Edisi Juni 2015 Volume IX No. 1 ISSN

Edisi Juni 2015 Volume IX No. 1

ISSN 1979-8911

POTENSI DAUN SIRSAK (Annona muricata Linn), DAUN BINAHONG (Anredera cordifolia (Ten) Steenis), DAN DAUN BENALU MANGGA (Dendrophthoe pentandra) SEBAGAI ANTIOKSIDAN PENCEGAH KANKER

Nunung Kurniasih1, Mimin Kusmiyati2, Nurhasanah3, Riska Puspita Sari4, Riza Wafdan5 1,3,4,5 Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi UIN Sunan Gunung Djati, Jl. AH Nasution No 105, Bandung, 40614 2 Jurusan Farmasi Politeknik Kesehatan Bandung [email protected]

ABSTRAK Kanker dapat dicegah menggunakan antioksidan, suatu senyawa yang bersifat imunomodulator yang dapat menguatkan sel-sel yang sehat untuk menghadang kanker. Senyawa aktif yang sudah berhasil diidentifikasi sebagai antikanker yang berasal dari tanaman antara lain adalah flavonoid glikosida, tanin, stigmasterol, dan inhibitor histone deacetylase (HDAC). Senyawa ini terdapat pada beberapa tanaman misalnya sirsak, binahong, benalu dan lain sebagainya. Sampel segar daun sirsak, binahong dan benalu dihaluskan, dimaserasi dengan metanol. Kemudian ekstrak metanol dipartisi dengan pelarut n-heksan dan etil asetat sampai menghasilkan ekstrak air. Ekstrak air dipekatkan dan diskrining fitokimia kemudian diuji daya antioksidannya dengan metode DPPH ((1,1difenil-2-pikrilhidrazil) dengan larutan kontrol berupa vitamin C. Ketiga ekstrak daun ini memiliki kandungan senyawa flavanoid, polifenol dan saponin. Diperoleh hasil IC50 daun sirsak sebesar 6,23 ppm, daun binahong 3,30 ppm sedangkan pada daun benalu adalah 33,31 ppm. Ketiga daun ini memiliki potensi untuk mencegah kanker. Kata kunci : daya antioksidan, daun sirsak, daun binahong, daun benalu, DPPH

Abstract Cancer can be prevented using an antioxidant, a compound that is an immunomodulator that can strengthen the healthy cells to block the cancer. Active compounds that have been identified as anticancer derived from plants include flavonoid glycosides, tannins, stigmasterol, and inhibitors of histone deacetylase (HDAC). These compounds found in some plants such soursop, binahong, parasites and so forth. Samples of fresh soursop leaves, binahong and parasites mashed, macerated with methanol. Then the methanol extract was partitioned with n-hexane solvent and ethyl acetate to produce a water extract. Water extract was concentrated and then tested for their phytochemical screening of antioxidants with DPPH ((1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) with control solution in the form of vitamin C. These three leaf extract contains compounds flavonoids, polyphenols and 162


ISSN 1979-8911

saponins. The results obtained IC50 soursop leaf at 6.23 ppm, 3.30 ppm whereas binahong leaf on leaf mistletoe was 33.31 ppm. This leaves three have the potential to prevent cancer. Keywords: antioxidant power, soursop leaves, leaf binahong, mistletoe leaves, DPPH

Radikal bebas dalam jumlah normal

1. PENDAHULUAN

bermanfaat bagi kesehatan misalnya, Kanker merupakan sekelompok

memerangi

peradangan,

membunuh

penyakit yang ditandai oleh pertumbuhan

bakteri, dan mengendalikan tonus otot

dan perkembangan sel-sel yang tidak

polos pembuluh darah serta organ-organ

terkontrol

(American

dalam tubuh. Sementara dalam jumlah

Cancer Society, 2008). Kanker dapat

berlebih mengakibatkan stress oksidatif.

disebabkan oleh faktor eksternal (infeksi,

Keadaan tersebut dapat menyebabkan

radiasi, zat kimia tertentu, tembakau) dan

kerusakan oksidatif mulai dari tingkat

faktor internal (mutasi, hormon, kondisi

sel, jaringan, hingga ke organ tubuh yang

sistem imun) yang memicu terjadinya

mempercepat terjadinya proses penuaan

proses

dan munculnya penyakit. Oleh karena

dan

abnormal

karsinogenesis

(pembentukan

kanker).

itu, antioksidan dibutuhkan untuk dapat

Radikal bebas dapat terbentuk secara endogen dan eksogen. Radikal

menunda

atau

menghambat

reaksi

oksidasi oleh radikal bebas.

endogen terbentuk dalam tubuh melalui

Antioksidan bersifat imunomodulator,

proses metabolisme normal di dalam

yaitu menguatkan sel-sel yang sehat

tubuh. Sementara radikal eksogen berasal

untuk menghadang kanker. Mekanisme

dari bahan pencemar yang masuk ke

yang sudah berhasil diungkap adalah

dalam

sitotoksik

tubuh

pencernaan,

dan

melalui

pernafasan,

penyerapan

kulit.

(penghambatan

siklus

pembelahan sel) dan induksi apoptosis

163


(merangsang proses

ISSN 1979-8911

bunuh diri sel

kanker). Senyawa aktif yang sudah

pertumbuhan

Salah satu khasiat daun benalu

yang berasal dari tanaman antara lain

adalah

adalah

dikarenakan

stigmasterol,

glikosida,

dan

inhibitor

tanin, histone

deacetylase (HDAC).

Staphylococcus

epidermis pada jerawat (Rani, 2012).

berhasil diidentifikasi sebagai antikanker

flavonoid

bakteri

dapat

melawan

senyawa

kanker

aktifnya

yaitu

flavonoid, fenol dan triterpenoid. Dari beberapa senyawa aktif yang dikandung

Acetogenins pada daun sirsak

dalam benalu tersebut memiliki sifat

dapat digunakan untuk melawan kanker

antikanker

dengan menghambat ATP (adenonsina

penelitian ini akan dibandingkan daya

trifosfat) yang memberi energi pada sel

antioksidan ekstrak dari ketiga tanaman

kanker

ini dengan menggunakan metode DPPH.

