DETEKSI KEMATIAN SEL KANKER PAYUDARA T47D OLEH FRAKSI DCM KULIT BATANG ASAM KANDIS (Garcinia Cowa Roxb.) DENGAN METODE DOUBLE STAINING

P ro sid ing Sem i na r Na siona l & Wo rkshop “Pe rkemba ngan Te rki ni Sa in s Fa rma si & K l in i k 5” | Padang , 6 -7 No vembe r 2015

DETEKSI KEMATIAN SEL KANKER PAYUDARA T47D OLEH FRAKSI DCM KULIT BATANG ASAM KANDIS (Garcinia Cowa Roxb.) DENGAN METODE DOUBLE STAINING

Elidahanum Husni*, Fatma Sri Wahyuni, Rizka Yunadia Fakultas Farmasi Universitas Andalas, Padang ABSTRAK Breast cancer is a common malignancy in women and the highest cause of death from cancer among women in the world. It has been known that stem bark of asam kandis (Garcinia cowa Roxb.) contain on xanthone which has potential as anticancer. On previous study, DCM stem bark fraction of Garcinia cowa Roxb. showed cytotoxic effect in T47D cells with 4 µg/mL of IC50. This study aims to determine the effect of DCM stem bark fraction of Garcinia cowa Roxb. in cell death induction (apoptosis) of breast cancer cells T47D using double staining method. Double staining method based on the DNA fluorescence differentiation of viable and death cells after binding two DNA fluorochrome, propidium iodide (PI) and acridine orange (AO). The result of this study shows that viable cells are green fluorescence, the cell undergoes apoptosis in green mixed yellow, and the cell undergoing necrosis is colored orange mix red. The average percentage of apoptotic cells in variable DCM stem bark fraction of Garcinia cowa Roxb. induction is higher than the average percentage of apoptotic cells in variable control (induction = 29,9233 ± 3,23117 and control = 3,4333 ± 3,28221). The result of statistics analysis by Independent Sample Test shows apoptosis significance value (2-tailed) = 0,005 (< 0,025).

Kata Kunci: Steam bark of asam kandis (Garcinia cowa Roxb.), T47D cells, apotosis

PENDAHULUAN

payudara dapat terjadi pada pria maupun

Kanker merupakan suatu penyakit yang terjadi

wanita, hanya saja prevalensi pada wanita jauh

melalui proses transformasi. Proses ini akan

lebih tinggi (CCRC, 2009).

berlangsung apabila sel mengalami perubahan

Data terbaru dari American Cancer Society telah

genetik dan mendapat kemampuan untuk

menghitung bahwa di tahun 2013, ada 2.240

melepaskan diri dari mekanisme regulator.

kasus baru kanker payudara pada pria dengan

Kanker dapat mengenai seluruh jaringan tubuh

angka kematian sebesar 410 kasus. Sementara

manusia termasuk payudara (Baratawidjaja,

sekitar 39.620 wanita meninggal dunia setiap

2010). Kanker payudara merupakan salah satu

tahunnya

kanker penyebab kematian tertinggi pada

perkirakan jumlah kasus kanker payudara akan

wanita di berbagai belahan dunia. Dua pertiga

meningkat 1.050.346 kasus per tahun (Rasjidi,

dari penderita kanker payudara di dunia berada

2010).

di negara-negara yang sedang berkembang

Perkembangan payudara normal dikontrol oleh

termasuk Indonesia (Amalina, 2008). Kanker

keseimbangan antara proliferasi dan apoptosis

karena

kanker

payudara.

Di

110


sel payudara. Pertumbuhan tumor dapat terjadi

(aktivitas

karena proliferasi yang tak terkontrol dan

tetrapreniltoluquinon

berkurangnya apoptosis (Parton et al., 2001).

dari kulit batang G. cowa.

