EKSPRESI GEN TNF-α INDIVIDU DENGAN HIPERTENSI. M.Sabir Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Tadulako

MEDIKA TADULAKO, Jurnal Ilmiah Kedokteran, Vol.1 No.3

September 2014

EKSPRESI GEN TNF-α INDIVIDU DENGAN HIPERTENSI M.Sabir Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Tadulako

ABSTRAK Telah dilakukan penelitian ekspresi gen TNF-α pada individu dengan hipertensi. Tujuan penelitian ini untuk mendeteksi ekspresi gen TNF-α pada individu dengan hipertensi. TNF-α merupakan salah satu mediator imun yang berperan pada inflamasi vaskuler baik akut maupun kronik. Pada individu dengan hipertensi terdapat sirkulasi TNF-α yang tinggi dan abnormal yang memiliki korelasi terhadap besarnya tekanan darah. Jumlah sampel yang digunakan sebanyak 25 sampel dari individu hipertensi dan individu sehat normotensi. Uji teknik RT-PCR dilakukan di Laboratorium Imunologi dan Biologi Molekuler Fakultas Kedokteran Universitas Hasanuddin. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekspresi gen TNFα pada individu hipertensi meningkat lebih tinggi dibandingkan dengan orang sehat. Kata kunci : Hipertensi, TNF-α, Inflamasi vaskular

ABSTRACT A research has been done about the Analyze of TNF-α Gene Expression in Hypertension. This research was aimed to detect of TNF-α gene expression in hypertension. TNF-α is an immune system that takes a role in acute and cronic of vascular inflamation. In many kinds of hypertension patients, there is a high and abnormal of TNF-α circulation and has been correlated with blood pressure level. Twenty five samples were taken from hypertension patients and health body (normotension) blood. Technical assay of RT-PCR was done in Molecular Biology and Immunology Laboratory of Medical Faculty of Hasanuddin University. The result indicated that TNF-α gene expression in hypertension was more increased than in health body cell. Keyword: Hipertension, TNF-α,Vascular inflamation

35

M. Sabir, Ekspresi Gen TNF-α Individu dengan Hipertensi


kelainan

Pendahuluan Hipertensi disebut sebagai “The

September 2014

endokrin

maupun

gangguan

neurologik (2,3).

silent killer” karena tidak menimbulkan

Beberapa penelitian sebelumnya

gejala hingga komplikasi mulai terjadi,

menunjukan

sekitar separuh orang yang menderita

merupakan salah satu bagian terhadap

hipertensi tidak menyadarinya. Selain itu

patogenesis vaskuler (4). Kelainan patologi

sebagian

besar

beranggapan

vaskuler dapat disebabkan oleh interaksi

hipertensi

sebagai

dari

suatu

antara sel imun dan dinding vaskuler yang

penyakit bukan sebagai penyakit atau suatu

maladaptif yakni melalui aktivasi mediator

keadaan abnormal yang primer (berdiri sen-

atau sitokin proinflamasi yang berlebihan

diri). Kenyataannya hipertensi merupakan

(abnormal). Pelepasan mediator inflamasi

salah satu dari tujuh penyebab kematian

yang abnormal ini diakibatkan oleh adanya

utama di dunia selain mengakibatkan

ekspresi gen yang tidak terkendali oleh

kerusakan pada organ jantung, otak dan

sistem imunitas yang ada. Salah satu

ginjal (1).

sitokin yang berperan penting pada proses

orang gejala

Di seluruh dunia hampir 1 miliar orang dewasa atau sekitar se-perempat dari seluruh

populasi

menyandang

orang

hipertensi,

inflamasi

kronik

inflamasi vaskuler adalah Tumor Necrosis Factor-α (TNF-α) (5). TNF-α adalah imunitas pleitropik

dewasa

jumlah

bahwa

ini

yang diproduksi monosit -makrofag, sel T

cenderung meningkat. Pada populasi usia

yang diaktifkan, sel NK, sel endotel dan

lanjut, angka

penyandang hipertensi

otot polos. TNF-α berperan penting dan

lebih banyak dialami oleh lebih dari

merupakan dasar yang sangat penting

separuh populasi usia di atas 60 tahun (2).

