UJI EFEK ANALGETIK DAN ANTIINFLAMASI EKSTRAK KERING AIR GAMBIR SECARA IN VIVO
Skripsi Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi
Disusun oleh : GITA PERMATA SARI 106102003380
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA 2010
LEMBAR PERSETUJUAN SKRIPSI
NAMA
: GITA PERMATA SARI
NIM
: 106102003380
JUDUL
: UJI EFEK ANALGETIK DAN ANTIINFLAMASI EKSTRAK KERING AIR GAMBIR SECARA IN VIVO
Disetujui Oleh:
Pembimbing I
Pembimbing II
Drs. Ahmad Musir, M.Sc, Apt
Azrifitria, M.Si, Apt
NIP:
NIP: 197211272005012004
Mengetahui Kepala Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Drs. M. Yanis Musdja, M.Sc, Apt. NIP: 1956010619851010001
KATA PENGANTAR Alhamdulillahirobbil ‘alamin. Segala pujian hanya pantas ditujukan kepada Allah SWT. Tak ada satu pun makhluk di dunia ini yang pantas mendapatkan pujian melebihi diri- Nya. Shalawat dan Salam hanyalah untuk Muhammad Rasulullah SAW, seorang manusia luar biasa. Ia senantiasa menjadi inspirasi dan semangat semangat penulis ketika melemah dan membutuhkan dukungan. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat menempuh ujian akhir guna mendapatkan gelar Sarjana Farmasi pada Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Adapun judul skripsi ini adalah ”Uji Efek Analgetik dan Antiinflamasi Ekstrak Kering Air Gambir Secara In Vivo”. Selesainya penelitian dan penyusunan skripsi ini tidak lepas dari bantuan berbagai pihak, maka dalam kesempatan ini perkenankanlah penulis menyampaikan ucapan terimakasih yang tulus dan sebesar-besarnya, khusunya kepada: 1. Prof. Dr. (hc) dr. M. K. Tadjudin, Sp.And selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 2. Drs. M. Yanis Musdja, M.Sc, Apt selaku Ketua Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 3. Ahmad Musir, Apt sebagai pembimbing I yang senantiasa dan dengan sabar membimbing penulis dalam menyelesaikan penyusunan skripsi ini. 4. Azryfitria, M.Si, Apt sebagai pembimbing II yang senantiasa dan dengan sabar membimbing penulis dalam menyelesaikan penyusunan skripsi ini. 5. Ayahanda Hartono dan Ibunda tercinta Endang Ketut Setyowati yang selalu mendoakan dan mendukung penulis baik moril maupun materiil. 6. Ibu/Bapak Dosen dan Staf Akademika Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 7. Untuk kakakku Fariz Agung Kurniawan, dan sister tersayang Dymitri Adhita, Nuri Prita Wardhani yang selalu memberikan dateline, dukungan materiil dan semangat kepada penulis. 8. Sahabat-sahabat farmasiku Alfi Inayati, Arny Fitri Agus, Eli Felasih, Nailul Hana, Reni Yandwi Sari, Putrisa Amnel Viona, Nindi Sesarowanti, dan Yunita Haryati untuk kebersamaan yang sangat berharga dalam 4 tahun terakhir ini, semoga ini bukanlah perpisahan untuk kita. 9. Sahabat-sahabat farmasi UHAMKA ibu Fith, Pak Hadi, Ibu Dwita, Ibu Alma, Hakim, Heru, Dian yang dengan senang hati mengajarkan dan membantu pelaksanaan uji antiinflamasi. 10. Teman-teman apotek JMED bang udin, mba imah, mba Yeni dan Ricky yang selalu memaklumi keterlambatan saya serta dr. Elsa, dr. Salfiah, dr. Hestin, drg. Dede, dan drg. Desy yang memberikan masukan serta motivasi dalam penyusunan skripsi ini. 11. Teman-teman seperjuangan Farmasi Teofilin 2006 untuk kekompakan dan canda-tawa yang dihadirkan setiap hari meskipun saat kelas berlangsung.
i
12. Dan kepada semua pihak yang telah membantu penulis selama ini yang tidak dapat disebutkan namanya satu persatu. Penulis meyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan karena tiada gading yang tak retak oleh karena itu penulis mengharapkan saran dan kritik yang bersifat membangun untuk lebih menyempurnakan skripsi ini serta memperbaiki kemampuan penulis dalam kesempatan lainnya.
Jakarta, September 2010
Penulis
ii
DAFTAR ISI Kata Pengantar …………………………………………………………………... i Daftar Isi …………………………………………………………………………. iii Daftar Tabel ……………………………………………………………………… v Daftar Gambar ………………………………………………………………....... vi Daftar Lampiran …………………………………………………………………. vii Abstrak …………………………………………………………………………… viii Bab I Pendahuluan 1.1 Latar Belakang ……………………………………………………... 1 1.2 Perumusan Masalah …………………………………………………. 2 1.3 Hipotesa …………………………………………………………… 3 1.4 Tujuan Penelitian ……………………………………………………. 3 1.5 Manfaat …………………………………………………………….. 3 Bab II Tinjauan Pustaka 2.1 Uraian Tanaman ……….……………………………………………. 2.1.1 Klasifikasi ……….…………………………………….………. 2.1.2 Nama Daerah …………………………………………………. 2.1.3 Deskripsi …………. ………………………………………… 2.1.4 Kandungan Kimia …………………………………………….. 2.1.5 Khasiat ………………………………………………………… 2.2 Persiapan Simplisia …….…………………………………………… 2.3 Ekstrak dan Ekstraksi ……………………………………………….. 2.3.1 Pengertian ekstrak dan ekstrak ………………………………... 2.3.2 Cara pembuatan ekstrak ……..………………………………… 2.4 Metode Ekstraksi …………………………………………………….. 2.5 Pengeringan Beku (Freeze Drying) ………………………………….. 2.6 Parameter Ekstrak ………………………………………………….... 2.7 Analgetik …………………………………………………………… .. 2.7.1 Pengertian analgetik ……………………………………… 2.7.2 Mekanisme nyeri………………………… ……………….. 2.7.3 Golongan obat analgetik.………………..………………… 2.7.4 Asam mefenamat …………………………………….…… 2.7.5 Asam asetat ……………………………………………….. 2.7.6 Pengujian efek analgetik …..……………………………… 2.8 Inflamasi …………………………………………………………….. 2.8.1 Pengertian inflamasi ………………………………………. 2.8.2 Mekanisme inflamasi ………………………………… 2.8.3 Golongan obat antiinflamasi ……………………………… 2.8.4 Natrium diklofenak ……………………………… 2.8.5 Karagenan ……………………………………………… 2.8.6 Pengujian efek antiinflamasi ………………………………
4 4 4 5 5 6 6 7 7 7 8 10 11 12 11 13 14 15 15 16 18 18 18 19 20 20 21
Bab III Kerangka Konsep Kerja ………………………………………………….. 24 iii
Bab IV Metodelogi Penelitian 4.1 Tempat dan Waktu Penelitian ………………………………………. 4.2 Alat dan Bahan Penelitian ………………………………………….. 4.2.1 Alat penelitian …………………………………………… 4.2.2 Bahan tanaman …………………………………………..... 4.2.3 Bahan kimia ………………………………………………. 4.2.4 Bahan pereaksi ……………………………………………. 4.2.5 Hewan percobaan …………………………………………. 4.3 Prosedur Penelitian …………………………………………………. 4.3.1 Penyiapan simplisia ………………………………………. 4.3.2 Pembuatan ekstrak air gambir…………………………….. 4.3.3 Uji cemaran gambir (urea) ……………………………… 4.3.4 Penapisan fitokimia ………………………………………. 4.3.5 Pengujian parameter non spesifik ekstrak ………………... 4.3.6 Persiapan hewan coba (aklimatisasi) ……………………... 4.3.7 Penetapan dosis …………………………………………… 4.3.8 Persiapan bahan …………………………………………… 4.3.9 Metode pengujian …………………………………………. 4.3.9.1 Uji analgetik ………………………………………. 4.3.9.2 Uji antiinflamasi …………………………………... 4.3.10 Teknik analisa data ………………………………………..
25 25 25 25 26 26 26 26 26 27 27 27 30 32 33 34 34 34 35 37
Bab V Hasil Penelitian dan Pembahasan 5.1 Hasil Penelitian ………………………………………………………. 5.1.1 Penapisan fitokimia ……………………………………..... 5.1.2 Pengujian parameter ekstrak ……………………………… 5.1.3 Hasil penelitian …………………………………………... 5.1.3.1 Analgetik ………… …………………………….. 5.1.3.2 Antiinflamasi …………………………………… 5.2 Pembahasan ………………………………………………………….
39 39 40 40 40 42 44
Bab VI Kesimpulan dan Saran 6.1 Kesimpulan ………………………………………………………….. 55 6.2 Saran ………………………………………………………………… 56 Daftar Pustaka ……………………………………………………………………. 60 Lampiran ……………………………………………………………………… 61
iv
DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1 Kelompok Perlakuan uji analgetik & antiinflamasi……………….. 33 Tabel 2 Kelompok Dosis Untuk Uji Analgetik…………………………….. 33 Tabel 3 Kelompok Dosis Untuk Uji Antiinflamasi………………………… 33 Tabel 4 Hasil Pengujian Penapisan Fitokimia……………………………… 39 Tabel 5 Karakteristik Ekstrak………………………………………………. 40 Tabel 6 Data Pengamatan Rata-rata Geliat..……………………………….. 40 Tabel 7 Data Persentase Proteksi Analgetik.……………………………….. 41 Tabel 8 Data Persentase Radang Telapak Kaki Tikus……………………… 42 Tabel 9 Data Penghambatan Radang Telapak Kaki Tikus…………………. 43 Tabel 10 Konversi Dosis Hewan ke HED Berdasarkan BSA……………… 71 Tabel 11 Data Pengamatan Geliat Mencit Pada Uji Analgetik ……………. 80 Tabel 12 Data Persentase Proteksi Analgetik ……………………………… 81 Tabel 13 Hasil Pengamatan Radang Pada Uji ANtiinflamasi …………… .. 83 Tabel 14 Hasil Persentase Radang Telapak Kaki Tikus …………………... 84 Tabel 15 Hasil Persentase Penghambatan Radang Telapak Kaki Tikus … .. 86 Tabel 16 Uji Normalitas ANOVA pada Analgetik ……………………… .. 88 Tabel 17 Uji Homogenitas ANOVA pada Analgetik ……………………… 90 Tabel 18 Uji ANOVA pada Analgetik …………………………………… . 91 Tabel 19 Uji Bobot Nyata Terkecil pada Analgetik ……………………… . 91 Tabel 20 Uji Normalitas ANOVA pada Antiinflamasi ……………… …… 94 Tabel 21 Uji Homogenitas ANOVA pada Antiinflamasi………………….. 95 Tabel 22 Uji ANOVA pada Antiinflamasi……………………………… … 97 Tabel 23 Uji Kruskal Wallis pada Antiinflamasi Jam 1………………… … 99 Tabel 24 Uji Bobot Nyata Terkecil pada Antiinflamasi…………………… 100
v
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1 Data Rata-rata jumlah Geliat………………………………….. . Gambar 2 Data Persentase Proteksi Analgetik ............................................. Gambar 3 Data Persentase Radang Telapak Kaki Tikus .............................. Gambar 4 Data Persentase Penghambatan Radang Telapak Kaki Tikus...... Gambar 5 Bongkahan Gambir ...................................................................... Gambar 6 Hasil Freeze Drying Gambir........................................................ Gambar 7 Hewan Uji Mencit DDY .............................................................. Gambar 8 Hewan Uji Tikus SD.................................................................... Gambar 9 Plethysmometer............................................................................ Gambar 10 Freeze Drying Gambir ............................................................... Gambar 11 Penyondean Zat Uji ................................................................. Gambar 12 Penyuntikkan Asam Asetat Secara IP ....................................... Gambar 13 Mencit Meregangkan Perutnya (writhing)................................. Gambar 14 Penyuntikkan Karagenan Secara Subplantar ............................. Gambar 15 Radang Pada Telapak Kaki Tikus.............................................. Gambar 16 Pengukuran Volume Radang Pada Telapak Kaki Tikus............ Gambar 17 Identifikasi Cemaran Gambir (Urea) .........................................
vi
Halaman 41 42 43 44 60 60 60 60 60 61 61 61 61 61 62 62 62
DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1Gambar Alat dan Bahan Penelitian............................................ 61 Lampiran 2 Kegiatan Penelitian ................................................................... 62 Lampiran 3 Sertifikat Natrium Diklofenak .................................................. 64 Lampiran 4 Sertifikat Analisa Diklofenak Sodium ...................................... 65 Lampiran 5 Sertifikat Karagenan ................................................................. 66 Lampiran 6 Absorbansi Asam Mefenamat................................................... 67 Lampiran 7 Skema Kerja (Pembuatan Ekstrak) ………………………..…. 68 Lampiran 8 Skema Kerja Uji Analgetik …………………………………… 69 Lampiran 9 Skema Kerja Uji Antiinflamasi…...…………………………… 70 Lampiran 10 Rumus Perhitungan Dosis Hewan …………………………. 71 Lampiran 11 Perhitungan Dosis Untuk Hewan Uji ……………………… 72 Lampiran 12 Pemeriksaan Parameter Ekstrak …………………………… 79 Lampiran 13 Data Pengamatan Geliat Mencit……………………………... 80 Lampiran 14 Data Persentase Proteksi Analgetik ….……………………… 81 Lampiran 15 Hasil Pengamatan Radang Pada Uji Antiinflamasi………… .. 83 Lampiran 16 Hasil Persentase Radang telapak Kaki Tikus………………… 84 Lampiran 17 Hasil Persentase Penghambatan Radang Telapak Kaki Tikus.. 86 Lampiran 18 Hasil Statistik Uji Efek Analgetik …………………………… 88 Lampiran 19 Hasil Statistik Uji Efek Antiinflamasi……………………….. 94
vii
ABSTRACT
Title : Analgesic and Anti-Inflammatory Effect of The Dryed Aqueous Extract of Gambir In Vivo The dryed aqueous extract of gambir was investigated for the analgesic and antiinflammatory effect in scienctific. This experiment is aims as a anti-inflammatory and analgesic drugs thus the side effect of AINS drugs can be minimize. The result showed that the dryed aqueous extract of gambir administered at dose of 3,5 mg/200 g body weight, 7 mg/200 g body weight dan 14 mg/200 g body weight reduced significantly the formation of oedema induced by carrageenan in rat. In the aceticacid induced writhing model, the extract showed a good analgesic effect characterized by a significant reduction in the number of writhes or abdominal stretches in mice with dose 1,4 mg/20 g body weight used when compared to the positive control group. The analgesic and anti-inflammatory effect of the dryed aqueous extract of gambir could be related to the presence of catechin, tannin and gambiriin in this extract, which it can inhibition the siklooxygenase and lipooxygenase pathway thus the formation arachidonat acid can be eliminated. ANOVA statistic result showed in analgetic and anti-inflammatory there is no different significantly with the positive control group.
Key word : Anti-inflammatory, Analgesic, Cathecin, Tannin, Gambiriin
viii
ABSTRAK
Judul : Uji Efek Analgetik dan Antiinflamasi Ekstrak Kering Air Gambir Secara In Vivo Ekstrak air gambir diasumsikan memiliki efek analgetik dan antiinflamasi secara ilmiah. Penelitian ini bertujuan sebagai obat analgetik dan antiinflamasi sehingga efek samping yang ditimbulkan oleh obat-obat AINS dapat diminimalisasi. Hasil penelitian menunjukkan pemberian oral pada dosis 3,5 mg/200 gBB, 7 mg/200 gBB dan 14 mg/200 gBB dapat menghambat pembentukkan radang yang ditimbulkan oleh karagenan dan histamine pada tikus. Pada metode writhing yang diinduksi dengan asam asetat,ekstrak air gambir menunjukkan efek analgetik yang baik dalam mereduksi jumlah geliat mencit pada dosis 1,4 mg/20 g BB dibandingkan dengan control positif. Efek analgetik dan antiinflamasi pada ekstrak air gambir berhubungan dengan katekin, tannin dan gambiriin yang terkandung didalamnya yang dapat menghambat jalur siklooksigenase dan lipooksigenase sehingga pembentukan asam arakidonat tidak terbentuk. Hasil statistik ANOVA menunjukkan bahwa data analgetik dan antiinflamasi tidak terdapat perbedaan secara bermakna dengan kontrol positif
Kata kunci : Antiinflamasi, Analgetik, Katekin, Tannin, Gambiriin
ix
DAFTAR ISI Kata Pengantar …………………………………………………………………...
i
Daftar Isi ………………………………………………………………………….
ii
Daftar Tabel ………………………………………………………………………
iii
Daftar Gambar ……………………………………………………………….......
iv
Daftar Lampiran ………………………………………………………………….
v
Abstrak …………………………………………………………………………….
vi
Bab I Pendahuluan 1.1 Latar Belakang ……………………………………………………...
1
1.2 Perumusan Masalah ………………………………………………….
2
1.3 Hipotesa ……………………………………………………………
2
1.4 Tujuan Penelitian …………………………………………………….
2
1.5 Manfaat ……………………………………………………………..
3
Bab II Tinjauan Pustaka 2.1 Uraian Tanaman ……….…………………………………………….
4
2.1.1 Klasifikasi ……….…………………………………….……….
4
2.1.2 Nama Daerah ………………………………………………….
4
2.1.3 Deskripsi …………. …………………………………………
5
2.1.4 Kandungan Kimia ……………………………………………..
5
2.1.5 Khasiat …………………………………………………………
5
2.2 Persiapan Simplisia …….……………………………………………
6
2.3 Ekstrak dan Ekstraksi ………………………………………………...
6
2.3.1 Pengertian ekstrak dan ekstrak ………………………………...
6
2.3.2 Cara pembuatan ekstrak ……..…………………………………
7
2.4 Metode Ekstraksi ……………………………………………………... 8 2.5 Pengeringan Beku (Freeze Drying) …………………………………... 9 2.6 Parameter Ekstrak ……………………………………………………. 10 2.7 Analgetik ……………………………………………………………... 11 2.7.1 Pengertian analgetik …………………………………………...
11
2.7.2 Golongan obat analgetik ………………………………………. 11
i
2.7.3 Beberapa pengujian untuk menentukan efek analgetik ………..
12
2.8 Inflamasi ……………………………………………………………… 13 2.8.1 Pengertian inflamasi …………………………………………...
13
2.8.2 Pengujian efek antiinflamasi …………………………………..
14
2.8.3 Golongan obat antiinflamasi …………………………………..
15
Bab III Kerangka Konsep Kerja
17
Bab IV Metodelogi Penelitian 4.1 Tempat dan Waktu Penelitian ………………………………………. 18 4.2 Alat dan Bahan Penelitian ………………………………………….. 18 4.2.1 Alat penelitian ……………………………………………
18
4.2.2 Bahan tanaman …………………………………………..... 18 4.2.3 Bahan kimia ………………………………………………. 19 4.2.4 Bahan pereaksi ……………………………………………. 19 4.2.5 Hewan percobaan …………………………………………. 19 4.3 Prosedur Penelitian …………………………………………………. 19 4.3.1 Penyiapan simplisia ………………………………………. 20 4.3.2 Pembuatan ekstrak air gambir……………………………..
