IDENTIFIKASI CEMARAN SALMONELLA sp DAN ISOLASI BAKTERIOFAGE SEBAGAI BIOKONTROL DALAM PENANGANAN PASCA PANEN UDANG VANNAMEI (LITOPENNAUS VANNAMEI)
(Tesis)
Oleh : MUMPUNI UJI KAWEDAR ANJUNG
PROGRAM PASCA SARJANA MAGISTER TEKNOLOGI AGROINDUSTRI PERTANIAN FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS LAMPUNG BANDAR LAMPUNG 2016
ABSTRACT
CONTAMINATION IDENTIFICATION AND ISOLATION BACTERIOPHAGE OF SALMONELLA sp AS BIOCONTROL IN POSTHARVEST VANNAMEI SHRIMP (LITOPENNAUS VANNAMEI)
By
MUMPUNI UJI KAWEDAR ANJUNG
Indonesia's shrimp production has increased every year, but the export to overseas encountered resistance and rejection, which are caused by bacterial contamination of Salmonella sp. Salmonella contamination causes a decrease in the quality and shrimp is not safe to eat. Decrease in Salmonella contamination during cultivation and processing with the use of antibiotics banned for causing a negative effect on consumers. One alternative natural ingredients that are safe to use to reduce Salmonella contamination is the use of bacteriophages. This study was conducted to identify the Salmonella contamination to the decline of the organoleptic quality of vannamei shrimp, isolate Salmonella bacteria and Salmonella’s bacteriophages in vannamei shrimp. The study was conducted by taking a sample of vannamei shrimp from the District of Wonosobo, Kotaagung, Padang Cermin and Eastern Rawajitu respectively of 3 replications to test the organoleptic quality and identification of Salmonella bacteria contamination. Salmonella isolates produced subsequently used as a host cell for the isolation of bacteriophage virulent to Salmonella by following the method used by Sartika (2012). Salmonella contamination on vannamei shrimp from the District of Wonosobo, Kotaagung and Padang Cermin resulted shrimp samples decreased organoleptic value. Organoleptic value of District of Wonosobo shrimp sample was 8.80, 7.79 and 8.54, District Kotaagung 8.93 8.54, and 7.59, while the District of Padang Cermin 8.80, 8.80 and 8.36. Average organoleptic shrimp from District of East Rawajitu 9, meaning not change the quality of fresh shrimp. Average organoleptic shrimp still above 7 so that they can be accepted by consumers and has not shown any decay due to Salmonella contamination. Vannamei shrimp samples from
District of Wonosobo 100% positive contaminated with Salmonella, District Kotaagung and District Padang Cermin a 33.3% positive samples contaminated with Salmonella while Rawajitu Eastern District of shrimp, no contaminated with Salmonella. The result of the isolation of Salmonella isolates obtained 2 as a candidate host for insulation bacteriophages. Obtained 42 isolates of bacteriophages as biocontrol Salmonella on post-harvest handling of Vannamei shrimp. KEYWORDS: Salmonella, bacteriophage, Vannamei shrimp, Post-Harvest
ABSTRAK
IDENTIFIKASI CEMARAN SALMONELLA sp DAN ISOLASI BAKTERIOFAGE SEBAGAI BIOKONTROL DALAM PENANGANAN PASCA PANEN UDANG VANNAMEI (LITOPENNAUS VANNAMEI)
Oleh
MUMPUNI UJI KAWEDAR ANJUNG
Produksi udang Indonesia setiap tahunnya mengalami peningkatan, namun ekspor udang ke luar negeri mengalami hambatan dan penolakan, diantaranya disebabkan oleh cemaran bakteri Salmonella sp. Cemaran bakteri Salmonella menyebabkan penurunan mutu udang tidak aman dikonsumsi. Penurunan cemaran Salmonella selama budidaya dan pengolahan dengan menggunakan antibiotik dilarang karena menyebabkan efek negatif terhadap konsumen. Salah satu alternatif bahan alami yang aman digunakan untuk menurunkan cemaran Salmonella adalah penggunaan bakteriofage. Penelitian ini dilakukan untuk mengidentifikasi cemaran Salmonella terhadap penurunan mutu organoleptik udang vannamei, mengisolasi bakteri Salmonella dan bakteriofage Salmonella pada udang vannamei. Penelitian dilakukan dengan mengambil sampel udang vannamei dari Kecamatan Wonosobo, Kotaagung, Padang Cermin dan Rawajitu Timur masingmasing sebanyak 3 ulangan untuk dilakukan uji terhadap mutu organoleptik dan identifikasi cemaran bakteri Salmonella. Isolat Salmonella yang dihasilkan selanjutnya digunakan sebagai sel inang untuk isolasi bakteriofage Salmonella dengan mengikuti metode yang digunakan Sartika (2012). Cemaran Salmonella pada udang vannamei dari Kecamatan Wonosobo, Kotaagung dan Padang Cermin mengakibatkan sampel udang mengalami penurunan nilai organoleptik. Nilai organoleptik sampel udang dari Kecamatan Wonosobo adalah 8,80, 7,79 dan 8,54, Kecamatan Kotaagung 8,93 8,54, dan 7,59, sedangkan Kecamatan Padang Cermin 8,80, 8,80 dan 8,36. Rata-rata organoleptik udang dari Kecamatan Rawajitu Timur 9, artinya belum mengalami perubahan
mutu udang segar. Rata-rata organoleptik udang masih di atas 7 sehingga masih dapat diterima oleh konsumen dan belum menunjukkan adanya pembusukan akibat cemaran Salmonella. Udang vannamei Kecamatan Wonosobo 100% positif tercemar Salmonella, Kecamatan Kotaagung dan Kecamatan Padang Cermin sejumlah 33,3% positif tercemar Salmonella sedangkan sampel udang Kecamatan Rawajitu Timur, tidak ada yang tercemar Salmonella.. Hasil isolasi Salmonella diperoleh 2 isolat Salmonella sebagai kandidat inang untuk isolasi bakteriofage. Diperoleh 42 isolat bakteriofage Salmonella sp sebagai biokontrol Salmonella pada penanganan pasca panen udang Vannamei. KATA KUNCI : Salmonella, Bakteriofage, Udang Vannamei, Pasca Panen
IDENTIFIKASI CEMARAN SALMONELLA sp DAN ISOLASI BAKTERIOFAGE SEBAGAI BIOKONTROL DALAM PENANGANAN PASCA PANEN UDANG VANNAMEI (LITOPENNAUS VANNAMEI) Oleh : MUMPUNI UJI KAWEDAR ANJUNG
Tesis Sebagai Salah Satu Syarat untuk Mencapai Gelar MAGISTER SAINS Pada Program Pascasarjana Magister Teknologi Industri Pertanian Fakultas Pertanian Universitas Lampung
PROGRAM PASCASARJANA MAGISTER TEKNOLOGI AGROINDUSTRI PERTANIAN FAKULTAS PERTANIAN UNIVERSITAS LAMPUNG BANDAR LAMPUNG 2016
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Kediri, pada tanggal 24 Juni 1979 merupakan istri dari Endang Ismail, A.Pi, M.Si dan ibu dari Rasyid Rahmat Suria, Arsyad Rahmat Mustakim serta Dafinah Rahmah Alya. Penulis merupakan anak ke lima buah hati pasangan Andjung Marsono, BA dan Dra. Sofaria Tabri Utami.
Penulis menyelesaikan pendidikan di Taman Kanak-kanak di TK Raudatul Atfal, Madiun pada tahun 1986, kemudian melanjutkan ke SD N Madiun Lor XII hingga lulus tahun 1992. SLTP penulis tekuni di SMP N 7 Madiun hingga tahun 1995 dan dilanjutkan ke jenjang SLTA di SMA N 1 Madiun sampai tahun 1998. Pada tahun 1998 penulis mengawali masa perkuliahan di Sekolah Tinggi Perikanan, Jakarta, Jurusan Teknologi Pengolahan Hasil Perikanan hingga lulus pada tahun 2002.
Pada tahun 2002, penulis bekerja sebagai Quality Control pada perusahaan pengolahan perikanan, PT. ISCP di Benoa, Bali. Pada tahun 2003 penulis diterima sebagai PNS di lingkup Kementerian Kelautan dan Perikanan, serta ditempatkan di Sekolah Usaha Perikanan Menengah Negeri Kotaagung sebagai guru hingga sekarang. Penulis melanjutkan pendidikan pada Program Studi Magister Teknologi Industri Pertanian, Universitas Lampung dari tahun 2013 hingga 2016.
KEPADA SUAMI TERCINTA DAN ANAK-ANAKKU TERSAYANG
SANCAWACANA
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah S.W.T, karena atas rahmat dan hidayah-Nya tesis ini dapat diselesaikan. Tesis dengan judul “Identifikasi Cemaran Salmonella sp dan Isolasi
Bakteriofage Sebagai Biokontrol Dalam
Penanganan Pasca Panen Udang Vannamei (Litopennaus Vannamei) “ adalah salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magisster Sains di Universitas Lampung. Dalam kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada : 1. Dr. Dewi Sartika, STP, M.Si, selaku Pembimbing Utama sekaligus Pembimbing Akademik. 2. Ir. Susilawati, M.Si, selaku Pembimbing Kedua. 3. Prof. Ir. Neti Yuliana, Ph.D, selaku Pembahas. 4. Dr. Sri Hidayati, S.T.P., M.P, selaku Ketua Program Studi Magister Teknologi Industri Pertanian Unila. 5. Prof. Dr. Ir. Irwan Sukri Banuwa, M.Si, selaku Dekan Fakultas Pertanian Unila. 6. Prof. Dr. Sudjarwo, M.S. selaku Direktur Program Pasca Sarjana. 7. Suami tercinta dan anak-anakku Rasyid, Arsyad, Alya serta keluarga besar Papi, Mami, Puh Ita, Puh Ake, Puh Tang, Puh La, serta keluarga besar Anjung dan keluarga besar Hadi bin Tuti. 8. Rekan-rekan Magister Teknologi Industri Pertanian angkatan 2013 (Dian Wulandari, Sintawati, Nursiti, Dian Puspitorini, Zana, Rio, Mr Arafat).
9. Adik-adik S1 (Anitsa, Lia, Nabila, Yoan, Gusman dkk), Laboran, dosen serta karyawan MTIP dan THP, teman-teman SKI serta semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu-persatu. Akhir kata, penulis menyadari bahwa tesis ini masih jauh dari kesempurnaan. Akan tetapi sedikit harapan penulis semoga tesis ini dapat berguna dan bermanfaat bagi pembaca dan penulis.
Bandarlampung, Maret 2016
Penulis
DAFTAR ISI
Halaman HALAMAN JUDUL ......................................................................................
ii
HALAMAN PERSETUJUAN ......................................................................
iii
HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................
iv
DAFTAR ISI ..................................................................................................
vi
DAFTAR TABEL .......................................................................................... viii DAFTAR GAMBAR ......................................................................................
ix
I.
PENDAHULUAN .................................................................................
1
A. Latar Belakang dan Masalah……………………………. .................
1
B. Tujuan ................................................................................................
4
C. Kerangka Pemikiran ..........................................................................
5
D. Hipotesis ............................................................................................
7
TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................
8
A. Bakteriofage ………………………….. ...........................................
8
1. Karakteristik Bakteriofage .............................................................
9
2. Aplikasi Bakteriofage .....................................................................
10
B. Salmonella sp ....................................................................................
14
1. Ciri-ciri Salmonella ........................................................................
14
2. Klasifikasi Salmonella ...................................................................
15
3. Patogenesis .....................................................................................
17
4. Pencegahan dan Penurunan Cemaran Salmonella Pada Pangan ....
18
II.
C. Isolasi Salmonella dan bakteriofage Salmonella ...............................
19
D. Penanganan Pasca Panen Udang Vannamei.......................................
25
1. Komposisi Kimia Udang Vannamei ..............................................
25
2. Kemunduran Mutu Pasca Panen Udang Vannamei .......................
25
3. Prosedur Penanganan Pasca Panen Udang Vannamei ...................
29
4. Standar Mutu Udang Segar ............................................................
30
III. METODE .................................................................................................
32
A. Tempat dan Waktu Penelitian ............................................................
32
B. Bahan dan Alat ..................................................................................
32
C. Metode Penelitian ..............................................................................
32
D Pelaksanan Penelitian .........................................................................
33
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................
38
A. Identifikasi Cemaran Salmonella dengan Uji Organoleptik ..............
39
B. Isolasi dan Pengkayaan Salmonella ...................................................
46
C. Isolasi Bakteriofage Sebagai Biokontrol Salmonella..........................
56
V. SIMPULAN DAN SARAN .......................................................................
64
A. Simpulan ............................................................................................
64
B. Saran ...................................................................................................
65
DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN
DAFTAR TABEL
Tabel
Halaman
1. Bakteri Patogen Penyebab Keracunan Makanan dan Penyakit Terkait .......
16
2. Alternatif Sistem Pre-Enrichment yang Digunakan Untuk Beberapa Jenis Pangan ...............................................................................................................
