In Vitro Antiproliferasi Senyawa Isolat Tb3 Dari Tampa Badak (Voacanga foetida (Bl.) K. Schum) Terhadap Sel Kanker Paru A- 549

P ro sid ing Sem ina r Na siona l & Wo rkshop “Pe rkemba ngan Te rki ni Sa in s Fa rma si & K l in i k 5” | Padang , 6 -7 No vembe r 2015

In Vitro Antiproliferasi Senyawa Isolat Tb3 Dari Tampa Badak (Voacanga foetida (Bl.) K. Schum) Terhadap Sel Kanker Paru A549 Adriani Susanty*1,2 ; Emrizal1 ; Nofrihendri Sandi1; Nur Alimin1; Sri Esky Sofia1 1Sekolah

Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru Pascasarjana S3 Biomedik, Fakultas Kedokteran, Universitas Andalas, Padang

2Program

*Corresponding email: [email protected] ABSTRAK

Senyawa Tb3 merupakan senyawa isolasi dari daun Voacanga foetida (Bl.)K. Schum fraksi butanol yang diketahui memiliki potensi menghambat proliferasi sel. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui potensi senyawa Tb3 dalam menghambat proliferasi sel kanker paru A-549 dengan metoda dye exclusion. Persentase antiproliferasi kelompok kontrol negatif (DMSO) sebesar 0%, antiproliferasi pada kelompok kontrol positif doksorubisin pada konsentrasi 0,04; 0,08; 0,16; 0,32 dan 0,64 μg/mL berturut-turut adalah 34,5; 44,8; 51,7; 56,9 dan 63,8%, sedangkan kelompok yang diberikan senyawa Tb3 konsentrasi 0,5; 1; 2; 4 dan 8 μg/mL berturut-turut adalah 20,7; 34,5; 50,0; 60,3 dan 70,7%. IC50 senyawa Tb3 sebesar 2,4 μg/mL dibandingkan dengan nilai IC50 doksorubisin terhadap sel A-549 adalah 0,16 μg/mL menunjukan bahwa senyawa Tb3 memiliki efek sitotoksik aktif terhadap sel A-549. Secara umum, efek sitotoksik menunjukkan adanya fenomena concentration dependent response, yaitu efek sitotoksik meningkat seiring dengan meningkatnya konsentrasi senyawa Tb3 yang diberikan. Kata kunci: Voacanga foetida, proliferasi, sel kanker paru A-549, IC50

PENDAHULUAN

setiap 100.000 orang terdapat kasus baru

Menurut WHO (2013) penyakit kanker

penyakit kanker sebanyak 170-190 kasus

merupakan salah satu penyebab kematian

(Tjindarbumi

terbesar di dunia. Kanker menjadi masalah

Menurut Boyle dan Ferlay (2004) di Eropa,

utama kesehatan dan penyakit pembunuh

kanker paru-paru menempati urutan pertama

terbesar kedua setelah kardiovaskuler. Kanker

penyebab kematian (13,3% dari 2.886.800

merupakan penyakit degeneratif yang ditandai

kasus).

dengan keadaan sel yang membelah secara terus menerus

(proliferasi)

memiliki

2001).

keanekaragaman

hayati yang tinggi. Penemuan tanaman obat

mempunyai kemampuan untuk menyebar ke

yang menunjukkan efek farmakologis terhadap

jaringan

patologi

kanker terutama yang telah mengalami uji

(Hawariah, 1998). Kasus penyakit kanker di

secara ilmiah memberikan alternatif dalam

Indonesia terus bertambah. Hasil penelitian,

mengatasi dan mengobati kanker. Hal ini

berlainan

kontrol

Mangunkusumo,

dan

yang

tanpa

Indonesia

&

secara

195


menyebabkan pengembangan penelitian untuk

berbagai

sel

menemukan obat-obat baru terus berkembang,

dilakukan.

biakan

kanker

yang

sudah

bahkan dari alam pun kini banyak diteliti untuk pengobatan kanker. Salah satunya tumbuhan

METODE PENELITIAN

dari famili Apocynaceae yaitu Voacanga foetida

Alat dan bahan

(Bl.) K. Schum.

Alat yang digunakan adalah botol kaca

Beberapa penelitian uji aktivitas antikanker daun

Voacanga

foetida

(Bl.)

K.

