36
DAFTAR PUSTAKA 1. Ballschmiter, M., Futterer, O., Liebl, W. (2006), Identification and characterization of a novel intracellular alkaline α-amylase from the hyperthermophilic bacterium Thermotoga maritima MSB8, Appl. Environ. Microbiol., 72, 2206-2211 2. Bentley, I.S. and Williams, E.C. (1996), Industrial applications, dalam Industrial Enzymology, Godfrey, T., West, S., Editor, Stockton Press, New York, 2, 341, 345. 3. Boyer, R. (2000), Modern Experimental Biochemistry, Addison Wesley Longman, San Fransisco, 3, 119. 4. Brock, T. D., Madigan, M. T., Martinko, J. M. (1994), Biology of Microorganisms, Prentice-Hall International Inc., London, 7. 5. Chandrasekaran, M. (1997), Industrial enzymes from marine microorganisms: The Indian scenario, J. Mar. Biotechnol., 5, 86-89. 6. Farmer III, J. J. and Brenner, F. W. H. (2006), The genera Vibrio and Photobacterium, dalam Prokaryotes, Bab 3.3.18, Dworkin, M., Falkow, S., Rosenberg, E., Schleifer, K.H., Stackebrandt, E., Editor, Springer, Singapura, 6, 508-563. 7. Feller, G., Lonhienne, T., Deroanne, C., Van Beeumen, J., Gerday, C. (1992), Purification, characterization and nucleotide sequence of the thermolabile αamylase from the Antarctic psychrotroph Alteromonas haloplanctis A23, J. Biol. Chem., 267, 5217-5221. 8. Godfrey, T. and West, S. (1996), Industrial applications, dalam Industrial Enzymology, Bab 2, Godfrey, T., West, S., Editor, Stockton Press, New York, 2, 91, 105-131, 192, 339-356, 361-371. 9. Goyal, N., Gupta, J.K., Soni, S.K. (2005), A novel raw-starch digesting thermostable α-amylase from Bacillus sp. I-3 and its use in the direct hydrolysis of raw potato starch, Enzyme and Microbial Tech., 37, 723-734. 10. Gupta, R., Gigras, P., Mohapatra, H., Goswami, V.K., Chauhan, B. (2003), Microbial α-amylases: a biotechnological perspective, Process Biochem., 38, 1599-1616. 11. Guzman-Maldonado, H. and Paredes-Lopez, O. (1995), Amylolytic enzymes and products derived from starch, Crit. Rev. Food Sci. Nutr., 35, 373–403.
37
12. Hormansdorfer, S., Wentaes, H., Neugebaur-Buchler K., Bauer, J. (2000), Isolation of Vibrio alginolyticus from seawater aquaria, Int. J. Hyg. Environ. Health, 203, 169-175. 13. Henrissat, B. (1991), A classification of glycosyl hydrolases based on amino acid sequence similarities, Biochem. J., 280, 309-316. 14. Ichige A., Oishi, K., Mizushima, S. (1988), Isolation and characterization of mutants of a marine Vibrio strain that are defective in production of extracellular proteins, J. Bacteriol., 170, 3537-3542. 15. Judoamidjojo, M., Darwis, A. A., Sa’id, E. G. (1990), Teknologi Fermentasi, PAU Bioteknologi IPB, Bogor. 16. Kandra, L. (2003), α-Amylases of medical and industrial importance, Theochem, 666-667, 487-498. 17. Kelman, D., Kashman, Y., Rosenberg, E., Kushmaro, A., Loya, Y. (2006), Antimicrobial activity of Red Sea Corals, Marine Biology, 149, 357-363. 18. Kim, U. O., Hahm, K. S., Park, Y. H., Kim, Y. J. (1999), CAMP-mediated catabolite repression and electrochemical potential-dependent production of an extracellular amylase in Vibrio alginolyticus, Biosci. Biotechnol. Biochem., 63, 288-292. 19. Koolman, J. and Roehm, K. H. (2005), Color Atlas of Biochemistry, Thieme, New York, 2, 42. 20. Koshland, D.E. (1953), Stereochemistry and the mechanism of enzymatic reactions, Biol. Rev., 28, 416–436. 21. Kuriki, T. and Imanaka, T. (1999), The concept of the α-amylase family: Structural similarity and common catalytic mechanism, J. Biosci. Bioeng., 87, 557-565. 22. Machovic, M. and Janecek, S. (2007), Amylolytic enzymes: types, structures and specificities, dalam Industrial Enzymes: Structure, Function and Applications, Bab 1, Polaina, J., MacCabe, A. P., Editor, Springer, Netherlands, 1, 3-18. 23. MacGregor, E.A. (2005), An overview of clan GH-H and distantly-related families, Biologia Bratislava, 60, 5-12. 24. Martinez, J. M. H., Schoenmakers, P. J., Kok, W. Th. (2004), Determination of the amylose–amylopectin ratio of starches by iodine-affinity capillary electrophoresis, J. Chromatogr. A., 1053, 227-234.
