Asztrociták, in vivo
Asztrociták, in vitro
Asztrociták in vitro, tenyészetben
Asztrociták in vitro, tenyészetben – konfluens asztrocita monolayer
Gliális sejttípusok az idegrendszerben neuroektodermális eredet (kivéve mikroglia) neuronok
neuroglia
asztroglia
mezodermális eredet
erek falát és agyhártyákat alkotó sejtek
oligodendroglia
mikroglia
* oligodendrociták * szatellitasejtek * asztrociták * NG2 sejtek * II. típusú asztrociták * olfactory nerve * radiális glia ensheating * Bergmann glia cells (ONEC) * Müller glia * Schwann sejtek * pituicita * tanycita * glia limitans sejtjei
*adeno* corpus hipofízis pineale gliasejtjei csillagsejtjei
GLIA: gyűjtőfogalom !!! “gliák”
* rezidens mikroglia bevándorolt makrofágok
ependyma *ependymociták
*ependymaszervek sejtjei *choroid plexus hámsejtjei
perivaszkuláris
* enterális gliasejtek
periszinaptikus
pericelluláris perinodális asztrociták
Oligodendrocita progenitor II. típusú asztrocita „O2A” progenitorok izolálása perinatális patkány látóidegből (később kisagyból, cortexből, gerincvelőből is) 1983, Martin C. Raff
Izolálás után 1 nappal. 70% O2A progenitor, 30% type-2 asztrocita
Izolálás után 3 héttel, 90% GFAP+ type2 asztrocita
A2B5-
A2B5+
Liu, Rao 2004
http://www.springerimages.com/Images/Biomedicine/1-10.1385_0-89603-214-0_269-10
Oligodendrocita progenitor II. típusú asztrocita 5 napos patkány, látóideg
1983, Martin C. Raff Type 1. astrocyte
Type 2. astrocyte: A2B5+, GFAP+ 4 hetes, passzált tenyészet
A2B5: sejtfelszíni gangliozid epitop -
A2B5
GFAP
gangliozid: glikoszfingolipid+sziálsav eredetileg csirke embrionális retina elleni immunizáltatásból származó antitest megjelöl: thymus epitélt, pancreas szigetsejteket, agyban: retina neuronokat és bipotens glia progenitorokat a látóidegben
Oligodendrocita progenitor II. típusú asztrocita
A2B5-
A2B5+, PDGFRa+, NG2+
A2B5+, FGFR+, Ran2+
- O2A progenitor oligodendrocitává differenciálódik thyroid hormon, retinsav és CNTF hatására - Type II asztrocitává is differenciálódhat - csak in vitro ? (type 2 asztro = in vitro műtermék !!! ???) O2A/OPC (oligo progenitor)
tud asztrocitát létrehozni
Oligodendrocita progenitor II. típusú asztrocita A2B5 : cell surface ganglioside epitop NG2 : Neuron-glial antigen 2 (NG2), chondroitin sulfate proteoglycan 4 PDGF : platelet derived growth factor Ran2 : Rat neural antigen-2 , a GPI-anchored form of ceruloplasmin
II. típusú asztrocita, GFAP+
(réz-kötő fehérje a vérben, vas metabolizmusban is szerepe van)
(Ilyen is van....: type-2 asztrocita sejtvonal: RBA-2)
Oligodendrocita
http://hjkri.buffalo.edu/paez.html
Oligodendrocita 1928, Del Rio Hortega - kevesebb nyúlvány: oligo
- 4 típus (Hortega szerint) Type I ODG: - kis, kerekded sejttest - 4-6 primer nyúlvány - 10-30 axon myelinálása, radiálisan - 100-200 um internodális táv - előagy, kisagy, gerincvelő Type III ODG: - nagyobb sejttest - 1-5 axon myelinálása - 200-500 um internodális táv - pedunculák, nyúltvelő, gerincvelő http://www.nrdaddy.com/lectures/ivh_pvl/oligo.htm
Type II ODG: - hasonló, mint Type I, de inkább parallel futó rostok myelinálása - fehérállományban a leggykoribb sejttípus
Type IV ODG: - nincs nyúlványa - egy hosszú myelinhüvely - 1000 um internodális táv - agyidegek CNS-be lépésénél
Oligodendrocita Type I
Type II
Type III
Type II - III
Type IV Adult rat anterior medullary.