Schum

yang berwarna gelap, alat destilasi, lampu UV, plat KLT, chamber, vial, pipet tetes, pinset,

menggunakan metode perhitungan langsung

corong,

dengan haemocytometer terhadap leukemia sel

timbangan analitik, melting point apparatus,

L1210 dan diperoleh nilai IC50 ekstrak metanol

spektrofotometer UV, kertas saring, mikropipet,

sebesar 4,3896 µg/mL (Fernando et al., 2011),

flask tube, haemocytometer, cryogenic vial,

fraksi

µg/mL

mikroskopfluoresens, vortex, multiwell plate

dan fraksi etil asetat

tissue’s culture 24 sumuran dan 96 sumuran,

sebesar 8,425 µg/mL (Susanty et al., 2011)

laminar air flow cabinet (LAF-cabinet) dan

menunjukkan daun Voacanga foetida (Bl.) K.

inkubator CO2 5% serta APD (alat pelindung

Schum

diri).

n-heksana

(Susanty dkk.,

sebesar

2012a)

berpotensi

16,8213

sebagai

obat

kanker

leukemia.

gelas

ukur,

Bahan-bahan

beaker

yang

glass,

digunakan

spatel,

adalah

Senyawa Tb3 merupakan senyawa isolasi

senyawa Tb3, sel kanker paru A-549, metanol,

dari daun Voacanga foetida (Bl.) K. Schum fraksi

etanol, etil asetat, n-heksana, DMEM, NaHCO3,

butanol

penisilin-streptomisin,

juga

telah

dilakukan

pengujian

FBS

(Fetal

Bovine

antiproliferasi terhadap leukemia sel L1210 dan

Serum), tripsin-EDTA (0,2%), trypan blue,

diperoleh nilai IC50 sebesar 1,057 µg/mL, juga

akuades

terhadap leukemia sel K-562 dengan IC50

(dimetilsulfoksida), dan doksorubisin.

sebesar 0,537 µg/mL (Susanty et al., 2012b).

Prosedur Kerja

Menurut US NCI (United State National Cancer

Pengambilan Sampel

dan

akubides

steril,

DMSO

Institute) program skrining tanaman, ekstrak

Sampel yang digunakan dalam penelitian

tanaman umumnya dianggap memiliki efek

ini berupa Daun Voacanga foetida yang diambil

sitotoksik yang aktif jika nilai IC50 setelah

pada bulan Mei 2011, di daerah Lembah Anai,

inkubasi antara 48 sampai 72 jam adalah ≤ 20

Padang Panjang, Provinsi Sumatera Barat.

μg/mL, sementara itu ≤ 4 μg/mL untuk senyawa

Ekstraksi Sampel

murni (Lee & Houghton, 2005; Malek et al.,

a) Perajangan

2009).

Daun V. foetida yang telah diambil dicuci

Tujuan dilakukan penelitian ini adalah

dengan air mengalir kemudian dirajang.

menguji senyawa Tb3 dalam menghambat

Setelah dirajang daun dikeringanginkan dan

proliferasi sel kanker paru A-549 secara in vitro

ditimbang berat kering daun V. foetida.

dengan

metoda

perhitungan

langsung

b) Perendaman

menggunakan haemocytometer. Penelitian ini

Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi

dilakukan untuk membandingkan potensi daya

atau

hambat proliferasi senyawa Tb3 terhadap

Sampel yang telah dirajang dimasukkan ke

perendaman

dengan

etanol

96%.

196


dalam

botol

yang

cm dari batas dilakukan pemisahan dengan

berkapasitas 2,5 L. Perendaman dilakukan

kromatografi kolom. Kolom diisi dengan silika

sebanyak 3 kali selama ± 5 hari dengan

gel 60. Pengisian kolom dilakukan dengan

sesekali diaduk. Hasil maserasi

membuat

disaring

bewarna

dengan

kapas

gelap

dan

kemudian filtratnya

dipindahkan ke dalam bejana tertutup. c) Pemekatan

bubur

silika

terlebih

dahulu,

kemudian bubur silika ini dimasukkan kedalam kolom kromatografi yang bagian dasarnya telah dilapisi kapas sebagai penyaring sampai bubur

Ekstrak yang diperoleh dikentalkan dengan

silika padat.

alat rotary evaporator sehingga diperoleh

Fraksi butanol yang akan dipisahkan dilakukan

ekstrak kental etanol V. foetida.

preadsorpsi dan dimasukkan dalam kolom.