Apoptosis merupakan program bunuh diri dari

Dari penelitian sebelumnya telah diketahui

sebuah sel. Program ini memiliki peran yang

bahwa ekstrak etanol kulit batang asam kandis

penting

homeostatis

(Garcinia cowa Roxb.) memiliki efek sitotoksik

perkembangbiakan sel dan dengan adanya

terhadap sel kanker payudara T47D dengan

disregulasi

berakibat

nilai IC50 5,1 µg/ml (Faras, 2013). Uji efek

timbulnya bermacam-macam penyakit (Evan

sitotoksik dari hasil fraksinasi kulit batang asam

and Litlewood,1998).

kandis juga telah dilakukan dan memperoleh

Modalitas terapi kanker payudara secara umum

hasil fraksi DCM sebagai fraksi paling aktif

meliputi operasi, kemoterapi, radioterapi, terapi

terhadap sel kanker payudara T47D denga nilai

hormonal, dan terapi target (Suyatno, 2010).

IC50 4 µg/mL.

Kemoterapi merupakan pengobatan kanker

Metode

dengan

yang

mendeteksi kematian selnya adalah dengan

mempunyai efek menghambat atau mematikan

metode double staining. Metode double staining

sel kanker. Namun karena biaya yang tinggi,

berdasarkan pada perbedaan fluoresensi DNA

hasil yang tidak memuaskan, dan multi drugs

pada sel yang hidup dan mati karena pengikatan

resistance

tentang

dua fluorokrom, yaitu propidium iodida -

antikanker sangat diperlukan (Suyatno, 2010).

akridin oranye. Dengan melihat perbedaan

Selain itu, terapi tersebut seringkali tidak

warna di bawah mikroskop fluorescence, dapat

terjangkau oleh masyarakat, maka dicari obat

dibedakan sel yang hidup dan sel yang

tradisional untuk pengobatan kanker. Ada

mengalami kematian secara apoptosis dan

beberapa

nekrosis (CCRC, 2009).

untuk

menjaga

apoptosis

menggunakan

maka

ini

bisa

bahan

penelitian

kelebihan

kimia

baru

penggunaan

obat

antioksidan)

pengujian

(aktivitas

yang

dan antikanker)

digunakan

untuk

tradisional, harganya lebih murah karena dapat dibudidayakan, mudah didapat dan diharapkan

METODE PENELITIAN

efek samping lebih minimal dibanding obat

Alat

antikanker sintetik (Rosmarilin, 2006).

Alat-alat yang digunakan untuk uji apoptosis

Garcinia cowa Roxb. atau yang dikenal dengan

berupa sarung tangan karet, botol semprot, labu

nama

lama

Erlenmeyer (Iwaki®), flask T-25 (Iwaki®), botol

digunakan masyarakat terutama untuk manisan

Duran, tabung Appendorf (Iwaki®), pipet mikro

atau penyedap masakan atau rempah-rempah

(Ecopipette®),

(Heyne, 1987).

analitik,

spesies

daerah

asam

kandis

sudah

Berdasarkan hasil penelitian,

ini mengandung golongan santon,

hemasitometer,

autoklaf

(Nasional®),

(Hirayama®),

inkubator

370

timbangan lemari

es

C/5% CO2 (Thermo

benzofenon dan flavonoid. Golongan senyawa

Scientific®), microbiological safety cabinet air

ini diketahui memiliki berbagai aktivitas seperti

flow kelas II (Thermo Scientific®), vortex

antimikroba,

(Etech®), penangas air (Memert®), sentrifus

antiimflamasi,

antimalaria, antitumor,

antioksidan, dan

antikanker

(Thermo

Scientific®),

tabung

sentrifugal,

inverted

(Zeiss®),

mikroskop

(Komguem et al., 2005). Wahyuni et al. (2004)

mikroskop

telah berhasil mengisolasi senyawa rubrasanton

Imager.A2 (Zeiss®), 24 well plate, dan cover slip. 111


Bahan

untuk melihat apakah sel melekat di dasar flask

Bahan yang digunakan untuk deteksi

dan membentuk lapisan monolayer. Medium

kematian sel adalah fraksi DCM dari kulit batang

pertumbuhan diganti sekali dalam dua hari dan

asam kandis (Garcinia cowa Roxb). Bahan-bahan

bila jumlah sel di dalam flask mencapai 70-85%,

yang digunakan untuk deteksi mekanisme

lakukan sub kultur sel.

