ds DNS vírusok Humán patogén vírusok csoportjai
Kapszid Burok
gazdaspektum és antigénszerkezet alapján ~130 típus – humánpatogének a Mastadenovirus genusban humán adenovírusok 51 típus, antigenitás alapján A-F csoportok
Patogenitás átvitel – inhaláció, fekális-orális átvitel, direkt kontaktus előfordulhat tünetmentes fertőzés 1. Légúti fertőzések – 3, 4, 7 és 21 szerotípus - akut légúti betegség (→ pneumonia) - akut, lázas pharyngitis (→ pneumonia) - pharyngoconjunctivalis láz - pertussis-szindróma 2. Szemfertőzés - conjunctivitis - keratoconjunctivitis epidemica – 8, 19 és 37 szerotípus 3. Gastrointestinális fertőzés - gastroenteritis – 40, 41; 2 év alatti gyermekek - appendicitis – 1, 2, 5, 6 4. Egyéb adenovírus fertőzések - akut haemorrhagiás cystitis (11, 21) - immunszupprimáltak betegségei (encephalitis, myocarditis)
VírusAdeno- Papilloma- Polyoma- Herpescsalád (-viridae)
Hepadna-
Pox
Papillomaviridae Patogenitás • bőr és nyálkahártya differenciálódott sejtjeiben • virális onkoproteinek szerepe a sejtproliferáció szabályozásában Betegségek • az okozott betegségekből meghatározott vírus genotípusok mutathatók ki • terjedés direkt kontaktussal, szexuális átvitel • szemölcs (1, 2, 3, 4) • epidermodysplasia verruciformis (5, 8) • benignus tumorok (6, 11) a genitáliák és a felső légutak területén • condyloma acuminatum • papilloma
• rosszindulatú daganatok (16, 18) • anogenitális traktus tumorai és rákmegelőző állapotok – cervix cc., analis cc. • fej-nyaki tumorok – gége cc, OSCC
Herpesviridae
Polyomaviridae látencia helye – vese, agy, lymphocyták T-AG p53 és pRb inaktiváció, t-AG ciklinD1 szintézis indukció JC-vírus – légutak, húgyutak és KIR fertőzés, progresszív multifocalis leukoencephalopathia (PML) (demyelinizáció) BK-vírus – reaktiváció; hemorrhágiás cystitis, veseepithelium nekrózisa; meningeoma, osteosarcoma, glioma, vesecarcinoma Merkel cell polyomavírus –Merkel cell carcinoma (neuroectodermalis tumor) KI és WU vírusok – légúti váladékok
komplex van
Adenoviridae
ikozahedrális nincs
ubikviter vírusok; 100 vírus - 8 humánpatogén rendszerint tünetmentes primer fertőzés látencia a gazdaszervezetben - reaktiváció a vírus fehérjéi az antivirális kemoterápia célpontjai
Rendszerezés (fertőzött sejtek és a látencia helye alapján) Alphaherpesvirinae - epitelsejtek; neuronok - Simplexvirus genus - HSV1 és HSV2 - Varicellovirus genus – VZV Betaherpesvirinae - sokféle sejttípus; epiteliális és limfoid sejtek - Cytomegalovirus genus – CMV - Roseolavirus genus- HHV6 és HHV7 Gammaherpesvirinae - limfoid sejtek - Lymphocryptovirus genus - EBV - Rhadinovirus genus - HHV8
1
Bőr Szájüreg Szem
HSV-1
HSV-2
vezikuláris kiütések
vezikuláris kiütések
gingivostomatitis
ritkán
keratoconjunctivitis
ritkán
encephalitis
meningitis
ritkán
bőrléziók és disszeminált megbetegedés, encephalitis
oesophagitis, pneumonia
ritkán
KIR Újszülöttek Disszeminált fertőzés
Varicella-zoster vírus (VZV) varicella (bárányhimlő)
herpes zoster (övsömör)
Epstein-Barr vírus (EBV)
Humán cytomegalovírus (HCMV) Immunkompentens egyének tünetmenetes fertőzés mononucleosis infectiosa Immundeficiensek primer fertőzés vagy reaktiváció pneumonia, disszeminált fertőzés, hepatitis, colitis, chorioretinitis, encephalitis Kongenitális és újszülöttkori fertőzések az anya primer fertőzése vagy reaktiváció KIR, máj és lép érintettség, microcephalia – citomegáliás zárványbetegség
Humán herpesvírus 6 (HHV6) CD4+ T-sejtek fertőzése, citotoxikus Patológia, betegségek - A és B csoport - általában tünetmentes fertőzés - B csoport – exanthema subitum/roseola infantum - mononucleosis szerű kórképek, hepatitis, lymphoproliferatív betegségek, sclerosis multiplex? - A csoport - immundeficiens egyének (transzplantáltak) pneumonia
Humán herpesvírus 7 (HHV7)
Általában tünetmentes fertőzés Mononucleosis infectiosa Hajas leukoplakia Burkitt-lymphoma (Afrika) – malária övezet Nasopharyngealis carcinoma (Kína) Lymphoproliferatív kórképek - Bsejtes limfómák - immundeficiensekben Krónikus EBV fertőzés (pneumonitis, hepatitis, hematológiai elváltozások)
Hepadnaviridae • részlegesen ds DNS genom • Orthohepadnavirus nemzetség Hepatitis B vírus (HBV) • részletesen lásd „Hepatitis vírusok”
CD4+ sejtek fertőzése nyálmirigyben perzisztál
Humán herpesvírus 8 (HHV8) – AIDS-asszociált Kaposi sarcoma bőrtumorok, lymphomák – immunszuppresszió szerepe
és
más
2
Poxviridae Patogenitás, betegségek Orthopoxvirus nemzetség 1. Variola vírus – feketehimlő - egyetlen szerotípus - kizárólag humánpatogén - terjedés cseppfertőzéssel vagy direkt kontaktussal 2. Vaccinia vírus - vektor - vakcinázás (encephalitis, generalizált vaccinia, vaccinia gangrenosa – vaccinia immunglobilin; VIG) Molluscipoxvirus nemzetség 1. Molluscum contagiosum vírus - papullaris, szemölcs-szerű csomók a bőrön és nyálkahártyákon főleg gyerekeken - átvitel közvetlen kontaktus (szexuális) - immunszuppresszív állapot
Parvoviridae ss DNS vírusok Genom
+/- ssDNS
Kapszid
-ssDNS
ikozahedrális
Burok
nincs
Víruscsalád (-viridae)
Parvo-
Vírus genus (-virus)
Anello-
humánpatogén parvovirus B19 (Erythrovirus) légúti infekció, vér, transzplacentális átvitel vvt. progenitor sejtek (anémia) és érendothel (kiütések) fertőzése, citopátiás hatás erythema infectiosum - láz, izomfájdalom - anémia, leukopénia, trombocitopénia - kiütések, arthritis, arthralgia - immunkomplex-képzés aplasticus krízis – krónikus anémiához társulva krónikus fertőzés (anémia, leukopénia) vetélés, hydrops foetalis (1. és 2. trimeszter)
Anellovirus Osztályozás - Torque- tenovírus, korábban transfusion transmitted virus (TTV) - számos genotípus, melyeket genocsoportokba sorolnak Patogenitás, betegségek - 1997 posztranszfúziós hepatitiszben szenvedő betegből izolálták - terjedés vérrel, széklettel, nyállal; közvetlen kontaktus - közel 100% prevalencia, legtöbb fertőzés tünetmentes - nincs bizonyítottan közvetlen kapcsolatban egyetlen betegséggel sem - társfertőző ágens lehet
ds RNS vírusok
3
Reoviridae
