.2.1. P e m b u a t a n l arutan d a p a r f o s f a t pH 7,4 Ditimbang sebanyak

natrium 0,21

dihidrogen

gram,

fosfat

k em u d i a n

(N a H 2P 0 4 .2HZ0 )

ditambah

air

suling

sam pa i larut. D i t i m b a n g d i n a t r i u m hi drogen sebanyak

1,91

gram,

kemudian

sam pa i l a r u t . Kedua

larutan

fosfat

(N a zH P 0 4 .12H 20 )

ditambah

air

suling

1

t er s e b u t

d ic am p ur ,

ditambah

air

s u li ng s a m pa i 100 ml.

SKRIPSI


FENNY SOEDARMADJI


30

D i u j i pH d e n ga n pH meter.

3.2.2. P e m b u a t a n l a r u t a n

dapar

fosfat

oktanol

pH 7,4

jenuh

.n-

'

Ke d a l a m

corong

pisah

dimasukkan

100

ml

d ap ar

f osfa t pH 7,4 la.lu d i m a s u k k a n p u l a o kt a n o l s e b a n y a k 100

ml

ke

dalamnya.

Digojog

selama

15

C a m p u r a n d i d i a m k a n s e l a m a 24 jam. K e m u d i a n

menit. lapisan

n - o k t a n o l dan d a p a r fos fa t pH 7,4 di pi s a h k a n .

3.2.3. P e m b u a t a n l a r u t a n b a k u turu n a n p e n i s i l i n Dibuat

larutan

p e n i s i l i n ya ng larutan baku

baku

untuk

digunakan

tiap-tiap

dalam

dalam dapar

tu ru na n

penelitian

fosf at pH

yaitu

7,4 j e n u h

n

o k tn n o 1 . T i a p - t i a p tu ru n a n

p e n i s i l i n y a ng

digunakan

dalam

p e n e l i t i a n ini d i p e r l a k u k a n se ba g a i berikut: Ditimbang

dengan

seksama

p e n i s i l i n s e b a n y a k 50

mg ,

menggunakan pelarut dapar o k t a n o l sampa i

tur un an

dan d i l a r u t k a n fosfa t pH

dengan

7,4 j e n u h

n-

Kemudian diencerkan

dengan

p e l a r u t d a p a r fosf at pH 7,4 j e n u h n - o k t a n o l

sa mp a i

d i p e r o l e h k adar larutan

dengan

rentang

antara

50 ml.

masing-masing

100

baku m a s i n g - m a s i n g sampai

dengan

500

Mg/ml

t e r g a n t u n g kadar m a s i n g - m a s i n g b a h a n .

SKRIPSI


FENNY SOEDARMADJI


31

3.2.4. P e n e n t u a n p a n j a n g g e l o m b a n g m a k s i m u m Penentuan

panjang

dengan mengamati

gelombang

maksimum

n i l a i s e r a pa n

baku tu ru na n p e n i s i l i n

dilakukan

tiap-tiap

larutan

dalam pelarut dapar

fosfat

pH 7,4 j e n u h n - o k t a n o l p a d a p a n j a n g g e l o m b a n g

200-

380 nm.

3.2.5. P e m b u a t a n k u r v a baku t u r u n a n p e n i s i l i n D i a m a t i s e r ap an m a s i n g - m a s i n g larutan baku penisilin pada

panjang

gelombang

h asil p e n g a m a t a n d i b u a t

tur un a n

m aksimum.

Dari

k u r v a dan p e r s a m a a n

g a ri s

r e g r e s i y a n g m e n y a t a k a n h u b u n g a n k adar larutan ba ku t i a p - t i a p t ur u n a n

penisilin

dengan

serapan

pada

p a n j a n g g e l o m b a n g maksimum. U n t u k b l a n g k o d i g u n a k a n larutan d a p a r fosf at pH 7,4 j e n u h n -o ktanol.

