12172275001V8.0
AST (ASAT/GOT)
Aspartátaminotransferáza dle IFCC s aktivací pyridoxalfosfátem Informace pro objednání Analyzátor(y), na kterých lze soupravu použít Aspartate aminotransferase acc. to IFCC with/without pyridoxal phosphate 10851124 216 activation Roche/Hitachi 902 ([1] 12 x 50 mL, [1a] 12 x 50 mL, [2] 3 x 44 mL) 10759350 190 Calibrator f.a.s (12 x 3 mL) Kód 401 10171743 122 Precinorm U (20 x 5 mL) Kód 300 10171735 122 Precinorm U (4 x 5 mL) Kód 300 12149435 122 Precinorm U plus (10 x 3 mL) Kód 300 10171778 122 Precipath U (20 x 5 mL) Kód 301 10171760 122 Precipath U (4 x 5 mL) Kód 301 12149443 122 Precipath U plus (10 x 3 mL) Kód 301 Některé analyzátory a soupravy nejsou dostupné ve všech zemích. Pro další systémové aplikace kontaktujte místní zastoupení Roche Diagnostics. Česky
Reagencie – pracovní roztoky
AST IFCC bez aktivace pyridoxal fosfátem Použití In vitro test pro kvantitativní měření aspartátaminotransferázy (AST) v lidském séru a plazmě na automatizovaných analyzátorech klinické chemie Roche. Souhrn1,2,3,4 Aspartátaminotransferáza (glutamát-oxalacetát transamináza) patří do skupiny transamináz, které katalyzují vzájemnou konverzi aminokyselin a α‑ketokyselin přenosem aminoskupiny. Aspartátaminotransferáza je běžně rozšířený enzym ve tkáních. Ačkoliv srdeční sval představuje největší zdroj aktivity enzymu, s významným množstvím aktivity se lze setkat i v mozku, játrech, sliznici zažívacího traktu, tukové tkáni, kosterním svalstvu a ledvinách. AST je přítomná v cytoplasmě i v mitochondriích buněk. V případech mírného poškození tkáně, dochází k uvolnění především cytoplasmatického AST a v menší míře i z mitochondrií. Těžké poškození tkáně znamená uvolnění mitochondriálního enzymu ve větší míře. Zvýšené hodnoty transamináz indikují infarkt myokardu, jaterní onemocnění, svalovou dystrofii a poškození vnitřních orgánů. V roce 1955 Karmen a kol. popsali první kinetické stanovení aktivity AST v séru. International Federation of Clinical Chemistry (IFCC) doporučila v letech 1977 a 1980 standardizované postupy pro měření AST, včetně optimalizace koncentrace substrátu, využití TRIS pufrua), preinkubace séra a pufru, umožňující vedlejší reakci s NADH, startu substrátem a volitelné aktivace pyridoxal fosfátem. V roce 2002 IFCC potvrdila své doporučení a rozšířila na 37 °C.5 Popisovaná metoda je odvozena z doporučení IFCC a byla optimalizována na využitelnost a stabilitu.
R1
(Nádobky 1 a 1a) TRIS pufr: 100 mmol/L, pH 7.8; L‑aspartát: 300 mmol/L; NADH (kvasinky): 0.23 mmol/L; MDH (vepřové srdce) ≥ 0.53 U/mL (8.83 µkat/L); LDH (mikroorganismy) ≥ 0.75 U/mL (12.5 µkat/L); konzervans
R2
(Nádobka 2) α‑Ketoglutarát: 94 mmol/L; konzervans
a) TRIS = Tris(hydroxymethyl)‑aminomethan
Princip testu4,6 UV test podle standardizované metody • Vzorek a přidání R1 • Přidání R2 a zahájení reakce: AST
α‑ketoglutarát + L‑aspartát
L‑glutamát + oxaloacetát
Enzym AST katalyzuje tuto rovnovážnou reakci. Nárůst oxalacetátu je stanovován v indikátorové reakci, katalyzované malát dehydrogenázou. MDH
oxalacetát + NADH + H+
L‑malát + NAD+
NADH je oxidováno na NAD+. Rychlost fotometricky měřeného úbytku NADH je přímo úměrná rychlosti tvorby oxalacetátu a tím i aktivitě AST.
Bezpečnostní opatření a varování Pro diagnostické použití in vitro. Dodržujte běžná bezpečnostní opatření, nutná pro nakládání se všemi reagenciemi. Likvidace všech odpadních materiálů musí probíhat v souladu s místními předpisy. Bezpečnostní listy jsou pro odborné uživatele dostupné na vyžádání. Zacházení s reagenciemi R1
Pro přípravu 50 mL rozpusťte za mírného míchání 2 tablety reagencie z nádobky 1a v jedné nádobce 1. Pro malé série rozpusťte za mírného míchání 1 reagenční tabletu z nádobky 1a v 25 mL pufru z nádobky 1.