kematian sel yaitu sel kanker payudara manusia T47D, dimetil sulfoksida (DMSO), etanol 70%, air

ultrapurifikasi,

Komplit

Penghitungan Sel

(MK)

Tambahkan 2 ml tripsin-EDTA ke dalam flask

Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640,

yang berisi kultur sel, kemudian inkubasi 5-10

Tripsin-EDTA, Phosphate Buffer Saline (PBS),

menit. Kemudian larutan tripsin-EDTA yang

reagen Propidium Iodida - Akridin Oranye.

berisi sel disentrifus dengan kecepatan 3000

Ibuprofen 200 mg dari PT Pharos (No.

rpm selama 5 menit. Buang supernatan, lalu

Batch BN C4G580B), metanol p.a (Emsure®),

pelet disuspensikan dalam 1 ml medium RPMI.

kloroform p.a

a.

Medium

c.

(Emsure®),

aseton p.a

(Emsure®)

Ambil 10 µl suspensi sel, letakkan pada masing-

dan etil asetat p.a (Emsure®) dari PT Merck.

masing kotak penghitungan sel hemasitometer.

Kultur Sel

Lakukan penghitungan di bawah mikroskop dan

Penyiapan Alat

rata-rata jumlah sel ditentukan untuk membuat

Alat–alat yang digunakan untuk pengujian harus

suspensi sel. 50.000 ribu sel dalam setiap sumur

dalam keadaan bersih dan steril. Wadah plastik

24 well plate dilakukan untuk analisis deteksi

dipersiapkan hanya untuk satu kali pemakaian,

kematian sel.

dan sterilitasnya terjamin selama kemasan tidak rusak. Untuk alat-alat berbahan gelas, wadah dicuci

bersih

dan

dikeringkan.

d.

Peletakan Sel

Kemudian

Suspensi sel dalam medium dibuat jumlah dan

1210C

volume terukur. Siapkan 24 well plate dan cover

tekanan 15 lbs selama 15 menit. Sedangkan

slip. Masukkan cover slip ke dalam sumuran

microbiological safety cabinet air flow kelas II

menggunakan pinset dengan hati-hati. Transfer

disterilkan dengan cara disemprot dengan

1000 µl suspensi sel ke atas cover slip. Setiap

etanol 70%.

akan mengisi sumuran, resuspensi sel kembali.

disterilkan dengan autoklaf pada suhu

Kolom pertama merupakan kontrol yang berisi b.

Penyiapan Sel

suspensi sel dalam medium, sedangkan kolom

Sel kanker payudara yang digunakan yaitu sel

kedua berisi suspensi sel diperlakukan dengan

T47D

merupakan

dari

Cancer

fraksi DCM kulit batang asam kandis. Amati

Center

(CCRC)

keadaan sel di bawah mikroskop untuk melihat

Universitas Gajah Mada (UGM). Sel kanker

distribusi sel. Inkubasi pada suhu 370 C, 5% CO2

dikeluarkan dari freezer (-800C), dihangatkan

selama 24 jam.

Chemoprevention

koleksi

Research

dalam penangas air pada suhu 370C selama 2-3 menit. Setelah mencair, sel dipindahkan ke dalam flask yang telah berisi 15 ml media, diinkubasi selama 3-4 jam pada suhu

370

Pembuatan Larutan Uji a.