(Widyaningrum

dkk,

2012).

(Artanti,

2010).

Pada

Dampaknya, mitosis atau pembelahan sel kanker

terhambat.

bermanfaat

Daun

menghambat

sirsak

sel

kanker

2. TEORI 2.1

Tanaman Sirsak

dengan menginduksi apoptosis, antidiare, analgetik,

antidisentri,

Sirsak (Annona muricata Linn)

antiasma,

adalah tanaman yang mudah tumbuh di

anthelmitic, dilatasi pembuluh darah,

banyak tempat. Nama sirsak berasal dari

menstimulasi

dan

bahasa Belanda yaitu Zuurzak yang

mengurangi depresi (McLaughlin, 2008).

berarti kantung yang asam (Thomas, A.

pencernaan

Binahong merupakan salah satu sumber

antioksidan

dalam

menangkap

(Yuswantina, memiliki

2009). daya

yang

berpotensi

radikal Binahong hambat

N. S, 1992). Sirsak

termasuk

tanaman

bebas

tahunan. Selain morfologi di atas, sirsak

juga

diklasifikasikan menjadi (Widyaningrum,

untuk

2012): 164


ISSN 1979-8911

Kingdom

: Plantae

penyebab muntah, mengobati kepala

Divisi

: Spermatophyta

berkutu dan parasit kulit serta obat

Sub Divisi

: Angiospermae

cacing. Kulit batang digunakan untuk

Kelas

: Dicotyledonae

pengobatan asma, batuk, hipertensi, obat

Ordo

: Polycarpiceae

parasit, obat penenang dan kejang. Akar

Famili

: Annonaceae

digunakan untuk obat diabetes (khusus

Genus

: Annona

kulit

Spesies

: Annona muricata Linn

kejang. Di antara bagian-bagian tanaman

Nama Umum : Graviola

akarnya),

obat

penenang

dan

(Brazil),

sirsak tersebut, daun juga bermanfaat

Soursop (Inggris), Guanabana (Spanyol),

sebagai obat penyakit jantung, diabetes

Nangka Sabrang atau Nangka Belanda

dan antikanker yang merupakan senyawa

(Jawa), Nangka Walanda atau Sirsak

antioksidan.

(Sunda) Sirsak sejauh ini dibudidayakan untuk dimanfaatkan buahnya karena kandungan gizinya yang tinggi seperti karbohidrat, vitamin C dan mineral Gambar 1. Daun Sirsak (Annona (Rahmani,

2008).

Menurut muricata Linn)

Widyaningrum (2012), buah berkhasiat Daun sirsak mengandung senyawa mencegah dan mengobati diare, maag, acetogenin, annocatacin, annocatalin, disentri, demam, flu, menjaga stamina annohexocin, annonacin, annomuricin, dan pelancar ASI. Bunga digunakan anomurine, anonol, caclourine, gentisic sebagai obat bronkhitis dan batuk. Biji acid, gigantetronin, asam linoleat dan digunakan

untuk

mencegah

dan muricapentocin (Widyaningrum, 2012).

mengobati

astrigent,

karminatif, 165


2.2

Binahong

(Anredera

ISSN 1979-8911

cordifolia

jantung. Panjang daun antara 5 - 10 cm dan mempunyai lebar antara 3 - 7 cm.

(Ten.) Steenis) Klasifikasi dari tanaman binahong

Seluruh

bagian

tanaman

dapat

adalah sebagai berikut :

dimanfaatkan, mulai dari akar, batang,

Kingdom

daun, umbi dan bunganya. Tanaman ini

: Plantae (tumbuhan)

Subkingdom : Tracheobionta

termasuk

Superdivisio : Spermetophyta

masih banyak yang perlu digali sebagai

Divisio

: Magnoliophyta

bahan fitofarmaka. Di Indonesia tanaman

Kelas

: Magnoliopsida

ini sering digunakan sebagai hiasan

Subkelas

: Hammelidae

gapura yang melingkar di atas jalan

Ordo

: Caryophyllales

taman, namun belum banyak dikenal

Familia

: Basellaceae

dalam

Genus

: Anredera

(Sumartiningsih, 2011)

Spesies

:

Anredera

dalam

famili

basellaceae,

masyarakat

Indonesia.

cordifolia

(Ten) Steenis (Mus,2008).

2.1

Tanaman binahong adalah tanaman herbal yang berasal dari Cina. Tanaman ini tumbuh menjalar dan panjangnya dapat mencapai 5 meter, berbatang lunak

Gambar 2. Daun Binahong 2.3.

Tanaman

Benalu

berbentuk silindris dan pada sela-sela

(Dendrophthoe

daun dan tangkai terdapat seperti umbi

pentandra)

yang bertekstur kasar. Daunnya tunggal dan

mempunyai

tangkai

Tanaman benalu bagi para petani

pendek,

adalah hama yang merugikan karena

bersusun berselang-seling dan berbentuk

tanaman parasit ini dapat membunuh pohon inangnya. Benalu tumbuh dari 166


ISSN 1979-8911

dataran menengah sampai pegunungan

tersebut adalah golongan flavonoid, yaitu

dari ketinggian 800 meter sampai 2.300

kuersetin yang bersifat inhibitor terhadap

meter di atas permukaan laut dan

enzim

berbunga sekitar bulan Juni-September.

kanker. Benalu

Jenis

banyak

flavonoid kuersetin, meso-inositol, rutin,

ragamnya, tergantung dari jenis pohon

dan tanin. Macam-macam benalu yang

inangnya, contohnya benalu mangga

sering digunakan sebagai antioksidan

Dendrophthoe

diantaranya yaitu benalu yang berasal

tanaman

benalu

juga

pentandra

dengan

DNA

topoisomerase mangga

sel

mengandung

klasifiksasi sebagai berikut :

dari pohon mangga, dukuh, teh, dan

Kerajaan

: Plantae

petai.

Divisi

: Spermatophyta

2.4.