szegmentált (10-12) kettős ikozahedrális kapszid – külső és belső réteg burok nincs nagy (L), közepes (M) és kis (S) szegmensek RNS-dependens RNS-polimeráz gastrointestinalis megbetegedések, légúti fertőzések legtöbbször tünetmentes vagy enyhe fertőzés kimutathatók a székletben, légúti váladékokban, vizeletben, liquorban és a vérben Nemzetség
Genomszegmentek száma
Vírus
Orthoreovirus
10
Orthoreovírus 1-3
Orbivirus
10
Lipovnik- és Tribecs-vírus Bluetongue vírus
Coltivirus
12
Colorado-kullancsláz
Rotavirus
11
Humán rotavírus
(+) ss RNS vírusok Kapszid
ikozahedrális
Burok Víruscsalád (-viridae)
Vírus
Vírus genus (-virus)
Flavi- Retro-
Corona-
Poliovírusok Szerotípus
Enterovirus
Poliovírus Coxsackie A Coxsackie B Echovírus Enterovírus
1, 2 és 3 1-22, 24 1-6 1-9, 11-27, 29-34 68-71
Rhinovirus
Rhinovírus
110<
Hepatovirus
HAV
1
Cardiovirus
EMC vírus Theilovirus (VHEV)
1 4
Aphtovirus
Száj- és körömfájás vírus
7
Parechovirus
Humán parechovírus Ljungan vírus
5 2<
Kobuvirus
Aichivírus
29 szerotípus „A” csoport – 23 típus „B” csoport – 6 típus terjedés fekális-orális úton és cseppfertőzéssel oropharynx és bél a szaporodás helye kizárólag humánpatogének, főleg gyermekekben nyári-őszi szezonalitás legtöbbször tünetmentes fertőzés „A” csoport – bőr és nyálkahártya fertőzés (herpangina, kéz-láb-száj betegség; láz, hólyagos kiütések, torokfájás); conjunctiva „B” csoport – szív, pleura, pancreas, máj (pleurodynia – Bornholm-betegség, pericarditis, myocarditis, hepatitis) mindkét csoport – aszeptikus meningitis, paralízis
Toga-
Hepe-
főemlősöket fertőz (PVR/CD155) három szerotípus (elkülönítés neutralizációs teszttel) terjedés fecal-oral úton (inhaláció, conjunctiva) gerincvelő elülső szarvában szaporodás, neuronok pusztítása ›>> izomparalízis tünetmentes (90%) abortív fertőzés (5%) aszeptikus meningitis (1-2%) paralyticus poliomyelitis (<1%) poszt-polio-szindróma vírusürítés a széklettel IPV, OPV
Echovírusok
Coxsackie vírusok
van
Picorna- Calici- Astro-
Picornaviridae Nemzetség
helikális
nincs
30 < szerotípus terjedés fecal-oral úton oropharynx és bél a szaporodás helye, majd disszemináció legtöbbször tünetmentes felső légúti megbetegedés kiütéses lázas megbetegedés hasmenés aszeptikus meningitis, myocarditis nekrotizáló hepatitis újszülötteknél
Enterovírusok Szerotípus
Betegség
68
pneumonia, bronchitis
69
?
70 70,71 71
akut haemorrhagiás conjunctivitis paralysis, meningoencephalitis kéz-láb-száj betegség
4
Parechovírusok
humán parechovírus 1 és 2 (HPeV1, HPev2, korábban echovírus 22 és 23), 3, 4 és 5 enyhe gastrointestinális és légúti fertőzések ritkán encephalitis és flaccid paralízis, myocarditis csecsemőkben és kisgyermekekben HPeV3 (2004) székletből izolálták, a betegség magas lázzal, kiütésekkel, légúti és gastrointestinális tünetekkel és tranziens paralízissel járt; újszülöttkori fertőzés is kialakulhat Ljungan vírus – zoonózis, diabetes?, abortus?
Caliciviridae Norovirus nemzetség – Norwalk vírusok Sapovirus nemzetség - Sapporovirus részletesen lásd „Gastroenteritist okozó vírusok”
Astroviridae Kobuvirus genus • Aichi vírus, 17 törzset izoláltak • gastroenteritis (osztriga) • hasmenés, hasi fájdalom, hányás, láz
Mamastrovirus nemzetség – humán astrovírusok részletesen lásd „Gastroenteritist okozó vírusok”
Togaviridae Alphavirus nemzetség • arbovírusok – ízeltlábú vektor közvetítésével terjednek (szúnyog) • ember és a nagytestű emlősök • szaporodási ciklus fenntartása – rágcsáló/madár – szúnyog rágcsáló/madár • kiütések és polyarthritis • •
•
O’nyong’nyong vírus (szúnyog) Chikungunya vírus
encephalitis •
Keleti-, nyugati és venezuelai lóencephalitis vírusok
Flaviviridae Flavivirus nemzetség • • •
Rubivirus nemzetség • posztnatális fertőzés • cseppfertőzés • 2-3 hét inkubáció • kiütések, lymphadenopathia, arthritis, légúti vírusürítés • encephalitis • kongenitális fertőzés • abortusz, koraszülés • kongenitális rubeola szindróma
•
Hepacivirus genus • •
Kullancs-encephalitis vírusok • szezonális megbetegedés (ápr.-máj., aug.-szept.) • Ixodes fajok (vektor és rezervoár) – minden fejlődési fázisban • erdei rágcsálók – természetes szaporodási ciklus • ritkán a fertőzött juhok, kecskék és szarvasmarhák nem pasztörizált tejével • tünetek fertőzöttek 1/3-ban 5-14. napon - influenzaszerű tünetek (abortív fertőzés) 4. héten – központi idegrendszeri tünetek, bénulás (meningoencephalitis) maradandó károsodás 15-20% mortalitás 1,2% • megelőzése kullancs-csípés kivédése inaktivált vírust tartalmazó vakcina 0., 1. hó (max. 3 hó) majd 9-12 hónap múlva 3 évenként emlékeztető oltás
arbovírusok - ízeltlábú vektorok (szúnyog, kullancs) egyéb átviteli lehetőség – fertőzött állati tetemek, transzfúzió, aerosol, perinatális átvitel, nem pasztörizált tej hemorrágiás lázat okozó vírusok – sárgaláz vírus (szúnyog) – dengue vírus (szúnyog) encephalitist okozó vírusok – Japán encephalitis vírus (szúnyog) – Nyugat-nílusi láz (szúnyog) – Kullancsencephalitis vírus (kullancs)
Hepatitis C vírus részletesen lásd „Hepatitis vírusok”
Retroviridae • • • • •
reverz transzkriptáz aktivitás provírus/provirális DNS integráció a gazda genomba parenterális terjedés, kongenitális átvitel Deltaretrovirus nemzetség – humán Tsejtes leukémia vírus (HTLV) • Lentivirus nemzetség – humán immundeficiencia vírus (HIV); részletesen lásd „HIV”
5
Coronaviridae
szaporodás a hámsejtekben (légutak, bélhámsejtek) átvitel – fekál-orál út, aeroszol csecsemők, kisgyermekek gastroenteritise légúti fertőzés (csillós hám destrukció) - nátha SARS (severe acut respiratory syndrome) vírus
(-) ss RNS vírusok Kapszid
helikális
Burok
van
Víruscsalád (-viridae)
Orthomyxo-
Paramyxo-
Rhabdo- Arena- Bunya- Filo-
Vírus genus (-virus)
Borna-
Delta-
Orthomyxoviridae – Influenzavírusok szegmentált (8) negatív ssRNS genom influenza A influenza B influenza C hemagglutinin (HA) és neuraminidáz (NA) 16 HA és 9 NA szubtípus emberből 3 HA és 2 NA szubtípus izolálható antigén shift és drift terjedés cseppfertőzéssel, közvetlen kontaktussal téli-kora tavaszi szezonalitás szaporodás a légutak epithel sejtjeiben - citotoxikus vírus, emellett apoptózist indukál nő a fogékonyság a másodlagos fertőzésekre komplikációmentes influenza pneumonia Reye-szindróma