Larutan Stok

C, 5%

Timbang fraksi DCM kulit batang asam kandis

CO2, kemudian diamati di bawah mikroskop

sebanyak 100 mg. Larutkan dalam 1 ml pelarut 112


DMSO untuk mendapatkan konsentrasi larutan

mikroskop fluorescence. Jika pewarnaan belum

100 mg/ml. Fraksi ini

optimal, tunggu beberapa menit dan amati

harus dapat larut

sempurna dalam pelarut yang digunakan.

kembali. Dokumentasikan. Set kamera dengan setting khusus untuk fluorescence. Setelah

b.

Larutan Uji Untuk Deteksi Kematian Sel

selesai, buang cover slip dan cuci kembali object

Satu tabung appendorf disiapkan untuk masing-

glass. Lakukan sanitasi laboratorium.

masing sampel, diberi label sesuai dengan konsentrasi yang akan dibuat. Pengenceran

Analisa Data

dilakukan untuk mendapatkan konsentrasi yang

Masing-masing sel yang viabel, apoptosis atau

akan diuji dalam media RPMI-1640.

nekrosis dihitung jumlahnya secara manual. Dengan menggunakan data jumlah sel dari hasil

Uji Deteksi Kematian Sel

penghitungan

tersebut,

dapat

ditentukan

Viabilitas, nekrosis, dan apoptosis sel dihitung

persentase sel yang mengalami apoptosis atau

menggunakan 2 jenis intercalating agents yaitu

nekrosis.

Propidium Iodida (PI) dan Akridin Oranye (AO). Ambil 24 well plate yang telah berisi sel dari inkubator. Buang semua medium komplit dari sumuran dengan pipet Pasteur secara perlahanlahan. Cuci sel dalam sumuran dengan PBS masing-masing 500 μL. Buang PBS dari sumuran dengan pipet Pasteur secara perlahan-lahan. Masukkan sampel dengan konsentrasi tertentu

Dari hasil pengamatan, data diuji dengan uji

sebanyak 1000 μL ke dalam sumuran. Masukkan

parametrik analisis variansi Independent Sample

media ke dalam sumuran untuk kontrol sel.

T-test. Uji Independent Sample T-test dilakukan

Inkubasi plate di dalam inkubator. Amati kondisi

untuk

sel setelah inkubasi 24 jam, dokumentasikan.

perlakuan terhadap setiap parameter yang

Konsultasikan untuk menentukan akhir waktu

diamati

inkubasi. Setelah inkubasi selesai, keluarkan

variabel kontrol dan perlakuan.

plate dari inkubator. Buang semua media dari sumuran dengan pipet Pasteur secara perlahan. Cuci sel dalam sumuran dengan PBS masingmasing 500 mL. Buang PBS dari sumuran dengan pipet Pasteur secara perlahan. Ambil cover slip menggunakan pinset dengan bantuan ujung jarum dengan hati-hati. Letakkan cover slip di atas object glass (kaca obyek). Beri label pada object glass. Teteskan masing-masing 10 μL reagen propidium iodida dan akridin oranye di atas cover slip. Ratakan dengan cara menggoyang secara perlahan. Amati di bawah

mengetahui dan

apakah

perbedaan

ada

pengaruh

bermakna

antara

HASIL DAN DISKUSI Setelah dilakukan penelitian mengenai deteksi kematian sel fraksi DCM kulit batang asam kandis (Garcinia cowa Roxb.) dengan IC50 sebesar 4 µg/mL terhadap sel kanker payudara T47D menggunakan metode double staining, maka didapatkan hasil terjadinya perbedaan fluoresensi warna antara sel yang hidup (viabel) dengan sel yang mengalami kematian sel secara apoptosis dan nekrosis. Perbedaan warna ini dapat dilihat dibawah mikroskop fluorescence 113


menggunakan dua jenis intercalating agents

antara sel kontrol (tanpa perlakuan) dan sel

yaitu propidium iodida dan akridin oranye.

yang diberi perlakuan dengan fraksi DCM kulit

Pengamatan kematian sel dilakukan dengan

batang asam kandis (Gambar 1).