R2
Připravena k použití
Uskladnění a stabilita Součásti neotevřené soupravy: Do data exspirace při 2‑8 °C R1: 4 týdny otevřená a v chlazeném prostoru analyzátoru R2: 90 dní otevřená v chlazeném prostoru analyzátoru Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testovány a jsou přijatelné. Sérum Plazma: Heparin nebo EDTA plazma. Sérum/plazmu oddělte od sraženiny/buněk do 8 hodin při pokojové teplotě nebo do 48 hodin při 2‑8 °C. Uvedené druhy vzorků byly testovány s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době, tzn. že do testu nebyly zařazeny všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Vzorky, obsahující precipitáty, centrifugujte před provedením testu. Stabilita:
24 hodin při 15‑25 °C7 7 dní při 15‑25 °C (s aktivací P‑5‑P)7 7 dní při 2‑8 °C8
Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". 2014-07, V 8.0 Česky
1/5
12172275001V8.0
AST (ASAT/GOT)
Aspartátaminotransferáza dle IFCC s aktivací pyridoxalfosfátem Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) ▪ Viz část "Informace pro objednání" ▪ Celkové vybavení laboratoře ▪ 0.9% NaCl Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro příslušný analyzátor. Pokyny ke stanovení specifické pro analyzátor vyhledejte v příslušném návodu k použití. Provádění aplikací, které nejsou schváleny Roche, je bez záruky a musí být definováno uživatelem. Kalibrace Návaznost:5 Tato metoda byla standardizovaná podle originální formulace IFCCb) použitím kalibrovaných pipet spolu s manuálním fotometrem, poskytujícím absolutní hodnoty a substrát‑specifickou absorptivitu, ε. S1: 0.9% NaCl S2: C.f.a.s. Frekvence kalibrace 2bodová kalibrace se doporučuje: ▪ po změně šarže reagencií ▪ jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality b) s nebo bez pyridoxal fosfátu, v závislosti na aplikaci
Kontrola kvality Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. Kontrolní intervaly a limity by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaný postup pro případ, že hodnoty kontrol překročí definované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Výpočet Analyzátor automaticky vypočítá aktivitu analytu pro každý vzorek. Převodní faktor: U/L x 0.0167 = µkat/L Omezení - interference Kritérium: Výtěžnost v rámci ± 10 % počáteční hodnoty. Hemolýza:9 Bez významných interferencí do H indexu 25 (přibližná koncentrace hemoglobinu: 25 mg/dL nebo 16 µmol/L). Ikterus:9 Bez významných interferencí do hodnoty I indexu 60 (přibližná koncentrace konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu: 60 mg/dL nebo 1026 µmol/L). Lipémie (Intralipid):9 Bez významných interferencí do hodnoty L indexu 500. Mezi L indexem (odpovídá zákalu) a koncentrací triglyceridů je slabá korelace. Lipemie může způsobit varovné označení absorbance v důsledku jejího zvýšení. Isoniazid může způsobit uměle nízké a Furosemid uměle vysoké výsledky aspartát aminotransferázy při terapeutických koncentracích. Fyziologické koncentrace sulfasalazinu nebo sulfapyridinu v plazmě mohou vést k nesprávným výsledkům. Cyanokit (hydroxocobalamin) při terapeutických hladinách způsobuje významně nižší výsledky. Ve velmi vzácných případech gamapatie, především u typu IgM (Waldenströmova makroglobulinémie), může způsobit nespolehlivé výsledky.10 Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s anamnestickými údaji pacienta, klinickým vyšetřením a jinými nálezy. POTŘEBNÝ KROK Programování speciálního mytí: Při zpracovávání určitých kombinací testů na analyzátorech Roche/Hitachi je použití speciálních mycích cyklů povinné. Pro další pokyny čtěte nejnovější verzi seznamu zamezení přenosu (carry‑over) a návod k použití. Uživatelé v USA naleznou pokyny pro speciální mycí cykly v dokumentu Special Wash Programming, dostupném na stránce usdiagnostics.roche.com, a v návodu k použití.