Fraksinasi Sampel

Selanjutnya

Hasil ekstrak kental etanol yang diperoleh ditambahkan

aquadest

dilakukan

menggunakan metoda Step Gradient Polarity

dihomogenkan,

(SGP) dengan pelarut heksan dan etil dengan

selanjutnya difraksinasi dengan menggunakan

perbandingan meningkat. Hasil pengkoloman

corong pisah dengan pelarut n-butanol, sehingga

ditampung dalam vial yang telah diberi nomor,

diperoleh dua fraksi, yaitu fraksi n-butanol dan

kemudian dimonitor dengan KLT. Vial-vial

fraksi Air. Diambil fraksi air dan ditambah

dengan nilai Rf yang sama digabung dan

pelarut butanol, sehingga diperoleh fraksi air

dimonitor kembali dengan KLT hingga didapat

dan butanol. Fraksinasi dilakukan berulang-

satu noda pada plat KLT.

ulang sampai ekstrak terfraksinasi sempurna.

Pemurniaan Senyawa Hasil Isolasi

Hasil fraksi butanol diambil dan dipekatkan

Senyawa yang diperoleh melalui proses isolasi

dengan

terlebih dahulu dimurnikan, salah satunya

alat

rotary

dan

pengelusian

evaporator

sehingga

didapatkan fraksi butanol.

adalah dengan metoda rekristalisasi dan uji titik

Uji Kandungan Kimia

leleh.

Pemeriksaan kandungan kimia metabolit

Karakterisasi

Struktur

Senyawa

dengan

sekunder dilakukan terhadap fraksi butanol

Spektrofotometri UV dan IR

daun V. foetida yang meliputi pemeriksaan

Karakterisasi struktur senyawa yang diperoleh

alkaloid, flavonoid, fenolik, saponin, terpenoid

dilakukan

dan steroid.

spektrofotometri

Pemisahan dengan Kromatografi Kolom

menggunakan

dengan UV

analisa dan

spektroskopi

IR. UV

secara Analisa dilakukan

Pemisahan komponen-komponen yang ada

dengan melarutkan sedikit senyawa Tb3 dalam

dalam fraksi butanol dilakukan dengan KLT dan

metanol kemudian diukur serapannya. Analisa

kromatografi

menggunakan

pemisahan

kolom. dengan

Sebelum kromatografi,

dilakukan

spektroskopi

IR

dilakukan

terlebih

dengan menggerus senyawa Tb3 dengan KBr,

dahulu ekstrak dianalisa pola pemisahannya

kemudian dikempa hingga terbentuk seperti

dengan KLT menggunakan fase gerak pelarut

sebuah pellet yang tipis lalu diukur serapannya.

organik dalam berbagai perbandingan. Fraksi

Pembuatan medium biakan sel (DMEM)

butanol diuji menggunakan kromatografi lapis

Pengerjaan dilakukan secara aseptis di

tipis dengan cara menotolkan larutan fraksi

dalam LAF-cabinet. Media DMEM (Dulbecco’s

butanol dengan bantuan pipa kapiler kira-kira 1

Modified Eagle Medium) dilarutkan dalam 50 mL 197


akuabidest steril dengan bantuan stirer sampai

µL, lalu dimasukan ke dalam multiwell plate

semua media terlarut. Selanjutnya ditambahkan

tissue’s culture

2,438 g NaHCO3 sambil terus diaduk dengan

akan ditambahkan dengan suspensi sel sampai

stirer. Volume media ditepatkan sampai 1000

batas volume 1000 μL (v/v 1%).

mL dan disterilkan dengan menggunakan filter

Pembiakan Sel Kanker

membran 0,22 μm. Media ini digunakan untuk

a)

pada sumuran yang nantinya

Satu tabung sel dari persediaan diambil

membuat larutan stok contoh maupun media

kemudian dicairkan pada suhu 37°C

pencuci

hingga

sedangkan

media

lengkap

untuk

medium sel mencair. Bagian luar

pertumbuhan kultur sel ditambahkan dengan

tabung dibersihkan dengan alkohol 70%

10% FBS (Fetal Bovine Serum), 100 IU/mL

untuk

antibiotika penisilin-streptomisin dan 0,01 %

kemudian isi tabung dipindahkan ke

anti jamur fungison.

dalam tabung sentrifus 15 mL secara

Pembuatan larutan trypan blue

aseptik

menghindari

di

dalam

kontaminasi

LAF-cabinet.