20
4.3.3 Identifikasi Urea ………………………………………….. 20 4.3.4 Penapisan fitokimia ………………………………………. 21 4.3.5 Pengujian parameter non spesifik ekstrak ………………...
23
4.3.6 Persiapan hewan coba (aklimatisasi) ……………………... 25 4.3.7 Penetapan dosis …………………………………………… 26 4.3.8 Persiapan bahan …………………………………………… 27 4.3.9 Metode pengujian …………………………………………. 27 4.3.9.1 Uji analgetik ………………………………………. 27 4.3.9.2 Uji antiinflamasi …………………………………... 28 4.3.10 Teknik analisa data ……………………………………….. 30
Bab V Hasil Penelitian dan Pembahasan 5.1 Hasil Penelitian ………………………………………………………. 32
ii
5.1.1 Penapisan fitokimia …………………………………………....
32
5.1.2 Pengujian parameter ekstrak …………………………………... 33 5.1.3 Hasil penelitian ………………………………………………... 33 5.1.3.1 Analgetik ………………………………………………
34
5.1.3.2 Antiinflamasi ……………………………………….....
36
5.2 Pembahasan …………………………………………………………...
38
Bab VI Kesimpulan dan Saran 6.1 Kesimpulan …………………………………………………………… 48 6.2 Saran ………………………………………………………………….. 49
Daftar Pustaka ……………………………………………………………………. 50 Lampiran
……………………………………………………………………… 54
iii
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Kesehatan merupakan suatu hal yang sangat penting bagi manusia demi mencapai kesejahteraan dan kebahagian baik moral maupun spiritual. Untuk mendapatkan kesehatan yang diinginkan, dapat ditempuh dengan menggunakan obat-obatan, baik dengan tujuan penyembuhan ataupun pencegahan. Untuk tujuan ini selain digunakan obat-obatan modern yang berupa bahan kimia dapat juga digunakan obat-obatan tradisional. Pengetahuan tentang obat tradisional berdasar pada pengalaman dan ketrampilan yang secara turun temurun telah diwariskan dari satu generasi ke generasi berikutnya. Pengertian obat tradisional berdasarkan Peraturan Menteri kesehatan Nomor 246/Menkes/Per/V/1990 Pasal 1 menyebutkan bahwa : Obat tradisional adalah ramuan bahan yang berupa bahan tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan galenik atau campuran dan bahan-bahan tersebut, yang secara traditional telah digunakan untuk pengobatan berdasarkan pengalaman. Dari berbagai macam tanaman obat terdapat satu jenis tanaman yang akan dijadikan objek penelitian yaitu gambir yang memiliki nama latin Uncaria gambir Roxb, tanaman ini termasuk dalam suku Rubiaceae. Gambir merupakan
1
2
ekstrak air panas dari daun dan ranting tanaman gambir dan kemudian dicetak serta dikeringkan (Puguh, 2009) Kandungan utama gambir adalah katekin (51%), zat penyamak (20-25%), asam catechutannat, guersetin, catechu merah, gambir flouresein, abu, asam lemak, lilin (BPOM RI, 2007). Kelarutan katekin yang optimum pada keadaan hangat sekitar 400 C (Lusida et al., 2007). Menurut jurnal The key to medicinal plants research resolves around the detection, isolation, and characterization of antioxidants as therapeutic agents (Misra, 2009) mengatakan gambir dapat digunakan sebagai analgetik, dimana kandungan dari gambir seperti tannin, katekin dan gambiriin berfungsi sebagai antioksidan. Antioksidan ini diasumsikan sebagai penghambat siklooxygenase dan lipooxygenase sehingga nyeri dan inflamasi tidak terjadi (Esvandiary et al.,2004). Nyeri adalah suatu mekanisme protektif bagi tubuh, ia timbul bilamana jaringan sedang dirusak. Inflamasi merupakan suatu gejala pada beberapa penyakit dan dirasa oleh banyak orang tidak nyaman (Ganiswara et al., 1995).
1.2 Perumusan Masalah Apakah ekstrak kering air gambir memiliki efek analgetik dan antiinflamasi yang diberi secara oral pada mencit putih jantan dan tikus putih betina.
3
1.3 Hipotesa Ekstrak kering air gambir memiliki efek analgetik dan antiinflamasi yang diberi secara oral pada mencit putih jantan dan tikus putih betina.
1.4 Tujuan Penelitian Penelitian ini dilakukan untuk menguji pengaruh pemberian ekstrak kering air gambir terhadap pengurangan rasa nyeri pada mencit putih jantan dan radang (inflamasi) pada tikus putih betina dalam berbagai konsentrasi dengan asam mefenamat dan natrium diklofenak sebagai pembanding.
1.5 Manfaat Penelitian 1) Penelitian diharapkan memberikan informasi ilmiah mengenai efek analgetik dan antiinflamasi dari ekstrak kering air gambir. 2) Untuk pengembangan penggunaan zat analgetik dan antiinflamasi yang berasal dari ekstrak kering air gambir sebagai bahan pengganti obat analgetik dan antiinflamasi. 3) Sebagai dasar penelitian lebih lanjut dalam usaha pengembangan obat tradisional lain sebagai upaya peningkatan kesehatan masyarakat.
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Tanaman 2.1.1 Klasifikasi (DepKes RI,1989) Berdasarkan ilmu taksonomi, klasifikasi tumbuhan gambir adalah sebagai berikut: Kingdom
: Plantae
Divisi
: Magnoliophyta
Kelas
: Magnoliopsida
Ordo
: Asteridae
Familia
: Rubiaceae
Genus
: Uncaria
Spesies
: Uncaria gambir Roxb
Sinonim
: Uncaria gambir Roxb
2.1.2 Nama daerah (DepKes RI, 1989) Sumatera: gambee, gani, kacu, sontang, gambie, gambu, gimber, pangilom, sepelet. Jawa: santun, ghambhir Kalimantan: kelare, abi, gamer, kambin, sori.
4
5
Maluku: kampir, kambir, ngamir, gaamer, gabi, tagabere, gagabere, gabere, gambe. Nusa Tenggara: tagambe, gambele, gamelo, gambit, gambe, gambiri.
2.1.3 Deskripsi Tanaman gambir termasuk tumbuhan perdu memanjat yang memiliki batang keras, bila dibiarkan akan tumbuh melingkar. Tinggi tanaman 1,5-2 meter, warna batang coklat muda sampai coklat tua, percabangan banyak bersudut 30-50 derajat dari batang utama. Daunnya berwarna hijau muda-hijau coklat dan coklat muda, dengan panjang 0,2-0,4 cm berwarna hijau. Bunganya berwarna putih, berbentuk kecil-kecil dan tongkol bulat. Perakaran tanaman gambir adalah berakar tunggang atau tunjang dan fungsi akar adalah untuk mempengaruhi pertumbuhan daun dan batang. Perakaran tanaman gambir sangat penting sekali sebagai organ penyerap air dan unsur hara, tempat menyimpan makanan, jangkar tanaman, dan sebagai tempat terbentuknya berbagai senyawa organik (BPOM RI, 2007).
2.1.4 Kandungan Kimia Kandungan utama gambir adalah katekin, asam catechutannat, guersetin, catechu merah, gambir flouresein, abu, asam lemak, lilin, alkaloid tannin (BPOM RI, 2007).
6
2.1.5 Khasiat Kandungan tannin dalam gambir bekerja baik sebagai antibakteri dan antifungi. Gambir dapat digunakan sebagai astringent dan pada dosis besar dapat digunakan untuk mengobati diare (Kress, 2009). Secara empirik gambir telah digunakan untuk radang gusi, radang tenggorokan, serak batuk, caries gigi, bisul, dan obat luka bakar (Haryanto, 2009). Sediaan antiseptic mulut dari katekin gambir dapat mencegah plak pada gigi (Lucida et al.,2007).
2.2 Persiapan Simplisia Simplisia adalah bahan alamiah yang digunakan sebagai obat yang belum mengalami pengolahan apapun juga dan kecuali dikatakan lain, berupa bahan yang telah dikeringkan (Gunawan, Didik et al., 2004). Simplisia dibedakan menjadi simplisia nabati, simplisia hewani, simplisia pelican (mineral). Simplisia nabati yang akan digunakan pada penelitian kali ini. Simplisia nabati adalah simplisia yang berupa tumbuhan utuh, bagian tumbuhan atau eksudat tumbuhan. Eksudat tumbuhan ialah isi sel dengan cara tertentu dikeluarkan dari selnya. Eksudat tanaman dapat berupa zatzat atau bahan-bahan nabati lainya yang dengan cara tertentu dipisahkan atau diisolasi dari tanaman (Gunawan, Didik et al., 2004).
7
2.3 Ekstrak dan Ekstraksi 2.3.1 Pengertian ekstrak dan ekstraksi Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Depkes RI, 2000). Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair (Harbone, 1996).
2.3.2 Cara pembuatan ekstrak (DepKes RI, 2000) Pembuatan ekstrak melalui tahap-tahap sebagai berikut: a. Pembuatan serbuk simplisia Proses awal pembuatan ekstrak adalah tahapan pembuatan serbuk simplisia kering. Dari simplisia dibuat serbuk simplisia. b. Cairan pelarut (penyari) Cairan pelarut dalam proses pembuatan ekstrak adalah pelarut yang baik (optimal) untuk dapat melarutkan kandungan zat aktif sehingga senyawa tersebut dapat terpisahkan dari senyawa lainnya.
8
c. Pemisahan dan pemurnian Tujuan dari tahapan ini adalah untuk menghilangkan (memisahkan) senyawa yang tidak dikehendaki semaksimal mungkin tanpa berpengaruh pada senyawa kandungan yang dikehendaki, sehingga diperoleh ekstrak yang lebih murni. d. Pengeringan ekstrak Pengeringan berarti menghilangkan pelarut dari bahan sehingga menghasilkan serbuk, massa kering-rapuh. e. Rendemen Rendemen adalah perbandingan antara ekstrak yang diperoleh dengan simplisia awal.
2.4 Metode Ekstraksi (DepKes RI, 2000) Metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut terdiri dari dua cara, yaitu cara dingin dan cara panas. 1. Cara dingin a. Maserasi Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur
ruang
(kamar).
Maserasi
kinetik
berarti
dilakukan
pengadukan yang kontinu (terus-menerus), sedangkan remaserasi berarti
9
dilakukan
pengulangan
penambahan
pelarut
setelah
dilakukan
penyaringan maserat pertama dan seterusnya. b. Perkolasi Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur ruang. 2. Cara panas a. Refluks Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut sampai pada temperatur titik didihnya selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik.
Umumnya dilakukan
pengulangan proses pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna. b. Sokhletasi Sokhletasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi berkelanjutan dengan jumlah pelarut yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. c. Digesti Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinyu) pada temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan, secara umum dilakukan pada temperatur 40o-50oC.
10
d. Infus Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air (bejana infus tercelup dalan penangas air mendidih), temperatur terukur 96o-98oC selama waktu tertentu (15-20 menit). e. Dekok Dekok adalah infus ada waktu yang lebih lama (≥ 30oC) dan temperatur sampai titik didih air.
2.5 Pengeringan Beku (Freeze Drying) Prinsip
kerja
Freeze
drying
meliputi
pembekuan
larutan,
menggranulasikan larutan yang beku tersebut, mengkondisikannya pada vacum ultra-high dengan pemanasan yang sedang sehingga mengakibatkan air pada bahan pangan tersebut akan menyublin dan akan menghasilkan produk padat (solid product) (Ridwansyah, 2003). Metode ini menghilangkan air melalui 3 tahap yaitu pembekuan atau freezing dengan cara sublimasi, pengeringan primer, dan pengeringan sekunder. Pada proses freezing sampel dibekukan pada suhu -400C, kemudian pada pengeringan primer padatan tersebut disublimkan tanpa menjadi cair dahulu dengan cara menurunkan tekanan udara pada ruangan sampai 0,1 bar kemudian suhu dinaikkan dan menarik H2O ke kondensor. Kemudian pada proses selanjutnya untuk mengangkat air yang masih tersisa, zat diuapkan
11
dengan cara biasa namun dengan tekanan udara yang sangat rendah dan suhu lebih tinggi daripada pengeringan primer (Tambunan, 2000).
2.6 Parameter Ekstrak (DepKes RI, 2000) a. Susut pengeringan Susut pengeringan adalah pengukuran sisa zat setelah pengeringan pada temperatur 105oC selama 30 menit atau sampai berat konstan, yang dinyatakan sebagai nilai persen (%). Tujuannya untuk memberikan batasan maksimal (rentang) tentang besarnya senyawa yang hilang pada proses pengeringan. Nilai untuk susut pengeringan jika tidak dinyatakan lain adalah kurang dari 10%. b. Kadar air Kadar air adalah pengukuran kandungan air yang berada di dalam bahan. Tujuannya untuk memberikan batasan maksimal (rentang) tentang besarnya kandungan air di dalam bahan. Nilai untuk kadar air sesuai dengan yang tertera dalam monografi. c. Kadar abu Untuk penentuan kadar abu, bahan dipanaskan pada temperatur dimana senyawa organik dan turunannya terdestruksi dan menguap sehingga hanya tersisa unsur mineral dan anorganik. Tujuannya adalah untuk memberikan gambaran tentang kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal
12
dari proses awal sampai terbentuknya ekstrak. Nilai untuk kadar abu sesuai dengan yang tertera dalam monografi.
2.7 Analgetik 2.7.1 Pengertian nyeri Nyeri adalah pengalaman sensorik dan emosional yang tidak menyenangkan dan yang berkaitan dengan (ancaman) kerusakan jaringan. Rasa nyeri dalam kebanyakan hal hanya merupakan suatu gejala, yang berfungsi melindungi tubuh. Nyeri disebabkan oleh rangsangan mekanis, kimiawi atau fisis (kalor, listrik), dapat menimbulkan kerusakan pada jaringan (Tjay & Rahardja, 2002). Kualitas nyeri berdasarkan tempat terjadinya dibagi atas nyeri somatik dan nyeri visceral. Nyeri somatik dibagi atas dua kualitas yaitu nyeri permukaan dan nyeri dalam (Mustchler, 1991). Nyeri dalam bila rasa nyeri berasal dari kulit, otot, persendian, dan tulang. Nyeri dalam bersifat menekan dan membakar yang sukar dilokalisasi sertag kebanyakan menyebar ke daerah sekitar. Sedangkan nyeri permukaan bertempat pada kulit, misalnya tertusuk dengan jarum pada kulit. Nyeri permukaan mempunyai karakter yang ringan, dapat dilokalisasi (Mustchler, 1991).
13
Nyeri viseral atau nyeri perut adalah nyeri yang disebabkan oleh rangsangan pada saraf nyeri di daerah visera terutama dalam rongga dada dan perut (Mustchler, 1991).
2.7.2 Mekanisme nyeri (Guyton, 1995) Mekanisme terdiri atas 4 proses utama, yaitu: 1. Transduksi adalah proses dimana stimulus nyeri merupakan aktivitas elektrik reseptor terkait. 2. Transmisi, dalam proses ini terlibat tiga komponen saraf yaitu saraf sensorik perifer yang meneruskan impuls ke medulla spinalis, kemudian jaringan saraf yang meneruskan impuls yang menuju ke atas (ascendens), dari medulla spinalis ke batang otak dan hipothalamus.
Yang
terakhir
hubungan
timbal
balik
antara
hipothalamus dan cortex. 3. Modulasi yaitu aktivitas saraf untuk mengontrol transmisi nyeri. Suatu analgetik tubuh secara selektif menghambat transmisi nyeri di medulla spinalis. Analgetik ini diaktifkan oleh stress atau obat analgetika seperti morfin. 4. Persepsi,
Proses
impuls
nyeri
yang
ditransmisikan
hingga
menimbulkan perasaan subyektif dari nyeri sama sekali belum jelas. bahkan struktur otak yang menimbulkan persepsi tersebut juga tidak jelas. Sangat disayangkan karena nyeri secara mendasar merupakan
14
pengalaman subyektif sehingga tidak terhindarkan keterbatasan untuk memahaminya.
2.7.3 Golongan obat analgetik Analgetik meringankan rasa
adalah nyeri
senyawa
yang
(Mutschler,
dalam
2007).
dosis
terapetik
Berdasarkan
kerja
farmakologinya, analgetik dibagi 2 kelompok besar, yaitu analgetik narkotik dan analgetik non-narkotik. a. Analgetik narkotik Zat ini mempunyai daya penghalau nyeri yang kuat sekali dengan titik kerja yang terletak di sistem saraf sentral, analgetik ini umumnya menurunkan kesadaran (sifat meredakan dan menidurkan) dan menimbulkan perasaan nyaman (euforia), serta mengakibatkan ketergantungan fisik dan psikis (ketagihan, adiksi) bila pengobatan dihentikan (Tjay & Rahardja, 2002). b. Analgetik non-narkotik Analgetik non-narkotik bersifat tidak adiktif dan kurang kuat dibandingkan dengan analgetik narkotik. Obat-obat ini juga dinamakan analgetik perifer, tidak menurunkan kesadaran dan tidak mengakibatkan ketagihan secara kimiawi (Tjay & Rahardja, 2002).
15
2.7.4 Asam Mefenamat Asam mefenamat digunakan sebagai obat analgetik. Asam mefenamat bekerja dengan cara menghambat sintesa prostaglandin dalam jaringan tubuh dengan menghambat enzim siklooxygenase. Efek samping dapat
terjadi gangguan saluran cerna, antara lain iritasi
lambung, kolik usus, mual, muntah dan diare, rasa mengantuk, pusing sakit kepala, penglihatan kabur, vertigo (Wilmana, 1995). Asam mefenamat memiliki waktu paruh (T ½) sekitar 2 jam dan waktu puncak 2-4 jam. Ikatan protein asam mefenamat > 90% dan eliminasi ginjal sekitar 52% (Sukandar, 2008).
2.7.5 Asam asetat Asam asetat, asam etanoat atau asam cuka
adalah senyawa
kimia asam organik yang dikenal sebagai pemberi rasa asam dan aroma dalam makanan. Asam cuka memiliki rumus empiris C2H4O2. Rumus ini seringkali ditulis dalam bentuk CH3-COOH, CH3CO2H.
Asam
asetat
murni
(disebut asam
CH3COOH, asetat
atau
glasial)
adalah cairan higroskopis tak berwarna, dan memiliki titik beku 16,7°C.
