Immunoglobulinum humanum normale ad usum intravenosum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 - 1
01/2009:0918
IMMUNOGLOBULINUM HUMANUM NORMALE AD USUM INTRAVENOSUM Humán normál immunglobulin intravénás alkalmazásra
DEFINÍCIÓ Az intravénás alkalmazásra szánt humán normál immunglobulin folyékony vagy fagyasztva szárított, immunglobulinokat, főleg immunglobulin G-t (IgG) tartalmazó készítmény. A készítményben más fehérjék is jelen lehetnek. Az intravénás alkalmazásra szánt humán normál immunglobulin egészséges alanyok IgG antitestjeit tartalmazza. Ez a cikkely nem vonatkozik azokra a termékekre, amelyeket szándékosan úgy készítettek, hogy IgG fragmentumokat vagy kémiailag módosított IgG-t tartalmazzanak. Az intravénás alkalmazásra szánt humán normál immunglobulint a Humán plazma frakcionálás céljára (0853) cikkely követelményeinek megfelelő humán plazmából nyerik. A felhasznált plazmához antibiotikum nem adható. ELŐÁLLÍTÁS Az előállítási eljárásnak olyan lépés(eke)t kell tartalmaznia, amely(ek)ről igazolták, hogy alkalmas(ak) az ismert fertőző ágensek eltávolítására vagy inaktiválására. Vírusinaktiváló szerek alkalmazása esetén igazolni kell, hogy esetleges maradékuk a végtermékben nincs kedvezőtlen hatással az immunglobulinnal kezelt betegekre. Megfelelő állatkísérletekkel, illetve klinikai vizsgálatokkal bizonyítani kell, hogy a készítmény intravénás alkalmazás esetén jól tolerálható. Az intravénás alkalmazásra szánt humán normál immunglobulint legalább 1000 donor összegyűjtött plazmájából készítik, olyan módszerrel, melyről kimutatták, hogy az alkalmazásával előállított termék:
nem terjeszt fertőzést,
50 g/l immunglobulin koncentrációnál a kiindulási kevert plazmához képest legalább háromszoros koncentrációban tartalmaz legalább egy olyan virális és legalább egy olyan bakteriális antitestet, amelyből Nemzetközi Standard vagy Referenciakészítmény áll rendelkezésre,
amelyben az immunglobulin G alosztályok eloszlása meghatározott,
Immunoglobulinum humanum normale ad usum intravenosum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 - 2
megfelel az immunglobulin Fc funkciójára irányuló vizsgálat (2.7.9) követelményeinek.
Az intravénás alkalmazásra szánt humán normál immunglobulint stabilizált oldatként vagy fagyasztva szárított készítményként állítják elő. A készítményhez stabilizáló anyag hozzáadása megengedett. A készítményt mindkét esetben baktériumszűrőn bocsátják keresztül. A készítményt ezt követően fagyasztva száríthatják, amit a tartályok vákuumban vagy inert gáztérben történő lezárása követ. Mikrobiológiai tartósítószer sem frakcionálás közben, sem a letöltés előtti végtermék-oldatban nem alkalmazható. A készítmény stabilitását a fejlesztés folyamán megfelelő vizsgálatokkal igazolni kell. SAJÁTSÁGOK A folyékony készítmény tiszta vagy enyhén opálos, és színtelen vagy halványsárga lehet. A fagyasztva szárított készítmény higroszkópos, fehér vagy halványsárga por, vagy porlékony szilárd anyag. A fagyasztva szárított készítményt a címkén feltüntetett módon – közvetlenül az azonossági és a tisztasági vizsgálatok előtt (az oldékonyság és a víztartalom vizsgálata kivételével) – feloldjuk. AZONOSÍTÁS A készítményt megfelelő immunelektroforézis technikával vizsgáljuk. Normál humán szérumfehérjék elleni antiszérumot használva összehasonlítjuk a normál humán szérumot és a vizsgálandó készítményt; az összehasonlításhoz mindkettőt 10 g/l fehérje töménységűre hígítjuk. A vizsgálandó készítmény fő összetevője feleljen meg a normál humán szérum IgG összetevőjének. Az oldatban kis mennyiségben jelen lehetnek más plazmafehérjék is. Amennyiben a készítményhez humán albumint adnak stabilizáló anyagként, lehetséges, hogy főkomponensként az látható. VIZSGÁLATOK Oldékonyság. A fagyasztva szárított készítményhez a címkén megjelölt folyadék megadott térfogatát adjuk. A készítménynek 20-25 °C-on, 30 percen belül teljesen fel kell oldódnia. pH (2.2.3): 4,0–7,4. A vizsgálandó készítményt R nátrium-klorid 9 g/l töménységű oldatával úgy hígítjuk, hogy 10 g/l fehérjetartalmú oldatot nyerjünk. A hígított oldatot vizsgáljuk.