Ordo

: Santalales

Famili

: Loranthaceae

kehilangan elektron di lingkaran orbital

Genus

: Dendrophthoe

terluarnya sehingga jumlah elektronnya

Spesies

: Pentandra

menjadi

Radikal Bebas Radikal bebas adalah molekul yang

ganjil

dan

tidak

stabil

(Kusumadewi, 2002). Radikal bebas dianggap

berbahaya

karena

menjadi

sangat reaktif dalam upaya mendapatkan pasangan Gambar 3. Daun Benalu Mangga

elektronnya

dan

dapat

membentuk radikal bebas baru dari atom

Dari berbagai hasil penelitian,

atau molekul yang elektronnya terambil

benalu mangga mengandung senyawa

untuk berpasangan dengan radikal bebas

yang berperan sebagai zat antioksidan

sebelumnya. Oleh karena sifatnya yang

sehingga.dapat mencegah penyakit tumor

sangat reaktif dan gerakannya yang tidak

maupun

beraturan, jika terjadi di dalam tubuh

penyakit

kanker.

Senyawa

167


makhluk

hidup

kerusakan

di

akan

ISSN 1979-8911

menimbulkan

berbagai

bagian

tersebut memiliki derajat kekuatan yang

sel.

berbeda, namun radikal yang paling

Kerusakan yang dapat ditimbulkan oleh

berbahaya adalah hidroksil (OH-) karena

serangan radikal bebas yaitu kerusakan

memiliki reaktivitas yang paling tinggi

membran sel, protein, DNA dan lipid.

(Putra, 2008; dalam Maryam, 2012).

Kerusakan tersebut dapat menyebabkan

2.5.

timbulnya berbagai macam penyakit degeneratif

seperti

atherosklerosis

Antioksidan Antioksidan adalah senyawa kimia

katarak,

kanker,

yang dapat menyumbangkan satu atau

proses

penuaan

lebih elektron kepada radikal bebas,

dan

(Muhilal, 1991).

sehingga radikal bebas tersebut dapat

Radikal bebas terbentuk dalam

diredam (Suhartono, 2002). Antioksidan

tubuh melalui berbagai cara diantaranya

dapat

akibat proses biokimiawi berupa hasil

manusia

samping

atau

disebabkan oleh senyawa oksigen reaktif

pembakaran sel yang berlangsung pada

(ROS; Reactive Oxygen Species) dan

waktu

radikal bebas lainnya (L. Wang, et.al.,

dari

proses

bernapas,

oksidasi

metabolisme

sel,

olahraga yang berlebihan, peradangan (inflamasi)

dan

lingkungan

seperti

melawan

melindungi

tubuh

kerusakan

yang

2003; dalam Yuhernita 2011).

polusi

Senyawa antioksidan diantaranya

kendaraaan

adalah asam fenolik, flavonoid, karoten,

bermotor, asap rokok, bahan pencemar

vitamin E (tokoferol), vitamin C, asam

dan radiasi matahari. Contoh radikal

urat, bilirubin dan albumin (Gheldof,

bebas adalah superoksida (O2-), hidroksil

et.al., 2002; dalam Mega, dkk., 2010).

(OH-), peroksida

paparan

membantu

asap

nitroksida

(NO),

hidrogen

Zat-zat gizi mineral seperti mangan,

(H2O2),

asam

hipoklorit

seng, tembaga dan selenium (Se) juga

(HOCl) dan lain-lain. Radikal bebas

berperan sebagai antioksidan. 168


ISSN 1979-8911

Antioksidan memiliki fungsi utama sebagai

upaya

untuk

memperkecil

senyawa antioksidan tetapi jumlahnya sering

kali

tidak

cukup

untuk

terjadinya proses oksidasi dari lemak dan

menetralkan radikal bebas yang masuk

minyak, memperkecil terjadinya proses

ke dalam tubuh. Sebagai contoh, tubuh

kerusakan

makanan,

manusia dapat menghasilkan glutathione,

memperpanjang masa pemakaian dalam

salah satu antioksidan yang sangat kuat,

industri

meningkatkan

hanya tubuh memerlukan asupan vitamin

stabilitas lemak yang terkandung dalam

C sebesar 1.000 mg untuk memicu tubuh

makanan

serta

menghasilkan

kualitas

sensori

dalam

makanan,

mencegah dan

hilangnya

nutrisi.

Lipid

glutathione

Kekurangan antioksidan dalam tubuh

peroksidasi merupakan salah satu faktor

membutuhkan

yang cukup berperan dalam kerusakan

(antioksidan eksogen).

selama

dalam

pengolahan

penyimpanan

makanan

(Hernani

dan dan

Raharjo, 2005).

asupan

Antioksidan antioksidan

dari

luar

dibagi

menjadi

dan

vitamin.

enzim

Antioksidan enzim meliputi superoksida

Antioksidan tidak hanya digunakan dalam

ini.

industri farmasi,

tetapi juga

dismutase (SOD), katalase dan glutation peroksidase (GSH.Prx). Vitamin lebih

digunakan secara luas dalam industri

dikenal

makanan, industri petroleum, industri

dibandingkan

karet dan sebagainya (Tahir dkk, 2003).

vitamin

Berkaitan dengan fungsinya, senyawa

(vitamin E), beta karoten dan asam

antioksidan diklasifikasikan dalam lima

askorbat

tipe antioksidan yaitu (Maulida dan

didapatkan dari tanaman dan hewan

Naufal, 2010):

(Sofia, 2006; dalam Kuncahyo, 2007).

Tubuh

manusia

menghasilkan

sebagai enzim.

mencakup

(vitamin

Reaksi

antioksidan Antioksidan alfa

C)

radikal

yang

bebas

tokoferol

banyak

dengan 169


ISSN 1979-8911

antioksidan di dalam tubuh menghasilkan

suatu radikal bebas antioksidan menjadi

radikal senyawa antioksidan, contohnya

prooksidan apabila terdapat molekul

radikal tokoferoksil yang terbentuk dari

reseptor untuk menerima elektron dan

oksidasi

menimbulkan

tokoferol.

