Mikrobiológiai ellenőrzések a GMP-ben Gyimóthyné Ádám Éva dr.pharm.
1
Az előadás témái A mikrobiológiai ellenőrzés szerepe a GMP-ben a céltól a megvalósulásig A minőségi követelményrendszer alakulása, alkalmazások Steril és nem steril készítmények Gyógynövények Magisztrális készítmények és a GMP 2
Minőségi követelmények érvénysülése a GMP-ben Cél (általános): a termék rendeltetésének és a forgalomba hozatali engedélyben megkövetelt mikrobiológiai tisztaságnak a biztosítása. Megvalósítás: a g y a k o r l a t szintjén kell betartani a minőségi követelmények szerinti gyártást és ellenőrzést. Feltétel: a megfelelő személyzet! Ellenőrző módszer: mikrobiológiai tisztasági vizsgálatok (sok irányúak). 3
A gyógyszerészi mikrobiológia területe A mikroorganizmusok gyógyszeripari alkalmazása (fermentációs eljárások) A géntechnológia alkalmazása Gyógyszerellenőrzés - hatékonysági vizsgálatok (antibiotikumok, immunbiológiai és szerobakteriológiai készítmények)
- tisztasági vizsgálatok célja (konkrét): a gyógyszerben végbemenő esetleges változások megelőzése (közvetett hatás), közvetlen egészségkárosító hatás megelőzése. 4
A tisztasági vizsgálatok iránya megfelelő mikrobiológiai tisztaság elérése - kiindulási anyagok - környezet: levegő, gépek / berendezések, személyi higiéné
a mikrobiológiai tisztaság fenntartása tartósítószer, csomagolás, tárolás, felhasználhatósági idő
a mikrobiológiai tisztaság ellenőrzése visszacsatolás, fejlesztés, késztermék minőségtanúsítás, folyamatvalidálás (kritikus lépések), tisztításvalidálás 5
Kiemelt fogalom: „Tiszta tér” Jelentése, kialakítása és működtetése: tisztasági osztályának megfelelően ellenőrzött tér; limitált részecske- és mikróba-szám, megfelelő légcsere. Az A, B, C, D tisztasági osztálynak megfelelő terek egymáshoz kapcsolódását zsilipekkel kell megoldani csak egy-egy fokozatot lépve. Klímatechnikával szabályozottan csökken a levegő túlnyomása a nagyobb tisztasági fokozat irányából. A tisztasági fokozatoknak megfelelő takarítási / fertőtlenítési, személyi higiénés és ellenőrzési utasításokat kell készíteni. (Betegségek bejelentése!) Rendkívüli jelentősége van az oktatásnak! S t á t u s z j e l ö l é s fontossága! 6
Személyzet Alapkövetelmények: megbízhatóság megfelelő képzettség felelősségtudat A munkakörökben: feladatokon és kötelességeken kívül jogkör a feladatok végrehajtásához! A személyi higiéné összetevői: egészségi állapot vizsgálat belépéskor (fertőző betegség, nyílt seb!) gyakorlati higiéné utasítás szerint; kézmosás! öltözködés munkavégzés szerint szabályozva
7
Oktatás A higiénés rendszabályok oktatásának hangsúlyos elemei: -
- - - - - - - -
gyártást veszélyeztető betegségek jelentése kézmosás / fertőtlenítés módja védőfelszerelés használata gépkezelők termékkel való érintkezése ! „tiszta” és „tisztítatlan” eszköz, berendezés, helyiség állapotának mindenkori jelölése takarítóeszközök/ fertőtlenítőszerek helyes alkalmazása elsődleges csomagolóanyagokkal való bánásmód tartályok, zsákok zárása, védelem hőtől, nedvességtől rendkívüli események jelentése (pl. sérült csomagolás) kijelölt étkező és dohányzó helyek 8
Mintavétel, vizsgálat Kiindulási- és primer csomagoló anyagok mintavételi utasítás szerint – oktatás! (mintavevő személye, hely, eszközök, mód, mennyiség) a vizsgáló egy akkreditált, saját / szerződött laboratórium Környezethigiéné: szabályozott időközönként a mintavételi térképnek megfelelően (levegő, gépek, felületek, védőruha, kesztyű) minták vizsgálatát az akkreditált laboratórium végzi Közti / ömlesztett termékek: hosszú tároláskor mindenképp Késztermékek: fenti labornak küldendőek. 9
Tiszta terek mikrobiológiai ellenőrzéséhez ajánlott határértékek Működés közben: levegőminta szűréssel
A B C D
ülepítéssel
CFU/m3 CFU/4h Ø 90 mm <1 <1 10 5 100 50 200 100
kontakt lemez berendezések
CFU/lemez Ø 55 mm <1 5 25 50
kesztyűs ujjlenyomat (5 ujj) CFU/kesztyű <1 5 -
10
A megfelelő mikrobiológiai tisztaságú gyógyszer fogalma Minőségi követelmény előzmények → Ph.Hg.VII. → Ph.Eur. – Ph.Hg.VIII.