RIP antibody
Kettenmann H., Ransom B.: Neuroglia
Oligodendrocita 1932, Wilder Graves Penfield was first to suggest myelin is made by oligodendrocytes, not axons
1891–1976, Canadian neurosurgeon epilepszia kezelése, érző és motor cortex feltérképezése...
“That these cells have to do with the formation and maintenance of the myelin sheath is born out by the facts … they are very numerous, especially in the white matter, and the position and relation of their cytoplasmic expansions to the myelin sheaths is similar to the arrangement of the sheath of Schwann” Penfield
A: 1924, Penfield rajza oligodendrocitákról (O) és neurogliáról/asztrocitáról (N) Myelin nem festődött – direkt bizonyték O myelináló képességéről csak az ELMI felfedezésekor jött B: egér látóideg MBP/oligodendrocita Emery 2010
Oligodendrocita
Jianrong Li
Kachar et al., 1986
http://www.regenecell.com/article-multiple-sclerosis-status.htm
Oligodendrocita
Dr H. Jastrow
myelin hüvely
oligodendrocita
1878, Louis-Antoine Ranvier, dicovered the nodes of Ranvier 1835–1922, French physician, pathologist, http://www.uni-mainz.de/FB/Medizin/Anatomie/workshop/EM/EMNervE.html anatomist and histologist http://legacy.owensboro.kctcs.edu/gcaplan/anat/histology.html
http://vanat.cvm.umn.edu/neurHistAtls/pages/glia6.html
Oligodendrocita Golgi
mitkokondriumok
axonok myelinhüvellyel
Több axonnal kapcsolatban álló oligodendrocita http://www.wesapiens.org/file/2050457/Oligodendrocyte
Oligodendrocita
myelin
Development of oligodendroglial cells
O2A precursor
ODG blast
pre ODG
immature ODG
myelinating ODG
E12,5
Egér, E12.5 embrió, koronális metszet LGE: lateral ganglionic eminence MGE: medial ganglionic eminence Sárga: GABA-erg interneuronok vándorlása Piros: glutamaterg neuronok migrációja
striatum http://www.j-biomeddiscovery.com/content/1/1/16/figure/F1
előagyban
gerincvelőben
Oligodendrocita – progenitorok (OPC) - korai embrionális korban: velőcső ventrális neuroepitéliumának azon doménjében, ahol először a motoneuronok keletkeznek - késői embrionális/korai posztnatális korban: dorzális gerincvelő
- 1. hullám: az előagyban az első OPCk a mediális gangliondombokban és az anterior entopedunculáris area területéről - 2. hullám: OPCk a laterális és/vagy caudális gangliondombokban - 3. hullám: OPCk a posztnatális cortexben
OPC sejtek innen migrálnak a gerincvelő teljes területére és végül myelináló ODC-vá differenciálódnak ezek adják a teljes gerincvelői OPC pool 10+-15%-át a teljes embrionális/posztnatális telencephalon területét ellátják, beleértve a cortexet
Bármelyik hullám hibádzik: másik gerenerációs hullámok pótolják a kiesett sejteket ! Redundancia... Nicoletta Kessaris et al. 2006
NG2 sejtek („NG2 glia”) 1980s, William Stallcup és mtsai írják le az NG2+ sejteket a felnőtt agyban
NG2: neuron-glial antigen 2 (NG2) = kondroitin szulfát proteoglikán 4 (CSPG4) - sok oligodendroglia-progenitor (OPC) markert is expresszálnak (pl. PDGFRa) - érett oligo, asztro markereket nem expresszálnak
- myelináló oligodendroglia sejteket (Sox10+ ODG lineage) és további NG2+ sejteket hoznak létre de neuront (?) és asztrocitát is generálhatnak (őssejtek ??? ) - kis sejttest, elágazó nyúlványok
A) cortex of a P13 Sox10-GFP mouse showing the near-uniform distribution of oligodendrocyte lineage cells, mainly NG2-glia. B) A single NG2-glial cell in the cerebellum Richardson 2011
EC domén
N-terminális
NG2: kondroitin szulfát proteoglikán 4 (CSPG4) = neuron-glial antigen 2 (NG2)
Növekedési faktor kötés
IC domén
TM domén
15 CS repeat
C-terminális