membandingkan gambaran fluoresensi warna

Gambar 1. (a) Fluoresensi warna sel kontrol (tidak diberikan perlakuan dengan fraksi DCM kulit batang asam kandis) pada inkubasi setelah 24 jam, sel viabel berfluoresensi hijau seragam. (b) Fluoresensi warna dari efek perlakuan fraksi DCM kulit batang asam kandis dengan IC50 4 µg/ml terhadap sel viabel, apoptosis dan nekrosis sel kanker payudara T47D pada inkubasi 24 jam ( sel viabel berflouresensi hijau seragam, sedangkan sel yang mengalami kematian sel secara apoptosis yang berflouresensi hijau kekuningan, dan sel yang mengalami kematian sel secara nekrosis berflouresensi oranye sampai kemerahan). Pada pengamatan kematian sel juga dilakukan perhitungan jumlah dan rata-rata

persentase sel yang hidup (viabel), apoptosis, dan nekrosis (Tabel 1, Gambar 2).

Tabel 1. Rata-rata persentase sel yang hidup (viabel), apoptosis, dan nekrosis Persentase ( % ) Kelompok Cover slip Viabel Apoptosis Nekrosis Kontrol 1 100 0 0 2 90,46 6,54 2,99 3 95,69 3,76 0,53 Rata-rata 95,38 3,43 1,17 Perlakuan 1 61,05 32,84 6,10 2 60,11 30,48 9,40 3 67,77 26,45 5,78 Rata-rata 62,97 29,92 7,09

Gambar 2. Grafik Persentase Sel Viabel, Apoptosis, dan Nekrosis pada variabel kontrol dan perlakuan dengan fraksi DCM kulit batang asam kandis 114


Pengolahan data hasil penelitian diuji secara

fraksi paling aktif efek sitotoksiknya terhadap

statistik menggunakan uji Independent Sample

sel

T-test sebagai berikut :

menggunakan metode double staining. Pada

kanker

payudara

T47D

dengan

penelitian sebelumnya telah diketahui bahwa 1. Rata-rata persentase sel viabel ± SD (kontrol =

ekstrak etanol kulit batang asam kandis

95,3833 ± 4,77739 dan perlakuan =

(Garcinia cowa Roxb.) memiliki efek sitotoksik

62,9767 ± 4,17767), rata-rata persentase sel

terhadap sel kanker payudara T47D dengan

apoptosis ± SD (kontrol = 3,4333 ± 3,28221

nilai IC50 5,1 µg/ml (Faras, 2013). Selanjutnya

dan perlakuan = 29,9233 ± 3,23117), dan

juga telah dilakukan uji efek sitotoksik terhadap

rata-rata persentase sel nekrosis ± SD

sel kanker payudara T47D dari empat jenis hasil

(kontrol = 1,1733 ± 1,59544 dan perlakuan =

fraksinasi, yaitu fraksi DCM, etil asetat, heksan

7,0933 ± 2,00403).

dan etanol sehingga diperoleh fraksi DCM sebagai fraksi paling aktif yang berpotensi

2. Dari

uji

homogenitas

dengan

sitotoksik terhadap sel kanker payudara T47D

Levene’s Test for Equality of Variances

dengan IC50 4 µg/ml. Maka dari itu, penelitian ini

diperoleh nilai sel viabel dengan Sig. =

merupakan penelitian lanjutan yang bertujuan

0,962 (P > 0,05), sel apoptosis dengan Sig. =

untuk mendeteksi jenis kematian sel yang

0,985 (P > 0,05), dan sel nekrosis dengan Sig.

terjadi pada sel kanker payudara T47D oleh

= 0,565 (P > 0,05) yang berarti bahwa

induksi fraksi DCM kulit batang asam kandis

masing-masing variansi dari persentase sel

(Garcinia cowa Roxb.).

