EFEK HIPOGLIKEMIK UNDUR-UNDUR DARAT (Myrmileon sp.) PADA TIKUS PUTIH JANTAN TERBEBANI GLUKOSA SKRIPSI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI EFEK HIPOGLIKEMIK UNDUR-UNDUR DARAT (Myrmileon sp.) PADA TIKUS PUTIH JANTAN TERBEBANI GLUKOSA

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Ilmu Farmasi

Oleh: Andy Francisca Irawan NIM: 048114135

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2007

i

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI EFEK HIPOGLIKEMIK UNDUR-UNDUR DARAT (Myrmileon sp.) PADA TIKUS PUTIH JANTAN TERBEBANI GLUKOSA

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Ilmu Farmasi

Oleh: Andy Francisca Irawan NIM: 048114135

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2007

ii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

iii


iv


HALAMAN PERSEMBAHAN Whatever you do, work at it with all your heart as working for the Lord not for men. (Colossians 3:23)

Karya kecilku ini kupersembahkan kepada:

Tuhanku (Bapaku Yang Sempurna, Penuntun Jalanku dan Pengharapanku)

Bunda Maria (Bunda Yang Paling Setia)

Papaku, Mamaku , dan Cie2ku ”cie lili” (Kalian karunia terindah Tuhan bagiku! )

Nenekku ( Yang selalu bersemangat, semoga selalu bersemangat dan sehat)

Keluarga Besar Keluarga Angkatku Semua Sahabatku Almamaterku

v


PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis haturkan kepada Tuhan Yang Maha Esa yang telah melimpahkan rahmat dan berkatnya untuk menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi yang berjudul Efek Hipoglikemik Undur-Undur Darat (Myrmileon sp.) pada Tikus Putih Jantan Terbebani Glukosa. Penelitian ini dilakukan untuk memenuhi salah satu syarat tugas akhir untuk mencapai gelar sarjana ilmu Farmasi bidang studi Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Penulis telah banyak mendapat bantuan baik moral maupun spiritual dan dukungan yang berupa bimbingan, dorongan, sarana, maupun fasilitas dari berbagai pihak dalam penulisan skripsi ini, oleh karena itu penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada: 1.

Ibu Rita Suhadi, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta dan selaku dosen penguji yang telah memberikan masukan dan saran dalam penyusunan skripsi ini.

2.

Bapak Yosef Wijoyo, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing atas bimbingan, waktu, diskusi, dan pengarahan selama penelitian sampai penyusunan skripsi.

3.

Bapak Drs. Mulyono, Apt. selaku dosen penguji yang telah memberikan masukan dan saran dalam penyusunan skripsi ini.

4.

dr. Fenty, M.Kes., Sp.PK. selaku dosen penguj i yang telah memberikan masukan dan saran dalam penyusunan skripsi ini.

vi

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 5.

Ibu Christine Patramurti, M.Si., Apt.; Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si.,; Bapak Ipang Djunarko S.Si., Apt.; dan Romo Drs. Petrus Sunu Hardiyanta, S.J., S.Si., yang telah memberikan masukan dan saran dalam penyusunan

skripsi ini. 6.

Prof. Dr. Jusup Subagja, M.Sc. dan Bapak Sukirno, S.Si. yang telah memberikan masukan dan bantuan dalam mengidentifikasi undur- undur darat (Myrmileon sp.).

7.

Keluargaku tercinta, papaku Benny Irawan Liong, mamaku Yulita Megasari, kakakku Shirly Irawan atas cinta, dan nenekku Ong Siek Nio atas cinta, pengorbanan, dukungan, semangat, dan doanya yang tak pernah berhenti.

8.

Semua guru dan dosenku dari TK hingga kuliah, terima kasih atas segala pengajaran, kesabaran, dan ketekunan kalian.

9.

Mas Heru, Mas Parjiman, Mas Kayat dan Mas Yuwono selaku staf laboratorium Farmakologi Toksikologi dan Boifarmasetika. Terima kasih atas bantuan, dan canda yang diberikan.

10.

Sahabatku Ika Sindu, Hepi, Icka Gravilla, Riris, Niken, Aya, Shella, Naomi, Veevee yang tak pernah lelah menemaniku.

11.

Sahabatku Novi, Nike, Apri, Lala, Yasint a, Andrew, Arif yang selalu memberikan semangat, canda, keceriaan sehingga proses perkuliahan menjadi menyenangkan.

12.

Tintus, Lidia, Acin, Brian, Ari, Fandy, Meri, Mbak Nana, Maduma, Keke, Nur, Sisil, Yudi, Rosa semua teman-teman di Kelas C angkatan 2004

vii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI ataupun kelas FKK 2004 yang tidak dapat disebutkan satu persatu. Terima kasih atas kebersamaan, segala suka duka di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma ini. 13.

Feri, Liza, Rizki, Dika teman penelitian dan seperjuangan yang luar biasa.

14.

Novi, Selvi, Listy, Meta, Maria, Ricka, Indah, Renny, Lia, Lanni, Nike, Yohana, Melisa, Aning, Ratih, Wiwit, Eka, Chicha dan teman-teman kost DEWI lainnya. Terima kasih atas kebersamaan dan kekompakkannya selama ini.

15.

Teman-teman di UKF Dolan-dolan terima kasih atas keceriaan dan kekeluargaannya selama ini.

16.

Teman-teman kecilku Feefee, Biandi, Nyndia, Nana, Edo, Yurico, Arif, dan Edwin yang mencerahkan pikiranku selama liburan.

17.

Teman-teman PKB dan PD yang selalu menguatkan dan meneguhkan pikiran positifku.

18.

Kak Dessi terima kasih atas kerja sama dan bantuannya selama penelitian.

19.

Pihak lain yang tidak dapat disebutkan satu persatu oleh penulis. Penulis menyadari masih ada kekurangan dalam penyusunan skripsi ini,

maka penulis sangat mengharapkan saran dan kritik yang membangun dari berbagai pihak demi kemajuan dan kesempurnaan penelitian yang telah dilakukan. Semoga skripsi ini memberikan manfaat bagi kita semua.

viii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PERNYATAAN KEASLIAN KARYA

Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi yang saya tulis ini tidak memuat karya atau bagian orang lain, kecuali yang telah disebutkan dalam kutipan dan daftar pustaka, sebagaimana layaknya karya ilmiah. Sejauh pengetahuan penulis belum pernah dilakukan penelitian mengenai efek hipoglikemik undur-undur darat (Myrmileon sp.) pada tikus putih jantan terbebani glukosa.

ix

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI INTISARI Jenis penelitian yang dilakukan adalah eksperimental murni dan dikerjakan mengikuti rancangan acak lengkap pola searah. Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan 35 ekor tikus yang terdiri atas tujuh kelompok perlakuan. Kelompok I sebagai kontrol negatif diberi perlakua n aquades, kelompok II sebagai kontrol negatif diberi perlakuan CMC 1%, kelompok III diberi perlakuan glibenklamid sebagai kontrol positif dan kelompok IV, V, VI dan VII diberi perlakuan undur- undur darat dengan peringkat konsentrasi yang berbeda, semua pemberian dilakukan secara per-oral. Efek hipoglikemik undurundur darat diuji mengikuti metode uji toleransi glukosa oral (UTGO). Kadar glukosa darah ditetapkan pada menit ke-0 sebelum UTGO dan menit ke-5, 15, 30, 60, 90, 120, 180, 240, dan 300 setelah UTGO dari hewan uji yang sebelumnya telah mendapat pra-perlakuan kontrol negatif, positif, dan undur-undur darat. Data kadar glukosa darah pada tiap kelompok dianalisis secara statistik menggunakan metode GLM Repeated Measure. Kemud ian AUC0-300 diuji dengan KruskallWallis dan dilanjutkan uji Mann-Whitney bertaraf kepercayaan 95%. Hasil penelitian menunjukkan adanya undur-undur darat dengan dosis 6,3 mg/kgBB dan konsentrasi 0,63 mg/ml; 1,26 mg/ml; 2,52 mg/ml; dan 5,04 mg/ml memberikan penurunan kadar glukosa darah sebesar 20,47 %; 27,85 %; 20,15 %; 20,41 % terhadap kontrol negatif. Peringkat konsentrasi undur- undur darat sebesar 0,63 mg/ml; 1,26 mg/ml; dan 5,04 mg/ml menunjukkan penurunan kadar glukosa darah secara bermakna terhadap kontrol negatif. Peringkat konsentrasi undurundur darat sebesar 0,63 mg/ml; 1,26 mg/ml dan 5,04 mg/ml juga menunjukkan penurunan kadar glukosa darah secara bermakna terhadap kontrol positif. Hal ini menunjukkan bahwa undur- undur darat terbukti memiliki efek hipoglikemik tetapi potensi yang dimiliki kecil dibandingkan potensi glibenklamid.

Kata kunci: undur-undur darat, diabetes mellitus, efek hipoglikemik

x

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI ABSTRACT The research type was the pure experimental and worked by following the complete-random-design of one way-pattern. This research was tested by using thirty five white- male-rat which were divided into seven different treatment groups. The First group was given to the aquadest treatment as the negative control, the second group was given to the CMC 1% as the negative control; while third group as the positive control was given to the glibenclamida treatment and the rest of the groups were given to undur- undur darat treatment with different concentration given for each group, all of the processes were given through the oral method. The hypoglycemic effect of undur-undur darat was tested by following the Oral Glucose Tolerance Test (UTGO) method. The blood-glucosecontents were taken, at the 0 minutes before the UTGO and also taken at minutes of 5, 15, 30, 60, 90, 120, 180, 240, and 300 after the UTGO, from the tested animal that had been gotten the pre-treatment of the negative control, positive control and undur-undur darat control before. Then the data of blood-glucosecontents was analyzed statistically using GLM Repeated Measure design. The AUC 0-300 was statistically analyzed using the Kruskall-Wallis test and then continued by using the Mann-Whitney test with 95 % level of convidence. The result of the research showed that the 6,3 mg/kgBB doses of undurundur darat reduced the concentration blood glucose contents for 20, 47 % of the 0,63 mg/ml concentration given; for 27, 85 % of the 1,26 mg/ml concentration given; for 20, 15 % of the 2,52 mg/ml concentration given; for 20, 41 % of the 5,04 mg/ml concentration given; toward the negative control. The concentration given ranks of 0,63 mg/ml; 1,26 mg/ml; and 5,04 mg/ml which gave the significantly effect in reducing the concentration blood glucose contents towards the negative control. While the given concentration ranks of 0,63 mg/ml; 1,26 mg/ml; and 5,04 mg/ml also gave the significantly effect in reducing the bloodglucose-contents towards the positive control. Thus, it can be concluded that undur- undur darat did prove gives the hypoglycemic effect but just small potensial if compared with glibenclamida.

Key words: Myrmileon sp., Undur- undur darat, Diabetes Mellitus, Hypoglycemic Effect.

xi

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ........................................................................................... ii HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................... iii HALAMAN PENGESAHAN .............................................................................. iv HALAMAN PERSEMBAHAN ........................................................................... v KATA PENGANTAR...........................................................................................vi PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................... ix INTISARI...............................................................................................................x ABSTRACT............................................................................................................xi DAFTAR ISI……………………………………………………………………..xii DAFTAR TABEL………………………………………………………………xvii DAFTAR GAMBAR…………………………………………………………..xix DAFTAR LAMPIRAN………………………………………………………..xx DAFTAR SINGKATAN, ARTI LAMBANG DAN ISTILAH..........................xxi

BAB I PENGANTAR ......................................................................................... 1 A. Latar Belakang ............................................................................................... 1 1. Permasalahan ............................................................................................ 3 2. Keaslian penelitian.................................................................................... 3 3. Manfaat penelitian..................................................................................... 4 a. Manfaat teoritis…………………………..................…………………....4 b. Manfaat praktis..........................................................................................4

xii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI B. Tujuan Penelitian ............................................................................................ 4 a. Tujuan Umum............................................................................................4 b. Tujuan Khusus...........................................................................................4

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ................................................................. 5 A. Binatang Undur-undur Darat .......................................................................... 5 1. Sinonim ..................................................................................................... 5 2. Taksonomi binatang undur- undur darat .................................................... 5 3. Morfologi binatang ................................................................................... 6 B. Transport Glukosa............................................................................................6 C. Diabetes Melitus ............................................................................................. 9 1. Definisi...................................................................................................... 9 2. Gejala……………… ................................................................................ 10 3. Klasifikasi ................................................................................................. 11 4. Diagnosis penyakit .................................................................................... 13 5. Terapi ........................................................................................................ 15 D. Teknik Uji Diabetik dan Metode Penetapan Kadar Glukosa Darah............... 15 1. Teknik uji diabetik.....................................................................................15 2. Metode penetapan kadar glukosa darah.....................................................16 E. Glibenklamida ................................................................................................. 17 F. Spektrofotometri ............................................................................................. 18 G. Keterangan Empiris ......................................................................................... 19

xiii


BAB III METODOLOGI PENELITIAN ......................................................... 20 A. Jenis dan Rancangan Penelitian...................................................................... 20 B. Variabel Penelitian.......................................................................................... 20 1. Variabel utama .......................................................................................... 20 2. Variabel pengacau terkendali.................................................................... 21 3. Variabel pengacau tak terkendali…………...…………………………....21 C. Bahan dan Alat Penelitian............................................................................... 21 1. Bahan penelitian........................................................................................ 21 2. Alat penelitian........................................................................................... 23 D. Jalannya Penelitian......................................................................................... 23 1. Determinasi binatang undur-undur darat .................................................. 23 2. Pembuatan simplisia uji ............................................................................ 24 a. Pengolahan bahan……………………………………………………24 b. Pembuatan air halusan undur- undur darat ...………………………...24 c. Pasca pengolahan......... .......................................................................24 d. Penetapan peringkat konsentrasi undur- undur darat............................25 3. Preparasi bahan......................................................................................... 26 a. Pembuatan larutan asam benzoat 0,1% b/v……………………..……26 b. Pembuatan larutan stok glukosa 10mg/ml ...………………………...26 c. Pembuatan larutan natrium oksalat p.a. 2% b/v...................................26 d. Penentuan keseragaman bobot kaplet glibenklamida .........................26 e. Penentuan dosis glibenklamida ...........................................................27

xiv

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI f. Pembuatan larutan glibenklamida 0,1125 mg/ml.................................27 4. Percobaan pendahuluan ............................................................................ 28 a. Penetapan waktu resapan stabil larutan glukosa murni .......................28 b. Penetapan panjang gelombang maksimum .........................................28 c. Pembuatan kurva baku ........................................................................28 d. Penetapan waktu pemberian glibenklamida ........................................28 e. Penetapan waktu pemberian undur-undur darat ..................................29 f. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji ...........................................30 5. Penetapan kadar glukosa darah................................................................. 31 E. Analisis Hasil ..................................................................................................33

