CINtec PLUS Cytology Kit

V rámci řady studií byla analyzována a prokázána klinická využitelnost imunologického barvení p16INK4a v cervikální histologii [1; 3; 5; 7; 8; 4; 9; 10] i v cervikální cytologii [5; 11; 12]. V řadě studií bylo prokázáno, že konjunktivní interpretace preparátů barvených na p16INK4a významně zvyšuje jak interobservní, tak diagnostickou přesnost detekce CIN2 a lézí vyššího stupně v histologických vzorcích cervikální tkáně [6; 10; 12]. Bylo prokázáno, že v cervikální cytologii představuje imunologické barvení na p16INK4a hodnotný nástroj k účinné triáži případů PAP cytologie hodnocených jako ASC-US nebo LSIL, jehož citlivost při detekci příslušné CIN2 nebo horších lézí je podobná jako při testování na HPV, přičemž specificita je výrazně vyšší [12]. Dále byla detekce p16INK4a v cytologických vzorcích navržena jako vhodný podpůrný marker k triáži žen s pozitivním výsledkem testu na HR-HPV při screeningu na rakovinu děložního čípku [11;13]. Bylo zjištěno, že prakticky všechny cervikální intraepiteliální léze vysokého stupně (tj. CIN2, CIN3 nebo horší) nadměrně exprimují p16INK4a [3; 6; 8]. Jelikož vysoký podíl epiteliálních buněk v CIN lézích vykazuje také proliferativní aktivitu, může detekce cervikálních epiteliálních buněk, které exprimují současně p16INK4a i Ki-67, sloužit jako indikátor statusu transformovaných buněk. Proto se metoda vycházející z hodnocení cervikálních cytologických vzorků vzhledem k přítomnosti jednotlivých cervikálních epiteliálních buněk vykazujících pozitivní výsledky barvení jak na p16INK4a, tak na Ki-67 vyznačuje jak vysokou citlivostí, tak vysokou specificitou na přítomnost předrakovinového nebo rakovinového onemocnění [14; 15; 16; 17; 18; 19; 20; 21].

CINtec® PLUS Cytology Kit 605-100 06889565001

100

Obr. 1. Cervikální epiteliální buňka pozitivní na p16INK4a (hnědé cytoplastické zbarvení) a na Ki-67 (červené jaderné zbarvení)

PRINCIPY METODY

URČENÉ POUŽITÍ CINtec® PLUS Cytology Kit je imunocytochemická souprava k současné kvalitativní detekci proteinů p16INK4a a Ki-67 v cervikálních cytologických preparátech. Souprava je indikována k použití jako pomocný prostředek k identifikaci žen s výraznými cervikálními intraepiteliálními lézemi ve v populačním screeningu a ve skupině pacientek s výsledkem Pap cytologie ASC-US (atypické skvamózní buňky nejistého významu) nebo LSIL (skvamózní intraepiteliální léze nízkého stupně) nebo u pacientek s pozitivním výsledkem testu s vysokým rizikem. Interpretaci výsledků testu smí provádět pouze příslušně kvalifikovaný odborník, který přitom musí vzít v úvahu pacientčinu anamnézu a výsledky dalších provedených diagnostických testů. Výrobek je určen k diagnostice in vitro (IVD). SOUHRN A VYSVĚTLENÍ U eukaryotických buněk je kontrola progrese cyklu buněčného dělení regulována komplexním modelem kontrolované exprese a posttranslačními modifikacemi proteinů regulujících buněčný cyklus. V tomto mechanismu regulace cyklu eukaryotických buněk hraje zásadní úlohu protein p16INK4a. Účastní se retinoblastomovým proteinem (pRb) zprostředkované kontroly G1/S-fázového přechodu a vyvolává zástavu buněčného cyklu při procesech buněčné diferenciace. p16INK4a tedy má antiproliferativní účinek během progrese pravidelného buněčného cyklu. V terminálně diferencovaných epiteliálních buňkách se exprese p16INK4a snižuje na hladiny, které imunocytochemie nedokáže běžně detekovat [1]. Ki-67 je protein spojený s proliferací, který lze detekovat výhradně v jádře proliferujících buněk. Detailními analýzami buněčného cyklu bylo zjištěno, že antigen Ki-67 je v detekovatelných množstvích přítomen během všech fází buněčné proliferace a rovněž při mitóze, zatímco buňky v klidovém (quiescentním) stavu ve fázi G0 tento antigen neexprimují [2]. Jelikož buňky nadměrně exprimující p16INK4a mohou aktivně proliferovat pouze při poškozeném mechanismu kontroly buněčného cyklu, exprese jak p16INK4a, tak proliferačního markeru Ki-67 v téže buňce by se měla za normálních fyziologických podmínek vzájemně vylučovat. Souběžná exprese p16INK4a a Ki-67 v určitých buňkách může tedy sloužit jako indikátor deregulace kontroly buněčného cyklu v těchto buňkách. Je prokázáno, že při cervikální neoplazii je p16INK4a výrazně nadměrně exprimován v důsledku funkční inaktivace pRb zprostředkované onkoproteinem E7 vysoce rizikových typů lidského papilomaviru (HR-HPV) [3; 4]. Jelikož je E7 nutný k ustavení a udržování maligního fenotypu v HPV-asociovaných předrakovinových a rakovinových lézích, pojí se nadměrná exprese p16INK4a přímo s onkogenickou aktivitou jednotlivých typů HR-HPV, a proto byla navržena jako surogátní marker transformujících se HPV infekcí [1; 5].

2016-02-04 FT0700-421a

1/7

Souprava CINtec PLUS Cytology Kit obsahuje sadu reagencií k současné imunocytochemické detekci proteinů p16INK4a a Ki-67 v cytologických vzorcích získaných z děložního čípku. K detekci proteinů slouží hotový koktejl primárních monoklonálních protilátek, který obsahuje monoklonální myší protilátku zaměřenou proti lidskému proteinu p16INK4a (klon E6H4™) a primární rekombinantní králičí protilátku zaměřenou proti lidskému proteinu Ki-67 (klon 274-11 AC3). Po kondicionování buněk, inhibici endogenní peroxidázové aktivity a inkubaci koktejlem primárních protilátek se při testu využívají dva detekční systémy ve stavu připraveném k použití, optimalizované pro cervikální cytologii:  Sekundární kozí anti-myší protilátka kovalentně navázaná na hapteny HQ (proprietární hapten) a anti-HQ hapten, terciární protilátka konjugovaná s křenovou peroxidázou (HRP), optimalizovaná k detekci monoklonální myší protilátky klonu E6H4.  Sekundární kozí anti-králičí protilátka kovalentně navázaná na hapteny NP (proprietární hapten) a anti-NP hapten, terciární protilátka konjugovaná s alkalickou fosfatázou (AP), optimalizovanou k detekci králičí rekombinantní protilátky klonu 274-11 AC3. Chromogenní reakce spočívají v HRP-zprostředkované konverzi 3,3’--diaminobenzidintetrahydrochloridu (DAB) a AP-zprostředkované konverzi Fast Red naftylfosfátem, poskytujícím (po řadě) hnědou sraženinu v místě antigenu p16INK4a a červenou sraženinu v místě antigenu Ki-67. Po automatizovaném kontrastním barvení a modření následuje dvoustupňový fixační postup. Nejprve je preparát fixován pomocí vodného fixačního média. Potom je překryt permanentním fixačním médiem. Výsledek barvení se vyhodnocuje pod světelným mikroskopem.