Immunoglobulinum humanum normale ad usum intravenosum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 - 3
Ozmolalitás (2.2.35): legalább 240 mosmol/kg. Összes fehérje: legalább 30 g/l, illetve a címkén megjelölt tartalom 90–110%a. A vizsgálandó készítményt R nátrium-klorid 9 g/l töménységű oldatával úgy hígítjuk, hogy 2 ml oldat kb. 15 mg fehérjét tartalmazzon. Az oldat 2,0 ml-éhez kerek aljú centrifugacsőben R nátrium-molibdenát 75 g/l töménységű oldatának 2 ml-ét, valamint 1 térfogatrész R nitrogénmentes tömény kénsav és 30 térfogatrész R víz elegyének 2 ml-ét adjuk. Az elegyet összerázzuk, 5 percig centrifugáljuk, a felülúszó folyadékot leöntjük és a nyílásával lefelé fordított csövet szűrőpapírra állítjuk, hogy az felszívja a maradék nedvességet. A maradék nitrogéntartalmát kénsavas roncsolásos módszerrel (2.5.9) meghatározzuk, és az eredményt 6,25-dal szorozva kiszámítjuk a fehérjetartalmat. Fehérjeösszetétel. Zónaelektroforézis (2.2.31). Hordozóként megfelelő cellulóz-acetát vagy agaróz gélcsíkokat, elektrolitoldatként pedig R1 barbitál–tompítóoldatot (pH 8,6) használunk. Amennyiben cellulóz-acetátot használunk hordozóként, az alábbiakban leírt módszer alkalmazható. Ha agaróz géleket használunk, mivel ezek rendszerint egy automatizált rendszer részét képezik, a gyártó utasításai szerint kell eljárni. Vizsgálati oldat. A vizsgálandó készítményt R nátrium-klorid 9 g/l töménységű oldatával úgy hígítjuk, hogy az oldat immunglobulin koncentrációja 30 g/l legyen. Összehasonlító oldat. BRP elektroforézis céljára szánt humán immunglobulint R nátrium-klorid 9 g/l töménységű oldatával úgy hígítjuk, hogy az oldat fehérjekoncentrációja 30 g/l legyen. A vizsgálati oldat 4,0 l-ét, 10 mm-es sávban visszük fel, vagy – ha keskenyebb csíkot használunk – milliméterenként 0,4 l-t juttatunk a csíkra. Egy másik csíkra ugyanilyen módon, ugyanekkora térfogatú összehasonlító oldatot viszünk fel. Olyan elektromos térerőt alkalmazunk, hogy a kontroll csíkra felvitt normál humán szérum-albumin sávja legalább 30 mm-t vándoroljon. A csíkokat R amidofekete-10B–oldattal 5 percen keresztül festjük. A csíkokat ezután 10 térfogatrész R tömény ecetsav és 90 térfogatrész R metanol elegyével addig kezeljük, amíg a háttér éppen elszíntelenedik. A csíkokat 19 térfogatrész R tömény ecetsav és 81 térfogatrész R metanol elegyével átlátszóvá tesszük. A sávok abszorbanciáját 600 nm-en mérjük, olyan eszközzel, mely a méréstartományon belül lineáris választ ad. Az eredményt csíkonként 3 mérés átlagából számoljuk ki. Rendszeralkalmasság: az összehasonlító oldattal nyert cellulóz-acetát vagy agaróz gél elektroferogramon a fősávban található fehérje aránya az összehasonlító készítmény kísérőiratában megjelölt határok közé essen.
Immunoglobulinum humanum normale ad usum intravenosum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 - 4
Értékelés: a vizsgálati oldattal nyert cellulóz-acetát vagy agaróz gél elektroferogramon a fehérjék legfeljebb 5%-ának lehet a fősávétól eltérő mozgékonysága. Ez a határérték nem alkalmazható, ha a készítményhez albumint adtak stabilizáló anyagként. Ilyen készítmények esetén a fehérjeösszetétel vizsgálatát gyártás közben kell elvégezni, a stabilizáló anyag hozzáadása előtt. Molekulaméret-eloszlás. Folyadékkromatográfia (2.2.29). Vizsgálati oldat. A vizsgálandó készítményt R nátrium-klorid 9 g/l töménységű oldatával olyan töménységűre hígítjuk, amely alkalmazható a használt kromatográfiás rendszerben. 4–12 g/l töménység és 50–600 g mennyiségű injektált fehérje általában megfelelő. Összehasonlító oldat. BRP (molekulaméret) humán immunglobulint R nátriumklorid 9 g/l töménységű oldatával úgy hígítunk, hogy a vizsgálati oldatéval azonos fehérjekoncentrációjú oldatot nyerjünk. Oszlop:
méret: l = 0,6 m, = 7,5 mm vagy l = 0,3 m, = 7,8 mm,
állófázis: 10 000–500 000 relatív molekulatömeg-tartományba eső globuláris fehérjék frakcionálásra alkalmas R kromatográfiás célra szánt hidrofil szilikagél.