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................ 34 A. Determinasi Binatang Undur -Undur Darat ................................................... 34 B. Pembuatan simplisia uji dan preparasi bahan ............................................... 34 C. Percobaan Pendahuluan .. ............................................................................... 34 1. Waktu resapan stabil glukosa ……………………………………………34 2. Penetapan panjang gelombang maksimum ……………………………...37 3. Pembuatan kurva baku …………………………………………………..38 4. Penetapan waktu pemberian larutan glibenklamida ……………………..40 5. Penetapan waktu pemberian undur-undur darat ………………...….……43 D. Efek Hipoglikemik Undur- Undur Darat ....................................................... 45

xv

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................. 58 DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 59 LAMPIRAN ......................................................................................................... 62 BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................ 97

xvi


DAFTAR TABEL

Tabel I

Nilai glukosa plasma puasa dan toleransi glukosa.........................14

Tabel II

Diagnosis DM dengan pemberian glukosa oral 100g atau 75 g.....14

Tabel III

Isi pereaksi enzim Glucose GOD-PAP..........................................22

Tabel IV

Keseragaman bobot tablet..............................................................27

Tabel V

Volume pengukuran kadar glukosa darah......................................32

Tabel VI

Data hasil penetapan waktu resapan stabil larutan glukosa standar ........................................................................................................36

Tabel VII

Hubungan kadar dan resapan glukosa pada ? maksimum 502nm.39

Tabel VIII

Hasil UTGO dan perhitungan prosentase selisih LDDK 0− 300 larutan glibenklamida................................................................................41

Tabel IX

Hasil UTGO dan perhitungan prosentase selisih LDDK 0− 300 air halusan undur- undur darat.............................................................43

Tabel X

Data kadar glukosa darah rata-rata dan LDDK 0− 300 setiap kelompok perlakuan.......................................................................46

Tabel XI

Hasil analisis GLM Repeated Measure kadar glukosa darah........49

Tabel XII

Pengaruh praperlakuan undur-undur darat terhadap LDDK 0− 300 kadar glukosa darah tikus putih jantan dan prosentase perbedaan terhadap kontrol positif dan kontrol negatif..................................51

Tabel XIII a

Hasil analisis homogenitas variansi menggunakan uji Anova One Way................................................................................................54

xvii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Tabel XIII b

Test Mean LDDK 0− 300 ketujuh kelompok perlakuan dengan uji Kruskal-Wallis...............................................................................55

Tabel XIV

Hasil uji Mann-Whitney LDDK 0− 300 glukosa darah tikus putih jantan terbebani glukosa................................................................55

xviii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI DAFTAR GAMBAR Gambar 1.

Sekresi insulin akibat peningkatan kadar glukosa dalam darah…8

Gambar 2.

Insulin memperantarai transport glukosa ke dalam sel…………..9

Gambar 3.

Struktur Glibenklamida………………………………………...17

Gambar 4.

Reaksi enzimatik antara glukosa dan reagen GOD-PAP………35

Gambar 5.

Grafik hubungan resapan glukosa murni 100 mg/dl pada ? 500nm terhadap waktu………………….. ……………...………………36

Gambar 6.

Kurva hubungan antara ? dan resapan maksimum glukosa standar selama operating time……………………………………………37

Gambar 7.

Kurva baku seri kadar glukosa pada ? maksimum 502 nm selama operating time ( pada menit 15-35 )………………….....………..40

Gambar 8.

Diagram penentuan selang waktu pemberian glibenklamida terhadap % selisih LDDK……………….……………………….42

Gambar 9.

Diagram penentuan selang waktu pemberian undur-undur darat terhadap LDDK…………………….………………...…………..44

Gambar 10.

Kurva hubungan antara waktu sampling dan kadar rata-rata glukosa darah akibat pemberian aquadest, CMC, glibenklamida, dan undur- undur darat………………..…………………………..47

Gambar 11.

Diagram

LDDK 0− 300 ± SE

glukosa

darah

masing- masing

perlakuan........................................................................................53

xix

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1.

Determinasi binatang undur-undur darat..............................

62

Lampiran 2.

Foto undur-undur darat ........................................................

63

Lampiran 3.

Foto air halusan undur- undur darat……..….........................

64

Lampiran 4.

Foto hewan uji percobaan (tikus putih jantan) ......................

65

Lampiran 5.

Foto alat penelitian ................................................................

66

Lampiran 6.

Preparasi bahan ......................................................................

68

Lampiran 7.

Data kadar glukosa darah pada tiap perlakuan dan waktu sampling ...............................................................................

73

Lampiran 8.

Hasil uji distribusi data dengan Tes Kolmogorov Smirnov ..

76

Lampiran 9.

Hasil uji GLM Repeated Measure kadar glukosa darah ..

77

Lampiran 10. Hasil uji Kruskal Wallis ........................................................

87

Lampiran 11. Hasil uji Mann Whitney .........................................................

88

Lampiran 13. Hasil uji Anova One Way ......................................................

94

Lampiran 13. Leaflet GOD-PAP..................................................................

95

xx

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI DAFTAR SINGKATAN, ARTI LAMBANG, DAN ISTILAH

ad libitum

:

tanpa batas

Antikoagulan

:

bekerja untuk mencegah pembekuan darah; berbagai substansi yang menekan, memperlambat atau meniadakan pembekuan darah

CMC

:

Carboxy Methyl Cellulosa

DM

:

Diabetes Mellitus

Geoxalated

:

darah yang mengandung oksalat sebagai antikoagulan

GOD–PAP

:

Glucose Oxidase - Phenol Antipirin atau Glukosa Oksidase Phenol p-aminophenazone

Herbal

:

Obat tradisional yang dibuat dengan cara sederhana seperti infusa, dekok, dan sebagainya yang berasal dari simplisia

Hipoglikemi(k)

:

penurunan kadar glukosa dalam darah secara abnormal

LDDK

:

Luas Daerah di Bawah Kurva, kadar glukosa dalam darah vs waktu

LDDK 0− 300

:

Luas Daerah di Bawah Kurva dari menit ke-0 sampai menit ke-300

?

:

panjang gelombang

xxi


BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Pada masa modern seperti saat ini, kepraktisan dalam hidup sangat ditonjolkan dalam menjalani kehidupan karena waktu yang digunakan dianggap sangat berharga. Untuk menghemat waktu tersebut maka banyak teknologiteknologi yang berkembang untuk membantu manusia melakukan suatu pekerjaan. Teknologi ini memanjakan manusia sehingga metabolisme tubuh menurun dan menyebabkan menurunnya kondisi kesehatan dan meningkatnya penyakit degeneratif. Penyakit degeneratif merupakan penyakit akibat fungsi atau struktur dari jaringan atau organ tubuh yang secara progresif menurun dari waktu ke waktu karena usia atau pilihan gaya hidup yang tidak sehat (Subroto, 2006). Diabetes mellitus merupakan penyakit kronik yang mendunia, dapat menimbulkan komplikasi yang merugikan pada semua organ tubuh dan berbagai macam keluhan. Penyakit yang menjadi ”momok” bagi manusia di seluruh dunia ini, semakin meningkat terutama karena kurangnya kontrol pola hidup dan asupan makanan. Oleh karena itu, penyakit ini perlu diwaspadai mengingat banyaknya komplikasi yang dapat ditimbulkan pada berbagai organ. Data epidemiologi menunjukkan jumlah penderita diabetes mellitus di dunia pada tahun 1994 adalah 110,4 juta, diperkirakan pada tahun 2010 akan melonjak dua kali lipat menjadi 239,3 juta. Jumlah penderita kencing manis (diabetes

1


2

mellitus) di Indonesia sekitar 17 juta orang (8,6 persen dari jumlah penduduk) atau menduduki urutan terbesar ke-4 setelah India, China dan Amerika Serikat (AS), ungkap Menkes Siti Fadilah Supari pada dialog tentang Diabetes memperingatai Hari Lanjut Usia (Lansia) Nasional, di Jakarta, Rabu 22 Juni 2005 (Anonim, 2002). Selama ini pengobatan untuk penyakit diabetes mellitus adalah dengan menggunakan obat hipoglikemik oral (OHO), suntikan insulin, diet, ataupun gabungan ketiganya. Banyak obat hipoglikemik oral yang tersedia di pasaran sekarang, tetapi harga yang diberikan pun tidak murah padahal penderita penyakit ini harus mengkonsumsi obat dalam jangka waktu yang panjang sehingga tidak semua masyarakat dapat melakukan pengobatan. Selain itu kondisi masyarakat di desa yang jauh dari kota ataupun tidak adanya jasa apotek membuat pengobatan ini sulit diperoleh. Oleh karena itu, perlu adanya suatu solusi lain untuk pengobatan diabetes mellitus seperti memanfaatkan tanaman obat, hewan, ataupun bahan alam lain yang dapat diperoleh dari lingkungan sekitar, yang telah terbukti dapat berkhasiat sebagai obat hipoglikemik. Undur-undur darat merupakan salah satu solusi obat tradisional dari hewan yang oleh masyarakat digunakan untuk menurunkan kadar gula darah pada penderita diabetes. Hewan yang baru dikenal masyarakat dua tahun terakhir ini tampaknya semakin dipercaya oleh masyarakat dan berkembang terus dari pembicaraan di masyarakat, bahkan tak jarang pengalaman orang-orang yang menggunakannya semakin meyakinkan akan manfaat hewan tersebut. Hewan ini


3

sekarang semakin diburu dan dibudidayakan untuk keperluan pengobatan penyakit. Untuk lebih memperoleh bukti khasiatnya maka perlu dilakukan penelitian ilmiah. Meski belum diketahui secara pasti kandungan maupun mekanismenya, namun diperkirakan efeknya dapat menurunkan kadar glukosa darah seperti halnya obat hipoglikemik oral. Dengan didapatnya data yang meyakinkan secara ilmiah maka penggunaan undur-undur darat sebagai obat hipoglikemik oral dapat dijamin kebenarannya. Penelitian pengaruh undur-undur darat terhadap kadar glukosa darah dapat dilakukan dengan cara mengukur kadar glukosa darah dari hewan uji seperti tikus yaitu dengan memberikan beban glukosa dan diamati pengaruh terhadap toleransi glukosa. 1. Permasalahan Permasalahan yang diangkat penulis pada penelitian ini adalah apakah undur- undur darat memiliki efek hipoglikemik pada tikus putih jantan terbebani glukosa? 2. Keaslian Penelitian Sejauh pene lusuran penulis, penelitian menggunakan undur-undur darat masih jarang dilakukan di Indonesia.


4

3. Manfaat Penelitian a. Manfaat teoritis Penelitian ini diharapkan dapat mengembangkan manfaat undur- undur darat sebagai obat tradisional yang berkhasiat sebagai antidiabetes. b. Manfaat praktis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan sumbangan pemikiran, informasi, dan masukan kepada masyarakat pada umumnya dan khususnya para penderita diabetes mellitus mengenai penggunaan undur-undur darat sebagai obat antidiabetes.

B. Tujuan Penelitian ini bertujuan untuk : 1. Tujuan Umum Tujuan penelitian ini secara umum adalah untuk membuktikan kebenaran efek hipoglikemik undur- undur darat. 2. Tujuan Khusus Tujuan penelitian ini secara khusus adalah untuk memperoleh data sebagai bukti adanya efek hipoglikemik akibat pemberian undur-undur darat pada tikus jantan terbebani glukosa.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Binatang Undur-undur Darat 1. Sinonim Berdasarkan Wayne's Word Noteworthy Plant Originally Published In July 1997, binatang undur-undur darat memiliki sinonim doodlebug (Armstrong, 2007).

2. Taksonomi binatang undur-undur darat Class

: Insecta (Insects)

Subclass

: Myrientomata

Section

: Pterygota (Winged Insects)

Division

: Neoptilota

Subdivision

: Endopterygota

Superorder

: Neuropteroidea

Order

: Neuroptera

Suborder

: Planipennia

Family

: Myrmeleontidae (Antlions) (Swanson, 2007).

5


6

3. Morfologi binatang Berbeda dengan serangga lainnya, undur-undur darat mempunyai bentuk tubuh yang teradaptasi untuk membuat lubang di tanah dan pola hidup sebagai predator. Undur-undur darat mempunyai tubuh yang lebar, datar, kaki yang pendek (sangat cocok untuk berjalan mundur), dan kepala datar dengan mandible yang berbentuk seperti sickle. Bentuk larva tidak menyerupai undur-undur dewasa yaitu serangga yang dapat terbang dengan tubuh yang kecil dan panjang serta sayap terbentang lebar (Anonim, 2008).

B. Transport Glukosa Karbohidrat glukosa adalah karbohidrat terpenting dalam kaitannya dengan penyediaan energi di dalam tubuh, hal ini dikarenakan semua jenis karbohidrat baik monosakarida, disakarida, maupun polisakarida yang dikonsumsi manusia akan terkonversi menjadi glukosa di dalam tubuh. Glukosa ini akan berperan sebagai salah satu molekul utama bagi pembentukan energi di dalam tubuh. Glukosa yang telah diserap (diabsorpsi) oleh usus halus kemudian akan terdistribusi ke dalam semua sel tubuh melalui aliran darah (Irawan, 2007). Glukosa di dalam tubuh selain tersimpan dalam bentuk glikogen di dalam otot dan hati, juga tersimpan pada plasma darah dalam bentuk glukosa darah (blood glucose). Di dalam tubuh glukosa berperan sebagai bahan bakar bagi proses metabolisme, dan sumber energi utama bagi kerja otak. Glukosa digunakan


7

untuk mensintesis molekul ATP (adenosine triphosphate) melalui proses oksidasi. ATP merupakan molekul- molekul dasar penghasil energi di dalam tubuh. Dalam kebutuhan seharian, glukosa menyediakan hampir 50-75% dari total kebutuhan energi tubuh (Irawan, 2007). Sekresi insulin oleh sel ß (beta) tergantung oleh 3 faktor utama yaitu kadar glukosa darah, ATP-sensitive K + channels dan Voltage-sensitive Calsium Channels sel ß pankreas. Mekanisme kerja faktor- faktor tersebut adalah sebagai berikut: pada keadaan puasa, kadar glukosa darah turun, ATP-sensitive K + channels pada membrane sel ß akan terbuka sehingga ion kalium akan meninggalkan sel ß, dan Ca-channels tertutup, akibatnya kalsium tidak dapat masuk ke dalam sel ß, dan perangsangan sel ß untuk mensekresi insulin menurun (Merentek, 2006). Pada saat keadaan setelah makan, kadar glukosa darah akan meningkat dan akan ditangkap oleh sel ß melalui glucose transporter 2 (GLUT2) dan dibawa ke dalam sel ß.