dalam

proses

inflamasi

vaskuler,

Kurang lebih 90 – 95 % hipertensi

aterosklerosis dan infark miokard. Pada

ialah primer dan idiopatik (esensial) yang

kadar rendah TNF-α berperan terhadap sel

lebih banyak berhubungan dengan kelainan

endotel dan pada kadar tinggi ber-peran

genetik dan sisanya 5 % adalah hipertensi

terhadap resistensi vaskuler (5).

sekunder (non esensial) yang kebanyakan berhubungan stenosis

arteri

dengan renalis

penyakit

PCR adalah suatu metode untuk

ginjal,

mengamplifikasi sekuens gen target secara

(reno-vaskuler),

eksponensial in vitro dan telah berkembang menjadi teknik utama dalam laboratorium

36



biologi molekuler yang dapat digunakan

Waktu dan Tempat Penelitian

untuk mendeteksi suatu ekspresi gen.

Penelitian telah dilakukan pada

Selain itu juga PCR telah digunakan secara

bulan

luas dalam bidang kedokteran untuk analisa

dilaksanakan

berbagai penyakit menular, keganasan dan

Molekuler

kelainan

Kedokteran,

genetika.

Pada

reaksi

ini

dibutuhkan DNA target, sepasang primer,

September 2014

April

hingga di dan

Mei

2013

dan

Laboratorium

Biologi

Imunologi,

Fakultas

Universitas

Hasanuddin

Makassar.

polimerase DNA yang termostabil dan buffer reaksi (6).

Subjek dan Cara Pemilihan

Berdasarkan latar belakang di atas,

Subjek penelitian meliputi semua

maka diperoleh rumusan masalah dari

populasi

penelitian

kriteria inklusi dan eksklusi. Pemeriksaan

ini

adalah

peningkatan ekspresi

apakah

ada

gen TNF-α pada

ekspresi

terjangkau

yang

memenuhi

dilakukan

di

gen

TNF-α

individu hipertensi dibandingkan individu

Laboratorium

Biologi

normal dengan menggunakan metode RT-

Imunologi, Bagian Mikrobiologi Fakultas

PCR (12). Tujuan penelitian ini adalah

Kedokteran, Universitas Hasanuddin.

Molekuler

dan

mendeteksi ekspresi gen TNF-α pada individu hipertensi. Manfaat dari penelitian

Kriteria sampel

ini diharapkan dapat menambah informasi

1. Inklusi

ilmiah

mengenai

peran

gen

TNF-α

Sampel berasal dari penderita yang telah

terhadap perkembangan hipertensi dan

didiagnosa

dapat dijadikan sebagai salah satu petunjuk

(≥ 140/90 mmHg).

dalam penelitian hipertensi.

menderita

hipertensi

2. Eksklusi Penyakit kardiovaskuler, gagal ginjal, diabetes melitus, kehamilan dan pasien

Desain Penelitian Penelitian ini dilakukan secara observasional dengan pendekatan Cross

dalam terapi obat anti hipertensi dan anti inflamasi.

Sectional Study untuk mendeteksi adanya ekspresi

gen

TNF-α

pada

individu

hipertensi dan individu normotensi dengan menggunakan metode RT-PCR (12,18). 37

Jenis sampel Sampel dalam penelitian darah vena individu dengan hipertensi dan orang



normal

(normotensi)

yang

memenuhi

September 2014

Definisi Operasional

kriteria serta bersedia diikutkan dalam penelitian ini. Teknik pengambilan sampel secara

accidental

sampling

1.

TNF-α adalah sitokin proinflamasi

yaitu

yang diproduksi oleh sel makrofag, sel

pengambilan sampel berdasarkan kejadian

T yang diaktifkan, sel NK, sel endotel,

atau kemunculan pada saat penelitian

berperan

berlangsung.

inflamasi akut dan vaskuler (5). 2.

Perkiraan Besar Sampel Besar

adalah

dalam

metode

proses

untuk

mengamplifikasi sekuens gen target

sampel

diperkirakan

berdasarkan rumus (16) :

secara

eksponensial

in

vitro

menggunakan DNA target, primer dan enzim polimerase (14).