Mozgófázis: 4,873 g R dinátrium-hidrogén-foszfát-dihidrátot, 1,741 g R nátrium-dihidrogén-foszfát-monohidrátot, 11,688 g R nátrium-kloridot és 50 mg R nátrium-azidot 1 liter R vízben oldunk. Áramlási sebesség: 0,5 ml/perc. Detektálás: spektrofotométerrel, 280 nm-en. Az összehasonlító oldattal kapott kromatogram főcsúcsa az IgG monomernek felel meg. Egy további csúcs a dimernek felel meg, a monomerhez viszonyított kb. 0,85 relatív retencióval. A vizsgálati oldat kromatogramján megjelenő csúcsokat az összehasonlító oldat kromatogramjával összevetve azonosítjuk; a dimerénél rövidebb retenciós idővel megjelenő csúcsok polimereknek és aggregátumoknak felelnek meg. Értékelés: a vizsgálati oldat kromatogramján:
relatív retenció: a monomer és a dimer relatív retenciója, az összehasonlító oldat kromatogramján megjelenő megfelelő csúcsokra vonatkoztatva: 1 ± 0,02,
csúcsterület: a monomer és dimer csúcsok területének összege a kromatogram teljes csúcsterületének legalább 90%-a, a polimerek és az aggregátumok csúcsterületének összege pedig a kromatogram teljes csúcsterületének legfeljebb 3%-a; ez a követelmény nem vonatkozik azokra a termékekre, amelyekhez albumint adtak stabilizáló anyagként.
Immunoglobulinum humanum normale ad usum intravenosum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 - 5
Albuminnal stabilizált termékek esetén a molekulaméret eloszlásának vizsgálatát gyártás közben végzik el, a stabilizáló anyag hozzáadása előtt. Antikomplement aktivitás.(2.6.17). A komplement-fogyás legfeljebb 50% (1 CH50 immunglobulin milligrammonként). Prekallikrein aktivátor (2.6.15). legfeljebb 35 NE/ml, a vizsgálandó készítmény 30 g/l immunglobulin tartalmú hígítására számolva. Anti-A és anti-B hemagglutininek (2.6.20). Elvégezzük az anti-A és anti-B hemagglutininek vizsgálatát. Ha a vizsgálandó készítmény immunglobulin tartalma több, mint 30 g/l, hígítsuk ilyen töménységűre, mielőtt elkészítenénk a vizsgálatban használandó hígításokat. Az 1:64-es hígítások nem mutathatnak agglutinációt. Anti-D ellenanyagok (2.6.26). A készítmény feleljen meg az intravénás alkalmazásra szánt humán immunoglobulin anti-D ellenanyagainak meghatározására irányuló vizsgálat követelményének. Hepatitisz B felszíni antigén elleni ellenanyag: legalább 0,5 NE/g immunglobulin, melyet megfelelő immunkémiai módszerrel (2.7.1) határozunk meg. Immunglobulin A. Megfelelő immunkémiai módszerrel (2.7.1) meghatározva, az immunglobulin A tartalom nem lehet magasabb, mint a címkén feltüntetett legnagyobb érték. Víztartalom. A megfelelő módszerrel, mint pl. félmikro-vízmeghatározással (2.5.12), a szárítási veszteség mérésével (2.2.32), vagy közeli infravörös spektrofotometriával (2.2.40) mért víztartalomnak az illetékes hatóság által jóváhagyott határokon belül kell lennie. Sterilitás (2.6.1). A készítmény feleljen meg a sterilitási vizsgálat követelményeinek. Pirogének (2.6.8). A készítmény feleljen meg a pirogén vizsgálat követelményeinek. A nyulaknak testtömegkilogrammonként 0,5 g immunglobulinnak megfelelő térfogatot adunk be, de testtömegkilogrammonként legfeljebb 10 ml-t. ELTARTÁS A folyékony készítményt színtelen üvegtartályban, fénytől védve, a címkén megadott hőmérsékleten. A fagyasztva szárított készítményt légmentesen záró, színtelen üvegtartályban, fénytől védve, 25 °C-ot meg nem haladó hőmérsékleten. FELIRAT
Immunoglobulinum humanum normale ad usum intravenosum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.6.3 - 6
A feliraton fel kell tüntetni:
folyékony készítmény esetén a tartályban levő folyadék térfogatát, és g/lben kifejezett fehérjetartalmát,
fagyasztva szárított készítményeknél a tartályban lévő fehérjetartalmat,
a tartályban levő immunglobulin mennyiségét,
az alkalmazás módját,
fagyasztva szárított készítményeknél a feloldásra használandó folyadék nevét vagy összetételét, valamint térfogatát,
a készítményben jelen levő immunglobulin G alosztályok eloszlását,
adott esetben a hozzáadott stabilizáló albumin mennyiségét,
a legnagyobb immunglobulin A tartalmat.