16
2.7.6 Beberapa pengujian untuk menentukan efek analgetik (Turner, R.A, 1965) 1. Analgetik narkotik a.
Metode tgail-clip Dilakukan oleh Bianchi dan Franchesch ini menggunakan rangsang tekan melalui suatu artery clip pada pangkal ekor mencit.
b. Metode green at.al. Ransang analgetik pada metode ini adalah tekanan yang diberikan kepada ekor tikus menggunakan suatu tabung yang diisi oleh suatu cairan. Tabung tersebut dihubungkan dengan sebuah manometer untuk mengukur tekanan (dalam mm Hg). c. Metode dengan rangsang panas (Thermal stimulus) Metode ini dilakukan dengan cara menempatkan hewan percobaan di atas suatu permukaan panas. 2. Analgetik non narkotik a.
Peritoneal test (writhing test) Pemberian secara intra peritoneal dari beberapa zat kimia, dapat memberikan respon yang khas pada mencit, yaitu adanya gerakan peregangan berupa konstraksi dari dinding perut, kepala dan kaki ditarik ke belakang sehingga abdomen menyentuh dasar dari ruang yang ditempatinya. Gejala ini
17
dinamakan writhing atau peregangan
yang dapat dihitung
secara kuantiitatif (Carvalho et.al., 1999). b. Podolorimeter Metode ini menggunakan arus listrik sebagai rangsang analgetik. Mencit diletakkan pada alas yang terbuat dari logam. Alat tersebut dialiri arus listrik yang voltasenya diketahui. Voltase minimum yang menimbulkan respon mencicit dicatat, kemudian voltase berangsur-angsur dinaikkan. Zat-zat yang berefek analgetik akan menyebabkan kenaikan voltase yang dibutuhkan untuk menimbulkan respon mencicit. Pertambahan voltase ini diidentikan dengan efek analgetik. c.
Rectodolorimeter Metode ini menggunakan plate tembaga yang dihubungkan dengan sebuah kumparan induksi. Kumparan tersebut dihubungkan dengan sebuah elektroda tembaga berbentuk silinder yang dimasukkan ke dalam rectum. Untuk mengukur voltase (tegangan) listrik digunakan sebuah voltmeter dengan sensitifitas 0,1 volt. Prosedur kerja dan pengamatan sama seperti pada metode podolorimeter. Voltase yang dibutuhkan untuk menimbulkan respon mencicit adalah 1 sampai 2 volt.
18
2.8 Inflamasi 2.8.1 Pengertian inflamasi Inflamasi adalah respon terhadap cedera jaringan dan infeksi. Ketika proses inflamasi berlangsung, terjadi reaksi vaskular dimana cairan, elemen-elemen darah, sel darah putih dan mediator kimia berkumpul pada tempat cedera jaringan atau infeksi. Proses inflamasi merupakan suatu mekanisme perlindungan tubuh untuk menetralisir dan membasmi agen-agen yang berbahaya pada tempat cedera dan mempersiapkan keadaan untuk perbaikan jaringan (Wilmana, 1995). Ciri khas inflamasi dikenal dengan tanda-tanda utama inflamasi, yaitu: a. Eritema (kemerahan) b. Edema (pembengkakan) c. Kolor (panas) d. Dolor (nyeri) e. Functio laesa ( hilangnya fungsi )
2.8.2 Mekanisme inflamasi Terjadinya inflamasi dimulai dengan adanya stimulus yang merusak jaringan, mengakibatkan sel mast pecah dan terlepasnya mediator-mediator inflamasi. Terjadi vasodilatasi dari seluruh pembuluh darah pada daerah inflamasi sehingga aliran darah meningkat. Terjadinya perubahan volume darah dalam kapiler dan venula yang
19
menyebabkan sel-sel endotel pembuluh darah meregang dan terjadi kenaikan permeabilitas pembuluh darah serta protein plasma keluar dari pembuluh sehingga timbul edema. Infiltrasi leukosit dengan cara melengket pada dinding endotelium venula kemudian menuju daerah inflamasi dan memfagositosis penyebab inflamasi (EkaPutri, 2001).
2.8.3 Golongan obat antiinflamasi NSAID dikenal sebagai penghambat prostaglandin, mempunyai efek analgetik dan antipiretik yang berbeda-beda tetapi terutama dipakai sebagai agen antiinflamasi untuk meredakan inflamasi dan nyeri (Wilmana,
1995).
Berdasarkan
mekanisme
kerjanya
obat-obat
antiinflamasi terbagi kedalam golongan : a.
Antiinflamasi steroid Bekerja dengan cara menghambat pelepasan prostaglandin dari selsel sumbernya, termasuk golongan obat ini antara lain : hidrokortison,
pednison,
prednisolon,
metyl
prednisolon,
triamsinolon, deksametason dan betametason (Bowman, WC, 1980). b.
Antiinflamasi non steroid Bekerja dengan cara menghambat enzim siklooxygenase sehingga konversi asam arakidonat menjadi terganggu. Termasuk golongan
20
obat ini adalah aspirin, natrim diklofenak ibuprofen dan lain-lain (Gan, Sulistia, 1995).
2.8.4 Natrium Diklofenak Natrium diklofenak memiliki efek sebagai antiinflamasi, analgetik dan antipiretik. Efek sampingnya adalah gangguan saluran cerna, perdarahan saluran cerna dan tukak lambung (Katzung, 2001). Obat ini adalah penghambat siklooksigenase yang relatif nonselektif dan kuat, juga mengurangi bioavailabilitas asam arakidonat (Tjay dan Kirana, 2002). Obat ini terikat 99% pada protein plasma dan mengalami efek lintas awal (first-pass) sebesar 40-50%. Waktu paruh natrium diklofenak singkat yakni 1-3 jam (Wilmana, 1995).
2.8.5 Karagenan Karagenan merupakan suatu ekstrak kering ganggang laut merah (EkaPutri, 2001). Zat ini dapat digunakan untuk memicu terbentuknya udem yang diinduksikan secara subplantar pada telapak kaki tikus (Anggraini, 2008).
21
2.8.6 Pengujian efek antiinflamasi 1. Pengujian berdasarkan penghambatan radang yang ditimbulkan oleh iritan pada telapak kaki mencit Zat penginduksi untuk menghasilkan radang sangat mempengaruhi hasil pengujian obat. Efek penghambatan pembentuk radang oleh obat antiinflamasi dinilai dengan pengukuran volume telapak kaki mencit pada selang waktu tertentu dengan menggunakan alat plethysmometer (Hamid, 2004). 2. Pengujian berdasarkan penghambatan leukosit terhadap peritonitis Percobaan ini menggunakan 0,25 ml karagenin 0,75% dalam NaCl fisiologis sebagai iritan yang diinjeksikan intraperitoneal, 4 jam kemudian hewan dibedah dan cairan peritonealnya dikumpulkan lalu dicampur dengan NaCl fisiologis dengan dapar fosfat yang bebas Ca2+ Mg2+. Total leukosit ditentukan dalam kamar hitung Neubauer (Turner, R.A, 1965). 3. Pengujian berdasarkan penghambatan pembentukan eritema dengan radiasi ultra violet Pengujian ini dilakukan dengan penyinaran sinar ultra violet kulit hewan uji yang telah dicukur rambutnya, lalu eritema yang terbentuk diamati Penekanan respon eritema berhubungan dengan keefektifan obat yang dipakai dalam pengobatan arthritis rematoid. Perubahan suhu kulit pada daerah inflamasi juga dapat dipakai untuk mengukur efek obat anti inflamasi pada inflamasi sendi karena arthritis rematoid. Dinding
22
pembuluh juga akan mengalami kebocoran terhadap protein dan hal ini dapat digunakan untuk mengukur kemampuan obat dalam menekan efek mediator endogen terhadap permeabilitas vaskuler. Dalam pengujian ini biasanya digunakan zat warna biru seperti evans blue, trypan blue yang dapat bergabung dengn protein plasma dan memperlihatkan terjadinya perubahan permeabilitas vaskuler. Zat warna ini disuntikkan melalui pembuluh darah ekor hewan coba. Peningkatan permeabilitas vaskuler dapat menimbulkan kebococran protein yang telah berikatan dengan zat warna biru, sehingga kulit bewarna biru pada daerah yang rusak. Tingkat pembiruan
dapat
diukur
dengan
berbagai
cara,
dapat
dengan
mengekstraksi daerah kulit yang biru atau hanya diamati secara visual (Turner, R.A, 1965). 4. Pengujian berdasarkan metode granuloma pouch Metode ini dilakukan dengan penyuntikkan 20-25 ml udara dan sejumlah kecil iritan ke dalam jaringan subkutan punggung tikus, yang terjadi inflamsi yang berupa abses. Luasnya inflamasi yang terbentuk diukur 4-14 hari sesudah induksi dengan mengukur tebalnya dinding granulasi yang terbentuk sekitar abses, ditimbang potongan granuloma (Turner, R.A, 1965).
23
5. Pengujian dengan metode pembentukan granuloma oleh cotton pellets atau sponge (kubus busa poliuretan) Metode ini menggunakan cotton pellets atau sponge yang ditanam secara subkutan pada hewan coba, 5-8 hari sesudahnya cotton pellets atau sponge dikeluarkan. Pellets kemudian diinkubasi pada suhu 37 0C selama 24 jam lalu dikeringkan pada suhu 60 0C hingga beratnya konstan. Pertambahan berat pada bobot keringnya menunjukkan formasi granuloma (Turner, R.A, 1965).
BAB III KERANGKA KONSEP KERJA
Ekstrak kering air gambir
1. 2. 3. 4.
Serbuk
Uji penapisan fitokimia Uji cemaran gambir (urea) Susut pengeringan Kadar abu
Dibuat infusa
Larutan ekstrak kering air gambir
Freeze drying
Ekstrak uji 0,7; 1,4; 2,8 mg/20 gBB
Uji efek analgetik
Ekstrak uji 3,5; 7; 14 mg/200 gBB
Uji efek antiinflamasi
Ekstrak kering air gambir
24
BAB IV METODOLOGI PENELITIAN
4.1 Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian dilakukan di Laboratorium Kimia dan Farmakologi Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran & Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta dan Laboratorium Farmakologi UHAMKA Jakarta. Penelitian ini dilakukan selama ± tiga bulan (Mei– Juli 2010).
4.2 Alat dan Bahan Penelitian 4.2.1 Alat penelitian Alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi : (1) Neraca analitik (Wiggen Hauser); (2) Spuit injeksi suplantar dan peroral 1 ml (Terumo); (3) Stopwatch (Olympic); (4) Alat-alat gelas (Pyrex Iwaki Glass); (5) Freeze drying (LIPI); (6) Plethysmometer; (7) Kandang mencit & tikus; (8) Sonde; (9) Timbangan hewan; (10) Kapas; (11) Lumpang dan stamfer; (12) Tissu gulung; (13) Label; (14) Botol vial; (15) Spatel.
4.2.2 Bahan tanaman Simplisia yang digunakan adalah bongkahan gambir yang diperoleh dari perkebunan gambir Payakumbuh, Sumatra Barat.
25
26
4.2.3 Bahan kimia Aquades, Asam asetat, Asam mefenamat dari PT. Kimia Farma, Natrium Karboksimetilselulosa (NaCMC) dari PT. Brataco, Aquades, Karagenan (LIPI), Na diklofenak dari PT. Kimia Farma, NaCl 0,9% steril (Otsuka Pharmaceutical Indonesia), Air Raksa (Hg), Methylen blue.
4.2.4 Bahan pereaksi Bahan pelarut untuk ekstraksi adalah aquades. Bahan untuk penapisan fitokimia adalah ammonia (10%, 25%), etil asetat, HCl (1%, 1:10), pereaksi Dragendorff, pereaksi Mayer, aquadest, lempeng magnesium, HCl pekat, butanol, larutan besi (III) klorida (FeCl3) 1%, pereaksi Stiasny, NaOH 1 N, eter, asam asetat anhidrat, H2SO4 pekat, pereaksi Libermann-Burchard, petroleum eter.
4.2.5 Hewan percobaan Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian adalah mencit putih jantan (Mus musculus) dan tikus putih betina (Rattus novergicus) yang diperoleh dari Laboratorium Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor (IPB).
4.3 Prosedur Penelitian 4.3.1 Penyiapan simplisia Bongkahan gambir langsung digerus sampai diperoleh serbuk halus.
27
4.3.2 Pembuatan ekstrak air gambir Pembuatan ekstrak dilakukan dengan metode infusa. Sebanyak 200 gram serbuk ekstrak air gambir dilarutkan dalam aquades secukupnya, kemudian dididihkan selama 15 menit pada suhu 900-980 sambil diaduk. Setelah itu, larutan gambir disaring menggunakan kapas dan ditampung dalam botol. Selanjutnya filtrat gambir yang sudah disaring kemudian diuapkan menggunakan freeze drying di LIPI. Dihitung hasil rendemen ekstrak dengan rumus:
4.3.3 Uji cemaran gambir (urea) Panaskan 500 mg dalam tabung kimia hingga meleleh dan bau ammonia. Lanjutkan pemanasan hingga cairan keruh lalu dinginkan dan larutkan dalam campuran 10 ml air dan 0,5 ml larutan Natrium hidroksida P, tambahkan 1 tetes larutan tembaga (III) sulfat P; terjadi perubahan warna violet. Larutkan 100 mg dalam 1 ml air, tambahkan 1 ml asam nitrat P; terbentuk endapan hablur putih. (Anonim, 1995).
4.3.4 Penapisan fitokimia (Fansworth,1969) Pada pemeriksaan terhadap kandungan golongan senyawa kimia dari serbuk dan ekstrak gambir (Uncaria gambir Roxb) seperti alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, steroid/terpenoid, kuinon, minyak atsiri dan kumarin.
28
a. Identifikasi alkaloid Sebanyak ± 5 gram serbuk dilembabkan dengan 5 ml ammoniak 25 % digerus dalam mortir, kemudian ditambahkan 20 ml kloroform dan digerus kembali dengan kuat, campuran tersebut disaring dengan kertas saring, filtrat berupa larutan organik diambil (sebagai larutan A), sebagai larutan A (10 ml) diekstraksi dengan 10 ml larutan HCl 1:10 dengan pengocokan dalam tabung reaksi, diambil larutan bagian atasnya (larutan B). Larutan A diteteskan beberapa tetes pada kertas saring dan disemprot atau ditetesi dengan pereaksi Dragendroff, terbentuk warna merah atau jingga pada kertas saring menunjukkan adanya senyawa alkaloid. Larutan B dibagi dalam 2 tabung reaksi, ditambahkan masingmasing pereaksi Dragendroff dan pereaksi Mayer, terbentuk endapan merah bata dengan pereaksi Dragendroff atau endapan putih dengan pereaksi Mayer menunjukkan adanya senyawa alkaloid. b. Identifikasi flavonoid Sebanyak ± 10 gram serbuk ditambah 100 ml air panas, didihkan selama 5 menit, saring. Ambil 5 ml filtratnya (dalam tabung reaksi), ditambahkan serbuk Mg secukupnya dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil alkohol, kocok kuat dan biarkan memisah. Terbentuknya warna merah, kuning, atau jingga pada lapisan amil alkohol menunjukkan adanya flavonoid.
29
c. Identikasi saponin Serbuk dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambah 10 ml air panas. Setelah dingin kocok kuat secara vertikal selama 10 detik. Terbentuknya busa yang stabil menunjukkan adanya saponin, bila ditambahkan 1 tetes HCl 1% busa tetap stabil. d. Identifikasi tanin Sebanyak ± 10 gram serbuk ditambah 10 ml air, didihkan selama 15 menit, setelah dingin kemudian di saring dengan kertas saring. Filtrat ditambah 1-2 tetes FeCl3 1 %, terbentuknya warna biru, hijau atau hitam menunjukkan adanya seyawa golongan tanin. e. Identifikasi steroid/terpenoid Sebanyak ± 5 gram serbuk dimaserasi dalam 20 ml eter selama 2 jam kemudian disaring. Diuapkan dalam cawan penguap sampai kering. Ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat ke dalam residu. Terbetuknya warna hijau atau merah menunjukkan adanya steroid/triterpenoid. f. Identifikasi kuinon Sebanyak ± 1 gram serbuk dipanaskan dalam air selama 5 menit, disaring. Sebanyak 5 ml filtat ditambah beberapa tetes larutan NaOH 1 N, terbentuk warna merah menunjukkan adanya kuinon. g. Identifikasi minyak atsiri Sebanyak ± 2 gram serbuk dimasukkan ke dalam tabung reaksi (volume 20 ml), tambahkan 10 ml pelarut petroleum eter. Pada mulut tabung dipasang corong yang diberi lapisan kapas yang telah
30
dibasahi dengan air, kemudian disaring dengan kertas saring. Filtrat yang diperoleh diuapkan pada cawan penguap, selanjutnya residu dilarutkan dengan pelarut etanol 95 % sebanyak 5 ml lalu saring dengan kertas saring. Filtratnya diuapkan dengan cawan penguap, residu yang berbau aromatik menunjukkan adanya senyawa golongan minyak atsiri. h. Identifikasi kumarin Sebanyak ± 2 gram serbuk dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 10 ml kloroform. Corong yang diberi lapisan kapas yang telah dibasahi dengan air dipasang pada mulut tabung, kemudian dipanaskan selama 30 menit, setelah dingin disaring. Filtrat diuapkan dengan cawan penguap hingga kering, sisa ditambah air panas 10 ml, dinginkan kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 0,5 ml amoniak 1 %. Diamati dibawah sinar UV 366 nm, flouresensi biru atau hijau menunjukkan adanya kumarin.