N

n=

PCR

penting

1 + N (d2) Alat dan Bahan

keterangan :

1. Alat

- n = Besar sampel

Alat-alat yang digunakan dalam

- N = Besar proporsi populasi (27,33) - d = Tingkat

kepercayaan

yang

diinginkan (ditetapkan), nilainya

penelitian ini adalah elektoforesis, mesin PCR,

gyraroty

shaker,

inkubator,

mikropipet 10 µl,100 µl dan 1000 µl,

(p) = 0,05

sentrifus, vortex dan oven. Data rekam medik yang diambil di Rumah

Sakit

Wahidin

Sudirohusodo,

menunjukkan bahwa jumlah keseluruhan

2 Bahan Bahan-bahan

yang

digunakan

pasien hipertensi rawat jalan selama tahun

dalam penelitian ini adalah sampel darah

2012 adalah 328 orang (dengan proporsi

vena individu hipertensi dan sampel darah

27.33).

vena orang sehat (normotensi), buffer L6,

27,33

Jadi n =

= 25,29

1 + 27,33 (0.05)2 dibulatkan menjadi 25 sampel

suspensi diatom, buffer L2, etanol 70 %, aseton, destilat water, PCR mix, ethidium bromida, gel agarose 2 %, microcup, tabung eppendorf, primer yang terdiri atas (15,17) :

38



1. TNF-α :

September 2014

2. Pengambilan darah vena

5’-CAGCCTCTTCTCCTTCCTGAT-3’

Bersihkan

tempat

pengambilan

dan

darah dengan alkohol 70% dan biarkan

5’GCCAGAGGGCTGATTAGAGA-3’

kering kembali. Pasang pembendung pada

2. β-actin :

lengan atas, minta pasien agar mengepal

5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’

dan membuka tangannya berkali-kali agar

dan

vena jelas terlihat. Tegangkan kulit dengan

5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATT

menggunakan

TC-3’

bergerak. Tusuk kulit dengan jarum yang

jari,

agar

vena

tidak

terpasang pada holder. Ketika darah mulai Prosedur Kerja

mengalir pembendung dilepaskan. Jika

1. Pengukuran tekanan darah

volume darah telah mencukupi, tabung

Pasien dibiarkan rileks 5 menit

darah dilepaskan dari holder. Letakkan

sebelum pengukuran tekanan darah. Atur

kapas di atas jarum dan jarum ditarik

posisi tangan minimal sejajar dengan letak

perlahan-lahan. Pasien diminta menekan

jantung dan tidak terlalu rendah. Pasang

tempat pengambilan darah dengan kapas,

manset pada lengan atas 2 – 3 cm di atas

kemudian diberi plester (7,8).

lipatan siku dan stetoskop pada arteri tepat di bawah manset untuk mendengar bunyi

3. Pengambilan sampel

arteri. Pompa manset sampai pada tekanan

Sampel berupa darah vena yang

di antara tekanan sistolik dan tekanan

berasal dari individu hipertensi dan orang

diastolik yang terbaca pada skala (≥ 160

normal, dimasukkan pada microcup yang

mmHg).

berisi larutan buffer L6 sebanyak masing-

Manset

dikempiskan

secara

perlahan-lahan sampai timbul bunyi. Bunyi

masing sebanyak 1-2 tetes.

pertama kali terbaca sebagai tekanan sistolik dan hilangnya bunyi pertama kali

4. Pemeriksaan PCR

terbaca

a.

sebagai

tekanan

kemudian catat hasil (2).

diastolik,

Ekstrasi RNA TNF-α yang berasal dari darah vena penderita hipertensi dan orang normal dengan metode Boom. Darah vena sebanyak 100 µl

dimasukkan 39

ke

dalam

microcup

lalu



September 2014

ditambahkan 900 µl larutan buffer L6 dan

Tabung dimasukkan dalam mesin PCR.

dihomogenkan

shaker.

Program amplifikasi dibuat berlangsung

Campuran kemudian disentrifus dengan

selama 40 siklus, yang tiap siklus terdiri

kecepatan 12000 rpm selama 10 menit, lalu

dari :

ditambahkan

pada

30

gyraroty

diatom

1. Denaturasi dengan jalan pemisahan

kemudian dilakukan vortex dan disentrifus

dari pasangan untai-DNA, pada

di

suhu 950 C selama 30 detik

dalam

µl

tabung

suspensi

eppendorf

dengan

kecepatan 12000 rpm selama 30 detik.