szemléletváltást hordoz a gyakorlatban született és alakul(t) tisztasági határértékekben fogalmazódik meg meghatározott mikrorganizmusokra vizsgáltat Escherichia coli, Salmonella, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, epetűrő Gram (-)-ok
Indikátor mikroorganizmus fogalma; E.Coli, mint fakultatív patogén baktérium 11
A „fiatal” tudomány, mint háttér 1858., 1861. Semmelweis publikációi, 1877-től Lister antiszeptikus eljárásai (Pasteur kórokozókról szóló tanulmánya alapján)
1883.
Hőgyes Endre elindítja a
mikrobiológia egyetemi oktatását a kórtannal közös tantárgy keretében; 1948. !
A mikrobiológia önálló tantárgyként való oktatása. 12
Előzmények a gyógyszerészi gyakorlatban
1927. 1933. 1933. 1951. 1954. 1962. 1967. 1977.
OKI – hatósági gyógyszerellenőrzés Gyógyszertörzskönyvezés IV. MAGYAR GYÓGYSZERKÖNYV Szakfelügyelői hálózat V. MAGYAR GYÓGYSZERKÖNYV OGYI az EÜ Min. alapintézménye VI. MAGYAR GYÓGYSZERKÖNYV GMP (Az FDA szabályzatát a WHO megjeleníti.) 13
Megjegyzések: Mit jelentenek e témában a fenti évszámok? A hatósági gyógyszerellenőrzés bevezetése fényt derített a nem megfelelő készítmények nagy számára (pl.: „steril” kötözőszerek 25 %-a nem volt steril !) Gyógyszerkönyveink új kiadásaiban ettől kezdve már megjelennek a Sterilitási vizsgálatok ! – a vizsgálati módszerek folyamatos fejlesztésével A Ph.Hg.V. kiadásától kezdődően pedig egyéb bakteriológiai vizsgálatok is szerepelnek (Zselatin!)
14
A közelmúlt vonatkozásai 1987. VII. MAGYAR GYÓGYSZERKÖNYV Próbálkozás a tisztasági vizsgálatok kiterjesztésére: I., II., III. mikrobiológiai tisztasági osztály követelménye. Módosítás OGYI-Ph.Hg.VII-4/1995 sz. határozatával: I., II., III.A, III.B, IV.A, IV.B tisztasági osztályok; Megemelt limitértékek, „kizárt” mikroorganizmusok: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli (nem csak Enterobacteriaceae), Salmonella
2006. VIII. MAGYAR GYÓGYSZERKÖNYV, amely az Európai Gyógyszerkönyv fordítását tartalmazza. 15
Jelen helyzet Az Európai Gyógyszerkönyv változásait az OGYI folyamatosan közzéteszi (Közleményekben) és határozatokban rendeli el a Ph.Hg.VIII. módosításait: 2.6.1. STERILITÁSI VIZSGÁLAT
07/2010.20601
Előnyben részesíti a membránszűrési technikát a közvetlen beoltással szemben, ha a vizsgált termék sajátságai megengedik; Nem csak parenterális készítményeknél! SAL (Sterility Assurance Level) 10-6, vagy jobb legyen. 16
Egyéb vizsgálatok, előírások 2.6.8.
Vizsgálat pirogén anyagokra (nyulakon) pl.: Glucosum anhydricum parenterális készítményekhez
2.6.14. Vizsgálat bakteriális endotoxinokra (LAL) pl.: Natrii chloridum parenterális készítményekhez < 5 NE / g - kiindulási csíraszám!