1012838CS Rev D

DAB sraženina

H2O2 DAB

Dávkovač 10 ml (1 ks)

CINtec PLUS Fast Red obsahuje Fast Red (< 1 %) v acetátovém pufru s konzervační látkou ProClin® 300.


CINtec PLUS DAB Peroxidase Inhibitor obsahuje roztok peroxidu vodíku (< 5 %).


CINtec PLUS DAB anti-Mouse HQ Linker obsahuje HQznačený kozí anti-myší IgG (< 40 µg/ml; HQ je proprietární hapten, který je na kozí protilátku kovalentně navázaný) v pufru obsahujícím protein s konzervační látkou ProClin® 300.


CINtec PLUS DAB HRP Multimer obsahuje myší monoklonální anti-HQ-značenou HRP terciární protilátku (< 10 µg/ml) v pufru obsahujícím protein s konzervační látkou ProClin® 300.


CINtec PLUS DAB obsahuje 3,3’-diaminobenzidintetrahydrochlorid (< 1 %) v roztoku proprietárního stabilizátoru s proprietární konzervační látkou.


CINtec PLUS DAB H2O2 obsahuje peroxid vodíku (< 1 %) ve fosfátovém pufrovacím roztoku.

HRP Multimer HQ

HQ Linker

HQ p16 primární protilátka E6H4 Buňka

Cílový antigen

Obr. 2. Detekce lidského proteinu p16INK4a

REKONSTITUCE, MÍSENÍ, ŘEDĚNÍ, TITRACE Červená sraženina

Detekční souprava CINtec PLUS Cytology Kit je optimalizována pro použití v barvicích automatech VENTANA BenchMark GX, XT a ULTRA. Žádná rekonstituce, mísení, ředění ani titrace činidel soupravy není zapotřebí. Pokud by se fixace a další zpracování cervikálních cytologických vzorků odchylovaly od doporučených postupů, mohly by se výsledky značně lišit, což si vyžaduje pravidelné kontroly v laboratořích dané instituce. Další informace o kontrolách najdete v části „Kontrola kvality“.

Naftylfosfát Fast Red

AP Multimer NP Linker

NP

POTŘEBNÝ MATERIÁL, KTERÝ NENÍ SOUČÁSTÍ DODÁVKY

NP Ki-67 primární protilátka 274-11 AC3 Cílový antigen

Buňka Obr. 3. Detekce lidského proteinu Ki-67 DODÁVANÉ REAGENCIE

Každá souprava CINtec PLUS Cytology Kit obsahuje reagencii postačující na 100 testů. Dávkovač 10 ml (1 ks)

CINtec PLUS Primary Antibody Cocktail (p16/Ki-67) obsahuje koktejl monoklonální myší protilátky klonu E6H4 zaměřené na lidský protein p16INK4a a primární rekombinantní králičí protilátky klonu 274-11 AC3 zaměřené proti lidskému proteinu Ki--67 (celkové množství protilátky < 5 µg/ml) v pufru obsahujícím protein s konzervační látkou ProClin® 300.


CINtec PLUS Red anti-Rabbit NP Linker obsahuje NPznačený kozí anti-králičí IgG (< 10 µg/ml; NP je proprietární hapten, který je na kozí protilátku kovalentně navázaný) v pufru obsahujícím protein s konzervační látkou ProClin® 300.


CINtec PLUS Red AP Multimer obsahuje myší monoklonální anti-NP-značenou AP terciární protilátku (< 20 µg/ml) v pufru obsahujícím protein s konzervační látkou ProClin® 300.


CINtec PLUS Red Naphthol Phosphate obsahuje naftylfosfát (< 1 %) s konzervační látkou ProClin® 300.

2016-02-04 FT0700-421a

2/7

K barvení jsou zapotřebí i následující reagencie a materiály, které nejsou se soupravou CINtec PLUS Cytology Kit dodávány: Ve všech zeměpisných oblastech nemusejí být dostupné všechny produkty uvedené v příbalové informaci. Obraťte se na své místní servisní zastoupení. 1. Vhodné kontroly (volitelné, viz oddíl „Kontrola kvality“) 2. Kontrastní barvivo Hematoxylin Counterstain 3. Reagencie Bluing Reagent 4. Reaction Buffer Concentrate (10X) 5. Roztoky pro kondicionování buněk Cell Conditioning Solutions (CC1/ ULTRA CC1) 6. Roztoky pro kondicionování buněk Cell Conditioning Solutions (CC2/ ULTRA CC2), vyžadované na přístroji, avšak nepoužívané 7. EZ Prep Concentrate (10X), vyžadované u přístroje, ale nepoužívané 8. SSC Concentrate (10X), vyžadovaný u přístroje, avšak nepoužívaný 9. Liquid Coverslip (krycí roztok) (LCS/ ULTRA LCS) 10. Etanol denaturovaný, o čistotě pro reagencie (≥ 95 %) 11. VENTANA Barvicí automat BenchMark GX, XT nebo ULTRA 12. Doporučují se podložní sklíčka SuperFrost® PLUS (Thermo Fisher Scientific) pro běžné stěry 13. Podložní sklíčka ThinPrep® Arcless nebo ThinPrep® FOR SPECIAL PROCESSING (Hologic, objedn. č. 70126-002) 14. Sklíčka BD SurePath™ PreCoat (jsou součástí soupravy SurePath GYN) 15. Vodné zalévací médium CC/Mount™ (Diagnostic BioSystems P/N: K 002; Sigma-Aldrich P/N: C9368) 16. Volitelně: sušička schopná udržovat teplotu 60 °C ± 5 °C 17. Xylen (histologické čistoty) 18. Deionizovaná nebo destilovaná voda 19. Krycí sklíčka a xylenové fixační médium nebo plastová krycí fólie pro krytí cytologických preparátů 20. Světelný mikroskop 21. Mírný saponát na nádobí

1012838CS Rev D

Příprava vzorků ThinPrep®

UCHOVÁVÁNÍ Uchovávejte při teplotě 2 až 8 °C. Chraňte před mrazem. Reagenční soupravu lze použít ihned po vyjmutí z chladničky. Aby bylo zajištěno správné dávkování reagencie a stabilita reagencií, je třeba dávkovač po každém použití uzavřít víčkem a okamžitě umístit ve svislé poloze do chladničky. Souprava CINtec PLUS Cytology Kit má vymezenou dobu použitelnosti. Při správném skladování jsou reagencie stálé do data uvedeného na štítku. Nepoužívejte reagencie po skončení exspirační doby pro předepsanou metodu skladování. Neexistují žádné jednoznačné známky nestability produktu, proto je třeba souběžně s neznámými vzorky provádět pozitivní kontrolu. Pokud zjistíte známky nestability reagencie, neprodleně se spojte s místním servisním zastoupením.