Epidemiológia - influenza A – pandémia, epidémia; állati rezervoárok; shift + drift - influenza B – epidémia; szűk gazdaspektrum (ember, fóka); lassú drift - influenza C – sporadikus esetek; szűk gazdaspektrum (ember, sertés); stabil genom - reasszortáció a különböző törzsek között - pandémiák: Kína déli része influenza „epicentrum” o 1889-1890 H2N2 o 1900 H3N8 o 1918-1920 H1N1 (spanyol nátha) o 1957-1958 H2N2 (ázsiai influenza) o 1968-1969 H3N2 (Hong-Kong-i influenza) o 1977 H1N1 o 1997 H5N1 o 1999 H9N2 o 2003 H7N7; H7N2 o 2004 H7N3; H10N7 o H1N2 - H5N1
Terápia - amantadin, rimantadin – influenza A; penetráció és dekapszidáció gátlása, profilaxis és kezelés a tünetek megjelenése után 24-48 órán belül - oseltamivir, zanamivir – influenza A és B ellen; NA gátlás, sejtből való kiszabadulás gátlása
Influenza A madárinfluenza
Különbségek az AIV és a humán IV között • PB2 (RNS polimeráz) Glu/Lys • HA kötődés alfa-2,3-sziálsav receptor vs. alfa-2,6-sziálsav receptor • sertés influenza vírus mindkét receptorhoz kötődhet • összesen 52 genetikai különbség, ebből 16 specifikus a humán influenzára
Madárinfluenza – H5N1 – alacsony patogenitású (LPAI) – magas patogenitású (HPAI) – természetes tünetmenetes rezervoár – vad vízi szárnyasok – madarak, sertés, lovak, fókák, bálnák, ember – vad vízi madarak >>>háziszárnyasok – nagy elhullással járó járványok – nincs emberről emberre terjedés – direkt kontaktus kerülése a beteg háziszárnyasokkal – humán esetek – 50% halálozás – oseltamivir, zanamivir hatásos
Megelőzés - trivalens elölt vírust tartalmazó vakcina (H3N2, H1N1 és B)
6
Paramyxoviridae Paramyxovirinae alcsalád 1. Henipavirus genus - hendra vírus - nipah vírus 2. Morbillivirus genus - kanyaró vírus 3. Respirovirus genus - parainfluenza vírus 1 és 3 4. Rubulavirus genus - mumpsz - parainfluenza vírus PIV2, 4a és 4b
Pneumovirinae alcsalád 1. Pneumovirus genus - respiratory syntitial virus A és B 2. Metapneumovirus genus - humán metapneumovírus
Arenaviridae
Rhabdoviridae
szegmentált (2-5) genom
Lyssavirus nemzetség
melegvérű állatok fertőzése terjedés a fertőzött állat harapásával, aerosollal, direkt kontaktussal emberről emberre nem terjed, transzplantáció vírus szaporodás a behatolás helyén idegek mentén vándorlás a KIR-be, szaporodás, majd szóródás a perifériákra >>>>> akut encephalitis rókák – rekombináns vakcina (felszíni gp) kutyák – embrionált tojásban termelt élő fix vírus preexpozíciós profilaxis posztexpozíciós profilaxis – HDCV; passzív immunizálás is
Vesiculovirus nemzetség
Vírus
Betegség
Vektor
Előfordulás
Lymphocytás choriomeningitis
házi egér (Mus musculus)
világszerte
Lassa vírus
Lassa láz
sokcsecsű egér (Mastomys natalensis)
Nyugat Afrika
Junin vírus
Argentin haemorrhagiás láz
Corn mouse (Calomys musculus)
Argentína
Machupo vírus
Bolíviai haemorrhagiás láz
Vesper mouse (Calomys callosus)
Bolívia
Guanarito vírus
Venezuelai haemorrhagiás láz
Cane mouse (Zygodontomys brevicauda)
Venezuela
Lymphocytás choriomeningitis vírus
Sabiá vírus
Brazil haemorrhagiás láz
Tacaribe vírus Flexal vírus
vesicularis stomatitis vírus Whitewater Arroyo vírus
– hemorrágiás láz vese szindromával – Hantaan vírus, Dobrava-Belgrád vírus, Seoul vírus, Puumala vírus – hantavírus pulmonális szindróma – Sin Nombre, Black Creek Canal, New York
Brazília Trinidad
Influenza-szerű betegség
Rice rat (Oryzomys)
Brazília
haemorrhagiás láz
Woodrat (Neotoma)
DNY USA
Filoviridae
Bunyaviridae • szegmentált (5 szegment) genom • Hantavirus nemzetség
ismeretlen denevér (Artibeus)
Marburgvirus Ebolavirus (5 szubtípus) hemorrágiás láz magas mortalitás
• Nairovirus nemzetség – krími-kongói hemorrágiás láz
• Orthobunyavirus nemzetség – La Crosse vírus
• Phlebovirus nemzetség – Rift völgyi láz
7
Bornaviridae
neurotrop vírus terjedés cseppfertőzéssel (nyál, orrváladék) melegvérű állatokat fertőz (juhok, lovak, szarvasmarha, macska, kutyafélék, főemlősök, madarak) előfordulhat tünetmentes vagy szubklinikai fertőzés is neurológiai megbetegedés (abnormális viselkedés, mozgászavar; pusztulás – 50-100%) – immun-mediált meningitis és encephalomyelitis zoonózis emberben neurológiai és pszichiátriai kórképek (depresszió) – USA, Japán, Németország
Hepatitis A vírus (HAV)
Hepatitisvírusok
fertőződés fecal-oral úton (étel, kontaminált víz; ritkán vérrel) a tünetek megjelenése előtt kb. 2 héttel a vírus már kimutatható a székletben target sejtek a hepatocyták, Kupfer-sejtek nincs citotoxikus hatás immunpatomechanizmus epe, széklet perzisztencia és krónikus fertőzés nem alakul ki
Klinikai kép inkubációs idő 2-6 hét; tünetmentes fertőzés (90%) anicterusos forma – általános, influenza-szerű tünetek icterus fulmináns forma relapszus 0,5% mortalitás
Epidemiológia - világszerte elterjedt, rossz szociális körülmények között (100%) - széklettel szennyezett víz, élelmiszerek - gyermekek és fiatal felnőttek körében - évente kb. 10 millió fertőzés; az akut vírushepatitiszek 40%-a - endémiás területekre utazók
Hepatitis B vírus (HBV) HBsAg – négy szerotípus (adw, adr, ayw, ayr) HBcAg – a nukleokapszidban HBeAg – a nukleokapszidban (fertőzőképesség) genom variabilitás alapján 8 genotípus (A-H) a vírus viszonylag ellenálló, szobahőn beszáradva 1 hétig fertőzőképes alkalmazható sterilezési eljárások: autokláv, etilén-oxid Patogenitás, klinikai kép
Megelőzés - inaktivált vírust tartalmazó vakcina (humán sejtkultúra, formalin) alkalmazása a rizikócsoportokban (monovalens, Twinrix) - passzív immunizálás normál humán Ig-nal a veszélyeztetettek körében (fertőzést megelőzően vagy a fertőzést követő 14 napon belül) - aspecifikus megelőzés
terjedés parenterálisan (vér, szexuális kontaktus, iv. kábítószer élvezők); vertikális transzmisszió hepatocyták fertőzése inkubációs idő 10-12 hét tünetmentes fertőzés (30%) akut fertőzés fulmináns hepatitis krónikus fertőzés HBs(+) 6 hó < krónikus perzisztáló hepatitis krónikus aktív hepatitis hepatocelluláris carcinoma extrahepatikus -immunkomplex-mediált tünetek (arthritis, urticaria, glomerulonephritis, vasculitis)
8
A krónikus vezet.