4.3.5 Pengujian parameter non spesifik ekstrak (Depkes RI, 2000) a. Susut pengeringan Ekstrak ditimbang dengan seksama sebanyak 1 gram sampai 2 gram dan dimasukan ke dalam botol timbang dangkal bertutup yang sebelumnya telah dipanaskan pada suhu 105 oC selama 30 menit dan telah ditara. Sebelum ditimbang, ekstrak diratakan dalam botol timbang dengan menggoyang-goyangkan botol, hingga merupakan
31
lapisan setebal lebih kurang 5 mm sampai 10 mm, kemudian dimasukan ke dalam oven, buka tutupnya. Pengeringan dilakukan pada suhu penetapan yaitu 105oC hingga diperoleh bobot tetap lalu ditimbang. Sebelum setiap pengeringan, botol dibiarkan dalam keadaan tertutup mendingin dalam eksikator hingga suhu kamar. Hitung susut pengeringan dan kadar air dengan rumus sebagai berikut :
b. Kadar abu Lebih kurang 2 g sampai 3 g ekstrak yang telah digerus dan ditimbang seksama, dimasukan kedalam krus platina atau krus silikat yang telah dipijarkan dan ditara, lalu ekstrak diratakan. Dipijarkan
perlahan-
lahan hingga arang habis, didinginkan, ditimbang. Jika arang tidak dapat hilang, ditambahkan air panas, disaring dengan menggunakan kertas saring bebas abu. Dipijarkan sisa abu dan kertas saring dalam krus yang sama. Filtrat dimasukkan ke dalam krus, diuapkan, dipijarkan hingga bobot tetap, ditimbang. Kadar abu dihitung terhadap berat ekstrak dan dinyatakan dalam % b/b. Hitung kadar abu dengan rumus sebagai berikut :
32
4.3.6 Persiapan hewan coba (aklimatisasi) Hewan coba yang digunakan adalah mencit putih jantan (Mus musculus) dengan berat badan 20-25 gram dan tikus putih betina (Rat nervicus) dengan berat badan 200-250 gram, diaklimatisasi selama dua minggu agar dapat menyesuaikan dengan lingkungannya. Selama perlakuan, pakan dan minum diberikan secara ad libitum (Harmita, 2004). Hewan uji dipilih sebanyak 25 ekor mencit putih jantan dan 25 ekor tikus putih betina secara acak untuk dibagi menjadi 10 kelompok, masing-masing terdiri dari 5 ekor. Penentuan jumlah mencit tiap kelompok dihitung berdasarkan rumus Federer, yaitu: Rumus Federer untuk uji analgetik dan antiinflamasi : (n-1) (t-1)
> 15
(n-1) (5-1)
> 15
(n-1) (4)
>15
4n – 4
> 15
n
> 4,75 ≈ 5
dimana t menunjukkan jumlah perlakuan dan n menunjukkan jumlah ulangan minimal dari tiap perlakuan. Jumlah minimal mencit yang digunakan tiap kelompok adalah 4,75 ekor atau dibulatkan menjadi 5 ekor. Kelompok perlakuan dibagi secara acak menjadi 5 kelompok seperti yang terdapat pada tabel berikut:
33
Tabel 1. Kelompok perlakuan uji analgetik dan antiinflamasi No
Kelompok
Perlakuan
1
Kontrol negatif
Diberikan NaCMC atau NaCl fisiologis
2
Kontrol positif
Diberikan obat analgetik atau obat antiinflamasi
3
Dosis 1
Diberikan ekstrak kering air gambir dosis I
4
Dosis 2
Diberikan ekstrak kering air gambir dosis II
5
Dosis 3
Diberikan ekstrak kering air gambir dosis III
4.3.7 Penetapan Dosis Untuk uji analgetik Tabel 2. Kelompok dosis untuk uji analgetik Dosis I
35 mg/KgBB ≈ 0,7 mg/20 gBB
Dosis II
70 mg/KgBB ≈ 1,4 mg/20 gBB
Dosis III
140 mg/KgBB ≈ 2,8 mg/20 gBB
Untuk uji antiinflamasi Tabel 3. Kelompok dosis untuk uji antiinflamasi Dosis I
17 mg/KgBB ≈ 3,5 mg/200 gBB
Dosis II
35 mg/KgBB ≈ 7 mg/200 gBB
Dosis III
70 mg/KgBB ≈ 14 mg/200 gBB
34
4.3.8 Persiapan Bahan A. Pembuatan suspensi asam mefenamat Asam mefenamat ditimbang sebanyak 18,2 mg digerus perlahan di dalam
lumpang, tambahkan 0,5 ml suspensi NaCMC 1% sambil
diaduk homogen, kemudian dilarutkan dengan NaCMC 1% sampai 10 ml dalam gelas ukur. B. Pembuatan suspensi natrium diklofenak Natrium diklofenak ditimbang sebanyak 5,15 mg digerus perlahan di dalam
lumpang, tambahkan 0,5 ml suspensi NaCMC 1% sambil
diaduk homogen, , kemudian dilarutkan dengan NaCMC 1% sampai 10 ml dalam gelas ukur. C. Pembuatan karagenan 2% b/v Karagenan ditimbang sebanyak 200 mg, kemudian kemudian dilarutkan dengan NaCl fisiologis sampai 10 ml dalam gelas ukur. Lalu diaduk dan dipanaskan diatas waterbath sampai larut dengan sempurna.
4.3.9 Metode Pengujian 4.3.9.1 Uji Analgetik Pengujian efek analgetik 1. Hewan percobaan dipuasakan makan selama lebih kurang 18 jam, minum tetap diberikan. 2. Setelah ditimbang, hewan dikelompokkan secara acak, yaitu kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol positif,
35
dan kelompok uji. Masing-masing kelompok terdiri dari lima ekor. 3. Untuk kelompok kontrol negatif diberikan NaCMC 1% dengan volume 0,5 ml/20 gBB. 4. Untuk kelompok positif diberikan asam mefenamat secara oral dengan volume 0,4 ml/20 gBB. 5. Pada kelompok uji, masing-masing kelompok diberikan zat uji secara oral dengan volume 0,5 ml/20 gBB pada beberapa dosis. 6. Tiga puluh menit kemudian, disuntikkan secara intra peritoneal (IP) larutan asam asetat 0,5% v/v dengan volume 0,5 ml/20 gBB. Kemudian hewan uji diletakkan dalam kotak pengamatan masing-masing. 7. Diamati dan dicatat jumlah geliatan dalam 5 menit selama 30 menit untuk setiap mencit. Jumlah geliatan untuk tiap kelompok dirata-ratakan. 8. Dihitung persentase proteksi analgetik pada masing-masing kelompok dosis.
4.3.9.2 Uji Antiinflamasi Pengujian efek antiinflamasi 1. Hewan percobaan dipuasakan makan selama lebih kurang 18 jam, minum tetap diberikan.
36
2. Pada hari pengujian, hewan ditimbang dan dikelompokkan secara acak, yaitu kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol
positif,
dan
kelompok
uji.
Masing-masing
kelompok terdiri dari lima ekor. 3. Untuk kelompok kontrol negatif diberikan suspensi NaCl fisiologis dengan volume 2 ml/200 gBB. 4. Untuk kelompok positif diberikan suspensi natrium diklofenak dalam NaCMC 1% secara oral dengan volume 2 ml/200 gBB. 5. Pada kelompok uji, masing-masing kelompok diberikan suspensi zat uji dalam NaCMC 1% secara oral dengan volume pemberian 2 ml/200 gBB pada beberapa dosis. 6. Satu jam setelah pemberiaan obat uji atau larutan kontrol, telapak kaki semua tikus disuntik secara intraplantar dengan karagenan 2% b/v sebanyak 0,4 ml, sebelumnya kaki tikus dibersihkan dengan etanol 70%. 7. Setelah satu jam, volume kaki kiri diukur dengan cara mencelupkannya ke dalam alat plethysmometer untuk setiap selang waktu 1 jam selama 4-5 jam setelah penyuntikkan suspensi karagenan 2% b/v. 8. Semua data yang diperoleh ditabulasi dan hasil setiap kelompok dirata-rata. 9. Dihitung persentase radang dan persentase penghambatan radang.
37
4.3.10 Teknik analisa data 1. Proteksi analgetik (Saha, 2007) Analisis dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui perbedaan pada semua kelompok perlakuan. Data penelitian pada metode sigmund berupa jumlah kumulatif geliat pada masing-masing kelompok perlakuan digunakan untuk menghitung proteksi analgetik dengan rumus sebagai berikut :
Keterangan: P = Jumlah geliat kumulatif kelompok percobaan rata-rata tiap individu K = Jumlah geliat kumulatif kelompok kontrol rata-rata Jumlah kumulatif geliat mencit dan persen proteksi analgetik dari semua kelompok perlakuan, diuji dengan Anova satu jalan untuk mengetahui perbedaan tiap kelompok-kelompok perlakuan dan dilanjutkan dengan uji LSD jika terdapat perbedaan bermakna. 2. Persentasi penghambatan radang Data yang diperoleh dianalisis dengan uji Kolmogorov Smirnovz untuk melihat distribusi data dan dianalisis dengan uji Levene untuk melihat homogenitas data. Jika data terdistribusi normal dan homogen maka dilanjutkan dengan uji Analisis varians (ANAVA) satu arah dengan taraf kepercayaan 95% sehingga dapat diketahui apakah perbedaan yang diperoleh bermakna atau tidak (Santoso, 2008). Jika terdapat perbedaan bermakna, dilanjutkan dengan uji
38
beda nyata terkecil (LSD) dan setiap kelompok tikus dihitung persentasi penghambatan radang rata-rata untuk setiap dosis zat uji dengan rumus (Turner, 1965):
Keterangan: Vt dan Vo adalah volume telapak kaki tikus pada waktu t dan waktu nol
Keterangan: a = volume radang pada kelompok hewan kontrol negatif b = volume radang pada kelompok hewan uji
BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN
5.1 Hasil Penelitian 5.1.1 Penapisan fitokimia Berdasarkan pemeriksaan pada penapisan fitokimia, baik pada serbuk maupun ekstrak air gambir (Uncaria gambir Roxb.) terdapat kandungan alkaloid, flavanoid, saponin, tannin, kuinon. Hasil uji penapisan dapat dilihat pada tabel dibawah ini: Tabel 4. Hasil Pengujian Penapisan Fitokimia Hasil Pengujian Jenis Pengujian Serbuk simplisia
Ekstrak
Alkaloid
+
+
Flavonoid
+
+
Saponin
+
+
Tanin
+
+
Kuinon
+
+
Steroid & Triterpenoid
-
-
Minyak atsiri
-
-
Kumarin
-
-
Keterangan : (+) Memberikan reaksi positif, (-) Memberikan reaksi negatif 39
40
5.1.2 Pengujian parameter ekstrak Hasil uji karakteristik ekstrak dapat dilihat pada tabel dibawah ini: Tabel 5. Karakteristik ekstrak (Berdasarkan MMI ed. V, 1989) Jenis Pengujian
Hasil Pengujian
Persyaratan
Bentuk
Serbuk Kering
--
Rasa
Pahit
Pahit
Warna
Coklat Muda
Coklat muda
Bau
Lemah
Lemah
Susut Pengeringan
0,29 %
Kurang dari 10%
Kadar Abu
0,18 %
Tidak lebih dari 4%
Rendemen
48,16 %
---
5.1.3 Hasil penelitian 5.1.3.1 Analgetik Data rata-rata jumlah geliat mencit dari masing-masing kelompok perlakuan. Tabel 6. Data pengamatan rata-rata jumlah geliat
No.
Kelompok
1
NaCMC 1% 0,5ml/20 gBB Asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB Ekstrak air gambir 0,7 mg/20 gBB
2 3
Rata-rata jumlah geliat mencit pada 5 menit ke… 1 2 3 4 5 6 44 39 38 35 24 16 20.67
16.67
13.67
12.33
10
9
41.33
32.67
23
19.33
13.67
14
41
4 5
Ekstrak air gambir 1,4 mg/20 gBB Ekstrak air gambir 2,8 mg/20 gBB
17
16.33
12.33
7.33
4.67
3.33
32.67
25
23.67
19.33
14.33
9
Dari data diatas ditampilkan dalam bentuk grafik, dapat dilihat pada gambar berikut:
Gambar 1. Data rata-rata jumlah geliat mencit Dari nilai rata-rata jumlah geliat dapat dihitung nilai presentase analgetik, yaitu : Tabel 7. Persentase proteksi analgetik ekstrak air gambir dan asam mefenamat
No. 1 2 D 3 a 4
Kelompok Perlakuan Asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB Ekstrak air gambir 0,7 mg/20 gBB Ekstrak air gambir 1,4 mg/20 gBB Ekstrak air gambir 2,8 mg/20 gBB
Persentase proteksi analgetik 59.84 % 27.54 % 68.04 % 36.14 %
42
Dari data diatas ditampilkan dalam bentuk grafik pada gambar berikut :
Gambar 2. Data persentase proteksi analgetik
5.1.5.2
Antiinflamasi Berikut data persentase radang telapak kaki tikus pada masingmasing kelompok perlakuan. Tabel 8. Data persentase radang telapak kaki tikus
Waktu 1 jam 2 jam 3 jam 4 jam 5 jam
NaCl 2 ml/200 gBB 112.45 135.69 143.09 149.15 135.69
Na diklofenak 1,03 mg/ 200 gBB 30.55 58.89 68.33 86.67 73.89
Ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB 48.77 74.54 84.54 91.21 78.18
Ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB 22.22 45 63.89 76.11 63.89
Ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB 56.67 66.06 81.51 90.9 75.15
43
Data diatas ditampilkan dalam bentuk grafik, dapat dilihat pada gambar berikut:
Gambar 3. Data persentase radang telapak kaki tikus
Kemudian presentase penghambatan radang dapat ditampilkan pada tabel berikut: Tabel 9. Data penghambatan radang telapak kaki tikus
Waktu 1 jam 2 jam 3 jam 4 jam 5 jam
Na diklofenak 1,03 mg/ 200 gBB 70.06
Ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB 52.82
Ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB 79.8
Ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB 47.32
55.81 50.99 41.27 44.14
43.77 38.87 38.04 40.74
65.77 53.48 48.35 51.67
51.47 42.67 39.09 44.24
Dan dari data diatas ditampilkan dalam bentuk grafik, dapat dilihat pada gambar berikut:
44
Gambar 4. Data persentase penghambatan radang telapak kaki tikus
5.2 Pembahasan Tanaman gambir (Uncaria gambir Roxb) memiliki khasiat unuk pengobatan berbagai penyakit. Dari literature diperoleh informasi bahwa tanaman ini digunakan sebagai obat diare, luka bakar dan lain-lain (Haryanto, 2009). Dari hasil penapisan fitokimia ekstrak air gambir mengandung flavanoid, alkaloid, saponin, tannin dan kuinon. Menurut jurnal the key to medicinal plants research revolves around the detection, isolation, and characterisation of antioxidants as therapeutic agent (Misra, 2009) mengatakan bahwa gambir dapat digunakan sebagai analgetik dan antiinflamasi karena gambir mengandung katekin (flavanoid), tannin dan gambiriin yang berfungsi sebagai antioksidan. Antioksidan ini diasumsikan dapat menghilangkan nyeri (analgetik) dan radang (inflamasi) (Lieber dan Leo, 1999).