Radikal

tersebut

reaksi

autooksidasi

cukup stabil sampai dapat direduksi oleh

(Halliwell, et.al., 1992; dalam Muchtadi,

vitamin C atau enzim GSH untuk

2012).

membentuk quinol sehingga tidak akan

Antioksidan berdasarkan sumber

mengoksidasi asam lemak tak jenuh yang

perolehannya ada dua macam yaitu

ada di sekitarnya (Packer, et.al., 1979;

antioksidan alami dan antioksidan buatan

dalam Muchtadi, 2012). Demikian juga

(sintetik). Beberapa contoh antioksidan

bentuk teroksidasi vitamin C

sintetik

radikal

bebas

askorbil

yaitu

yang

diizinkan

dan

sering

dan

digunakan untuk makanan, yaitu butil

dehidroaskorbat dapat dibentuk kembali

hidroksi anisol (BHA), butil hidroksi

menjadi askorbat oleh GSH atau oleh

toluen

enzim

tetrabutil hidroksi quinon (TBHQ) dan

dehidroaskorbat

reduktase

(BHT),

propil

galat

(PG),

(Diplock, et.al., 1998; dalam Muchtadi,

tokoferol.

2012).

tersebut merupakan antioksidan alami

Kemampuan

untuk

Antioksidan-antioksidan

membentuk

yang telah diproduksi secara sintetik

kembali antioksidan tersebut merupakan

untuk tujuan komersial. Antioksidan

indikasi pentingnya senyawa antioksidan

alami di dalam makanan dapat berasal

di dalam tubuh. Radikal bebas yang

dari senyawa antioksidan yang sudah ada

terbentuk dari antioksidan berpotensi

dari satu atau dua komponen makanan,

sebagai prooksidan seperti halnya radikal

senyawa antioksidan yang terbentuk dari

bebas lain. Dalam kondisi biologis yang

reaksi-reaksi selama proses pengolahan,

tidak normal, selalu ada potensi untuk

senyawa antioksidan yang diisolasi dari 170


sumber

ISSN 1979-8911

alami dan ditambahkan ke

makanan

sebagai

bahan

tambahan

pangan (Rohdiana, 2001).

2.6. Penentuan Aktivitas Antioksidan Penentuan

aktivitas

antioksidan

Metode

FRAP

menggunakan

Fe(TPTZ)23+ kompleks besi-ligan 2,4,6tripiridil-triazin

sebagai

Kompleks

Fe(TPTZ)23+

biru

pereaksi. akan

berfungsi sebagai zat pengoksidasi dan akan

mengalami

reduksi

menjadi

dapat dilakukan dengan beberapa metode

Fe(TPTZ)22+

yaitu Cupric Ion Reducing Antioxidant

dengan reaksi (Benzie & Strain, 1996;

Capacity (CUPRAC), Ferric Reducing

dalam Widyastuti, 2010):

Antioxidant

Oxygen

Fe(TPTZ)23+ +

AR(OH)

Radical Absorbance Capacity (ORAC),

Fe(TPTZ)22+ +

H+ + AR=O

ABTS

c.

Power (FRAP),

(TEAC)

dan

1,1-Difenil-2-

Pikrilhidrazil (DPPH). a.

Metode

CUPRAC

berwarna

kuning

Metode ORAC Metode

Metode CUPRAC

yang

ORAC

menggunakan

senyawa radikal peroksil yang dihasilkan menggunakan

melalui larutan cair dari 2,2’-azobis-2-

bis(neokuproin) tembaga(II) (Cu(Nc)22+)

metil-propanimidamida.

sebagai pereaksi kromogenik. Pereaksi

akan bereaksi dengan radikal peroksil

Cu(Nc)22+ yang berwarna biru akan

dan menghambat degradasi pendaran zat

mengalami reduksi menjadi Cu(Nc)2+

warna (Teow dkk., 2007; dalam Hartanto,

yang berwarna kuning dengan reaksi

2012).

(Apak et.al., 2007; dalam Widyastuti,

ORAC adalah kemampuannya dalam

2010):

menguji

n Cu(Nc)22++AR(OH)n

lipofilik sehingga akan menghasilkan

n Cu(Nc)2++AR(=O)n + n H+

pengukuran lebih baik terhadap total

b.

aktivitas antioksidan. Kelemahan dari

Metode FRAP

Kelebihan

Antioksidan

metode

antioksidan

pengujian

hipofilik

dan

171


metode

ini

adalah

ISSN 1979-8911

membutuhkan

diujikan kepada radikal DPPH menjadi

peralatan yang mahal dan hanya sensitif

senyawa non radikal difenilpikrilhidrazin

terhadap penghambatan radikal peroksil.

yang ditunjukkan oleh perubahan warna

d.

Metode ABTS (TEAC)

(Molyneux,

Metode ini menggunakan prinsip

2012).

2004;

dalam

Hartanto,

inhibisi yaitu sampel ditambahkan pada sistem penghasil radikal bebas dan pengaruh inhibisi terhadap efek radikal bebas diukur untuk menentukan total Gambar 4. Reaksi DPPH dengan kapasitas antioksidan dari sampel (Wang Antioksidan dkk., 2004; dalam Hartanto, 2012). Metode

DPPH

mengukur

Metode TEAC menggunakan senyawa kemampuan suatu senyawa antioksidan 2,2’-azino-bis (3-ethylbenzthiazoline-6dalam

menangkap

radikal

bebas.

sulfonic acid) sebagai sumber penghasil Kemampuan

penangkapan

berhubungan

dengan

radikal

radikal bebas. e.

kemampuan

Metode DPPH komponen

senyawa

dalam

Uji peredaman warna radikal bebas menyumbangkan elektron atau hidrogen. DPPH

adalah

untuk

menentukan Setiap

aktivitas

antioksidan

dalam

molekul

yang

dapat

sampel menyumbangkan elektron atau hidrogen

dengan melihat kemampuannya dalam akan bereaksi dan akan memudarkan menangkal radikal bebas DPPH. Sumber DPPH. Intensitas warna DPPH akan radikal bebas dari metode ini adalah berubah dari ungu menjadi kuning oleh senyawa

1,1-difenil-2-pikrilhidrazil. elektron yang berasal dari senyawa

Prinsip

pengujiannya

adalah

adanya antioksidan. Konsentrasi DPPH pada

donasi atom hidrogen dari substansi yang 172


ISSN 1979-8911

akhir reaksi tergantung pada konsentrasi

persamaan regresi yang diperoleh dari

awal dan struktur komponen senyawa

grafik

penangkap radikal (Naik dkk., 2003).