Integrin és mátrix-metalloproteináz kötés The extracellular domain contains an N-terminal globular subdomain (D1) consisting of laminin G-type regions (LG) and disulfide bonds. The D2 subdomain consists of 15 CSPG repeats and, in NG2, a single chondroitin sulfate glycosaminoglycan (CS-GAG) chain. This region of the core protein is known to bind certain soluble growth factor ligands, and the CS-GAG is responsible for CSPG4 binding to integrin and matrix metalloproteinases (MMPs). CS modification is also associated with distinct membrane distribution patterns of CSPG4/NG2 on the cell surface. CSPG4/NG2 can be expressed with or without CS modification. Proximal to the plasma membrane, the D3 globular subdomain contains sites for N-linked carbohydrate modification, binding sites for lectins (e.g., galectin 3), and proteolytic cleavage by MMPs or other proteases. The transmembrane region of CSPG4 contains a cysteine residue (C) at position 2230 that may play a role in CSPG4 membrane localization, although this is yet to be evaluated. The CTD contains tyrosine residues (T) that serve as phosphoacceptor sites for PKCa and ERK 1,2 (CSPG4 residues 2252 and 2310, respectively). The proline-rich region (PR) may comprise a non-canonical SH3 protein interaction domain, and the Cterminus contains a 4 residue PDZ domain-binding motif (PDZ) that is responsible for interactions with various PDZ domain-containing binding partners.
Price A., et al, 2011
Oligodendrociták (ODC) és progenitorjaik (OPC) „polydendrocyte” elnevezést Nishiyama et al. javasolták (2002)
polydendrocita = OPC, NG2 sejt felnőtt agyban
??? inkább nem (nem generálnak neuront)
The cellular source of each mature cell type is shown. The thickness of the arrows represents the relative contribution of the precursor population. Most polydendrocytes arise from the medial ganglionic eminence (MGE) and the anterior entopeduncular region (AEP), with a minor contribution from radial glia. Polydendrocytes give rise to ODCs and a subpopulation of protoplasmic astrocytes in the grey matter but do not give rise to white matter astrocytes. Other sources of astrocytes include cells in the subventricular zone (SVZ) and radial glia. Nishiyama 2009
NG2 sejtek („NG2 glia”)
Még egy elnevezés: „synantocytes”
Egyes elképzelések szerint az NG2 sejtek nem simán ODC progenitorok – hanem különálló glia-típusnak tekinthetőek: asztro, oligo, mikro, OPC ÉS NG2
- a ‘tetrapartite’ synapse tagjai - neuronok környezetében, neuronális aktivitást érzékelik Synantociták szoros kapcsolatban a neuronokkal. NG2 és toluidine kék festés. (A) HC CA1 area: némelyik szoros kapcsolatban piramissejtekkel (B) Perineuronális network, HC neuron (csillag) körbeölelése (C) Kérgi piramissejt körül Butt 2005
NG2 sejtek („NG2 glia”) „synantocytes”
NG2-expresszáló glia (synantocita) a felnőtt agyban. (A) NG2 szaggitális metszeten (B) hippocampusban erős jelölődés CA1, CA2, CA3 régiókban - akár extracelluláris jelölődés is lehet (C) kisagyban ott vannak Purkinje neuronok között (PCL), a molekuláris (ML) és a szemcsesejt-rétegben (GCL) és a fehér-állományban (WM) is (itt polarizáltak, nyúlványaik az axon-kötegek mentén futnak). Butt 2005
NG2 sejtek („NG2 glia”) „synantocytes” Synantociták a Ranvier-befűződések körül (antrior medullary velum)
NG2, myelin basic protein, ankyrin-3G (A) egyedi NG2 sej több nodussal is kapcsolatban van és nyúlványuk követi a myelinált axont (minden NG2-re igaz ezen a területen !) (B) dekonvolvált kép: nodus és paranodus kapcsolatok a myelinhüvelyen ankyrin-3G: axon-iniciális szegmensben és Ranvier-féle befűződésben, Na-csatornák kihorgonyzása
NG2 sejtek („NG2 glia”)
Még egy elnevezés: „GluR cell/complex cell”
1992, Steinhauser C.