23
3. Alternatif Metode Untuk Skrining Salmonella .............................................
24
4. Komposisi Kimia Udang Vannamei ............................................................
25
5. Persyaratan Mutu dan Keamanan Pangan Udang Segar ..............................
31
6. Kriteria Penilaian Organoleptik Udang ........................................................
34
7. Nilai Pengujian Organoleptik Udang Vannamei di Kecamatan Wonosobo, Kotaaagung, Padang Cermin dan Rawajitu Timur ..........................................
39
8. Hasil Pengujian Cemaran Salmonella pada Udang Vannamei di Kecamatan Wonosobo, Kotaaagung, Padang Cermin dan Rawajitu Timur ....................... 47
9. Data Deskriptif Cemaran Salmonella pada Udang Vannamei di Kecamatan Wonosobo, Kotaaagung, Padang Cermin dan Rawajitu Timur .......................
48
10. Kuantifikasi Cemaran Salmonella pada Udang Vannamei di Kecamatan Wonosobo, Kotaaagung, Padang Cermin dan Rawajitu Timur .......................
48
14. Hasil Isolasi Bakteriofage ..........................................................................
58
DAFTAR GAMBAR
Gambar
Halaman
1. Elektron Mikrograph Struktur Umum Bakteriofage ..............................
9
2. Daur Lisis ................................................................................................
11
3. Scanning Mikrograf Salmonella typhimurium .......................................
15
4. Virulen faktor pada patogenesis Salmonella ...........................................
18
5. Conventional Method for the isolation and identification of Salmonella sp ............................................................................................................
20
6. Degradasi ATP Pada Udang ....................................................................
27
7. Flowchart Penelitian ................................................................................
37
8. Sampel Udang Vannamei ........................................................................
38
9. Hasil Positif Isolasi Salmonella Pada Media XLD .................................
46
10. Hasil Negatif Isolasi Salmonella Pada Media XLD ..............................
47
11. Lokasi Budidaya Kecamatan Wonosobo dan Pemukiman ....................
50
12. Lokasi Budidaya Kecamatan Padang Cermin .......................................
51
13. Lokasi Budidaya Kecamatan Kotaagung ...............................................
51
14. Lokasi Budidaya Kecamatan Rawajitu Timur ......................................
51
15. Peremajaan Isolat Salmonella ...............................................................
56
16. Double Layer Tanpa Zona Bening ........................................................
57
17. Double Layer Menghasilkan Zona Bening ...........................................
57
18. Hasil Positif Isolasi Bakteriofage ..........................................................
61
1
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang dan Masalah Indonesia merupakan salah satu produsen dan eksportir utama produk perikanan, terutama udang. Jenis udang yang banyak dibudidayakan di Indonesia antara lain udang windu, udang galah dan udang vannamei. Udang vannamei (Litopenaeus vannamei) adalah salah satu spesies udang varietas unggul yang saat ini dikembangkan oleh para pembudidaya udang di Indonesia. Udang vannamei merupakan udang introduksi yang resmi diperkenalkan di Indonesia pada tahun 2001 (Subyakto, 2009) dengan tujuan meningkatkan produksi udang Indonesia. Peningkatan produksi udang pada kenyataannya tidak diimbangi peningkatan ekspor udang. Permintaan ekspor udang Indonesia mengalami penurunan, hal ini terlihat pada permintaan ekspor udang tahun 2009 sebesar 208.802 ton, turun menjadi 100.800 ton pada tahun 2010 (Pusat Data Statistik dan Informasi, 2012). Ekspor udang pada tahun 2011 mengalami peningkatan menjadi 119.828,4 ton, pada tahun 2012 sebesar 122.898,8 ton, pada tahun 2013 meningkat menjadi 126.969,9 ton dan pada tahun 2014 tercatat sebesar 148.519,4 ton (Badan Pusat Statistik, 2015). Ekspor udang ke Amerika Serikat, Uni Eropa dan Jepang pada periode 2011-2012 juga tercatat mengalami penurunan volume ekspor. Volume ekspor ke Uni Eropa turun dari 102.334 ton menjadi 87.116 ton, ekspor ke Amerika Serikat dari 70.059 ton menjadi 62.194 ton sedangkan ekspor ke Jepang turun dari 37.897
2
ton menjadi 33.521 ton. Penurunan tersebut karena sebagian udang ekspor Indonesia tidak memenuhi standar mutu negara konsumen, diantaranya bebas bakteri patogen, antibiotik dan pengawet. Menurut SNI 01-2728.1-2006, udang harus bebas bakteri Salmonella dan Vibrio cholera (Badan Standardisasi Nasional, 2006). Sedangkan Kementerian Kelautan dan Perikanan mentargetkan pada tahun 2016 peningkatan volume produksi udang meningkat menjadi 600.000 ton (Wardani, 2016) dan sebagian besar (50%) ditujukan untuk ekspor (Noviani, 2013). Hal ini menjadi kendala bagi pemasaran udang Indonesia ke pasar ekspor. Udang ekspor dari Indonesia ditolak karena pada umumnya terkontaminasi bakteri Salmonella. Amerika Serikat hingga tahun 2012 menolak 181 produk perikanan dari Indonesia karena tercemar Salmonella (Supriadi, 2012). Demikian pula Uni Eropa hingga 2011 menolak 17 produk perikanan dari Indonesia. Food and Drug Administration (FDA) pada Juli 2013 menolak 5 lot Udang vannamei yang diekspor dari Indonesia karena dilaporkan tercemar bakteri Salmonella (Maas, 2013). Cemaran Salmonella merupakan indikasi kurangnya sanitasi pada penanganan pangan. Cemaran Salmonella pada pangan menyebabkan Salmonellosis. Salmonellosis dapat menimbulkan infeksi serius bagi manusia dan melemahkan sistem kekebalan pada anak-anak, wanita tua dan hamil. Gejala Salmonellosis umumnya adalah sakit kepala, demam, kekejangan perut, diare, mual dan muntah (Multi Cultural Health Communication, 2011). Pada manusia, pola klinis Salmonellosis meliputi demam enterik, gastroenteristis, bakteremia dan komplikasi nonthypoid sebagai carrier (Pui et al, 2011). Cemaran Salmonella pada udang juga dapat menyebabkan penurunan mutu udang secara organoleptik sehingga tidak diterima
3
oleh konsumen. Untuk mengurangi akibat cemaran Salmonella, harus dilakukan penurunan paparan Salmonella pada pangan yang umumnya dilakukan dengan penggunaan antibiotik dan pengawet sintetis oleh pembudidaya maupun industri pengolah udang. Penggunaan antibiotik pada udang selama budidaya dan pengolahan dilarang, baik di Indonesia maupun negara tujuan ekspor. Ekspor udang yang terdeteksi terdapat komponen antibiotik akan ditolak. Penggunaan antibiotik pada dosis yang tidak sesuai, selain menyebabkan resistensi antibiotik (Bahri, 2008) juga dapat memberikan efek negatif yaitu produk pangan tidak aman dikonsumsi, reaksi hipersensitivitas, bahkan depresi sumsum tulang belakang (Wibowo et al, 2010) atau gangguan fisiologis pada manusia. Bahan-bahan alami dibutuhkan sebagai alternatif dalam menurunkan cemaran Salmonella. Salah satu alternatif bahan alami yang aman digunakan adalah penggunaan bakteriofage. Bakteriofage adalah virus yang inangnya bakteri. Mekanisme bakteriofage menginfeksi sel inangnya menyebabkan pengrusakan total terhadap bakteri dengan cara melisiskan bakteri inang (Davidson, 2003). Bakteriofage dapat digunakan sebagai agen hayati (biocontrol) Salmonella yang ramah lingkungan. Bakteriofage nanomedicines bersifat aman untuk toksisitas dan imunogenetik (Vaks and Benhar, 2011). Modifikasi kombinasi bakteriofage, SalmoLyse ™, secara signifikan dapat mengurangi kontaminasi permukaan oleh Salmonella paratyphii (Woolston, et al, 2013). Bakteriofage juga telah
menjadi
alternatif
biocontrol
Salmonella
serovar
enteritidis
dan
typhimurium pada makanan siap saji, ternak, buah dan sayuran (Kang et al,
4
2013). Terapi bakteriofage secara oral pada manusia dinyatakan aman (McCallin et al, 2013) Di Indonesia belum tersedia bakteriofage secara komersial. Hal ini disebabkan karena penelitian tentang bakteriofage masih sedikit. Penelitian bakteriofage yang telah dilakukan ditemukan isolasi, spesifitas, karakterisasi dan keamanan bakteriofage. Bakteriofage hanya melisiskan bakteri target, sehingga bakteriofage untuk melisiskan Salmonella sp dapat diperoleh dari isolasi bakteriofage yang berasal dari media yang tercemar bakteri Salmonella sp (Atterbury, et al, 2007). Bakteriofage yang dapat melisiskan Salmonella pada udang vannamei dapat diperoleh dengan mengisolasi bakteriofage dengan menggunakan Salmonella yang terdapat pada udang dan lingkungannya. Penelitian bakteriofage di Indonesia tidak diiringi pemanfaatannya pada pangan dan lingkungan secara komersial. Pemanfaatan bakteriofage Salmonella secara komersial memerlukan penelitian tentang isolasi dan pemanfaatan bakteriofage. Pada penelitian ini dilakukan uji organoleptik udang vannamei dan isolasi Salmonella pada udang vannamei segar untuk mengetahui kemunduran mutu akibat cemaran Salmonella pada udang vannamei segar, serta dan isolasi bakteriofage sebagai biokontrol dalam menurunkan Salmonella. Hasil penelitian ini diharapkan dapat menurunkan cemaran Salmonella.
B. Tujuan Tujuan penelitian ini adalah : 1. Mengidentifikasi cemaran Salmonella pada udang vannamei terhadap penurunan mutu organoleptik.
5
2. Mengidentifikasi dan mengisolasi bakteri Salmonella pada udang vannamei 3. Mengisolasi bakteriofage Salmonella sp pada udang Vannamei.
C. Kerangka Pemikiran Udang merupakan bahan makanan yang tergolong mudah rusak (perishable food) atau menurun mutunya segera setelah udang mati. Perubahan-perubahan yang terjadi setelah ikan mati secara garis besar adalah terjadinya rigormortis kemudian autolisis dan terakhir pembusukan (Sanger, 2010). Pada saat mulai terjadi pembusukan, jumlah bakteri meningkat. Penilaian mutu udang dapat dilakukan secara sensori dengan uji organoleptik. Pengujian organoleptik merupakan cara pengujian menggunakan indera manusia sebagai alat utama untuk menilai mutu ikan hidup dan produk perikanan yang segar utuh (Badan Standardisasi Nasional, 2006). Pengamatan dilakukan dengan uji organoleptik berdasarkan SNI 01-2728.1-2006 terhadap udang untuk mengetahui penerimaan konsumen terhadap sampel udang. Kriteria udang mutu udang segar adalah kenampakan udang utuh, bening bercahaya asli menurut jenis, antar ruas kokoh hingga kurang bening, cahaya mulai pudar, berwarna asli, bau sangat segar spesifik jenis hingga netral, tekstur sangat elastis hingga kurang elastis, kompak dan padat. Kriteria mutu udang yang mengalami pembusukan oleh bakteri adalah warna merah sangat kusam, noda hitam banyak, bau amoniak kuat dan bau busuk, tekstur udang lunak. Penurunan mutu udang dapat disebabkan oleh cemaran bakteri Salmonella. Udang dapat tercemar oleh Salmonella dan beberapa bakteri lain sekaligus,.
6
Isolasi Salmonella akan memisahkan Salmonella dari bakteri lain yang mencemari udang tersebu,t seperti E. Coli, Shigella dan Vibrio. Isolasi bakteri merupakan suatu cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu dari lingkungannya sehingga diperoleh kultur murni atau biakan murni. Isolasi Salmonella dilakukan dengan metode konvensional dengan media Xylose Lysine Deoxycholate agar (XLD). Media XLD memiliki konsentrasi deoksikolat yang tinggi (0,25%) sehingga menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dan bakteri gram negatif seperti Salmonella dapat tumbuh. XLD dapat membedakan Salmonella dan Shigella karena medium ini mengandung xilosa laktosa dan sukrosa yang difermentasi oleh sebagian besar coloform intestinal normal yang menghasilkan
koloni
kuning.