Di dalam sel, glukosa akan mengalami fosforilase menjadi

glukosa-6-fosfat (G6P) dengan bantuan enzim glukokinase. Glukosa-6-fosfat akan mengalami glikolisis menjadi asam piruvat. Proses glikolisis juga menghasilkan produk 6-8 ATP. Penambahan ATP ini akan meningkatkan rasio ATP/ADP dan menutup kanal kalium. Penumpukan kalium dalam sel mengakibatkan depolarisasi membran sel sehingga membuka kanal kalsium dan kalsium akan masuk kedalam sel dan insulin akan dilepaskan ke dalam sel (Merentek, 2006).


8

Gambar 1. Sekresi insulin akibat peningkatan kadar glukosa dalam darah (Cartailler, 2004)

Sekresi insulin pada orang non diabetes meliputi 2 fase, yaitu early peak (fase 1) yang terjadi dalam 3–10 menit pertama setelah makan. Insulin yang disekresi pada fase ini adalah insulin yang disimpan dalam sel beta (siap pakai). Fase 2 atau disebut juga fase lanjut adalah sekresi insulin yang dimulai 20 menit setelah stimulasi glukosa. Pada fase 1 pemberian glukosa meningkatkan sekresi insulin untuk mencegah kenaikan kadar glukosa darah, dan kenaikan glukosa darah selanjutnya akan merangsang fase 2 untuk meningkatkan produksi insulin. Pada diabetes mellitus tipe-2, sekresi insulin pada fase 1 tidak mampu menurunkan glukosa darah sehingga merangsang fase 2 untuk menghasilkan insulin lebih banyak, tetapi sudah tidak mampu meningkatkan sekresi insulin sebagaimana pada orang non diabetes (Merentek, 2006).


9

Gambar 2. Insulin memperantarai transport glukosa ke dalam sel (Cartailler, 2004)

C. Diabetes Mellitus 1. Definisi Diabetes Mellitus adalah penyakit kelainan metabolik glukosa akibat defisiensi

atau

penurunan

efektivitas

insulin

(adalah

hormon

yang

disekresikan oleh sel ß pada pankreas yang berperan dalam metabolisme glukosa), gangguan metabolik glukosa pada kasus diabetes mellitus akan mempengaruhi metabolisme tubuh yang lain(seperti metabolisme karbohidrat, lemak, protein, dan air) (Wijayakusuma, 2006) dan menghasilkan gangguan mikrovaskuler, dan makrovaskuler (Triptitt dkk, 2005). Hiperglikemia timbul karena penyerapan glukosa ke dalam sel terhambat serta metabolismenya diganggu. Dalam keadaan normal, kira-kira


10

lima puluh persen glukosa yang dimakan mengalami metabolisme sempurna menjadi CO 2 dan air, lima persen diubah menjadi glikogen dan kira-kira tiga puluh sampai empat puluh persen diubah menjadi lemak. Pada diabetes mellitus semua proses tersebut terganggu, glukosa tidak dapat masuk ke dalam sel, sehingga energi terutama diperoleh dari metabolisme protein dan lemak. Sebenarnya hiperglikemia sendiri relatif tidak berbahaya, kecuali bila hebat hingga darah menjadi hiperosmotik terhadap cairan intrasel. Yang nyata berbahaya adalah glikosuria yang timbul, karena glukosa bersifat diuretik osmotik, sehingga diuresis sangat meningkat disertai hilangnya berbagai elektrolit. Hal inilah yang menyebabkan terjadinya dehidrasi dan hilangnya elektrolit pada penderita diabetes yang tidak diobati (Handoko dan Suharto, 1995). 2. Gejala Gejala klasik penyakit diabetes melitus, dikenal dengan istilah trio-P, yaitu poliuria (banyak kencing), polidipsi (banyak minum), dan polipagia (banyak makan). a. Poliuria (banyak kencing) merupakan gejala umum pada penderita diabetes melitus. Banyaknya kencing ini disebabkan kadar gula yang berlebihan, sehingga merangsang tubuh untuk berusaha mengeluarkannya melalui ginjal bersama air kencing. Gejala banyak kencing ini terutama menonjol pada waktu malam hari, yaitu saat kadar gula dalam darah relatif tinggi.


11

b. Polidipsi (banyak minum) sebenarnya merupakan akibat (reaksi tubuh) dari banyak kencing tersebut. Untuk menghindari tubuh kekurangan cairan (dehidrasi), maka secara otomatis akan timbul rasa haus atau kering yang menyebabkan timbulnya keinginan untuk terus minum selama kadar gula dalam darah belum terkontrol baik. Sehingga dengan demikian akan terjadi banyak kencing dan banyak minum. c. Polifagia (banyak makan) merupakan gejala yang tidak menonjol. Terjadinya banyak makan ini disebabkan oleh berkurangnya cadangan gula dalam tubuh meskipun kadar gula dalam darah tinggi. Sehingga dengan demikian tubuh berusaha untuk memperoleh tambahan cadangan gula dari makanan yang diterima. Badan kehilangan 4 kalori untuk setiap gram glukosa yang diekskresi. Polifagia timbul karena perangsangan pusat nafsu makan di hipotalamus oleh kurangnya pemakaian glukosa di kelenjar itu (Lanywati, 2001; Handoko dan Suharto, 1995).

3. Klasifikasi Berdasarkan klasifikasi American Diabetes Association/World Health Organization (ADA/WHO), diabetes mellitus diklasifikasikan menjadi empat tipe berdasarkan penyebab dan proses penyakitnya, yaitu: a. diabetes mellitus tipe-1 (insulin dependent diabetes mellitus) Pada tipe I, sel pankreas yang menghasilkan insulin mengalami kerusakan. Akibatnya, sel-sel β pada pankreas tidak dapat mensekresi insulin atau jika dapat mensekresi insulin, hanya dala m jumlah kecil.


12

Kerusakan pada sel-sel β disebabkan oleh peradangan pada pankreas (pankreatitis) yang dapat disebabkan oleh infeksi virus atau akibat endapan-endapan

besi

dalam

pankreas

(hemokromatosis

atau

hemosiderosis). Akibat sel-sel β tidak dapat membentuk insulin maka penderita tipe I ini selalu tergantung pada insulin. b. diabetes mellitus tipe-2 (non-insulin dependent diabetes) Sel-sel β pankreas tidak rusak, walaupun mungkin hanya terdapat sedikit yang normal sehingga masih bisa mensekresi insulin, tetapi dalam jumlah yang kecil sehingga tidak cukup untuk memenuhi kebutuhan tubuh. Pada tipe-2 ini juga disebabkan pasien mengalami resistensi insulin dimana sel-sel β pankreas mensekresi insulin dalam jumlah normal ataupun lebih banyak tetapi jaringan relatif tidak sensitif pada aksi insulin dan tidak memberikan respon yang seharusnya (Crowley, 2001). Alasan terjadinya respon yang buruk dari jaringan ini tidak diketahui secara pasti, tetapi sepertinya berkaitan dengan obesitas, karena mengurangi sifat respon dari insulin (Crowley, 2001). Biasanya, penderita tipe ini adalah orang dewasa gemuk diatas 40 tahun, tetapi kadang-kadang juga menyerang segala umur. c. diabetes mellitus tipe lain Tipe ini disebabkan oleh berbagai kelainan genetik spesifik (kerusakan genetik sel ß pankreas dan kerja insulin), penyakit pada pankreas, obatobatan, baha n kimia, infeksi, dan lain- lain.


13

d. diabetes mellitus saat kehamilan Diabetes mellitus saat kehamilan merupakan istilah yang digunakan untuk wanita yang menderita diabetes selama kehamilan dan kembali normal sesudah hamil. Banyak wanita yang mengalami diabetes kehamilan kembali normal saat postpartum (setelah kelahiran), tetapi pada beberapa wanita tidak demikian. (Wijayakusuma, 2006)

4. Diagnosis Penyakit Cara dan kriteria diagnosis diabetes melitus adalah sebagai berikut: a. Berdasarkan glukosa plasma puasa Glukosa plasma dalam keadaan puasa dibagi atas tiga nilai, yaitu < 100mg/dl, antara > 100 mg/dl sampai < 125 mg/dl, dan =126 mg/dl. Kadar glukosa plasma puasa <110 mg/dl dinyatakan normal, =126 mg/dl adalah diabetes melitus, sedangkan antara 110-126 mg/dl disebut glukosa darah puasa terganggu atau impaired fasting glucose (IFG). b. Berdasarkan tes toleransi glukosa oral Sesuai dengan kesepakatan WHO maka tes toleransi glukosa oral harus dilakukan dengan beban 75 gram setelah berpuasa minimal 8 jam. Penilaian adalah sebagai berikut: toleransi glukosa normal bila < 140 mg/dl, toleransi glukosa terganggu atau impaired glucose tolerance (IGT) bila kadar glukosa 140 mg/dl - 200 mg/dl, dan kadar glukosa = 200 mg/dl disebut diabetes melitus. Pasien dengan IFG dan IGT secara umum


14

mengacu pada ‘prediabetes’ yang mempunyai resiko besar berkembang menjadi diabetes di masa depan. c. HbA1c Rekomendasi determinasi HbA1c ini untuk memonitor kontrol glikemik pada pasien diabetes. Karena tidak adanya standar baik dan beberapa negara belum siap untuk mengakses tes ini, maka determinasi HbA1c tidak direkomendasikan untuk mendiagnosis diabetes sewaktu-waktu.

§

Glukosa plasma puasa

-

Normal

-

Glukosa plasma puasa terganggu

-

Diabetes melitus

§

< 100 mg/dl (5,6 mmol/L) 100 -125 mg/dl (5,6 – 6,9 mmol/L)

= 126 mg/dl (7,0 mmol/L)

Hasil tes toleransi glukosa oral, glukosa plasma 2 jam

-

Normal

-

Toleransi glukosa terganggu

-

Diabetes melitus

< 140 mg/dl (7,8 mmmol/L) 140 - 200 mg/dl (7,8 - 11,1 mmol/L)

= 200 mg/dl (11,1 mmol/L)

Tabel 1. Nilai glukosa pl asma puasa dan toleransi glukosa

§

Pemberian glukosa oral 100g

-

Puasa

= 95 mg/dl (5,3 mmol/L)

-

1 jam

= 180 mg/dl (10 mmol/L)

-

2 jam

= 155 mg/dl (8,6 mmol/L)

-

3 jam

= 140 mg/dl (7,8 mmol/L)

§

Pemberian glukosa oral 75g

-

Puasa

= 95 mg/dl (5,3 mmol/L)

-

1 jam

= 180 mg/dl (10 mmol/L)

-

2 jam

= 155 mg/dl (8,6 mmol/L)

Tabel 2. Diagnosis DM dengan pemberian glukosa oral 100g atau 75 g

(DiPiro et al, 2005)


15

5. Terapi Terapi terbaru bagi penatalaksanaan diabetes mellitus dibagi menjadi terapi primer dan terapi sekunder, yang masing- masing mencakup hal- hal berikut: a. Terapi primer. Terapi primer terdiri atas diet diabetes mellitus, latihan fisik/olah raga, dan penyuluhan kesehatan. b. Terapi sekunder. Terapi sekunder terdiri obat antidiabetika dan cangkok pankreas (Lanywati, 2001).

D. Teknik Uji Diabetik dan Metode Penetapan Kadar Glukosa Darah 1. Teknik Uji Diabetik Pada suatu penelitian yang bertujuan untuk membuktikan khasiat suatu obat antidiabetes, hewan uji yang digunakan perlu diubah keadaannya menjadi diabetes baik DMTI maupun DMTTI. Suatu keadaan DMTI dapat dibuat secara pankreatektomi dan juga secara kimia dengan menggunakan zat kimia sebagai induktor (diabetogen) seperti aloksan, streptozosin, adrenalin, glukagon, dan EDTA yang diberikan secara parenteral. Diabetogen-diabetogen tersebut mampu menginduksi diabetes secara permanen yang ditandai dengan terjadinya hiperglikemi yang diakibatkan oleh rusaknya sel β pada pankreas. Diabetes Mellitus Tidak Tergantung Insulin dapat dihasilkan dengan pembebasan glukosa peroral sebagai diabetoagen pada dosis 1,75 g/kgBB hewan uji, keadaan hiperglikemi hanya berlangsung beberapa jam setelah pembebanan glukosa tersebut (Anonim, 1991).


16

2. Metode Penetapan Kadar Glukosa Darah Secara umum menurut Widowati dkk (1997) metode penentuan glukosa darah dapat ditentukan dengan beberapa cara yaitu: a. metode kondensasi dengan gugus amina Prinsip: aldosa dikondensasikan dengan orto-toluidin dalam suasana asam dan menghasilkan larutan berwarna hijau setelah dipanaskan. Kadar glukosa darah dapat ditentukan sesuai dengan intensitas warna yang terjadi diukur secara spektrofotometri. b. metode enzimatik Glukosa dapat ditentukan secara enzimatik, dengan menggunakan enzim glukosa oksidase (GOD). Dengan adanya glukosa oksidase, maka glukosa dioksidasi oleh udara (O 2 ) menjadi asam glukuronat disertai pembentukan hidrogen peroksida. Dengan adanya enzim peroksidase (POD), H 2 O 2 akan membebaskan O 2 yang mengoksidasi akseptor kromogen yang sesuai serta memberikan warna merah. Akseptor kromogennya dapat berupa senyawa aminoantipirin dan fenol atau orthodianisidin, kadar glukosa darah ditentukan berdasarkan intensitas warna yang terjadi, diukur secara spektrofotometri. c. metode oksidasi-reduksi Kadar glukosa darah ditentukan dengan cara dioksidasi dengan menggunakan suatu oksidan ferrisianida. Oksida ini direduksi menjadi ferrosianida oleh glukosa dalam suatu suasana basa dengan pemanasan, kemudian kelebihan garam ferri dititrasi secara iodometri.