viabel,

antara

Pada penelitian ini terdapat dua variabel uji,

variabel kontrol dan perlakuan adalah sama,

yaitu variabel kontrol dan variabel yang diberi

maka

rata-rata

perlakuan dengan fraksi DCM kulit batang asam

persentase sel viabel, apoptosis, dan nekrosis

kandis pada konsentrasi IC50 4 mg/mL. Pada sel

digunakan data Equal Variance Assumed.

kontrol,

apoptosis, untuk

dan

variansi

nekrosis

membandingkan

umumnya

terdapat

sel

yang

berfluoresensi hijau terang seragam dan sedikit 3. Hasil uji T-test menunjukkan sel viabel

oranye. Fluoresensi hijau terang yang seragam

dengan Sig. (2-tailed) = 0,005 (< 0,025), sel

pada nukleus dimiliki oleh sel hidup yang masih

apoptosis dengan Sig. (2-tailed) = 0,005 (<

memiliki membran sel yang utuh (McGahon et

0,025), dan nekrosis dengan Sig. (2-tailed) =

al., 1995). Sel berfluoresensi hijau menandakan

0,008 (< 0,025). Ini berarti bahwa terjadi

bahwa

perbedaan yang bermakna dari masing-

berfluoresensi oranye merupakan sel yang mati

masing persentase sel viabel, apoptosis, dan

akibat nekrosis. Nekrosis dapat terjadi pada

nekrosis

kontrol karena faktor lingkungan. Mungkin

antara

variabel

kontrol

dan

perlakuan.

sel

masih

hidup.

Sedangkan

sel

selama preparasi sel dengan double staining terjadi

stres

yang

menyebabkan

sel-sel

Penelitian ini mendeteksi kematian sel kanker

kemudian mati (Meiyanto dan Septisetyani,

payudara T47D oleh fraksi DCM kulit batang

2005).

asam kandis (Garcinia cowa Roxb.) sebagai 115


Pada kelompok perlakuan, hampir semua sel

jumlah apoptosis dan nekrosis. Berbeda dengan

menunjukkan fluoresensi warna yang tidak

variabel kontrol, setelah diinkubasi selama 24

seragam yaitu fluoresensi hijau bercampur

jam tanpa diberi perlakuan viabilitas sel jauh

kuning

lebih tinggi dan hanya sedikit sel yang

yang

mengindikasikan

terjadinya

apoptosis dan fluoresensi oranye kemerahan

mengalami

yang

menandakan bahwa fraksi DCM kulit batang

menandakan

bahwa

sel

mengalami

apoptosis

nekrosis. Hal tersebut terjadi karena sel mulai

asam

mengalami

menginduksi apoptosis.

membran

blebbing,

sehingga

propidium iodida mulai masuk ke dalam sel (Sekti et al., 2010). Perubahan morfologi pada sel yang mengalami apoptosis ditandai dengan terjadinya kromatin,

kondensasi fragmentasi

dan

fragmentasi

DNA,

menyusutnya

volume sel, karioreksis, dan pembentukan badan-badan apoptosis (Kerr et al., 1970). Seperti yang terlihat pada gambar fluoresensi kelompok

perlakuan,

sel

yang

apoptosis

memiliki bentuk bulat yang tidak utuh dan terdapat

fragmen-fragmen

seperti

badan

kandis

dan

memiliki

nekrosis. potensi

Ini

dalam

Dari hasil analisa uji statistik menggunakan Independent Sample T-test menunjukkan nilai Sig. (2-tailed) dari sel viabel = 0,005 (< 0,025), sel apoptosis dengan Sig. (2-tailed) = 0,005 (< 0,025), dan nekrosis dengan Sig. (2-tailed) = 0,008 (< 0,025). Hal ini berarti bahwa terjadi perbedaan yang bermakna dari masing-masing persentase sel viabel, apoptosis, dan nekrosis antara variabel kontrol dan perlakuan. Kulit batang asam kandis (Garcinia cowa Roxb.)