Shigella
tidak
menghasilkan koloni warna merah (atau jernih).
memfermentasi
gula
dan
Salmonella memfermentasi
xilasa, namun bakteri ini melakukan dekarboksilasi lisin pada medium, menyebabkan produksi amonia. Salmonella akan memfermentasi laktosa dan sukrosa hadir dalam medium ke tingkat yang akan mencegah pH reversi oleh dekarboksilasi dan mengasamkan media mengubahnya kuning, sehingga Salmonella pada awalnya tampak berwarna kuning tetapi kemudian menjadi merah. Salmonella menghasilkan hidrogen sulfida dari natrium tiosulfat dan karenanya tampak sebagai koloni merah dengan pusat hitam. Pada saat diperoleh isolat Salmonella, akan dipilih yang paling stabil, tidak smear, warna koloni hitam mengkilat dan isolat tersebut yang akan dimurnikan. Penurunan cemaran Salmonella dapat dilakukan dengan penggunaan bakteriofage. Bakteriofage pada perkembangbiakan secara vegetatif akan melisiskan bakteri inang sehingga bakteri inang mati (Haq, et al, 2012).
7
Bakteriofage litik yang menginfeksi sel bakteri akan mengakibatkan bakteriofage bereplikasi di dalam sel inang dan akan membentuk sejumlah bakteriofage baru, kemudian akan membuat sel inang pecah dan akan menginfeksi sel inang lainnya (Astriningsih, 2012). Sel inang yang pecah megakibatkan kematian sel inang sehingga jumlah bakteri menurun. Bakteriofage untuk menurunkan cemaran Salmonella diperoleh dengan mengisolasi bakteriofage yang sel inangnya Salmonella dengan mengikuti metode yang digunakan Sartika (2012). Hasil penelitian berupa data rata-rata organoleptik udang dan data cemaran Salmonella pada udang dan isolat bakteriofage sebagai biokontrol Salmonella dipaparkan menggunakan metode deskriptif.
D. Hipotesis 1. Cemaran
Salmonella
menurunkan
mutu
udang
vannamei
secara
organoleptik. 2. Bakteri Salmonella sp pada udang vannamei dapat diisolasi dengan metode konvensional menggunakan media XLD. 3. Bakteriofage Salmonella sp dapat diisolasi.
8
II. TINJAUAN PUSTAKA
A. Bakteriofage Bakteriofage adalah entitas virus bakteri yang memiliki materi genetik baik dalam bentuk DNA maupun RNA, terkapsid oleh mantel protein (Haq et al, 2012). Lebih lanjut dijelaskan kapsid bakteriofage terpasang ke ekor yang memiliki serat, digunakan untuk menginokulasi ke reseptor pada permukaan sel bakteri. Sebagian besar fage memiliki kapsid polyhedral kecuali fage berserabut. Bakteriofage memiliki ciri umum yang sama dengan virus. Perbedaan bakteriofage dan virus adalah bakteriofage hanya menginfeksi bakteri target saja dan tidak dapat menyerang manusia, hewan dan tumbuh-tumbuhan (Astriningsih, 2012) sedangkan virus dapat menyerang manusia, hewan dan tumbuh-tumbuhan. Istilah virus merujuk pada partikel-partikel yang menginfeksi sel-sel eukariota (organisme multisel dan banyak jenis organisme sel tunggal) sementara istilah bakteriofage untuk jenis-jenis yang menyerang jenis-jenis sel prokariota (bakteri dan organisme lain yang tidak berinti sel). Berdasarkan morfologi, bakteriofage terdiri atas bagian kepala, ekor, dan serabut ekor. Kepala berbentuk polyhedral (segi banyak) yang di dalamnya mengandung DNA atau RNA saja. Tubus atau selubung memanjang yang dinamakan sebagai ekor virus muncul di atas kepala. Ekor ini berfungsi sebagai
9
alat penginfeksi. Selubung antara bagian kepala dan ekor disebut kapsid. Morfologi dan struktur bakteriofage dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1. Elektron Mikrograph Struktur Umum Bakteriofage Sumber : Davidson College, 2003
Kapsid tersusun atas molekul-molekul protein, oleh sebab itu disebut sebagai selubung protein atau pembungkus protein, fungsinya sebagai pelindung asam nukleat (DNA dan RNA). Kapsid dapat membantu menginfeksi ke sel inangnya dan menentukan macam sel yang akan dilekati. Bagian ujung ekor ditumbuhi serabut-serabut ekor yang berfungsi sebagai penerima rangsang atau reseptor. Sejumlah subunit molekul protein yang menyusun kapsid dan identik satu dengan yang lain disebut kapsomer.
1. Karakteristik Bakteriofage Bakteriofage diklasifikasikan ke dalam 13 famili. Lebih dari 95% Bakteriofage tergolong ordo Caudovirales atau fage ekor dsDNA. Tiga famili
10
utama Caudovirales dibedakan oleh morfologi ekor yang berbeda. Famili tersebut adalah Siphoviridae (60%), Myoviridae (25%), dan Podoviridae (15%). Siphoviridae bentuk ekor panjang, fleksibel sedangkan Myoviridae ekor lapis ganda, ekor kontraktil, dan Podoviridae ditandai dengan bentuk ringkas, ekor gemuk. Polyhedral, berserabut dan pleomorfik hanya mewakili 3-4% fag dan 10 famili (Ceyssens, 2009). Menurut Abedon (2008), bakteriofage berdasarkan kekerabatan, morfologi dan tipe genom dikelompokkan sebagai berikut : 1. Fage T4
: famili Myoviridae, memiliki ekor, dsDNA, antara lain P1-, P2-, Mu dan SPO1-like fages
2. Fage λ
: famili Siphoviridae, memiliki ekor, antara lain T1-, T5-, c2-, dan L5- like fages
3. Fage T3 dan T7
: famili Podoviridae, memiliki ekor, dsDNA, antara lain ϕ29- da P22- like fages
4. Fage ϕX174 5. Fage ϕ6
: famili Microviridae, icosahedral, ssDNA : famili Cystoviridae, icosahedral dan terbungkus, terbagi dsRNA
6. Fage MS2
: famili Leviviridae, icosahedral, ssRNA, termasuk fage F2 dan Qß
7. Fage f1, fd dan M13
: famili Inoviridae, filamentous, ssDNA
2. Aplikasi Bakteriofage Bakteriofage memiliki dua daur siklus reproduksi yang berbeda, yaitu lisis dan lisogenik. Bakteriofage lisis dapat memecahkan atau melisiskan bakteri sehingga bakteri mati. Siklus bakteriofage secara lisis terdiri atas tahapan adsorpsi, penetrasi, biosintesis, pematangan dan pelepasan. Adsorpsi dilakukan dengan menggunakan reseptor. Laju adsorpsi bakteriofage meningkat menjadi 90% dalam kurun waktu 30 menit setelah infeksi (Phumkhacorn and Pongsak,
11
2010). Pada tahap penetrasi, bakteriofage melepaskan lisozim untuk memecah sebagian dinding sel dan kapsid didorong menembus membran plasma. Genom kemudian disuntikkan ke dalam bakteri dilanjutkan tahapan biosintesis. Selama tahap pematangan atau perakitan bakteriofage, DNA dan kapsid dirakit menjadi virus yang lengkap dan siap dilepaskan. Pelepasan terjadi ketika lisozim bakteriofage memecah dinding sel dan partikel bakteriofage yang baru disintesis dilepaskan (gambar 2).
Gambar 2. Daur Lisis (Sturino and Klaenhammer, 2006) Pemanfaatan bakteriofage untuk menurunkan kontaminasi bakteri dilakukan pada fase lisis. Bakteriofage dapat melisiskan bakteri target sehingga populasi bakteri menurun. Bakteriofage mampu menginfeksi bakteri dan membunuh sel bakteri tersebut secara langsung atau mengintegrasikan DNA virus
12
ke dalam kromosom bakteri inang (Buana dan Krisna, 2014). Bakteriofage merupakan virus yang menginfeksi bakteri dan mampu membunuh sel bakteri tersebut secara langsung atau mengintegrasikan DNA virus ke dalam kromosom bakteri inang. Penelitian dan penemuan bakteriofage lisis mulai berkembang sejak tahun 1896. Pada tahun 1896 Ernest Hanbury Hankin mengamati aktivitas bakteriofage yang menginfeksi Vibrio cholerae di India. Penggunaan bakteriofage lisis secara klinis pada manusia mulai dilakukan setelah penemuan bakteriofage lisis pada tahun 1915-1917, khususnya di Eropa Timur (Abedon, 2007). Pada tahun 1921 bakteriofage lisis dimanfaatkan untuk perlakuan terhadap infeksi Staphylococcus pada kulit. Pada tahun 1940-an, perusahaan Eli Lilly di Amerika Serikat telah memproduksi 7 produk bakteriofage untuk digunakan pada manusia. Hingga ini penelitian bakteriofage di dunia terus berkembang di berbagai negara. Penelitian pemanfaaatan bakteriofage sebagai biokontrol Salmonella diantaranya dilakukan oleh Fiorentin, et al (2005) untuk menurunkan Salmonella enteridis pada ayam potong, menurunkan Salmonella pada produk peternakan (Hargis, et al. 2005), Salmonella enterica pada kompos (Heringa, et al. 2010), menurunkan Salmonella enterica (Bao, Zhang and Wang, 2011), efek terapi bakteriofage melawan Salmonella gallinarum (Hong, et al. 2013), menurunkan Salmonella enteridis pada ayam broiler (Gonçalves, et al. 2014). Pemanfaatan bakteriofage untuk menurunkan infeksi Salmonella juga telah dilaporkan oleh Zhang, et al.(2015). Lebih lanjut dijelaskan hingga saat ini sedikitnya 25 genome bakteriofage Salmonella telah dilaporkan dengan ukuran genome berkisar antara 33 hingga 240 kb. Hal ini mengindikasikan bahwa keanekaragaman bakteriofage Salmonella hidup di alam.
13
Penelitian bakteriofage di Indonesia tidak berkembang pesat. Penelitian bakteriofage masih terbatas pada penemuan bakteriofage lisis. Beberapa penelitian yang telah dilakukan diantaranya penelitian bakteriofage untuk mengendalikan infeksi bakteri pada tanaman kubis (Widadi, Linayanti, Sumiyati, 2012). Budiarti, Pratiwi and Rusmana (2011) meneliti bakteriofage lisis pada pasien diare, isolasi bakteriofage untuk meningkatkan keamanan pangan (Nurizkiawan, 2011), spesifitas dan karakteristik bakteriofage lisis Salmonella (Astriningsih, 2012 dan Sunarti, 2012), isolasi bakteriofage Shigella (Iswadi, 2012). Penelitian Sartika, Budiarti and Sudarwanto (2012) telah menemukan manfaat dan keamanan bakteriofage pada pangan. Berbagai hasil penelitian bakteriofage di Indonesia belum disertai pemanfaatannya secara komersial. Penelitian dan penemuan bakteriofage di berbagai negara telah diiringi pemanfaatannya di berbagai aspek kehidupan. Pemanfaatan bakteriofage untuk bidang kesehatan diantaranya untuk vaksin antigen untuk imunisasi terhadap Schistosoma mansoni (Rao et al, 2003), terapi melawan infeksi pada kulit, tulang, saluran gastrointestinal, dada, abdomen, kepala, leher dan sistem organ tubuh lainnya (Abedon, 2008). Staphylococcus aureus pada sentral vena kateter (Lungren et al, 2013). Di bidang pertanian dan peternakan antara lain untuk layu pada tembakau, kanker pada jeruk, bercak pada jeruk, hawar pada geranium, lodoh pada jamur merang, dan hawar Xanthomonas pada bawang, (Jones et al, 2007), bercak pada apel (Youssef et al, 2011), Escherichia coli Septicemia dan Meningitis pada ayam dan anak sapi (Barrow, 1998), Salmonella pada ternak ayam (Bardina et al, 2012), multidrug resistant Klebsiella pneumonia pada ternak ruminansia (Kęzik-Szeloch et. al, 2013). Di bidang pangan, bakteriofage lisis
14
banyak dimanfaatkan dalam menurunkan cemaran Listeria monocytogenes pada melon (Leverentz et al, 2004), Vibrio harveyi (Phumkacorn and Pongsak, 2010), Shigella (Garcia et al, 2010), E. Coli (Budiarti, Pratiwi and Rusmana, 2011), dan Salmonella (Hooton et al, 2011 dan Woolston et al, 2013).