17

E. Glibenklamida Cl

CO

NH

CH2

CH2

O2 S

NH

CO2

NH

OCH3

Gambar 3. Struktur Glibenklamid (Evans dan Rushakoff, 2007)

Glibenklamida merupakan obat hipoglikemik oral yang digunakan secara luas di dalam pengobatan diabetes mellitus tidak tergantung insulin (tipe-2). Glibenklamida merupakan sulfonilurea paling poten dan dikenal sebagai sulfonilurea ”generasi kedua” (Dollery, 1999). Aksi farmakologi glibenklamida adalah mentimulasi pelepasan insulin dengan meningkatkan fungsi sel-sel islet β pankreas. Pada terapi jangka pendek, hal ini signifikan dengan peningkatan sirkulasi konsentrasi insulin, tetapi dengan penggunaan berkelanjutan biasanya terjadi penurunan kadar insulin tanpa merusak kontrol glikemik. Sulfonilurea menunjukkan peningkatan sintesis glikogen dan penghambatan glikogenolisisi dan glukoneogenesis pada hati. Pada subyek normal puasa, peningkatan konsentrasi insulin dalam plasma dan penurunan glukosa plasma terjadi 15-60 menit setelah pemberian glibenklamida oral dan mencapai maksimum setelah 1-2 jam sebelum kembali ke nilai dasar setelah 3 jam (Dollery, 1999). Glibenklamida dimetabolisme dalam hati menjadi produk dengan aktivitas hipoglikemik yang sangat rendah. Meskipun analisis spesifik untuk senyawa yang tidak dimetabolisme menimbulkan dugaan terdapatnya suatu waktu-paruh plasma yang singkat, tetapi efek biologis glibenklamida jelas bertahan selama 24 jam setelah pemberian satu dosis tunggal yang diberikan pada pagi hari pada pasien


18

diabetes. Awal dosis pemberian yang biasa adalah 2,5 mg/hari atau kurang, dan rata-rata dosis pemeliharaan adalah 5-10 mg/hari yang diberikan sebagai dosis tunggal pada pagi hari. Tidak dianjurkan untuk memberikan dosis pemeliharaan lebih dari 20 mg/hari (Nolte and Karam, 2002).

F. Spektrofotometri Spektrofotometri UV-Vis adalah salah satu teknik analisis fisika-kimia yang

mengamati

tentang

interaksi

atom

atau

molekul

dengan

radiasi

elektromagnetik pada panjang gelombang 190 – 380 nm (UV) dan 380 – 780 nm (Vis) dengan memakai spektrofotometer (Mulja dan Suharman, 1995). Prinsip kerja

spektrofotometri

adalah

berdasarkan

atas

interaksi

antara

radiasi

elektromagnetik dengan materi. Materi dapat berupa atom, ion, atau molekul, sedang radiasi elektromagnetik merupakan salah satu jenis energi yang ditransmisikan dalam ruang dengan kecepatan tinggi (Khopkar, 1990). Interaksi antara molekul yang mempunyai gugus kromofor dan radiasi elektromagnetik pada daerah sinar ultraviolet dan sinar tampak (200-800 nm) akan menghasilkan spektra serapan elektronik. Spektra serapan ini dapat digunakan untuk analisis kuantitatif karena jumlah radiasi elektromagnetik yang diserap ada hubungannya dengan jumlah molekul penyerap (Skoog, 1985). Panjang gelombang dimana terjadi eksitasi elektronik yang memberikan serapan maksimum disebut sebagai panjang gelombang serapan maksimum. Penentuan panjang gelombang pada saat serapan maksimum dapat digunakan untuk mengidentifikasi molekul (Mulja dan Suharman, 1995). Pada analisis


19

kuantitatif, pengukuran serapan dilakukan pada panjang gelombang saat serapan maksimum, disebabkan dua alasan: i.

Sensitivitas maksimum diperoleh dengan mengerjakan pada pita maksimum karena pada konsentrasi yang diberikan maka pada panjang gelombang tersebut memberikan respon yang paling kuat.

ii. Pada pita maksimum, perubahan yang kecil pada panjang gelombang akan memberikan perubahan serapan yang minimal (kecuali kalau pita absorpsi sangat tajam). Dengan demikian kesalahan kecil dalam meletakan tanda pemilih panjang gelombang pada instrumen tidakk akan mengakiibatkan kesalahan besar pada pengukuran serapan (Fatah, 1989).

G. Keterangan Empiris Penelitian ini sifatnya “trial and error” untuk mendapatkan pengetahuan empiris tentang efek hipoglikemik undur-undur darat terhadap penurunan kadar glukosa darah tikus putih jantan yang dibebani glukosa. Cara makan: masukkan 2 ekor undur-undur darat ke dalam kapsul kosong, biasanya dimasukkan dalam keadaan hidup. Makan dua ekor saja perhari, karena ada yang memakan 7 ekor sekaligus berefek badan terasa panas dan kadar gula langsung turun (Anonim, 2008).


BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Jenis penelitian yang dilakukan termasuk jenis penelitian eksperimental murni dan dikerjakan mengikuti rancangan acak lengkap pola searah. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biokimia-Mikrobiologi dan Laboratorium Farmakologi Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

B. Variabel Penelitian 1. Variabel utama a. Variabel bebas : Konsentrasi undur-undur darat. Konsentrasi undur- undur darat adalah jumlah gram (g) banyaknya undurundur darat yang dilarutkan dalam mililiter (ml) aquades kemudian disuntikkan pada tikus putih jantan terbebani glukosa. b. Variabel tergantung : LDDK 0-300 kadar glukosa dalam darah. LDDK 0-300 kadar glukosa dalam darah adalah besaran yang menggambarkan jumlah kadar glukosa dalam darah pada rentang waktu mulai menit ke-0 sampai menit ke-300 yang dihitung menggunakan metode trapezoid.

20


21

2. Variabel pengacau terkendali a. Jenis kelamin

: jantan.

b. Galur spesies subyek uji : galur Wistar. c. Warna

: putih.

d. Berat badan subyek uji

: antara 175-225 gram.

e. Umur subyek uji

: antara 2-3 bulan.

f. Cara pemberian

: peroral.

3. Variabel pengacau tak terkendali a. Keadaan patologi subjek uji. b. Kandungan dalam undur- undur darat.

C. Bahan dan Alat Penelitian 1. Bahan penelitian a. hewan uji Tikus putih jantan galur Wistar, umur 2 - 3 bulan, berat badan 175-225 gram, dari Laboratorium Farmakologi Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. b. bahan uji Undur-undur darat (Myrmileon sp.) yang diperoleh dari Kebun Obat Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. c. senyawa pembanding Senyawa pembanding berupa kaplet generik glibenklamida yang diproduksi oleh PT. Indofarma.


22

d. pereaksi untuk pengukuran kadar glukosa darah Pereaksi yang digunakan adalah enzim Glucose GOD FS*(DiaSys, Germany) yang terdiri atas: Tabel III. Isi pereaksi enzim Glucose GOD-PAP Reagen : Phosphat buffer

pH 7,5

Phenol

250 mmol/l 5 mmol/l

4-aminoantipyrine

0,5 mmol/l

Glukosa oksidase

(GOD)

≥ 10 kU/l

Phenol AminoAntipirin Peroksidase

(PAP)

≤ 1 kU/l

100mg/dl

(5,5 mmol/dl)

Glukosa standar

e. lain- lain 1) Sodium oksalat p.a 2 mg/ml darah sebagai antikoagulan pada waktu pengambilan darah. 2) Glukosa monohidrat p.a (Merck) dengan dosis 1,75 g/kgBB sebagai larutan untuk pembuatan kurva baku dan untuk uji toleransi glukosa oral yang diperoleh dari LPPT Universitas Gadjah Mada. 3) Asam benzoat p.a 0,1% b/v sebagai pengawet glukosa monohidrat yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 4) Aquades sebagai cairan pelarut undur- undur darat yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.


23

5) Parafin cair sebagai pelancar aliran darah dalam pengambilan sampel darah dari hewan uji, yang diperoleh dari Laboratorium Biofarmasetika dan Bioanalisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 2. Alat penelitian 1) Seperangkat alat gelas ( Beaker glass, labu takar, gelas ukur, pengaduk) merk pyrex. 2) Mortir dan stamper. 3) Jarum suntik (injeksi peroral) yaitu jarum suntik yang ujungnya diberi bulatan kecil dengan lubang ditengahnya agar tidak melukai hewan uji. 4) Mikropipet. 5) Sentrifuge (Hettich WBA SS, Germany) ,yellow tipe, microtube, surgical blade. 6) Spektrometer Ultraviolet –Visibel (Optima® SP300, Japan) dan kuvet 7) Alat timbang elektrik (Mettler Toledo AB 204, Switzerland) 8) Vortex (Janke-Kankel IKA® - Labortechnik) 9) Holder D. Jalannya Penelitian 1. Determinasi binatang undur-undur darat Determinasi binatang undur-undur darat (Myrmileon sp.) dilakukan di Laboratorium Entomologi Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.


24

2. Pembuatan simplisia uji a. pengolahan bahan 1) mempersiapkan bahan mentah Pengambilan undur-undur darat dipilih dari undur-undur darat yang berbentuk larva. 2) Pembersihan Undur-undur darat yang akan diolah harus bebas dari debu, kotoran, pasir atau tanah serta terbebas dari bakteri atau jamur penyebab penyakit. b. pembuatan air halusan undur- undur darat Undur-undur darat yang telah bersih ditimbang sebanyak dua ekor, digerus dengan menggunakan mortir dan stamper sampai halus dan ditambah dengan aquades sebanyak 10 ml (konsentrasi ± 0,05g/10ml). Ambil sebanyak 6,3 ml kemudian ditambahkan aguadest sampai 25 ml (konsentrasi ± 0,0315g/25ml) dan air halusan pun siap digunakan. Air halusan yang dibuat tidak menggunakan blender karena hanya memerlukan sedikit dan jumlah yang kecil jadi proses penghalusan tidak memungkinkan untuk menggunakan blender. c. Pascapengolahan Air halusan undur- undur selalu dibuat baru setiap kali akan digunakan untuk menghindari kontaminasi bakteri, pertumbuhan jamur, gangguan serangga yang dapat merusak air halusan tersebut.


25

d. Penetapan peringkat konsentrasi undur- undur darat Sebelumnya dilakukan penetapan dosis undur-undur darat terlebih dahulu. Berdasarkan pengalaman empiris di masyarakat, penggunaan undur- undur darat untuk menurunkan kadar glukosa darah yaitu sebanyak 2 ekor atau ± 0,05g/50kgBB. Untuk manusia 70 kg dibutuhkan 0,07 g undur-undur darat dan dikonversikan ke tikus 200 gram dengan faktor konversi 0,018. 0,07 g undur- undur darat x 0,018 = 0,00126 g/200g = 0,0063 g/kgBB = 6,3 mg/kgBB Ditentukan volume pemberiannya= 1,0 ml Perhitungan konsentrasi undur-undur darat: Volume pemberian x Konsentrasi = Dosis x Berat Badan 1,0 x Konsentrasi = 0,0063 g/kgBB x 200 g Konsentrasi

= 0,00126 g/ml = 1,26 mg/ml

Konsentrasi undur-undur darat yang dibuat adalah 1,26 mg/ml Berdasarkan perhitungan maka besarnya konsentrasi undur- undur darat pada hewan uji tikus yaitu 1,26 mg/ml. Untuk selanjutnya digunakan satu konsentrasi

dibawah

dan

dua

diatas

konsentrasi

orientasi

dengan

pengurangan/penambahan faktor perkalian 2 sehingga didapat rentang konsentrasi undur-undur darat yang digunakan adalah 0,63 mg/ml; 1,26 mg/ml; 2,52 mg/ml; 5,04 mg/ml.


26

3. Preparasi bahan a. pembuatan larutan asam benzoat p.a. 0,1% b /v Serbuk asam benzoat p.a. ditimbang sebanyak 0,5 gram dan dilarutkan dengan aquades panas dalam labu takar 500 ml sampai tanda. b. pembuatan larutan stok glukosa p.a. 1% b/v Glukosa monohidrat p.a. ditimbang sebanyak 1 gram dan dilarutkan dengan aquades dan menggunakan pengawet asam benzoat 0,1% b/v dalam labu takar 100 ml sampai tanda. c. pembuatan larutan natrium oksalat p.a. 2% b/v Natrium oksalat p.a. ditimbang sebanyak 1 gram dan dilarutkan dengan aquades dalam labu takar 50 ml sampai tanda. d. penentuan keseragaman bobot kaplet glibenklamida Penentuan keseragaman bobot kaplet glibenklamida mengacu pada Anonim 1979. Timbang 20 tablet, hitung bobot tablet. Jika ditimbang satusatu, tidak boleh lebih dari 2 tablet yang masing- masing bobotnya menyimpang dari bobot rata-ratanya lebih besar dari harga yang ditetapkan kolom A, dan tidak satu tabletpun menyimpang dari bobot rataratanya lebih dari harga yang ditetapkan kolom B. Nilai penyimpangan bobot rata-rata kolom A dan B dapat dilihat pada tabel IV.


27

Tabel IV. Keseragaman bobot tablet Penyimpangan bobot rata-rata dalam % Bobot rata-rata

A

B

25 mg atau kurang

15 %

30 %

26 mg sampai dengan 150 mg

10 %

20 %

151 mg sampai dengan 300 mg

7.5 %

15 %

Lebih dari 300 mg

5%

10 %

e. penentuan dosis glibenklamida Dosis glibenklamida yaitu 5 mg pada manusia dengan berat badan 70 kg, dikonversikan ke tikus 200 gram dengan faktor konversi 0,018 5 mg glibenklamida x 0,018 = 0,09 mg glibenklamida/ 200 gram = 0,45 mg glibenklamida/ kg BB Berdasarkan perhitungan maka besarnya dosis glibenklamida pada hewan uji tikus yaitu 0,45 mg/ kgBB. f. pembuatan larutan glibenklamida 0,1125mg/ml Timbang serbuk glibenklamida setara dengan 25 mg glibenklamida murni, larutkan dengan aquades dalam labu takar 10 ml sampai tanda sebagai larutan induk glibenklamida. Buat dengan konsentrasi 0,1125 mg/ml dalam labu ukur 10 ml dari larutan induk glibenklamida tersebut.


