DAFTAR PUSTAKA. Aktivitas Penghambatan Tirosin..., Qori Wahyuningsih, Farmasi UMP, 2013

27

DAFTAR PUSTAKA

Andersen, Q. M., and Markham, K. R. 2006.Flavonoids.Chemistry, Biochemistry, and Applications.Boca. Raton, FL: CRC Press, Taylor & Francis. Arung ET, kusuma IW, Iskandar YM. Yasutake S. Shimizu K. Kondo R. 2006.Screening of Indonesian plants for tyrosinase inhibitory activity. Journal Wood Science 51:520-525. Backer, CA and Bakkuizen v/d Brink RC Jr. 1963.Flora of Java vol 1. WolterNoordhoff NV. Groningen. P:2. Balsam, M.S. and Sagarin, E., 1972.Cosmetics Science and Technology, 2

nd

ed,

Vol. 3, John Wiley and Sons, New York. Batubara I, Darusman LK, Mitsunaga T, Rahmniwati M, Djauhari E.2010. Potency of Indonesia medicinal plants as tyrosinase inhibitors and antioxidant agent. Journal of Biologi Science, 10 :138- 144. BPOM. 2004. Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat Indonesia Volume I. Jakarta : BPOM RI. Chang T, Ding HY, Tai SSK, Wu CY. 2007. Mushroom tyrosinase inhibitory effects of isoflavones isolated from soygerm koji fermented with Aspergillus oryzae BCRC 32288. Journal of Food chemistry. 105: 14301438. Chang T. 2009. An updated review of tyrosinase inhibitor. International Journal of molecular science: 2440- 2476. Depkes, RI. 1979. Farmakope Indonesia ed III. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Depkes, RI. 1986. Sediaan Galenika. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Depkes, RI. 1995. Farmakope Indonesia ed IV. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia.

Aktivitas Penghambatan Tirosin..., Qori Wahyuningsih, Farmasi UMP, 2013

28

Depkes RI.2000.Inventaris Tanaman Obat Indonesia (I).Jilid I. Jakarta : Departemen Kesehatan RI dan Kesejahteraan Sosial RI Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan. Halaman 131-132. Depkes, RI. 2006. Inventaris Tanaman Obat Indonesia (VI). Jakarta: Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Tawangmangu. Food and Drug Administration (FDA). 2003.Guidance for Industry Photosafety Testing, Pharmacology Toxycology Coordinating Committee in the Centre for Drug Evaluation and Research (CDER) at the FDA. Gennaro, RA., 1995. Remington‟s : Practice of Pharmacy. Nineteenth edition Vol II.Pennsylvania : Mack Publishing Company Easton. Germano, M.P., Cacciola, F., Donato, P., Dugo, P., Certo, G., D‟Angelo, V., et al., 2012., Betula pendula leaves :polyphenolic characterization and potential innovative usi in skin whitening products, Fitoterapia. 83:877882. Harborne.1987.Metode Fitokimia Penuntuk Cara Modern MenganalisisTumbuhan. Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata. Bandung: ITB Press. Hill, MG. 2010. Specialty Board Review Dermatology. Katzung, G.B. 1995. Basic and Clinical Pharmacology, a lange medical book. Prentice-Hall International, USA. Kim, Y. J., K.J. Kyung, J.H. Lee., and H. Y. Chung. (2004). “4-4‟Dihydroxybiphenyl as a New Potent Tyrosinase Inhibitor”. J. Biol. Pharm. Bull. 28 (2) 323-327. Kubo, I., Ikuyo, KH., Ken, IN., Frida, S., Midori, T., Jose, S., et al., 2003. Tyrosinase Inhibitors From Galls of Rhus javanica Leaves and Their Effects on Insects. Naturforsch 719-725. Lachman, Leon, dkkl. 1994. Teori dan Praktek Farmasi Industri II (terjemahan ) Siti suyatmi.Edisi ketiga. Jakarta: UI Press. Likhitwitayawuid.K. 2008.Stilbenes with tyrosinase inhibitor activity.Current Science, 94: 44- 52. Manoi,F. 2009. “Binahong (Anredera cordifolia) sebagai Obat”.Warta penelitian dan Pengembangan Tanaman Industri. Vol.15 (1): hal 4.