sampel dengan persen penghambatan

Menurut

DPPH digunakan untuk mencari nilai

Ariyanto

(2006),

tingkatan

hubungan

kekuatan antioksidan pada metode DPPH

IC50.

diklasifikasikan menjadi:

ditandai

Tabel 1. Tingkatan Aktivitas Antioksidan

konsentrasi

pada Metode DPPH

Besarnya dengan

antara

konsentrasi

aktivitas nilai

larutan

antioksidan IC50,

yaitu

sampel

yang

dibutuhkan untuk menghambat

50%

Nilai

Tingkatan

radikal bebas DPPH (Andayani dkk.,

IC50 < 50 µg/mL

Sangat kuat

2008). Metode DPPH dipilih karena

IC50 50-100

Kuat

pengujiannya sederhana, mudah, cepat, peka dan hanya memerlukan sedikit

µg/mL IC50 101-150

sampel.

Sedang

3. BAHAN DAN METODE

µg/mL IC50 > 150 µg/mL

Bahan sampel yang digunakan

Lemah

adalah daun sirsak yang diambil dari Aktivitas antioksidan dari ekstrak

daerah Cibogo, Subang. Daun binahong

persen

dan daun benalu mangga dari Cibiru

radikal

Bandung. Bahan-bahan lainnya yaitu

DPPH. Persentase penghambatan ini

metanol teknis, n-heksana redestilasi, etil

didapatkan dari perbedaan serapan antara

asetat redestilasi, aquades, kloroform

absorban DPPH dalam metanol dengan

amoniakal, H2SO4 pekat, pereaksi Mayer,

absorban sampel yang diukur dengan

pereaksi Wagner, pereaksi Dragendorff,

spektrofotometer UV-Vis pada panjang

FeCl3, serbuk Mg, HCl 2 N, gelatin 1%,

gelombang

etanol, asam askorbat (vitamin C) dan

dinyatakan

dalam

penghambatannya

515

terhadap

nm.

Selanjutnya

173


ISSN 1979-8911

1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH).

dengan pelarut n-heksana dan etil asetat

3.1.1 Preparasi Sampel

menggunakan

corong

pisah

sampai

Daun sirsak, binahong dan benalu

didapatkan bagian yang bening. Bagian

segar disiapkan masing-masing sebanyak

yang terlarut pada pelarut n-heksana, etil

5 kg, dibersihkan dari kotoran dan debu

asetat dan air yang masing-masing telah

yang menempel kemudian dikeringkan

terpisah

dengan

fitokimia dan dipekatkan dengan rotary

cara

Selanjutnya

diangin-anginkan.

dihaluskan

menggunakan

kemudian

diuji

penapisan

vacuum evaporator sehingga diperoleh

blender.

ekstrak kental dari fraksi n-heksana,

3.1.2 Ekstraksi Senyawa (Maserasi)

fraksi etil asetat dan fraksi air.

Masing-masing daun yang telah

3.1.4 Uji Penapisan Fitokimia

halus dimaserasi dengan metanol dengan

Ekstrak metanol, fraksi n-heksana,

cara direndam selama 3x24 jam dan

fraksi etil asetat dan fraksi air yang telah

sesekali

atau

dipekatkan kemudian diuji kandungan

disaring.

senyawanya dengan metode penapisan

dilakukan

pengocokan,

pengadukan

kemudian

Maserasi dilakukan sampai filtrat tidak

fitokimia sebagai berikut:

berwarna atau minimal sampai 3 kali

3.1.4.1 Identifikasi Senyawa Alkaloid

pengulangan.

Filtrat

fraksi

Ekstrak sampel sebanyak 1 – 2

metanol yang telah didapat kemudian

mL ditambahkan 2 mL kloroform dan 2

dipekatkan

mL amoniak, dikocok dan disaring.

dengan

berupa

rotary

vacuum

evaporator.

Filtrat

ditambahkan

3.1.3 Metode Fraksinasi Partisi Cair-Cair

sebanyak 3 – 5 tetes untuk menetralkan,

Ekstrak metanol pekat (ekstrak

kemudian dikocok sampai terbentuk dua lapisan.

selanjutnya

berwarna selanjutnya dimasukkan ke

berturut-turut

asam

yang

pekat

kasar) ditambahkan dengan aquades, dipartisi

Lapisan

H2SO4

tidak

174


ISSN 1979-8911

dalam tiga tabung reaksi, masing-masing

larutan FeCl3. Perubahan warna hijau,

tabung ditambahkan pereaksi Mayer,

biru kehijauan atau biru kehitaman atau

pereaksi

adanya endapan menunjukkan positif

Wagner

dan

pereaksi

Dragendorff sebanyak 4 – 5 Perubahan

warna

dan

tetes.

terbentuknya

polifenol. 3.1.4.5 Identifikasi Senyawa Saponin

endapan berturut-turut berwarna putih

Ekstrak sampel sebanyak 1 – 2

keruh, kuning-merah lembayung dan

mL ditambahkan air panas, kemudian

jingga menunjukkan positif alkaloid.

didinginkan dan dikocok kuat selama 10

3.1.4.2 Identifikasi Senyawa Flavonoid

menit. Jika terbentuk busa atau buih

Ekstrak sampel sebanyak 1 – 2 mL ditambahkan sedikit serbuk Mg, HCl

menunjukkan positif saponin. 3.1.5 Uji

Aktivitas

Antioksidan

2 N dan etanol sebanyak 4 – 5 tetes

Menggunakan Metode 1,1-Difenil-

kemudian dikocok. Perubahan warna

2-Pikrilhidrazil (DPPH)

menjadi merah, kuning atau jingga menunjukkan positif flavonoid.

Larutan

3.1.4.3 Identifikasi Senyawa Tanin

dipanaskan

pada

penangas

DPPH

dalam

etanol

dengan konsentrasi 50 ppm diambil

Ekstrak sampel sebanyak 1 – 2 mL

3.1.5.1 Absorbansi DPPH awal

sebanyak 4 mL kemudian diinkubasi

air

pada suhu ruang selama 30 menit.

kemudian disaring. Filtrat ditambahkan

Setelah itu diukur absorbansinya pada

gelatin 1%. Perubahan warna putih

panjang gelombang 514 nm.

menunjukkan positif tanin.