2. Annaeling yaitu pengikatan primer

Supernatan dipisahkan dan dicuci dengan

dengan untai-DNA yang sesuai

larutan L2 dan dilanjutkan dengan etanol

pada suhu 560 C selama 30 detik

70 % sebanyak 2 kali dan aseton 1 kali.

3. Elongating

yaitu

perpanjangan

Setelah itu dipanaskan pada suhu 56oC

ikatan antara primer dengan untai-

pada

DNA yang telah terikat, pada susu

oven

ditambahkan

selama

10

60

destilate

µl

menit

Kemudian dilakukan vortex. eppendorf

tersebut

dan

720 C selama 30 detik

water. Tabung

diinkubasi

dalam

Hasil PCR kemudian dianalisa dengan menggunakan metode

o

oven

pada suhu 56 C selama 10 menit,

elektroforesis (6,14,15).

kemudian disentrifus dengan kecepatan 12000

rpm

selama

15

detik

dan

dipindahkan ke dalam tabung eppendorf

c.

Analisa hasil PCR dengan metode Elektroforesis menggunakan gel agarose 2 %

yang baru. Supernatan dari proses ini merupakan

hasil

ekstraksi

Ke dalam tangki elektroforesis,

yang

mengandung RNA dan disimpan pada suhu – 20oC untuk dilakukan analisa PCR

dimasukkan

produk

amplifikasi

ditambahkan

larutan

pengembang (gel

loading

(10,13).

buffer)

sebanyak

2

µl

yang

lalu

dimasukkan ke dalam sumur- sumur gel b.

Amplifikasi RNA TNF-α dengan teknik RT-PCR Hasil ekstraksi RNA sebanyak 2,5

µl ditambah 22,5 µl PCR mix dan dimasukkan ke dalam tabung 250 µl. 40

agarosa. Elektroforesis dijalankan dengan elektroda 220 volt, sehingga DNA akan bergerak

ke

kutub

positif.

Hasil

elektroforesis dapat dilihat dengan bantuan lampu

ultraviolet.

Pita

DNA

dapat



September 2014

divisualisasikan dengan kamera. Pita DNA

Pada tabel 4 menunjukan data

dari sampel dibandingkan dengan pita

ekspresi gen TNF-α dari sampel darah

internal kontrol β-actin. Hasil pemeriksaan

penderita

pada teknik PCR dikatakan positif yaitu

sebanyak 2 orang dan +2, +3, +4, +5 tidak

jika terbentuk pita DNA TNF-α pada

ada (0).

123 bp dan terbentuk pita internal kontrol pada

elektroforesis

dimana

nilai

+1

Tabel 4. Data ekspresi gen TNF-α pada penderita hipertensi

elektroforesis dengan pasangan basa (bp) β-actin

hipertensi

dengan

pasangan basa (bp) 540 bp (11,15). Berdasarkan

data

tersebut

dilakukan perhitungan mean ekspresi gen

HASIL DAN PEMBAHASAN

TNF-α dari sampel tersebut dengan hasil yang diperoleh adalah 0,16 dan persentase

Hasil Penelitian Penelitian mengenai ekspresi gen TNF-α pada penderita hipertensi dan

ekspresi

gen

TNF-α

pada

populasi

hipertensi (tabel 5).

normotensi (normal) dengan metode RTPCR (Reverse Transciptase-PCR) telah

Tabel 5.

dilakukan dengan jumlah 25 sampel.

Persentase ekpresi gen TNF-α pada populasi hipertensi berdasarkan tekanan darah

Berdasarkan hasil yang diperoleh menunjukan bahwa adanya ekspresi gen TNF-α dimana peningkatan terjadi pada sampel hipertensi nomor 1 dan 7 seperti terlihat pada tabel 3. Tabel 3. Sampel hipertensi berdasarkan umur, jenis kelamin dan tekanan darah

Hasil uji PCR sampel penderita hipertensi diperoleh peningkatan gen TNFα sebanyak 2 dari 12 sampel orang (16,7 %),

berdasarkan

te-kanan

peningkatan terjadi pada tekanan

darah darah

150/80 mmHg (8,33%) dan >160/90 mmHg (8,33 %).