B. Salmonella sp Salmonella adalah bakteri yang menjadi indikator sanitasi pada pangan. Salmonella pada umumnya tergolong bakteri patogen. 1. Ciri-ciri Salmonella Salmonella adalah bakteri batang gram negatif yang bersifat motil, dengan panjang 1,0 sampai 3,0 µm memiliki lebar 0,8 sampai 1,0 µm. Salmonella akan menghasilkan batang warna merah muda pada pewarnaan gram pada pemeriksaan mikroskopis. Salmonella dapat memfermentasikan glukosa, memproduksi gas, namun tidak memfermentasikan laktosa dan sukrosa. Salmonella bersifat patogen terhadap manusia dan hewan bila tertelan. Salmonella tersebar luas di alam dan mereka bertahan dengan baik dalam berbagai makanan (Pui et al, 2011). Cemaran Salmonella dapat dijumpai pada tanah dan air. Cemaran Salmonella akan menyebar ke sayuran, ternak, bahan pangan, dan manusia melalui ekskresi manusia dan hewan. Salmonella tidak berlipat jumlahnya dengan cepat jika berada di luar inangnya, tetapi dapat bertahan beberapa minggu di air dan beberapa tahun di tanah jika kondisi lingkungan mendukung. Salmonella dapat tumbuh optimum di berbagai kondisi lingkungan di luar inang. Sebagian besar serotipe Salmonella tumbuh pada kisaran suhu 5-47oC dan
15
optimum pada kisaran suhu 35-37oC. Salmonella tumbuh dalam kisaran pH antara 4-9 dengan pH optimal antara 6.5 dan 7.5. mereka membutuhkan aktivitas air tinggi (aw) antara 0,99 dan 0,94 (Pui et al, 2011)
2. Klasifikasi Salmonella Lebih dari 2300 serovar Salmonella telah dijelaskan namun meskipun seluruhnya bersifat potensial patogenik sangat berbeda pada inang dan patogenisitas (Wray et al, 2000). Salmonella (Gambar 3) merupakan salah satu bakteri patogen penyebab keracunan makanan (tabel 1) pada hewan dan manusia. Bakteri ini masuk melalui kontaminasi makanan dan minuman. Bakteri ini menyebabkan infeksi Salmonella. Berikut gambar scanning mikrograf Salmonella typhimurium
Gambar 3. Scanning Mikrograf Salmonella typhimurium Sumber : Madigan et al, 2012
16
Tabel 1. Bakteri Patogen Penyebab Keracunan Makanan dan Penyakit Terkait Organisme Salmonella Shigella Escherichia coli Yersinia enterocolitica Campylobacter jejuni Listeria monocytogenes Vibrio parahemolyticus Aeromonas hydrophila Staphylococcus aureus Clostridium botulinum Clostridium perfringens toxin in intestine Bacillus cereusc Bacillus cereusd
Infeksi Infeksi Infeksi Infeksi Infeksi Infeksi Infeksi Infeksi Toksin pada makanan Toksin pada makanan Toksin pada usus
Waktu Inkubasi (jam) 6–36 6–12 12–72 24–36 3–5 (days) Variable 2–48 2–48 2–6 12–96 8–22
Durasi Penyakit (hari) 1–7 2–3 1–7 3–5 5–7 —a 2–5 2–7 ≤1 1–8b 1–2
Toksin pada makanan Toksin pada usus
1–5 8–16
≤1 >1
Patogenisitas
a mempengaruhi orang dengan faktor predisposisi, tingkat kematian yang tinggi b angka kematian tinggi, pemulihan lengkap membutuhkan waktu 6-8 bulan c tipe emetik d tipe diare Sumber : Vries, 1996
Klasifikasi Salmonella didasarkan pada struktur antigen. Struktur antigen utama yaitu somatic, surface dan flagellar. Somatic (O) atau Cell Wall Antigen tergolong serovar tahan panas dan alkohol, sedangkan surface disebut juga envelope antigen, dan flagellar (H) antigen yang labil terhadap panas (Todar, 2009). Bakteri dapat diklasifikasikan berdasarkan filogeni. Sebuah pohon filogenetik dapat diturunkan dari perbandingan dengan 16S rRNA atau urutan gen lainnya. Ada 2.463 serotipe Salmonella yang sekarang ditempatkan di bawah 2 spesies karena perbedaan 16S analisis urutan rRNA: Salmonella enterica (2443 serotipe) dan Salmonella bongori (20 serotipe). Sistem saat ini digunakan oleh World Health Organisasi (WHO) Collaborating Centre, Pusat Pengendalian dan Pencegahan Penyakit (CDC) dan beberapa organisasi lainnya. Salmonella enterica selanjutnya dibagi menjadi enam subspesies, yang ditunjuk oleh angka romawi. Subspesies Salmonella enterica I terutama diisolasi dari hewan berdarah
17
panas dan menyumbang lebih dari 99% dari isolat klinis sedangkan sisanya subspesies dan S. bongori yang terutama terisolasi dari hewan berdarah dingin dan mencapai kurang dari 1% dari isolat klinis. Sebagai contoh, spesies Salmonella typhimurium kini ditunjuk sebagai Salmonella subspesies enterica I serotipe Typhimurium.
Dibawah
sistem
nomenklatur
modern,
subspesies
informasi sering diabaikan dan budaya disebut S. enterica serotipe Typhimurium dan selanjutnya, tertulis sebagai S. Typhimurium. Ini sistem tata nama yang digunakan saat ini untuk membawa keseragaman dalam pelaporan (Pui et al, 2011).
3. Patogenesis Patogenesis adalah mekanisme penyebab penyakit. Istilah ini juga dapat digunakan untuk menggambarkan asal usul dan perkembangan penyakit, apakah akut, kronis atau berulang. Kata ini berasal dari bahasa Yunani. Patogen Salmonella umumnya terkait dengan pencemaran tinja yang terdeteksi secara sporadis atau tidak sama sekali (Paola et al, 2010). Mekanisme patogenesis Salmonella umumnya dengan proses infeksi sistemik. Gejala yang timbul umumnya adalah demam, diare, mual, muntah, dan sakit perut. Gejala ini disebut salmonellosis. Salmonella masuk melalui makanan ke lambung dan usus halus. Selanjutnya akan menyebar ke kelenjar getah bening, pembuluh darah dan seluruh tubuh sehingga feses dan urin penderita mengandung Salmonella.
18
Gambar 4. Virulen Faktor pada Patogenesis Salmonella Sumber : Madigan et al (2012)
Gejala infeksi Salmonella atau Salmonellosis umumnya adalah demam, diare, mual, muntah , dan sakit perut. Dalam beberapa kasus, Salmonellosis dapat menyebar ke aliran darah yang mengakibatkan penyakit yang lebih berat seperti infeksi arteri, endokarditis, dan arthritis (Sartika, 2012). Strategi pencegahan penyakit Salmonellosis yang efektif adalah deteksi kasus, perbaikan sanitasi lingkungan, pencegahan kontaminasi dalam industri makanan, menekan angka reaktor Salmonellosis, pendidikan kesehatan masyarakat serta eliminasi sumber infeksi (Ariyanti dan Supar, 2005).
4. Pencegahan dan Penurunan Cemaran Salmonella Pada Pangan Pencegahan cemaran Salmonella pada pangan dapat dilakukan dengan mengontrol sanitasi dan higiene pada pengolahan. Penurunan suhu penyimpanan beku dan penambahan waktu memasak beberapa menit dapat mengurangi resiko cemaran Salmonella pada daging babi (Gonzales-Barron et al, 2012).
19
Penurunan cemaran Salmonella pada pangan dapat dilakukan secara biologi, fisik (sterilisasi dengan panas, radiasi dan filter), dan kimia (Madigan et al, 2012). Penurunan cemaran Salmonella pada pengan secara biologi yakni dengan menggunakan bakteriofage. Perubahan suhu dari 37oC ke 50oC dan 60oC mematikan Salmonella typhimurium (Migeemanathan et al, 2011). Penurunan cemaran Salmonella secara kimia menggunakan antibiotik menyebabkan resistensi Salmonella. Cardoso (2009) menyatakan, diantara Salmonella yang berhasil diisolasi dari sosis babi segar prevalensi terbesar resisten terhadap antibiotik tetracycline. Penggunaan antibiotik pada produk seafood menyebabkan resistensi mikrobial (Amagliani et al, 2011). C. Isolasi Salmonella dan bakteriofage Salmonella Metode isolasi Salmonella pada makanan dapat dilakukan dengan cara konvensional atau metode alternatif lain. Secara konvensional, metode isolasi dapat dilakukan dengan media xylose lysine desoxycholate agar (XLD), desoxycholate citrate agar (DCA), desoxycholate citrate lactose saccharose agar (DCLS), Salmonella Shigella agar (SS), bismuth sulphite agar (BS), dan brilliant green agar (BG). Media untuk isolasi terbaik adalah BS (Lim et al, 1980). Metode isolasi konvensional dasar meliputi pre-enrichment of the sample, subculturing from the pre-enrichment broth, streaked onto two selective plating media, purified to confirmation, identification and further caracterisation (Bell and Kyriakides, 2002). Tahapan metode isolasi konvensional dapat dilihat pada gambar 5 berikut.
20
Test Methods Pre-enrichment Inoculate preenrichment medium, e.g bufeered peptone water (1 part test portion + 9 parts medium)
Incubate 35oC or 37oC/16-20 hours
Selective enrichment Sub-culture to 2 selective enrichment broths, e.g Selenite-Cystine (SC) broth (1+9), RappaportVassiliadis (RV) broth (1+100)
Incubate SC 37oC/24 hours + 24 hours RV 42oC/24 hours + (if necessary) 24 hours
Selective plating Streak at each 24 hour selective enrichmnet stage onto 2 selective agars, e.g Brilliant Green Agar (modified) Hektoen Enteric Agar, XLD Agar
Incubate 35oC or 37oC/20-24 hours and further 18-24 hours if necessary
Inspect plates for the presence of characteristic colonies and any primary biochemical reactions Confirmation of suspect colonies Purify suspect colonies on Nutrient Agar
Incubate 35oC or 37oC/18-24 hours
Serology using ‘O” & “H” antisera Inoculate media or test strips to obtain biochemical profile
Incubate according to the manufacturer’s instructions, usually 35oC or 37oC/18-24 hours
Read reactions
Gambar 5. Conventional Method for the isolation and identification of Salmonella sp Sumber : Bell and Kyriakides (2002)
Metode konvensional juga dapat dilakukan dengan menambahkan 225 ml media lactose broth (BPW) ke dalam 25 gram sampel, selanjutnya dihomogenkan selama 2 menit lalu dibiarkan pada suhu ruang selama 60 menit. Kocok rata larutan dan diinkubasikan pada suhu 35oC selama 24 jam. Untuk produk perikanan dengan tingkat kontaminasi tinggi, pindahkan 0,1 ml larutan contoh ke dalam 10 ml Rappaport-Vassiliadis (RV) medium dan 1 ml larutan contoh ke dalam 10 ml Tetrathionate Broth (TTB); Untuk jenis produk perikanan lain, pindahkan 1 ml larutan contoh ke dalam masing-masing 10 ml SCB dan 10 ml TTB. Inkubasi media pengkayaan selektif sebagai berikut : Untuk produk perikanan dengan tingkat kontaminasi tinggi, inkubasi RV medium selama 24
21
jam±2 jam pada suhu 42°C ± 0,2°C (Water bath); Inkubasi TTB selama 24 jam± 2 jam pada suhu 43°C ± 0,2°C (Water bath); Untuk jenis produk perikanan lain, inkubasi TTB dan SCB selama 24 jam ± 2 jam pada suhu 35°C ± 1°C. Kocok tabung (dengan vortex) dan dengan mengggunakan jarum loop (3mm) gores TTB yang diinkubasi ke dalam media HE, XLD dan BSA. Siapkan BSA sehari sebelum digunakan dan simpan di tempat gelap pada suhu ruang. Gores ke dalam media yang sama dari RV Broth atau SCB. Inkubasi cawan BSA, HE dan XLD selama 24 jam pada suhu 35°C ± 1°C. Amati kemungkinan adanya koloni Salmonella. Ambil 2 atau lebih koloni Salmonella dari masing-masing media Agar selektif setelah 24 jam ± 2 jam inkubasi. Koloni-koloni Salmonella yang khas (typical) adalah sebagai berikut: a) HE Agar. Koloni hijau kebiruan sampai biru dengan atau tanpa inti hitam. Umumnya kultur Salmonella membentuk koloni besar, inti hitam
mengkilat
atau hampir seluruh koloni terlihat berwarna hitam. b) XLD Agar. Koloni merah jambu (pink) dengan atau tanpa inti hitam. Umumnya kultur Salmonella membentuk koloni besar, inti hitam mengkilat atau hampir seluruh koloni terlihat berwarna hitam. c) BSA.Koloni coklat, abu-abu atau hitam; kadang-kadang metalik. Biasanya media di sekitar koloni pada awalnya berwarna coklat, kemudian berubah menjadi hitam (halo effect) dengan makin lamanya waktu inkubasi. Apabila koloni yang khas (typical) tumbuh pada BSA setelah 24 jam ± 2 jam inkubasi, ambil 2 koloni atau lebih. Inkubasikan kembali media BSA selama 24 jam ± 2 jam. Setelah 48 jam ± 2 jam, ambil 2 atau lebih koloni yang khas (typical) yang tumbuh pada media BSA. Pengambilan ini dilakukan hanya bila koloni yang tumbuh pada
22
media BSA yang diinkubasi selama 24 jam ± 2 jam memberikan reaksi yang tidak sesuai pada TSI dan LIA, yang menjadikan kultur ini dinyatakan sebagai bukan Salmonella.Ambil secara hati-hati bagian tengah koloni dengan menggunakan jarum inokulasi steril dan goreskan ke permukaan media TSI agar dengan cara menggores agar miring dan menusuk agar tegak. Tanpa mengambil koloni baru, gunakan jarum yang sama untuk menggores media LIA dengan cara menusuk agar tegak lebih dahulu, setelah itu goreskan pada agar miring. Karena reaksi Lysine Decarboxylase sangat anaerobik, LIA miring harus mempunyai tusukan yang dalam (4 cm). Simpan media agar selektif yang telah diambil koloninya pada suhu 5°C – 8°C. Inkubasi TSI dan LIA selama 24 jam ± 2 jam pada suhu 35°C ± 1°C dengan membiarkan tutup sedikit kendur untuk mencegah terbentuknya H2S yang berlebihan. Pada TSI, kultur Salmonella yang khas memberikan reaksi alkalin (merah) pada goresan agar miring dan asam (kuning) pada tusukan agar tegak, dengan atau tanpa H2S (warna kehitaman pada agar). Pada LIA, kultur Salmonella yang khas memberikan reaksi alkaline (ungu) pada keseluruhan tabung. Reaksi yang benar-benar kuning pada tusukan dinyatakan sebagai kultur negatif. Jangan hanya melihat diskolorisasi pada tusukan untuk menyatakan kultur negatif. Umumnya kultur Salmonella membentuk H2S pada LIA. Beberapa kultur non Salmonella membentuk reaksi merah bata pada agar miring LIA. Alternatif
sistem pre-enrichment untuk beberapa jenis pangan dapat
dilihat pada tabel 2 berikut :
23
Tabel 2. Alternatif Sistem Pre-Enrichment yang Digunakan Untuk Beberapa Jenis Pangan Food Type Pre-enrichment Effect Food with a high fat content, e.g. cheese Highly acidic or alkaline product Chocolate and confectionery products
Garlic and onion
Products that may contain inhibitory substances or products that may osmotically active, e.g. some herbs and spices (oregano, cinnamon, cloves), honey
Buffered peptone water with 0.22% Tergitol 7 Adjust pH of pre-enrichment broth to 6.6-7.0 before incubation Reconstituted skim milk powder (10% w/v) with Brilliant Green Dye (final concentration of 0.002% w/v) Buffered peptone water with potassium sulphite) 0.5% final concentration) 1:100 dilution of sample in buffered peptone water, e.g. 25 g+2475 ml
Aids fat dispersion Neutralises acid or alkali Reduces inhibition Salmonella
of
Reduces inhibition Salmonella
of
Reduces inhibition Salmonella
of
Sumber : Bell and Kyriakides (2002) Selain secara konvensional, dapat digunakan alternatif metode antara lain enzyme-linked
immuno-sorbent
assays
(ELISA),
immuno-chromatography,
chemiluminescent immunoassays, antibody coated dipsticks or beads, latex agglutination dan teknologi lain seperti electrical conductance methods dan polymerase chain reaction (PCR) (Bell and Kyriakides, 2002). Metode PCR dapat digunakan untuk direct detecting Salmonella (Marathe et al, 2012). Contoh metode alternatif tersebut dapat dilihat pada tabel 3 berikut.