Ditambahkan media pencuci ke dalam

dalam LAF-cabinet. Serbuk trypan blue sebanyak

tabung untuk membilas sel yang masih

0,2 gram dilarutkan ke dalam 20 mL akuadest

tertinggal

steril sehingga diperoleh trypan blue dengan

ditepatkan sampai 10 mL. Suspensi sel

konsentrasi b/v 1%.

disentrifus dengan kecepatan 1000 rpm

Pembuatan larutan konsentrasi bertingkat

pada suhu 4oC selama 5-10 menit. Sel

senyawa Tb3

mengendap di bawah tabung. Supernatan

Pengerjaan

suspensi

sel

dibuang kemudian pada endapan sel

Senyawa Tb3 ditimbang 3,2 mg ditambah

ditambah media pencuci sampai 10 mL

pelarut

sehingga

dan ulangi sebanyak 3 kali sentrifus

diperoleh konsentrasi 640 µg/mL (sebagai

dengan kecepatan dan waktu yang sama.

larutan

Supernatan

induk).

sebanyak

secara

volume

aseptis.

DMSO

dilakukan

dan

5

Larutan

mL induk

dibuat

kembali

dibuang

dan

pengenceran 0,5; 1; 2; 4; dan 8 µg/mL.

endapan sel dilarutkan dalam 5 mL media

Pembuatan larutan konsentrasi bertingkat

lengkap dan dikocok dengan vortex

doksorubisin sebagai kontrol positif.

perlahan agar suspensi sel homogen.

Pengerjaan dilakukan secara aseptis di dalam

LAF-cabinet.

Sediaan

Suspensi sel kemudian diinkubasi pada

larutan

suhu 37°C dalam inkubator 5% CO2

doksorubisin ditimbang 2 mg ditambah pelarut DMSO sebanyak 1 mL sehingga diperoleh konsentrasi 2000 µg/mL

selama 48 jam. b)

Setelah masa inkubasi selesai maka

(sebagai larutan

keadaan dan pertumbuhan sel diperiksa

induk). Larutan induk diencerkan menjadi

di bawah mikroskop untuk melihat

konsentrasi 0,04; 0,08; 0,16; 0,32; dan 0,64

apakah

µg/mL.

mikroorganisme lain pada medium dan

Larutan DMSO (dimetilsulfoksida) sebagai

untuk menghitung jumlah sel hidup per

kontrol negatif

mL

terjadi

medium.

kontaminasi

Penghitungan

sel


menggunakan haemocytometer. Di bawah

dalam LAF-cabinet. DMSO dipipet sebanyak 10

mikroskop, sel hidup terlihat sebagai 198


c)

bulatan bening, inti sel di tengah bulatan.

yang ada dalam 25 kotak pada bagian tengah

Jumlah sel pada tahap ini berkisar antara

kamar hitung. Pada setiap ulangan dilakukan

10 sampai 50x104 sel/mL.

pembacaan sebanyak 3 kali. Sel hidup terlihat

Sebanyak 10 mL medium ditambahkan ke

sebagai bulatan bening dengan inti sel di tengah

dalam sel dalam botol inkubasi dan sel

bulatan, sedangkan sel mati terlihat sebagai

diinkubasi

bercak biru yang bentuknya tidak teratur.

kembali

selama

48

jam.

Setelah masa inkubasi kedua ini berakhir, sel

diperiksa

kembali

di

Jumlah sel hidup per mL, persen proliferasi

bawah

dan persen antiproliferasi dihitung dengan

mikroskop dan jumlah sel dihitung. Sel

rumus (Doyle & Griffith, 2000) yang telah

kemudian diencerkan dengan medium

dimodifikasi : Daya hambat dinyatakan dengan

sampai mencapai jumlah sel menjadi

nilai IC50, yaitu konsentrasi senyawa murni

2x105 sel/mL untuk uji aktivitas.

dalam µg/mL medium yang dapat menghambat perkembangbiakan sel sebanyak 50% setelah

Uji Daya Hambat Terhadap Pertumbuhan Sel

masa inkubasi 72 jam. Aktivitas senyawa murni

Kanker Paru A-549 secara In Vitro

dinyatakan sebagai sitotoksik aktif terhadap sel

Larutan senyawa Tb3 dalam DMSO yang

kanker dengan inkubasi 72 jam bila nilai IC 50 ≤ 4

akan diuji pada 6 seri konsentrasi yaitu 0 µg/mL

µg/mL (Lee & Houghton, 2005; Malek et al.,

(kontrol negatif); 0,5; 1; 2; 4 dan 8 µg/mL.

2009).