41



Hasil

elektroforesis

September 2014

ditandai

dengan terbentuknya pita DNA TNF-α pada pasangan basa sebesar 123 bp dan terbentuknya pita internal kontrol β-actin pada elektroforesis dengan pasangan basa sebesar 540 bp. Dimana sampel 1 dan 7 terlihat lebih tebal dibandingkan dengan yang lainnya (gambar 3). Pada tabel 6 menunjukan hasil pemeriksaan gen TNF-α dari sampel orang normal (normotensi) sebanyak 13 sampel, hasil yang diperoleh adalah tidak adanya peningkatan ekspresi seperti pada individu hipertensi

Tabel 6. Sampel orang normal berdasarkan umur, jenis kelamin dan tekanan darah

Gambar 3. Hasil Elektroforesis tampak pita TNF-α pada posisi 123 bp dan pita internal kontrol β-actin pada posisi 540 bp dengan RT PCR. M=Marker; No.1-12 = sampel penderita hipertensi.

Pada tabel 7 menunjukan data ekspresi gen TNF-α dari sampel darah orang normal dimana nilai +1 ,+2, +3, +4, +5 tidak menunjukan adanya peningkatan (0).

Secara keseluruhan pada individu hipertensi terjadi peningkatan ekspresi gen TNF-α sebanyak 16,7% (diagram 1) 42



Tabel 7. Data ekspresi gen TNF-α pada orang normal (normotensi)

Berdasarkan

data

tersebut

September 2014

ekspresi yang sebagian besar terdapat pada orang normal (tabel 8 dan diagram 2). Tabel 8. Persentase ekpresi gen TNF-α pada populasi hipertensi dan normal

dilakukan perhitungan mean ekspresi gen TNF-α dari sampel tersebut dengan hasil yang diperoleh adalah 0. Hasil elektroforesis menunjukkan tidak adanya penebalan pita DNA TNF-α pada

elektroforesis

yang

menunjukan

bahwa tidak adanya peningkatan ekspresi (gambar 4).

Pembahasan Penelitian ini dilakukan pada bulan Gambar 4. Hasil Elektroforesis tampak pita TNF-α pada posisi 123 bp dan pita internal kontrol β-actin pada posisi 540 bp dengan RT PCR. M=Marker; No.13-25 = sampel orang normal (normotensi) Secara

umum

dari

keseluruhan

populasi sampel baik hipertensi maupun normal

menunjukkan

bahwa

terjadi

peningkatan ekspresi sebanyak 8% yang terdapat pada populasi hipertensi dan sisanya 92 % tidak mengalami peningkatan

Maret

hingga

April

2012

dengan

menggunakan 25 sampel yang berasal dari penderita hipertensi dan orang normal (normotensi) menggunakan metode RTPCR. Tujuan dari peneli-tian ini adalah untuk melihat apakah ada peningkatan ekspresi

gen

TNF-α

hipertensi dibandingkan

pada

penderita

dengan

normal. Pemilihan

pemeriksan

TNF-α

sebagai subyek penelitian karena selain diproduksi oleh makrofag, TNF-α

43

orang

juga



September 2014

disintesis oleh sel endotel yang merupakan

pada ke-adaan normal TNF-α merupakan

penyusun utama tunika intima vaskuler

mediator

yang berperan dalam regulasi tekanan

dilepaskan pada saat dibutuhkan seperti

darah (tahanan perifer) melalui produksi zat

ketika tubuh terpapar benda asing atau

vasoaktif salah satunya adalah Nitrit oksida

adanya gangguan dalam tubuh (abnormal)

(NO) (7). Jika terjadi kerusakan pada sel

(5,9).

endotel maka TNF-α akan diekspresikan

non-preformed

Pada

sampel

yang

hanya

hipertensi

terjadi

dan

peningkatan ekspresi gen TNF-α pada

transduksi sinyal antar sel. Kadar TNF-α

tekanan darah yang tinggi yakni 150/80 –

yang

160/90 mmHg.