Cytologické vzorky v roztoku PreservCyt® k imunocytochemickému barvení pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit lze uchovávat při teplotě od 4 do 30 °C a testovat do 6 týdnů od odběru. K imunocytochemickému barvení pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit na barvicích automatech VENTANA Benchmark GX, XT a ULTRA jsou zapotřebí podložní sklíčka ThinPrep® Arcless nebo ThinPrep® FOR SPECIAL PROCESSING (Hologic, objedn. č. 70126-002). Příprava vzorků ThinPrep® pomocí procesoru ThinPrep® 2000 Preparáty ThinPrep® (Hologic Inc.) se zhotovují na procesoru ThinPrep® 2000 (Hologic Inc.) podle návodu výrobce. Po dokončení sekvence na procesoru ThinPrep® 2000 se zpracovaný preparát uloží v lahvičce s fixativem obsahujícím ≥ 95% roztok UPOZORNĚNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ etanolu o čistotě pro reagencie. Opatrně vyjměte lahvičku z držáku fixační lázně 1. K diagnostice in vitro (IVD). procesoru ThinPrep® 2000 a zpracovaný preparát přeneste z lahvičky do nádobky na 2. Pouze pro odborné použití. preparáty s ≥ 95% roztokem etanolu o čistotě pro reagencie. Inkubujte preparát v etanolu 3. Pokud je obal nebo kterákoli součást balení poškozená, výrobek nepoužívejte. po dobu minimálně 15 minut a maximálně 60 minut. Po každých 20 zhotovených V takovém případě neprodleně uvědomte místní zastoupení firmy. preparátech etanolový roztok v lahvičce s fixativem a v nádobce na preparáty vyměňte. Po uplynutí inkubační doby vyjměte preparát z nádobky s etanolem a nechte jej schnout po 4. Reagencie jsou již optimálně naředěné a další ředění by mohlo vést ke ztrátě dobu alespoň 60 minut ve vodorovné poloze na rovné ploše. Suché preparáty lze zbarvení antigenu. Jakoukoli změnu tohoto druhu musí uživatel ověřit. uchovávat při laboratorní teplotě bez přístupu světla; obarvit pomocí soupravy CINtec 5. Jako konzervační látka slouží ProClin® 300. Ten je klasifikován jako dráždivý a při PLUS Cytology Kit se musí do 3 dnů od přípravy. styku s pokožkou může způsobit senzibilizaci. Při manipulaci dodržujte příslušná bezpečnostní opatření. Dbejte na to, aby se reagencie nedostaly do styku s očima, Příprava vzorků ThinPrep® pomocí procesoru ThinPrep® 5000 pokožkou a sliznicemi. Noste ochranný oděv a rukavice. Dávkovače, které tuto Preparáty ThinPrep® (Hologic Inc.) se zhotovují na procesoru ThinPrep® 5000 konzervační látku obsahují, naleznete v oddíle „Dodané reagencie“. (Hologic Inc.) podle návodu výrobce. Po dokončení sekvence na procesoru ThinPrep® 6. S materiály lidského nebo zvířecího původu je nutno zacházet jako s biologicky 5000 jsou zpracované preparáty uložené ve stojanu ponořeném do ≥ 95% roztoku etanolu nebezpečnými materiály a likvidovat je v rámci příslušných bezpečnostních o čistotě pro reagencie obsahujícího fixační lázeň. Fixační lázeň z procesoru ThinPrep® opatření. 5000 opatrně vyjměte a preparáty inkubujte po další dobu minimálně 15 minut 7. Při manipulaci s reagenciemi je nutné dodržovat příslušná bezpečnostní opatření. a maximálně 60 minut. Po každém cyklu etanolový roztok v lahvičce s fixativem a v Dbejte na to, aby se reagencie nedostaly do styku s očima, pokožkou a sliznicemi. nádobce na preparáty vyměňte. Po uplynutí inkubační doby vyjměte preparát z nádobky s Nevdechujte výpary z reagencií. Při manipulaci s možnými karcinogeny či toxickými etanolem a nechte jej schnout po dobu alespoň 60 minut ve vodorovné poloze na rovné materiály používejte jednorázové rukavice a ochranný oděv. ploše. Suché preparáty lze uchovávat při laboratorní teplotě bez přístupu světla; obarvit Jestliže se reagencie dostanou do kontaktu s citlivými oblastmi, omyjte je vydatným pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit se musí do 3 dnů od přípravy. množstvím vody. Před imunocytochemickým barvením pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit 8. Zabraňte mikrobiální kontaminaci reagencií, mohla by způsobit nesprávné výsledky. odstraňte ze sklíčka původní štítek, kterým jej opatřil procesor ThinPrep® 5000, a nalepte příslušný štítek vygenerovaný barvicím automatem VENTANA BenchMark GX, XT nebo 9. Doporučené metody likvidace jsou uvedeny v celostátních nebo místních BenchMark ULTRA. předpisech. 10. Další informace o bezpečnosti naleznete v bezpečnostním listu a také v příručce pro Příprava vzorku BD SurePath™ výklad R a S vět týkajících se bezpečnosti na adrese www.ventana.com. Cytologické vzorky v konzervační tekutině SurePath™ určené k imunocytochemickému 11. Při manipulaci s cytologickými vzorky a jejich likvidaci, včetně veškerých vzorků barvení pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit lze uchovávat při laboratorní teplotě před fixací i po ní, a všech materiálů, které se vzorky přišly do styku, dodržujte (15–30 °C) až 4 týdny nebo v chladničce při teplotě 2–10 °C až 6 měsíců. bezpečnostní opatření pro práci s potenciálně infekčními látkami a příslušné Příprava vzorků BD SurePath™ bezprostředně po zpracování preparátu Pap požadavky na likvidaci odpadu. Poté co byla zhotovena peleta obohacených buněk pro přípravu preparátu k barvení pro PŘÍPRAVA VZORKŮ test Pap, lze ji použít bezprostředně i pro přípravu druhého preparátu k barvení pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit. Postupujte podle doporučení výrobce k použití S cytologickými vzorky je třeba zacházet správně tak, aby se zachovaly pro „Příprava preparátů“ [možnost 2] pro vzorky GYN na procesoru preparátů PrepStain™. imunocytochemické postupy. Všechny vzorky se zpracovávají standardními metodami Resuspenzní objem je třeba v položce nabídky „Change Sample/Stain Parameters“ zpracování buněk. (Změnit parametry vzorku nebo barvení) přepsat na 0 ml. Aby se neskryly součásti, jako jsou krev a hlen, a vzorek vyhovoval pokynům „Bethesda Příprava vzorků BD SurePath™ z uchované buněčné pelety Guidelines“, je třeba, aby kliničtí lékaři dodržovali doporučené metody odběru vzorků [22;23]. Pelety obohacených buněk lze konzervovat přídavkem zhruba 2 ml konzervační tekutiny SurePath™ a uzavřením zkumavek víčky k uložení (podrobnosti naleznete v návodu Pro použití se soupravou CINtec PLUS Cytology Kit jsou vhodné tyto metody přípravy výrobce). Od data odběru vzorku lze buněčné pelety resuspendované v konzervační tekutině preparátů: uchovávat při laboratorní teplotě (15–30 °C) po dobu až 4 týdnů nebo v chladničce při teplotě  Sklíčka ThinPrep® (Hologic Inc.) připravená na procesoru ThinPrep® 2000 nebo 2–10 °C po dobu až 6 měsíců. Před dalším zpracováním pomocí soupravy CINtec PLUS 5000 (Hologic Inc.) za použití podložních sklíček ThinPrep® Arcless nebo ThinPrep® Cytology Kit je třeba nechat preparáty po dobu 60 minut temperovat při laboratorní teplotě. FOR SPECIAL PROCESSING (Hologic, objedn. č. 70126-002) podle doporučení Začněte druhým centrifugačním krokem obohacovacího postupu GYN a dále proveďte výrobce. všechny zbývající kroky předběžného zpracování podle návodu výrobce pro přepracování  Sklíčka BD SurePath™ (BD Diagnostics Tripath) připravená podle doporučení konzervovaných buněčných pelet. Postupujte podle doporučení výrobce k použití „Příprava výrobce. preparátů“ [možnost 2] pro vzorky GYN na procesoru preparátů PrepStain™.  Manuálně připravené preparáty (běžné stěry). Při všech výše uvedených variantách přípravy vyjměte po dokončení přenosu vzorku z přístroje PrepStain™ stojan na preparáty. K dekantování kapaliny stojan obraťte. Do Doporučuje se zpracovat souběžně se vzorky pacientek také příslušnou kontrolu (bližší každé usazovací komůrky napipetujte 2 ml ≥ 95% roztoku etanolu o čistotě pro reagencie a podrobnosti viz oddíl „Kontrola kvality“). ihned dekantujte. Vypláchněte podruhé 2 ml ≥ 95% roztoku etanolu o čistotě pro reagencie a inkubujte po dobu 10 minut. Obrácením stojanu podruhé dekantujte. Sejměte z preparátů usazovací komůrky a preparáty nechte schnout po dobu alespoň 60 minut ve vodorovné