Pengerjaan seri kadar perlakuan dilakukan secara aseptis di dalam LAF-cabinet. Suspensi

Analisis Data

sel distribusikan ke dalam multiwell plate 24

Selanjutnya data persentase antiproliferasi

sumuran sampai mencapai batas volume 1 mL

diplotkan ke tabel probit untuk memperoleh

dalam setiap sumurannya. Perlakuan dilakukan

nilai probit. Kemudian dibuat kurva antara log

tiga kali pengulangan, selanjutnya suspensi sel

konsentrasi

yang telah diisi zat uji diinkubasi selama 72 jam

diperoleh persamaan regresi linier y = a+bx,

pada suhu 37°C dalam inkubator 5% CO2.

dengan memasukkan nilai y = 5 (probit dari

(x)

dan

probit

(y)

sehingga

Pada kultur dilakukan tripisinasi untuk

50%), maka diperoleh nilai x (log konsentrasi),

melepaskan sel yang menempel pada dasar

nilai IC50 dengan mengkonversikan nilai log

sumur. Medium penumbuh (DMEM) pada

konsentrasi ke bentuk anti log, IC50 yaitu

masing-masing sumur dibuang terlebih dahulu

konsentrasi zat uji yang dapat menghambat

kemudian ditambahkan 40 μL tripsin-EDTA 0,2

perkembangbiakan sel sebanyak 50% setelah

% dan diinkubasi selama 8 menit. Pada masing-

masa inkubasi 72 jam

masing sumur dimasukkan 960 μL medium

2008).

penumbuh

dan

dikocok

perlahan

(Katrin & Winarno,

dengan

mikropipet hingga homogen. Sebanyak 90 μL

HASIL DAN DISKUSI

kultur sel dan 10 μL biru tripan 1% dikocok

Dari hasil pemisahan fraksi butanol dengan

hingga homogen di dalam sumur microplate well

menggunakan kromatografi kolom diperoleh

96 sumuran, selanjutnya 10 μL campuran tadi,

fraksi-fraksi terpisah yang ditampung di vial

diteteskan pada celah haemocytometer Improved

yang dimonitor pada plat KLT. Pada vial 33-44

Neubauer untuk menghitung jumlah sel hidup

pada eluen heksan : etil asetat (8 : 2) yang 199


dimonitor pada plat KLT dengan sinar UV 254

128-1300C sehingga senyawa ini dianggap

nm didapatkan satu noda pada berbagai

murni karena telah menghasilkan satu noda

perbandingan eluen yaitu heksana : etil asetat

tunggal terhadap berbagai sistem eluen dan

(7:3) Rf = 0,25; heksana : etil asetat (6:4) Rf =

range pelelehan ≤ 2. Hasil uji KLT dari senyawa

0,5; heksana : etil asetat (5:5) Rf =0,62 serta etil

Tb3.

asetat 100% Rf = 0,67. Kemudian dilakukan

Hasil pengukuran spektrum UV senyawa Tb3

rekristalisasi sehingga didapat senyawa Tb3

menunjukkan panjang gelombang berturut-

berbentuk

turut pada 271,40 nm (0,491); 281,80 nm

kristal

jarum

berwarna

putih

kekuningan seberat 301 mg.

(0,522) dan 293,40 (0,316). Didapat λ maks

Senyawa Tb3 yang diperoleh dilakukan uji titik leleh dengan menggunakan alat Fisher John.

senyawa Tb3 yaitu 281,80 nm (Tabel 1) Hasil

Spektrofotometri

UV:

Senyawa tersebut meleleh pada temperatur

Gambar 1. Hasil Spektrofotometri UV Tabel 1. Hasil Pemeriksaan Spektrofotometri UV Senyawa Tb3

Hasil

Panjang gelombang (nm)

Absorban

271,40

0,491

281,80

0,522

293,40

0,316 IR

muncul pada 2868.15 cm-1 (regang gugus CH

KBr

alifatis), sedangkan pada bilangan gelombang

memperlihatkan serapan maksimum terdapat

1600,92 cm-1 (regang gugus C=O) . Bilangan

didaerah 3419,79 cm-1 (regang OH), untuk pita

gelombang 1375,25 cm-1 adanya =CH (gugus

yang muncul pada 3024,38 cm-1 menunjukkan

alkena) sedangkan regang C-O terlihat pada

adanya =CH (gugus alkena). Untuk pita yang

bilangan gelombang 1058.92 cm-1(Tabel 2).