passzív
kapcsolt, Glu és GABA transzporterek, GFAP+: asztro
komplex
nem kapcsolt, gyakran GFAP-, de S100b+: éretlen asztro
patch clamp: 2 glia-populáció
GluR
GluT
Szerintem: nem kapcsolt „komplex” sejtek lehetnek asztrociták és NG2+ sejtek is
később (2004) ezeket GluR sejteknek is nevezik, ionotróp GluR (AMPAR) expresszió miatt (és GABAAR+, Glu transzporter-)
TODAY (2010) : emerging consensus: (i) NG2 cells and GluR/complex cells represent overlapping populations of glia (ii) NG2 cells represent a fourth class of neuroglial cells in the adult CNS
Még alakul...
NG2+ sejtek, ezüsttel intenzifikált DAB festés (dark granules on the surface and in the cytoplasm). Bab alakú, ovális magvú sejtek, heterokromatin magmembrán mellett és nukleoplazmában is. A: neuron mellett, C: kapilláris mellett
NG2 sejtek („NG2 glia”)
Klb. nyúlványrendszerű NG2+ sejtek a cortexben (o=oligodendrocita sejttest az A képen) Peters, Sethares 2004
Oligodendrocita NG2 progenitorok és O2A progenitorok viszonya
O2A progenitor is NG2+
A2B5: cell surface ganglioside epitope
asztrocita
előagyban
gerincvelőben
Oligodendrocita – progenitorok (OPC) - korai embrionális korban: velőcső ventrális neuroepitéliumának azon doménjében, ahol először a motoneuronok keletkeznek - késői embrionális/korai posztnatális korban: dorzális gerincvelő
- 1. hullám: az előagyban az első OPCk a mediális gangliondombokban és az anterior entopedunculáris area területéről - 2. hullám: OPCk a laterális és/vagy caudális gangliondombokban - 3. hullám: OPCk a posztnatális cortexben
OPC sejtek innen migrálnak a gerincvelő teljes területére és végül myelináló ODC-vá differenciálódnak ezek adják a teljes gerincvelői OPC pool 10+-15%-át a teljes embrionális/posztnatális telencephalon területét ellátják, beleértve a cortexet
Bármelyik hullám hibádzik: másik gerenerációs hullámok pótolják a kiesett sejteket ! Redundancia... Nicoletta Kessaris et al. 2006
NG2 sejtek eredete és sorsa
Hill, Nishiyama 2014 Heterogeneous origin and fate of NG2 cells in the forebrain. During mid-gestation, NG2 cells in the forebrain are generated from the ganglionic eminences (MGE (purple) and LGE (blue) defined by the transcriptional factors Nkx2.1 and Gsh2, respectively. The LGE-derived cells expand and constitute the majority of NG2 cells in the subpallial forebrain but also migrate dorsally to populate the corpus callosum and to a lesser extent the neocortex. Subsequently, from late embryonic stages to early postnatal period, additional NG2 cells are generated from the dorsal VZ defined by the Emx1 transcriptional factor (Emx1, green). After the VZ has ceased to produce new neurons and glia, a minor population of NG2 cells is generated from the SVZ (red). NG2 cells produced from all of these sources are capable of generating oligodendrocytes. In addition, those from the ventral germinal zones differentiate into protoplasmic astrocytes, constituting up to 40% of the protoplasmic astrocytes in the ventral posterior gray matter of the forebrain. It is not yet known whether the astrogliogenic NG2 cells originate in MGE or LGE or both. As soon as NG2 cells exit the germinal zone, they acquire one or more processes, thus already exhibiting the polydendrocytic morphology from as early as mid-embryonic stages.