sebagai

mediator

proinflamasi

diekspresikan

sebanding

dengan

tingkat kerusakan yang ditimbulkan (5). RT-PCR

digunakan

Hipertensi dapat terjadi

karena resistensi perifer sebagai akibat

dalam

disfungsi endotel atau sebaliknya. Kadar

penelitian ini karena teknik tersebut dapat

TNF-α yang tinggi (≥ 10-7 M) diketahui

menganalisis

yang

berperan penting terhadap resistensi perifer.

diekspresikan oleh gen TNF-α akan diubah

Tekanan darah yang tinggi dan persisten

menjadi

dapat

mRNA.

cDNA

dengan

mRNA

menggunakan

menimbulkan

dilakukan amplifikasi PCR. Pada penelitian

dilepaskan

ini, β-actin digunakan sebagai internal

kerusakan yang terjadi (5). Berdasarkan hal

kontrol

dari

tersebut ekspresi TNF-α pada orang dengan

pemeriksaan PCR (18). β-actin merupakan

tekanan darah tinggi (hipertensi) lebih

housekeeping gene yang diekspresikan oleh

banyak dibandingkan dengan orang dengan

semua

tekanan darah normal (normotensi) maupun

jenis

sel

dan

kualitas

secara

umum

ekspresinya tidak dipengaruhi oleh kondisi eksperimental dan selalu hadir dalam kondisi apapun (13,15).

sebanding

TNF-α

yang

resistensi

melihat

kadar

berupa

enzim reverse transcriptase, baru kemudian

untuk

perifer,

kerusakan

dengan

tingkat

rendah (hipotensi) (4,9,15). Hal di atas belum bisa dijadikan sebagai acuan yang pasti, karena dari hasil

Berdasarkan hasil yang diperoleh

penelitian pada sampel penderita hipertensi

bahwa pada sampel orang normal dengan

dengan tekanan darah yang sama (150/80

tekanan darah yang normal (≤ 120/80

mmHg) diperoleh bahwa tidak adanya

mmHg)

peningkatan

ekpresi

gen

Sebagaimana

diketahui

bahwa

tidak

menunjukkan

adanya

peningkatan. Hal ini sesuai teori bahwa 44

TNF-α. dalam



mekanisme kerjanya, ekpresi gen TNF-α diatur dan dipengaruhi oleh multifaktorial

September 2014

2. Saran Perlu

adanya

penelitian

untuk

seperti hormon (hormon steroid), molekul

melihat ekspresi sitokin anti-inflamasi pada

sinyal

individu dengan hipertensi.

(cAMP)

pertumbuhan

dan

peptida

termasuk

faktor

sitokin

IL-1

(Interleukin-1), IL-12 (Interleukin-12), IL10 (Interleukin-10), IFN- γ (Interferon- γ) dan VEGF (Vasculer endothelial Growth Factor) (16). Selain itu, regulasi ekspresi

DAFTAR PUSTAKA 1. Beevers D. G. Tekanan Darah. Simbolon OH. Dian Rakyat. Jakarta. 2002. Hal 16 - 28

TNF-α juga diinduksi oleh reseptor TNF-α sendiri.

Pengikatan

reseptornya

(TNFR1

TNF-α

dengan

dan

TNFR2)

menimbulkan amplifikasi sinyal TNF-α. Sistem

regulasi

faktor-faktor

tersebut

mempunyai kepekaan yang berbeda pada setiap orang termasuk sistem imunitas. Sehingga meskipun berada pada keadaan tekanan darah yang sama, akan tetapi respon tubuh dapat berbeda-beda. Selain itu, tidak adanya peningkatan ekspresi gen TNF-α

dapat

antihipertensi

dan

dipengaruhi

oleh

antiinflamasi

yang

3. Robbins, Cotran & Kumar. Dasar Patologi Penyakit. Ed. 5. Terjemahan oleh Tjarta A, Himawan S, Kurniawan AN, Sadikin V & Halim A. Jakarta; EGC. 1999. Hal 293 – 294 4. Boos CJ & Lip HJY. Is Hypertension an Inflammatory Process. Current Pharm. Design. 2006(12). pp. 1263, 1267 -1268 5. Baratawijaya KG. Imunologi Dasar. Ed. 7. Balai Penerbit FKUI. Jakarta. 2006. Hal 124, 384 – 389 6. Putra ST. Biologi Molekuler Kedokteran. Airlangga University Press. Surabaya. 1999. Hal 165

dikonsumsi penderita hipertensi.