28

4. Percobaan pendahuluan a. penetapan waktu resapan stabil glukosa standar (operating time) Sebanyak 25 µl larutan glukosa standar direaksikan dengan 2,5 ml pereaksi GOD-PAP. Campuran larutan tersebut kemudian divortex dan segera diukur resapannya pada panjang gelombang 500 nm (sesuai dengan yang tertulis dalam leaflet Glucose GOD FS*) selama 60 menit. Waktu resapan stabil yang digunakan adalah waktu inkubasi yang memberikan resapan stabil. b. penetapan panjang gelombang serapan maksimum (? maksimal) Sebanyak 25 µl larutan glukosa standar direaksikan dengan 2,5 ml pereaksi GOD-PAP. Campuran larutan tersebut kemudian divortex dan diukur pada rentang panjang gelombang 400 - 600 nm. Panjang gelombang yang menunjukkan serapan yang paling tinggi adalah panjang gelombang serapan maksimum (? maksimal). c. pembuatan kurva baku Memipet 0,75 ml; 1,0 ml; 1,5 ml; 2,0 ml; dan 2,25 ml larutan glukosa monohidrat 1% b/v. Penetapan kadar glukosa darah dilakukan seperti pada penetapan kadar glukosa darah dengan metode GOD-PAP. Resapan diukur secara spektrofotometri pada panjang gelombang serapan maksimum (? maksimal). d. penetapan waktu pemberian glibenklamida Tujuan dari penetapan pemberian glibenklamida adalah untuk melihat pengaruh waktu pemberian terhadap efek hipoglikemik glibenklamida, agar pada saat uji toleransi glikosa oral (UTGO) glibenklamida sudah memberikan


29

efek penurunan kadar glukosa darah. Orientasi ini menggunakan 6 ekor tikus yang terbagi dalam 3 kelompok dimana masing- masing kelompok diberi perlakuan perlakuan kontrol positif dan kontrol negatif. Perlakuan tersebut dilakukan terhadap masing- masing kelompok yaitu pada menit ke-15 sebelum UTGO untuk kelompok kesatu, menit ke-30 sebelum UTGO untuk kelompok kedua, dan menit ke-45 sebelum UTGO untuk kelompok ketiga. Semua pemberian dilakukan secara peroral, selanjutnya dilakukan UTGO dengan diberikan larutan glukosa monohidrat 15% b/v; 1,75 g/kgBB. Pengambilan cuplikan darah dilakukan sesaat sebelum perlakuan sebagai menit ke-0 dan pada menit ke-15, 30, 45, 60, 90, 120, 180, 240, dan 300 setelah UTGO. Pengukuran kadar glukosa darah dilakukan dengan menggunakan metode GOD-PAP. Selanjutnya dibuat kurva UTGO dan perhitungan harga LDKK0300

. Penentuan waktu pemberian undur-undur darat didasarkan pada harga

selisih LDKK0-300 kontrol positif dan negatif tertinggi. e. penetapan waktu pemberian undur-undur darat Penetapan waktu

pemberian undur-undur darat digunakan untuk melihat

pengaruh waktu pemberian terhadap efek penurunan kadar glukosa darah, agar pada saat dilakukan UTGO undur-undur darat sudah memberikan efek dalam menurunkan kadar glukosa darah. Orientasi ini menggunakan 3 ekor tikus yang masing- masing diberi undur-undur darat pada menit ke-15, 30, dan 45 sebelum UTGO. Semua pemberian dilakukan secara peroral, selanjutnya dilakukan UTGO dengan diberikan larutan glukosa monohidrat 15% b/v; 1,75 g/kgBB. Pengambilan cuplikan darah dilakukan sesaat sebelum perlakuan


30

sebagai menit ke-0 dan pada menit ke-15, 30, 45, 60, 90, 120, 180, 240, dan 300 setelah UTGO. Pengukuran kadar glukosa darah dilakukan dengan menggunakan metode GOD-PAP. Selanjutnya dibuat kurva UTGO dan perhitungan harga LDKK0-300 . Penentuan waktu pemberian undur-undur darat didasarkan pada harga LDKK0-300 terendah. f. pengelompokan dan perlakuan hewan uji Penelitian ini mengikuti rancangan acak lengkap pola searah, yang mana 35 ekor tikus dibagi secara acak menjadi 7 kelompok, masing- masing kelompok terdiri dari 5 ekor. Tiap hewan uji diadaptasikan dengan kondisi yang sama, jauh dari kebisingan dan dihindarkan dari stress. Sebelum mendapat perlakuan, masing- masing kelompok dipuasakan selama 18 jam dengan tetap diberi minum ad libitum, lalu diberi perlakuan sebagai berikut: 1) Kelompok I Aquades 5 ml/ kg BB (kontrol negatif untuk perlakuan undur- undur darat) 2) Kelompok II Larutan CMC 1% b/v 5ml/kg BB (kontrol negatif untuk perlakuan glibenklamida) 3) Kelompok III Larutan glibenklamida 0,45 mg/kgBB (kontrol positif) 4) Kelompok IV Undur-undur darat dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 0,63 mg/ml


31

5) Kelompok V Undur-undur darat dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 1,26 mg/ml 6) Kelompok VI Undur-undur darat dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 2,52 mg/ml 7) Kelompok VII Undur-undur darat dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 5,04 mg/ml Semua pemberian dilakukan secara peroral, selanjutnya dilakukan UTGO dengan diberikan larutan glukosa monohidrat 15% b/v; 1,75 g/kgBB. Pengambilan cuplikan darah dilakukan sesaat sebelum UTGO sebagai menit ke-0 dan pada menit ke-15, 30, 45, 60, 90, 120, 180, 240, dan 300 setelah UTGO. Pengukuran kadar glukosa darah dilakukan dengan menggunakan metode GOD-PAP. Selanjutnya dibuat kur va UTGO dan perhitungan harga LDKK0-300 . 5. Penetapan kadar glukosa darah Kadar glukosa darah ditetapkan dengan metode GOD-PAP. Pada tiap kelompok dilakukan pengambilan cuplikan darah sebanyak 0,5 ml melalui vena lateralis ekor dan ditampung dalam microtube yang berisi 50 µl sodium oksalat 2%. Pengambilan cuplikan darah dilakukan sesaat sebelum perlakuan sebagai menit ke-0 dan pada menit ke-15, 30, 45, 60, 90, 120, 180, 240, dan 300 setelah UTGO. Kemudian darah geoxalated ini dipusingkan 3000 rpm selama 10 menit. Selanjutnya diambil 0,025 ml plasma darah, kemudian dilakukan pengukuran seperti dalam tabel V


32

Tabel V. Volume pengukuran kadar glukosa darah Bahan

Sampel (ml)

Standar (ml)

Blangko (ml)

Supernatan

0.025

-

-

Larutan baku glukosa

-

0,025

-

Asam benzoat 1% b /v

-

-

0,025

Pereaksi GOD-PAP

2,5

2,5

2,5

Bahan-bahan tersebut dicampur dan diinkubasi selama operating time. Kemudian kadar glukosa darah ditetapkan secara spektrofotometri visibel menggunakan metode GOD-PAP. Resapan diukur pada panjang gelombang maksimum. Kemudian kadar glukosa darah dihitung dengan rumus: Kadar glukosa = (As / Ast ) x 100 mg% Keterangan : As = resapan sampel

Ast = resapan standar

Selanjutnya dibuat kurva dengan mem-plot-kan nilai kadar glukosa darah lawan waktu ke-0 sampai menit ke 300 dengan metode trapezoid (LDDK 0-300) dan rumus yang digunakan adalah sebagai berikut: LDDK to-tn = t1 – to x (Co + C1 ) + t 2 – t 1 x (C2 + C1 ) + 2

t3 – t2

2

x (C3 + C2 ) + t n – tn-1 x (Cn + Cn-1 )

2

2

Keterangan: t

= waktu (jam-1/menit-1)

C

= konsentrasi zat dalam darah (mg/ml)

LDDK to-tn

= luas daerah di bawah kurva dari waktu ke-0 sampai ke-n


33

E. Analisis Hasil Data kadar glukosa darah pada tiap kelompok dianalisis secara statistik menggunakan metode General-Linier Model Repeated Measured. Dari harga LDDK 0-300 glukosa darah dilakukan uji distribusi menggunakan uji Kolmogorov Smirnov kemudian jika distribusinya normal dilanjutkan dengan analisis Anova One Way dan post hoc tests LSD dengan tingkat kepercayaan 95%. Jika nilai LDDK 0-300 glukosa darah mempunyai variansi yang berbeda maka dilakukan uji Kruskal Wallis dan dilanjutkan uji Mann Whitney dengan tingkat kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan masing- masing kelompok.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Determinasi Binatang Undur-Undur Darat Binatang undur-undur darat yang digunakan dalam penelitian ini dideterminasi agar tidak terjadi kesalahan dalam menggunakan binatang undurundur darat sehingga pada akhirnya dapat dikonfirmasi bahwa binatang yang dipakai memang benar binatang undur-undur darat (Myrmileon sp.). Bukti determinasi dapat dilihat pada lampiran 1. B. Pembuatan Simplisia Uji dan Preparasi Bahan Pembuatan simplisia uji sesuai tata cara yang tertera pada halaman 24. Preparasi bahan sesuai tata cara yang tertera pada halaman 26-27.

C. Percobaan Pendahuluan 1. Waktu resapan stabil glukosa Reaksi antara glukosa dan reagen GOD-PAP merupakan reaksi enzimatis yang menghasilkan senyawa berwarna, karena itulah maka perlu dilakukan uji stabilitas glukosa untuk mengetahui Operating Time (OT) dari reaksi tersebut. Penentuan OT ini bertujuan untuk mengetahui waktu resapan saat senyawa berwarna yang terbentuk memberikan resapan yang stabil pada pengukuran 34

35


menggunakan spektrofotometri visible. Pengukuran dilakukan pada panjang gelombang 500 nm (sesuai pada leaflet enzim GOD-PAP) selama 60 menit. Reagen GOD-PAP bekerja secara enzimatik dengan prinsip adanya GOD (glucose oxidase) yang akan mengkatalisis oksidasi glukosa menjadi asam glukonat dan hydrogen peroksida. Hidrogen peroksida akan bereaksi dengan adanya enzim peroksidase, bersama dengan fenol dan 4-amino-antipirin membentuk senyawa kuinonimin yang berwarna merah muda. Intensitas warna merah muda yang terbentuk sebanding dengan konsentrasi glukosa. Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut:

CH2OH O

H

H OH

H

OH

OH H

CH2OH

H

GOD

+ H2O 2

C

H

OH

OH

OH

+

H OH

+ O2

H

glukosa

H2O2

O

OH

H

OH hidrogen peroksida

asam glukonat

H2N

CH 3

PAP

+

O

N

CH 3

+ H2O hidrogen peroksida

N CH3 O

N CH3

N

O

N

OH fenol

4 amino-antipirin

kuinonimin (berwarna merah muda)

Gambar 4. Reaksi enzimatik antara glukosa dan reagen GOD-PAP(DiaSysy, 2006)


36

Data penetapan waktu resapan stabil glukosa standar 100 mg/dl tampak dalam tabel VI. Tabel VI. Data hasil penetapan waktu resapan stabil larutan glukosa standar Waktu (menit)

Resapan

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60

0,336 0,361 0,365 0,365 0,364 0,364 0,363 0,362 0,361 0,361 0,361 0,360

Grafik hubungan resapan glukosa murni 100 mg/dl pada ? 500 nm terhadap waktu seperti berikut:

Gambar 5. Grafik hubungan resapan glukosa murni 100 mg/dl pada ? 500 nm terhadap waktu


37

Dari grafik pada gambar 5 dapat dilihat bahwa pada menit ke-15 sampai menit ke35 memberikan grafik yang relatif datar, artinya pada menit tersebut terjadi reaksi yang stabil dan sempurna antara glukosa murni dengan pereaksi GOD-PAP. Hal ini berarti penetapan kadar glukosa darah dapat dilakukan pada menit ke-15-35 setelah pemberian pereaksi GOD-PAP. Akan tetapi untuk lebih meminimalkan perbedaan resapan, maka pengerjaan OT dilakukan dari menit ke-15 sampai 35. 2. Penetapan panjang gelombang maksimum Instrumen ukur (spektrofotometer visible) serta kondisi yang digunakan dalam penelitian ini berbeda dengan instrument yang digunakan oleh DiaSys. Oleh karena itu perlu dilakukan percobaan awal untuk mengetahui besar panjang gelombang yang memberi resapan yang maksimum. Penetapan panjang gelombang maksimum diukur pada rentang panjang gelombang 400-600nm.

Gambar 6. Kurva hubungan antara ? dan resapan maksimum glukosa standar selama operating time


38

Berdasarkan gambar 6 dapat dilihat bahwa resapan maksimum terjadi pada panjang gelombang 502 nm. Pada leaflet

DiaSys tertera bahwa panjang

gelombang saat resapan maksimum terjadi pada panjang gelombang 500nm. Perbedaan panjang gelombang ini dikarenakan instrumen yang digunakan belum tentu sama. Oleh karena itu pada pengukuran kadar glukosa pada percobaan ini dilakukan pada panjang gelombang 502 nm. 3. Pembuatan kurva baku Pada

penelitian

ini

penetapan

kadar

glukosa

darah

dilakukan

menggunakan spektrofotometer sehingga harus memenuhi persyaratan hukum Lambert-Beer. Hukum Lambert-Beer menjelaskan bahwa resapan akan meningkat seiring dengan meningkatnya kadar. Oleh karena itu perlu dilakukan pembuatan kurva baku untuk menunjukkan bahwa penetapan kadar glukosa dan secara spektrofotometri ini telah memenuhi hukum Lambert-Beer. Pembuatan kurva baku menggunakan larutan glukosa monohidrat 10 mg/ml (1% b/v) sebagai larutan stok glukosa. Tetapi larutan ini dibuat dengan menggunakan pelarut asam benzoat. Sebagai pelarut digunakan aquades dan ditambahkan asam benzoat sebagai pengawet glukosa selama kurun waktu tertentu. Pengawetan ini perlu dilakukan karena glukosa merupakan media yang baik untuk pertumbuhan mikroorganisme sehingga dengan penggunaan asam benzoat diharapkan dapat meminimalkan faktor- faktor yang dapat menganggu penetapan kadar glukosa darah.


39

Kurva baku dibuat dengan kadar 75 mg/dl, 100 mg/dl, 150 mg/dl, 200 mg/dl, 225 mg/dl. Kadar glukosa ditetapkan pada panjang gelombang 502 nm dan waktu resapan maksimum(operating time) pada menit ke-15-35 sesuai dengan hasil percobaaan pendahuluan yang telah dilakukan sebelumnya. Dari hasil pengukuran resapan larutan glukosa standar pada panjang gelombang 502 nm diperoleh data sebagai berikut: Tabel VII. Hubungan kadar dan resapan glukosa pada ? maksimum 502 nm

Kadar (mg/dl)

Resapan

Persamaan Regresi Linear

75,3705

0,266

100,4940

0,343

A = 0,03217

150,7410

0,478

B = 0,00307

200,9880

0,668

r = 0,9976

226,1115

0,717

y = 0,00307x + 0,03217

Dari tabel VII. diatas terlihat bahwa harga koefisien regresi hubungan kadar dan resapan glukosa pada ? 502 nm mendekati ±1, dan setelah dibandingkan dengan r tabel dengan taraf kepercayaan 95% dengan df3 (df: degree of freedom, yaitu jumlah sampel dikurangi dua) didapat bahwa r tabel sebesar 0,878. Dapat dilihat bahwa harga r hitung lebih besar dari r tabel. Hal ini berarti bahwa persamaan kurva baku tersebut memiliki linieritas yang baik. Pada persamaan kurva baku tersebut sudut yang dibentuk oleh kurva hubungan konsentrasi dan serapan sangat kecil, sehingga dari segi sensitivitas


40

kurva tersebut tidak dapat disajikan. Oleh karena itu, maka diperlukan faktor koreksi (manipulasi) menjadi 300 kali lebih besar. Sehingga persamaan kurva baku yang diperoleh menjadi y = 0,9199 X + 9,6508 dengan r = 0,9976.