Oligodendrociták (ODC) és progenitorjaik (OPC)
*
Nishiyama 2009
Oligodendrociták (ODC) és progenitorjaik (OPC)
Markerek Bradl, Lassmann 2010
-
NG2 PDGFRa OLIG2 SOX10 O4 MBP Nkx2.2 CA II CNP Kir4.1 MAG MOG NogoA PLP RIP TPP/p25 O1 GalC Cx32
Oligodendrociták - szigetelés, ingerületvezetés - axon tápanyagellátása
MS, szklerózis multiplex (agy, gerincvelő)
P: Purkinje neuron AIS: axon initial segment: ioncsatorna—clusterek, akciós potenciál generáció Node: Na+ csatornák, akcióspotenciál propagálás Paranode: myelin rétegek és axolemma kapcsolatai
JXP: juxtaparanode, delayedrectifier K+ csatornák Internode: kompakt myelin KV1.2 : K+ ioncsatorna NF186: Nfasc186 (neurofascin) Caspr : contactin-associated protein-2 Calb: calbindin MBP: myelin basic protein
Oligodendrociták
Mielináció 2 modellje
Oligodendrociták (ODC) és progenitorjaik (OPC) Olig2 Oligodendrocyte transcription factor 2 - bHlH transzkripciós faktor - ventrális neuroektodermális sejtsors specifikáció (motor neuron és OPC differenciáció) - diffúz gliómák univerzális markere (diagnosztikában használható marker)
Sox10 transzkripciós faktor Nkx2.2 homeobox fehérje, transzkripciós faktor inkább OPC-ben Liu, Qiu 2007
(Olig1 – szintén oligodendrogenezis Olig3 – pl. dorzális gerincvelői neuron képzés, tranziens expresszió)
Olig2 kiütése: NG2 glia asztro irányban fog differenciálódni!
Olig2 /O4
Olig2 /O4 in differentiated rat cortical stem cells
http://www.rndsystems.com/ihc_molecule_images.aspx?m=1929
Markerek
O4 O4 érett ODC marker sejtfelszíni antigén, sulfatide, glycosphingolipid
Oligodendrociták myelin intracellular
extracellular
intracellular
Oligodendrociták
Proteolipid Protein, PLP
- transzmembrán proteolipid protein, a myelin fehérjéknek 50%-a - 1 génről 2 fehérje keletkezik: a PLP és a DM-20, mindkettő rendkívül hidrofób - a myelin lamellák extracelluláris lemezeinek fúziójáért, kompakttá válásáért felelős (valószínűszeg más funkciója is van) - membránba épülése szabályozza a myelinlepedő-képződés sebességét - hiányában van myelinizáció: de axondegeneráció, korai ODC pusztulás jellemző
van KO egér illetve természetes mutánsok, pl. shaking, jimpy Humán: Pelizaeus-Merzbacher disease Baron, Hoekstra 2010
http://www.em.mpg.de/index.php?id=232&L=1 Werner
Verrkhratsky, Butt 2007
Oligodendrociták Myelin Basic Protein, MBP 1971, ekkor szekvenálták meg az MBP-t - fehérjecsalád, több izoforma - myelin fehérjéknek 20%-a - a myelin lamellák citoplazmatikus lamelláinak adhéziójáért felel - CNS-ben esszenciális fehérje mely nélkül a myelin struktúrája dezorganizálódik - PNS-ben lehet ép a myelin MBP defektus esetén is - 1 gén, sok izoforma (CNS/PNS-ben más-más eloszlásban) - MBP valószínűleg csak PLP beépülés után integrálódik a membránba
- természetes mutáns: shiverer - MBP-KO: hasonló fenotípus Baron, Hoekstra 2010