5.2.8. Az állati szivacsos agyvelőbetegség (TSE) kórokozója átviteli kockázatának minimálisra csökkentése pl.: Steril, felszívódó bélhúr előállítása 17
Jelen helyzet 5.1.4. NEM STERIL GYÓGYSZERKÉSZÍTMÉNYEK ÉS GYÓGYSZERANYAGOK MIKROBIOLÓGIAI TISZTASÁGÁNAK ELFOGADHATÓSÁGA:
a 2006., 2008-as verziók után a 01/2009 :50104 újdonság (harmonizált), majd 04/2010:50104 és kiegészítésül: Ph.Eur.6.7. Supplement 5.1.8. bevételre szánt növényi gyógyszerekre vonatkozóan * (A, B, C kategória - a feldolgozás módja szerint ) 18
Elfogadhatósági értékek (CFU/g v. CFU/ml) Alkalmazás módja Orális alk. nem vizes kész. Orális alk. vizes kész. Rektális alkalmazás
TAMC TYMC 103 102 102 101 103 102
Nevesített mikr. E. Coli E. Coli
-
Szájnyálkahártyán, fogínyen, bőrön, Staph.aur. és nazálisan, fülészetben történő alk. 102 101 Pseudom.aer.; Vaginális alkalmazás 102 101 előzőek és Candida alb.; Transzdermális tapaszok (/ tapasz) 102 101 Staph.aur. és Ps.aer.; Inhalációs alkalmazás 102 101 Staph.aur., Ps.aer. és (nem porlasztásos) epetűrő Gram (-) –ok; Ph.Eur.külön követelményei max. 102 epetűrő Gram (-), természetes eredetű kiind. Salmonella / 10 g, anyagokat tart. orális kész. 104 102 E. Coli és Staph. aur.; Bevételre szánt növényi gyógysz.* Legmagasabb elfogadható mikroorganizmus-szám: 101 – 20, stb. 19
Vizsgálati módszer 2.6.12. MIKROORGANIZMUSSZÁM MEGHATÁROZÁS: Membránszűréssel, lemezen számlálással, a legvalószínűbb mikroorganizmus-szám módszerrel. 2.6.13. VIZSGÁLAT MEGHATÁROZOTT MIKROORGANIZMUSOKRA nevesített mikroorganizmusok (kizárás, elfogadhatóság) kitenyésző egyéb mikroorganizmusok
- kockázat az alkalmazás helyétől függően, - a termék sajátságának jelentősége, - kezelt kockázati korcsoportok, stb. 20
Megjegyzések: készítmények / anyagok Ph.Hg.VII. követelmény volt: a kiindulási anyagok tisztasága feleljen meg legalább az előállítandó készítmény tisztaságának; Ph.Hg.VIII.- Ph.Eur. követelmény: a nem steril gyógyszeranyagok mikrobiológiai tisztaságának elfogadhatósági követelménye 10³/10² összes életképes mikróba/gombaszám. (Ez a régi III. tisztasági kategóriának felel meg.) 21
A Ph.Hg.VIII. előírása a mikrobiológiai vízminőségre Aqua ad dilutionem solutionum concentratum ad haemodialysim TAMC: max. 102 CFU / ml;
Bakteriális endotoxin: < 0,25 NE/ml
Aqua ad iniectabila letöltetlen: beavatkozási határérték TAMC: 102 CFU / ml; Bakteriális endotoxin: < 0,25 NE/ml
sterilezett: sterilitás; Bakteriális endotoxin: < 0,25 NE/ml Aqua purificata letöltetlen: beavatkozási határérték TAMC: 102 CFU / ml; letöltött: TAMC: max. 102 CFU / ml; A q u a v a l d e p u r i f i c a t a (nagy biológiai tisztaságú) 22
Példák az értelmezéshez Egyértelmű:
Talcum
Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur.
helyi alkalmazás: összesen max. 10² orális alkalmazás: 10³ / 10²
Nem egyértelmű: Matricariae flos Ph.Hg.VIII. – Ph.Eur. felhasználás előtt le kell forrázni 107 / 105; E.Coli 103 ! ( amit felhasználás előtt nem kell leforrázni 105 / 104 ) orális alkalmazás Alkalmazási módok: szemészeti!, inhalációs!, szájnyálkahártyán, bőrön történő alkalmazás problémája A Ph.Eur. e g y e d i / á l t a l á n o s cikkelyei szerint Címkézés kérdése 23
A minőségi követelményrendszer alkalmazása a magisztrális gyógyszereknél Szintén szemléletváltást hordoz.