24
Tabel 3. Alternatif Metode untuk Skrining Salmonella. Tipe Metode Electrical conductance Enzyme-linked immuno-sorbent assay (ELISA)
Chemiluminescent immunoassay Immunochromatography Immunoprecipitate Ice-nucleation
Nucleic Acid Hybridisation Probe Polymerase chain reaction
Nama Pengujian
Waktu Pengujian
Pensuplai
Bactometer Malthus RABIT Vidas Salmonella Salmonella-Tek TECRA Salmonella Visual Assay Transia Plate Salmonella EIAFOSS Locate
42 maximum 42 maximum 42 26 52 42-52
bioMérieux UK Ltd Malthus Instruments Don Whitley Scientific Ltd bioMérieux UK Ltd Organon Teknika Ltd TECRA Diagnostics, UK
52 26 52
ISO Screen Salmonella
24
DiffChamb, S.A. Foss UK Ltd Rhône-diagnostics Technologies Ltd Stratecon Diagnostics
Path-Stik REVEAL® for Salmonella Visual Immunoprecipitate Assay (VIP) for Salmonella BIND® (Bacteril Ice Nucleation Detection) Salmonella Gene Trak Slmonella assay
56 21 24/48
Celsis International plc Neogen Corporation Bio Control Systems Inc.
22
Bio Control Systems Inc.
48
Gene Trak Systems
Foodproof® Salmonella TaqMan® for Salmonella ProbeliaTM BAXTM for screening Salmonella
24 24 24 24
BioteCon Diagnostics PE Applied Biosystems Sanofi DiagnosticvPasteur Qualicon
Sumber : Bell and Kyriakides (2002)
Metode isolasi bakteriofage Salmonella dapat dilakukan dengan berbagai metode. Metode isolasi bakteriofage diantaranya metode Clokie and Kropinski (2009), Budiarti et al (2011) dan metode yang digunakan Sartika (2012). Metode yang digunakan Sartika merupakan kombinasi dari metode Clokie dan Budiarti. Isolat bakteriofage yang dihasilkan selanjutnya dilakukan pengkayaan. Pengkayaan bakteriofage Salmonella dilakukan dengan metode yang digunakan Sartika. Hasil pengkayaan digunakan untuk stok atau bahan produksi. Penelitian sebelumnya juga menyatakan bahwa buffer terbaik untuk penyimpanan fage pada pH 7 dan suhu 37oC (Astriningsih, 2012).
25
D. Penanganan Pasca Panen Udang Vannamei 1. Komposisi Kimia Udang Vannamei Udang merupakan sumber protein yang sangat baik dan itu adalah salah satu bagian spesies popular yang kaya protein dan mineral, yang merupakan keunggulan dibandingkan daging dan unggas. Udang memiliki kualitas tinggi dari komposisi tubuh termasuk protein, lemak dan asam amino dan lain lain yang merupakan indikator dari keberadaan fisiologis yang baik dan kondisi biokimia. Adapun komposisi kimia udang windu dan vannamei disajikan dalam tabel 4. Tabel 4. Komposisi Kimia Udang Analisis Proksimat Protein Karbohidrat Lemak Air Kadar Abu
(mg/g) (mg/g) (%) (%) (mg/g)
Jenis Udang Windu Vannamei 11,41 ±0,183 19,99±0,74 1,55 ±0,070 ± 10,66 ±0,333 1,34±0,18 80,89 ±0,175 73,14±1,23 2,20±0,88
2. Kemunduran Mutu Pasca Panen Udang Vannamei Proses kemunduran mutu pada udang terjadi karena adanya aktivitas enzim, mikroorganisme atau oksidasi oksigen. Setelah udang mati, berbagai proses perubahan fisik maupun kimiawi berlangsung lebih cepat. Semua perubahan ini akhirnya mengarah ke pembusukan. Pada saat ditangkap, udang masih bernafas hingga beberapa waktu kemudian. Seluruh jaringan peredaran darah udang masih mampu menyerap oksigen hingga proses kimia yang terjadi dapat berlangsung secara aerob.
26
Menurut Huss (1995) perubahan yang paling dramatis adalah rigor mortis. Segera setelah kematian otot benar-benar santai dan tekstur elastis lemas biasanya berlangsung selama beberapa jam, setelah itu otot akan berkontraksi. Otot udang menjadi keras dan kaku, seluruh tubuh menjadi tidak fleksibel pada fase rigor mortis. Kondisi ini biasanya berlangsung selama satu hari atau lebih dan kemudian kekakuan selesai. Resolusi rigor mortis membuat otot rileks lagi dan itu menjadi lemas, tetapi tidak lagi sebagai elastis seperti sebelum kekakuan. Tingkat onset dan resolusi kekakuan bervariasi dari spesies ke spesies dan dipengaruhi oleh suhu, penanganan, ukuran dan kondisi fisik udang. Autolisis berarti " pencernaan- sendiri ". Telah diketahui selama bertahuntahun bahwa setidaknya ada dua jenis pembusukan ikan: bakteri dan enzimatik. Autolisis kontribusi untuk berbagai tingkat hilangnya kualitas keseluruhan di samping proses mikroba-dimediasi. Produksi energi di otot post mortem Pada titik kematian, pasokan oksigen ke jaringan otot terganggu karena darah tidak lagi dipompa oleh jantung dan tidak diedarkan. Karena tidak ada oksigen yang tersedia untuk respirasi normal, produksi energi dari nutrisi yang tertelan sangat dibatasi. Glikogen (disimpan karbohidrat) atau lemak teroksidasi atau "terbakar" oleh enzim jaringan dalam serangkaian reaksi yang akhirnya menghasilkan karbon dioksida (CO2), air dan organik senyawa adenosin trifosfat kaya energi (ATP). Jenis respirasi berlangsung dalam dua tahap: anaerobik dan tahap aerobik. Yang terakhir tergantung pada kehadiran lanjutan oksigen (O2) yang hanya tersedia dari sistem peredaran darah. Kebanyakan krustasea mampu bernapas di luar lingkungan air dengan penyerapan oksigen atmosfer untuk waktu yang terbatas.
27
Gambar 6. Degradasi ATP pada udang. Sumber : Gill (1992) dalam Sriket (2006). Penurunan post mortem di pH otot ikan memiliki efek pada sifat fisik otot. Setelah pH turun, jumlah permukaan bersih dari protein otot berkurang, menyebabkan sebagian otot terdenaturasi dan kehilangan kapasitas daya ikat air. Jaringan otot dalam keadaan rigor mortis kehilangan kelembaban ketika dimasak dan sangat cocok untuk diproses lebih lanjut yang melibatkan pemanasan, karena denaturasi panas meningkatkan kehilangan air. Kehilangan air memiliki efek yang merugikan pada tekstur otot udang. Menurut Nurmeilita Taher (2010), perubahan tekstur daging menjadi lunak disebabkan terjadinya perombakan pada jaringan otot daging oleh proses enzimatis. Pengurangan trimetilamin oksida (TMAO), suatu senyawa osmoregulatory di banyak ikan teleost laut, biasanya karena aksi bakteri tetapi dalam beberapa spesies enzim hadir dalam jaringan otot yang mampu memecah TMAO menjadi dimetilamina ( DMA) dan formaldehid (FA):
(CH3)3 NO
(CH3)2NH + HCHO
28
Jumlah formaldehida dihasilkan setara dengan dimetilamine tetapi terbentuk perubahan komersial penting yang jauh lebih besar. Formaldehida menginduksi silang dari protein otot membuat otot mudah kehilangan daya ikat airnya. Enzim yang bertanggung jawab untuk finduksi disebut TMAO-ase atau TMAO demethylase. Sebagian besar enzim demethylase TMAO dilaporkan sampai saat ini terikat membran dan menjadi yang paling aktif ketika membran jaringan terganggu dengan pembekuan atau artifisial oleh deterjen solubilisasi. Hal tersebut didukung oleh pendapat Pardio, et al (2010) bahwa Trimetilamina oksida (TMAO), ditemukan di sebuah besar jumlah ikan laut dan kerang, dipecah menjadi trimetilamina (TMA) oleh salah satu enzim endogen atau bakteri enzim trimetilamina oksidase. Di perairan tercemar, Enterobacteriaceae dapat ditemukan dalam jumlah tinggi. Di perairan beriklim bersih, organisme ini hilang dengan cepat, tetapi telah menunjukkan bahwa Escherichia coli dan Salmonella dapat bertahan untuk waktu yang sangat lama di perairan tropis. Daging ikan hidup atau baru-tertangkap sehat adalah steril sebagai sistem kekebalan tubuh ikan mencegah bakteri tumbuh di dalam daging. Ketika ikan mati, sistem kekebalan tubuh runtuh dan bakteri berkembang biak secara bebas. Tidak ada perbedaan yang ditemukan dalam pola invasif bakteri tertentu pembusukan (misalnya, S. putrefaciens) dan bakteri non-pembusukan. Karena hanya sejumlah organisme sebenarnya menyerbu daging dan pertumbuhan mikroba terutama terjadi di permukaan, pembusukan mungkin untuk sebagian besar konsekuensi dari enzim bakteri menyebar ke dalam daging dan nutrisi menyebar ke luar.