38
25. Mitsuiki , S., Mukae, K., Sakai, M., Goto, M., Hayashida, S., Furukawa, K. (2005), Comparative characterization of raw starch hydrolyzing α-amylase from various Bacillus strains, Enzyme and Microbial Tech., 37, 410-416. 26. Najafi, M. F., Deobagkar, D., Deobagkar, D. (2005), Purification and characterization of an extracellular α-amylase from Bacillus subtilis AX20, Protein Expression and Purification, 41, 349-354. 27. Najafi, M. F. and Kembhavi, A. (2005), One step purification and characterization of an extracellular α-amylase from marine Vibrio sp., Enzyme and Microbial Technology, 36, 535-539. 28. Nielsen, J. E., Borchert, T. V., Vriend, G. (2001), The determinants of αamylase pH-activity profiles, Prot. Eng., 14, 505-512. 29. Pandey, A., Nigam, P., Soccol, C.R., Soccol, V.T., Singh, D., Mohan, R. (2000), Advances in microbial amylases, Biotechnol. Appl. Biochem., 31, 135152. 30. Ratcliffe, C., Sanders, R. L., Tittel, L., O’Brien, R. W. (1982), Protease secretion by the marine bacterium Vibrio gazogenes, J. Biol. Sci., 35, 457-467. 31. Rohwer, F., Seguritan, V., Azam, F., Knowlton, N. (2002), Diversity and distribution of coral-associated bacteria, Marine Ecology Progress Series, 243, 1-10. 32. Sambrook, J. and Russel, D. W. (2001), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 3, A8.46-47. 33. Saramma, A.V. and Babu, P. (1994), Regulation of α-amylase biosynthesis in Vibrio alginolyticus (MB1), Indian J. Exp. Biol., 32, 515-516. 34. Siddiqui, K.S., Poljak, A., Guilhaus, M., Feller, G., D’Amico, S., Gerday, C., Cavicchioli, R. (2005), Role of disulfide bridges in the activity and stability of a cold-active α-amylase, J. Bacteriol. 187, 6206-6212. 35. Sivaramakrishnan, S., Gangadharan, D., Madhavan K., Nampoothiri, Soccol, C.R., Pandey, A. (2006), α-Amylases from Microbial Sources – An Overview on Recent Developments, Food Technol. Biotechnol., 44, 173-184. 36. Tolan, J.S. (1996), Industrial applications, dalam Industrial Enzymology, Godfrey, T., West, S., Editor, Stockton Press, New York, 2, 336-337. 37. Uitdehaag, J.C.M., Mosi, R., Kalk, K.H., van der Veen, B.A., Dijkhuizen, L., Withers, S.G., Dijkstra, B.W. (1999), X-ray structures along the reaction pathway of cyclodextrin glycosyltransferase elucidate catalysis in the αamylase family, Nature Struct. Biol., 6, 432–436.
39
38. Van der Maarel, M.J.E.C., van der Veen, B., Uitdehaag, J.C.M., Leemhuis, H., Dijkhuizen, L. (2002), Properties and applications of starch-converting enzymes of the α-amylase family, J. Biotechnol. 94, 137-155. 39. Wanderley, K.J., Torres, F.A.G., Moraes, L.M.P., Ulhoa, C.J. (2004), Biochemical characterization of α-amylase from the yeast Cryptococcus flavus. FEMS Microbiology Letters, 231, 165-169.