aktív
hepatitis
cirrhosishoz
Diagnózis - szerológiai diagnózis (ELISA, IFA) - amplifikációs technikák - in situ Ag kimutatás
Epidemiológia - világszerte elterjedt, a népesség 1/3-a fertőzött; 350 millió krónikus fertőzés - fejlett országok (USA, Európa) – 2% alatt a krónikus fertőzés aránya - közepesen fertőzött régiók (2-7% a krónikus fertőzés) - endémiás területek legalább 8% krónikus fertőzés - parenterális terjedés; kontakt terjedés - kongenitális és perinatális fertőzés krónikussá válása Megelőzés - véradók szűrése, sterilitás - aktív immunizálás (HBsAg; Twinrix) - passzív immunizálás (HBIG) - posztexpozíciós profilaxis - perinatális fertőzés - szexuális fertőződés - perkután expozíció
Hepatitis C vírus (HCV) 6 vírus genotípus és szubtípusok parenterális bejutás (vér, iv. droghasználók) lappangási idő: 60-120 nap (átlagosan 8 hét) immunpatomechanizmus tünetmentes fertőzés (60-70%) akut hepatitis (15-40%) krónikus perzisztens hepatitis (60-85%) krónikus aktív hepatitis (20%) arthritis, vasculitis, glomerulonephritis diagnózis – szerológia, PCR terápia - interferon-kezelés (30-40%) PEG-interferon ribavirin kombináció (50% sikeres) HIV fertőzöttek terápiája
Hepatitis D vírus (HDV) Morfológia - delta ágens vagy delta antigén (core protein) - nukleokapszid - a vírus peplonja lipidből és HBsAg-ből áll Patogenezis - terjedése parenterális - lappangási idő: 2-12 hét - replikációja HBV-vel fertőzött májsejtek magjában zajlik, összeépülés HBsAg jelenlétében megy végbe - HBV-HDV koinfekció (2-20% fulmináns hepatitis) és szuperinfekció (70-80% krónikus aktív hepatitis) >>> súlyosbítja a HBV okozta hepatitist
Hepatitis E vírus (HEV) Patogenitás, klinikai kép - fecal-oral terjedés - szaporodás helye a hepatocytákban - inkubációs idő 5-6 hét - betegség lefolyása mint a HAV - mortalitás terhesek esetében ~ 20% - nincs krónikus vírushordozás Diagnózis - szerológia (IgM és IgG) Terápia - specifikus terápia nincs Epidemiológia
Diagnózis – anti-HDAg elleni ellenanyagok kimutatása – HDAg és HDV RNS kimutatása Kezelés, megelőzés – specifikus kezelés nincs – HBV vakcina véd
9
Hepatitis F vírus (HFV) – sporadikus non-A-non-B-non-C-non-E hepatitises esetből izolálták – dsDNS genom – jelenleg folyó karakterizálás, nem tisztázott a patogenitási szerep, diagnosztika és epidemiológia – fecal-oral terjedés
Hepatitis G vírus (HGV) – non-A-non-B poszttranszfúziós hepatitis (1996) – flavivirus, de különbözik az eddig azonosított hepatitis- és flavivírusoktól – parenterális terjedés – inkább a limfocitákat fertőzi – krónikus fertőzés – HIV-HGV koinfekció – interferencia? – HCV-HGV koinfekció – interferencia?
Vírus
HAV
HBV
HCV
Család
Picorna
Hepadna
Flavi
HDV
HEV
Genus
Hepato
Orthohepadna
Hep-c
Delta
Hepe
Burok
nincs
van (HBsAg)
van
van (HBsAg)
nincs
Kapszid Genom
kubikális
kubikális
kubikális
kubikális
kubikális
+ssRNS
dsDNS
+ssRNS
+ssRNS
+ssRNS
Stabilitás
hő és saválló
savérzékeny
éterérzékeny
savérzékeny
hőálló
Terjedés
fekál-orál
parenterális
parenterális
parenterális
fekál-orál
gyakori
gyakori
közepes
ritka
regionális
Krónikus hordozás
soha
gyakori
gyakori
gyakori
soha
Onkogén hatás
nincs
van
van
?