29

Marliana, Soerya dewi, Venty Suryanti, dan Suyono.2005.Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimia Buah Labu Siam (Sechium edule Jacq.Swatrz.)dalam ekstrak etanol. Biofarmasi 3(1): 2631. Miyazawa, M. and Naotaka T., 2007. Inhibitory Compound of Tyrosinase Activity from the Sprout of Polygonum hydropiper L. (Benitade). Biol. Pharm.Bull.30(3) 595-597. Mus. 2008.Informasi Spesies Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). http://www.plantamor.com. Diakses 15 Desember 2012. Octavia,D. R. 2009. Uji Aktivitas Penangkap Radikal ekstrak petroleum Eter, Etil Asetat dan Etanol Daun binahong (anredera cordifolia(Tenore) Steen) dengan Metode DPPH (2,2- difenil-1-pikrilhidrazil).Skripsi Sarjana pada fakultas farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Pink A. 2004.Gardening for the Million. Project Gutenberg Literary Archive Foundation.http://www.gutenberg.org. Diakses 10 Desember 2012. Rahayu, Elvi. 2012. Aktivitas Gabungan Ekstrak Bakau (Rhizophora apiculata), Alamanda (Allamanda schottii), Dan Binahong (Anredera cordifolia) Terhadap Enzim Tirosinase. Skripsi Sarjana pada fakultas farmasi Institut Pertanian Bogor.Diakses 12 Juni 2012. Rochani, N. 2009. Uji Aktivitas Antijamur Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia(Tenore) Steen) Terhadap Candida albicans serta skrining fitokimiannya. Skripsi Tidak Diterbitkan. Surakarta : Fakultas Farmasi UMS Surakarta. Rowe RC, Paul JS dan Paul JW. 2003. Handbook of Pharmaceutical Excipients,4thedition. London: Chicago Pharmaceutical Press. Sembrook, J and David, WR., 2001. Molecular Cloning edisi III. New York. Cold Spring Harbor laboratory Press. Setiaji, A. 2009.Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Petroleum eter, Etil asetat Dan Etanol 70% Rhizoma binahong (Anredera cordifolia (Tenore) Steenis) Terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 Dan Escherichia coli


30

ATCC 11229 Serta Skrining Fitokimianya. Skripsi Tidak Diterbitkan. Surakarta :Fakultas Farmasi UMS Surakarta. Seymour, M.B. 1975. Medicated application, Remington‟s Pharmaceutical hal 295-296, (1523). Susetya Darma,S.P. 2011. Khasiat & Manfaat Daun Ajaib Binahong. Yogjakarta: Penerbit Pustaka Baru Press. Voigt, R.1994. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi Ed-5. Noerono Soendani, penerjemah. Samhoedi Raksohadiprojo, editor. Yogyakarta: Gajah Mada Press. Terjemahan dari Lehburch Der Pharmazeutischen Technologie.hlm: 314-316. Winarsi H. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal bebas Potensi dan Aplikasinya Dalam Kesehatan. Yogjakarta: Penerbit Kanisius. Yamauchi K, Mitsunaga T, Batubara I. 2011. Isolation, identification, and tyrosinase inhibitory activities of the extractives from Allamanda cathartica. Natural Resources 2: 167-172.


31

LAMPIRAN


32

Lampiran 1. Surat Keterangan determinasi daun binahong (Anredera cordifolia (Tenore) Steen)