40
Lampiran 1 Kurva Standar Glukosa Kurva standar glukosa dibuat dari larutan stok glukosa 0,5% (v/v). 100 µL sampel yang berisi larutan glukosa pada berbagai konsentrasi direaksikan dengan 1 mL reagen DNS, diinkubasi pada 100oC selama 10 menit dan kemudian didinginkan pada suhu ruang selama 20 menit. Setelah itu sampel diukur absorbansinya pada λ 500 nm. Sebagai blanko digunakan 100 µL aqua milipore. Kurva standar glukosa dibuat untuk tiap reagen DNS yang baru. Berikut adalah contoh dari salah satu kurva standar yang digunakan di dalam penelitian ini. Tabel L.1. Absorban standar glukosa. % (w/v) glukosa
A1
A2
A3
Rerata A
0,04 0,05 0,06 0,07 0,08 0,09 0,10
0,145 0,277 0,403 0,536 0,698 0,810 0,940
0,155 0,271 0,398 0,542 0,703 0,816 0,952
0,153 0,283 0,406 0,550 0,710 0,823 0,961
0,151 0,277 0,402 0,543 0,704 0,816 0,951
Kurva standar glukosa dari data diatas diberikan sebagai berikut. 1,000 0,900
Absorban 500 nm
0,800 0,700 0,600
y = 13,502x - 0,396 R2 = 0,9988
0,500 0,400 0,300 0,200 0,100 0,000 0,03
0,05
0,07 % Glukosa
Gambar L.1. Kurva standar glukosa.
0,09
0,11
41
Lampiran 2 Langkah Perhitungan Aktivitas α-Amilase
Perhitungan aktivitas α-amilase dilakukan sebagai berikut. 1. Gram gula pereduksi per mL yang dihasilkan dari reaksi enzimatis diatas didapatkan dengan mengintrapolasikan selisih absorban sampel dengan absorban kontrol yang berada dalam kisaran absorban standar glukosa ke dalam
persamaan
regresi
linier
kurva
standar
glukosa,
kemudian
mengalikannya dengan faktor pengenceran dan membaginya dengan 100 mL. 2. Selanjutnya gram gula pereduksi per mL dikonversi ke mikromol per mL. Setelah itu mikromol gula pereduksi per mL dikalikan dengan volume reaksi uji dan dibagi dengan volume enzim yang digunakan dalam reaksi uji.
42
Lampiran 3 Kurva Standar BSA Kurva standar BSA dibuat dari larutan stok BSA 0,1% (w/v). 800 µL sampel yang berisi larutan BSA pada berbagai konsentrasi direaksikan dengan 200 µL reagen Bradford dan didiamkan pada suhu ruang selama 10 menit. Setelah itu, sampel diukur absorbansinya pada λ 595 nm. Sebagai blanko digunakan 800 µL aqua milipore. Tabel L.2. Absorban standar BSA. V stok BSA (µL) 0,0 1,6 4,8 8,0 11,2 14,4 17,6
BSA (µmol/mL) 0 2 6 10 14 18 22
V aqua milipore (µL) 800,0 798,4 795,2 792,0 788,8 785,6 782,4
A1
A2
A3
Rerata A
0,000 0,080 0,243 0,409 0,553 0,708 0,847
0,000 0,077 0,256 0,409 0,582 0,733 0,851
0,000 0,083 0,242 0,401 0,572 0,712 0,843
0,000 0,080 0,247 0,406 0,569 0,718 0,847
Kurva standar BSA dari data diatas diberikan berikut. 1,000
Absorbansi 595 nm
0,900
y = 0,039x + 0,0084 R2 = 0,9986
0,800 0,700 0,600 0,500 0,400 0,300 0,200 0,100 0,000 0
5
10
15
20
Konsentrasi BSA (m ikrogram /m L)
Gambar L.2. Kurva standar BSA.
25
43
Lampiran 4 Data OD Sel Kurva Pertumbuhan Vibrio sp. SFNB 3 dan Uji DNS Aktivitas α-Amilase Tabel L.3. Data OD sel kurva pertumbuhan Vibrio sp. SFNB 3. Jam ke0 2 4 6 8 10 12 14 16 24
Faktor Pengenceran 1x 1x 2x 5x 8x 8x 8x 8x 8x 8x
OD1
OD2
OD3
0,000 0,210 1,554 2,415 2,472 2,048 1,888 1,712 1,744 1,792
0,000 0,214 1,554 2,425 2,520 2,040 1,920 1,744 1,760 1,792
0,000 0,215 1,554 2,525 2,504 2,120 1,952 1,752 1,856 1,864
Rerata OD 0,000 0,213 1,554 2,455 2,499 2,069 1,920 1,736 1,787 1,816
Standar Deviasi 0,000 0,003 0,000 0,061 0,024 0,044 0,032 0,021 0,061 0,042
Tabel L.4. Data uji DNS aktivitas α-amilase Vibrio sp. SFNB 3.