45
Untuk mengekstraksi kandungan kimia dari tanaman gambir digunakan metode cara panas, yaitu dengan memasak panas daun tanaman gambir yang kemudian dicetak selagi panas menjadi bongkahan gambir. Kemudian dari hasil bongkahan ekstrak kering air gambir ini kita ekstrak kembali dengan freeze drying yang sebelumnya bongkahan gambir dibuat infusa terlebih dahulu. Tujuan dilakukan pengekstrakan dua kali adalah karena ekstrak air yang dilakukan oleh masyarakat tidak sesuai standar dan untuk meminimalisasi kemungkinan adanya variasi kandungan kimia sehingga ditakutkan adanya tambahan zat lain sebagai pengotor dalam gambir tersebut oleh karena itu, perlu dilakukan ekstrak air terstandar yaitu dengan metode freeze drying. Berdasarkan kandungan berkhasiat yang dimiliki oleh gambir seperti tannin, katekin, asam katekutanat yang
kelarutannya lebih baik dalam
senyawa polar dan akan lebih besar kelarutannya apabila menggunakan air panas (Pambayun, 2007). Sehingga, diharapkan dengan metode infusa dapat menarik semua komponen berkhasiat dalam gambir karena proses infundasi sendiri adalah ekstraksi dengan pelarut air selama 15 menit setelah suhu dalam penangas mencapai 95-980C (DepKes 2000). Pada saat proses penyaringan, gambir harus segera disaring dalam keadaan panas agar kandungan dalam gambir tetap larut dan tersaring selain itu karena gambir akan cepat mengeras (membentuk seperti pasta) dalam keadaan dingin sehingga dikhawatirkan komponen berkhasiat gambir tidak ikut terbawa saat
46
proses penyaringan. Kemudian, hasil infusa gambir dikeringkan dengan cara freeze drying. Prinsip kerja freeze drying meliputi pembekuan larutan, menggranulasikan larutan yang beku tersebut, mengkondisikannya pada vacum ultra-high dengan pemanasan yang sedang sehingga mengakibatkan air pada bahan pangan tersebut akan menyublin dan akan menghasilkan produk padat (solid product) (Tambunan, 2000). Efek analgetik ekstrak air gambir dilakukan dengan metode Writhing Test. Metode Writhing Test digunakan untuk pengujian analgetik non narkotik. Metode ini dipilih karena metodenya sederhana, sensitive untuk pengujian analgetik-analgetik lemah. Prinsip metode ini adalah mengamati jumlah geliat pada mencit yang terjadi akibat pemberian induksi asam asetat 0,5% v/v dengan pemberian volume 0,5 ml/20 gBB mencit secara intra peritoneal (IP). Larutan asam asetat ini digunakan sebagai pemicu nyeri yang berupa geliat (cacah perut) pada mencit. Penggunaan asam asetat 0,5% v/v karena asam asetat pada 0,5% v/v dapat memberikan geliat (cacah perut) pada mencit yang tidak terlalu banyak ataupun sedikit sehingga dapat teramati serta dapat dihitung secara kuantitatif dibandingkan penggunaan asam asetat dengan konsentrasi 1% v/v. Penyuntikkan asam asetat 0,5% v/v dilakukan secara intra peritoneal (IP) karena penyuntikkan secara IP absorpsi terjadi secara cepat dan konstan sehingga efek yang dihasilkan lama (Setiawati, 1995) sehingga rasa nyeri yang dirasakan mencit cukup lama. Dengan durasi
47
nyeri yang cukup lama maka geliat mencit dapat teramati dan dihitung selama 30 menit. Pada metode Writhing Test efek analgetik diamati mulai dari waktu 0 menit sampai 30 menit (Cavalho et.al,. 1999) setelah diinduksi dengan asam asetat pada tiap-tiap kelompok perlakuan, dimana kelompok perlakuannya adalah kontrol negatif (NaCMC 1%), kontrol positif (asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB) dan variasi kelompok dosis (0,7 mg/20 gBB, 1,4 mg/20 gBB dan 2,8 mg/20 gBB). Penggunaan asam mefenamat sebagai kontrol positif dikarenakan penggunaan obat ini sebagai analgetik sudah cukup umum dalam masyarakat dan efek samping yang ditimbulkan oleh asam mefenamat khususnya dalam mengiritasi saluran cerna masih terbilang rendah jika dibandingkan dengan aspirin (asam asetil salisilat) (Sukandar, 2008). Penggunaan NaCMC sebagai suspending agent karena NaCMC dapat mensuspensikan ekstrak air gambir. Selain itu keuntungan penggunaan NaCMC karena kelarutan dalam air cukup baik. Pada grafik rata-rata jumlah geliat mencit (gambar 1) terlihat asam asetat 0,5% v/v memberikan efek geliat yang banyak pada 5 menit pertama kemudian rata-rata jumlah geliat menurun sedikit demi sedikit sampai 5 menit keenam di setiap kelompok perlakuan. Hal ini kemungkinan terjadi karena asam asetat mengalami sekresi di dalam tubuh mencit yang dapat terlihat bahwa hewan coba (mencit) mengeluarkan urin selama uji pengamatan. Hasil rata-rata jumlah geliat mencit pada tiap kelompok perlakuan terlihat hubungan
48
antara dosis dengan penurunan rata-rata jumlah geliat mencit. Semakin kecil rata-rata jumlah geliat mencit semakin besar efek analgetik yang ditimbulkan oleh kelompok perlakuan, dimana didapatkan kelompok dosis 1,4 mg/20 gBB (dosis sedang) memberikan nilai rata-rata jumlah geliat mencit yang paling rendah, baik dari 5 menit pertama sampai 5 menit keenam (30 menit). Kemudian diikuti oleh asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB (kontrol positif), dosis 2,8 mg/20 gBB (dosis tinggi), dosis 0,7 mg/20 gBB (dosis rendah). Kemudian dari hasil rata-rata jumlah geliat mencit kita dapat menghitung persentase proteksi analgetik (gambar 2). Dari perhitungan ini, didapat nilai persentase dosis 1,4 mg/20 gBB yang memiliki nilai persentase proteksi analgetik terbesar yaitu sebesar 68,04%, kemudian diikuti oleh asam mefenamat (kontrol positif) 59,84%, kelompok dosis 2,8 mg/20 gBB (dosis tinggi) 36,18%, dan kelompok dosis 0,7 mg/20 gBB (dosis rendah) 27,54%. Hasil-hasil ini menunjukkan hubungan antara rata-rata jumlah geliat mencit benbanding terbalik dengan persentase proteksi analgetik. Artinya semakin rendah nilai rata-rata jumlah geliat mencit maka semakin besar nilai persentase proteksi analgetik sebaliknya makin besar nilai rata-rata jumlah geliat mencit maka semakin besar nilai persentase proteksi analgetik. Pada grafik hubungan antara dosis dengan rata-rata jumlah geliat (gambar 1) terlihat bahwa pada dosis 2,8 mg/20 gBB menurun efek analgetik. Hal ini kemungkinan karena ekstrak gambir dibuat secara suspensi sehingga mungkin gambir tidak terdispersi secara sempurna sehingga konsentrasi
49
gambirpun juga tidak merata. Menurut persentase proteksi analgetik kelompok dosis sedang (1,4 mg/20 gBB) dimana persentasenya mendekati kontrol positif (asam mefenamat), berarti gambir dapat dipertimbangkan sebagai obat analgetik. Pengujian efek antiinflamasi menggunakan metode Rat hind paw oedema atau pembentukan radang buatan pada telapak kaki belakang tikus putih betina. Metode ini dipilih karena edema atau radang merupakan salah satu gejala inflamasi yang dapat digunakan sebagai parameter untuk mengukur potensi antiinflamasi suatu senyawa. Potensi antiinflamasi diukur berdasarkan
kemampuan
senyawa
tersebut
untuk
menghambat
dan
mengurangi terjadinya radang. Selain itu, metode ini sederhana, tidak membutuhkan keahlian serta mudah pelaksanaanya. Pada penelitian ini radang dibuat dengan menginduksi telapak kaki tikus dengan larutan karagenan 2% b/v sebanyak 0,4 ml. Pemilihan hewan uji tikus karena tikus memiliki kaki yang besar dibandingkan mencit dan pada tikus putih betina memiliki hormon estrogen yang dapat memperbesar radang di telapak kakinya dibandingkan dengan jantan. Dimana berdasarkan jurnal sex steroid regulation of the inflammatory response, menyatakan bahwa pada tikus betina terdapat steroid sex (estrogen) yang dapat meningkatkan inflamasi melalui mediator kimia (bradikinin) (Green et al., 1999) dibandingkan dengan tikus jantan sehingga pada saat pengukuran radang dapat terbaca di plethysmometer. Karagenan dipilih karena dapat menimbulkan radang pada
50
waktu relatif singkat dan radang yang terbentuk berkembang lambat dan dapat kembali normal dalam 1-2 hari. Pembentukan radang oleh karagenan dapat diamati dengan jelas dan tidak menyebabkan kerusakan permanen pada jaringan disekitar inflamasi. Pemilihan penggunaan karagenan sebesar 2% b/v dikarenakan radang yang terbentuk oleh karagenan 1% terlalu kecil sehingga pengukuran menjadi kurang jelas dan dikhawatirkan terjadinya kesalahan dalam pembacaan besar radang. Alat yang digunakan untuk mengukur volume radang pada kaki tikus adalah plethysmometer air raksa. Pada saat pengukuran, hal-hal yang harus diperhatikan adalah volume air raksa harus sama pada setiap kali pengukuran, tanda pada pergelangan kaki tikus harus jelas dan dipastikan pada saat mencelup kaki tikus harus tercelup sempurna sampai tanda batas yang telah ditentukan. Hal ini bertujuan agar mendapatkan data pengukuran yang selalu konstan pada tiap waktu dan dalam kondisi yang sama. Bahan pembanding yang digunakan adalah natrium diklofenak. Pemilihan natrium diklofenak sebagai bahan pembanding karena natrium diklofenak memiliki daya absorbsi yang cepat, dilihat dari waktu paruh natrium diklofenak 0,5-1 jam dalam tubuh (Sukandar, 2008). Selain itu, penggunaan natrium diklofenak sebagai antiinflamasi dalam masyarakat sudah cukup umum. Volume radang rata-rata telapak kaki tikus maksimal dicapai pada jam ke 4 setelah pemberian larutan karagenan 2% b/v. Demikian juga persentase
51
radang rata-rata hewan coba maksimal dicapai pada jam ke-4 (Gambar 3). Pada jam ke-5 persentase radang sudah mulai menurun, hal ini mungkin disebabkan karena absorbsi karagenan cepat dalam tubuh sehingga efek radang sudah mulai menurun. Dari hasil penelitian menunjukkan bahwa pada dosis sedang ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB mampu menghambat proses radang, kemudian diikuti oleh kontrol positif (natrium diklofenak 3,04 mg/200 gBB), dosis tinggi (14 mg/200 gBB) dan dosis rendah (3,5 mg/200 gBB). Hasil penelitian pada beberapa tanaman, diketahui flavonoid mempunyai aktivitas antiinflamasi karena dapat menghambat beberapa enzim seperti lipooxygenase dan cyclooxygenase (Esvandiary, 2002). Melalui jalur enzim cyclooxygenase dan lipooxygenase dari metabolisme asam arakidonat ini yang memfasilitasi terbentuknya mediator proses inflamasi (Katzung, 2002). Flavonoid dalam bentuk aglikon bersifat non-polar dan dalam bentuk glikosidanya bersifat polar. Untuk melakukan penyarian flavonoid dapat dilakukan dengan pelarut air (Harborne, 1987). Aktivitas gambir sebagai penghambat analgetik dan antiinflamasi diasumsikan berhubungan dengan ketersedian kandungan katekin, tannin dan gambiriin dalam gambir, dimana kandungan katekin mencapai 51% katekin, tannin dan gambiriin memiliki aktivitas sebagai antioksidan alami (Misra, 2009). Katekin, tannin dan gambiriin mampu menghambat oksidasi asam arakhidonat menjadi endoperoksida dan menurunkan aktivitas enzim
52
lipoksigenase. Apabila oksidasi asam arakhidonat dapat dihambat maka tidak terbentuk oksigen reaktif dan mediator-mediator kimia yang dapat menyebabkan nyeri dan radang. Penurunan aktivitas enzim lipooxygenase menyebabkan tidak terbentuknya leukotrien yang dapat mengaktivasi leukosit yang memacu terjadinya peradangan serta enzim cyclooxygenase menurun mengakibatkan prostaglandin tidak terbentuk (Lieber dan Leo, 1999). Adanya hambatan pada oksidasi asam arakhidonat dan penetralan oksigen reaktif menyebabkan gambir berefek analgetik dan antiinflamasi. Hasil uji dilanjutkan dengan pengolahan data melalui statistik, sehingga didapat uji distribusi normal dan uji distribusi homogen. Pada uji analgetik didapatkan signifikansi normal (ρ = 0,883) dan uji homogenitas (ρ = 0,102) hal ini menunjukkan bahwa data terdistribusi normal dan homogen (ρ ≥ 0,05) (lampiran 17). Analisa dilanjutkan dengan metode analisa varian satu arah (ANAVA) untuk mengetahui apakah ada perbedaan yang bermakna atau tidak pada setiap kelompok perlakuan. Hasil analisa diperoleh nilai ρ = 0,00 (ρ ≤ 0,05), maka Ho ditolak atau data memiliki perbedaan secara bermakna, dimana kontrol negatif berbeda secara bermakna dengan kontrol positif (asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB), kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 2,8 mg/20 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 1,4 mg/20 gBB) dan dosis 3 (ekstrak air gambir 2,8 mg/20 gBB). Tetapi jika dibandingkan antara kontrol positif (asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB) dengan kelompok dosis 2 (ekstrak air gambir 2,8 mg/20 gBB) tidak terdapat perbedaan secara bermakna, artinya efek yang
53
ditimbulkan oleh kontrol positif (asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB) dalam memberikan proteksi analgetik sama dengan dosis 2 (ekstrak air gambir 1,4 mg/20 gBB). Pada uji antiinflamasi dilanjutkan dengan pengolahan data melalui statistik untuk mendapatkan nilai distribusi normal dan uji distribusi homogen (lampiran 18). Pada uji antiinflamasi didapatkan signifikansi normal (ρ ≥ 0,05) dan uji homogenitas (ρ ≥ 0,05) hal ini menunjukkan bahwa data terdistribusi normal dan data homogen kecuali pada jam 1 data tidak homogen karena ρ = 0,039 (ρ ≤ 0,05). Oleh karena itu data pada jam 1 dilanjutkan dengan metode Kruskal Wallis untuk mengetahui apakah ada perbedaan yang bermakna atau tidak pada setiap kelompok perlakuan. Hasil analisa diperoleh nilai ρ = 0,028 (ρ ≤ 0,05), maka Ho ditolak atau data memiliki perbedaan secara bermakna. Pada hasil BNT antiinflamsi didapatkan bahwa baik pada jam 1 sampai jam 5 kontrol negatif (NaCl 0,9% 2 ml/200 gBB) memiliki perbedaan secara bermakna dengan kontrol positif (Na diklofenak 3,04 mg/200 gBB), kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB) dan dosis 3 (ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB). Sedangkan kontrol positif (Na diklofenak 3,04 mg/200 gBB) tidak berbeda secara bermakna dengan kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB) dan dosis 3 (ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB). Hasil ini menunjukkan bahwa efek kontrol positif (Na diklofenak 3,04 mg/200 gBB) dalam menghambat radang pada
54
telapak kaki tikus sama dengan dosis 1 (ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB) dan dosis 3 (ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB).
BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN
6.1 Kesimpulan Dari penelitian yang telah dilakukan dapat di ambil beberapa kesimpulan, yaitu: 1. Didapatkan dosis ekstrak kering air gambir yang berefek analgetik adalah 1,4 mg/20 gBB dengan menggunakan metode Writhing test (geliat) pada mencit putih jantan. 2. Dosis ekstrak kering air gambir yang berefek sebagai antiinflamasi adalah 3,5 mg/200 gBB, 7 mg/200 gBB, 14 mg/200 gBB dengan menggunakan metode Rat hind paw (pembentukan radang) pada tikus putih betina. 3. Pada uji ANOVA ekstrak kering air gambir yang sebagai analgetik dengan variasi dosis 0,7 mg/20 gBB, 1,4 mg/20 gBB dan 2,8 mg/20 gBB terdapat perbedaan secara bermakna terhadap kontrol negatif (p ≤ 0,05). Tetapi semua variasi dosis ini tidak memiliki perbedaan secara bermakna (p ≥ 0,05) terhadap kontrol positif (asam mefenamat) dengan dosis 1,82 mg/20 gBB. 4. Pada uji ANOVA dan Kruskal Wallis ekstrak kering air gambir sebagai antiinflamasi dengan variasi dosis 3,5 mg/200 gBB, 7 mg/200 gBB dan 14 mg/200 gBB terdapat perbedaan secara bermakna terhadap kontrol negatif (p ≤ 0,05). Tetapi semua variasi dosis ini tidak memiliki perbedaan secara bermakna (p ≥ 0,05) terhadap kontrol positif (natrium diklofenak) dengan dosis 3,04 mg/200 gBB.
55
56
6.2 Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut pada ekstrak gambir yang berkhasiat sebagai analgetik dan antiinflamasi dengan pelarut yang berbeda untuk mengetahui pengaruh perbedaan pelarut dalam menghambat nyeri dan radang.
DAFTAR PUSTAKA
Almahdy, A. 2000. Skrining Hipokratik LD50, serta Efek Teratogenitas Uncaria gambir Roxb. Padang. Jurusan FMIPA Universitas Andalas. Dalam: Jurnal Sains dan Teknologi Famasi vol 6(2). Hal: 47-59 Anggraini, Wenni. 2008. Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Jambu (Psidum guajava Linn.) Pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar. Surakarta.: Universitas Muhammadiyah Surakarta. Anonym. 1995. Penapisan Farmakologi, pengujian Fitokimia dan Pengujian Klinik Pengembangan dan Pemanfaatan Obat Bahan Alam. Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI. 2007. Acuan Sediaan Herbal vol 3 Ed I. Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia. Jakarta Bowman, WC. Textbook of pharmacology 2nd ad. 1980. London : .Blackweell Scientific Publication. Oxford. Hal 1315,1317. Brown, Dr. O. Phelps.2009. The Complete Herbalist. http://chestofbooks.com/health/herbs/O-Phelps-Brown/The-CompleteHerbalist/Gambir-Plant-Uncaria-Gambir.html Diakses pada tanggal 29 Maret 2010 pukul 01.35 WIB Carvalho, J.C.T., L.S. Santus, E.P. Vianna. 1999. Anti-Inflammatory and Analgesic Activities of The Crude Extracts From Stem Bark of Bauhinia Guianensis. Journal Pharmaceutical Biology. Vol 37, no. 4, pp 281-284. Departemen Kesehatan RI. 1989. Material Medika Jilid V. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. hal: 137 Departemen Kesehatan RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta.: Direktorat Jendral POM. hal :7-8; 10-11; 13-17 Esvandiary, Jeanne. Maria Firmina. Yosef Wijoyo. 2001. Efek Analgetik dan Efek Antiinflamasi Beta Karoten Pada Mencit. Yogyakarta.: Fakultas Farmasi Universitas Santa Dharma Yogyakarta. Fansworth, N. R. 1969. Biological and Phytochemical Screening of Plants. Journal Pharmaceutical Science. hal 255-265 Green,Paul G., Solbritt Rantapa, Dahlqvist, William M. Isenberg, Holly J. Strausbaugh, Frederick J.-P. Miao, and Jon D. Levine. 1999. Sex Steroid
57
58
Regulation of the Inflammatory Response: Sympathoadrenal Dependence in the Female Rat. Journal of Neuroscience: 19(10):4082–4089 Haryanto, Sugeng. 2009. Ensiklopedi Tanaman Obat Indonesia. Yogyakarta. Pallmal: 183-184 Henderson, Velyien Ewart.2009. A Text-Book Of Materia Medica And Pharmacy For Medical Students. http://chestofbooks.com/health/materia-medicadrugs/Text-Book-Materia-Medica-Pharmacy-Medical-Students/CatechuCatechu.html Diakses pada tanggal 29 Maret 2010 pukul 02.07 WIB Harmita., Radji, M. 2004. Buku Ajar analisis Hayati. Depok: Departemen Farmasi FMIPA UI. Ganiswara, Sutistia G (editor). 1995. Farmakologi Dan Terapi edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Gunawan, Didik. 2004. Ilmu Obat Alam Farmakognosi Jilid I. Jakarta.: Penebar Swadaya. hal:9. Hamid, Hinna, S.Tarique Abdullah, Asif Ali. 2004. Anti-Inflammatory and Analgesic Activity of Uraria Logopoides. Journal Pharmaceutical Biology. Vol 42, no. 2, pp 114-116. Harborne, JB. 1996. Metode Fitokimia Penuntun Cara modern Menganalisis Tumbuhan. Bandung ITB .Terjemahan: Kosasih P, Soediro Iwang. Harmita., Radji, M. 2005. Buku Ajar analisis Hayati. Depok: Departemen Farmasi FMIPA UI: 47-88 Haryanto, Sugeng. 2009. Ensiklopedi Tanaman Obat Indonesia. Yogyakarta. Pallmal: 183-184 Katzung.G.Bertram 2001. Farmakologi Dasar dan Klinik Edisi VIII Bagian ke II. Jakarta : Salemba Medika. Kress H. 2009. Gambir (Uncaria gambir). http://www.henriettesherbal.com/plants/uncaria/gambir.html. Diakses pada tanggal 4 Maret 2010 pukul 19.25 WIB Lieber, C.S., and Leo, M.A., 1999. Alcohol, Vitamin A and β Carotene: Adverse Interactions, Including Hepatotoxicity and Carcinogenicity. Am. J. Clin. Nut. 69 (6), 1071-1085.
59
Lucida, Henny, Amri Bakhtiar, Wina Astari. 2007. Formulasi Sediaan Antiseptik Mulut dari Katekin Gambir.. Dalam: Jurnal Sains dan Teknologi Famasi vol 12(1). Padang. Misra, Meena. 2009. The key to medicinal plants research revolves around the detection, isolation, and characterisation of antioxidants as therapeutic agents. Journal of Medicinal Plants Research Vol. 3(10). Mutschler, E. 1991. Dinamika Obat; Buku Ajar Farmakologi dan Toksikologi. Edisi ke lima, diterjemahkan oleh Widianto, M. B. Dan A. S. Ranti. Bandung : Penerbit ITB. Pp 177-195. Pambayun, Rindit.. 2007. Kandungan fenol dan sifat antibakteri dari berbagai jenis ekstrak produk gambir (Uncaria gambir Roxb). Majalah Farmasia Indonesia 18(3): 141 – 146 Puguh. 2009. Gambir Dapat Mencegah Gangguan Perut dan Kanker. http://puguh.com/2009/09/09/gambir-dapat-mencegah-gangguan-perut-dankanker/">. Diakses tanggal 28 Febuari 2010 pukul 21.54 WIB Putri, Eka. 2001. Uji Efek Analgetik, Antipiretik dan Anti Inflamasi Ekstrak Metanol Batang Brotowali (Tinospora crispa (L) Miers ex Hook. F. & Thems). Padang: Skripsi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam UNAND. Reagan-Shaw S,. Nihal M and Ahmad N. 2008. Dose translation from animal to human studies revisited. The FASEB Journal 2007, 22:659-661. http://www.fasebj.org. Diakses tanggal 4 Maret 2010 pukul 19.25 WIB Ridwansyah. 2003. Pengolahan Kopi. http://repository.usu.ac.id/bitstream/123456789/776/1/tekperridwansyah4.pdf. Diakses pada tanggal 17 Juli 2010 pukul 22.29 WIB Saha, Achinta, Mohammad A. Masud, Sitesh C. Bahtiar. 2007. The Analgesic and Anti-inflammatory Activities of The Extracts of Phyllantus reticulatus. Journal Pharmaceutical Biology.Vol 45 no.5, pp 355-359. Santoso, S. Panduan Lengkap Menguasai SPSS 16. PT. Jakarta: Elex Media Komputindo Kelompok Gramedia. 2008: 237-247. Setiawati, Arini, Zunilda S.B., F.D. Suyatna. 1995. Farmakologi dan Terapi edisi V. Jakarta: Bagian Farmakologi. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Siswandono, M. S. 1995, Kimia Medisinal. 301-302. Surabaya: Airlangga Press. Wade,Ainley (editor). 1992. Handbook of Pharmaceutical Excipients section II.78-79. London : The Pharmaceutical Press.