SIMPULAN DAN SARAN

1. Simpulan Individu dengan hipertensi terjadi peningkatan ekspresi gen TNF-α sebesar 8% dibandingkan dengan individu normal.

45

2. Palmer A, Williams B. Tekanan Darah Tinggi. Terjemahan oleh Yasmine E. Erlangga. Jakarta. 2005. Hal 10-59

7. The Seven Report of The Joint of National Committee. Prevention, Detection, Evaluation and Treatment of High Blood Pressure. JNC 7 Express. [diakses 9 Februari 2011]. Available from : www.nih.gov/guidelines/hypertension/e xpress.pdf



8.

Pickering TG, Hall JE, Appel LJ, Falkner BE, Graves J, Hill MN, et al. Recommendations For Blood Pressusre Measurement In Humans And Experimental Animals. [diakses 9 Februari 2011]. Available from : http://hyper.ahajournals.org/cgi/full/45/ 1/142

9. Whiteside TL. Introduction to Cytokines as Targets for Immunomodulation. In: House RV, Descotes J, editors. Cytokines in Human Health: Immunotoxicology, Pathology, and Therapeutic Applications. Humana Press, Inc. Totowa, New Jersey. 2007. pp. 1-12 10. Twyman R. Gene Expression. The Human Genome. 8 Januari 2003; [dikutip 7 Februari 2010]. Available at: http://genome.wellcome.ac.uk 11. Azhar TN. Dasar – Dasar Biologi Molekuler. Widya Padjadjaran. Bandung. 2008. Hal 52, 69-81 12.

Hatta M. Advance Experimental in Medical Biology. Plenum Publisher. New York. 2003. pp 269-278. Available as PDF file

13.

Boom R, Col CJA. Rapid and Simple Method for Purification of Nucleic Acids. Journal of Clinical Microbiology. New York. 1990 ;(28). pp 495-503. Available as PDF file

14. Yuwono T. Teori dan Aplikasi Polymerase Chain Reaction. Penerbit Andi. Yogyakarta. 2006. hal. 10-16 15. Aust G. Competitive RT-PCR to Quantify Small Amounts of mRNA. In: De Ley M, editor. Cytokine Protocols.

46

September 2014

Humana Press. Totowa. 2007. pp 31-40. Available as PDF file 16. Notoatmodjo S. Metodelogi Penelitian Kesehatan. Bingkai cipta. Jakarta. 2005. Hal 92 17. Buckingham L, Flaws ML. Molecular Diagnostics. Davis Company. New York. 2007. pp. 72-77,81 18. Guiletty A, Overbergh L. An Overview of Real-Time Quantitative PCR: Applications to Quantify Cytokine Gene Expression. Ideal. [serial on the internet]. 2001[dikutip 23 Februari 2011]; Vol.25 [8 screen]. Available from: http://www.idealibrary.com

LAMPIRAN 1 DNA Manusia untuk TNF-α >tnf-a mRna-AK314960 1 agacgctccc tcagcaagga cagcagagga ccagctaaga gggagagaag caactacaga 61 ccccccctga aaacaaccct cagacgccac atcccctgac aagctgccag gcaggttctc 121 ttcctctcac atactgaccc acggctccac cctctctccc ctggaaagga caccatgagc 181 actgaaagca tgatccggga cgtggagctg gccgaggagg cgctccccaa gaagacaggg 241 gggccccagg gctccaggcg gtgcttgttc ctcagcctct tctccttcct gatcgtggca 301 ggcgccacca cgctcttctg cctgctgcac tttggagtga tcggccccca gagggaagag 361 ttccccaggg acctctctct aatcagccct ctggc ccagg cagtcagatc atcttctcga 421 accccgagtg acaagcctgt agcccatgtt gtagcaaacc ctcaagctga ggggcagctc 481 cagtggctga accgccgggc caatgccctc ctggccaatg gcgtggagct gagagataac 541 cagctggtgg tgccatcaga gggcctgtac ctcatctact cccaggtcct cttcaagggc 601 caaggctgcc cctccaccca tgtgctcctc acccacacca tcagccgcat cgccgtctcc