2016-02-04 FT0700-421a

3/7

1012838CS Rev D

poloze na rovné ploše. Suché preparáty lze uchovávat při laboratorní teplotě bez přístupu světla; obarvit pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit se musí do 3 dnů od přípravy. Příprava normálních stěrů Běžné stěry se ihned po odběru vzorků fixují cytologickou postřikovou fixační reagencií obsahující polyetylénglykol (např. Safetex™ Cytology Fixative, Andwin Scientific). Postřikem fixované preparáty lze uchovávat při laboratorní teplotě bez přístupu světla; obarvit pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit se musí do 7 dnů od přípravy. Žádné další předběžné zpracování preparátů před uložením do barvicích automatů VENTANA BenchMark GX, XT a ULTRA není zapotřebí.

Tabulka 2. Doporučený barvicí protokol pro preparáty na sklíčkách ThinPrep®, SurePath™ a pro běžné stěry na barvicím automatu VENTANA BenchMark XT za použití barviva Hematoxylin (P/N 760-2021) a reagencie Bluing Reagent (P/N 760-2037). Postup barvení

Varianta

POSTUP BARVENÍ Souprava CINtec PLUS Cytology Kit byla vyvinuta k použití v barvicích automatech VENTANA BenchMark GX, XT a ULTRA ve spojení s pomocnými reagenciemi a příslušenstvím VENTANA. Doporučené barvicí protokoly naleznete v tab. 1, 2 a 3. Souprava CINtec PLUS Cytology Kit je optimalizována za použití parametrů uvedených v tab. 1, 2 a 3; nicméně je třeba, aby uživatel výsledky získané s touto soupravou ověřil. Parametry automatizovaných postupů lze zobrazovat, tisknout a upravovat postupem uvedeným v návodu k obsluze příslušného přístroje. Tabulka 1. Doporučený barvicí protokol pro preparáty na sklíčkách ThinPrep®, SurePath™ a pro běžné stěry na barvicím automatu VENTANA BenchMark GX za použití barviva Hematoxylin (P/N 760-2021) a reagencie Bluing Reagent (P/N 760-2037). Postup barvení

Varianta

GX CINtec PLUS Cytology Příprava vzorků ThinPrep

SurePath

Běžná

ThinPrep

Zvolená

Nezvolená

Nezvolená

SurePath

Nezvolená

Zvolená

Nezvolená

Jiná

Nezvolená

Nezvolená

Zvolená

Volba úpravy buněk

Nezvolitelná

Nezvolitelná

16 min

Inkub. doba protilátky

16 min

20 min

16 min

Inkub. doba HQ Linker

12 min

16 min

12 min

Inkub. doba HRP Multimer Inc

6 min

8 min

Inkub. doba NP Linker

8 min

16 min

Inkub. doba AP Multimer

8 min

8 min

8 min

XT CINtec PLUS Cytology Příprava vzorků ThinPrep

SurePath

Běžná

ThinPrep

Zvolená

Nezvolená

Nezvolená

SurePath

Nezvolená

Zvolená

Nezvolená

Jiná

Nezvolená

Nezvolená

Zvolená


Nezvolitelná

Nezvolitelná

16 min


16 min

20 min

16 min


12 min

16 min

12 min


8 min

8 min

8 min


8 min

16 min

8 min


8 min

8 min

8 min

Kontrastní barvivo

Hematoxylin 4 min Hematoxylin 4 min Hematoxylin 4 min

Kontrastní barvivo

Bluing 4 min

Bluing 4 min

Bluing 4 min

Tabulka 3. Doporučený barvicí protokol pro preparáty na sklíčkách ThinPrep®, SurePath™ a pro běžné stěry na barvicím automatu VENTANA BenchMark ULTRA za použití barviva Hematoxylin(P/N 760-2021) a reagencie Bluing Reagent (P/N 760-2037). Postup barvení