Tam, kde se to vyžaduje, musí být před vykazováním výsledků prove deno programování speciálního mytí/zamezení přenosu mezi vzorky (carry‑over). Limity a rozmezí Rozsah měření 4‑800 U/L (0.07‑13.34 µkat/L) Vzorky s vyššími aktivitami měřte pomocí funkce rerun. Vzorky nařeďte 1:3.3 pomocí funkce rerun. Výsledky ze vzorků naředěných funkcí rerun jsou automaticky vynásobeny faktorem 3.3. Na přístrojích bez funkce rerun vzorek ručně nařeďte 0.9% roztokem NaCl nebo destilovanou/deionizovanou vodou (např. 1 + 2). Výsledek vynásobte odpovídajícím faktorem ředění (např. 3). Spodní limity měření Spodní detekční limit testu 4 U/L (0.07 µkat/L) Spodní detekční limit představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Je vypočítána jako hodnota ležící 3 standardní odchylky nad nejnižším standardem (standard 1 + 3 SD, opakovatelnost, n = 21). Očekávané hodnoty11 Dle optimalizované standardní metody (srovnatelné s metodou IFCC bez aktivace pyridoxal fosfátem12): U/L
µkat/L
Muži
do 40
do 0.67
Ženy
do 32
do 0.53
Faktor 2.13 byl použit k převodu hodnot z 25 °C na 37 °C.13 Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů, a je-li to nutné stanovit si vlastní referenční rozmezí. Specifické údaje o využití Údaje o využití, typické pro analyzátory, jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Preciznost Preciznost byla měřena použitím lidských vzorků a kontrol podle interního protokolu s opakovatelností (n = 21) a mezilehlou precizností (1 alikvot na sérii, 1 série denně, 10 dní). Byly získány následující výsledky: Opakovatelnost Vzorek
Průměr
Mezilehlá preciznost VK
Průměr
VK
U/L
µkat/L
%
U/L
µkat/L
%
58
0.97
1.8
58
0.97
3.2
Precitrol‑N
32
0.53
2.1
32
0.53
3.2
Precitrol‑A
124
2.07
1.1
124
2.07
1.8
Lidské sérum
Porovnání metod Porovnání stanovení AST s 10 µL množstvím vzorku (y) s 20 µL stanovením (x) použitím reagencií AST IFCC od Roche na analyzátoru Roche/Hitachi 911 poskytlo následující korelaci (U/L): Passing/Bablok14
Lineární regrese
y = 1.01x - 0.93
y = 1.01x - 0.75 r = 1.000
Počet naměřených vzorků: 91 Aktivity vzorků byly v rozmezí 11 až 690 U/L (0.18‑11.5 µkat/L). AST IFCC s aktivací pyridoxal fosfátem Vyžaduje tablety pyridoxal fosfátu Kat. č. 10400939 035
2/5
Souprava s 1 x 27 tabletami
2014-07, V 8.0 Česky
12172275001V8.0
AST (ASAT/GOT)
Aspartátaminotransferáza dle IFCC s aktivací pyridoxalfosfátem Použití In vitro test pro kvantitativní stanovení aspartát aminotransferázy (AST) s aktivací pyridoxal fosfátem v lidském séru a plazmě na automatizovaných analyzátorech klinické chemie Roche. Souhrn4 Popisovaná metoda je odvozena z doporučení IFCC a optimalizovaná na využitelnost a stabilitu. Princip testu4,6,15 UV test podle standardizované metody • Vzorek a přidání R1 • Přidání R2 a zahájení reakce: L‑aspartát + pyridoxal fosfát‑enzymový komplex
Konsenzuální hodnoty s aktivací pyridoxal fosfátem:17 U/L Muži
do 50
do 0.83
Ženy
do 35
do 0.58
Specifické údaje o využití Údaje o využití, typické pro analyzátory, jsou uvedeny níže. Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit. Preciznost Preciznost byla měřena použitím lidských vzorků a kontrol podle interního postupu. Opakovatelnost (n = 21), mezilehlá preciznost (1 alikvot na sérii, 1 série denně, 10 dní). Byly získány následující výsledky:
oxalacetát + pyridoxamin fosfát enzymový komplex
Opakovatelnost Vzorek
α‑ketoglutarát + pyridoxamin fosfát‑enzymový komplex
MDH
malát + NAD+
NADH je oxidováno na NAD+. Rychlost fotometricky měřeného úbytku NADH je přímo úměrná rychlosti tvorby oxalacetátu a tím i aktivitě AST. Reagencie - pracovní roztoky R1
(Nádobky 1 a 1a, tablety s pyridoxalfosfátem) TRIS pufr: 100 mmol/L, pH 7.8; L‑aspartát: 300 mmol/L; NADH (kvasinky): 0.23 mmol/L; MDH (vepřové srdce) ≥ 0.53 U/mL (8.83 µkat/L); LDH (mikroorganismy) ≥ 0.75 U/mL (12.5 µkat/L); pyridoxalfosfát ≥ 120 µmol/L; konzervans
R2
(Nádobka 2) α‑Ketoglutarát: 94 mmol/L; konzervans
Zacházení s reagenciemi R1:
Pro přípravu 50 mL přidejte 2 reagenční tablety z nádobky 1a do nádobky 1. Nechte rozpustit za mírného míchání. Ihned potom přidejte 2 tablety pyridoxal fosfátu a nechte rozpustit. Pro malé série rozpusťte za mírného míchání 1 reagenční tabletu z nádobky 1a v 25 mL pufru z nádobky 1. Poté přidejte k reagencii 1 tabletu pyridoxal fosfátu a nechte rozpustit.