senyawa

Pengukuran

Tb3

spektrum

menggunakan

200


40

%T

2077.33

2314.58

35

30

2603.90

25

4000 temulawak

3500

3000

2000

501.49 457.13

1375.25

1460.11 2500

617.22 599.86

960.55

1058.92

0

2868.15

2956.87

3321.42

3419.79

5

833.25

1311.59

10

734.88

1600.92

3024.38

15

2652.12

2725.42

20

1500

1000

500 1/cm

Gambar 2. Hasil Spektrofotometri IR Tabel 2. Hasil Pemeriksaan Spektrofotometri Inframerah Senyawa Tb3 Bilangan gelombang (cm-1)

Keterangan

3419,79

regang OH

3024,38

=CH (gugus alkena)

2868,15

regang gugus CH alifatis

1600,92

regang gugus C=O

1375,25

=CH (gugus alkena )

1058,92

Regang C-O

Salah satu obat antikanker yang banyak terdapat

di

adalah

berbagai

fungsi

seluler

dan

doksorubisin.

berinteraksi dengan DNA topoisomerase II

kemoterapi

membentuk kompleks pemotongan DNA. Dalam

golongan antrasiklin yang memiliki aktivitas

penelitian ini, doksorubisin berfungsi sebagai

antikanker spektrum luas dan telah lama

standard

digunakan pada berbagai jenis kanker. Selain

mempelajari dan menganalisis produk atau

sensitif terhadap sel kanker paru, doksorubisin

kandidat antikanker yang sedang diuji. Standard

juga sensitif dan poten terhadap kanker lain

agent yaitu dasar pengujian dan standarisasi

seperti kanker serviks. Senyawa ini mempunyai

produk, penilaian kemampuan produk dan

aktivitas antikanker dan spesifik untuk fase S

pengembangan

dalam siklus sel. Mekanisme aksi doksorubisin

kontrol produk (Teicher and Andrews, 2004).

Doksorubisin

pasaran

mengubah

merupakan

agen

agent

yang

untuk

bertujuan

memonitor

untuk

kualitas

kemungkinan melibatkan ikatan dengan DNA

Menurut US NCI (United State National

melalui interkalasi di antara pasangan basa

Cancer Institute) program skrining tanaman,

serta menghambat sintesis DNA dan RNA

senyawa murni umumnya dianggap memiliki

melalui pengacauan template. Kemungkinan

efek sitotoksik yang aktif jika nilai IC50 setelah

mekanisme yang lain adalah dengan melibatkan

inkubasi antara 48 sampai 72 jam adalah 4

ikatan dengan lipid membran sel yang akan 201


μg/mL atau kurang (Lee & Houghton, 2005;

pada metafase. Zat aktif yang terdapat pada

Malek et al., 2009).

tanaman obat tersebut akan terikat pada protein

Hasil perhitungan menunjukkan bahwa sel

mikrotubular, tepatnya tubulin pada GTP, dan

yang diberi senyawa Tb3 daun Voacanga foetida

akan menghambat kemampuan tubulin untuk

(Bl.) K. Schum setelah diinkubasi selama 72 jam

berpolimerisasi

dapat

pada

sehingga menghambat pemisahan kromosom

konsentrasi 0,5; 1; 2; 4; dan 8 μg/mL. Secara

dan proliferasi sel (Harvey and Champe, 2001).

umum efek sitotoksik menunjukkan adanya

Efek sitotoksik senyawa Tb3 daun Voacanga

fenomena concentration dependent response,

foetida (Bl.) K. Schum terhadap sel kanker paru

yaitu efek sitotoksik meningkat seiring dengan

A-549 diduga dapat melalui jalur siklus sel

meningkatnya konsentrasi senyawa Tb3 yang

maupun apoptosis.

menghambat

proliferasi

sel

membentuk

mikrotubulus

diberikan. Semakin tinggi konsentrasi yang

Persentase antiproliferasi pada kelompok

digunakan, semakin kecil jumlah sel yang hidup

kontrol negatif (DMSO) sebesar 0%, sedangkan

dan aktifitas penghambatannya (persentase

pada kelompok yang diberikan senyawa Tb3

kematian)

persentase

pada konsentrasi 0,5; 1; 2; 4 dan 8 μg/mL

kematian sel setelah dihitung dengan statistik

berturut-turut adalah 20,7; 34,5; 50,0; 60,3 dan

regresi linier, pada konsentrasi 2,3632 μg/mL

70,7%. Hasil ini menunjukkan bahwa senyawa

senyawa Tb3 daun Voacanga foetida (Bl.) K.