nincs
Gyakoriság
Retroviridae család - Lentivirus nemzetség Gazdafaj Ember
HIV
• 1981 – Pneumocystis jirovecii és Kaposi-sarcoma halmozott előfordulása homoszexuális férfiakban, majd hemofíliásokban >>> súlyos szerzett immunhiányos tünetegyüttes (AIDS) • 1983 – Barre-Sinoussi és mtsai, Párizs, Pasteur Intézet – kórokozó izolálása • NIH – diagnosztikus módszer kifejlesztése • 1985 – humán immundeficiencia vírus (HIV) elnevezés
Betegség AIDS
Majmok Rhesusmajom Cerkóf Mandrill Csimpánz
SIV SIV SIV SIV
Simian AIDS
Egyéb emlősök Macska Szarvasmarha Juh
Felin immundeficiencia vírus Bovin immundeficiencia vírus Visna/maedi vírus
Felin AIDS Bovin AIDS Pneumonia/ encephalitis Anaemia Arthritis/ encephalitis
Ló Kecske
Humán immundeficiencia vírus (HIV) Szerzett immunhiányos szindróma (AIDS)
Vírus HIV-1 HIV-2
Equin fertőző anaemia vírus Caprin arthritis/encephalomyelitis vírus
A világjárvány •
A járvány kezdete – szubszaharai területek forrás Közép-Nyugat-Afrika 25-28,2 millió fertőzött heteroszexuális és perinatális terjedés
•
Észak-Amerika, Nyugat-Európa, Dél-Amerika, Ausztrália
•
mérséklődő járvány – hatékony kezelés homoszexuális terjedés helyett inkább IDU és heteroszexuális kontaktus Nyugat-Európa – 520-680 ezer fertőzött, Latin-Amerika 1,3-1,9 millió emelkedik a fertőzés aránya a nők, a fekete és a spanyol ajkú lakosság körében
Dél- és Délkelet-Ázsia 80-as évek vége 4,6-8,2 millió fertőzött (India, Kambodzsa, Thaiföld) heteroszexuális terjedés (prostitúció), IDU
•
Kelet-Európa
•
90-es évek közepe 1,2-1,8 millió fertőzött (Oroszország, Ukrajna, Moldávia, Fehéroroszország) IDU, heteroszexuális terjedés évente duplázódik a fertőzöttek száma
Közép-Európa, Magyarország Magyarország, Csehország, Szlovákia – homoszexuális terjedés Lengyelország, Szlovénia, Horvátország – IDU Románia – egészségügyi beavatkozások (80-as évek közepe)
10
A global view of HIV infection 33 million people [30–36 million] living with HIV, 2007
2.2
HIV Magyarországon Helyzetkép 2008. december 31.- HIV fertőzöttek
HIV Magyarországon Helyzetkép 2008. december 31.- AIDS betegek Év
Férfi
Nő
Összesen
1986-2002
380
43
423
63
2003
22
4
26
0
75
2004
19
4
23
14
12
106
2005
29
4
33
49
13
19
81
2006
15
7
22
2007
88
10
21
11
2007
17
6
23
2008
108
9
28
145
2008
21
2
23
Összesen
1233
209
188
1630
Összesen
503
70
573
Év
Férfi
Nő
Ismeretlen
Összesen
1985-2002
792
141
108
1041
2003
53
10
0
2004
63
12
2005
80
2006
Év
Rizikócsoportok Homo- v. biszexuális
Heteroszexuális
Hemofíliás
Transzfúzió
Év
IDU
Nozokomiális
Maternális
Ismeretlen
Összes
Rizikócsoportok Homo- v. biszexuális
Heteroszexuális
Hemofíliás
Transzfúzió
IDU
Nozokomiális
Maternális
Ismeretlen
Összes
1986-2002
297
63
20
12
2
4
2
23
423
1985-2002
519
182
32
22
12
12
3
259
1041
2003
35
18
0
0
1
0
0
9
63
2003
16
9
0
0
1
0
0
0
26
2004
45
13
0
0
2
0
0
15
75
2004
15
4
0
0
0
1
0
3
23
2005
56
20
0
0
2
3
2
23
106
2005
18
8
0
0
2
3
1
1
33
2006
38
14
0
0
0
0
0
29
81
2006
10
11
0
0
0
0
0
1
22
2007
61
15
0
1
3
1
2
36
119
2007
12
5
0
2
1
0
0
3
23
2008
93
17
0
0
2
0
0
33
145
2008
16
5
0
0
0
0
0
2
23
Összesen
847
279
32
23
22
16
7
404
1630
Összesen
384
105
20
14
6
8
3
33
573
HIV Magyarországon Helyzetkép 2008. december 31.- AIDS halálozás Év
Férfi
Nő
Összesen
1987-2002
226
21
247
2003
9
1
10
2004
11
2
13
2005
6
0
6
2006
5
1
6
2007
9
1
10
2008 Összesen
4
0
4
270
26
296
Év
A vírus
Rizikócsoportok Homo- v. biszexuális
Heteroszexuális
Hemofíliás
Transzfúzió
IDU
Nozokomiális
Maternális
Ismeretlen
Összes
184
22
13
11
1
2
1
13
247
2003
7
3
0
0
0
0
0
0
10
2004
8
3
0
0
0
1
0
1
13
2005
5
0
0
0
1
0
0
0
2006
3
3
0
0
0
0
0
0
6
2007
6
1
0
0
1
0
0
2
10
1987-2002
2008 Összesen
6
3
1
0
0
0
0
0
0
4
216
33
13
11
3
3
1
16
296
• 2 típus – HIV1 és HIV2 • HIV1 – pandémia • HIV2 – Nyugat-Afrika, HIV1/HIV2 koinfekció • HIV1 – további alcsoportok (M) és variánsok (A-H) • Észak-Amerika és Európa – B variáns • magas mutációs ráta >>> HIV kvázi-speciesek (patogenitás, rezisztencia)
11
A replikációs ciklus – fogékony sejtek CCR5 – monocita/makrofág CXCR4 – T-limfocita
Gp120
Gp41
Struktúrkomponensek: gag (core, kapszid), pol (proteáz, RT, RNázH, integráz), env (gp41, gp120) Replikáció regulációja: tat (transzkripciós aktivátor), rev (RNS stabilizáció és cp transzport) Járulékos gének: vif (infektivitás), vpr (provirális DNS sejtmagba szállítása), vpu/vpx, nef
Fogékony sejtek - CD4+ T-limfociták; monociták/makrofagok; dendritikus sejtek; oligodendroglia, mikroglia Receptorok – CD4 receptor, galaktozil-ceramid, kemokin koreceptorok
A HIV fertőzés természetes lefolyása A fertőzés
A HIV terjedése • • A.
a vírus és a vírussal fertőzött mononukleáris sejtek jelen vannak a fertőzött személy vérében, genitális váladékaiban kiemelkedően magas a fertőzőképes virionok száma a betegség korai fázisában (virémiás stádium) és a manifeszt AIDS szakaszban Szexuális aktus
B.
fertőzések több mint 3/4-e heteroszexuális transzmisszió a nők fogékonyabbak átviteli kockázat 1:200, 1:300
Vér- és vérkészítmények
C.
• • • • •
transzfúzió vérkészítmények (pl. véralvadási faktorok) egészségügyi dolgozók perkután sérülései IDU
– – –
Vertikális transzmisszió
CD4+ sejtek fertőzése – élettartam 1-1,5 napra csökken generalizált nyirokszöveti fertőzés és virémia CTL jelentősen csökkenti a fertőzött sejtek számát a naponta termelődő virionok száma arányos a progresszió mértékével CD4+ sejtek pusztulását eredményezi
perinatális terjedés, ritkábban intrauterin anyatejjel való terjedés kockázat 20-33%
a CTL ölő hatása a fertőzött sejtek apoptózisa (Vpr és Tat) nem fertőzött sejtek apoptózisa » a gp120 sejtfúziót indukál » mononukleáris sejtek Fas-ligand termelése » Tat szekréció
A HIV fertőzés természetes lefolyása Primer vagy akut HIV-tünetegyüttes
• •
•
fertőzést követő 36. héten a tünetek 1-2 hét alatt spontán megszűnnek a CD4+ sejtek száma visszaáll a normál szintre
12
A HIV fertőzés természetes lefolyása Krónikus tünetmentes stádium
Kiütések
Orális candidiasis
Nyálkahártya fekélyek
• • • • •
semmilyen klinikai tünet nem jelentkezik az immunvédekezés kielégítően működik a vírus szaporodás folyamatos a CD4+ sejtszám fokozatos csökkenése 3-10 év
Limfadenopátia
A HIV fertőzés természetes lefolyása AIDS related complex – tünetes AIDS • • • • • • • • • • • • • • • •