3.2.6. P e n e n t u a n

logaritma

koefisien

partisi

turunan

penisilin Ditimbang

dengan

t u r u n a n peni si li n,

seksama

masing-masing

k em ud i an m a s i n g - m a s i n g

k ukan s e b a g a i b e r i k u t

50

mg

diperla-

:

Zat d i l a r u t k a n d e n g a n d a p a r fosf at pH 7,4 j e n u h

n-

o k t a n o l s a m p a i 100 ml. Dipipet, 10 ml m a s u k k a n d a l a m labu ukur, d i e n c e r k a n pH 7,4

SKRIPSI

jenuh

d e n g a n larutan d a p a r

n-oktanol

sampai


25

ml,

fosfat sehingga.

FENNY SOEDARMADJI


32

d i p e r o l e h larutan t urunan p e n i s i l i n d e n g a n t rasi 200jjg/ml. ke

dalam

Kemudian dipipet

corong

pisah.

20 ml,

Ditambahkan

konsen

dimasukkan

juga

ke

corong pisah tersebut n-oktanol jenuh dapar pH

7,4

sebartyak

k em ud ia n

20

didiamkan

dan

dapar

air

(dapar

fosf at

ml.

Digojog

s el a m a pH

fos fa t

7,4 pH

24

selama

jam.

Fa se

d ip i s a h k a n .

7,4)

diamati

dalam fosfat

15

me nit

n-oktanol

Ser ap an pada

fasa

panjang

g e l o m b a n g maksimum. U n t u k b l a n g k o d i g u n a k a n larutan d a p a r fosf at pH 7,4 j e n u h n-o kt an ol . P e r c o b a a n d i l a k u k a n d e n g a n r e p l i k a s i 5 kali. C Q = kadar sa mp e l d a l a m f a sa n - o k t a n o l C M = kadar s a m p e l d a l a m fasa air K o e f i s i e n p a r t i s i (P) =

3.3. P e n e n t u a n n i l a i

Cw

(12)

3.3.1. P e m b u a t a n l a r u t a n i m p r e g n a s i atau p e l a p i s (36) 3 ml n - o k t a n o l j e n u h

d apar fosfat pH 7,4

ditambah

eter s a m pa i 100 ml, ke mu di an d i a d u k sam pa i homogen.

3.3.2. I m p r e g n a s i l e m p e n g k r o m a t o g r a f i Lempeng kromatografi kromatografi yang p r e g n a s i yaitu

dimasukkan

sudah jenuh

larutan

ke

dalam

bejana

d e n g a n l arutan

3% n - o k t a n o l

jenuh

fosfat pH 7,4 d a l a m eter. D i d i a m k a n s e l a m a 24

imd ap ar jam,

k e m u d i a n d i a n g k a t da n di k e r i n g k a n .

I SKRIPSI


FENNY SOEDARMADJI


33

3.3.3. Penenttian nilai. Rjf turu n a n p e n i s i l i n Fase d i a m dapar

yang dipakai

dalam

eter

y a i tu 3%

y an g

k r o m a t o g r a f i d ar i

n-oktanol

dilapiskan

s il i k a

kromatografi dijenuhkan

gel

pada

60 GF

d e n g a n fase

j en uh lem pe ng

254.

Bejana

gerak.

fase g e r a k d i g u n a k a n c am pu ra n m e t a n o l - d a p a r

Untuk fosfat

pH 7,4 d e n g a n lima m acam k o n s e n t r a s i me ta n o l

yaitu

30% v/v, 35% v/v, 40% v/v, 45% v/v, dan 50% v/v. M a s i n g - m a s i n g tu ru na n

penisilin

dilarutkan

m e t a n o l lalu d i t o t o l k a n p ad a le mp en g Lempeng kromatografi

fase

gerak.

lalu

d i k e r i n gk an .

bawah

Didiamkan

Setelah

metanol

dimasukkan

y a n g s u da h j e n u h

sam pa i

lampu u l t r a violet.

sentrasi

kromatograf.i .

tersebut kemudian

dalam bejana kromatografi

eluen

k e r i ng

dalam

naik

noda

dengan ± 15

cm

dilihat

di

Untuk masing-masing k o n

dilakukan

replikasi

sebanyak

5

kali .