Varianta

U CINtec PLUS Cytology Příprava vzorků ThinPrep

SurePath

Běžná

ThinPrep

Zvolená

Nezvolená

Nezvolená

8 min

SurePath

Nezvolená

Zvolená

Nezvolená

8 min

Jiná

Nezvolená

Nezvolená

Zvolená


Nezvolitelná

Nezvolitelná

16 min

16 min

16 min

16 min

Kontrastní barvivo

Hematoxylin 4 min Hematoxylin 4 min Hematoxylin 4 min


Kontrastní barvivo

Bluing 4 min


12 min

16 min

12 min


8 min

8 min

8 min


8 min

16 min

8 min


8 min

8 min

8 min

Kontrastní barvivo

Hematoxylin4 min Hematoxylin4 min Hematoxylin4 min

Kontrastní barvivo

Bluing4 min

Bluing 4 min

Bluing 4 min

Bluing4 min

Bluing4 min

Barvení na automatech BenchMark GX, XT a ULTRA 1. 2. 3. 4. 5. 6.

2016-02-04 FT0700-421a

4/7

Opatřete preparáty štítky s čárovým kódem odpovídajícím příslušnému protokolu analýzy. Vložte dávkovače soupravy CINtec PLUS Cytology Kit a potřebné pomocné reagencie do přihrádky pro reagencie a uložte je do barvicího automatu. Zkontrolujte nádoby na tekutiny a odpad. Do barvicího automatu vložte preparáty. Spusťte barvící cyklus. Po dokončení cyklu vyjměte preparáty z barvicího automatu.

1012838CS Rev D

POSTUP PO ZPRACOVÁNÍ - FIXACE A PŘEKRYTÍ

Negativní kontrola

Aby se zachovala optimální citlivost a předešlo se vyblednutí chromogenů, je zapotřebí dvoustupňový fixační postup. Vyjměte preparáty z přístroje VENTANA BenchMark GX, XT nebo ULTRA a opatrně jimi zatřepte a oplachujte je vodovodní, deionizovanou nebo destilovanou vodou a jemným prostředkem na nádobí, dokud se z nich dokonale nesmyje veškeré zalévací médium Liquid Coverslip. POZNÁMKA: Dávejte pozor, aby vodní proud nedopadal přímo na preparáty. Nechte vodu téci minimálním proudem. Preparáty se fixují podle dvoustupňového protokolu, přičemž níže uvedené kroky musejí následovat za sebou: 1. Fixace vodným fixačním prostředkem:  Inkubujete preparáty po dobu alespoň 1 minuty v destilované nebo deionizované vodě.  Preparáty, které se nebudou pokrývat, je během nanášení vodného fixačního média CC/Mount™ na ostatní preparáty třeba ponechat v destilované nebo deionizované vodě.  Vyjměte z destilované nebo deionizované vody jeden preparát a otřete papírovým ubrouskem důkladně zadní stranu sklíčka, abyste odstranili přebytečnou vodu. Neodvádějte ani nestírejte vodu z přední strany sklíčka (se vzorkem).  Sklíčko mírně nakloňte a naneste 4–6 kapek vodného fixačního média CC/Mount™ (Diagnostic BioSystems, P/N: K 002; Sigma-Aldrich P/N: C9368) na každý preparát na sklíčku ThinPrep® nebo SurePath™ nebo po 8 kapkách na sklíčka s normálními stěry. Dbejte, aby se netvořily vzduchové bublinky. Za tím účelem je možno první kapku odkápnout na papírový ubrousek a teprve potom nanášet CC/Mount™ na preparát na sklíčku.  Sklíčko opatrně naklápějte a otáčejte jím, aby se po ploše preparátu rovnoměrně rozprostřela tenká vrstva fixačního média (zatím na preparát nepokládejte sklíčko ani coverslip); vizuálně zkontrolujte rozložení média.  Odstraňte přebytek vodného fixačního média CC/Mount™ ze zadní strany a hran sklíčka. Podle potřeby použijte vlhkou papírovou utěrku.  K sušení uložte sklíčka do vodorovné polohy. a) Preparáty na sklíčkách ThinPrep® nebo SurePath™ inkubujte při teplotě 37–60 °C po dobu 1 hodiny nebo je nechte při laboratorní teplotě inkubovat přes noc. b) Preparáty s normálními stěry inkubujte při teplotě 37 °C po dobu 4 hodin nebo při teplotě 60 °C po dobu 1 hodiny, případně je nechte při laboratorní teplotě inkubovat přes noc. 2. Překrytí sklíčkem nebo filmem:  Poté co vodný fixační prostředek CC/Mount™ dokonale vyschl, nechte preparáty podle potřeby ekvilibrovat při laboratorní teplotě. Inkubujte je v xylenu po dobu minimálně 1 minuty a maximálně 20 minut. Potom překryjte preparáty krycími sklíčky za použití xylenového fixačního média nebo metody překryvu filmem na bázi xylenu. POZNÁMKA: Před překrytím sklíčkem nebo filmem musejí být preparáty dehydratovány vzrůstající alkoholovou řadou.  Xylenové fixační médium nechte vyschnout při laboratorní teplotě. POZNÁMKA: Aby zbarvení postupně nevybledlo, chraňte preparáty před světlem a uchovávejte je při laboratorní teplotě.