0
Faktor Pengenceran 1x
2
1x
4
2x
6
5x
8
8x
10
8x
12
8x
14
8x
16
8x
24
8x
Jam ke-
A1 0,000 0,000 0,000 0,007 0,003 0,005 0,008 0,009 0,010 0,166 0,168 0,175 0,225 0,229 0,234 0,288 0,292 0,295 0,384 0,393 0,393 0,406 0,403 0,397 0,412 0,416 0,416 0,475 0,478 0,482
Sampel A2 0,000 0,000 0,000 0,008 0,006 0,010 0,013 0,016 0,013 0,192 0,181 0,192 0,219 0,215 0,215 0,297 0,292 0,300 0,366 0,372 0,375 0,406 0,419 0,416 0,446 0,446 0,449 0,494 0,498 0,498
A3 0,000 0,000 0,000 0,006 0,008 0,009 0,011 0,010 0,010 0,194 0,190 0,203 0,225 0,229 0,231 0,336 0,330 0,333 0,425 0,431 0,431 0,449 0,446 0,446 0,490 0,518 0,518 0,530 0,539 0,526
A1 0,000 0,000 0,000 0,001 0,001 0,000 0,001 0,003 0,003 0,003 0,001 0,004 0,048 0,051 0,049 0,016 0,019 0,017 0,028 0,029 0,029 0,032 0,037 0,037 0,020 0,025 0,022 0,025 0,046 0,050
Kontrol A2 0,000 0,000 0,000 0,003 0,000 0,001 0,001 0,003 0,002 0,009 0,010 0,014 0,010 0,013 0,011 0,026 0,028 0,028 0,022 0,025 0,028 0,039 0,042 0,043 0,043 0,040 0,042 0,058 0,067 0,059
A3 0,000 0,000 0,000 0,002 0,002 0,001 0,003 0,001 0,003 0,003 0,007 0,009 0,026 0,031 0,028 0,032 0,034 0,038 0,026 0,032 0,030 0,053 0,056 0,059 0,076 0,079 0,076 0,128 0,124 0,124
44
Lampiran 5 Data Uji DNS dan Uji Bradford α-Amilase Ekstrak Kasar dan Hasil Isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3 Tabel L.5. Data uji DNS α-amilase ekstrak kasar dan hasil isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3. Sampel
Faktor Pengenceran
Ekstrak Kasar
5x
Hasil Isolasi
10x
A1 0,396 0,396 0,386 0,730 0,741 0,741
Sampel A2 0,359 0,363 0,363 0,776 0,764 0,776
A3 0,363 0,368 0,363 0,764 0,776 0,776
A1 0,000 0,000 0,000 0,131 0,131 0,134
Kontrol A2 0,000 0,000 0,000 0,137 0,139 0,135
A3 0,000 0,000 0,000 0,123 0,126 0,126
Tabel L.6. Data uji Bradford α-amilase ekstrak kasar dan hasil isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3. Sampel Ekstrak Kasar Hasil Isolasi
A1 0,153 0,208
A2 0,146 0,203
A3 0,160 0,207
Rerata A 0,153 0,206
mikrogram/mL 3,708 5,067
mikrogram 1854 253
45
Lampiran 6 Data Uji DNS α-Amilase Hasil Isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3 pada Berbagai Suhu Tabel L.7. Data uji DNS α-amilase hasil isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3 pada berbagai suhu. Suhu (oC)
Faktor Pengenceran
30
10x
40
10x
50
10x
60
10x
70
10x
80
10x
90
10x
100
10x
A1 0,573 0,566 0,566 0,669 0,678 0,687 0,730 0,741 0,741 0,699 0,708 0,718 0,570 0,577 0,584 0,385 0,390 0,394 0,222 0,226 0,222 0,160 0,170 0,154
Sampel A2 0,595 0,602 0,595 0,748 0,748 0,748 0,776 0,764 0,776 0,728 0,738 0,738 0,551 0,557 0,564 0,359 0,355 0,355 0,198 0,213 0,207 0,175 0,167 0,181
A3 0,546 0,553 0,553 0,678 0,687 0,687 0,764 0,776 0,776 0,728 0,738 0,738 0,538 0,544 0,544 0,372 0,372 0,381 0,210 0,216 0,216 0,183 0,186 0,189