R2:
Připravena k použití
Uskladnění a stabilita Součásti neotevřené soupravy: Do uvedeného data expirace při 2‑8 °C R1:
6 dní otevřená v chlazeném prostoru analyzátoru
R2:
90 dní otevřená v chlazeném prostoru analyzátoru
Pro odběr a přípravu vzorků, dodávaný a potřebný materiál (ale nedodávaný), kalibraci, kontrolu kvality, výpočet, interference a rozsah měření čtěte část AST IFCC bez aktivace pyridoxal fosfátem. Očekávané hodnoty Podle IFCC/Standard Method 94 s aktivací pyridoxal fosfátem při 37 °C:16 U/L
µkat/L
Muži
10‑50
0.17‑0.83
Ženy
10‑35
0.17‑0.58
2014-07, V 8.0 Česky
VK
Průměr
VK
µkat/L
%
U/L
µkat/L
%
143
2.39
0.7
102
1.70
2.9
Precinorm U
81
1.35
4.0
74
1.24
3.4
Precipath U
175
2.91
0.8
161
2.69
1.9
Lidské sérum Pyridoxal fosfát je koenzym, který přenáší aminoskupinu z jedné aminokyseliny (aspartát) na jinou (glutamát) přes odpovídající α‑ketokyselinu. Aspartát reaguje za tvorby oxalacetátu. Přidání pyridoxal fosfátu do reakční směsi zajišťuje maximální katalytickou aktivitu enzymu, zatímco přidání α‑ketoglutarátu způsobí opětovné uvolnění pyridoxal fosfátu, a tím obnovení reakce transaminázy. Nárůst oxalacetátu je stanovován v indikátorové reakci, katalyzované malát dehydrogenázou.
Průměr
Mezilehlá preciznost
U/L
L‑glutamát + pyridoxal fosfát‑enzymový komplex
oxalacetát + NADH + H+
µkat/L
Porovnání metod Porovnání stanovení AST s 10 µL množství vzorku (y) s 20 µL stanovením (x), použitím reagencií AST IFCC s pyridoxal fosfátem od Roche na analyzátoru Roche/Hitachi 911, poskytlo následující korelaci (U/L): Passing/Bablok14
Lineární regrese
y = 1.01x - 0.24
y = 1.02x - 1.21 r = 1.000
Počet naměřených vzorků: 91 Aktivity vzorků byly v rozmezí 12 až 857 U/L (0.20‑14.28 µkat/L). Odkazy 1 Greiling H, Gressner AM, eds. Lehrbuch der Klinischen Chemie und Pathobiochemie, 3rd ed. Stuttgart/New York: Schattauer Verlag 1995. 2 Schmidt FW. Ref Med Ges, Marburg/Lahn, December 1959. 3 Karmen A, Wroblewski F, LaDue JS Transaminase activity in human blood J Clin Invest 1955;34(1):126-133. 4 Bergmeyer HU, Hørder M, Rej R. Approved recommendation (1985) on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes. Part 2. IFCC Method for aspartate aminotransferase. J Clin Chem Clin Biochem 1986;24:497-510. 5 Schumann G, Bonora R, Ceriotti F, et al. IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 °C – Part 5. Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Aspartate Aminotransferase. Clin Chem Lab Med 2002;40(7):725-733. 6 ECCLS. Determination of the catalytic activity concentration in serum of L-alanine aminotransferase (EC 2.6.1.2, ALAT). Klin Chem Mitt 1989;20:198-204. 7 Tietz NW, ed. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. Philadelphia PA: WB Saunders Company 1995;76-77. 8 Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. WHO Publication WHO/DIL/LAB/99.1 Rev. 2. Jan. 2002. 9 Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32:470-475. 10 Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinical chemistry assays: mechanisms, detection and prevention. Clin Chem Lab Med 2007;45(9):1240-1243. 11 Thefeld W, Hoffmeister H, Busch EW, et al. Referenzwerte für die Bestimmungen der Transaminasen GOT und GPT sowie der alkalischen Phosphatase im Serum mit optimierten Standardmethoden. Dtsch Med Wschr 1974;99(8):343-351. 3/5