A Ph.Hg.VII. engedményt tett a szemészeti készítmények vonatkozásában. A tisztasági követelményt az OGYI-P-25-1988. irányelve adta meg: „aszeptikus” (nem pedig steril) minőségben. Az OGYI-P-25-2010. a szemészeti készítményeknél már a Ph.Hg.VIII. szerinti sterilitást követeli meg, viszont egyéb kategóriákban tesz engedményeket. (Hiányzik a régi II. kategória követelménye!) Az Európa Tanács Miniszterek Tanácsának ResAp 1. számú ajánlása magisztrális gyógyszerekhez. 24
Az ajánlás irányelvei magisztrális készítményekre Ph.Eur. kidolgozásáról szóló egyezményben részt vevő államok egyéni hatásköre (Nincs harmonizáció.) A gyógyszertárakban készített és az ipari méretben gyártott gyógyszerkészítmények közötti eltérések elkerülendőek (minőség, biztonság) Ajánlatos a szabályozás módosítása kockázatelemzés alapján. A ”nagy kockázatú készítmények” minőségbiztosítási rendszerére vonatkozó referencia a GMP iránymutatója. 25
Gyógyszerkönyvi cikkelyek vonatkozásai ÁLTALÁNOS FEJEZETEK (Módszerek, általános előírások, stb.) ÁLTALÁNOS CIKKELYEK (Allergének, immunszérumok, vakcinák, gyógyszeranyagok, növényi drogok, stb.) GYÓGYSZERFORMA CIKKELYEK EGYEDI CIKKELYEK Ha nincs alkalmazható egyedi gyógyszerkönyvi cikkely, vagy általános fejezet, validált módszerrel kell bizonyítani a kiindulási anyagok kémiai, gyógyszerészeti és mikrobiológiai szempont szerinti felhasználhatóságukat. 26
Tapasztalatok STERILITÁSI VIZSGÁLATOK
nagy kockázat / nagyobb biztonság, DE* sok tapasztalat jól értelmezhető követelményrendszer a sterilezési eljárások jól validálhatóak rutinszerű ellenőrzés gyártóhelyek / bérvizsgáló akkreditált laborok keverékinfúziók (OGYI-P-63-2007/2012, OGYI-P-64-2007/2012), parenterális készítmények (OGYI-P-68-2008/2012) 27
DE* A hiányosságok okozta tragédiák napjainkban is jelentkeznek: 2012. október, az Amerikai Járványügyi Központ (CDC) közleménye gombás agyhártyagyulladás okozta megbetegedésekről és elhalálozásokról, amit gombával (Exerohilum rostratum, Aspergillus fumigatus, Cladosporium)
fertőzött epidurális injekció okozott /okoz: a Methylprednisolon acetat 80 mg / ml inj. három gyártási tétele! Járványhelyzet! 28
Tapasztalatok NEM STERIL GYÓGYSZERKÉSZÍTMÉNYEK VIZSGÁLATA
gyártói felelősség ! kevesebb tapasztalat nehezebben értelmezhető követelményrendszer nem rutinszerű az ellenőrzés a vizsgálatot kérő és végző szakember rendszerint kész helyzet előtt áll 29
Tapasztalatok MAGISZTRÁLIS KÉSZÍTMÉNYEK VIZSGÁLATA
1980-as évek: a szakfelügyelői mintavételezések vizsgálati eredményeiből nem megfelelő a szemcseppek ~20 %-a!, a szemészeti alapoldatok (bontott) ~12 %-a, injekcióhoz való deszt.víz (bontott) ~45 %-a!! F e l h a s z n á l h a t ó s á g i i d ő, t á r o l á s, e d é n y z e t p r o b l é m á j a ! 30
Tapasztalatok EGYÉB KÉSZÍTMÉNYEK:
Kritikus hibák a desztillált / ioncserélt / reverzozmózissal előállított víz minősége a vizes kenőcsök penészesedése a gyógynövénykivonatok erjedése A kiindulási csíraszám és tárolás problémája 31
A tapasztalatok hasznosítása Példák a higiénés állapotfelmérést követő fejlesztésekre: Sartorus szűrőfeltétek beszerzése (szemcseppek), több hőlégsterilizátor beszerzése (üvegedények), a magisztrális gyógyszerkészítés officinából való kivitele (légtértisztaság), steril kontaktlencse tároló (Galenusi laboratórium) (a 80-as évek elején még nem aszeptikusan készültek!) 32
A tapasztalatok hasznosítása Szakmai utasítások készítésénél, pl.: a gyógyszerkészítéshez használt „nagytisztaságú” vízzel kapcsolatban üveg edényzet tisztítása, fertőtlenítése, hordómosás és szárítás; (forralás gyermek-gyógyszerekhez); ipari méretben a desztillált és ionmentes vízvezetékek csíraszám-csökkentő kezelése! Kritikus hibaforrás: - pangó víz a nagytisztaságú vízelőállító berendezések szakaszos üzemeltetésekor! - a nem megfelelő tárolási mód és idő 33
Tapasztalatok GYÓGYNÖVÉNYEK MIKROBIOLÓGIAI TISZTASÁGA nehéz a megfelelő követelményrendszer megalkotása és betartatása, mert:
a gyűjtőterületek nagyon különbözőek kevés a megfelelő szárító- és raktárhely a hatósági minősítés (GYNKI) megszűnése óta nagyobb a forgalmazói / gyártói felelősség (önállóság), ill. felelőtlenség A kínálathoz igazodó beszerzések. Kevés a jól működő akkreditált vizsgálóhely. 34
Tapasztalatok Példa:
kamilla-virágzat minták (kisker.csom.) 2010.