A1 0,025 0,027 0,027 0,076 0,080 0,083 0,131 0,131 0,134 0,198 0,198 0,198 0,141 0,146 0,149 0,039 0,047 0,045 0,064 0,060 0,067 0,045 0,057 0,059
Kontrol A2 0,037 0,041 0,041 0,090 0,097 0,093 0,137 0,139 0,135 0,225 0,225 0,234 0,131 0,136 0,136 0,064 0,064 0,060 0,056 0,071 0,067 0,069 0,074 0,074
A3 0,029 0,031 0,033 0,105 0,110 0,110 0,123 0,126 0,126 0,222 0,222 0,213 0,151 0,156 0,164 0,096 0,086 0,093 0,067 0,073 0,071 0,093 0,106 0,102
46
Lampiran 7 Data Uji DNS α-Amilase Hasil Isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3 setelah Inkubasi pada Suhu Optimum selama 0, 15, 30, 60, 120 dan 240 Menit Tabel L.8. Data uji DNS α-amilase hasil isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3 setelah inkubasi pada suhu optimum selama 0, 15, 30, 60, 120 dan 240 menit. Menit ke-
Faktor Pengenceran
0
10x
15
10x
30
10x
120
10x
240
10x
A1 0,720 0,716 0,720 0,692 0,692 0,689 0,680 0,676 0,676 0,560 0,566 0,564 0,392 0,392 0,392
Sampel A2 0,708 0,706 0,706 0,688 0,690 0,690 0,676 0,682 0,680 0,580 0,582 0,585 0,387 0,390 0,382
A3 0,710 0,712 0,706 0,695 0,695 0,691 0,681 0,681 0,679 0,583 0,583 0,588 0,397 0,391 0,389
A1 0,020 0,030 0,024 0,034 0,030 0,030 0,022 0,025 0,025 0,025 0,038 0,038 0,041 0,044 0,044
Kontrol A2 0,022 0,021 0,025 0,028 0,025 0,025 0,035 0,035 0,033 0,039 0,039 0,035 0,035 0,035 0,033
A3 0,028 0,026 0,030 0,020 0,018 0,022 0,037 0,033 0,033 0,045 0,045 0,051 0,039 0,033 0,039
47
Lampiran 8 Data Uji DNS α-Amilase Hasil Isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3 pada Berbagai pH Tabel L.9. Data uji DNS α-amilase hasil isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3 pada berbagai pH. pH
Faktor Pengenceran
2
10x
3
10x
4
10x
5
10x
6
10x
7
10x
8
10x
9
10x
10
10x
A1 0,053 0,065 0,063 0,077 0,073 0,057 0,055 0,055 0,057 0,494 0,505 0,505 0,413 0,409 0,413 0,400 0,396 0,400 0,587 0,587 0,594 0,258 0,258 0,261 0,112 0,108 0,104
Sampel A2 0,069 0,069 0,064 0,053 0,055 0,055 0,059 0,057 0,053 0,510 0,494 0,505 0,413 0,418 0,422 0,392 0,388 0,388 0,614 0,614 0,607 0,280 0,273 0,277 0,075 0,077 0,081
A3 0,055 0,057 0,059 0,059 0,057 0,057 0,061 0,067 0,063 0,445 0,440 0,445 0,427 0,427 0,431 0,386 0,384 0,392 0,621 0,621 0,628 0,289 0,293 0,293 0,099 0,106 0,104
A1 0,046 0,048 0,044 0,050 0,057 0,059 0,040 0,044 0,039 0,104 0,106 0,102 0,079 0,081 0,083 0,083 0,087 0,089 0,163 0,168 0,163 0,083 0,089 0,087 0,069 0,067 0,067
Kontrol A2 0,059 0,055 0,055 0,040 0,050 0,044 0,044 0,040 0,039 0,117 0,119 0,121 0,083 0,087 0,089 0,073 0,075 0,077 0,173 0,175 0,178 0,089 0,090 0,102 0,055 0,069 0,063
A3 0,046 0,046 0,046 0,044 0,045 0,045 0,044 0,046 0,042 0,104 0,102 0,104 0,091 0,091 0,095 0,073 0,067 0,073 0,185 0,188 0,188 0,119 0,121 0,128 0,085 0,081 0,087