12172275001V8.0
AST (ASAT/GOT)
Aspartátaminotransferáza dle IFCC s aktivací pyridoxalfosfátem 12 Klein G, Lehmann P, Michel E, et al. Vergleich der IFCC-Methoden für ALAT, ASAT und GGT bei 37 °C mit den eingeführten Standardmethoden bei 25 °C und 37 °C. Lab Med 1994;18:403-404. 13 Zawta B, Klein G, Bablok W. Temperaturumrechnung in der klinischen Enzymologie? Klin Lab 1994;40:23-32. 14 Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11):783-790. 15 Keller H, ed. Klinisch-chemische Labordiagnostik für die Praxis, 2nd ed. Stuttgart/New York: Georg Thieme Verlag 1991. 16 Klauke R, Schmidt E, Lorentz K. Recommendations for carrying out standard ECCLS procedures (1988) for the catalytic concentrations of creatine kinase, aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase and γ-glutamyltransferase at 37 °C. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1993;31:901-909. 17 Thomas L, Müller M, Schumann G, et al. Consensus of DGKL and VDGH for interim reference intervals on enzymes in serum. J Lab Med 2005;29(5):301-308.
28
Calib. Pos. 3
0
29
Calib. Conc. 4
0
30
Calib. Pos. 4
0
31
Calib. Conc. 5
0
32
Calib. Pos. 5
0
33
Calib. Conc. 6
0
34
Calib. Pos. 6
0
35
S1 ABS
0
36
K Factor
10000
37
K2 Factor
10000
38
K3 Factor
10000
39
K4 Factor
10000
40
K5 Factor
10000
41
A Factor
0
Nastavení přístroje
42
B Factor
0
Analyzátor Roche/Hitachi 902
43
C Factor
0
44
SD Limit
0.1
Duplicate Limit
15 125
č.
bez P‑5‑P
s P‑5‑P
1
Test Name
AST
45
2
Assay Code (Mthd)
Rate A
46
Sens. Limit
47
S1 Abs. Limit (L) -32000
Assay Code (2. Test)
0
48
S1 Abs. Limit (H) 32000
49
Abs. Limit
5500
4
Reaction Time
5
10
50
Abs. Limit (D/I)
Decrease
5
Assay Point 1
9
22
51
Prozone Limit
0
6
Assay Point 2
17
35
52
Assay Point 3
0
Proz. Limit (Upp/Low)
Lower
7 8
Assay Point 4
0
53
Wavelength (SUB)
700
Prozone (Endpoint)
35
9
54
Expect. Value (L) .....
55
Expect. Value (H) .....
3
10
Wavelength (MAIN)
340
56
Instr. Fact. (a)
1.0
11
Sample Volume
10.0
57
Instr. Fact. (b)
0.0
12
R1 Volume
250
58
Key setting
......
13
R1 Pos.
.....
..... Data vložená obsluhou
14
R1 Bottle Size
Large
15
R2 Volume
0
0
16
R2 Pos.
0
0
17
R2 Bottle Size
Large
Small
18
R3 Volume
0
50
19
R3 Pos.
0
.....
20
R3 Bottle Size
Small
Large
21
Calib. Type (Type)
Linear
22
Calib. Type (Wght)
0
23
Calib. Conc. 1
0.0
24
Calib. Pos. 1
.....
25
Calib. Conc. 2
.....
Významné doplňky nebo změny jsou označeny pruhem podél textu.
26
Calib. Pos. 2
.....
© 2013, Roche Diagnostics
27
Calib. Conc. 3
0
140
7500
P‑5‑P = pyridoxal fosfát Více informací je uvedeno v příslušném návodu k použití určeném pro analyzátor, v odpovídajících aplikačních letácích a metodických listech všech potřebných komponent. Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla. Oddělení tisíců se nepoužívá. Symboly Roche Diagnostics používá následující symboly a znaky, včetně uvedených v normě ISO 15223‑1. Obsah soupravy Reagencie Kalibrátor Objem po rekonstituci nebo smíchání
4/5
2014-07, V 8.0 Česky
12172275001V8.0
AST (ASAT/GOT)
Aspartátaminotransferáza dle IFCC s aktivací pyridoxalfosfátem
Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com
2014-07, V 8.0 Česky
5/5