Gambar 7. Kurva baku seri kadar glukosa pada ? maksimum 502 nm selama operating time ( pada menit 15-35 )

4. Penetapan waktu pemberian larutan glibenklamida Waktu pemberian larutan glibenklamida didasarkan pada prosentase penurunan harga luas daerah di bawah kurva dari menit ke-0 sampai menit ke-300 (LDDK 0− 300 ). Hasil UTGO dan perhitungan prosentase selisih LDDK 0− 300 teringkas pada tabel VIII.

41


Tabel VIII. Hasil UTGO dan perhitungan prosentase selisih LDDK glibenklamida Waktu pemberian

LDDK

larutan

Kontrol negatif

Perlakuan

glibenklamida

(CMC 1%)

(larutan

0− 300

sebelum UTGO

(mg.menit/dl)

Selisih LDDK

0− 300

0− 300

larutan

% Selisih LDDK

0− 300

(mg.menit/dl)

glibenklamida)

(menit ke-)

15

40435,517

25659,985

14775,532

36,541

30

46982,475

19380,681

27601,794

58,749

45

45915,023

31039,283

14875,740

32,398

Dari tabel VIII. dapat kita lihat bahwa larutan glibenklamida yang diberikan secara peroral pada menit ke-30 sebelum UTGO dapat menurunkan harga LDDK 0− 300 sebesar 58,749% yang nilainya paling besar dibandingkan pemberian pada menit yang lain sehingga ditetapkan pemberian larutan glibenklamida sebagai kontrol positif untuk dibandingkan dengan pemberian undur-undur darat yang digunakan yaitu 30 menit sebelum UTGO. Untuk lebih jelasnya dapat dilihat pada gambar 8.


42

Gambar 8. Diagram penentuan selang waktu pemberian glibenklamida terhadap % selisih LDDK

Pada gambar 8 diatas dapat diamati bahwa pada menit ke-30 glibenklamida memberikan prosentase selisih LDDK 0− 300 yang paling besar terhadap kontrol dibandingkan menit- menit lainnya. Pada menit ke-30 inilah glibenklamida telah mencapai onset sehingga kemampuan untuk menurunkan kadar glukosa darah paling tinggi dibandingkan dengan yang lainnya. Jadi, kemampuan glibenklamida yang paling efektif dalam menurunkan kadar glukosa darah adalah pada menit ke-30. Jika dibandingkan dengan menit ke-15 dan menit ke-45, kemampuan menurunkan kadar glukosa darah berbeda banyak dengan menit ke-30, sehingga dipilih menit ke-30.


43

5. Penetapan waktu pemberian undur-undur darat Waktu pemberian undur-undur darat didasarkan pada prosentase penurunan harga luas luas daerah di bawah kurva dari menit ke-0 sampai menit ke-300 (LDDK 0− 300 ). Hasil UTGO dan perhitungan prosentase selisih LDDK 0− 300 teringkas pada tabel IX.

Tabel IX. Hasil UTGO dan perhitungan prosentase selisih LDDK darat Waktu pemberian undur-undur darat sebelum UTGO

LDDK

0− 300

0− 300

undur-undur

(md.menit/dl)

(menit ke-)

15

41539,097

30

35867,141

45

30892,516

Dari tabel IX. dapat kita lihat bahwa undur-undur darat yang diberikan secara peroral pada menit ke-45 sebelum UTGO memberikan harga LDDK 0− 300 sebesar 30892,516 yang nilainya paling kecil dibandingkan pemberian pada menit yang lain sehingga ditetapkan pemberian undur- undur darat yang digunakan yaitu 45 menit sebelum UTGO. Untuk lebih jelasnya dapat dilihat pada gambar 9.


44

Gambar 9. Diagram penentuan selang waktu pemberian undur-undur darat terhadap LDDK

Pada gambar 9 diatas dapat diamati bahwa pada menit ke-45 undur- undur darat memberikan nilai LDDK 0− 300 yang paling kecil dibandingkan menit-menit lainnya. Pada menit ke-45 inilah undur-undur darat telah mencapai onset sehingga kemampuan untuk menurunkan kadar glukosa darah paling tinggi dibandingkan dengan yang lainnya. Berdasarkan data tersebut maka ditetapkan pemberian undur- undur darat yang digunakan yaitu 45 menit sebelum UTGO.


45

D. Efek Hipoglikemik Undur-undur Darat Pada penelitian ini dilakukan penetapan kadar glukosa darah dengan kontrol negatif diberi aquades; kontrol negatif diberi larutan CMC 1%; kontrol positif diberi larutan glibenklamida dengan dosis 0,45 mg/kgBB; dan empat kelompok perlakuan yaitu kelompok I diberi undur-undur dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 0,63 mg/ml; kelompok II diberi undur- undur dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 1,26 mg/ml; kelompok III diberi undur-undur dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 2,52 mg/ml; dan kelompok IV diberi undurundur dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 5,04 mg/ml. Kadar glukosa darah diukur menggunakan spektrofotometri visible dengan metode enzimatik GOD-PAP. Sebelum dilakukan pengukuran resapan glukosa perlakuan terlebih dahulu dilakukan pengukuran resapan glukosa standar. Perhitungan kadar glukosa menggunakan perbandingan relatif antara kadar dan resapan dari standar dan perlakuan.

46


Kontrol –

Kontrol -

Kontrol +

Perlakuan I

Perlakuan II

Perlakuan III

Perlakuan IV

(aquades)

(CMC1%)

128,5805

122,6744

98,9904

121,3724

118,9950

107,6801

102,3057

0

165,7347

160,2880

127,3538

147,7438

147,1689

149,0388

145,1190

15

201,7217

164,1600

129,3574

142,6602

142,7386

143,0826

133,0209

30

202,3701

138,4082

105,8151

138,0849

123,4945

118,9901

121,5687

45

Kadar glukosa darah

182,5934

129,1277

73,5697

122,7704

116,5029

146,0273

118,8085

60

rata-rata (mg/dl)

142,9753

112,6564

45,7697

120,6734

108,4038

109,2193

113,3467

90

tikus putih jantan

147,3846

113,5168

40,7607

116,0981

87,0138

112,0301

112,4070

120

126,6353

111,1199

49,4639

108,5361

90,6134

109,6208

113,1705

180

125,7275

108,9073

46,9594

99,2584

100,2354

105,5385

110,1753

240

126,3759

113,8241

58,1670

105,4859

101,0661

107,5462

110,1753

300

43474,7158

35872,5835

18573,3720

34576,8265

31365,4540

34713,7670

34600,8437

Tabel X. Data kadar glukosa darah rata-rata dan LDDK

0− 300

Kelompok perlakuan

LDDK

setiap kelompok perlakuan

0− 300

(mg.menit/dl)


47

Selanjutnya grafik hubungan antara kadar glukosa darah dan waktu sampling dari tiap-tiap kelompok perlakuan yaitu aquades, larutan CMC, larutan glibenklamida, dan undur- undur darat dapat dilihat pada gambar 10.

Gambar 10. Kurva hubungan antara waktu sampling dan kadar rata-rata glukosa darah akibat pemberian aquades, CMC, glibenklamida, dan undur-undur darat Keterangan: Kontrol negatif

: aquades

Kontrol negatif

: CMC 1 %

Kontrol positif

: glibenklamida dosis 0,45 mg/kgBB

Konsentrasi 1

: undur-undur dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 0,63m g/ml

Konsentrasi 2

: undur-undur dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 1,26 mg/ml

Konsentrasi 3


Konsentrasi 4

: undur-undur dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 5,04 mg/ml.


48

Gambar 10 memaparkan respon kadar glukosa darah hewan uji akibat pembebanan glukosa saat UTGO pada berbagai perlakuan. Pada kelompok kontrol negatif aquades menunjukkan rata-rata kadar glukosa paling tinggi dibandingkan perlakuan lainnya. Hal ini dikarenakan pada kontrol negatif aquades, tikus hanya diberi aquades yang tidak memiliki efek terapetik, sehingga kadar glukosa darah ditentukan oleh kemampuan tubuh tikus sendiri untuk menurunkan kadar glukosa tanpa adanya penambahan obat ataupun undur-undur darat. Hal ini memberikan hasil bahwa kelompok kontrol negatif aquades ini mempunyai rata-rata kadar glukosa yang paling tinggi jika dibandingkan dengan kelompok lainnya. Hasil percobaan menunjukkan bahwa kadar glukosa darah mencapai maksimum pada menit ke-30 sampai menit ke-60, kemudian kadar glukosa darah menurun kembali setelah dua sampai tiga jam setelah pemberian glukosa oral. Hal ini sesuai dengan teori Mayes (1990) dimana kadar glukosa darah pada individu normal meningkat dalam satu jam setelah pemberian glukosa oral. Absorpsi glukosa menjadi normal kembali setelah dua sampai tiga jam setelah pemberian glukosa. Hal ini berarti bahwa tubuh hewan uji tersebut berada dalam keadaan sehat karena masih dapat mentoleransi pembebanan glukosa UTGO pada tingkat normal. Kontrol positif memberikan rata-rata kadar glukosa yang paling rendah diantara kelompok perlakuan lainnya. Hal ini disebabkan karena penggunaan larutan glibenklamida sebagai kontrol positif, merupakan obat hipoglikemik oral

49


golongan sulfonilurea yang memiliki efek terapetik menurunkan kadar glukosa darah. Dari kelompok perlakuan I sampai IV, ternyata kelompok perlakuan II dengan dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 1,26 mg/ml memberikan penurunan kadar glukosa darah yang paling baik dibandingkan perlakuan dengan undur- undur darat lainnya. Hal ini terlihat dari nilai LDDK 0− 300 kelompok tersebut paling kecil dari nilai LDDK 0− 300 perlakuan undur-undur darat lainnya (I, III, dan IV). Perlakuan undur-undur darat lain hampir sama nilainya satu sama lain, hanya mempunyai selisih sedikit antara perlakuan satu dengan yang lainnya. Data kadar glukosa darah kemudian dianalisis mengikuti tata cara rancangan GLM Repeated Measure untuk melihat perbedaan harga kadar glukosa darah pada setiap waktu cuplikan akibat berbagai perlakuan. Hasil analisis statistic secara GLM Repeated Measure menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna apabila probability (p) < 0,05 dan perbedaan yang tidak bermakna apabila p > 0,05. Hasil analisis dapat dilihat secara ringkas pada tabel XI. Tabel XI. Hasil analisis GLM Repeated Measure kadar glukosa darah Subjek variasi

Jumlah kuadrat

Periode (waktu)

124820,054

Periode perlakuan

43697,860

Db

Rata-rata kuadrat

Tes antar subjek 9 13868,895 54

F

p

67,271

0,000

BB

809,220

3,925

0,000

BB

26035,531

10,303

0,000

BB

Diantara subjek Perlakuan (konsentrasi) Keterangan

156213,184

6

: BB = berbeda bermakna (p < 0,05) BTB = berbeda tidak bermakna (p > 0,05)


50

Pada tabel XI dapat kita lihat adanya perbedaan yang bermakna (p < 0,05) antara purata kadar glukosa darah hewan uji yang dipengaruhi oleh periode waktu (p= 0,000). Hal ini menunjukkan bahwa secara statistik terjadi perbedaan kadar glukosa darah yang bermakna (signifikan) dari setiap waktu sampling darah (menit ke-0 sampai 300) pada taraf kepercayaan 95%. Juga terlihat perbedaan yang bermakna (p < 0,05) antara purata kadar plasma hewan uji yang dipengaruhi oleh perlakuan (konsentrasi), sehingga perlakuan antar kelompok terbukti memberi pengaruh signifikan terhadap perbedaan kadar glukosa darah pada menit ke-0 sampai 300 dengan taraf kepercayaan 95%. Kemampuan undur-undur darat dalam menurunkan kadar glukosa darah dapat diperjelas dengan membandingkan nilai LDDK 0− 300 glukosa darah dari masing- masing kelompok. LDDK 0− 300 merupakan besaran yang menggambarkan jumlah glukosa darah yang diamati pada menit ke-0 sampai menit ke-300 pada setiap kelompok perlakuan. Tabel XII berikut akan menunjukkan adanya perbedaan antara kelompok kontrol negatif aquades, kontrol negatif CMC, kontrol positif glibenklamida, perlakuan I, II, III, dan IV.


51

0− 300

Tabel XII. pengaruh praperlakuan undur-undur darat terhadap LDDK kadar glukosa darah tikus putih jantan dan prosentase perbedaan terhadap kontrol positif dan kontrol negatif Prosentase perbedaan terhadap Kelompok perlakuan

Mean LDDK N

0− 300

±SE

(mg.menit/dl)

Kontrol

Kontrol

Kontrol

negatif

negatif

positif

CMC

aquades

glibenklamida

Kontrol negatif CMC

5

35872,58 ± 392,17997

-

-

93,14

Kontrol negatif Aquades

5

43474,72 ± 3185,877

-

-

-

Kontrol positif glibenklamida

5

18573,37 ± 328,87961

-48,22

-

-

Perlakuan I

5

34576,83 ± 1893,881

-

-20,47

86,16

Perlakuan II

5

31365,45 ± 3075,361

-

-27,85

68,87

Perlakuan III

5

34713,77 ± 1577,326

-

-20,15

86,90

Perlakuan IV

5

34600,84 ± 2315,080

-

-20,41

86,29

Keterangan: Kontrol negatif

: aquades

Kontrol negatif

: CMC 1 %

Kontrol positif


Perlakuan I


Perlakuan II


Perlakuan III


Perlakuan IV


Pada tabel diatas menunjukkan adanya perbedaan antara

semua kelompok

perlakuan bila dibandingkan dengan kontrol negatif aquades. Perbedaan kelompok perlakuan I, II, III, IV dengan kontrol negatif aquades secara berturut-turut adalah 20,47%; 27,85%; 20,15%; dan 20,41%. Penurunan yang paling besar terlihat pada kontrol positif dengan pemberian glibenklamida dibandingkan dengan kontrol


52

negatif CMC 1% yaitu sebesar 48,22%. Sedangkan pada kelompok perlakuan penurunan paling besar terjadi pada perlakuan II dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 1,26 mg/ml yaitu 27,85%. Pada tabel XII diatas juga menunjukkan adanya perbedaan antara semua kelompok bila dibandingkan dengan kontrol positif glibenklamida. Perbedaan kelompok perlakuan I, II, III, IV dengan kontrol negatif aquades secara berturutturut adalah 86,16 %; 68,87 %; 86,90 %; dan 86,29 %. Perbedaan yang paling besar terhadap kontrol positif glibenklamida terlihat pada kontrol negatif CMC 1% yaitu sebesar 93,14%. Sedangkan pada kelompok perlakuan perbedaan paling kecil terhadap kontrol positif glibenklamida terjadi pada perlakuan II dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 1,26 mg/ml yaitu 68,87%. Dari jabaran diatas maka dapat dilihat bahwa undur- undur darat yang dapat menurunkan kadar glukosa dalam darah adalah perlakuan II dengan diberi undur- undur darat dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 1,26 mg/ml. Perlakuan ini lebih baik dibandingkan perlakuan dengan undur- undur darat lainnya. Gambaran mean LDDK pada tiap kelompok perlakuan dapat dilihat pada gambar 11.