29
Pada suhu kamar (25 ° C), mikroflora pada titik pembusukan didominasi oleh mesofilik Vibrionaceae dan, terutama jika ikan yang ditangkap di perairan tercemar, Enterobacteriaceae. Sulit untuk menentukan dari mana bakteri yang diisolasi yang menyebabkan pembusukan, dan memerlukan studi luas mengenai sensorik, mikrobiologi dan kimia. Perbandingan senyawa kimia berkembang pada udang yang telah mati menunjukkan bahwa sebagian besar senyawa volatil diproduksi oleh bakteri termasuk trimetilamina, senyawa belerang yang mudah menguap, aldehid, keton, ester, hipoksantin serta senyawa dengan berat molekul rendah lainnya. Substrat untuk produksi volatil adalah karbohidrat (misalnya, laktat dan ribose), nukleotida (misalnya, inosin mono-fosfat dan inosin) dan molekul lainnya NPN. Asam amino merupakan yang substrat sangat penting untuk pembentukan sulfida dan amonia yang menyebabkan penurunan penerimaan konsumen secara sensori. Mikroorganisme akan mengubah struktur protein selama penyimpanan dan akan menghasilkan bau yang tidak menyenangkan (Hastarini, et al 2014).
3. Prosedur Penanganan Pasca Panen Udang Vannamei Penanganan pasca panen adalah penanganan yang dilakukan terhadap hasil budidaya ataupun tangkapan setelah kegiatan panen. Tujuan kegiatan penanganan ini adalah mempertahankan mutu hasil panen sampai ke tahap distribusi kepada konsumen. Udang merupakan salah satu produk perikanan yang mudah busuk atau rusak oleh karena itu proses penanganan udang perlu dilakukan lebih cepat agar memperoleh harga jual yang tinggi. Harga udang akan merosot tajam apabila mutunya terlihat mundur (Soeseno, 1983).
30
Tahapan yang dianjurkan bagi penanganan pasca panen udang segar adalah sebagai berikut (Ilyas, 1993) : a. Sortasi, memilih udang dan memisahkannya dari hasil tangkapan samping lainnya b. Pencucian, dengan air laut bersih atau air tawar mutu air minum c. Pemotongan kepala atau operasi penyiangan lainnya Pencucian d. Perlakuan pencelupan, untuk menghambat pembentukan bercak hitam e. Pendinginan, menurunkan suhu udang segera mencapai 0ºC sampai -1ºC dengan menggunakan hancuran es halus, atau air laut atau air tawar yang didinginkan f. Penyimpanan dingin (pada sekitar 0ºC sampai -1ºC) dan transportasi dingin selama udang itu dipasarkan segar atau selama mengangkutnya ke pabrik pengolahan beku (cold storage). Selama
kegiatan
penanganan
pasca
panen,
udang
segar
dapat
terkontaminasi. Kontaminasi ini baik secara mikrobiologi, kimia, maupun fisik. Pemerintah maupun negara pengimpor udang segar mensyaratkan udang segar yang diproduksi harus bebas kontaminan, seperti Salmonella, Escherichia coli, Vibrio Harveyi (mikrobiologi), kloramfenikol, nitrofuran, tetrasiklin dan antibiotik lain (kimia), besi, rambut, kayu dll (fisik) (Badan Standardisasi Nasional, 2006).
4. Standar Mutu Udang Segar Standar mutu udang segar menurut SNI 01-2728.1-2006 untuk persyaratan mutu dan keamanan pangan sebagaimana tabel 5 berikut.
31
Tabel 5. Persyaratan Mutu dan Keamanan Pangan Udang Segar Jenis Uji a. Organoleptik b. Cemaran mikroba* - ALT - Escherichia coli - Salmonella - Vibrio cholerae c. Cemaran kimia* - Kloramfenikol - Nitrofuran - Tetrasiklin d. Filth Catatan* bila diperlukan
Satuan Angka (1-9) Koloni/g APM/g APM/25g APM/25g µg/kg µg/kg µg/kg -
Persyaratan Minimal 7 Maksimal 5,0x105 Maksimal < 2 Negatif Negatif Maksimal 0 Maksimal 0 Maksimal 100 Maksimal 0
32
`
III. METODE
A. Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi Hasil Pertanian Jurusan THP, Laboratorium Hama dan Penyakit Ikan SUPM N Kotaagung serta Laboratorium Kualitas Air SUPM N Kotaagung pada bulan Juli 2014 - Desember 2015.
B. Bahan dan Alat Bahan yang digunakan adalah udang vannamei dengan kisaran size 40-65 yang diperoleh dari Tambak Udang di Kecamatan Rawa Jitu Timur, Tambak Udang di Kecamatan Padang Cermin, Tambak Udang di Kecamatan Kotaagung dan Tambak Udang di Kecamatan Wonosobo., es, alkohol, spiritus, Media NA, Media NB, Media SSA, Media XLD, Media SM, Soft Agar, Pengencer BPW. Alat yang digunakan meliputi refrigerator, erlenmeyer, falcon, tabung durham, petri dish, eppendorf, saringan milipore 0.22, gelas sampel, masker, kapas, tisu, karet, sarung tangan karet, plastik tahan panas, timbangan, sentrifuge, stryrer, incubator, laminar, jarum ose, syringe, shaker waterbath, mikropipet.
C. Metode Penelitian Penelitian ini dilakukan dalam 2 tahap, yaitu penelitian tahap 1 dan penelitian tahap 2. Penelitian tahap 1 meliputi kegiatan Pengambilan sampel
33
udang Vannamei, Isolasi Bakteri Salmonella dan pengujian organoleptik udang Vannamei. Penelitian tahap 2 meliputi Isolasi bakteriofage dengan mengikuti metode yang digunakan Sartika (2012). Data yang diperoleh diolah dalam bentuk tabel dan grafik. Hasil penelitian dipaparkan menggunakan metode deskriptif.
D. Pelaksanaan Penelitian Prosedur Penelitian tahap 1 Penelitian dilaksanakan dengan pengambilan sampel di empat tempat, yaitu Tambak Udang di Kecamatan Rawa Jitu Timur, Tambak Udang di Kecamatan Padang Cermin, Tambak Udang di Kecamatan Kotaagung dan Tambak Udang di Kecamatan Wonosobo. Sampel yang diambil adalah udang vannamei dan air media hidup udang vannamei. Sampel diambil dari lokasi dan disimpan dalam coolbox dan diberi es sehingga dapat dipertahankan pada suhu rendah. 1. Identifikasi cemaran Salmonella dengan Uji Organoleptik Sampel yang diambil dilakukan pengujian organoleptik. Pengujian organoleptik dilakukan dengan cara sampel diambil sebanyak minimal 25 gr lalu dilakukan penilaian secara organoleptik oleh 5 orang panelis. Score sheet yang digunakan sesuai dengan SNI 01-2728.1 2006 (. Kriteria yang digunakan dapat dilihat pada tabel 4). Pengujian dilakukan pengulangan masing-masing 3 ulangan. Data yang diperoleh meliputi kriteria kenampakan, bau dan tekstur diolah dalam bentuk tabel. Hasil pengujian kemudian dihitung rata-ratanya sesuai dengan SNI 01-2346-2006 (Badan Standardisasi Nasional Indonesia, 2006) selanjutnya
34
disajikan dalam bentuk tabel rata-rata Uji Organoleptik terhadap udang vannamei. Hasil penelitian dipaparkan menggunakan metode deskriptif. Tabel 6. Kriteria Penilaian Organoleptik Udang Segar SPESIFIKASI 1
NILAI
Kenampakan Utuh, bening bercahaya asli meurut jenis, antar ruas kokoh Utuh, kurang bening, cahaya mulai pudar, berwarna asli, antar
2
3
ruas kokoh Utuh, kebeningan agak hilang, sedikit kusam, antar ruas kurang kokoh Utuh, kebeningan hilang, kusam, warna agak mera muda, sedikit noda hitam, antar ruas kurang kokoh Warna merah, noda hitam banyak, kulit mudah lepas dari daging Warna merah sangat kusam, banyak sekali noda hitam Bau Bau sangat segar spesifik jenis Bau segar spesifik jenis Bau spesifik jenis netral Mulai timbul bau amoniak Bau asam sulfit (H2S)
Bau amoniak kuat dan bau busuk Tekstur Sangat elastis, kompak dan padat Elastis, kompak dan padat Kurang elastis, kompak dan padat Tidak elastis, tidak kompak dan tidak padat Agak lunak Lunak
9
7 5 3 1 9 8 7 5 3 1
9 8 7 5 3 1
Rumus yang digunakan dalam menghitung rata-rata adalah sebagai berikut: ( – (1,96. s/ ̅=
x
)) ≤ μ ≤ ( ̅
+ 1,96. /√
) ≅ 95%
35
=
=
(x – x) n (x − x)
Dengan : N adalah banyaknya panelis S2 adalah keragaman nilai mutu 1,96 adalah koefisien standar deviasi pada taraf 95% ̅ adalah nilai mutu rata-rata Untuk penulisan nilai akhir organoleptik udang segar diambil nilai terkecil. 2. Identifikasi dan Isolasi Salmonella Isolasi Salmonella dilakukan dengan mengambil sampel sebanyak 25 gram untuk ditambahkan 225 ml media preenrichment buffer peptone water (BPW), selanjutnya dilakukan pengenceran bertahap dengan memindahkan 1 ml larutan ke dalam 9 ml BPW dalam tabung reaksi dan tiap pengenceran ditanam pada media XLD dan diinkubasikan pada suhu 37oC selama 24 jam. Koloni yang tumbuh dimurnikan pada media XLD, diinkubasi 37oC selama 24 jam. Pada saat diperoleh isolat Salmonella, akan dipilih yang paling stabil, tidak smear, warna koloni hitam mengkilat dan isolat tersebut yang akan digunakan sebagai inang untuk isolasi bakteriofage. Selanjutnya dilakukan isolasi bakteriofage dari isolat Salmonella yang diperoleh.
Penelitian tahap 2 Isolasi bakteriofage dilakukan dengan pengambilan isolat Salmonella dan ditambahkan 45 ml sampel dan 5 ml NB, lalu diinkubasikan pada shaker
36
waterbath pada suhu ±37oC selama 24-48 jam. Larutan selanjutnya disentrifuse dengan kecepatan 2500 rpm selama 20 menit dan disaring menggunakan syringe filter 0.22 µl. Sejumlah 100 µl filtrat divortek dengan 5 ml NB, dan diinkubasikan selama 15 menit. Selanjutnya dilakukan pembiakan dengan metode double overlay dengan media NA dan diinkubasikan selama 24 jam. Bakteriofage efektif melisiskan Salmonella jika timbul plak (zona bening). Data yang diperoleh lalu diolah dalam bentuk tabel dan hasilnya disajikan dalam bentuk deskriptif. Prosedur penelitian dapat dilihat pada diagram alir berikut :
37
Udang
Pengambilan Sampel
Identifikasi Cemaran Mikrobia
Uji Sensori
Terdeteksi
Cemaran
Tidak terdeteksi
Identifikasi cemaran Salmonella dengan uji mikrobiologi
Isolasi Salmonella
Isolat Salmonella
Isolasi Bakteriofage untuk menurunkan cemaran Salmonella
Isolat Bakteriofage Salmonella
Cemaran Salmonella pada udang vannamei menurun
Gambar 7. Flowchart Penelitian
64
V. SIMPULAN DAN SARAN
A. Simpulan Kesimpulan yang dapat diperoleh dalam penelitian ini adalah : 1. Cemaran Salmonella pada udang vannamei dari Kecamatan Wonosobo, Kotaagung dan Padang Cermin mengakibatkan sampel udang mengalami penurunan nilai organoleptik. Nilai organoleptik sampel udang dari Kecamatan Wonosobo adalah 8,80, 7,79 dan 8,54, udang dari Kecamatan Kotaagung 8,93 8,54, dan 7,59, sedangkan Kecamatan Padang Cermin 8,80, 8,80 dan 8,36. Rata-
rata organoleptik udang dari Kecamatan Rawajitu Timur 9, artinya belum mengalami perubahan mutu udang segar. Rata-rata organoleptik udang masih di atas 7 sehingga masih dapat diterima oleh konsumen dan belum menunjukkan adanya pembusukan akibat cemaran Salmonella. 2. Sampel udang vannamei dari Kecamatan Wonosobo 100% positif tercemar Salmonella, Kecamatan Kotaagung dan Kecamatan Padang Cermin sejumlah 33,3% positif tercemar Salmonella sedangkan sampel udang Kecamatan Rawajitu Timur, tidak ada yang tercemar Salmonella.. Hasil isolasi Salmonella diperoleh 2 isolat Salmonella sebagai kandidat inang untuk isolasi bakteriofage. 3. Diperoleh 42 isolat bakteriofage Salmonella sp sebagai biokontrol Salmonella pada penanganan pasca panen udang Vannamei.