33


34

Lampiran 2. Hasil persentase inhibisi ekstrak daun binahong


35

Lampiran 3. Hasil persentase inhibisi Hidroquinon


36

Lampiran 4. Hasil aktivitas penghambatan tirosinase

Keterangan :  Absorbansi kontrol (-) Absorbansi + enzim 1A, 1B, 1C

Absorbansi – enzim 1D, 1E, 1F

 Absorbansi Hidroquinon (kontrol positif) Konsentrasi 1,375 2,75 5,5 11 22

Absorbansi + enzim 1G, 1H, 2A 2E, 2F, 2G 3C, 3D, 3E 4A, 4B, 4C 4G, 4H, 5A

Absorbansi enzim 2B, 2C, 2D 2H, 3A, 3B 3F, 3G, 3H 4D, 4E, 4F 5B, 5C, 5D


37

Lampiran 5.Perhitungan pembuatan buffer fosfat pH 6,8

a. Pembuatan larutan BM

.2

.2

O1M

O = 177,99 g/mol

M= mol = M x V = 1 x 0,1 L = 0,1 mol mol = g

= mol x BM = 0,1 x 177,99 = 17,80 g

Jadi, membuat larutan .2

.2

O 1 M dengan cara menimbang 17,80 g

O dan melarutkannya dengan aquabides 100 mL.

b. Pembuatan larutan BM

.

.

O1M

O = 137,99 g/mol

M= mol = M x V = 1 x 0,1 L = 0,1 mol mol = g

= mol x BM = 0,1 x 137,99 = 13,80 g

Jadi, membuat larutan .

.

O 1 M dengan cara menimbang 13,80 g

O dan melarutkannya dengan aquabides 100 mL.


38

c. Pembuatan buffer fosfat 0,1 M pH 6,8 Pembuatan buffer fosfat 0,1 M pH 6,8 dengan mengambil sebanyak 46,3 mL larutan

.2

O 1 M dilarutkan dengan larutan

.

O1M

sebanyak 53,7 mL lalu diukur hingga pH 6,8.

d. Pembuatan buffer fosfat 0,02 M pH 6,8 Pembuatan buffer fosfat 0,02 M pH 6,8 dengan melakukan pengenceran dari larutan buffer fosfat 0,1 M pH 6,8. M1 x V1

= M2 x V2

0,1M x V1

= 0,02 M x 100 mL

0,1M x V1

= 0,02 M x 100 mL

V1

=

V1 = 20 mL Jadi, mengambil 20 mL dari larutan buffer fosfat 0,1 M lalu diencerkan dengan aquabides hingga 100 mL lalu diukur hingga pH 6,8.


39

Lampiran 6. Perhitungan pembuatan larutan L-DOPA

BM L-DOPA = 197, 19 g/mol a. Pembuatan larutan L-DOPA 5 mM M

=

mol = M x V = 5.

x 2,5.

= 1,25.

mol

mol = g

= mol x BM = 1,25

x 197, 19

= 0,02465 g = 24,65 mg Jadi menimbang sebanyak 24,65 mg L-DOPA lalu dilarutkan dengan 25 mL larutan buffer fosfat 0,02 M pH 6,8.

b. Pembuatan larutan L-DOPA 0,85 mM M1 x V1

= M2 x V2

5 x V1

= 0,85 x 10

5 V1 = 8,5 V1

=

V1 = 1,7 mL Jadi, caranya dengan mengambil sebanyak 1,7 mL larutan L-DOPA 5 mM lalu diencerkan dengan larutan buffer fosfat 0,02 M pH 6,8 hingga 10 mL.


40

Tabel 3.Hidroquinon (Kontrol positif) Konsentrasi 1,375

2,75

5,5

11

22

Replikasi I II III I II III I II III I II III I II III

Absorbansi + Enzim 0,188 0,190 0,189 0,172 0,172 0,172 0,160 0,158 0,157 0,153 0,157 0,155 0,149 0,147 0,145

Absorbansi – Enzim 0,034 0,033 0,035 0,033 0,034 0,034 0,033 0,033 0,034 0,034 0,034 0,035 0,035 0,038 0,038

Tabel 4.Kontrol negatif Replikasi I II III

Absorbansi +Enzim 0,232 0,225 0,222

Absorbansi -Enzim 0,033 0,034 0,035

Tabel 5. Ekstrak daun binahong

Konsentrasi 50

100

200

400

800

Replikasi I II III I II III I II III I II III I II III

Absorbansi + Enzim 0,147 0,140 0,158 0,149 0,152 0,171 0,176 0,182 0,183 0,239 0,220 0,239 0,353 0,356 0,367

Absorbansi Enzim 0,041 0,040 0,040 0,049 0,052 0,054 0,069 0,068 0,078 0,115 0,137 0,119 0,239 0,265 0,273


41

Lampiran 7. Perhitungan persentase inhibisi

Rumus = [ ( A B)

(C D)] x 100%.