Gambar 11. Diagram LDDK

0− 300

53

± SE glukosa darah masing-masing perlakuan

Keterangan: Kontrol negatif

: aquades

Kontrol negatif

: CMC 1 %

Kontrol positif


Konsentrasi 1


Konsentrasi 2


Konsentrasi 3


Konsentrasi 4


Data LDDK 0− 300 dari tujuh kelompok perlakuan ini kemudian dianalisis menggunakan uji Anova One Way untuk terlebih dahuju mengetahui homogenits variansi data LDDK 0− 300 . Dari hasil uji tersebut menunjukkan bahwa variansi data LDDK 0− 300 memang berbeda, sehingga uji Anova One Way tidak dapat


54

dilanjutkan. Syarat-syarat yang harus dipenuhi agar dapat diuji menggunakan uji Anova One Way adalah data mempunyai distribusi normal, dan variansi data sama. Data dalam percobaan ini memenuhi syarat distrib usi normal tetapi tidak memenuhi syarat variansi data sama, sehingga data percobaan ini tidak dianalisis dengan uji Anova One Way tetapi menggunakan uji Kruskal-Wallis. Perbedaan variansi data LDDK 0− 300 dapat dilihat pada tabel XIIIa yang menunjukkan bahwa nilai p < 0,05 yaitu 0,007 Tabel XIIIa. Hasil analisis homogenitas variansi menggunakan uji Anova One Way

Levene Statistic 3.757

df1 6

df2 28

Sig. .007

Uji Kruskal-Wallis dilakukan untuk mengetahui apakah ada perbedaan nilai LDDK 0− 300 yang bermakna dari kelompok-kelompok perlakuan. Berdasarkan tabel XIIIb dapat diketahui bahwa ketujuh kelompok perlakuan memiliki rata-rata nilai LDDK 0− 300 (purata) yang berbeda. Hal ini disebabkan nilai probabilitasnya yaitu sebesar 0,007 atau p < 0,05 0− 300

Tabel XIIIb. Test Mean LDDK ketujuh kelompok perlakuan dengan uji Kruskal-Wallis

Chi-Square df Asymp. Sig.

LDDK 17.669 6 .007

Setelah diketahui bahwa ada perbedaan LDDK 0− 300 yang signifikan di antara ketujuh kelompok perlakuan, masalah yang timbul adalah kelompok perlakuan mana yang berbeda dan tidak berbeda. Untuk itu analisis Kruskal-

55


Wallis ini dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney untuk mengetahui pengaruh peringkat konsentrasi undur-undur darat pada masing- masing kelompok. Hasil uji dinyatakan berbeda bermakna antar kelompok perlakuan bila nilai p < 0,05. Hasil ini secara ringkas dapat dilihat dalam tabel XIV. 0− 300

Tabel XIV. Hasil uji Mann-Whitney LDDK terbebani glukosa

glukosa darah tikus putih jantan

1

2

3

4

5

6

7

1

-

*

**

BB

BB

BTB

BB

2

*

-

BB

***

***

***

***

3

**

BB

-

BB

BB

BB

BB

4

BB

***

BB

-

BTB

BTB

BTB

5

BB

***

BB

BTB

-

BTB

BTB

6

BTB

***

BB

BTB

BTB

-

BTB

7

BB

***

BB

BTB

BTB

BTB

-

Keterangan: 1

= Kontrol Negatif Aquades

2

= Kontrol Negatif CMC

3

= Kontrol Positif Glibenklamida

4

= undur-undur dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 0,63 mg/ml

5


6


7


BB

= Berbeda Bermakna

BTB

= Berbeda Tidak Bermakna

*

= kontrol negatif aquades dan kontrol negatif CMC t idak berkaitan satu sama lain

**

= kontrol positif glibenklamid tidak dilarutkan menggunakan aquades

***

= perlakuan undur-undur darat tidak dilarutkan dalam CMC


56

Hasil uji Mann-Whitney LDDK 0− 300 glukosa darah pada tabel XIV menunjukkan perbedaan yang bermakna antara kontrol negatif CMC 1% terhadap kontrol positif glibenklamida. Kontrol positif glibenklamida tidak dibandingkan dengan kontrol negatif aquades karena larutan glibenklamida dibuat dengan pelarut CMC 1% bukan menggunakan pelarut aquades. Hal ini dilakukan karena glibenklamid tidak larut dalam aquades. Kelompok perlakuan undur- undur darat tidak dibandingkan dengan kontrol negatif CMC 1% karena kelompok perlakuan tersebut tidak menggunakan perlarut CMC 1% tetapi menggunakan pelarut aquades sehingga kelompok perlakuan undur- undur darat hanya dibandingkan dengan kontrol negatif aquades. Semua

kelompok

perlakuan

menggunakan

undur-undur

darat

menunjukkan perbedaan yang bermakna bila dibandingkan dengan kontrol negatif aquades kecuali perlakuan III dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 1,26 mg/ml. Perlakuan III menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna dibandingkan dengan kontrol negatif aquades, hal ini berarti bahwa perlakuan III (dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 2,52 mg/ml) dapat menurunkan kadar glukosa darah tetapi sangat lemah. Sedangkan kelompok perlakuan dengan undur-undur darat lainnya dapat menurunkan kadar glukosa darah tetapi perlu dilihat juga bila dibandingkan dengan kontrol positif glibenklamida. Kelompok perlakuan undur-undur darat dibandingkan juga dengan kontrol positif

glibenklamida.

Semua

kelompok

perlakuan

undur- undur

darat

menunjukkan perbedaan yang bermakna dengan kontrol positif glibenklamida.


57

Hal ini menunjukkan bahwa undur- undur darat kecuali perlakuan III (dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 2,52 mg/ml) dapat menurunkan kadar glukosa darah tetapi penurunan yang terjadi tidak sebaik glibenklamida. Dari semua perlakuan dengan undur-undur darat, perlakuan yang memberikan penurunan terbesar adalah perlakuan II dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 1,26 mg/ml. Hal ini dilihat dari Gambar 11 yaitu diagram LDDK 0− 300 glukosa darah masing- masing perlakuan, dimana perlakua n II mempunyai nilai purata LDDK 0− 300 yang terkecil dibandingkan perlakuan dengan undur- undur darat lainnya. Perlu ditekankan juga walaupun perlakuan II mempunyai kemampuan menurunkan kadar glukosa darah yang lebih besar dibandingkan perlakuan dengan undur-undur darat lainnya, tetapi kemampuan perlakuan II tidak sebaik yang dimiliki glibenklamida.

kontrol positif

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan Hasil penelitian menunjukkan bahwa undur- undur darat dengan dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 0,63 mg/ml sampai dengan konsentrasi 5,04 mg/ml memberikan penurunan kadar glukosa darah sebesar 20,15% sampai 27,85% terhadap kontrol negatif aquades. Undur-undur darat dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 0,63 mg/ml; 1,26 mg/ml; 5,04 mg/ml memberikan efek penurunan kadar glukosa darah secara berbeda bermakna terhadap kontrol negatif aquades. Undur-undur darat dosis 6,3 mg/kgBB dengan konsentrasi 0,63 mg/ml; 1,26 mg/ml; 5,04 mg/ml juga memberikan efek penurunan kadar glukosa darah secara berbeda bermakna terhadap kontrol positif glibenklamida. Nilai purata kadar glukosa darah yang didapatkan dari perlakuan dengan undur-undur darat (terdapat dalam tabel XII)

dipertimbangkan kembali. Purata kadar glukosa darah dari

perlakuan undur-undur darat lebih mendekati nilai kontrol negatif aquades. Hal ini menunjukkan bahwa hipoglikemik

tetapi

undur-undur darat terbukti memiliki potensi efek potensi

yang

dimiliki

kecil

dibandingkan

dengan

glibenklamid. B. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang efek hipoglikemik undurundur darat dalam jangka waktu yang lebih lama (pemberiannya bukan dosis tunggal tetapi dosis berulang).

58


59

DAFTAR PUSTAKA Anonim, 1979, Farmakope Indonesia, Edisi III, 7, 9, 32, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta Anonim, 1991, Penapisan Farmakologi, Pengujian Fitokimia dan Pengujian Klinik (Pedoman Pengujian dan Pengembangan Fitofarmaka), 233-240, Balai Pengembangan dan Pemanfaatan Obat Bahan Alam, Jakarta Anonim, 2002, News and article, Error! Hyperlink reference not valid.. diakses tanggal 28 September 2007 Anonim, 2008, Antlions: The good, the odd, the ugly, Error! Hyperlink reference not valid.. diakses tanggal 20 Januari 2008

Armstrong, W.P., 2007, Antlions: Denizens Of The Sand, Error! Hyperlink reference not valid.. diakses tanggal 20 Januari 2008

Cartailler, J.P., 2004, Insulin - from secretion to action, www.betacell.org/content/ articles/print.php?aid=1, diakses tanggal 30 April 2008 Crowley, Leonard V., 2001, An Introduction to Human Disease: Pathology and Pathophysiology Corelations, 5 th Edition, 586, Jones and Bartlett Publishers, Canada. Dollery, S.C., 1999, Therapeutic Drugs, 2 nd Edition, Vol I, G 64-69, Churchill Livingstone, London Fatah, A.M., 1989, Spektroskopi, 45-46, Fakultas Farmasi UGM, Yogyakarta Handoko, T., dan Suharto, B., 1995, Insulin, Glukagon dan Anti Diabetik Oral dalam Ganiswarna, (Ed.), Farmakologi dan Terapi, Edisi 4, 462-473, Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta


60

Irawan,M.A., 2007, Glukosa dan Metabolisme Energi, http://www.pssplab.com/ journal/06.pdf, diakses tanggal 25 April 2008 Katzung, B.G., 2002, Farmakologi Dasar dan Klinik. diterjemahkan oleh Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. Buku 2 Edisi 8, 699. Salemba Medika. Jakarta Khopkar, 1990, Basic Concepts of Analytical Chemistry, diterjemahkan oleh Saptoraharjo, 193, 204, UI Press, Jakarta Lanywati, E., 2006, Diabetes Mellitus Penyakit Kencing Manis, 13-14, 30, Kanisius. Yogyakarta Mayes, P.A., 1990, Glukoneogenesis dan Pengendalian Kadar Glukosa Darah, dalam Murray, R.K., Granner, D.K., Mayes, P.A., Rodwell, V.W., (Eds.), Harper’s Biochemistry, diterjemahkan oleh Andry Hartono, Edisi 22, 227, ECG, Jakarta Merentek, E., 2006, Resistensi Insulin Pada Diabetes mellitus Tipe 2, Majalah Cermin Dunia Kedokteran, No 150,38, 39, Jakarta Mulja, H.M., Suharman, 1995, Analisis Instrumental, 1-59, 238 Airlangga University Press, Surabaya

Nolte, M.S., and Karam, J.H., 2002, Hormon Pankreas dan Obat Anti Diabetes, dalam Katzung, B.G., (Eds.), Farmakologi Dasar dan Klinik, diterjemahkan oleh Bagian Farmakologi Fakultas edokteran Universitas Airlangga, Buku 2, Edisi 8, 699, Salemba Medika, Jakarta

Subroto, Ahkam. M, 2006, Ramuan Herbal untuk Diabetes Melitus, 5-6, Penebar Swadaya, Jakarta


61

Swanson, Mark, 2007, Antlion Taxonomy, Error! Hyperlink reference not valid.. diakses tanggal 20 Januari 2008 Triptitt, C.L., Reasner, C.A., and Isley, W.L., 2005, Endocrinologic Disorders, in DiPiro, J.T., Talbert, R.L., Yee, G.C., Matzke, G.R., Wells, B.G., and Posey, L.M., (Eds.), Pharmacotherapy: A Pathophysiologic Approach, 6 th Edition, 1333-1363, McGraw-Hill Companies, USA Widowati, L., Dzulkarnain, B., dan Sa’roni, 1997, Tanaman Obat untuk Diabetes Mellitus, Cermin Dunia Kedokteran., 116, 53-60, Jakarta Widyaningrum, Y., 2004, Efek Hepatoprotektif Kombinasi Jus Wortel ( Daucus arota L.) dan Apel Hijau (Pyrus macus L.) pada Mencit Jantan Terinduksi Parasetamol, Skripsi, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Wijayakusuma, Hembing., 2006, Bebas Diabetes Mellitus ala Hembing, 7-8, 1516, Puspa Swara, Jakarta

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 1. Determinasi binatang undur-undur darat.

62

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lamp iran 2.

Foto undur-undur darat

Foto undur-undur darat 1

Foto undur-undur darat 2

63

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 3.

Foto air halusan undur- undur darat Foto air halusan undur- undur darat 1

Foto air halusan undur- undur darat 2

64


Foto hewan uji percobaan (tikus putih jantan)

Foto tikus putih jantan 1

Foto tikus putih jantan2

65

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 5. Foto alat penelitian

Foto mortir dan stamper

Foto timbangan elektrik (Mettler Toledo AB240, Switzerland)

66

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Foto sentrifuge (Hettich WBA SS, Germany)

Foto vortex (Janke-Kankel IKA®- Labortechnik)

Foto spektrofotometri visible (Optima ® SP300, Japan)

67


68

Lampiran 6. Preparasi bahan a. Pembuatan larutan asam benzoat 0,1% b/v Berat kertas

= 0,4658 g

Berat kertas + asam benzoat

= 0,5665 g

Berat kertas + sisa

= 0,4660 g -

Berat asam benzoat

= 0,1005 g

Sebanyak 0,1005 g serbuk asam benzoat p.a. dilarutkan dengan aquades panas dalam labu takar 100,0 ml sampai tanda. b. Pembuatan Larutan Stock Glukosa 10 mg/ml Berat kertas

= 0,4040 g

Berat kertas + glukosa monohidrat

= 1,4051 g

Berat kertas + sisa

= 0,4048 g -

Berat glukosa monohidrat

= 1,0003 g

Glukosa Monohidrat sebanyak 1,0003 g dilarutkan dengan larutan asam benzoat 0,1% p.a. b/v dalm labu takar 50 ml sampai tanda.