Jako vnitřní negativní kontrola k posouzení zbarvení pozadí může sloužit celá řada různých typů buněk přítomných v reprezentativních cervikálních cytologických vzorcích, o nichž je známo, že jsou vzhledem k expresi antigenů p16INK4a a Ki-67 negativní (například povrchové buňky). Ověření testu Před prvním použitím v diagnostickém postupu je třeba, aby uživatel ověřil funkčnost soupravy CINtec PLUS Cytology Kit na pozitivních a negativních vzorcích o známých funkčních charakteristikách. INTERPRETACE ZBARVENÍ / OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY Barvicí postupy pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit poskytují dva různě zbarvené reakční produkty: hnědou sraženinu v místech antigenu p16INK4a a červenou sraženinu v místech antigenu Ki-67. Hnědé zbarvení buněk (cytoplazma a/nebo jádra) indikuje nadměrnou expresi p16INK4a. Červené zbarvení buněk (jader) indikuje expresi Ki-67. Buňky se zbarvením na oba antigeny vykazují hnědé cytoplastické zbarvení s typicky výrazně červenými jádry. Před interpretací výsledků je třeba, aby kvalifikovaný patolog/cytotechnolog zkušený v imunocytochemických postupech a vyškolený v interpretaci preparátů obarvených pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit vyhodnotil kontroly (pokud byly použity). Interpretaci výsledků testu smí provádět pouze příslušně kvalifikovaný odborník, který přitom musí vzít v úvahu pacientčinu anamnézu a výsledky dalších provedených diagnostických testů. Při interpretaci cervikálních cytologických preparátů obarvených pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit se preparáty hodnotí z hlediska přítomnosti cervikálních epiteliálních buněk vykazujících jak hnědé cytoplastické zbarvení, tak červené jaderné zbarvení, poukazující na současnou expresi p16INK4a a Ki-67. Dále, podobně jako u výsledků Pap cytologie, je třeba při vydávání výsledků testu CINtec PLUS Cytology preparáty posoudit z hlediska adekvátnosti vzorků podle pokynů „Bethesda Guidelines 2001“ (nebo TBS) [23]. Pozitivní výsledek testu Za pozitivní výsledek testu CINtec PLUS Cytology se považuje přítomnost jedné nebo více cervikálních epiteliálních buněk s kolokalizací specifického hnědého cytoplastického imunologického zbarvení a specifického červeného jaderného imunologického zbarvení. Negativní výsledek testu Pokud žádná cervikální epiteliální buňka nevykazuje současně hnědé cytoplastické imunologické zbarvení a červené jaderné imunologické zbarvení, považuje se výsledek testu CINtec PLUS Cytology za negativní. Přítomnost cervikálních epiteliálních buněk vykazujících imunoreaktivitu pouze na jeden marker, a nikoli na oba (tedy buď pouze hnědé zbarvení na p16INK4a, nebo pouze červené zbarvení na Ki-67), se nepovažuje za pozitivní výsledek testu se soupravou CINtec PLUS Cytology Kit. OMEZENÍ 1. 2. 3. 4.

KONTROLA KVALITY Případné odchylky od doporučených postupů fixace a dalšího zpracování cervikálních cytologických vzorků mohou způsobit výraznou variabilitu výsledků. Chybná funkce produktu v důsledku problémů při manipulaci nebo nestability nemá zjevné projevy. Proto je třeba souběžně se vzorky pacientů vyšetřovat i příslušné kontroly. Pozitivní kontrola Jako pozitivní kontroly se používají vzorky zpracované stejným způsobem jako vzorky pacientek. Pozitivní kontrola je ukazatelem správnosti přípravy vzorků a postupu barvení. Do každého cyklu analýz se má zařadit jedna pozitivní kontrola. Známé pozitivní kontroly mají sloužit pouze k ověření správnosti funkce zpracovaných vzorků a reagencií testu, nikoliv jako pomůcka ke stanovení konkrétní diagnózy vzorků pacientek. Pokud se u pozitivních kontrolních tkání neprojeví příslušné pozitivní obarvení, je třeba považovat výsledky testů vzorků za neplatné. 2016-02-04 FT0700-421a

5/7

5.

6. 7.

Pouze pro odborné použití. K provádění imunocytochemických postupů musí být pracovník speciálně vyškolen. Mikroskopické preparáty obarvené pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit smí vyhodnocovat pouze příslušně kvalifikovaný odborník, který je v interpretaci výsledků těchto testů vyškolen. Klinickou interpretaci pozitivního nebo negativního zbarvení je třeba posuzovat v souvislosti s klinickým obrazem pacientky a s cytologickými kritérii. Interpretaci výsledků barvení pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit ovlivňuje intenzita a kvalita hematoxylinového kontrastního zbarvení. Pokud by byly použity jiné reagencie nebo jiné inkubační doby, než je doporučeno, je třeba, aby uživatel postup ověřil, protože nadměrné nebo naopak neúplné kontrastní zbarvení může narušit správnou interpretaci výsledků. Pokud se mají soupravou CINtec PLUS Cytology Kit obarvit normální stěry, je třeba preparáty připravit za použití podložních sklíček SuperFrost® PLUS (Thermo Fisher Scientific) a cytologického postřikového fixačního činidla s polyetylénglykolem Safetex™ Cytology Fixative (Andwin Scientific). Při každé odchylce od těchto podmínek je třeba, aby uživatel postup ověřil. Použití procesoru ThinPrep® 3000 se pro přípravu vzorků ThinPrep® nedoporučuje, protože fixace postřikem, kterou přístroj provádí, může u preparátů barvených soupravou CINtec PLUS Cytology Kit vést k výrazné ztrátě buněk. K imunocytochemickému barvení vzorků ThinPrep® pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit na barvicích automatech VENTANA BenchMark GX, XT a ULTRA jsou 1012838CS Rev D

zapotřebí podložní sklíčka ThinPrep® Arcless neboThinPrep® FOR SPECIAL PROCESSING (Hologic, objedn. č. 70126-002). Podložní sklíčka ThinPrep® s potištěnou screeningovou plochou mohou poskytovat nekonzistentní výsledky barvení. Výrobce dodává tyto protilátky a reagencie v optimálním ředění k použití podle přiloženého návodu pro imunocytochemické testování připravených preparátů při cytologii z tekutého média (liquid-based cytology) nebo preparátů normálních stěrů. Jakákoli odchylka od doporučených postupů testu může deklarované výsledky znehodnotit; je třeba používat a dokumentovat příslušné kontroly. Uživatelé, kteří se odchýlí od doporučených testovacích postupů, musí za těchto okolností přijmout odpovědnost za interpretaci výsledků pacientů.

Reprodukovatelnost

ŘEŠENÍ PROBLÉMU

Studie reprodukovatelnosti byly u soupravy CINtec PLUS Cytology Kit provedeny k prokázání:  reprodukovatelnosti mezi různými šaržemi soupravy CINtec PLUS Cytology Kit,  reprodukovatelnosti v rámci jednoho cyklu a mezi různými cykly na barvicích automatech VENTANA BenchMark GX, XT a ULTRA,  reprodukovatelnosti na jedné platformě na barvicích automatech VENTANA BenchMark GX, XT a ULTRA,  reprodukovatelnosti mezi platformami barvicích automatů VENTANA BenchMark GX, XT a ULTRA. Ve všech studiích byla splněna příslušná kritéria přijatelnosti.

1.

Studie shody

8.

2.

3. 4. 5. 6.

7. 8.