3.4. A n a l i s i s d a t a ( 37,38) D ar i

hasil

pengamatan

akan

diperoleh

dua

v a r i a b e l yaitu: - v a r i a b e l x : n ilai log P d ar i a mo ks is il in . lin, k l o k s a si li n, - variabel y : nilai kloksa si li n,

ampisi-

f l u k l o k s a s i l i n dan d i k l o k s a s i l i n . da ri a m o k s is il in ,

ampisilin,

f l u k l o k s a s i l i n dan di k l o k s a s i l i n .

S e l a n j u t n y a d a t a t e rs eb ut d i m a s u k k a n d a l a m tabel

SKRIPSI


FENNY SOEDARMADJI


34

berikut

:

Penisilin

X

y

^x

*-y

xz

xy

1

yZ

Amoksisilin Ampisilin Kloksasilin Dikloksasilin Flukloksasilin

N i l a i log

P

dan

*-xy

n i l a i R^

turunan penisilin ditentukan

Z y 7-

i-X£

d ar i

masing-masing

nilai rata-ratanya

dan

s t a nd ar de v i a s i n y a : (Ex) 2

Ex2 -

SD =

n - 1

SD = s t a nd ar d e v ia si x

= n ilai log P atau n i l a i R^

n

= j u m l a h sampel

Untuk mengetahui antara

variabel

x

ada t i d a k n y a dengan

k or elasi

variabel

y

linier

dilakukan

p e r h i t u n g a n k o e f i s i e n korelasi. n .E x y - ( E x ).( E y ) J [n.Exz - (Ex)z ] [n.Zy2 - (Ey)z ] r = k o e f i s i e n ko re l as i n = j u m l a h sam pe l Jika

h ar ga

rhUung

>

rtabei

ma ka

dapat

disim-

l

SKRIPSI


FENNY SOEDARMADJI


35

p u l ka n t er d a p a t

k or el as i

dengan variabel

y,

persamaan berikut

gar is

linier a n t a r a

unt.uk s e l a n j u t n y a

regretinya

dengan

variabel da pat

rumus

x

dibuat se ba ga i

: y = bx + a

dimana b - JL'Exy ~ ( ^ x ) . ( Z y ) ” n . I x ^ - (Ex)*

Z y - b. 2 x a = ------ -— — — n Untuk mengevaluasi

persamaan

garis

d i g u n a k a n uj i A n o v a p a d a ot = 0,05 d e n g a n

regresi,

:

Ho : t i da k ada k o r e l a s i linier a n t a r a x dan y Ha : ada ko re l a s i linier a n t a r a x dan y Su mb e r V a r i as i

deraj at b eb as

SS

MS

F Hitung

1

Reg re si linier

£(yc-y) 2

1

£ ( y c- y ) z

^ ( y c- y ) z

R es id u a l

n -2

£ ( y - y c )z

^ ( y - y c )2/ n - 2

T ot al

n- 1

£(y-y)2

£ ( y - y c )z/ n - 2

dimana : y c = n i l a i y y a n g d i d a p a t da ri p e r s a m a a n g a r i s r e g r e si y

= n i l a i y rata- ra t a

n

= j u m l a h sam pe l Apabila

atau

SKRIPSI

d ap a t

harga

F huung

dikatakan

bahwa

>

Ftabei

m ak a

persamaan


Ho

ditolak

g ar is

reg re si

FENNY SOEDARMADJI


ya ng d i d a p a t c u ku p r e p r e s e n t a t i f u n t u k k o r e l a s i linier a n t a r a

36

menggambarkan

variabel x dengan variabel

y

<37,38).

SKRIPSI


FENNY SOEDARMADJI

Indonesia) (Pharmachim)

Recommend Documents