fokozatosan gyengülő immunrendszer szekunder virémia tartós limfadenopátia soor zoster hajas sejtes leukoplákia molluscum contagiosum bacillaris angiomatosis hüvelygomba (terápia-rezisztens) cervikális diszplázia és in situ karcinoma láz, fogyás, hasmenés listeriosis kismedencei gyulladás perifériás neuropátia trombocitopénia 2-3 év
Orális candidiasis
• a CD4+ sejtszám < 200 sejt/µL • AIDS indikátor betegségek megjelenése (opportunista fertőzések és tumorok) • 6 hónap -2 év • halálos kimenetel
Bacilláris angiomatosis
Herpes zoster Hüvelyi candidiasis
Molluscum contagiosum
A HIV fertőzés természetes lefolyása Kifejlett AIDS
Hajas leukoplákia
Cervikális diszplázia
Központi idegrendszeri AIDS • HIV fertőzött Mo/MPH • gyulladáskeltő citokinek termelése > AIDS dementia komplex, myelopathia, szubakut encephalitis, perifériás neuropathia • opportunista fertőzések
13
AIDS indikátor betegségek PATOGÉNEK
TUMOROK
Mycobacterium avium complex (disszeminált)
invazív cervix karcinoma
Mycobacterium kansasii (disszeminált)
Kaposi sarcoma
Mycobacterium tuberculosis (disszeminált, extrapulmonalis, tüdő)
Primer agyi lymphoma
nocardiosis
Non-Hodgkin lymphoma
Fertőzéses szövődmények Vírusfertőzések
recidíváló bakteriális pneumonia Salmonella septicaemia candidiasis (nyelőcső, légcső, hörgők, tüdő)
Család
Vírus
Herpesviridae Papillomaviridae Polyomaviridae Poxviridae Parvoviridae Adenoviridae Hepadnaviridae Flaviviridae
HSV1/2, VZV, CMV, HHV6, EBV, HHV8 HPV JC-vírus molluscum contagiosum vírus parvovírus B19 adenovírus HBV HCV
Bakteriális fertőzések
Gombafertőzések
cryptosporidiosis
Streptococcus pneumoniae Haemophilus influenzae Staphylococcus aureus Salmonella, Shigella, Campylobacter Treponema pallidum Rhodococcus equii
Candida spp. Cryptococcus neoformans Histoplasma capsulatum Coccidioides immitis Penicillium marneffei Pneumocystis jiroveczi
isosporiasis
Mycobacteriumok
Paraziták
toxoplasmosis
Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium avium komplex Atípusos mycobacteriumok
Toxoplasma gondii Cryptosporidium, Isospora Microsporidia Leishmania
coccidiomycosis extrapulmonalis cryptococcosis
EGYÉB
extrapulmonalis histoplasmosis
HIV encephalopathia
Pneumocystis jirovecii pneumonia
HIV enteropathia
extraintestinalis strongyloidosis progressiv multifocalis leucoencephalopathia HSV CMV
AIDS gyermekkorban Epidemiológia
A HIV terápiája • Státuszfelmérés, laboratóriumi vizsgálatok – kockázat értékelés • HAART – HIV szaporodásának gátlása – reverz transzkriptáz gátló szerek • nukleozid típusú szerek – AZT, zalcitabin, didanozin, lamivudin, stavudin, abacavir, tenofovir • nem-nukleozid analóg RT gátlók – nevirapin, delavirdin, efavirenz
– proteáz inhibitorok – saquinavir, ritonavir, indinavir, nelfinavir, amprenavir, lopinavir, atanazavir, – fúzió inhibitorok – enfuvirtid – a terápia hatékonyságának ellenőrzése (HIV-RNS kópiaszám) – posztexpozíciós profilaxis
• Vakcináció – 40 különböző vakcina típus vizsgálata – HIV variabilitása
• • • • • •
vertikális átvitel (70-90%) 30% a terhesség 16-38. hetében 70% szülés előtt és alatt, illetve a szoptatás idején intrauterin infekciók – gyors progresszió intranatális és posztnatális infekciók – lassú progresszió nő a fertőződés kockázata, ha – magas HIV-kópiaszám – korai burokrepedés (átvitel 13-39% kockázatú) – elhúzódó szülés
• horizontális terjedés – fiatalkori prostitúció – IDU – nosocomialis fertőzés
Rotavirus genus
Gastroenteritist okozó vírusok
hét típus (A-G), az A típus a leggyakoribb (90%) csecsemő és kisgyermekkori gastroenteritis (rotavírus A) felnőttkori rotavírus fertőzés (B) sporadikus esetek világszerte (C) téli szezonalitás, évente több mint 600.000 haláleset terjedés fekális-orális úton, kb. 2 nap inkubációs időszak vékonybél hámsejtek elpusztítása; zavar a Na és glükóz felszívódásában >>> dehidráció hányás, vizes hasmenés, hőemelkedés, láz (4-8 nap) előfordulhatnak tünetmentes esetek (felnőttekben) nagy mennyiségű vírus ürülése a széklettel (108-1010 virion/ml feces) vírus kimutatása; szerológia; RT-PCR terápia – rehidráció pentavalens vakcina (per os adható attenuált vírus)
14
Astroviridae savakra és zsíroldószerekre rezisztensek gastroenteritis kisgyermekekben, idősekben és immunszuppresszáltakban halmozottan fordulhat elő krónikus belgyógyászati osztályokon, szociális otthonokban és katonaságnál téli szezonalitás fertőzés fekális-orális átvitellel (szennyezett étel, ivóvíz) vékonybél hámsejtek elpusztítása; zavar a Na és glükóz felszívódásában (>>> dehidráció) hányás, hasmenés, láz, hasi fájdalom (3-4 nap) nagy mennyiségű vírus ürül a széklettel Ag-ELISA, hibridizáció, neutralizáló Ea, IFA, PCR terápia – rehidráció
Caliciviridae savrezisztensek Norwalk vírus (Norovirus genus), Sapporo vírus (Sapovirus genus) átvitel fekál-orál úton, szennyezett élelmiszerrel, ivóvízzel; direkt kontaktus; téli szezonalitás iskoláskorú gyerekek és felnőttek, idősek körében gyakori gastroenteritis (hányás, hasmenés, hasi fájdalom) >>> dehidráció) mikrovillusok károsítása jejunumban
ESETEK • •
• •
5 éves óvodás kislány hőemelkedés, majd láz, hányás, hasmenés, dehidráció infúzió, lázcsillapítás gyógyult
•
• •
• •
22, két közeli óvodába járó gyermek gastroenteritises tünetek ismétlődő hányás, hasmenés, hőemelkedés elektrolités folyadékpótlás közeli iskola tanulói között hányásos megbetegedések
• • •
• •
1,5 éves bölcsődés kisfiú február elején két napja híg vizes, pelenkába ivódó, nem véres széklet, hőemelkedés, étvágytalanság, hányás dehidráció folyadékés elektrolitpótlás
adenovírus (40, 41) calicivírusok astrovírusok rotavírusok coronavírusok
• • •
• •
•
78 éves nőbeteg január végén jelentkező tünetek hányinger, hasi fájdalom, hőemelkedés, ismétlődő hasmenenés enyhe kiszáradás miatt kórházi ellátás szobatársánál és az egyik ápolónőnél hasonló tünetek anamnézis – beteg unoka (hasmenés, hányás, láz, hasi görcsök)
elektronmikroszkópia latex agglutináció tenyésztés PCR
Vírusfertőzések diagnosztikája
Vírusdiagnosztika módszerei
Mintavétel szabályai I. megfelelő adatszolgáltatás
1. Vírusok illetve vírus antigének direkt kimutatása 2. Vírusizolálás és a vírusszaporodás kimutatása 3. A vírussal szembeni immunválasz vizsgálata - vírusszerológia 4. Molekuláris módszerek
beteg azonosíthatósága betegség kezdete mintavétel ideje feltételezett diagnózis főbb klinikai tünetek egyéb információk – utalás immunglobulin készítmények adagolására, immunszupprimált állapotra, transzfúzióra, kezelés, védőoltási adatok, stb.