3.1.5.2 Absorbansi Sampel

3.1.4.4 Identifikasi Senyawa Polifenol

Fraksi n-heksana, fraksi etil asetat

Ekstrak sampel sebanyak 1 – 2 mL

dipanaskan

pada

penangas

dan fraksi air dibuat dengan konsentrasi

air

10, 30, 50, 70 dan 90 ppm dilarutkan

kemudian disaring. Filtrat ditambahkan

dengan etanol ke dalam labu ukur 10 mL. 175


ISSN 1979-8911

Kemudian tiap-tiap konsentrasi diambil 2 mL dan ditambahkan 2 mL larutan DPPH 50 ppm. Setelah itu diinkubasi pada suhu ruang selama 30 menit,

4. HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1

dan Fraksinasi Partisi Cair-Cair

kemudian dimasukkan ke dalam kuvet


untuk diukur absorbansinya pada panjang gelombang

514

nm.

Tiap

sampel

dilakukan pengulangan dua kali (duplo). Sebagai standar digunakan vitamin C dengan perlakuan yang sama dengan sampel. Data absorbansi yang diperoleh dari tiap konsentrasi dihitung

nilai

aktivitas antioksidannya. Nilai tersebut

Ekstraksi Senyawa (Maserasi)

segar masing-masing sebanyak 5 kg dikeringkan

dengan

cara

diangin-

anginkan selama ± 7 hari pada suhu ruang

kemudian

pengeringan

dihaluskan.

yaitu

untuk

Tujuan

mematikan

jaringan tumbuhan agar tidak terjadi oksidasi ataupun hidrolisis enzimatik dan mengeluarkan sebagian air dalam sampel

diperoleh dengan rumus:

(mengurangi kadar air) agar daun tidak berjamur dan memudahkan penguapan Konsentrasi

dan

aktivitas

pelarut pada saat ekstrak dipekatkan.

antioksidan yang diperoleh kemudian

Adapun penggunaan suhu ruang yaitu

dibuat grafik, dimana konsentrasi sebagai

untuk menghindari terjadinya degradasi

sumbu (x) dan aktivitas antioksidan

senyawa-senyawa dalam sampel yang

sebagai sumbu (y). Nilai IC50 dihitung

tidak stabil terhadap suhu tinggi. Daun

berdasarkan rumus persamaan regresi

dihaluskan

yang diperoleh dengan persamaan umum

memperluas

yaitu:

memudahkan

dengan

tujuan

permukaan kontak

antara

untuk sehingga sampel

dengan pelarut pada saat ekstraksi. 176


ISSN 1979-8911

Masing-masing daun yang telah kering

diekstraksi

dengan

teknik

pelarut ke dalam sel sampel. Namun penggunaan suhu yang tinggi akan

maserasi selama tiga hari. Ekstraksi

menyebabkan

menggunakan pelarut metanol sebanyak

senyawa tertentu yang tidak stabil pada

± 6 L melalui penambahan ± 2 L pelarut

keadaan

setiap harinya.

ini,

ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi

ekstrak yang dihasilkan masih berwarna

atau pada suhu ruang walaupun cara ini

hijau, belum sampai bening. Ekstraksi

memiliki kelemahan yaitu membutuhkan

beberapa kali dengan pelarut yang lebih

banyak pelarut dan berlangsung dalam

sedikit akan lebih efektif dibandingkan

waktu

dengan ekstraksi satu kali dengan semua

dibandingkan dengan ekstraksi pada suhu

pelarut

efisiensi

tinggi. Ekstrak metanol (ekstrak kasar)

dengan

yang diperoleh berwarna hijau tua pekat.

ekstraksi bertingkat (berulang) tetapi

Ekstrak tersebut kemudian dipekatkan

penambahan pelarut akan menambah

menggunakan rotary vacuum evaporator

matriks

proses

sehingga dihasilkan ekstrak berupa pasta

ekstraksi terjadi peristiwa difusi yaitu

yang lengket berwarna hitam kehijauan

masuknya pelarut ke dalam sel sampel

dan berbau khas. Warna hijau disebabkan

karena perbedaan tekanan. Pelarut yang

adanya kandungan klorofil.

ekstraksi

Pada penelitian

sekaligus, akan

karena meningkat

(pengotor).

Dalam

masuk ke dalam sampel akan melarutkan

kehilangan

tersebut.

yang

Ekstrak air.

Oleh

cukup

metanol

senyawa-

karena

lama

itu,

jika

ditambahkan

senyawa bila kelarutan senyawa yang

dengan

akan diekstrak sama dengan pelarut.

menggunakan air kadang-kadang agak

Kelarutan suatu senyawa dalam pelarut

sulit dilakukan (kurang larut) karena

akan meningkat dengan peningkatan

ekstrak

suhu yang akan mempermudah penetrasi

sehingga ada sebagian yang terbuang.

sangat

Pelarutan

kental

dan

ekstrak

lengket

177


ISSN 1979-8911

Partisi merupakan ekstraksi cair-cair

Sampel

Massa Hasil Masera si (g)

menggunakan corong pisah, dilakukan dengan

penambahan

pelarut

sampai

diperoleh cairan (ekstrak) yang bening. Partisi

bertujuan

untuk

Daun Sirsak

memisahkan

fraksi aktif dari ekstrak kasarnya, dimana fraksi aktif dipisahkan menggunakan pelarut air, etil asetat dan n-heksana yang

Daun Binahong

tingkat kepolarannya berbeda. Pelarut yang digunakan untuk proses partisi harus bersifat sedikit larut atau tidak larut dalam air atau dalam bahan lain yang

Daun Benalu

Fraksi

Fraksi

Air Etil Asetat 52,50 nHeksan a Air Etil Asetat 52,64 nHeksan a Air Etil Asetat 54,16 nHeksan a air dan etil