Tb3 memiliki peningkatan persentase daya

Schum dapat menghambat 50% proliferasi sel

hambat pertumbuhan terhadap sel kanker paru

(IC50)

A-549.

makin

A-549,

tinggi.

dan

Data

doksorubisin

dapat

menghambat 50% proliferasi sel (IC50) A-549 pada konsentrasi 0,1548 μg/mL. Dalam

penelitian

Voacanga foetida (Bl.) K. Schum terhadap sel yang

kanker paru A-549 dengan inkubasi 72 jam

aktivitas

metode perhitungan langsung haemocytometer

antiproliferasi ini adalah golongan senyawa

memiliki nilai IC50 sebesar 2,3632 μg/mL yang

steroid. Senyawa steroid terdapat pada hewan,

menunjukkan bahwa senyawa Tb3 memiliki

tanaman tingkat tinggi bahkan terdapat pula

efek sitotoksik aktif terhadap sel A-549.

bertanggung

ini,

Aktivitas antiproliferasi senyawa Tb3 daun

jawab

senyawa

terhadap

pada beberapa tanaman tingkat rendah seperti jamur

(fungi),

steroid

untuk

kontrol positif doksorubisin pada konsentrasi

meningkatkan laju perpanjangan sel tumbuhan

0,04; 0,08; 0,16; 0,32 dan 0,64 μg/mL berturut-

serta

pucuk

turut adalah 34,5; 44,8; 51,7; 56,9 dan 63,8 % ,

tumbuhan. Steroid banyak terdapat di alam

dibandingkan Nilai IC50 doksorubisin terhadap

tetapi

sel A-549 adalah 0,1548 μg/mL.

merangsang dalam

antara

lain

Persentase antiproliferasi pada kelompok

pertumbuhan

jumlah

yang

terbatas

dan

mempunyai aktivitas biologis. Beberapa turunan steroid yang penting ialah steroid alkohol atau sterol (Manitto, 1981). Zat

antikanker

KESIMPULAN Hasil perhitungan menunjukkan bahwa

yang

dihasilkan

dari

senyawa Tb3 daun Voacanga foetida (Bl.) K.

tanaman, mempunyai mekanisme kerja yang

Schum terhadap sel kanker paru A-549 dengan

hampir sama dengan obat antikanker golongan

inkubasi selama 72 jam dapat menghambat

antimikotika yang menghambat proses mitosis

proliferasi sel pada konsentrasi 0,5; 1; 2; 4; dan 202


8 μg/mL dengan persen daya hambat masing-

sebesar 2,3632 μg/mL dan memliki daya

masing 20,7; 34,5; 50,0; 60,4; dan 70,7%. Secara

sitotoksik aktif terhadap sel kanker paru A-549.

umum efek sitotoksik menunjukkan adanya fenomena concentration dependent response,

UCAPAN TERIMA KASIH

yaitu efek sitotoksik meningkat seiring dengan

Terima kasih kepada Dirjen Dikti atas

meningkatnya konsentrasi senyawa Tb3 yang

Hibah Bersaing selama tiga tahun berturut-turut

diberikan. Analisis data di atas menunjukkan

dari tahun 2012 hingga tahun 2014.

bahwa senyawa Tb3 fraksi butanol daun Voacanga foetida (Bl.) K. Schum memiliki IC50 DAFTAR PUSTAKA Anonim,

2013, Cancer, World Health Organisation (WHO), http://www.who.int/mediacentre/facts heets/fs297/en/, diakses pada tanggal 25 Juli 2013 Boyle P., dan Ferlay J., 2005, Cancer Incidence and Mortality in Europe 2004, Annals of Oncology, 16: 481 – 488. Doyle A., dan Griffith, B.J.S., 2000, Cell and Tissue Culture for Medical Research, John Willey and Sons, Ltd., New York. p. 12– 6, 48–9, 409. Fernando A., Susanty A., dan Hastuti I.A., 2011, In Vitro Anticancer Test from Methanol Extract Tampa Badak (Voacanga foetida (Bl.) K. Schum) Leafs Concerning L1210 Leukemia Cells, International Seminar Natural Product for Cancer Chomoprevention, Purwokerto. Harvey A.R., and Champe C.P., 2001, Farmakologi Ulasan Bergambar. Ed. IV. Widya Medika, Jakarta. hal. 94–5, 398– 9. Katrin E., dan Winarno H., 2008, Aktivitas Sitotoksik Fraksi-fraksi Etil Asetat Kulit Batang Mahkota Dewa [Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl] Terhadap Sel Kanker Manusia dan Uji Aktivitas Sitotoksik Terhadap Sel Leukemia L1210, J. Traditional Medicines, vol.13 no.45. Hal 120-127. Lee C.C., dan Houghton, P., 2005, Cytotoxicity of Plants from Malaysia and Thailand used Traditionally to Treat Cancer, J. Ethnopharmacol; 100, 237-243. Levenson, Anait S., dan Jordan V.C., 1997, MCF-7: The First Hormone-Responsive Breast Cancer Cell Line, Cancer Research, 57, 3071-3078. Malek S.N.A., Sim K.S., Norhanom A.W., and Yaacob H., 2009, Cytotoxic Components of Pereskia bleo (Kunth) DC. (Cactaceae) Leaves. Articel Molecules Vol. 14.