60
Suhendi, Andi, Kuswandi, Agung Endro Nugroho. 2003. Efek Analgetik Infusa Daun Dewa (Gynura procumbens (Lour) Merr.) Pada Mencit Putih Jantan Galur DDY. Pharmaceutical Journal of Indonesia. Vol. 4, no. 2. Tambunan, Armansyah., Solahudin. 2000. Simulasi Karakteristik Pengeringan Beku Daging Sapi Giling. Bulletin Keteknikan Pertanian Vol 14: 1. Sukandar, Ellin Yulinah, Retnosari, Joseph I Sigit, I Ketut Adnyana. 2008. Iso Farmakoterapi. Jakarta: PT. ISFI Penerbitan. Tjay, Tan Hoan, Kirana Rahardja. 2002. Obat-obat Penting. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo. Turner, R.A. 1965. Screening Methods in Pharmacology. New York: Academic Press. Wilmana, P.F. 1995. Farmakologi dan Terapi edisi V. Jakarta: Bagian Farmakologi. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
62
Lampiran 1. Gambar Alat dan Bahan Penelitian
Gambar 5: Bongkahan Gambir
Gambar
6:
Hasil
Freeze
Gambar 8: Hewan uji Tikus SD
Drying
Gambir
Gambar 9: Plethysmometer
Gambar 7: Hewan uji Mencit DDY
62
Lampiran 2. Kegiatan Penelitian
Gambar 10: Freeze Drying Gambir
Gambar 13 :mencit meregangkan perutnya (writhing)
Gambar 11: Penyondean Zat Uji
Gambar 14 : Penyuntikkan karagenan sec subplantar
Gambar 12: Penyuntikkan asam asetat secara IP
62
Gambar 15: Radang pada telapak
gambir (urea)
kaki tikus
Ga mbar
16:
radang tikus
Pengukuran
Gambar 17: Identifikasi cemaran
volume
62
68
Lampiran 7. Skema kerja (Pembuatan Ekstrak)
Gambir (sampel)
Determinasi gambir
1. Uji penapisan fitokimia 2. Uji cemaran urea
Serbuk
Dibuat infusa
Ekstrak air Gambir
Freeze drying
Ekstrak uji 100,200,400 mg./KgBB
Uji efek analgetik
Ekstrak uji 50,100,200 mg./KgBB
Uji efek antiinflamasi
Ekstrak kering gambir
69
Lampiran 8. Skema kerja uji analgetik
Persiapan Hewan Uji 25 ekor mencit
Perlakuan tiap Kelompok
Kontrol Negatif
Kontrol Positif
Kelompok Dosis Rendah
Kelompok Dosis Sedang
30’
Setiap ekor disuntikkan asam asetat 0,5% secara IP 5’
Pengukuran jumlah geliat selama 30’ dengan interval waktu 5’
Analisa data
Kelompok Dosis Tinggi
70
Lampiran 9. Skema kerja uji antiinflamasi Persiapan Hewan Uji 25 ekor mencit
Timbang Berat Badan Ukur Volume Telapak Kaki Kiri Belakang Tikus
Perlakuan tiap Kelompok
Kontrol Negatif
Kontrol Positif
Kelompok Dosis Rendah
Kelompok Dosis Sedang
1 jam
Masing-masing diinjeksikan suspensi karagenan 2% 1 jam
Ukur Volume Telapak Kaki Kiri Belakang Tikus selama 4 jam interval waktu 15’
Analisa data
Kelompok Dosis Tinggi
71
Lampiran 10. Rumus perhitungan dosis hewan dan tabel konversi dosis hewan ke HED berdasarkan BSA (Reagan-Shaw dkk, 2008)
Tabel 10. Konversi Dosis Hewan ke HED Berdasarkan BSA Weight (kg)
BSA (m2)
Km factor
Adult
60
1.6
37
Chile
20
0.8
25
Baboon
12
0.6
20
Dog
10
0.5
20
Monkey
3
0.24
12
Rabbit
1.8
0.15
12
Guinea pig
0.4
0.05
8
Rat
0.15
0.025
6
Hamster
0.08
0.02
5
Mouse
0.02
0.007
3
Species Human
72
Lampiran 11. Perhitungan Dosis Untuk Hewan Uji Dosis gambir diperoleh berdasarkan kebiasaan penggunaan gambir di masyarakat yaitu sekitar 250 mg-1250 mg perhari. Jika dirata-ratakan penggunaan gambir adalah sekitar 350 mg perhari. Kemudian dari hasil rendemen ekstrak air gambir diperoleh sekitar 48%. Perhitungan dosis untuk uji analgetik pada mencit putih jantan a. Dosis 1. Ekstrak air gambir 35 mg/KgBB 0,7 mg/20 gBB 350 mg x 48%
= 168 mg
HED
=
168mg 60
=
Dosis hewan
= 34,5 mg/Kg 35 mg/ KgBB 0,7 mg/20 gBB
=
= 1,4 mg/ml
VAO
=
VAO
= 0,5 ml
0,7 mg/
0,7 mg/
20 gBB x 20 gBB 0 , 5 ml
20 gBB x 20 gBB 1 , 4 mg / ml
b. Dosis 2. Ekstrak air gambir 69 mg/KgBB 1,4 mg/20 gBB 700 mg x 48%
= 336 mg
73
HED
=
336 60
=
Dosis hewan
= 69 mg/Kg 1,38 mg/20 gBB 1,4 mg/20 gBB
=
= 2,8 mg/ml
VAO
=
VAO
= 0,5 ml
1,4 mg/
1,4 mg/
20 gBB x 20 gBB 0 , 5 ml
20 gBB x 20 gBB 2 , 8 mg / ml
c. Dosis 3. Ekstrak air gambir 138 mg/ KgBB 2,8 mg/20 gBB 1400 mg x 48%= 672 mg HED
=
672 60
=
Dosis hewan
= 138 mg/Kg 2,8 mg/20 gBB
=
= 5,6 mg/ml
2,8 mg/
20 gBB x 20 gBB 0 , 5 ml
74
2,8 mg/
VAO
=
VAO
= 0,5 ml
20 gBB x 20 gBB 5 , 6 mg / ml
Jadi dosis yang digunakan untuk uji analgetik adalah : 1) Dosis 1 (rendah) = 0,7 mg/20 gBB 2) Dosis 2 (sedang) = 1,4 mg/20 gBB 3) Dosis 3 (tinggi) = 2,8 mg/20 gBB
Perhitungan dosis untuk asam mafenamat 0,05% (Andi Suhedi, Kuswandi dan Agung Endro Nugroho. 2003) Dosis lazim asam mefenamat untuk manusia adalah 500 mg untuk sekali pakai. Untuk dosis analgetik adalah 91 mg/kgBB mencit sekali pakai maka dosis yang dapat diberikan pada mencit (20 gr) adalah:
VAO
= 0,364 ml
VAOtota
l
75
Jumlah Asam mefenamat
Perhitungan dosis untuk uji antiinflamasi pada tikus putih betina a. Dosis 1. Ekstrak air gambir 17,2 mg/KgBB 3,5 mg/200 gBB 350 mg x 48%
= 168 mg
HED
=
168 60
= ?x
Dosis hewan
= 17,2 mg/Kg 3,5 mg/200 gBB
=
= 1,75 mg/ml
VAO
=
VAO
= 2 ml
6 37
3,5 mg/
3,5 mg/
200 gBB 2 ml
x 200 gBB
200 gBB x 200 gBB 1 , 75 mg / ml
b. Dosis 2. Ekstrak air gambir 34,4 mg/KgBB 7 mg/200 gBB 700 mg x 48%
= 336 mg
HED
=
76
336 60
= ?x
Dosis hewan
=34,4 mg/Kg 7 mg/200gBB
=
= 3,5 mg/ml
VAO
=
VAO
= 2 ml
6 37
7 mg/
7 mg/
200 gBB x 200 gBB 2 ml
200 gBB x 200 gBB 3 , 5 mg / ml
c. Dosis 3. Ekstrak air gambir 68,8 mg/ KgBB 14 mg/200 gBB 1400 mg x 48%
= 672 mg
HED
=
672 60
= ?x
6 37
Dosis hewan= 68,8 mg/Kg 14 mg/200 gBB
14 mg/
=
= 7 mg/ml
200 gBB 2 ml
x 200 gBB
77
14 mg/
VAO
=
VAO
= 2 ml
200 gBB x 200 gBB 7 mg / ml
Jadi dosis yang digunakan untuk uji antiinflamasi adalah : 1) Dosis 1 (rendah) = 3,5 mg/200 gBB 2) Dosis 2 (sedang) = 7 mg/ 200 gBB 3) Dosis 3 (tinggi)
= 14 mg/200 gBB
Perhitungan dosis natrium diklofenak ( Tjay dan Rahardja, 2007) Dosis lazim diklofenak untuk manusia adalah 25 – 50 mg garam Na/K untuk sekali pakai. Untuk dosis anti inflamasi adalah 25 - 50 mg sekali pakai maka dosis yang dapat diberikan pada tikus (200 gr) adalah: HED (mg/kg)
VAO
78
[ ]
=
VAOtotal
Jumlah Diklofenak
79
Lampiran 12. Pemeriksaan Parameter Ekstrak A. Perhitungan Perolehan Kembali Ekstrak yang didapat
B. Pemeriksaan Susut Pengeringan Berat cawan kosong (A) = 19,0017 Berat cawan + sampel sebelum di oven (B )= 20,015 Berat cawan + sampel setelah di oven (C) = 19,9563 % Susut Pengeringan
= =
C. Pemeriksaan Kadar Abu Berat cawan kosong (A) = 25,3726 Berat cawan + sampel sebelum di tanur (B) = 27,3829 Berat cawan + sampel setelah di tanur (C) = 25,3764 % Kadar Abu
= =
80
Lampiran 13. Data Pengamatan Geliat Mencit Selama Pengukuran Pada Uji Efek Analgetik Tabel 11. Data Pengamatan Geliat Mencit Pada Uji Efek Analgetik Kel 1
Perlakuan Kontrol negatif (Asam asetat 0,5%)
Dosis
N
0,5 ml/20 gBB
1 2 3
1,82 mg/20 gBB
5’ 47 40 45 44 3,61
Jumlah geliat menit ke 10’ 15’ 20’ 25’ 42 42 41 21 38 37 29 22 37 35 35 29 39 38 35 24 2,65 3,61 6 4,36
30’ 19 14 15 14,67 2,64
1 2 3
30 12 20 20,67 9,02
24 11 15 16,67 6,66
17 10 14 13,67 3,51
16 9 12 12,33 3,51
15 7 8 10 4,36
14 6 7 9 4,36
0,7 mg/20 gBB
1 2 3
42 37 45 41,33 4,04
28 30 40 32.67 6,42
16 22 31 23 7,54
16 19 23 19,33 3,51
15 11 15 13,67 2,3
13 10 10 14 1,73
1,4 mg/20 gBB
1 2 3
18 14 19 17 2,64
17 14 18 16,33 2,08
14 10 13 12,33 2,08
7 6 9 7,33 1,52
4 3 7 4,67 2,08
2 3 5 3,33 1,52
2,8 mg/20 gBB
1 2 3
32 26 40 32,67 7,02
27 26 22 25 2,64
27 22 22 23,67 2,88
26 19 13 19,33 6,5
17 15 11 14,33 3,05
10 9 8 9 4,35
Rata-rata SD 2
Kontrol Positif (As. Mefenamat) Rata-rata SD
3
Ekstrak Air Gambir Rata-rata SD
4
Ekstrak Air Gambir Rata-rata SD
5
Ekstrak Air Gambir Rata-rata SD
81
Lampiran 14. Data Persentase Proteksi Analgetik Tabel 12. Data Persentase Proteksi Analgetik
No 1
Kelompok Perlakuan NaCMC 1% 0,5 ml/20 gBB
N 1 2 3
Rata-rata kumulatif 38.6 33.2 36.2
% proteksi analgetik 0 0 0 0
1 2 3
20.4 9.8 13.8
47.15 70.48 61.88
Rata-rata 2
Asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB
Rata-rata 3
Ekstrak air gambir 0,7 mg/20 gBB
59.84 1 2 3
23.4 23.8 30.8
Rata-rata 4
Ekstrak air gambir 1,4 mg/20 gBB
27.54 1 2 3
12 9.4 13.2
1 2 3
25.8 21.6 21.6
Rata-rata 5
Ekstrak air gambir 2,8 mg/20 gBB
Rata-rata
39.38 28.31 14.92
68.91 71.69 63.53 68.04 33.16 34.94 40.33 36.14
82
Contoh perhitungan: Pada kelompok Asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB:
83
Lampiran 15. Hasil Pengamatan Radang Pada Uji Antiinflamasi Tabel 13. Hasil Pengamatan Radang Pada Uji Antiinflamasi Volume radang (ml) selama 4 jam pengamatan 0 1 2 3 4 5 0,18 0,40 0,44 0,46 0,46 0,44 0,18 0,42 0,44 0,46 0,46 0,44 0,22 0,40 0,48 0,48 0,52 0,48 0,19 0,41 0,45 0,47 0,48 0,45 0,02 0,01 0,02 0,01 0,03 0,02
Kel
Perlakuan
Dosis
N
1
Kontrol negative (NaCl 0,9%)
2 ml/200 gBB
1 2 3
1,03mg/200grBB
1 2 3
0,20 0,20 0,24 0,21 0,02
0,24 0,26 0,34 0,28 0,05
0,30 0,32 0,40 0,35 0,05
0,32 0,34 0,42 0,36 0,05
0,36 0,36 0,48 0,40 0,06
0,34 0,32 0,46 0,37 0,07
3,5 mg/200 gBB
1 2 3
0,20 0,22 0,20 0,21 0,01
0,30 0,30 0,32 0,31 0,02
0,34 0,36 0,38 0,36 0,02
0,38 0,36 0,40 0,38 0,02
0,40 0,36 0,42 0,39 0,03
0,36 0,34 0,40 0,37 0,03
7 mg/200 gBB
1 2 3
0,24 0,20 0,20 0,21 0,02
0,28 0,26 0,24 0,26 0,02
0,30 0,30 0,32 0,31 0,01
0,34 0,34 0,36 0,35 0,01
0,38 0,36 0,38 0,37 0,01
0,34 0,34 0,36 0,35 0,01
14 mg/200 gBB
1 2 3
0,20 0,22 0,22 0,21 0,01
0,34 0,32 0,34 0,36 0,01
0,36 0,36 0,34 0,38 0,01
0,38 0,40 0,38 0,40 0,01
0,40 0,42 0,40 0,42 0,01
0,36 0,38 0,38 0,38 0,01
Rata-rata SD 2
Kontrol Positif (Na diklofenak) Rata-rata SD
3
Dosis 1 (rendah) Rata-rata SD
4
Dosis 2 (sedang) Rata-rata SD
5
Dosis 3 (tinggi) Rata-rata SD
84
Lampiran 16. Hasil Persentase Radang Telapak Kaki Tikus Tabel 14. Hasil Persentase Radang Telapak Kaki Tikus Kel
Perlakuan
Dosis
N
1
Kontrol negative (NaCl 0,9%)
2 ml/200 gBB
1 2 3
1,03 mg/200grBB
0 0 0 0 0 0
Waktu pengamatan (jam) 1 2 3 4 122,22 144,44 155,55 155,55 133,33 144,44 155,55 155,55 81,81 118,18 118,18 136,36 112,45 135,69 143,09 149,15 27,11 15,16 21,57 11,08
5 144,44 144,44 118,18 135,69 15,16
1 2 3
0 0 0 0 0
20 30 41,67 30,55 10,85
50 60 66,67 58,89 8,39
60 70 75 68,33 7,64
80 80 100 86,67 11,55
70 60 91,67 73,89 19,51
3,5 mg/200 gBB
1 2 3
0 0 0 0 0
50 36,36 60 48,78 11,87
70 63,63 90 74,54 13,76
90 63,63 100 84,54 18,78
100 63,63 110 91,21 24,40
80 54,54 100 78,18 22,78
7 mg/200 gBB
1 2 3
0 0 0 0 0
16,67 30 20 22,22 6,93
25 50 60 45 18,03
41,62 70 80 63,87 19,91
58,33 80 90 76,11 16,18
41,67 70 80 63,89 19,88
14 mg/200 gBB
1 2 3
0 0 0 0 0
70 45,45 54,54 56,66 12,41
80 63,63 54,54 66,06 12,90
90 81,81 72,72 81,51 8,64
100 90,9 81,81 90,9 9,09
80 72,72 72,72 75,15 4,20
Rata-rata SD 2
Kontrol Positif (Na diklofenak) Rata-rata SD
3
Dosis 1 (rendah) Rata-rata SD
4
Dosis 2 (sedang) Rata-rata SD
5
Dosis 3 (tinggi) Rata-rata SD
85
Contoh perhitungan : Pada Na diklofenak 1,03 mg/200 gBB :
86
Lampiran 17. Hasil Persentase Penghambatan Radang Telapak Kaki Tikus Tabel 15. Hasil Persentase Penghambatan Radang Telapak Kaki Tikus Kel
Perlakuan
1 Kontrol negative (NaCl 0,9%)
Dosis
N 0 0 0 0 0 0
Waktu pengamatan (jam) 1 2 3 4 122,22 144,44 155,55 155,55 133,33 144,44 155,55 155,55 81,81 118,18 118,18 136,36 112,45 135,69 143,09 149,15 27,11 15,16 21,57 11,08
2 ml/200 gBB
1 2 3
5 144,44 144,44 118,18 135,69 15,16
1,03 mg/200grBB
1 2 3
0 0 0 0 0
83,63 77,49 49 70,04 18,47
65,38 58,46 43,58 55,81 11,14
61,43 54,99 36,54 50,99 12,92
48,57 48,57 26,67 41,27 12,64
51,54 58,46 22,43 44,14 19,12
3,5 mg/200 gBB
1 2 3
0 0 0 0 0
59,09 72,72 26,66 52,82 23,66
51,54 55,95 23,84 43,77 17,41
42,14 59,09 15,38 38,87 18,12
35,71 59,09 19,33 38,04 18,88
44,61 62,24 15,38 40,74 19,66
7 mg/200 gBB
1 2 3
0 0 0 0 0
86,36 77,49 75,55 79,8 5,76
82,69 65,38 49,22 65,76 16,73
73,24 54,99 32,20 53,48 20,56
62,50 48,57 33,99 48,35 14,26
71,15 51,54 32,31 51,67 19,42
14 mg/200 gBB
1 2 3
0 0 0 0 0
42,73 65,91 33,33 47,32 16,77
44,61 55,94 53,85 51,47 6,03
42,14 47,40 38,47 42,67 4,49
35,71 41,56 40 39,09 3,03
44,61 49,65 38,47 44,24 5,59
Rata-rata SD 2
Kontrol Positif (Na diklofenak) Rata-rata SD
3
Dosis 1 (rendah) Rata-rata SD
4
Dosis 2 (sedang) Rata-rata SD
5
Dosis 3 (tinggi) Rata-rata SD
87
Contoh perhitungan : Pada Na diklofenak 1,03 mg/200 gBB :
88
Lampiran 18. Hasil Statistik Uji Efek Analgetik 1. Uji Normalitas Kolmogorof-Smirnov dan Uji Homogenitas Levene Terhadap Geliat Menciat Tiap 5 Menit Pada Tiap Kelompok Perlakuan a. Uji Normalitas Kolmogorof-Smirnov Tujuan : untuk mengetahui kenormalan data sebagai syarat uji ANOVA Hipotesis Ho : Data geliat mencit yang terdistribusi normal Ha : Data geliat mencit yang tidak terdistribusi normal Pengambilan keputusan Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 maka Ho ditolak Tabel 16. Uji Normalitas ANOVA pada Analgetik One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ProteksiAnalg etik N Normal Parametersa,,b
15 Mean Std. Deviation
38.3120 25.97856
Most Extreme
Absolute
.151
Differences
Positive
.130
Negative
-.151
Kolmogorov-Smirnov Z
.586
Asymp. Sig. (2-tailed)
.883
89
a. Test distribution is Normal. b. Calculated from data. Keputusan : Ho diterima artinya uji normalitas geliat pada mencit seluruh kelompok hewan uji terdistribusi normal Kesimpulan : hasil data signifikansi (ρ = 0,883) lebih besar dari 0,05. Hal ini menunjukkan distribusi data normal. b. Uji Homogenitas Levene Tujuan : Untuk melihat data geliat pada menit homogeny atau tidak Hipotesis Ho : Data geliat mencit bervariasi homogen Ha : Data geliat mencit bervariasi tidak homogen Pengambilan keputusan Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho doiterima Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 maka Ho ditolak
90
Tabel 17. Uji Homogenitas ANOVA pada Analgetik Test of Homogeneity of Variances ProteksiAnalgetik Levene Statistic
df1
2.587
df2 4
Sig. 10
.102
Keputusan : Uji homogenitas geliat pada mencit seluruh kelompok hewan uji bervariasi homogen Kesimpulan : Data signifikansi (ρ = 0,102) lebih besar dari 0,05. Hal ini menunjukkan data bervariasi homogen. c. Uji Anava Satu Arah dan BNT (Beda Nyata Terkecil) terhadap geliat mencit Tujuan : Untuk melihat ada atau tidaknya perbedaan data geliat pada mencit Hipotesis Ho : Data geliat mencit tidak berbeda secara bermakna Ha : Data geliat mencit berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 maka Ho ditolak
91
Tabel 18. Uji ANOVA pada Analgetik
ANOVA ProteksiAnalgetik Sum of Squares Between Groups Within Groups Total
Df
Mean Square
8807.651
4
2201.913
640.746
10
64.075
9448.397
14
F
Sig.