65
B. Saran Saran yang diberikan berdasarkan hasil penelitian ini adalah : 1. Pembudidaya disarankan untuk memperhatikan konstruksi tambak serta menggunakan bahan alami dalam penurunan cemaran bakteri (biokontrol) Salmonella 2. Pembudidaya udang hendaknya lebih meningkatkan kesadaran tentang pentingnya menjaga sanitasi lingkungan untuk mencegah cemaran Salmonella pada udang. 3. Penelitian lebih lanjut diperlukan khususnya tentang pemurnian, produksi dan efektifitas lisis bakteriofage Salmonella sebagai biokontrol dalam menurunkan cemaran Salmonella.
66
DAFTAR PUSTAKA
Abedon, S. T. 2008. Bacteriophage Ecology. Cambridge University Press. United Kongdom. 508 pp. Afrianto, E. dan Liviawaty, E. 2011. Pengawetan dan Pengolahan Ikan. Kanisius. Yogyakarta. 57 hlm. Amagliani, G., G. Brandi, G.F. Schiavano. 2012. Incidence and role of Salmonella in seafood safety. Food Research International. 45: 780-788. Ariyanti, T. dan Supar. 2005. Cemaran salmonella enteritidis pada ternak dan produknya. Lokakarya Nasional Keamanan Pangan Produk Peternakan. 125-135. Asikin, A.N., S. Hutabarat, Ys. Darmanto, dan S. B. Prayitno. 2014. Kandungan bakteri patogen pada udang windu (Penaeus monodon fabricus) pascapanen asal tambak. Jurnal Dinamika Pertanian. 29 (2) : 199-206. Astriningsih, S.A.P.L. 2012. Characterization lytic phage of salmonella sp. FR38, FR19, and FR84. (Thesis). Institut Pertanian Bogor. Bogor. 36 pp. Atterbury, R.J., M.A.P.V. Bergen, F. Ortiz, M.A. Lovvel, J.A. Harris, A.D. Boer, J.A. Wagenaar, V.M. Allen, P.A Barrow. 2007. Bacteriophage therapy to reduce Salmonella colonization of broiler chickens. Appl. Environ Microbiol 73:4543-4549. Badan Standardisasi Nasional. 2006. Standar Nasional Indonesia 01-2346-2006 Petunjuk Pengujian Organoleptik dan atau Sensori. Badan Standarisasi Indonesia. Jakarta. 131 hlm Badan Standardisasi Nasional. 2006. Standar Nasional Indonesia 01-2728.1-2006 Udang Segar-Bagian 1: Spesifikasi. Badan Standarisasi Indonesia. Jakarta. 5 hlm. Badan Standardisasi Nasional. 2006. Standar Nasional Indonesia 01-2728.3-2006 Udang Segar-Bagian 3: Penanganan dan Pengolahan. Badan Standarisasi Indonesia. Jakarta. 3 hlm.
67
Bahri, S. 2008. Beberapa aspek keamanan pangan asal ternak di Indonesia. Pengembangan Inovasi Pertanian. 1 (3) : 225-242. Balfour, S.T., N. Badrie, I.C. Yen, and L. Chatergoon. 2014. Microbiological, physical and sensory quality of marine shrimp (Peneaus spp.) sold by vendors in Trinidad, West Indies. International Food Research Journal 21(4): 12791288. Bardina, C., D.A. Spricigo, P. Cortés and M. Llagostera. 2012. Significance of the bacteriophage treatment schedule in reducing Salmonella colonization of poultry. Appl. Environ Microbiology. 78 (18) : 6600-6607. Barrow, P., M. Lovell and A. Berchieri Jr. 1998. Use of lytic bacteriophage for control of experimental Escherichia coli septicemia and meningitis in chickens and calves. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, May 1998 : 294-298 Bell, C. And Alec Kyriakides. 2002. Salmonella : A Practical Approach to the Organism and Its Control in Foods. Blackell Publishing Ltd. London. 315 pp. Buana, E.O. dan A.K Wardani. 2014. Isolasi bakteriofag litik sebagai agen biosanitasi pada proses pelisisan bakteri pembentuk biofilm. Jurnal Pangan dan Agroindustri. 2 (2) : 36-34. Budiarti, S., Pratiwi, R.H. and Rusmana. 2011. Infectivity of lytic phage to enteropathogenic Escheria coli from diarrheal patients in Indonesia. USChina Medical Science. 8 (78) : 273-282. Capparelli, R.N., N. Nocerino, M. Iannaccone, D. Ercolini, M. Parlato, M. Chiara, D. Iannelli. 2010. Bacteriophage therapy of Salmonella enterica: A fresh appraisal of bacteriophage therapy. J. Infect Dis. 201 : 52-61. Cardoso, M., M.C. Dos Santos and L. Murmann. 2009. Prevalence, genetic characterization and antimicrobial resistence of Salmonella isolated from fresh pork sausages in Porto Alegre, Brazil. Food Control. 20 (3) : 191-195. Chibani-Chennoufi, S., A. Bruttin, M. Dillmann, and H. Brűssow. 2004. Phagehost interaction : an ecological perspective. Journal of Bacteriology. 186 (12) : 3677-3686. Cita, Y.P. 2011. Bakteri Salmonella typhi dan demam tifoid. Jurnal Kesehatan Masyarakat. 6 (l) : 42-46. Clokie M.R.J., Kropinski, A.M. 2009. Bacteriophages: Methods and Protocols. Humana Press. UK.
68
Davidson College. 2003. Molecular Tool: Plasmids and Phages Combine For Bluescript.http://www.bio.davidson.edu/courses/molbio/molstudents/spring20 03/keogh/plasmids.html De Paola, A., J.L. Jones, J. Woods, W. Burkhardt, K.R. Calci, J.A. Krantz, J.C. Bowers, K. Kasturi, R.H. Byars, E. Jacobs, D. Williams-Hill, and K. Nabe. 2010. Bacterial and Viral Pathogens in Live Oysters : 2007 United States Market Survey. Appl Environ Microbiology. 76 (9) : 2754-2768. De Vries, John. 1996. Food safety and toxicity. CRC Press. USA. 334 pp. Djumena, E. 2012. Indonesia Targetkan Jadi Produsen Utama Udang Dunia. Kompas.com. Sabtu, 9 Juni 2012 21:08 WIB.http://nasional.kompas.com/ read/2012/06/09/21083241/Indonesia.Targetkan.Jadi.Produsen.Utama.Udang. Dunia. Efri dan T.N. Aeny. 2004. Keefektifan ekstrak mengkudu pada berbagai konsentrasi terhadap penghambatan pertumbuhan bakteri Ralstonia sp. secara in vitro. J Hama dan Penyakit Tumbuhan Tropika. 4 (2) : 83-88. Elbreki, M., R.P. Ross, C. Hill, J. O’Mahony, O. McAuliffe and A. Coffey. 2014. Bacteriophages and their derivatives as biotheraupetic agents in diesase prevention and treatment. Journal of Viruses. 2014 (382539) : 20 p. Farid, M.M., G. Susianto, N.R. Dhany, N.F. Azizi, S.R. Resita. 2013. Pemanfaatan bakteriofag untuk pengembangan kit deteksi bakteri penyebab hawar bakteri pada kedelai. Jurnal Program Kreativitas MahasiswaPenelitian. 1-10. Fey, P.D., T.J. Safranek, M.E. Rupp, E.F. Dunne, E. Ribot, P.C. Iwen, P. A. Bradford, F.J. Angulo and S.H. Hinrichs. 2000. Ceftriaxone-resistant salmonella infection acquired by a child from cattle. The New England Journal of Medicine. 342 (17) : 1242-`1249. Fiorentin, L., N.D. Vierirera, W. Barioni Junior. 2005. Use of lytic bacteriophages to reduce Salmonella enteridis in experimentally contamined chicken cuts. Brazillian Journal of Poultry Science. 7 (4) : 255-260. Garcia, P., L. Rodriguez, A. Rodrigues, B. Martinez. 2010. Food biopreservation: Promising strategies using bacteriocins, bacteriophages and endolysins. Trends in Food Science & Technology. 21 (8) : 373-382. Gonzales-Barron, U.A, G. Redmond, F. Butler. 2012. A risk characterization model of Salmonella Typhimurium in Irish fresh pork sausages. Food Research International. 45 (20) : 1184-1193.
69
Gunarto dan Hendrajat, E.A. 2008. Budidaya udang vanamei, Litopenaeus vannamei pola semi intensif dengan aplikasi beberapa jenis probiotik komersial. Jurnal Riset Akuakultur. 3 (3) : 339-349. Haq, I.U., W.N. Chaudhry, M.N. Akhtar, S. Andleeb, and I. Qadri. 2012. Bacteriophages and their implications on future biotechnology: a review. Virology Journal, 9 (9) : 1-8. Hargis, B.M., J.P. Higgins, K.L. Guenther, W. Huff, A.M. Donoghue, D.J. Donoghue. 2005. Use of a spesific bacteriophage treatment to reduce Salmonella in poultry Products. Poultry Science. 84:1141-1145. Harsojo. 2008. Kualitas udang yang dijual di pasar Jakarta Selatan dari aspek mikrobiologi. Berk. Penel Hayati. 14 : 109-112. Heringa, S.D., J.K. Kim, X. Jiang, M.P. Doyle, and M.C. Erickson. 2010. Use of a mixture of bacteriophages for biological cotrol of Salmonella enterica strains in compost. Appl.Environ Microbiology. 76 (15) : 5327-5332. Hong, S.S., J. Jeong, J. Lee, S. Kim, W. Min, H. and Myung, 2013. Therapeutic effects of bacteriophages against Salmonella gallinarum infection in chickens. J. Microbiol. Biotechnol. 23 (10) : 1478–1483. Hooton, S.P.T., A.R.Timms, J. Rowsell, R. Wilson, and I.F. Connerton,. 2011. Salmonella Typhimurium-specific bacteriophage ΦSH19 and the origins of species specificity in the Vi01-like phage family. Virology Journal. 8:498. Hungaro, H.M., R.C.S. Mendonga, D.M. Gouvea, M.C.D. Vanetti, C.L.O. Pinto. 2013. Use of bacteriophages to reduce Salmonella in chicken skin in comparison with chmeical agents. Food Research International. 52 : 75-81. Huq, Khandaker Anisul. 2009. Quality aspects of frozen shrimp product in processing industry : A case study in Khulna, Bangladesh. Bangladesh Research Publications Journal. 3 (2) : 945 -962. Huss, H. H. 1995. Quality and Quality Changes In Fresh Fish. Food And Agriculture Organization Of The United Nations. Rome. 348 pp. Ilyas, S. 1983. Teknologi Refrigerasi Hasil Perikanan: Teknik Pendinginan Ikan. Paripurna. Jakarta. 237 hlm. Iswadi. 2012. Isolasi fage litik spesifik Shigella sp. Jurnal Ilmiah Pendidikan Biologi, Biologi Edukasi. 4 (2) : 112-117. Jan Ceyssens, P. 2009. Isolation and characterization of lytic bacteriophages infecting Pseudomonas aeruginosa. (Doctoraatsproefschrift) nr. 879 aan de faculteit Bio-ingenieurswetenschappen van de K.U.Leuven. 166 p.