apoptosis. Sementara nekrosis yang terjadi di

mengandung

sekitar sel ditandai dengan pembengkakan sel,

senyawa flavonoid, terpenoid, steroid, saponin,

rusaknya organel, dan pecahnya membran sel,

dan fenolik. Salah satu senyawa golongan

sehingga seluruh kandungan sel keluar ke cairan

fenolik adalah xanthone dengan beberapa

ekstraseluler, sehingga kerusakan jaringan yang

turunannya

seperti

meluas pada nekrosis ini dapat menyebabkan

mangostin,

cowanin,

inflamasi

tetrapreniltolouquinon,

(Guimaraes

dan

Linden,

2004).

metabolit

sekunder,

seperti

rubraxanthone, cowanol,

alfa

cowasanton,

β-mangostin

dan

Berdasarkan hasil fluoresensi warna diatas,

xanthone terprenilasi (Likhitwitayawuid et al.,

secara kualitatif dapat dilihat bahwa terjadi

1997; Wahyuni, et al., 2004). Senyawa-senyawa

perbedaan warna antara variabel kontrol dan

ini diketahui memiliki berbagai aktivitas seperti

perlakuan yang menandakan telah terjadinya

antimikroba,

apoptosis.

antiimflamasi, antitumor, dan antikanker.

Dari hasil penghitungan diperoleh persentase

Salah satu turunan xanthone, α-mangostin,

rata-rata sel pada variabel kontrol (viabel =

diketahui

95,38 %, apoptosis = 3,43 %, nekrosis = 1,17 %)

melalui jalur intrinsik (mitokondria) dengan

dan pada variabel perlakuan (viabel = 62,97 %,

cara mengaktivasi caspase 9 dan caspase 3 pada

apoptosis = 29,92 %, nekrosis = 7,09 %). Hal ini

sel HL60. Hal ini ditandai dengan terjadinya

menunjukkan

diberi

disfungsi mitokondria seperti pembengkakan

perlakuan dan diinkubasi selama 24 jam terjadi

sel, hilangnya potensial membran, penurunan

bahwa

setelah

sel

antimalaria,

mampu

menginduksi

antioksidan,

apoptosis

pengurangan viabilitas sel dan peningkatan

116 111


ATP, akumulasi ROS, dan pelepasan sitokrom C

KESIMPULAN

menuju sitosol (Matsumoto et al., 2004).

Dari penelitian yang dilakukan, dapat diambil

Berdasarkan data hasil penelitian ini, fraksi DCM kulit batang asam kandis memiliki aktivitas dalam memacu kematian sel kanker payudara T47D melalui mekanisme apoptosis, sehingga berpotensi

untuk

dikembangkan

sebagai

chemopreventif dan antikanker dengan target aksi spesifik. Namun, masih perlu dilakukan penelitian

lebih

lanjut

guna

mengetahui

senyawa aktif dalam fraksi DCM kulit batang asam kandis yang bertanggung jawab terhadap

kesimpulan bahwa fraksi DCM kulit batang asam kandis dapat memicu kematian sel kanker payudara T47D melalui mekanisme kematian sel secara apoptosis. Terjadinya perbedaan nilai rata-rata persentase yang signifikan antara sel viabel, apoptosis, dan nekrosis pada variabel kontrol dengan variabel yang diberi perlakuan fraksi DCM kulit batang asam kandis. Dari hasil perhitungan

Independent

Sample

T-test

didapatkan nilai signifikansi 2-tailed < 0,025.

mekanisme pemacuan apoptosis sel kanker payudara T47D.

