Enterotoxiny Staphylococcus aureus
Jana Kotschwarová Andrea Koťová
Obsah • • • • • • • •
Charakteristika Staphylococcus aureus Vlastnosti Faktory virulence Enterotoxiny Patogeneze Výskyt Metody stanovení Prevence výskytu
Charakteristika Staphylococcus aureus • „Zlatý stafylokok“ • nejvýznamnější druh rodu Staphylococcus (čeleď Staphylococcaceae) • velikost 0,7 – 0,9 µm, tvoří hroznovité shluky • G+ kok, fakultativně anaerobní, nepohyblivý • zkvašuje manitol
Vlastnosti • • • •
tvoří exopolysacharidy – slizy tvoří biofilm pomocí adhezinu na krevním agaru může způsobovat úplnou hemolýzu MRSA (methicillin-rezistentní S. aureus)- kmeny rezistentní vůči atb. oxacilinu
Podmínky
Produkce enterotoxinu (optimum/rozmezí)
Růst bakterií
Teplota [°C]
7-48
35-40
10-48
pH
4,3-9
7-8
4,5-9,6
aw
0,83-0,99
0,98
0,87-0,99
Faktory virulence • produkce velkého množství biologicky aktivních látek a. Adhezivní faktory
b. Propagační a transportní faktory- α hemolyzin
c. Ochranné faktory a toxiny
Enterotoxiny • • • • • • •
toxické exoproteiny chránící koky bohaté na Lys, Asp, Glu a Tyr metabolické produkty při množení S. aureus vyvolávají alimentární onemocnění 20 typů enterotoxinů SEA – SEU (značení genů) SEA-SEE způsobuje alimentární intoxikaci odolávají varu 20 min
Patogeneze • přirozeně se vyskytuje na kůži a oblasti nosohltanu lidí a zvířat • při oslabení organismu- kožní záněty, alimentární onemocnění, pneumonie, osteomyelitidy, STS, syndrom opařené kůže, abscesy, bakteriální endokarditidy a sepse
Stafylokoková enterotoxikóza • infekční dávka S. aureus min. 105 KTJ.g-1 a koncentrace toxinu v potravině 1 ng.g-1 • příznaky se objeví za 1-6 h po konzumaci • příznaky: nevolnost, zvracení, bolest břicha, průjem (bez horečky) a bolest hlavy • odeznění za 24 h • mnoho případů stafylokokové enterotoxikózy nezaznamenáno pro rychlý průběh
Výskyt • přirozeně osidluje pokožku a sliznice, běžná mikroflóra vemene • kontaminace ze zvířat, prostředí, nebo lidí během výrobního procesu • mléčné výrobky, lahůdky (šunka….), pudinky a salátové dresinky • u výrobků s velkým podílem ruční práce
Metody stanovení enterotoxinů • Přímé metody imunologické metody fyzikálně-chemické metody • Nepřímé metody molekulárně biologické metody
Imunologické metody ELISA • vazba antigenu a protilátky značené enzymem, který štěpením substrátu vyvolá barevnou změnu • nejčastěji se využívá tzv. sandwich ELISA, kdy jsou na detekovaný antigen navázány 2 protilátky- imobilizovaná a enzymaticky značená ELFA • princip je podobný jako u metody ELISA, rozdíl je v použitém substrátu, který je enzymem štěpen na fluorescenční produkt • vzniklé chemické změny jsou detekovány pomocí fotodiodového fluorimetru
RPLA = reverzní pasivní latexová aglutinace • aglutinační reakce • založena na vysoce specifické vazebné reakci mezi antigenem a protilátkou, nosičem je barevná latexová částice • provádí se v mikrotitračních destičkách
• hodnocení je semikvantitativní- podle mřížkové struktury vzniklé na dně jamek
Fyzikálně chemické metody SDS- PAGE • separace proteinů dle jejich pohyblivosti (v závislosti na délce řetězce) v elektrickém poli • polyakrylamidový gel s SDS
LC-MS • přesné stanovení proteinu na základě jeho molekulové hmotnosti a na základě pořadí AK po enzymatickém štěpení • nedostupnost std. pro celé spektrum SEs
HPLC • časově náročná příprava vzorků- složité extrakční postupy a následné čištění extraktů • pomocí kolony se stacionární fází separujeme jednotlivé toxiny • ověření identity toxinu imunologickou metodou • nejsou dostupné standardy pro všechny SEs, zatím stanoveno jen SEA a SEB
Molekulárně biologické metody PCR • denaturace DNA- rozvolnění vlákna • hybridizace- nasednutí primerů • syntéza- vznik nových vláken působením enzymu DNA- polymerázy
Prevence výskytu • důsledná hygiena pracovníků a používání ochranných rukavic v potravinářském provozu • zabránění množení bakterie a následné produkci toxinupasterace • nenechávat potraviny dlouhodobě při pokojové teplotě
Zdroje • http://cit.vfu.cz/alimentarnionemocneni/sa/index.html • http://www.chemickelisty.cz/docs/full/2012_08_745-749.pdf • http://www.wikiskripta.eu/index.php/Enterot oxiny • http://www.wikiskripta.eu/index.php/Rod_Sta phylococcus#Staphylococcus_aureus