661 taccagacca aggtcaacct cctctctgcc atcaagagcc cctgccagag ggagacccca 721 gagggggctg aggccaagcc ctggtatgag cccatctatc tgggaggggt cttccagctg 781 gagaagggtg accgactcag cgctgagatc aatcggcccg actatctcga ctttgccgag 841 tctgggcagg tctactttgg gatcattgcc ctgtga

961

Forward : cagcctcttctccttcctgat Reverse : gccagagggctgattagaga TCTCTAATCAGCCCTCTGGC (Complementary Reverse) // > best β-actin X00351

1201

1

1381

61 121 181 241 301 361 421 481 541 601 661 721 781 841 901

47

1021 1081 1141

1261 1321

ttgccgatcc gccgcccgtc cacacccgcc gccagctcac catggatgat gatatcgccg cgctcgtcgt cgacaacggc tccggcatgt gcaaggccgg cttcgcgggc gacgatgccc cccgggccgt cttcccctcc atcgtggggc gccccaggca ccagggcgtg atggtgggca tgggtcagaa ggattcctat gtgggcgacg aggcccagag caagagaggc atcctcaccc tgaagtaccc catcgagcac ggcatcgtca ccaactggga cgacatggag aaaatctggc accacacctt ctacaatgag ctgcgtgtgg ctcccgagga gcaccccgtg ctgctgaccg aggcccccct gaaccccaag gccaaccgcg agaagatgac ccagatcatg tttgagacct tcaacacccc agccatgtac gttgctatcc aggctgtgct atccctgtac gcctctggcc gtaccactgg catcgtgatg gactccggtg acggggtcac ccacactgtg cccatctacg aggggtatgc cctcccccat gccatcctgc gtctggacct ggctggccgg gacctgactg actacctcat gaagatcctc accgagcgcg gctacagctt caccaccacg gccgagcggg aaatcgtgcg tgacattaag gagaagctgt gctacgtcgc cctggacttc gagcaagaga tggccacggc tgcttccagc tcctccctgg agaagagcta cgagctgcct gacggccagg tcatcaccat tggcaatgag cggttccgct gccctgaggc actcttccag ccttccttcc tgggcatgga gtcctgtggc atccacgaaa ctaccttcaa ctccatcatg aagtgtgacg tggacatccg caaagacctg tacgccaaca cagtgctgtc tggcggcacc accatgtacc

1441 1501 1561 1621 1681 1741

September 2014

ctggcattgc cgacaggatg cagaaggaga tcactgccct ggcacccagc acaatgaaga tcaagatcat tgctcctcct gagcgcaagt actccgtgtg gatcggcggc tccatcctgg cctcgctgtc caccttccag cagatgtgga tcagcaagca ggagtatgac gagtccggcc cctccatcgt ccaccgcaaa tgcttctagg cggactatga cttagttgcg ttacaccctt tcttgacaaa acctaacttg cgcagaaaac aagatgagat tggcatggct ttatttgttt tttttgtttt gttttggttt tttttttttt tttggcttga ctcaggattt aaaaactgga acggtgaagg tgacagcagt cggttggagc gagcatcccc caaagttcac aatgtggccg aggactttga ttgcacattg ttgttttttt aatagtcatt ccaaatatga gatgcattgt tacaggaagt cccttgccat cctaaaagcc accccacttc tctctaagga gaatggccca gtcctctccc aagtccacac aggggaggtg atagcattgc tttcgtgtaa attatgtaat gcaaaatttt tttaatcttc gccttaatac ttttttattt tgttttattt tgaatgatga gccttcgtgc ccccccttcc ccctttttgt cccccaactt gagatgtatg aaggcttttg gtctccctgg gagtgggtgg aggcagccag ggcttacctg tacactgact tgagaccagt tgaataaaag tgcacacctt a

Forward : gtggggcgccccaggcacca Reverse : ctccttaatgtcacgcacgatttc GAAATCGTGCGTGACATTAAGGAG (Complementary Reverse) //


EKSPRESI GEN TNF-α INDIVIDU DENGAN HIPERTENSI. M.Sabir Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Tadulako

Recommend Documents