Massa Hasil Evapor asi (g) 29,80 1,92 1,46 18,48 12,63 17,68

6,68 8,10 6,45

asetat

dapat menahan komponen organik yang

menghasilkan ekstrak berwarna coklat,

diharapkan. Senyawa yang akan dipartisi

sedangkan

harus bersifat lebih larut dalam pelarut

menghasilkan ekstrak berwarna hijau tua

organik dibandingkan dalam air. Ekstrak

yang berasal dari klorofil. Ekstrak yang

dari masing-masing fraksi kemudian

dihasilkan memiliki tekstur yang lebih

dipekatkan

ekstrak

halus dan seragam dibandingkan dengan

disebut sebagai fraksi kental. Adapun

ekstrak metanol. Ekstrak metanol dan

berat fraksi kental yang diperoleh dari

fraksi air menghasilkan jumlah yang

masing-masing fraksi ditunjukkan pada

lebih banyak dibandingkan dengan etil

Tabel 2.

asetat (pelarut semi polar) dan n-heksana

Tabel 2. Berat Fraksi Kental dari Ekstrak

(pelarut non polar). Hal ini menunjukkan

dan

selanjutnya

Metanol

bahwa

sampel

fraksi

banyak

n-heksana

mengandung

komponen senyawa yang bersifat polar. 178


4.2

ISSN 1979-8911

Penapisan Fitokimia

.

an Senyaw a Alkaloi d Flavon oid Tanin Polifen ol Saponi n

Daun sirsak belum diketahui secara detail kandungan senyawa fitokimianya.

1

Oleh karena itu, perlu dilakukan uji

2 3

penapisan fitokimia untuk mengetahui kandungan senyawa aktif baik yang

4 5

bersifat racun maupun manfaat, sehingga dapat diketahui potensi daun sirsak

Daun Sirsak

Daun Binaho ng

Daun Benal u

-

-

-

+

+

+

-

-

+

+

+

+

+

+

+

Pelarut-pelarut

yang

digunakan

tersebut agar upaya pelestarian dan

pada uji ini terdiri atas air dan metanol

pemanfaatannya lebih baik dan lebih

yang bersifat polar, etil asetat yang

efektif. Penapisan fitokimia dilakukan

bersifat semi polar dan n-heksana yang

untuk memperoleh data lebih awal

bersifat non polar. Hasil uji penapisan

mengenai kelompok senyawa metabolit

fitokimia pada Tabel 3 menunjukkan

sekunder atau kandungan kimia pada

bahwa senyawa polifenol dan saponin

daun sirsak yang dinilai berkhasiat

larut dalam pelarut polar dan semi polar

sebagai antioksidan. Senyawa metabolit

sesuai dengan struktur kedua senyawa

sekunder

sebagai

tersebut yang banyak memiliki gugus OH

antioksidan adalah alkaloid, flavonoid,

yang dapat menyumbangkan elektron

senyawa fenolik, saponin, steroid dan

kepada radikal bebas. Begitupun pada

triterpenoid.

senyawa

yang

bersifat

Berikut ini adalah hasil

flavonoid

yang

banyak

penapisan fitokimia pada masing-masing

memiliki gugus OH larut dalam pelarut

fraksi:

polar kecuali pada metanol memberikan

Tabel 3. Hasil Uji Penapisan Fitokimia

reaksi

Berbagai Sampel pada Fraksi Air No

Golong

Sampel

negatif

karena

konsentrasinya

kecil

teridentifikasi.

Flavonoid

kemungkinan

sehingga juga

tidak larut 179


ISSN 1979-8911

dalam pelarut semi polar. Senyawa tanin

pelarut polar yaitu air dan semi polar

termasuk ke dalam golongan senyawa

yaitu etil asetat.

polifenol sehingga cenderung bersifat polar,

tetapi

reaksi

positif

hanya

4.3

ditunjukkan pada pelarut semi polar.

Aktivitas Antioksidan Penapisan fitokimia pada berbagai

Senyawa alkaloid menunjukkan reaksi

fraksi

positif

golongan senyawa kimia yang bersifat

dalam

pelarut

non

polar,

menunjukkan

terdapatnya

kemungkinan alkaloid ini berupa alkaloid

antioksidan,

bebas karena alkaloid dalam bentuk

dilanjutkan

garam lebih larut dalam pelarut polar.

antioksidan untuk mengetahui fraksi

Alkaloid juga memberikan reaksi positif

dengan

dalam pelarut semi polar. Pada uji ini

tinggi dari fraksi polar, semi polar dan

beberapa senyawa terlarut dalam pelarut

non polar berdasarkan kemampuannya

yang sifatnya tidak sesuai, hal ini dapat

menangkap radikal bebas 1,1-difenil-2-

terjadi akibat proses partisi yang kurang

pikrilhidrazil (DPPH) dan menurunkan

optimal karena pelarut yang digunakan

intensitas warna DPPH tersebut.

adalah

pelarut

kemungkinan

redestilasi masih

yang

mengandung

sehingga dengan

aktivitas

pengujian uji

aktivitas

antioksidan

paling

Metode 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH)

menunjukkan

reaktivitas

matriks (pengotor) sehingga hasilnya

senyawa yang diuji dengan suatu radikal

kurang akurat atau reaksi pada saat

stabil. DPPH memberikan serapan kuat

penapisan fitokimia tidak sempurna. Dari

pada panjang gelombang 514 nm dengan

hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa

warna ungu gelap. DPPH menerima

senyawa-senyawa fitokimia yang bersifat

elektron

antioksidatif lebih banyak larut dalam

elektronnya

dari

penghilangan

antioksidan

sehingga

berpasangan dan terjadi warna

ungu

menjadi 180


ISSN 1979-8911

kuning yang sebanding dengan jumlah

serapan

elektron yang diambilnya. Uji DPPH

gelombang 514 nm dengan waktu reaksi

dapat dianalisis melalui spektrofotometer

30

UV-Vis dilihat dari intensitas warna yang

pengulangan

dihasilkan. Pada metode ini absorbansi

Absorbansi yang diperoleh dihitung %

yang diukur adalah absorbansi larutan

aktivitas

DPPH sisa yang tidak bereaksi dengan

hubungan konsentrasi vitamin C dengan

senyawa antioksidan.

aktivitas antioksidan berdasarkan data

Pengujian

aktivitas

antioksidan

dilakukan pada fraksi air, etil asetat dan n-heksana

serta

vitamin

C

absorbansi

menit.

pada

Pengujian

ini

sebanyak

panjang

dilakukan dua

antioksidannya.

kali.