A B Keterangan: A = Absorbansi larutan tanpa sampel + enzim B = Absorbansi larutan tanpa sampel tanpa enzim C = Absorbansi larutan sampel + enzim D = Absorbansi larutan sampel tanpa enzim  Perhitungan persentase inhibisi hidroquinon 1. Konsentrasi 1,375 ppm R1

= [ (0,222 0,034) – (0,188 0,034) ] x 100% 0,222

0,034

= (0,188 – 0,154) x100% = 18,085 % 0,188 R2

= [ (0,225 0,034) – (0,189 0,034) ] x 100% 0,225

0,034

= (0,191 – 0,155) x100% = 18,848 % 0,191 R3

= [ (0,232 0,034) – (0,190 0,034) ] x 100% 0,232

0,034

= (0,198 – 0,156) x100% = 21,212 % 0,198 Rata- rata

= 18,085+ 18,848+ 21,212 =54,145 = 19,381 % 3

3

2. Konsentrasi 2,75 ppm R1

= [ (0,222 0,034) – (0,168 0,033) ] x 100% 0,222

0,034

= (0,188 – 0,135) x100% = 28,191 % 0,188


42

R2

= [ (0,225 0,034) – (0,172 0,033) ] x 100% 0,225

0,034

= (0,191 – 0,139) x100% = 27,225 % 0,191 R3

= [ (0,232 0,034) – (0,172 0,033) ] x 100% 0,232

0,034

= (0,198 – 0,139) x100% = 29,797 % 0,198 Rata- rata

= 28,191+ 27,225+ 29,797 =85,213 = 28,404 % 3

3

3. Konsentrasi 5,5 ppm R1

= [ (0,222 0,034) – (0,157 0,033) ] x 100% 0,222

0,034

= (0,188 – 0,124) x100% = 34,042 % 0,188 R2

= [ (0,225 0,034) – (0,158 0,033) ] x 100% 0,225

0,034

= (0,191 – 0,125) x100% = 34,554 % 0,191 R3

= [ (0,232 0,034) – (0,160 0,033) ] x 100% 0,232

0,034

= (0,198 – 0,127) x100% = 35,858 % 0,198 Rata- rata

= 34,042+ 34,554+ 35,858 =104,454= 34,818 % 3

3

4. Konsentrasi 11 ppm R1

= [ (0,222 0,034) – (0,153 0,034) ] x 100% 0,222

0,034

= (0,188 – 0,119) x100% = 36,702 % 0,188


43

R2

= [ (0,225 0,034) – (0,155 0,034) ] x 100% 0,225

0,034

= (0,191 – 0,121) x100% = 36,649 % 0,191 R3

= [ (0,232 0,034) – (0,157 0,034) ] x 100% 0,232

0,034

= (0,198 – 0,123) x100% = 37,878 % 0,198 Rata- rata

= 36,702+ 36,649+ 37,878 =112,229 = 37,076 % 3

3


= [ (0,222 0,034) – (0,145 0,037) ] x 100% 0,222

0,034

= (0,188 – 0,108) x100% = 42,553 % 0,188 R2

= [ (0,225 0,034) – (0,147 0,037) ] x 100% 0,225

0,034

= (0,191 – 0,110) x100% = 42,408 % 0,191 R3

= [ (0,232 0,034) – (0,149 0,037) ] x 100% 0,232

0,034

= (0,198 – 0,112) x100% = 43,434 % 0,198 Rata- rata

= 42,553+ 42,408+ 43,434 =128,395 = 42,795 % 3

3

 Perhitungan persentase inhibisi ekstrak daun binahong 1. Konsentrasi 50 ppm R1

= [ (0,222 0,033) – (0,140 0,040) ] x 100% 0,222

0,034

= (0,189 – 0,1) x100% = 47,089 % 0,189


44

R2

= [ (0,225 0,033) – (0,147 0,040) ] x 100% 0,225

0,033

= (0,192 – 0,107) x100% = 44,270 % 0,192 R3

= [ (0,232 0,033) – (0,158 0,040) ] x 100% 0,232

0,033

= (0,199 – 0,118) x100% = 40,703 % 0,199 Rata- rata