DAFTAR PUSTAKA Amalina N. 2008. Uji sitotoksik ekstrak etanol 70% buah merica hitam (piper nigrum L.) terhadap sel HeLa. Surakarta: Fakultas Farmasi Universitas Muhammadaiyah Surakarta. American Cancer Society. 2014. Cancer Facts and Figures 2014. Atlanta: American Cancer Society. Baratawidjaja KG, Rengganis I. 2010. Imunologi Dasar edisi 9. Jakarta: FK UI. Cancer Chemoprevention Research Center (CCRC). 2009. Mekanisme dan Regulasi Apoptosis. Yogyakarta: Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Press. Evan G, Littlewood TD. 1998. A Matter of Life and Cell Death. Science 281: 1317 -1322. Guimaraes CA, Linden R. 2004. Programmed Cell Death: Apoptosis and Alternative Deathstyles. Eur j Biochem 271: 1638-50. Heyne K. 1987. Tumbuhan Berguna Indonesia. Jilid III. Jakarta : Yayasan SaranaWana Jaya. Komguem J, AL Meli, RN Manfouo, David Lontsi, FN Ngounou, V Kuete, Hippolyte W. Kamdem, Pirre Tane, Bonaventure T. Ngadjui, Beiben L. Sondengam and Joseph D. Connolly. 2005. Xanthones from Garcinia smeathmannii (Oliver) and their antimicrobial activity. Phytochemistry 66: 17171773. Kerr JFR, Wyllie AH, and Currie AR. 1972. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implication in tissue kinetics. BJ C. 26: 239-57. Likhitwitayawuid K, Phadungcharoen T, Mahidol C, Ruchirawat S. 1997. 7-O-Methylgarcinone E from Garcinia cowa. Phytochemistry 45: 1299 –1301.

Matsumoto K, Akao Y, Yi H, Ohguchi K, Ito T, Tanaka T, Kobayashi E, Iinuma M, and Nozawa Y. 2004. Preferential target is mitochondria in α-mangostininduced apoptosis in human leukemia HL60 cells. Bioorg. Med. Chem 12: 5799-5806. McGowan CH. 2003. Regulation of the eukaryotic cell cycle. Progress in Cell Cycle Research 5: 1-4. Meiyanto, Edi dan Endah P. Septisetyani. 2005. Efek Antiproliferatif dan Apoptosis Fraksi Fenolik Ekstrak Etanolik Daun Gynura Procumbens (Lour.) Merr. terhadap Sel Hela. Majalah Artocarpus (5) 2: 74-80. Nahari, Faras. 2013. Uji Efek Sitotoksik Ekstrak Etanol Kulit Batang Asam Kandis (Garcinia cowa Roxb.) Terhadap Sel Kanker Payudara T47D Dengan Metoda MTT. (Skripsi). Padang : F.Farmasi, UNAND. Parton M, Dowsett M, and Smith I. 2001. Studies of apoptosis in breast cancer. BMJ 322: 1528-32. Rasjidi, Imam. 2010. Epidemiologi Kanker pada Wanita. Jakarta: Sagung Seto. Rosmarilin H. 2006. Anti-cancer activity of local alpinia galangal L(SW) rhizome extracts on cancer cell linee of human and mice transplanted with primary tumor cell. USU reporitary 2006 (cited 2007 feb 14). Available from: http://library.usu.ac.id/download/fp/D0300608.pdf Sekti DA, Muhammad Fithrul Mubarok, Inna Armandani, Sendy Junedy dan Edy Meiyanto. 2010. Ekstrak Etanolik Daun Awar–Awar (Ficus Septicaburm F.) Memacu Apoptosis Sel Kanker Payudara Mcf-7 Melalui Penekanan Ekspresi Bcl-2. Majalah Obat Tradisional 15(3).

117 112


Suyatno, Pasaribu ET. 2010. Bedah Onkologi Diagnosis dan Terapi Edisi I. Jakarta: CV Sagung Seto. Wahyuni FS, Lajis NH, Stanslas J, Ali DAI, Shaari K, and Dachriyanus. 2004. Isolation of bioactive compounds from Garcinia cowa Roxb. 14th Indonesian National Symposium on Natural Products Chemistry. Bandung. 16-17th December 2004

118 113

DETEKSI KEMATIAN SEL KANKER PAYUDARA T47D OLEH FRAKSI DCM KULIT BATANG ASAM KANDIS (Garcinia Cowa Roxb.) DENGAN METODE DOUBLE STAINING

Recommend Documents