Pokud dávkovač žádnou tekutinu nevypouští, prohlédněte plnicí komůrku a meniskus, zda neobsahují nějaká cizí tělesa nebo částice, například vlákna nebo sraženinu. Pokud je dávkovač ucpaný, nepoužívejte jej a spojte se s naším místním servisním zastoupením. Jinak dávkovač znovu naplňte tak, že jej namíříte na odpadní nádobu, sejmete uzávěr trysky a dávkovač nahoře stisknete. Pokud pozitivní kontrola vykazuje slabší zbarvení, než se očekává, zkontrolujte, zda zvolený protokol vyhovuje danému typů vzorků; například cytologické preparáty SurePath™ vyžadují delší dobu kondicionování než preparáty ThinPrep® nebo preparáty normálních stěrů. Dále zkontrolujte, zda v nádobkách dávkovačů nejsou nějaké pevné nečistoty. Jestliže je pozitivní kontrola negativní, je třeba zkontrolovat, zda je preparát opatřen správným čárovým kódem. Jestliže je preparát označen správně, zkontrolujte, zda v nádobkách dávkovačů nejsou nějaké pevné nečistoty. V případě příliš vysokého pozadí zkraťte v barvicím protokolu inkubační doby. Dále zkontrolujte, zda byl zásobní roztok Reaction Buffer připraven správně. Při příliš slabém zbarvení prodlužte v barvicích protokolech inkubační doby. U preparátů normálních stěrů lze upravit také dobu kondicionovací inkubace buněk. Červená sraženina sloužící k detekci exprese proteinu Ki-67 je rozpustná v alkoholu. Pokud je zbarvení Ki--67 slabé nebo není žádné, přesvědčte se, zda nebyl použit hematoxylin obsahující alkohol a zda se po zpracování postupovalo podle návodu v oddílu „Postup po zpracování – fixace a překrytí“. Pokud se vzorek ze sklíčka smývá, je třeba zkontrolovat, zda byly vzorky připravovány správně podle oddílu „Příprava vzorků“ a zda byla použita doporučená podložní sklíčka. Nápravná opatření jsou uvedena v oddíle „Postup barvení“ a v návodu k obsluze přístroje; případně se obraťte na své místní servisní zastoupení.

FUNKČNÍ CHARAKTERISTIKY K charakterizaci funkčnosti soupravy CINtec PLUS Cytology Kit sloužilo hodnocení analytické specificity, reprodukovatelnosti a shody, jak je uvedeno v následujícím oddíle. Analytická specificita Analytická specificita soupravy CINtec PLUS Cytology Kit je charakterizována inhibicí klonů primární protilátky E6H4 a 274-11 AC3 při použití příslušných epitop-specifických peptidů. K hodnocení vlivu inhibice specifickými peptidy na barvení na obě protilátky sloužily preparáty pro cytologii z tekutého média (LBC) pořízené z buněčné linie nadměrně exprimující oba antigeny. Vazba protilátek na jejich epitop-specifické peptidy vedla k inhibici těchto protilátek, což se projevilo sníženým zbarvením v porovnání s kontrolou bez peptidů. Mimoto nebyla žádná z obou protilátek inhibována epitopspecifickým peptidem druhé protilátky, což ukazuje, že nespecifické peptidy nebudou tyto protilátky inhibovat.

Funkčnost soupravy CINtec PLUS Cytology Kit při použití na barvicích automatech VENTANA BenchMark GX, XT a ULTRA byla hodnocena také porovnáním se soupravou Roche mtm CINtec PLUS Kit (srovnávací standard, Roche mtm laboratories AG, Mannheim), u které byla dříve prokázána vysoká citlivost a specificita na přítomnost předrakovinového a rakovinového onemocnění ve vzorcích pro cervikální cytologii, z hlediska přítomnosti jednotlivých cervikálních epiteliálních buněk vykazujících pozitivní duální zbarvení na p16INK4a a Ki-67 [14;15;16;17;18;19;20;21]. Studie shody byly provedeny za použití vzorků pacientek z cílové populace s výsledkem Pap cytologie NILM (negativní na intraepiteliální lézi nebo zhoubné bujení), ASC-US, LSIL a HSIL u každé jednotlivé metody přípravy preparátů pro cervikální cytologii: ThinPrep ® (Hologic Inc.), a BD SurePath™ (BD Diagnostics Tripath) a běžné stěry. V případě vzorků LBC byly z každého vzorku pacienta připraveny dva preparáty. V případě běžných stěrů bylo připraveno po dvou vzorcích od jednoho pacienta při jedné návštěvě, a to rozdělením odebraného materiálu na dvě sklíčka (tzv. metoda rozděleného vzorku). Jeden preparát se testuje soupravou CINtec PLUS Cytology Kit na barvicím automatu VENTANA BenchMark, druhý se barví na srovnávacím zařízení. Algoritmus postupu při vyhodnocování LBC vzorků: Každý vzorek hodnotí dva kvalifikovaní hodnotitelé. Pokud se na výsledku shodují, považuje se výsledek pro daný preparát za konečný. Pokud se na výsledku neshodují, provede třetí hodnotitel rozhodné vyhodnocení a za konečný se považuje většinový výsledek. Algoritmus postupu při vyhodnocování preparátů běžných stěrů: Každý vzorek hodnotí dva kvalifikovaní hodnotitelé. Jestliže oba hodnotitelé vyhodnotí preparát jako pozitivní, je pro tento preparát konečný výsledek pozitivní. Pokud se na výsledku neshodují, vyhodnotí preparát tři hodnotitelé jako panel pro konsenzuální kontrolu a za konečný výsledek se považuje výsledek jejich hodnocení. Jestliže oba hodnotitelé vyhodnotí preparát jako negativní, vyhodnotí jej ještě třetí hodnotitel, aby negativní výsledek potvrdil. Pokud třetí hodnotitel negativní výsledek potvrdí, je konečný výsledek preparátu negativní. Jestliže však třetí hodnotitel vyhodnotí preparát jako pozitivní, je preparát postoupen kontrolnímu panelu pro konsenzus, jehož závěr pak představuje pro tento preparát konečný výsledek. Výsledky testu se udávají ve formě pozitivní procentuální shody (PPA) a negativní procentuální shody (NPA) při použití soupravy CINtec PLUS Cytology Kit na automatu VENTANA BenchMark a na srovnávacím přístroji. Tabulka 4. Shoda výsledků testu mezi soupravou CINtec PLUS Cytology Kit a srovnávacím přístrojem při měření cervikálních cytologických preparátů ThinPrep®. Srovnávací přístroj (N)

Souprava CINtec PLUS Cytology Kit (n)

+

-

+

140

25

-

17

147

Celkem

157

172

PPA (n/N) (95% interval spolehlivosti) = 140/157 x 100 % = 89,2 % (83,3-93,1 %) NPA (n/N) (95% interval spolehlivosti) = 147/172 x 100 % = 85,5 % (79,4–90,0 %)

2016-02-04 FT0700-421a

6/7

1012838CS Rev D

Tabulka 5. Shoda mezi výsledky testu pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit a standardního srovnávacího zařízení u cervikálních cytologických preparátů SurePath™.