69

c. Natrium oksalat 2% b /v Berat kertas

= 0,4383 g

Berat kertas + sodium oksalat

= 5,4819 g

Berat kertas + sisa

= 0,4458 g -

Berat sodium oksalat

= 5,0361 g

Natrium Oksalat sebanyak 5,0361 g dilatutkan dengan aquadest dalam labu takar 250 ml sampai tanda. d. Keseragaman bobot tablet Berat rata-rata tablet glibenklamida = 201,79 mg. Berdasarkan Anonim 1979 tablet dengan bobot 151mg - 300mg memiliki penyimpangan rata-rata tablet pada kolom A = 7.5 % dan kolom B = 15% Kolom A: 7,5% x 201,79 mg = 15,13 mg ± 201,79 mg. Berdasarkan penimbangan dua puluh tablet, tidak ada tablet yang menyimpang dari range 186,66 mg – 216,92 mg. Kolom B: 15% x 201,79 mg = 30,2685 mg ± 201,79 mg. Berdasarkan penimbangan dua puluh tablet, tidak ada tablet yang menyimpang dari range 171, 5215 mg - 232,0585 mg. Ini berarti bahwa semua tablet memenuhi keseragaman bobot tablet.


70

e. Pembuatan larutan glibenklamida 0,1125mg/ml Berat rata-rata tablet glibenklamida = 201,79 mg Tiap tablet mengandung 5 mg zat aktif glibenklamida sehingga serbuk yang harus ditimbang untuk mendapatkan 25 mg zat aktif adalah = (25 mg : 5 mg ) x 201,79 mg = 1,008975 g Sejumlah 1,008975 g dilarutkan dalam labu ukur 10 ml sebagai larutan induk dengan konsentrasi 0,25%. Untuk mendapatkan larutan glibenklamida dengan konsentrasi 0,1125 mg/ml dengan volume 10 ml, maka C1 . V1 = C2 . V2 25 mg/10ml .

x

= 0,1125 mg/ml . 10 ml x

= 0,45 ml

Sebanyak 0,45 ml larutan induk dilarutkan dalam labu ukur 10 ml dengan aquades hingga tanda. f. Perhitungan Volume Penyuntikan •

Glibenklamida D

: 0,45 mg/kgBB

C

: 0,1125 mg/ml

BB : 188,3 g

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI V = (D x BB) = 0,45 mg/kgBB x 188,3 g = 0,75 ml C

•

0,1125 mg/ml

Air halusan undur-undur darat dosis 0,0063 g/kgBB D

: 0,0063 g/kgBB

C

: 0,0315 g/25ml

BB : 200 g

V=

•

( D × BB) 0,0063 g / kgBB × 0,200kg = = 1,0 ml C 0,0315 g / 25ml

Glukosa D

: 1,75 g/kgBB

C

: 15 g/100ml

BB : 178,7 g

V=

( D × BB) 1,75g / kgBB × 178,7 kg = = 2,085 ml C 15 g / 100ml

71

72

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI g. Perhitungan LDDK 0-300 Menit

0

15

30

45

60

90

120

180

240

300

Resapan

0,389

0,416

0,475

0,425

0,430

0,333

0,395

0,386

0,323

0,352

Kadar

119,54 127,84 145,97 130,60 132,14 102,33 121,38 118,62 99,26 108,17

Standar glukosa 100.18 mg/dl = 0,326 Kadar glukosa menit 0 = (0,389: 0,326) x 100.18 mg/dl = 119,54 mg/dl

LDDK 0-300 =

15 − 0 30 − 15 × (119,54 +127,84) + × (127,84 +145,97) + 2 2 45 − 30 60 − 45 × (145,97 +130,60) + × (130,60 +132,14) + 2 2 90 − 60 120 − 90 × (132,14 +102,33) + × (102,33 +121,38) + 2 2 180 − 120 240 − 180 × (121,38 +118,62) + × (118,62 +99,26) 2 2

+

300 − 240 × (99,26 +108,17) = 34785,66 mg.menit /dl 2

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 7. Data kadar glukosa darah (mg/dl) pada tiap perlakuan dan waktu sampling. Kontrol Negatif Aquadest 0

1

2

3

4

5

15

30

45

60

90

12

18

24

30

LD

0

0

0

0

DK

15

19

25

25

21

18

18

15

14

15

5288

4,3

9,0

5,7

6,4

6,2

0,9

4,4

3,3

3,2

5,6

8,71

22

63

99

47

46

07

73

50

99

19

80

6

2

4

8

1

6

9

0

5

4

13

18

22

19

16

14

13

12

11

10

4220

8,1

8,0

9,2

4,8

1,1

4,2

9,7

7,4

4,1

8,6

9,33

12

40

14

48

30

72

33

13

20

09

54

2

1

4

5

9

2

3

4

9

4

98,

12

14

15

15

98,

10

73,

12

11

3352

88

4,8

8,1

3,6

3,9

88

4,3

27

2,5

6,7

1,39

32

19

62

74

98

32

94

08

50

14

51

7

7

2

4

3

6

13

14

19

20

20

14

16

15

13

12

4683

8,4

0,7

6,4

8,7

6,8

4,2

4,0

7,5

2,9

7,0

4,15

36

05

69

89

44

72

48

64

24

89

00

7

4

9

5

4

1

2

8

7

9

2

11

17

17

19

17

14

14

12

11

12

4191

3,1

6,0

8,9

8,0

4,7

6,5

4,2

1,5

5,7

3,8

9,98

48

44

62

90

47

41

72

77

41

47

06

3

5

3

6

6

6

2

7

9

1

−

12

16

20

20

18

14

14

12

12

12

4347

X

8,5

5,7

1,7

2,3

2,5

2,9

7,3

6,6

5,7

6,3

4,71

80

34

21

70

93

75

84

35

27

75

58

5

7

7

1

4

3

6

3

5

9

73


74

Kontrol Negatif CMC

0

15

30

45

60

90

120

180

240

300

LDDK

1

119,5399

127,8371

145,9678

130,6028

132,1393

102,3311

121,3837

118,6180

99,2581

108,1698

34785,6612

2

127,8371

167,7861

169,9372

142,2802

131,8320

118,3107

127,2225

104,4822

103,8676

104,1749

36025,6192

3

118,6180

176,0833

169,0153

130,6028

131,5247

102,9457

96,4924

124,1494

122,3056

124,4567

36935,9972

4

113,7012

150,2700

172,3956

141,6656

98,0289

120,7691

128,1444

107,2479

114,9304

122,3056

36412,8179

5

133,6758

179,4636

163,4839

146,8897

152,1138

118,9253

94,3413

101,1019

104,1749

110,0136

35202,8218

−

122,6744

160,2880

164,1600

138,4082

129,1277

112,6564

113,5168

111,1199

108,9073

113,8241

35872,5835

X

Kontrol Positif Glibenklamida 0

15

30

45

60

90

120

180

240

300

LDDK

1

100,8061

141,8173

133,6777

93,6057

54,7859

39,7589

36,3153

53,5337

55,0990

50,7161

18391,6392

2

115,8331

130,8601

138,6867

106,7543

76,0742

62,9256

66,3693

44,1418

38,8198

44,7679

19420,0495

3

98,6147

122,4074

121,4683

102,3714

90,1620

42,8896

24,4189

36,6283

48,8378

75,7611

17748,2958

4

86,0922

125,2250

132,1124

112,7025

69,4999

34,1238

30,6801

50,7161

49,4639

62,6125

18053,5317

5

93,6057

116,4593

120,8421

113,6417

77,3264

49,1508

46,0202

62,2994

42,5765

56,9774

19253,3438

−

98,9904

127,3538

129,3574

105,8151

73,5697

45,7697

40,7607

49,4639

46,9594

58,1670

18573,3720

X

Perlakuan 1 0

15

30

45

60

90

120

180

240

300

LDDK

1

139,8006

171,5735

143,9311

144,8843

135,3524

126,4560

128,3624

139,4829

123,5965

123,5965

40062,4126

2

128,0447

126,1383

119,7837

129,6333

128,9979

102,6264

91,8236

98,1782

73,0776

63,5457

28888,6883

3

82,9272

133,4461

156,0048

131,8574

104,5327

128,3624

102,3086

102,3086

96,9073

88,3286

32351,1369

4

128,6801

147,1084

153,1452

146,7907

136,3056

130,2688

115,6532

103,8973

101,6732

92,4591

34958,1009

5

127,4092

160,4530

140,4361

137,2588

108,6632

115,6532

142,3425

98,8136

101,0377

159,4998

36623,7937

−

121,3724

147,7438

142,6602

138,0849

122,7704

120,6734

116,0981

108,5361

99,2584

105,4859

34576,8265

X


75

Perlakuan 2 0

15

30

45

60

90

120

180

240

300

LDDK

1

131,5244

114,9108

121,1409

105,2195

97,6049

81,6836

80,2991

71,6462

85,4909

68,8773

25860,1196

2

133,2550

168,2128

162,6749

143,6385

130,8322

137,4084

98,2972

113,1802

110,4113

118,3720

36573,3010

3

75,4535

132,9089

94,4899

88,2598

57,4554

69,5695

54,5714

66,8005

75,7996

84,7986

22101,2907

4

130,4860

173,7507

191,4026

155,4065

152,6375

125,2943

85,4909

100,7200

110,0652

112,1419

35838,6680

5

124,2559

146,0613

143,9846

124,9482

143,9846

128,0632

119,4103

100,7200

119,4103

121,1409

36453,8907

−

118,9950

147,1689

142,7386

123,4945

116,5029

108,4038

87,0138

90,6134

100,2354

101,0661

31365,4540

X

Perlakuan 3 0

15

30

45

60

90

120

180

240

300

LDDK

1

112,4316

160,9512

130,1664

112,0970

209,8054

113,4355

95,7007

113,7701

107,4124

102,7277

35674,4551

2

103,7316

128,1587

138,5318

97,7086

132,8433

118,4548

109,4201

123,4740

121,8009

107,0777

35639,3203

3

119,1240

172,3282

161,6205

128,8279

142,2126

110,7585

131,5049

114,4393

120,7971

125,1471

38143,9355

4

95,7007

132,5087

149,9088

118,1201

108,0816

98,0431

106,4085

80,6429

72,2775

89,0084

28732,8060

5

107,4124

151,2473

135,1856

138,1972

137,1934

105,4047

117,1163

115,7778

105,4047

113,7701

35378,3183

−

107,6701

149,0388

143,0826

118,9901

146,0273

109,2193

112,0301

109,6208

105,5385

107,5462

34713,7670

X

Perlakuan 4 0

15

30

45

60

90

120

180

240

300

LDDK

1

101,3073

133,9018

133,9018

120,1005

101,3073

101,0136

101,6009

99,2518

109,2357

108,0611

32211,3131

2

85,7441

138,8938

144,7666

94,7836

96,3253

92,2043

88,3869

84,5696

87,2124

92,2043

28348,4222

3

93,9662

140,9493

98,9026

112,4658

98,6645

106,5929

407,4738

117,1640

109,2357

112,1721

33162,7207

4

123,9179

126,2671

138,0128

135,9573

155,6315

142,1238

145,6476

146,2349

135,3700

122,4497

41822,2915

5

106,5929

185,5832

151,5205

141,5366

142,1238

124,7988

117,9259

118,6323

109,8230

115,9895

37459,4711

−

102,3057

145,1190

133,0209

121,5687

118,8085

113,3467

112,4070

113,1705

110,1753

110,1753

34600,8437

X


Hasil uji distribusi data dengan Tes Kolmogorov Smirnov

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test LDDK N Mean Normal Parameters(a,b) Most Extreme Differences

Std. Deviation Absolute Positive Negative

Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) a Test distribution is Normal. b Calculated from data.

35 33311.080 4 8236.3547 9 .171 .107 -.171 1.012 .257

76


Hasil uji GLM Repeated Measure kadar glukosa darah

77


78


79


80


81


82


83


84


85


86

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 10. Hasil uji Kruskal Wallis

Kruskal-Wallis Test Ranks Perlakuan LDDK Kontrol Negatif Aquadest Kontrol Negatif CMC Kontrol Positif Glibenklamid Volume 1 Volume 2 Volume 3 Volume 4 Total Test Statistics(a,b)

Chi-Square df Asymp. Sig.

LDDK 17.669 6

.007 a Kruskal Wallis Test b Grouping Variable: Perlakuan

N

Mean Rank

5 5

29.60 20.80

5

3.00

5 5 5 5 35

18.80 16.60 19.00 18.20

87

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 11. Hasil uji Mann Whitney ampiran 11. Hasil uji Mann Whitney

88


89


90


91


92


93

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 12. Hasil uji Anova One Way

94


Lampiran 13. Leaflet GOD-PAP

95


96


97

BIOGRAFI PENULIS Penulis bernama lengkap Andy Francisca Irawan lahir dari pasangan Benny Irawan Liong dan Yulita Megasari di kota Semarang, provinsi Jawa Tengah, sebagai anak bungsu dari dua bersaudara. Penulis menyelesaikan TK di TK Maria Purworejo pada tahun 1990-1992, SD Maria Purworejo pada tahun 1992-1998, SMP Bruderan Purworejo pada tahun 1998-2001, dan SMU Stella Duce 1 Yogyakarta pada tahun 2001-2004. Kemudian penulis melanjutkan pendidikan ke Perguruan Tinggi di Fakultas Farmasi Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2004. Selama menempuh pendidikan di Fakultas Farmasi Sanata Dharma Yogyakarta, penulis menjadi BEMF (Badan Eksekutif Mahasiswa Farmasi) 2006-2007 dalam divisi Pengabdian Masyarakat. Penulis juga aktif menjadi panitia beberapa kegiatan seperti PIMFI (Pekan Ilmiah Mahasiswa Farmasi Indonesia ) 2005, TITRASI (Tiga Hari Temu Akrab Farmasi) 2005, TITRASI 2006, Penyuluhan Self Medication dan Sunatan Masal “Ibu Aktif, Anak Sehat” yang bekerja sama dengan Gerakan Jogja Bangkit. Penulis juga magang di Rumah Sakit BETHESDA Jogjakarta sebagai mahasiswa Farmasi Sanata Dharma selama beberapa bulan.

EFEK HIPOGLIKEMIK UNDUR-UNDUR DARAT (Myrmileon sp.) PADA TIKUS PUTIH JANTAN TERBEBANI GLUKOSA SKRIPSI

Recommend Documents