forrázás előtt és forrázás után
2.
aerob összcsíraszám 5,82x105 CFU/g 103 CFU/g (E.Coli >103 / g <10 / g) 1,4 x105 CFU/g 104 CFU/g
1. 2.
összes élesztő/penész szám 2,07x104 CFU/g <102 CFU/g 2,3 x102 CFU/g <102 CFU/g
1.
Határérték: „A”(bevételre,
forrázva) 107/105; E.Coli 103/g 35
Következtetés, kérdés Általában forrázás után is csak kb. kettő nagyságrenddel csökken a mikróba-szám. (A kamilla fészkes virágzata kedvez a mikroorganizmusok megtelepedésének. Megjegyzendő: a minták nem homogének!) Magas kiindulási csíraszám esetén a kívánt érték többnyire nem érhető el. Kérdés, hogy mi a felhasználás módja, illetve helye! (Bevételre szánt, vagy egyéb?) 36
Gyártói felelősség A mikrobiológiai ellenőrzések vonatkozásában: - kiindulási anyag minősége amire szánták, (végrehajtható-e csíraszámcsökkentő eljárás?) - minőségi tanúsítvánnyal nem rendelkező anyagok vizsgáltatása (csomagoló anyagok is!) - helyi körülményeknek megfelelő higiénés szabályok megalkotása a gyártás vezetője és a minőségbiztosítási vezető által lehetőleg közösen, - környezethigiénés vizsgálatok végeztetése szabályozás szerinti megfelelő időközönként, - késztermékek minőségellenőrzése. 37
Tevékenységek fajtái Dokumentáció Engedélyek, szerződések, tanúsítások, szabályzatok, stb. ↑↓
Operatív műveletek Beszerzés, tárolás, anyagmozgatás, gyártáselőkészítés, gyártás, tisztítás, hulladékkezelés, stb. ↑↓
S z e r v e z é s, e l l e n ő r z é s, é r t é k e l é s Kritikus hibákat megelőző tevékenység (mikrobiológiai monitorozás!), hibajavító, oktató, minősítő, stb. tevékenység. 38
Összefoglalás A Ph.Eur. elsősorban ipari méretekre „épít”. A minőségi követelmények megvalósulását nagyüzemi méretben a GMP biztosítja. A mikrobiológiai ellenőrzés a GMP mindenkori irányelveit követve tervezett, irányított, ellenőrzött és dokumentált tevékenység. Kiterjed a teljes gyártási folyamatra, annak minden járulékos részével együtt. 39
Befejezés Az előadás igyekezett felvázolni a gyógyszerészi mikrobiológiai ellenőrzés szerepét, nyomon követni „szakaszos” fejlődését és jelenlegi helyzetét, rávilágítva a tapasztalatok hasznosítására, különös tekintettel a GMP követelményeire. Ezekre vonatkozó személyes gyakorlati tapasztalat alapja: középüzemi infúziókészítés és ellenőrzés, nagyüzemi oltóanyag ellenőrzés, szakfelügyelői mintavételezés és ellenőrzés, gyártás-higiénés ellenőrzés, gyógynövényminősítés és minőségbiztosítói tevékenység. 40
Köszönöm a figyelmet!
☺ 41