Institute of Biological Sciences, Faculty of Science, University of Malaya, Kuala Lumpur. Susanty A., Dachriyanus dan Mukhtar H., 2010a, Daya Antikanker Ekstrak Etanol Daun Tampa Badak (Voacanga foetida (Bl.) K. Schum). Seminar Nasional dan Rapat Tahunan Bidang Ilmu MIPA, Riau. Susanty A., Emrizal dan Sari R.K., 2012a, Uji Antikanker Senyawa Tb3 Fraksi Heksan dari Daun Tampa Badak (Voacanga foetida (Bl.) K. Schum) terhadap Sel Leukemia L1210. Jurnal Ilmiah IlmuIlmu Kefarmasian Farmasains. Vol. 1 No. 6 : ISSN 2086-6968. Susanty A., Emrizal, Mora E., Hasti S., Misya K., Dewi C.K., dan Sofia S.E., 2012b, Antiproliferation and Antileukemia from Compound Tb3 of Tampa Badak (Voacanga foetida (Bl.) K. Schum), The 24th Federation of Asian Pharmaceutical Association (FAPA) Congress, Bali. Susanty A., Fernando A., dan Suharpa, 2012c, Uji Teratogenik Ekstrak Etanol Daun Tampak Badak (Voacanga foetida (Bl.) K. Schum) pada Mencit Putih (Mus musculus L) Betina, Jurnal Artocarpus Media Pharmaceutica Indonesia Vol. 9 No. 2 : ISSN 1411-8734. Susanty A., Fernando A., Emrizal, Mora E., dan Mukrianur, 2011, In Vitro Anticancer Activity Test from Isolation Compound of Tampa Badak (Voacanga foetida (Bl.) K. Schum) Leafs Concerning L1210 Leukemia Cells, International Seminar, Natural Product for Cancer Chomoprevention, Purwokerto. Susanty A., Nurmeilis, Sari N.P., dan Sari M.D., 2010b, Potensi Daun Tampa Badak (Voacanga foetida (Bl.) K. Schum) sebagai Obat Leukemia, Kongres Ilmiah XVII dan Rapat Kerja Nasional, Makasar.

203


Susanty A., Sandi N.H., dan Sista W., 2013 a, Pengaruh Ekstrak Etanol Daun Tampak Badak (Voacanga foetida (Bl.) K. Schum) terhadap Klirens Kreatin Mencit Putih (Mus musculus L) Jantan, Jurnal Penelitian Farmasi Indonesia Vol. 1 No. 2 : ISSN 2302-187X. Susanty A., Susanti E., dan Ratnasari Y., 2013b, Efek Antipiretik Ekstrak Daun Tumbuhan Tampak Badak (Voacanga foetida (Bl.) K. Schum) terhadap Tikus

Putih (Rattus norvegicus) Jantan, Jurnal Farmasi dan Kesehatan Scientia Vol. 3 No. 1 : ISSN 2087-5045. Teicher B.A., dan Andrews P.A., 2004, Anticancer Drug Development Guide: Preclinical Screening, Clinical Trials, and Approval Second Edition, Humana Press, Totowa. Tjindarbumi, D., dan Mangunkusumo, R., 2001, Cancer in Indonesia, Present and Future, Jpn., J. Clin., Oncol,32: (Supplement 1) S17–S21

204

In Vitro Antiproliferasi Senyawa Isolat Tb3 Dari Tampa Badak (Voacanga foetida (Bl.) K. Schum) Terhadap Sel Kanker Paru A- 549

Recommend Documents