70
Jin, M., T. Ye, and X. Zhang. 2013. Roles of bacteriophage GVE2 endolysin in host lysis at high temperatures. J. Microbiology 159 : 1597-1605. Kang, H-W., J-W. Kim, T-S. Jung, G-J. Woo. 2013. A new biocontrol agent for Salmonella enterica serovars enteritidis and typhimurium in foods: characterization, application, sequence analysis, and oral acute toxicity study. Appl. Environ Microbiol. 79 (6) :1956-1968. Karnila, R., Suparmi dan M. Romaida. 2006. Kajian Sifat Mutu Udang Galah (Macrobrachium Rosenbergii) Segar Pada Penyimpanan Suhu Kamar. Berkala Perikanan Terubuk. 33 (2) : 121-125. Kęzik-Szeloch, A., Z. Drullis-Kawa, B. Weber-Dąbrowska, J. Kassner, G. Majkowska-Skrobek, D. Augustyniak, M. Lusiak-Szelachowska, M. Zaczek, A. Gȯrski, and A.M. Kropinski. 2013. Characterising the biology of novel lytic bacteriophages infecting multidrug resistant Klebsiella pneumoniae. Virology Journal, 10 (100) : 1-12. Kusumah, S.W.D., dan H.D Ariesyady, 2012. Microbiological source tracking bakteri Salmonella sp dan Escherichia coli dengan metode antibiotic resistance analysis di Sungai Citarum hulu. Leverentz, B., W.S. Conway, W. Janisiewicz and M.J. Camp. 2004. Optimizing concentration and timing of a phage spray application to reduce listeria monocytogenes on honeydew melon tissue. Journal of Food Protection. 67 (8) : 1682-1686. Lim, Y.S., M. Jegathesan and M.Y. Ong. 1980. Comparison of six selective media for recovering Salmonella. Malaysian J. Pathol. 3 : 31-33. Lungren, M.P., D. Christensen, R. Kankotia, I. Falk, B.E. Paxton, and C.Y Kim. 2013. Bacteriophage K for reduction of Staphylococcus aureus biofilm on central venous catheter material. J. Bacteriophage. 3 (4) : 1-3. Maas, R. 2013. Wholey Brand Cooked Shrimp Recall Issued Due To Salmonella Risk. Lawsuits.Com. Http://Www.Aboutlawsuits.Com/Shrimp-RecallSalmonella-Risk-51148/ Kamis 21 Nopember 2013 14:52. Madigan. et al. 2012. Brock Biology of Microorganisms 13th edition. Pearson Education, Inc. San Fransisco. Marathe, S.A., R. Chowdhury, R. Bhattacharya, A.G. Nagarajan and D. Chakravortty. 2012. Direct detection of Salmonella without pre-enrichmnet in milk, ice cream, and fruit juice by PCR against hilA gene. Food Control. 23 (2) : 559-563. McCallin, S., S.A. Sarker, C. Barretto, S. Sultana, B. Berger, S. Huq, L. Krause, R. Bibiloni, B. Schmitt, G. Reuteler, H. Brüssowa. 2013. Safety analysis of a
71
Russian phage cocktail: From MetaGenomic analysis to oral application in healthy human subjects. Virology. 443: 187–196. Migeemanathan, S. R. Bhat, L. Min-Tse and W. Wan-Abdullah. 2011. Effect of temperature abuse on the survival, growth, and inactivation of Salmonella typhimurium in goat milk. Foodborne Pathogens and disease. 8 (11) : 12351240. Muliani, Nurbaya, dan M. Atmomarsono. 2010. Penggunaan probiotik pada pemeliharaan udang windu (Penaeus monodon) dengan Dosis yang Berbeda. Prosiding Forum Teknologi Akuakultur. 249-259. Multi Cultural Health Communication. 2011. Salmonellosis. Multi Cultural Health Communication. http://www.mhcs.health.nsw.gov.au/publication sandresources/pdf/publication-pdfs/diseases-and-conditions/7190/doh-7190ind.pdf Narumi, H.E., Zuhriansyah dan I. Mustofa. 2009. Deteksi pencemaran bakteri Salmonella sp (Penaeus merguiensis) segara di pasar tradisional kotamadya Surabaya. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan. 1 (1) : Noviani, A. 2013. Produksi di dunia turun, ekspor udang Indonesia bisa naik. Bisnis Indonesia.com. Rabu, 14 Agustus 2013, 17:58 WIB. http://industri.bisnis.com/read/20130814/99/156625/produksi-di-dunia-turunekspor-udang-indonesia-bisa-naik. 06 Agustus 2014 20:18. Nurizkiawan, Z. 2011. Isolasi bakteriofag dan aplikasinya dalam mengendalikan bakteri patogen untuk meningkatkan keamanan pangan. (Skripsi). Universitas Brawijaya. Malang. Olgunoğlu, İlkan Ali. 2012. Salmonella in Fish and Fishery Products, Salmonella - A Dangerous Foodborne Pathogen, InTech. http://www.intechopen.com/ books/salmonella-a-dangerous-foodborne-pathogen/salmonella-in-fishandfishery-products 23 Januari 2014 15:03. Pardio, V.T., K.N. Waliszewski and P. Zuniga. 2011. Biochemical, microbial and sensory changes in shrimp (Panaeus aztecus) dipped in different salutions using face-centre central composite design. International Journal of Food Science and Technology. 46:305-314. Perdana, Damar. 2013. Sukses Bisnis Udang Galah. Pustaka Baru Press. Yogyakarta. Phumkhacorn, P. and Pongsak R. 2010. Isolation and partial characterization of a bacteriophage infecting the shrimp pathogen Vibrio harveyi. African Journal Of Microbiology Research. 4 (16) : 1794-1800.
72
Poeloengan, M., Komala, I dan Susan M. Noor. 2005. Bahaya Salmonella terhadap kesehatan. Prosiding Lokakarya Nasional Penyakit Zoonosis. Bogor. 216-223. Pratiwi, R.H., S.Budiarti. 2010. Karakterisasi fage litik dari limbah cai rumah tangga terhadap enteropathogenic Escherichia coli resisten antibiotik. Prosiding Seminar Nasional Biologi. 726-736. Pui, C.F, W.C .Wong, L.C. Chai, R. Tunung, P. Jayeletchumi, M.S. Noor Hidayah, A. Ubong, M.G. Farinazleen, Y.K. Cheah and R. Son. 2011. Review article Salmonella: A foodborne pathogen. International Food Research Journal. 18: 465-473. Purwantiningsih, T.I, Y.Y. Suranindyah, dan Widodo. 2014. Aktivitas senyawa fenol dalam buah mengkudu (Morinda citrifolia) sebagai antibakteri alami untuk penghambatan bakteri penyebab mastitis. Buletin Peternakan. 38(1): 59-64. Pusat Data Statistik dan Informasi . 2012. Statistik Perikanan Tangkap, Perikanan Budidaya, dan Ekspor Impor Setiap Provinsi Seluruh Indonesia 2003-2010. Pusat Data Statistik dan Informasi Sekretariat Jenderal Kelautan dan Perikanan. Jakarta. 302 hlm. Puspitasari, G., S. Murwani, Herawati. 2010. Uji daya antibakteri perasan buah mengkudu matang (Morinda citrifolia) terhadap bakteri Methicillin Resistan Staphylococcus Aureus (MRSA) M.2036.T secara in vitro. Program Studi Pendidikan Dokter Hewan. Universitas Brawijaya. Malang. 1–7. Rahaju, S.H. 2014. Metoda pengkayaan, filtrasi dan pertumbuhan untuk isolasi bakteriofag spesifik Salmonella typhimurium pada sampel air. Prosiding SnaPP2014 Sains, Teknologi dan Kesehatan. 315-322. Rao, K.V.N., Yi-Xun He, and R. Kalyanasundaram. 2003. Expression of a 28kilodalton Glutathione s-transferase antigen of schistosoma mansoni on the surface of filamentous phages and evaluation of its vaccine potential. Clinical and Diagnostis Laboratory Immunology. 536-541. Sanger, Grace. 2010. Mutu Kesegaran Ikan Tongkol (Auxis Tozordl Selama Penyimpanan Dingin Warta WIPTEK (Nomor :35/Th. 2010 / MAR. http://repo.unsrat.ac.id/38/1/4_-_Mutu_Kesegaran_Ikan.pdf. Sangha, K.K., B.V.S. Kumar, R.K. Agrawal, D. Deka, and R. Verma. 2014. Proteomic characterization of lytic bacteriophages of staphylococcus aureus isolated from sewage affluent of India. International Scholarly Research Notices. 2014 (ID 265298) : 6 pp.
73
Santos, S.B., C. Carvalho, J. Azerado, E.C. Ferreira. 2014. Population dynamics of a Salmonella lytic phageand its host: implication of the host bacterial growth rate in modelling. Plos one. 9 (7) : 1-10. Sarida, M., Tarsim dan I. Faizal. 2010. Pengaruh ekstrak buah mengkudu (Morinda citrifolia L.) dalam menghambat pertumbuhan bakteri Vibrio harveyi secara in vitro. Jurnal Penelitian Sains. 13 (3D) : 13312. Sartika, D. 2012. Efektifitas dan keamanan in vivo fage litik FR38 dari limbah domestik dalam menurunkan cemaran salmonella P38 indigenous pada sosis, susu dan air. (Desertasi). Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor. Bogor. Sartika, D., S.Budiarti, M. Sudarwanto. 2012. Phage FR38 treatmen on sprague dawley rat inferred from blood parameter and organ systems. Hayati Journal of Biosciences. 19 (3) : 131-136. Shakir, Zakiya. 2012. Molecular Characterization of Fluoroquinolone-Resistant Aeromonas spp. Isolated from Imported Shrimp. Appl. Environ. Microbiology. 78(22):8137-8141. Soeseno, S. 1983. Budidaya Ikan dan Udang Dalam Tambak. Gramedia. Jakarta. Sriket, P. 2006. Comparative study on the characteristics and quality changes during iced storage of Black tiger and White shrimps. (Thesis). Prince of Songkla University. Thailand. 139 pp. Sturino, J.M. and T.R. Klaenhammer. 2006. Engineered bacteriophage-defence systems in bioprocessing. Nature Reviews Microbiology. 4 : 395–404. Subyakto, S. 2009. Budidaya Udang Vannnamei (Litopenaeus vannamei) Semi Intensif Dengan Metode Resirkulasi Tertutup Untuk Menghindari Serangan Virus. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan. 1 (2). Sunanti. 2007. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Tunggal Bawang Putih (Allium sativum Linn.) Dan Rimpang Kunyit (Curcuma domestica Val.) Terhadap Salmonella typhimurium. Skripsi. IPB. Bogor. 27hlm. Sunarti, Riri Novita. 2012. Spesifitas dan efektivitas fage litik salmonella sp. (Thesis). Institut Pertanian Bogor. Bogor. Supriadi. 2012. Mengandung Salmonela, Produk RI Sempat Ditolak AS. Surabaya pos, Rabu, 03/10/2012 12:14 WIB.http://www.seafoodservicecentre.com/ index.php?option=com_content&view=article&id=201%3Amengandungsalmonela-produk-ri-sempat-ditolak-as-&catid=34&Itemid=1.
74
Taha, R.R., Alghalibi, S.M., and Saleh, M.G.S. 2013. Salmonella spp. in patients suffering from enteric fever and food poisoning in Thamar city, Yemen. Eastern Mediterranean Health Journal. 19 (1) : 88-93. Taher, Nurmeilita. 2010. Penilaian mutu organoleptik ikan mujair (Tilapia mossambica) segar dengan ukuran yang berbeda selama penyimpanan dingin. Jurnal Perikanan dan Kelautan. IV (1) : 8-12. Tim Karya Tani Mandiri. 2009. Pedoman Budidaya Tambak Udang. Nuansa Aulia. Bandung. Trobos. 2015. Perkuat Dominasi Udang Indonesia. http://www.trobos.com/detail_berita.php?sir=12&sid=5856
Trobos.
Vaks, L., and I. Benhar. 2011. In vivo characteristics of targeted drug-carrying filamentous bacteriophage nanomedicines. Journal of Nanobiotechnology. 9 (58) : 1-10. Violeta T. P, Waliszewski & P Zun˜ iga. 2011. Biochemical, microbiological and sensory changes in shrimp (panaeus aztecus) dipped in different solutions using face-centred central composite design. International Journal of Food Science and Technology. 46 : 305–314. Wibowo, A., L. Muliana, M.H. Prabowo. 2010. Analisis residu antibiotik kloramfenikol dalam daging ikan gurami (Osphronemus gouramy, Lac) menggunakan metode high performance liquid chromatography. Jurnal Ilmiah Farmasi. 7 (1) : 1-10. Widadi, S., Linayanti, Sumiyati. 2012. Exploration of bacteriophage virulent to xanthomonas campestris pv campetris toward development as biocontrol agent for cabbage black rot disease. Jurnal Ilmu-ilmu Pertanian Caraka Tani 27 (1) : 1-9. Widanarni, M.A. Lidaenni, D. Wahjuningrum. 2010. Pengaruh Pemberian Bakteri Probiotik Vibrio SKT-b dengan Dosis Yang Berbeda Terhadap Kelangsungan Hidup Dan Pertumbuhan Larva Udang Windu (Penaeus monodon). Jurnal Akuakultur Indonesia. 9 (1) : 21–29. Woolston, J., Parks, A.R., Abuladze, T., Anderson, B., Li, M., Carter, C., Hanna, F.L., Heyse, S., Charbonneau, D., Sulakvelidze, A. 2013. Bacteriophages lytic for Salmonella rapidly reduce Salmonella contamination on glass and stainless steel surfaces. Bacteriophage 3 (e25697) : 1-6. Wray, C., R.H. Davies and S.J. Evans. 2000. Poultry Meat Science. www.adiveter.com.articles Youssef, F., A. Marais, C. Faure, P. Gentit, and T.Candresse, 2011. Strategies to facilitate the development of uncloned or cloned infectious full-length viral
75
cDNAs: Apple chlorotic leaf spot virus as a case study. Virology Journal, 8 (488) : 1-12. Yudiati, E., Z. Arifin dan I. Riniatsih. 2010. Pengaruh aplikasi probiotik terhadap laju sintasan dan pertumbuhan tokolan udang Vanamei (Litopeneus vannamei), populasi bakteri Vibrio, serta kandungan amoniak dan bahan organik media budidaya. Ilmu Kelautan. 15 (3) : 153-158. Zhang, J., Z. Li, Z. Cao, L. Wang, X. Li, S. Li and Y. Xu. 2015. Bacteriophages as antimicrobial agents againts major pathogens in swine: a review. Journal of Animal Science and Biotechnology. 1-7