szerológiai vizsgálatra natív vér (alvadásgátló nélkül) – szérum használható, leválasztása előtt fagyasztani tilos; tárolás 4ºC-on max. 1 hétig, tartós tárolás -20ºC-on szérumminta párok – titeremelkedés vizsgálatához
direkt víruskimutatás, vírus antigén detektálás, vírusizolálás – kritikus a mintavétel ideje
15
Mintavétel szabályai II. vírusizolálás és direkt víruskimutatás – minél korábbi mintavétel a tünetek megjelenése után (max. 4 napon belül) – ezt követően a vírusmennyiség a mintában exponenciálisan csökken (kivéve immunszupprimáltak) mintavétel vírustranszport közegbe történjen (kivéve testnedvek – vér, liquor, vizelet és BAL), ha a vizsgálat nem az intézmény laboratóriumában történik transzportközeg szerepe – véd a kiszáradástól, gátolja a kontamináns baktériumflóra szaporodását, a vírus élet- és szaporodóképes marad benne transzportközegek rendszerint stabilizáló fehérjét (albumin, FBS) és antibiotikumokat tartalmazó pufferoldatok vírusizolálás – a minta 4ºC-on 2-3 napig stabil, -70ºC-on viszont korlátlan ideig tárolható; -20ºC-on tárolni tilos – kristályképződés roncsoló hatása miatt
Vírus, virális antigének, illetve vírus által okozott elváltozások közvetlen kimutatása II. Tulajdonságai: gyorsaság – a laboratóriumba érkezés után 2-3 óra alatt eredményt ad a szállítási viszonyok kevéssé befolyásolják az eredményt precíz mintavételi technika szükséges kevésbé érzékeny az értékelés nagy tapasztalatot igényel szükség lehet az eredmény más módszerrel történő megerősítésére műszerigény (elektronmikroszkóp)
Vírus, virális antigének, illetve vírus által okozott elváltozások közvetlen kimutatása I.
A feltételezett vírus a mintavétel számára elérhető helyen van. A vírus partikulumok nagy mennyiségben vannak jelen. A virion specifikus morfológiája lehetővé teszi a könnyű azonosítást. Leggyakoribb alkalmazási területek: légúti vírusok (influenza A és B, RSV, PIV, adenovírusok, coronavírusok, HSV) hólyagos kiütést okozó vírusok (HSV-1 és HSV-2, VZV) gastroenteritis kórokozói (rota-, astro- calici- és adenovírusok) vérben kimutatható vírusok (HBV, HCV, CMV, HHV-6) szemészeti elváltozásokban kimutatható vírusok (HSV-1 és HSV-2, VZV, adeno- és enterovírusok) vizeletben kimutatható vírusok (CMV, adenovírus, enterovírus) biopsziás, autopsziás mintákban kimutatható vírusok (CMV, HBV, rabies)
Vírus, virális antigének, illetve vírus által okozott elváltozások közvetlen kimutatása III. Direkt kimutatás Natív mikroszkópos vizsgálat • elektronmikroszkóp
Festett készítmények zárványok
• citopátiás elváltozások
• mag (HSV, adenovírus) • citoplazma (paramyxovírus, pox, reo, rhabdovírus) • mindkettő (kanyaró, CMV)
Elektronmikroszkópia
ROTAVÍRUS
ASTROVÍRUS
16
CALICIVÍRUS
ADENOVÍRUS
CORONAVÍRUS
FILOVÍRUS
Citopátiás hatás megfigyelése destrukció
HERPES SIMPLEX VÍRUS
17
Citopátiás hatás megfigyelése – syntitium képzés
Citopátiás hatás megfigyelése – transzformáció
Festett készítmények - magzárványok
Festett készítmények – citoplazma zárványok
HSV vagy VZV fertőzésnél a vezikulák bazális részéről vett kaparék és Tzanck-kenet: duzzadt magvú óriássejtek
Veszettség: az idegsejtek citoplazmájában lévő zárványok = Negritestek eozinofil zárványok bazofil szemcsékkel
További módszerek: Immunfluoreszcens teszt (IFA) Légúti infekciók (influenza, parainfluenza, mumps, morbilli, RSV, coronavirus, adenovirus) HSV, VZV Szövetmintákban: lenyomati készítmény vagy fagyasztott metszet
Immunperoxidáz teszt (IPO) CMV leukocytákban Szövetmintákban: lenyomati készítmény vagy fagyasztott metszet
Szilárd fázisú immunoassay, enzimjelöléses technika (EIA Enzyme Immunoassay) Extracelluláris vírusantigén kimutatás: HBV, rotavírus, enterális adenovírus, influenza, RSV, HIV, HSV A vírusspecifikus ellenanyag szilárd fázishoz kötött, ezzel reagál a vírus vagy vírusantigén
18
További módszerek: latex agglutináció (LAT) PCR Ha kevés a nukleinsav vagy nem tenyészthető a vírus
immunelfó koagglutináció immunkromatográfia
Állatoltás • •
Vírusok tenyésztése
•
Ma kevésbé jelentős Hátrányai: – Fogékony állatfaj szükséges – Sokszor nem specifikus tünetek – Esetleges látens fertőzés lehetséges – módosíthatja a tüneteket, interferencia Egéroltást ma is használják: – entero-, rhabdo-, coxsackie A és B
Embrionált tojás •
• •
• •
Előnyei: – Viszonylag tiszta vírusszuszpenzió nyerhető – Az embrió immunológiailag inaktív, nincs immunválaszból eredő szaporodásgátlás 7-12 napos keltetett tojás Különböző vírusok más és más embrionális szövetben szaporíthatók – Chorioallantois: pox, HSV - chorion oldalon jellegzetes szürkésfehér, kiemelkedő elváltozás - pock – Amniálisan oltva: influenza, mumps (adaptálás után allantoisban is) – Embrió: sárgaláz Sejtkultúrában több vírus tenyészthető Influenza A: a tojás fogékony - vakcina előállítás
1 embrió 2 amnion üreg 3 szikhólyag 5 allantois üreg 6 chorioallantois membrán 9 léghólyag
19
Vírusok izolálása - tojásoltás Chorioallantois membrán o pox, HSV o pock-képzés Chorioallantois folyadék o mumps, influenza o HA Amnionüreg o mumps, influenza o HA Embrió o sárgaláz o patológiai elváltozások
Vírusok izolálása - Sejttenyészetek 1. Növekedés típusa szerint • letapadó • szuszpenziós 2. Fenntarthatóság szerint • primer tenyészet • diploid sejtvonal • folyamatos sejtvonal 3. Sejttípus szerint • epitheloid • fibroblaszt • lymphoid
20
Primer tenyészetek • Állatokból eltávolított szervek, pl. vese vagy humán embrióból származó szövet • Tripszines emésztés után a sejtszuszpenziót tápfolyadékban veszik fel • A sejtek tulajdonságai az intakt szervben lévőkéhez hasonló • Korlátozott ideig tarthatók fenn – a sejtek elöregednek • HIV - PBMC sejteken történő tenyésztése • HPV – primer keratinocyta tenyészet
Diploid sejtvonalak • • • • •
Fibroblaszt eredetűek 50-60 passzázs hajtható végre, majd elpusztulnak Eredeti kariotípusukat megtartják Humán embrionális tüdő, bőr, tonsilla Sokféle vírussal szemben fogékonyak
Folyamatos sejtvonalak
HEp-2
HeLa
• Embrionális vagy felnőtt, daganatos szövetek • Korlátlanul passzálhatók, immortalizált sejtek • Változó kromoszómaszám és heteroploiditás, nincs kontakt gátlás Néhány példa: • Adherens sejtek – Vero és BSC-1 normál majom veseszövetből – HeLa: humán méhnyakrákból – HEp-2 emberi gégerákból
• Szuszpenziós sejtkulturák: CD4+ T-sejtes leukaemiából v. limfómából származó: HIV limfocitotrop törzseinek tenyésztése
SiHa HaCat
21
Vírus jelenlétének és szaporodásának kimutatása
Natív mikroszkópos vizsgálat Vero
Saos-2
1. Destrukció: nekrózis, lízis 2. Syncytium: Paramyxovírus és CMV 3. Transzformáció: polyomavírus és szárnyas v. emlősállatok sarcomavírusai
Raji
Vírus jelenlétének és szaporodásának kimutatása Natív módszerrel nem észlelhető elváltozások: Zárványok: • •
Alkothatja: vírus strukturkomponensei vagy a sejt kóros anyagcsereterméke Elhelyezkedés: – Sejtmagzárvány: HSV és adenovirus – Citoplazmazárvány: paramyxo-, pox-, reo-, rhabdovírus – Mag- és citoplazmazárvány: morbilli- és CMV
Kanyaróvírus
Vírus interferencia: rubeola fertőzés labordiagnosztikája • • •
A rubeola primer majomvese kulturában jól szaporodik, CH-t nem okoz Az echovírusok ezeket a sejteket elpusztítják Ha rubeolavírus van a sejtkultúrában, az echovírus 11. Típusa nem okoz CH-t.