48
Lampiran 9 Data Uji DNS Hidrolisis Pati Mentah Jagung oleh α-Amilase Hasil Isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3 setelah inkubasi pada 37oC, 150 rpm selama 24, 48 dan 72 Jam Tabel L.10. Data uji hidrolisis pati mentah jagung 5% (w/v) oleh α-amilase hasil isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3 setelah inkubasi pada 37oC, 150 rpm selama 24, 48 dan 72 jam dengan metode DNS. Jam ke-
Faktor Pengenceran
24
5x
48
5x
72
10x
A1 0,262 0,259 0,262 0,352 0,355 0,355 0,262 0,267 0,265
Sampel A2 0,268 0,268 0,265 0,363 0,367 0,367 0,247 0,250 0,247
A3 0,274 0,270 0,272 0,359 0,367 0,367 0,253 0,250 0,250
A1 0,045 0,047 0,045 0,056 0,054 0,053 0,008 0,010 0,010
Kontrol A2 0,056 0,056 0,054 0,060 0,056 0,056 0,017 0,015 0,015
A3 0,053 0,054 0,054 0,064 0,062 0,064 0,012 0,013 0,012
49
Lampiran 10 Data Uji DNS α-Amilase Hasil Isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3 untuk Penentuan Nilai Km, Vmax dan kcat Tabel L.11. Data uji DNS α-amilase hasil isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3 untuk penentuan waktu reaksi enzimatis. Menit ke-
Faktor Pengenceran
0
10x
5
10x
10
10x
15
10x
20
10x
A1 0,000 0,000 0,000 0,253 0,253 0,259 0,535 0,541 0,535 0,675 0,678 0,678 0,739 0,737 0,735
Sampel A2 0,000 0,000 0,000 0,250 0,256 0,250 0,548 0,548 0,541 0,668 0,668 0,660 0,730 0,725 0,728
A3 0,000 0,000 0,000 0,256 0,256 0,256 0,548 0,541 0,554 0,677 0,677 0,679 0,730 0,733 0,735
A1 0,000 0,000 0,000 0,029 0,025 0,027 0,012 0,018 0,022 0,027 0,022 0,027 0,027 0,027 0,025
Kontrol A2 0,000 0,000 0,000 0,027 0,029 0,031 0,022 0,023 0,027 0,029 0,033 0,029 0,022 0,023 0,020
A3 0,000 0,000 0,000 0,033 0,031 0,031 0,025 0,027 0,025 0,033 0,037 0,033 0,018 0,020 0,027
Tabel L.12. Data uji DNS α-amilase hasil isolasi dari Vibrio sp. SFNB 3 untuk penentuan Km dan Vmax. % Substrat
Faktor Pengenceran
0,00
10x
0,50
10x
0,75
10x
1,00
10x
1,25
10x
1,50
10x
1,75
10x
A1 0,000 0,000 0,000 0,105 0,098 0,103 0,221 0,231 0,224 0,331 0,328 0,325 0,483 0,483 0,483 0,540 0,549 0,545 0,628 0,630 0,630
Sampel A2 0,000 0,000 0,000 0,103 0,100 0,098 0,206 0,206 0,206 0,354 0,362 0,358 0,439 0,434 0,439 0,532 0,532 0,532 0,625 0,625 0,622
A3 0,000 0,000 0,000 0,081 0,084 0,084 0,210 0,212 0,210 0,315 0,315 0,320 0,418 0,423 0,418 0,519 0,513 0,513 0,650 0,650 0,659
A1 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,002 0,002 0,002 0,016 0,012 0,016 0,036 0,038 0,036 0,035 0,040 0,055 0,130 0,133 0,131
Kontrol A2 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,008 0,004 0,006 0,016 0,014 0,017 0,034 0,036 0,038 0,086 0,086 0,086 0,125 0,130 0,128
A3 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,001 0,004 0,006 0,004 0,002 0,008 0,032 0,028 0,038 0,044 0,038 0,044 0,135 0,129 0,131