34.365
Kesimpulan : Data geliat mencit ρ = 0,00 (ρ ≤ 0,05) berarti Ho ditolak dan Ha diterima atau data geliat mencit berbeda secara bermakna maka dilanjutkan dengan uji BNT menggunakan metode LSD. Uji BNT merupakan uji lanjutan yang dilakukan apabila hasil pengujian menunjukkan adanya perbedaan secara bermakna. Tujuannya adalah untuk menentukan kelompok mana yang memberikan nilai yang berbeda secara bermakna dengan kelompok lainnya.
Tabel 19. Uji Bobot Nyata Terkecil pada Analgetik
Multiple Comparisons ProteksiAnalgetik LSD (I) (J) Mean Kelomp Kelomp Difference (Iok ok J) Std. Error
95% Confidence Interval Sig.
Lower Bound Upper Bound
*
-59.83667
6.53578
.000
-74.3993
-45.2740
Dosis 1
-27.53667*
6.53578
.002
-42.0993
-12.9740
Dosis 2
-68.04333*
6.53578
.000
-82.6060
-53.4807
Dosis 3
-36.14333*
6.53578
.000
-50.7060
-21.5807
Negatif Positif
.000
92
Negatif
59.83667*
6.53578
.000
45.2740
74.3993
Dosis 1
*
6.53578
.001
17.7374
46.8626
Dosis 2
-8.20667
6.53578
.238
-22.7693
6.3560
Dosis 3
*
6.53578
.005
9.1307
38.2560
*
6.53578
.002
12.9740
42.0993
*
6.53578
.001
-46.8626
-17.7374
*
6.53578
.000
-55.0693
-25.9440
Dosis 3
-8.60667
6.53578
.217
-23.1693
5.9560
Dosis 2 Negatif
*
6.53578
.000
53.4807
82.6060
8.20667
6.53578
.238
-6.3560
22.7693
*
6.53578
.000
25.9440
55.0693
*
6.53578
.001
17.3374
46.4626
*
6.53578
.000
21.5807
50.7060
*
6.53578
.005
-38.2560
-9.1307
Dosis 1
8.60667
6.53578
.217
-5.9560
23.1693
Dosis 2
*
6.53578
.001
-46.4626
-17.3374
Positif
Dosis 1 Negatif Positif Dosis 2
Positif Dosis 1 Dosis 3 Dosis 3 Negatif Positif
32.30000 23.69333 27.53667
-32.30000 -40.50667 68.04333 40.50667 31.90000 36.14333
-23.69333 -31.90000
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Kesimpulan: 1. Pada kontrol negatif (NaCMC 1% 0,5 ml/20 gBB) terdapat perbedaan secara bermakna dengan kontrol positif, (Asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB) kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 0,7 mg/20 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 1,4 mg/20 gBB) dan dosis 3 (ekstrak air gambir 2,8 mg/20 gBB). Hal ini terlihat dari nilai signifikansi ρ ≤ 0,05. 2. Pada kontrol positif (Asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB) terdapat tidak ada perbedaan secara bermakna dengan kelompok dosis 2 (ekstrak air gambir 1,4 mg/20 gBB) karena nilai signifikansi ρ = 0,238 (ρ ≥ 0,05)
93
tetapi terdapat perbedaan secara bermakna dengan kontrol negatif dan kelompok dosis 1 dan 3, terlihat dari nilai signifikansi ρ ≤ 0,05. 3. Pada kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 0,7 mg/20 gBB) terdapat tidak ada perbedaan secara bermakna dengan kelompok dosis 3 (ekstrak air gambir 2,8 mg/20 gBB) karena nilai signifikansi ρ = 0,217 (ρ ≥ 0,05) tetapi terdapat perbedaan secara bermakna dengan kontrol negatif, kontrol positif dan kelompok dosis 2, terlihat dari nilai signifikansi ρ ≤ 0,05. 4. Pada kelompok dosis 2 (ekstrak air gambir 1,4 mg/20 gBB) tidak ada perbedaan secara bermakna dengan kontrol positif (Asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB) karena nilai signifikansi ρ = 0,238 (ρ ≥ 0,05) tetapi terdapat perbedaan secara bermakna dengan kontrol negatif dan kelompok dosis 1 dan 3, terlihat dari nilai signifikansi ρ ≤ 0,05. 5. Pada kelompok dosis 3 (ekstrak air gambir 2,8 mg/20 gBB) tidak ada perbedaan secara bermakna dengan kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 0,7 mg/20 gBB) karena nilai signifikansi ρ = 0,217 (ρ ≥ 0,05) tetapi terdapat perbedaan secara bermakna dengan kontrol negatif, kontrol positif dan kelompok dosis 2, terlihat dari nilai signifikansi ρ ≤ 0,05.
94
Lampiran 19. Hasil Uji Efek Antiinflamasi 1. Uji Normalitas Kolmogorof-Smirnov dan Uji Homogenitas Levene terhadap persen penghambatan udem kaki tikus a. Uji Normalitas Kolmogorof-Smirnov Tujuan : untuk mengetahui kenormalan data sebagai syarat uji ANOVA Hipotesis Ho : Data persen penghambatan udem kaki tikus yang terdistribusi normal Ha :Data persen penghambatan udem kaki tikus yang tidak terdistribusi normal Pengambilan keputusan Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansi ≤ maka 0,05 Ho ditolak Tabel 20. Uji Normalitas ANOVA pada Antiinflamasi One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Jam1 N a,,b
Normal Parameters
Mean Std. Deviation
Most Extreme Differences
Jam2
Jam3
Jam4
Jam5
15
15
15
15
15
49.9973
43.8160
37.2007
34.0180
36.1593
31.44801 25.94830 23.61241 20.47289 23.54744
Absolute
.165
.246
.156
.233
.173
Positive
.144
.154
.142
.152
.138
Negative
-.165
-.246
-.156
-.233
-.173
Kolmogorov-Smirnov Z
.639
.951
.602
.902
.672
Asymp. Sig. (2-tailed)
.809
.326
.861
.391
.757
a. Test distribution is Normal. b. Calculated from data.
95
Keputusan : Ho diterima artinya uji normalitas udem kaki tikus seluruh kelompok hewan uji terdistribusi normal b. Uji Homogenitas Levene Tujuan : Untuk melihat data persen penghambatan udem kaki tikus homogen atau tidak Hipotesis Ho : Data persen penghambatan udem kaki tikus bervariasi homogen Ha : Data persen penghambatan udem kaki tikus bervariasi tidak homogen Pengambilan keputusan Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho doiterima Jika nilai signifikansi ≤ maka 0,05 Ho ditolak
Tabel 21. Uji Homogenitas ANOVA pada Antiinflamasi Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic
df1
df2
Sig.
Jam1
3.807
4
10
.039
Jam2
2.559
4
10
.104
Jam3
2.562
4
10
.104
Jam4
2.710
4
10
.092
Jam5
2.540
4
10
.106
96
Keputusan : Uji normalitas persen penghambatan udem kaki tikus seluruh kelompok
perlakuan
bervariasi
homogen
karena
signifikansinya ρ ≥ 0,05 kecuali pada jam 1 ρ ≤ 0,05 (ρ = 0,039) Kesimpulan : Data persen penghambatan udem kaki tikus pada jam 1 tidak dapat memenuhi syarat ANOVA sehingga dilanjutkan dengan uji Kruskal Wallis
d. Uji Anava Satu Arah terhadap geliat mencit Tujuan : Untuk melihat ada atau tidaknya perbedaan data geliat pada mencit Hipotesis Ho : Data geliat mencit tidak berbeda secara bermakna Ha : Data geliat mencit berbeda secara bermakna Pengambilan Keputusan Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 maka Ho ditolak
97
Tabel 22. Uji ANOVA pada Antiinflamasi ANOVA Sum of Squares Jam1
Between Groups
4
2853.583
2431.349
10
243.135
13845.681
14
Between Groups
7940.599
4
1985.150
Within Groups
1485.800
10
148.580
Total
9426.399
14
Between Groups
5614.656
4
1403.664
Within Groups
2190.987
10
219.099
Total
7805.643
14
Between Groups
4550.112
4
1137.528
Within Groups
1317.836
10
131.784
Total
5867.948
14
Between Groups
5094.249
4
1273.562
Within Groups
2668.498
10
266.850
Total
7762.747
14
Total
Jam3
Jam4
Jam5
Mean Square
11414.332
Within Groups
Jam2
Df
F
Sig.
11.737
.001
13.361
.001
6.407
.008
8.632
.003
4.773
.021
98
Kesimpulan : Data persen penghambatan udem telapak kaki tikus memiliki signifikansi (ρ ≤ 0,05) berarti Ho ditolak dan Ha diterima atau data persen penghambatan udem telapak kaki tikus berbeda secara bermakna maka dilanjutkan dengan uji BNT menggunakan metode LSD. Uji BNT merupakan uji lanjutan yang dilakukan apabila hasil pengujian menunjukkan adanya perbedaan secara bermakna. Tujuannya adalah untuk menentukan kelompok mana yang memberikan nilai yang berbeda secara bermakna dengan kelompok lainnya.
e. Uji Kruskal Wallis dan BNT (Beda Nyata Terkecil) terhadap persen penghambatan udem kaki tikus Tujuan : Untuk
mengetahui ada atau tidaknya perbedaan persen
penghambatan udem kaki tikus karena tidak memenuhi syarat pengujian ANOVA Hipotesis Ho :Data persen penghambatan udem kaki tikus tidak berbeda secara bermakna Ha : Data persen penghambatan udem kaki tikus berbeda secara bermakna Pengambilan keputusan Jika nilai signifikansinya ≥ 0,05 maka Ho diterima Jika nilai signifikansinya ≤ 0,05 maka Ho ditolak
99
Tabel 23.Uji Kurskal Wallis pada Antiinflamasi Jam1 Test Statisticsa,b Jam1 Chi-Square
10.838
Df Asymp. Sig.
4 .028
a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Kelompok
Keputusan : Uji kurskal wallis persen penghambatan udem kaki tikus signifikansinya ρ ≤ 0,05 (ρ = 0,028) berarti Ho ditolak atau adanya perbedaan secara bermakna di semua perlakuan kelompok Kesimpulan : Data persen penghambatan udem kaki tikus terhadap perbedaan secara bermakna maka dilanjutkan dengan uji BNT menggunakan metode LSD. Uji BNT merupakan uji lanjutan yang dilakukan apabila hasil pengujian menunjukkan adanya perbedaan secara bermakna. Tujuannya adalah untuk menentukan kelompok mana yang memberikan nilai yang berbeda secara bermakna dengan kelompok lainnya.
100
Tabel 24. Uji Bobot Nyata Terkecil pada Antiinflamasi Multiple Comparisons LSD Depe
95% Confidence Interval
ndent (I)
(J)
Mean
Varia Kelom Kelomp Difference (Ible
pok
ok
J)
Std. Error
Sig. Lower Bound Upper Bound
-70.04000* 12.73145
.000
-98.4074
-41.6726
Dosis 1
-52.82333* 12.73145
.002
-81.1908
-24.4559
Dosis 2
-79.80000* 12.73145
.000
-108.1674
-51.4326
Dosis 3
-47.32333* 12.73145
.004
-75.6908
-18.9559
Positif Negatif
70.04000* 12.73145
.000
41.6726
98.4074
Dosis 1
17.21667 12.73145
.206
-11.1508
45.5841
Dosis 2
-9.76000 12.73145
.461
-38.1274
18.6074
Dosis 3
22.71667 12.73145
.105
-5.6508
51.0841
Dosis 1 Negatif
52.82333* 12.73145
.002
24.4559
81.1908
Positif
-17.21667 12.73145
.206
-45.5841
11.1508
Dosis 2
-26.97667 12.73145
.060
-55.3441
1.3908
Dosis 3
5.50000 12.73145
.675
-22.8674
33.8674
Jam1 Negatif Positif
101
79.80000* 12.73145
.000
51.4326
108.1674
Positif
9.76000 12.73145
.461
-18.6074
38.1274
Dosis 1
26.97667 12.73145
.060
-1.3908
55.3441
Dosis 3
32.47667* 12.73145
.029
4.1092
60.8441
Dosis 3 Negatif
47.32333* 12.73145
.004
18.9559
75.6908
Positif
-22.71667 12.73145
.105
-51.0841
5.6508
Dosis 1
-5.50000 12.73145
.675
-33.8674
22.8674
Dosis 2
-32.47667* 12.73145
.029
-60.8441
-4.1092
-56.40667*
9.95255
.000
-78.5823
-34.2310
Dosis 1
-43.77667*
9.95255
.001
-65.9523
-21.6010
Dosis 2
-65.76333*
9.95255
.000
-87.9390
-43.5877
Dosis 3
-53.13333*
9.95255
.000
-75.3090
-30.9577
positif Negatif
56.40667*
9.95255
.000
34.2310
78.5823
Dosis 1
12.63000
9.95255
.233
-9.5457
34.8057
Dosis 2
-9.35667
9.95255
.369
-31.5323
12.8190
Dosis 3
3.27333
9.95255
.749
-18.9023
25.4490
Dosis 1 Negatif
43.77667*
9.95255
.001
21.6010
65.9523
positif
-12.63000
9.95255
.233
-34.8057
9.5457
Dosis 2
-21.98667
9.95255
.052
-44.1623
.1890
Dosis 2 Negatif
Jam2 Negatif Positif
102
Dosis 3
-9.35667
9.95255
.369
-31.5323
12.8190
Dosis 2 Negatif
65.76333*
9.95255
.000
43.5877
87.9390
positif
9.35667
9.95255
.369
-12.8190
31.5323
Dosis 1
21.98667
9.95255
.052
-.1890
44.1623
Dosis 3
12.63000
9.95255
.233
-9.5457
34.8057
Dosis 3 Negatif
53.13333*
9.95255
.000
30.9577
75.3090
positif
-3.27333
9.95255
.749
-25.4490
18.9023
Dosis 1
9.35667
9.95255
.369
-12.8190
31.5323
Dosis 2
-12.63000
9.95255
.233
-34.8057
9.5457
-50.98667* 12.08577
.002
-77.9154
-24.0579
Dosis 1
-38.87000* 12.08577
.009
-65.7988
-11.9412
Dosis 2
-53.47667* 12.08577
.001
-80.4054
-26.5479
Dosis 3
-42.67000* 12.08577
.005
-69.5988
-15.7412
Positif Negatif
50.98667* 12.08577
.002
24.0579
77.9154
Dosis 1
12.11667 12.08577
.340
-14.8121
39.0454
Dosis 2
-2.49000 12.08577
.841
-29.4188
24.4388
Dosis 3
8.31667 12.08577
.507
-18.6121
35.2454
Dosis 1 Negatif
38.87000* 12.08577
.009
11.9412
65.7988
-12.11667 12.08577
.340
-39.0454
14.8121
Jam3 Negatif positif
positif
103
Dosis 2
-14.60667 12.08577
.255
-41.5354
12.3221
Dosis 3
-3.80000 12.08577
.760
-30.7288
23.1288
Dosis 2 Negatif
53.47667* 12.08577
.001
26.5479
80.4054
Positif
2.49000 12.08577
.841
-24.4388
29.4188
Dosis 1
14.60667 12.08577
.255
-12.3221
41.5354
Dosis 3
10.80667 12.08577
.392
-16.1221
37.7354
Dosis 3 Negatif
42.67000* 12.08577
.005
15.7412
69.5988
Positif
-8.31667 12.08577
.507
-35.2454
18.6121
Dosis 1
3.80000 12.08577
.760
-23.1288
30.7288
Dosis 2
-10.80667 12.08577
.392
-37.7354
16.1221
-44.60333*
9.37314
.001
-65.4880
-23.7187
Dosis 1
-38.04333*
9.37314
.002
-58.9280
-17.1587
Dosis 2
-48.35333*
9.37314
.000
-69.2380
-27.4687
Dosis 3
-39.09000*
9.37314
.002
-59.9747
-18.2053
positif Negatif
44.60333*
9.37314
.001
23.7187
65.4880
Dosis 1
6.56000
9.37314
.500
-14.3247
27.4447
Dosis 2
-3.75000
9.37314
.698
-24.6347
17.1347
Dosis 3
5.51333
9.37314
.569
-15.3713
26.3980
Dosis 1 Negatif
38.04333*
9.37314
.002
17.1587
58.9280
Jam4 Negatif Positif
104
positif
-6.56000
9.37314
.500
-27.4447
14.3247
Dosis 2
-10.31000
9.37314
.297
-31.1947
10.5747
Dosis 3
-1.04667
9.37314
.913
-21.9313
19.8380
Dosis 2 Negatif
48.35333*
9.37314
.000
27.4687
69.2380
positif
3.75000
9.37314
.698
-17.1347
24.6347
Dosis 1
10.31000
9.37314
.297
-10.5747
31.1947
Dosis 3
9.26333
9.37314
.346
-11.6213
30.1480
Dosis 3 Negatif
39.09000*
9.37314
.002
18.2053
59.9747
positif
-5.51333
9.37314
.569
-26.3980
15.3713
Dosis 1
1.04667
9.37314
.913
-19.8380
21.9313
Dosis 2
-9.26333
9.37314
.346
-30.1480
11.6213
-44.14333* 13.33791
.008
-73.8620
-14.4246
Dosis 1
-40.74333* 13.33791
.012
-70.4620
-11.0246
Dosis 2
-51.66667* 13.33791
.003
-81.3854
-21.9480
Dosis 3
-44.24333* 13.33791
.008
-73.9620
-14.5246
positif Negatif
44.14333* 13.33791
.008
14.4246
73.8620
Dosis 1
3.40000 13.33791
.804
-26.3187
33.1187
Dosis 2
-7.52333 13.33791
.585
-37.2420
22.1954
Dosis 3
-.10000 13.33791
.994
-29.8187
29.6187
Jam5 Negatif positif
105
40.74333* 13.33791
.012
11.0246
70.4620
positif
-3.40000 13.33791
.804
-33.1187
26.3187
Dosis 2
-10.92333 13.33791
.432
-40.6420
18.7954
Dosis 3
-3.50000 13.33791
.798
-33.2187
26.2187
Dosis 2 Negatif
51.66667* 13.33791
.003
21.9480
81.3854
positif
7.52333 13.33791
.585
-22.1954
37.2420
Dosis 1
10.92333 13.33791
.432
-18.7954
40.6420
Dosis 3
7.42333 13.33791
.590
-22.2954
37.1420
Dosis 3 Negatif
44.24333* 13.33791
.008
14.5246
73.9620
positif
.10000 13.33791
.994
-29.6187
29.8187
Dosis 1
3.50000 13.33791
.798
-26.2187
33.2187
Dosis 2
-7.42333 13.33791
.590
-37.1420
22.2954
Dosis 1 Negatif
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Kesimpulan : 1. Pada jam 1, kontrol
negatif
(NaCl 0,9% 2ml/200 gBB) terdapat
perbedaan secara bermakna dengan kontrol positif, (Na diklofenak 3,04 mg/200 gBB) kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB), dan dosis 3 (ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB) dilihat dari nilai signifikansi ρ ≤ 0,05.