ADENOVÍRUS VZV
REOVÍRUS HSV
MUMPSZ KANYARÓ
RSV
22
HSV magzárvány
CMV mag- és citoplazmazárvány
HSV felfúvódott sejtek
Citoplazmazárvány
Negri-test
23
Syncytium
Syncytium
Hemagglutináció • A vírus vagy antigén a vvt-ek receptorához kötődik • Egy vírus általában két vvt-hez kötődik, „vírushidat” képezve • Mikrotiter lemezen történik, 40-60 perces inkubáció • Negatív esetben a vvt-ek leülepednek • Pozitív esetben nem ülnek le a vvt-ek a háló képződése miatt
Hemadszorpció • Ha a vírus (citoplazma membránról lefűződő) agglutinációra képes, a hemagglutininek jelen vannak a sejtek felszínén, így a sejtek megkötik a vvt-eket • Orthomyxo- és paramyxovírus
Indirekt kimutatási és szerológiai módszerek
24
Indirekt kimutatás • Hemagglutináció • Hemadszorpció
Szerológiai módszerek - IgM és IgG - Merkaptánok - IgM molekula polipeptid láncai közti diszulfid hidat hasítják inaktiválva azt, segítve az IgM és IgG titerek hiteles meghatározását, a nem specifikus IgM molekulák eltávolítását - Akut betegség (5. naptól), reaktiváció, reinfekció, fogékonyság, átvészeltség, védettség vizsgálatára - Immunkompromittáltak esetén - inkább a vírus(ag) direkt kimutatása
Vírus neutralizációs teszt • • • •
Vírusneutralizáló ellenanyagok kimutatása. Specifikus ellenanyaggal vírus azonosítása és fordítva. Vírusvakcinák hatásosságának vizsgálatára is alkalmas. Legspecifikusabb teszt.
• HAG, HAdG • Neutralizációs teszt • KKR • IFA • RIA • ELISA • Western blot
Hemagglutináció • A vírus vagy a szolubilis antigén a vvt-ek receptorához kötődik • Egy vírus általában két vvt-hez kötődik, „vírushidat” képezve • Mikrotiter lemezen történik, 40-60 perces inkubáció • Negatív esetben a vvt-ek leülnek a cső aljára • Pozitív esetben nem ülnek le a vvt-ek a háló képződése miatt
Hemagglutináció gátlás A specifikus antitestek gátolják a virális hemagglutininek agglutináló hatását. 1. 2. 3. 4.
A beteg szérumából kettes léptékű hígítási sor készítése, valamint adott mennyiségű vírus hozzáadása. A beteg szérumában lévő ellenanyagok immunkomplexet képeznek a virus partikulumokkal. Vvt-k hozzáadása. Azok a virus partikulumok, amelyek nem képeztek komplexet képesek a vvt-eket agglutinálni.
Pozitív esetben az agglutináció elmaradása észlelhető Pl.: rubeola
Hemadszorpció • A citoplazma membránról lefűződő hemagglutináló vírusok hemagglutininje jelen van a fertőzött sejtek felszínén, így a sejtek megkötik a vvt-ket. • Orthomyxo- és paramyxovírus
25
Komplement kötési reakció
Hemadszorpció gátlás • A specifikus antitestek gátolják a vvt-ek adszorpcióját A beteg szérumát a sejttenyészethez adjuk a vvt-ek hozzáadása előtt Azon vírusok esetén használjuk, amelyek burka hemagglutinint hordoz és nincs kifejezett citopátiás hatása
Sejttenyésztből származó nagy koncentrációjú tisztított antigén szükséges A komplementkötő ellenanyagok specificitása kisebb, mint a neutralizáló ellenanyagoké Csoport-specifikus ellenanyagokat detektálunk ezzel a módszerrel Ezek az ellenanyagok általában hamarabb megjelennek a fertőzés során, mint a típusspecifikusak Szintjük a rekonvaleszcencia ideje alatt gyorsan csökken. Időigényes
• • •
• •
RIA - radioimmunoassay • • • • •
ellenanyag kimutatása szilárd fázisú RIÁ-val a tisztított vírusantigént szilárd hordozóhoz kötik izotóppal jelzett ellenanyag és a vizsgálandó szérum kompetitív assay kalibráló görbe
EIA/ELISA • • • •
HSV, VZV, CMV, HAV, HBV, rubeola, HIV Az antigén a szilárd fázishoz kötött Anti-IgG vagy anti-IgM típusú ellenanyagot használnak Reverz ELISA: anti-IgM kötött a szilárd fázishoz – Ehhez adják hozzá a beteg mintát – Ezután a vírusspecifikus antigént – Majd az enzimmel konjugált antitestet Így a nem specifikus anti-IgG hatású IgM ellenanyagok nem képesek kötni az antigént
26
IFA
Western blot
• Direkt és indirekt immunfluoreszcencia. • EBV-CA (Epstein-Barr virus capsid antigen), EBV-EA (Epstein-Barr early antigen) és EBNA (Epstein-Barr nuclear antigen) vírus antigének elleni ellenanyagok kimutatása • CMV antigenémia teszt.
Alkalmazás
Molekuláris biológiai módszerek
• Nehezen tenyészthető vagy nem tenyészthető vírusok esetében. • Gyors diagnosztikai módszerek. • Nagyobb érzékenység. • Általában nem differenciál élő és nem élő között. • Alapulhat – nukleinsav kimutatáson – fehérje kimutatáson – enzimaktivitás mérésen
Hibridizációs módszerek • Dot blot
Hibridizációs módszerek • Southern blot
27
Hibridizációs módszerek • Northern blot
Hibridizációs módszerek • Microarray
Amplifikációs módszerek • • • • • •
Polimeráz láncreakció Reverz transzkriptáz PCR Real-time PCR NASBA LAMP Ligáz láncreakció
Virális enzimek kimutatása • • • • •
Revertáz teszt reverz transzkriptáz aktivitásának vizsgálata felülúszóból vírus kimutatás polidT primer, triciummal jelölt timidin ha van vírus >>> van RT >>> reverz transzkripció >>> radioaktivitás mérése
28