12.

Srovnávací přístroj (N)


+

-

+

56

3

-

9

108

Celkem

65

111

13.

14. 15.

PPA (n/N) (95% interval spolehlivosti) = 56/65 x 100 % = 86,2 % (75,7-92,5 %) NPA (n/N) (95% interval spolehlivosti) = 108/111 x 100 % = 97,3 % (92,4–99,1 %)

16.

Tabulka 6. Shoda mezi výsledky testu pomocí soupravy CINtec PLUS Cytology Kit a standardního srovnávacího zařízení u preparátů běžných cervikálních cytologických stěrů.

17.

Srovnávací přístroj (N)


+

-

+

98

17

-

20

72

Celkem

118

89

18. 19.

20.

PPA (n/N) (95% interval spolehlivosti) = 98/118 x 100 % = 83,1 % (75,3-88,8 %) 21.

NPA (n/N) (95% interval spolehlivosti) = 72/89 x 100 % = 80.9% (71.5-87.7%)

22.

LITERATURA 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11.

Wentzensen N, von Knebel Doeberitz M. Biomarkers in cervical cancer screening. Dis Markers. 2007;23:315-30. Scholzen T, Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown. J Cell Physiol. 2000;182:311-22. Klaes R, Friedrich T, Spitkovsky D, et al. Overexpression of p16INK4a as a specific marker for dysplasia and neoplastic epithelial cells of the cervix uteri. Int J Cancer 2001;92:276-84. Sano T, Oyama T, Kashiwabara K, et al. Expression status of p16 protein is associated with human papillomavirus oncogenic potential in cervical and genital lesions. Am J Pathol. 1998;153:1741-8. Cuschieri K, Wentzensen N. Human papillomavirus mRNA and p16 detection as biomarkers for the improved diagnosis of cervical neoplasia. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 2008;17:2536-45. Bergeron C, Ordi J, Schmidt D, et al. Conjunctive p16INK4a testing significantly increases accuracy in diagnosing high-grade cervical intraepithelial neoplasia. Am J Clin Pathol. 2010;133:395-406. Del Pino M, Garcia S, Fusté V, et al. Value of p16INK4a as a marker of progression/ regression in cervical intraepithelial neoplasia grade 1. Am J Obstet Gynecol. 2009; 201(5):488. Ordi J, Garcia S, del Pino M, et al. p16INK4a immunostaining identifies occult CIN lesions in HPV-positive women. Int J Gynecol Pathol. 2008;28:90-7. Wang SS, Trunk M, Schiffman M, et al. Validation of p16INK4a as a marker of oncogenic human papillomavirus infection in cervical biopsies from a populationbased cohort in Costa Rica. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 2004;13:1355-60. Galgano MT, Castle PE, Atkins KA, et al. Using biomarkers as objective standards in the diagnosis of cervical biopsies. Am J Surg Pathol. 2010;8:1077-87. Carozzi F, Confortini M, Dalla Palma P, et al. Use of p16INK4a over-expression to increase the specificity of human papillomavirus testing: a nested substudy of the NTCC randomised controlled trial. Lancet Oncol. 2008;9:937-45.

2016-02-04 FT0700-421a

7/7

23.

Denton K, Bergeron C, Klement P, et al. The sensitivity and specificity of p16INK4a Cytology versus HPV Testing for Detecting High-Grade Cervical Disease in the Triage of ASC-US and LSIL Pap Cytology Results. Am J Clin Pathol. 2010;134:12-21. Carozzi F, Gillio-Tos A, Confortini M, et al. Risk of high-grade cervical intraepithelial neoplasia during follow-up in HPV-positive women according to baseline p16-INK4a results: a prospective analysis of a nested substudy of the NTCC randomised controlled trial. Lancet Oncol. 2013;14(2):168-76. Ikenberg H, Bergeron C, Schmidt D, et al., PALMS study group (2013). Screening for Cervical Cancer Precursors with p16/Ki-67 Dual-stained Cytology: Results of the PALMS Study. J Natl Cancer Inst. 2013;105(20):1550-7. Schmidt D, Bergeron C, Denton KJ, et al. p16/Ki-67 Dual-stain cytology in the triage of ASCUS and LSIL Papanicolaou cytology: Results from the European Equivocal or Mildly Abnormal Pap Cytology Study (EEMAPS). Cancer Cytopathol. 2011;119(3):158-66 Petry KU, Schmidt D, Scherbring S, et al. Triaging Pap cytology negative, HPV positive cervical cancer screening results with p16/Ki-67 Dual-stained cytology. Gynecol Oncol. 2011;121(3):505-09. Ravarino A, Nemolato S, Macciocu E, et al. CINtec PLUS immunocytochemistry as a tool for the cytologic diagnosis of glandular lesions of the cervix uteri. Am J Clin Pathol. 2012;138(5):652-56. Singh M, Mockler D, Akalin A, et al. Immunocytochemical colocalization of p16(INK4a) and Ki-67 predicts CIN2/3 and AIS/adenocarcinoma. Cancer Cytopathol. 2012;120(1):26-34. Waldstrøm M, Christensen RK, Ornskov D. Evaluation of p16INK4a/Ki-67 dual stain in comparison with an mRNA human papillomavirus test on liquid-based cytology samples with low-grade squamous intraepithelial lesion. Cancer Cytopathol. 2013;121(3):136-45. Wentzensen N, Schwartz L, Zuna RE, et al. Performance of p16/Ki-67 immunostaining to detect cervical cancer precursors in a colposcopy referral population. Clin Cancer Res. 2012;18(15):4154-62. Killeen JL, Dye T, Grace C, et al. Improved Abnormal Pap Smear Triage Using Cervical Cancer Biomarkers. J Low Genit Tract Dis. 2013 Jun 11. [Epub ahead of print] Birdsong G., Husain M., Faison T, et al. Cervicovaginal Cytology Based on the Papanicolaou Technique; Approved Guideline- Third Edition. CLSI document GP15A3. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2008. Solomon D, Davey D, Kurman R, et al. The 2001 Bethesda system. Terminology for reporting results of cervical cytology. JAMA. 2002;287:2114-9.

DUŠEVNÍ VLASTNICTVÍ BENCHMARK, CINtec, VENTANA a logoVENTANA jsou ochrannými známkami společnosti Roche. Všechny ostatní ochranné známky jsou majetkem jejich příslušných vlastníků. © 2013 Ventana Medical Systems, Inc. KONTAKTNÍ INFORMACE Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 D-68305 Mannheim Germany www.ventana.com

1012838CS Rev D

CINtec PLUS Cytology Kit

Recommend Documents