Adapun

absorbansi yang diperoleh ditunjukkan pada Gambar 5 di bawah ini:

yang

digunakan sebagai standar. Pengujian dilakukan

dengan

cara

melarutkan

vitamin C atau sampel dengan etanol, karena etanol dapat melarutkan hampir semua senyawa antioksidan. Adapun alasan campuran sampel dengan DPPH dibiarkan selama 30 menit yaitu agar larutan dapat terlarut sempurna dan warna yang dihasilkan lebih stabil. 4.3.1 Vitamin C Pengujian absorbansi peredaman radikal bebas DPPH dilakukan terhadap vitamin C sebagai standar, dibuat dengan

Gambar

5

Grafik

Hubungan

Konsentrasi Vitamin C dengan Aktivitas Antioksidan Gambar 5 menunjukkan bahwa kenaikan konsentrasi berbanding lurus dengan

aktivitas

antioksidan

yaitu

semakin besar konsentrasi vitamin C maka

semakin

besar

pula aktivitas

antioksidan yang dihasilkan. Hal ini terjadi karena elektron pada DPPH

berbagai konsentrasi kemudian diukur 181


ISSN 1979-8911

menjadi berpasangan oleh keberadaan

oksidasi

antioksidan vitamin C sebagai penangkap

dehidroaskorbat.

radikal bebas sehingga absorbansinya

4.3.2 Nilai IC50 Pada Sampel

menurun

secara

stoikiometri

sesuai

lebih

lanjut

membentuk

Hasil dari uji aktivitas antioksidan

dengan jumlah elektron yang diambil.

dinyatakan dengan nilai IC50

Berdasarkan rumus persamaan garis pada

konsentrasi antioksidan yang diperlukan

grafik di atas, diperoleh nilai IC50 untuk

untuk menghambat 50% radikal DPPH.

vitamin C yaitu 1,0878 ppm. Vitamin C

Nilai IC50 diperoleh dari perhitungan

(asam

rumus

askorbat)

digunakan

sebagai

persamaan

garis

yaitu

dari grafik

standar antioksidan karena termasuk ke

hubungan antara konsentrasi dengan

dalam antioksidan vitamin yang dapat

aktivitas antioksidan pada Gambar 6.

mencegah

oksidasi

pada

molekul

berbasis cairan. Vitamin C merupakan antioksidan yang kuat karena dapat mendonorkan

atom

hidrogen

dan

membentuk radikal bebas askorbil yang relatif stabil. Vitamin C sangat efektif menangkal radikal O2 -, H2O2, OH- dan 1

O2 serta dapat membersihkan spesies

nitrogen oksida reaktif untuk mencegah terbentuknya nitrosamin. Radikal bebas askorbil dapat dibentuk kembali menjadi askorbat tereduksi dengan cara menerima atom hidrogen lain dan dapat mengalami

Gambar

2.

Grafik

Hubungan

Konsentrasi Fraksi Air dari Ekstrak Daun Sirsak (A), Binahong (B) dan Benalu (C) dengan Aktivitas Antioksidan Berdasarkan rumus persamaan garis pada grafik di atas, diperoleh nilai IC50 untuk fraksi air pada ekstak daun sirsak sebesar 6,23 ppm sedangkan pada

182


ISSN 1979-8911

daun binahong adalah 3,20 ppm. Daun

1.


binahong memang populer di masyarakat

mengandung

sebagai tanaman obat tradisional untuk

saponin dan polifenol.

mengobati berbagai penyakit. Perbandingan

nilai

2. IC50

dari

7 dimana tingkat aktivitas antioksidan

flavanoid,

Daun sirsak, binahong dan benalu memiliki

ketiga sampel ditunjukkan oleh Gambar

senyawa

potensi

sebagai

antioksidan. 3.

Pada fraksi air daya antioksidan

pada vitamin C, daun sirsak dan daun

daun

binahong

lebih

binahong dan benalu sangat kuat karena

dibandingkan daun sirsak.

tinggi

nilai IC50 <50 ppm. Daya antioksidan daun binahong lebih tinggi daripada daun sirsak

dan

benalu,

meskipun

DAFTAR PUSTAKA Artanti,

tidak

Nina.

2010.

Evaluasi

Aktivitas Antioksidan Berbagai Ekstrak setinggi vitamin C.

Daun Benalu (Dendrophthoe pentandra (L.) Miq) Yang Tumbuh Pada Inang Belimbing Dan Mangga. Puslit Kimia Lipi, Kawasan Puspiptek, Serpong. McLaughlin JL. 2008. Paw Paw and Cancer: Annonaceous Acetogenins from

Gambar 7 Perbandingan Nilai IC50 pada

Discovery

to

Products.J Nat Prod. 71:1311-1321. Rani

Nurwahyuni,

Vitamin C, Daun Sirsak, Daun Binahong

Aktifitas

dan Daun Benalu

Anredera

cordifolia

Terhadap

Pertumbuhan

Epidermis

Pada

KESIMPULAN

Commercial

Ekstrak

2012.

Daun (Ten)

Uji

Binahong Steen)

Stahhylcocus

Jerawat.

[Skirpsi].

Bandung : Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Sunan Gunung Djati Bandung.

183


Widyaningrum,

Herlina.

ISSN 1979-8911

2012.

Sirsak Si Buah Ajaib 10.000x Lebih Hebat dari Kemoterapi. Yogyakarta: MedPress. Yuswantina,

Richa.

2009.

Uji

aktivitas Penangkapan Radikal Bebas Dari Ekstrak Petroleum Eter, Etil Astat dan Etanol Rhizome Binahong Anredera cordifolia (Ten) Steenis dengan Metode DPPH

(1,1-difenil-2-pikrilhidra-zil).

[Skripsi]. Surakarta : Fakultas Farmasi Universitas Muhammadyah Surakarta.

184

Edisi Juni 2015 Volume IX No. 1 ISSN

Recommend Documents