106
2. Pada jam 1, kontrol positif, (Na diklofenak 1,03 mg/200 gBB) tidak terdapat perbedaan secara bermakna dengan kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB), dan dosis 3 (ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB) dilihat dari nilai signifikansi ρ ≥ 0,05 tetapi berbeda secara bermakna dengan kontrol negatif (NaCl 0,9% 2ml/200 gBB), dilihat dari nilai signifikansi ρ = 0,00 (ρ ≤ 0,05). 3. Pada jam 2, kontrol
negatif
(NaCl 0,9% 2ml/200 gBB) terdapat
perbedaan secara bermakna dengan kontrol positif (Na diklofenak 1,03 mg/200 gBB) kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB), dan dosis 3 (ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB) dilihat dari nilai signifikansi ρ ≤ 0,05. 4. Pada jam 2, kontrol positif (Na diklofenak 1,03 mg/200 gBB) tidak terdapat perbedaan secara bermakna dengan kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB), dan dosis 3 (ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB) dilihat dari nilai signifikansi ρ ≥ 0,05 tetapi berbeda secara bermakna dengan kontrol negatif (NaCl 0,9% 2ml/200 gBB), dilihat dari nilai signifikansi ρ = 0,00 (ρ ≤ 0,05). 5. Pada jam 3, kontrol
negatif
(NaCl 0,9% 2ml/200 gBB) terdapat
perbedaan secara bermakna dengan kontrol positif (Na diklofenak 1,03 mg/200 gBB) kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB), dan dosis 3 (ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB) dilihat dari nilai signifikansi ρ ≤ 0,05.
107
6. Pada jam 3, kontrol positif (Na diklofenak 1,03 mg/200 gBB) tidak terdapat perbedaan secara bermakna dengan kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB), dan dosis 3 (ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB) dilihat dari nilai signifikansi ρ ≥ 0,05 tetapi berbeda secara bermakna dengan kontrol negatif (NaCl 0,9% 2ml/200 gBB), dilihat dari nilai signifikansi ρ = 0,00 (ρ ≤ 0,05). 7. Pada jam 4, kontrol
negatif
(NaCl 0,9% 2ml/200 gBB) terdapat
perbedaan secara bermakna dengan kontrol positif (Na diklofenak 1,03 mg/200 gBB) kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB), dan dosis 3 (ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB) dilihat dari nilai signifikansi ρ ≤ 0,05. 8. Pada jam 4, kontrol positif (Na diklofenak 3,04 mg/200 gBB) tidak terdapat perbedaan secara bermakna dengan kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB), dan dosis 3 (ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB) dilihat dari nilai signifikansi ρ ≥ 0,05 tetapi berbeda secara bermakna dengan kontrol negatif (NaCl 0,9% 2ml/200 gBB), dilihat dari nilai signifikansi ρ = 0,00 (ρ ≤ 0,05). 9. Pada jam 5, kontrol
negatif
(NaCl 0,9% 2ml/200 gBB) terdapat
perbedaan secara bermakna dengan kontrol positif (Na diklofenak 1,03 mg/200 gBB) kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB), dan dosis 3 (ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB) dilihat dari nilai signifikansi ρ ≤ 0,05.
108
10. Pada jam 4, kontrol positif (Na diklofenak 1,03 mg/200 gBB) tidak terdapat perbedaan secara bermakna dengan kelompok dosis 1 (ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB), dosis 2 (ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB), dan dosis 3 (ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB) dilihat dari nilai signifikansi ρ ≥ 0,05 tetapi berbeda secara bermakna dengan kontrol negatif (NaCl 0,9% 2ml/200 gBB), dilihat dari nilai signifikansi ρ = 0,00 (ρ ≤ 0,05).
UJI EFEK ANALGETIK DAN ANTIINFLAMASI EKSTRAK AIR GAMBIR (Uncaria gambir Roxb) SECARA IN VIVO
Disusun Oleh: GITA PERMATA SARI 106102003392
Pembimbing 1 : Drs. Ahmad Musir, M.Sc, Apt. Pembimbing 2 : Azryfitri, M.Si, Apt.
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN) SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA 2010
B A B I P E N D A H U L U A N
LATAR BELAKANG
Menguji manfaat ekstrak air gambir (Uncaria gambir Roxb) sebagai analgetik dan antiinflamasi secara invivo
Mengembangkan obat tradisiolnal khususnya gambir sbagai obat analgetik dan antiinflamasi
PERMASALAHAN MASALAH Apakah ekstrak air gambir (Uncaria gambir Roxb) memiliki aktivitas analgetik dan antiinflamasi yang diberi secara oral pada mencit dan tikus putih jantan.
HIPOTESA Ekstrak air gambir (Uncaria gambir Roxb) memiliki aktivitas analgetik dan antiinflamasi yang diberi secara oral pada mencit putih jantan dan tikus putih jantan.
TUJUAN PENELITIAN Penelitian ini dilakukan untuk menguji pengaruh pemberian ekstrak air gambir (Uncaria gambir Roxb) terhadap pengurangan rasa nyeri pada mencit putih jantan dan radang (inflamasi) pada tikus putih jantan dalam berbagai konsentrasi dengan asetosal dan natrium diklofenak sebagai pembanding.
MANFAAT PENELITIAN 1)
Penelitian diharapkan memberikan informasi ilmiah mengenai aktivitas analgetik dan antiinflamasi dari ekstrak air gambir (Uncaria gambir Roxb).
2)
Untuk pengembangan penggunaan zat analgetik dan antiinflamasi yang berasal dari ekstrak gambir (Uncaria gambir Roxb) sebagai bahan pengganti analgetik dan antiinflamasi.
3)
Sebagai dasar penelitian lebih lanjut dalam usaha pengembangan obat tradisional lain sebagai upaya peningkatan kesehatan masyarakat.
B A B I I T I N J A U A N P U S T A K A
GAMBIR Klasifikasi tumbuhan gambir : Kingdom
: Plantae
Divisi
: Magnoliophyta
Kelas
: Magnoliopsida
Ordo
: Asteridae
Familia
: Rubiaceae
Genus
: Uncaria
Spesies
: Uncaria gambir Roxb
KANDUNGAN KIMIA Kandungan yang utama adalah flavonoid (terutama gambirin), katekin (sampai 51%), zat penyamak. Kandungan gambir lain adalah asam catechutannat, guersetin, catechu merah, gambir flouresein, abu, asam lemak, lilin, alkaloid tannin (BPOM RI, 2007).
EKSTRAKSI Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair (Harbone, 1996).
INFUNDANSI Infusa adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air, temperatur terukur 96o98oC selama waktu tertentu (15-20 menit) (DepKes RI, 2000).
Serbuk gambir Dipanaskan dengan penambahan aquades selama 15 menit Saring panas menggunakan kapas
Filtrat gambir
Freeze drying
NYERI/ ANALGETIK Nyeri adalah gejala penyakit atau kerusakan yang paling sering. Walaupun nyeri sering berfungsi untuk mengingatkan dan melindungi serta sering memudahkan diagnosis, pasien merasakannya sebagai hal yang tidak mengenakkan.
PENGUJIAN EFEK ANALGETIK
Metode tgail- clip
Metode green
Metode dengan rangsang panas
Metode peritoneal test
Metode podolorimeter
Metode rectodolorimeter
INFLAMASI Inflamasi adalah respon terhadap cedera jaringan dan infeksi. Ciri khas inflamasi adalah :
Eritema
Edema
Kolor
Dolor
PENGUJIAN EFEK ANTIINFLAMASI
Pengujian berdasarkan penghambatan udem yang ditimbulkan oleh iritan yang pada telapak kaki mencit
Pengujian berdasarkan penghambatan leukosit terhadap peritonitis
Pengujian berdasarkan penghambatan pembentukan eritema dengan radiasi ultra violet
Pengujian berdasarkan metode granuloma pouch
Pengujian dengan metode pembentukan granuloma oleh cotton pellets atau sponge (kubus busa poliuretan)
B A B I I I A L U R P E N E L I T I A N
SKEMA KERJA Uji efek analgetik Ekstrak air gambir
Gambir (sampel
Serbuk
Uji penapisan fitokimia
Uji cemaran gambir
Ekstrak kering gambir Uji efek antiinflama si
DOSIS UNTUK MENCIT
0,7 mg/20 g BB 1,4 mg/20 g BB 2,8 mg/20 g BB
DOSIS UNTUK TIKUS 3,5 mg/200 g BB 7 mg/200 g BB 14 mg/200 g BB
B A B I V METODOLOGI PENELITIAN
SKEMA KERJA UJI ANALGETIK Persiapan hewan uji
Perlakuan tiap kelompok
Kontrol normal
Kontrol positif
Kelompok dosis rendah
Kelompok dosis sedang 30’
Setiap ekor disuntikan 0,5% asam asetat sec IP 5’ Pengukuran jumlah geliat selama 30’
Analisa data
Kelompok dosis tinggi
SKEMA KERJA UJI ANTIINFLAMASI Aklimatisasi
Persiapan hewan uji Ukur volume telapak kaki tikus
Perlakuan tiap kelompok Kontrol normal
Kontrol positif
Kelompok dosis rendah
Timbang berat badan tikus Kelompok dosis sedang
1 jam kemudian Masing- masing diinjeksikan suspensi karagenan 2% Selama 4 jam Ukur volume telapak kaki tikus Analisa data
Kelompo k dosis tinggi
B A B V HASIL PENELITIAN
PENGUJIAN PARAMETER EKSTRAK Jenis Pengujian
Hasil Pengujian
Bentuk
Serbuk Kering
Rasa
Pahit
Warna
Coklat Muda
Bau
Lemah
Susut Pengeringan
0,29 %
Kadar Abu
0,18 %
Rendemen
48,16 %
Persyaratan
--
Pahit
Coklat muda
Lemah
Kurang dari 10%
Tidak lebih dari 4% ---
DATA PENGAMATAN JUMLAH GELIAT Rata-rata jumlah geliat mencit pada 5 menit ke…
No.
Kelompok 1
2
3
4
5
6
1
NaCMC 0,5ml/20 gBB
44
39
38
35
24
16
2
Asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB
20.67
16.67
13.67
12.33
10
9
3
Ekstrak air gambir 0,7 mg/20 gBB Ekstrak air gambir 1,4 mg/20 gBB Ekstrak air gambir 2,8 mg/20 gBB
41.33
32.67
23
19.33
13.67
14
17
16.33
12.33
7.33
4.67
3.33
32.67
25
23.67
19.33
14.33
9
4
5
GRAFIK RATA-RATA JUMLAH GELIAT Rata-rata Jumlah Geliat Mencit 50 NaCMC 1% 0,5 ml/20 gBB
45
Jumlah geliat
40 Asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB
35 30
Ekstrak air gambir 0,7 mg/20 gBB
25 20
Ekstrak air gambir 1,4 mg/20 gBB
15 10
Ekstrak air gambir 2,8 mg/20 gBB
5 0 1
2
3
4
Waktu (menit)
5
6
PERSENTASE PROTEKSI ANALGETIK
No.
Kelompok Perlakuan
1
Asam mefenamat 1,82 mg/20 gBB
2
Ekstrak air gambir 0,7 mg/20 gBB
3
Ekstrak air gambir 1,4 mg/20 gBB
4
Ekstrak air gambir 2,8 mg/20 gBB
Persentase proteksi analgetik 59.84 % 27.54 % 68.04 % 36.14 %
GRAFIK PROTEKSI ANALGETIK Persentase Proteksi Analgetik 80.00%
% proteksi analgetik
70.00% 60.00% 50.00%
Series1
40.00% 30.00% 20.00% 10.00% 0.00% Asam mefenamat Ekstrak air gambir Ekstrak air gambir Ekstrak air gambir 1.82 mg/20 gBB 0,7 mg/20 gBB 1,4 mg/20 gBB 2,8 mg/20 gBB Kelompok Perlakuan
DATA PERSENTASE RADANG Waktu
NaCl 2 ml/200 gBB
Na diklofenak 1,03 mg/ 200 gBB
Ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB
Ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB
Ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB
1 jam
112.45
30.55
48.77
22.22
56.67
2 jam
135.69
58.89
74.54
45
66.06
3 jam
143.09
68.33
84.54
63.89
81.51
4 jam
149.15
86.67
91.21
76.11
90.9
5 jam
135.69
73.89
78.18
63.89
75.15
GRAFIK PERSENTASE RADANG Persentase Radang Telapak Kaki Tikus 160 NaCl 2 ml/200 gBB
140 120
Na diklofenak 1,03 mg/200 gBB
% edem
100 80
Ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB
60
Ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB
40
Ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB
20 0 1 jam
2 jam
3 jam Waktu (jam)
4 jam
5 jam
DATA PERSENTASE PENGHAMBATAN RADANG
Waktu
Na diklofenak 1,03 mg/200 gBB
Ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB
Ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB
Ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB
1 jam
70.06
52.82
79.8
47.32
2 jam
55.81
43.77
65.77
51.47
3 jam
50.99
38.87
53.48
42.67
4 jam
41.27
38.04
48.35
39.09
5 jam
44.14
40.74
51.67
44.24
GRAFIK PERSENTASE PENGHAMBATAN RADANG Persentase Penghambatan Radang Telapak Kaki Tikus 90 80
Na diklofenak 1,03 mg/200 gBB
70 % edem
60
Ekstrak air gambir 3,5 mg/200 gBB
50 40
Ekstrak air gambir 7 mg/200 gBB
30 20
Ekstrak air gambir 14 mg/200 gBB
10 0 1 jam
2 jam
3 jam
Waktu (jam)
4 jam
5 jam
B A B V I KESIMPULAN & SARAN
KESIMPULAN 1.
Didapatkan dosis ekstrak air gambir yang berefek analgetik adalah 0,7 mg/20 gBB dengan menggunakan metode Writhing (geliat) pada mencit putih jantan.
2.
Dosis ekstrak air gambir yang berefek sebagai antiinflamasi adalah 3,5 mg/200 gBB, 7 mg/200 gBB, 14 mg/200 gBB dengan menggunakan metode Rat hind paw (pembentukan udem) pada tikus putih betina.
3.
Pada uji ANOVA ekstrak air gambir yang sebagai analgetik dengan variasi dosis 0,7 mg/20 gBB, 1,4 mg/20 gBB dan 2,8 mg/20 gBB terdapat perbedaan secara bermakna terhadap kontrol negatif (p ≤0,05). Tetapi semua variasi dosis ini tidak memiliki perbedaan secara bermakna (p ≥0,05) terhadap kontrol positif (asam mefenamat) dengan dosis 1,82 mg/20 grBB.
4.
Pada uji ANOVA dan Kruskal Wallis ekstrak air gambir yang sebagai antiinflamasi dengan variasi dosis 3,5 mg/200 gBB, 7 mg/200 gBB dan 14 mg/200 gBB terdapat perbedaan secara bermakna terhadap kontrol negatif (p ≤0,05). Tetapi semua variasi dosis ini tidak memiliki perbedaan secara bermakna (p ≥0,05) terhadap kontrol positif (natrium diklofenak) dengan dosis 1,03 mg/200 grBB.
SARAN Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut seperti analgetik dan antiinflamasi pada ekstrak gambir dengan pelarut yang berbeda untuk mengetahui pengaruh perbedaan pelarut dalam menghambat intensitas nyeri dan radang.
T E R I M A K A S I H