= 47,089+ 44,270+ 40,703 =132,062 = 44,020 % 3

3


= [ (0,222 0,033) – (0,149 0,051) ] x 100% 0,222

0,033

= (0,189 – 0,098) x100% = 48,148 % 0,189 R2

= [ (0,225 0,033) – (0,152 0,051) ] x 100% 0,225

0,033

= (0,192 – 0,101) x100% = 47,395 % 0,192 R3

= [ (0,232 0,033) – (0,171 0,051) ] x 100% 0,232

0,033

= (0,199 – 0,12) x100% = 39,698 % 0,199 Rata- rata

= 48,148+ 47,395+ 39,698 =135,241 = 45,080 % 3

3


= [ (0,222 0,033) – (0,176 0,071) ] x 100% 0,222

0,033

= (0,189 – 0,105) x100% = 44,444 % 0,189


45

R2

= [ (0,225 0,033) – (0,182 0,071) ] x 100% 0,225

0,033

= (0,192 – 0,111) x100% = 42,187 % 0,192 R3

= [ (0,232 0,033) – (0,183 0,071) ] x 100% 0,232

0,033

= (0,199 – 0,112) x100% = 43,718 % 0,199 Rata- rata

= 44,444+ 42,187+ 43,718 =130,349 = 43,449 % 3

3


= [ (0,222 0,033) – (0,220 0,123) ] x 100% 0,222

0,033

= (0,189 – 0,097) x100% = 48,677 % 0,189 R2

= [ (0,225 0,033) – (0,239 0,123) ] x 100% 0,225

0,033

= (0,192 – 0,116) x100% = 39,583 % 0,192 R3

= [ (0,232 0,033) – (0,239 0,123) ] x 100% 0,232

0,033

= (0,199 – 0,116) x100% = 41,708 % 0,199 Rata- rata

= 48,677+ 39,583+ 41,708 =129,968 = 43,322 % 3

3


= [ (0,222 0,033) – (0,353 0,289) ] x 100% 0,222

0,033

= (0,189 – 0,094) x100% = 50,264 % 0,189


46

R2

= [ (0,225 0,033) – (0,356 0,259) ] x 100% 0,225

0,033

= (0,192 – 0,097) x100% = 49,479 % 0,192 R3

= [ (0,232 0,033) – (0,367 0,259) ] x 100% 0,232

0,033

= (0,199 – 0,108) x100% = 45,728 % 0,199 Rata- rata

= 50,264+ 49,479+ 45,728 =145,471 = 48,490 % 3

3


47

Lampiran 8. Gambar pelaksanaan penelitian

A. Pengambilan daun binahong

B. Simplisia basah

C. Proses pengeringan

D. Simplisia kering daun binahong

E. Serbuk daun binahong

F. Proses maserasi

G. Penguapan dengan evaporator

H. Ekstrak kental daun binahong


48

Lampiran 9.Uji aktivitas penghambatan tirosinase

A. Seri konsentrasi sampel

B. Seri konsentrasi kontrol positif

D. Tempat penyimpanan enzim

D. Perubahan warna


49

Lampiran 10. Identifikasi kandungan senyawa

Larutan ekstrak uji dan pembanding


50

Lampiran 11. Gambar hasil pengamatan kromatografi lapis tipis ekstrak etil asetat daun binahong

A. A. Identifikasi Flavonoid (UV366nm)

(UV 366nm)

C. Identifikasi Saponin Sinar tampak

B.Identifikasi Tanin

D.Identifikasi Alkaloid Sinar tampak


51

Lampiran 12. Alat dan bahan

1. Alat- alat gelas

2. Neraca Analitik

3. PH meter (Metrohm)

4. Microplate reader

5. Temperature suhu ruangan

6. Mikroplate


DAFTAR PUSTAKA. Aktivitas Penghambatan Tirosin..., Qori Wahyuningsih, Farmasi UMP, 2013

Recommend Documents