*glial progenitors from Oligodendrociták aborted human fetuses *PSA-NMCAM- and A2B5+ magnetic separation “Humanized mice” *shi/shi x rag2/-/- myelin and immunodeficient mice *transplantation of newborn mice (300 000 cells into cortex) *at 130 days mice started to dye
Cerebellum of a one year old myelin-mutant mouse transplanted with human precursor cells. Since the mutant mouse’s own cells cannot make MBP, (shiverer) all the myelin has been produced by the human cells. Nuclei/Human cells/MBP Steven Goldman, Martha Windrem et al. 2008 http://stemcell.ny.gov/slideshow/index.php?i=7
MBP, myelin basic protein
Nikon; MBP/GFAP/Hoechst
http://www.microscopyu.com/galleries/fluorescence/ratsections.html
Oligodendrociták MBP, myelin basic protein
MBP in adult rat brain, corpus striatum.
MBP - AXON-jelölés !!
http://www.immunoportal.com, Myelin Basic Protein in Rat brain: ab40390, ab40390
(MBP) in adult mouse cortex.
Oligodendrociták (ODC) Dendritek borítottsága ??? Van-e myelinált dendrit ? - dendrit: szinaptikus input, információ-integráció fő helye – myelin szigetelés nem jellemző - nem szinaptikus felszínt dendriten glia (asztrocita, Bergmann glia) végtalpak és a „perineural net” komponensei boríthatják - ritkán: részleges myelinborítás - PNS-ben: érző neuron
A: kisagy, Purkinje sejtek dendritjeit Bergmann glia (sötét vonalak, nyílhegyek) veszik körül. A két B betű Bergmann glia sejttestét jelenti a Purkinje sejttesthez közel. Csillag: kapilláris B: S100+ Bergmann glia Purkinje mellett C-D: részlegesen myelinált (MS) mitrális sejtek (olfactory bulb) dendritjei (d) majomagyban, nyilak a nem-myelinált szakaszt mutatják Hatton, Parpura 2004
Oligodendrociták (ODC) és progenitorjaik (OPC) Myelin fehérjék proteomikai analízise -342 CNS myelin-asszociált protein - szeparálás, - tömegspektrometria (MS) - egy csomó új fehérje - új analízis szerint: PLP: 17%, MBP 8% (!!!csak)
PDGFRa PDGF receptor alpha - korai marker - PDGF kell ODC in vitro differenciáltatásához TPPP/p25 tubulin polymerization promoting protein - MT stabilizáló szerep - myelináló oligodendrocitákban - úgy tűnik OPC differenciációban is esszenciális Lehotzky 2010
Kir4.1 - inward rectifying K+ csatorna - oligodendrocita sejttesten - Kir4.1.KO egér: gerincvelői hypomyelináció - de asztrocita perivaszkuláris/perinodális végtalpakon is)
Oligodendrociták (ODC) MAG (MGP), myelin associated glycoprotein - immunglobulin szupercsalád tagja - transzmembrán glikoprotein - 1 gén, két forma: L-MAG (large) embrionális, S-MAG (small) felnőtt - a molekula 30%-a cukor - mutáns egér, MAG-KO: quivering - CNS-ben csak a periaxonális területeken található, itt az axolemmától egy 12-14 nm-es rést tart fenn: axon/myelin kapcsolatért felel - szignál –transzdukció a myelinmembránon át - axon-növekedés (burjánzás) inhibitora
Myelin associated proteins MOG, myelin oligodendrocyte glycoprotein - oligodendrocita nyúlványokon és myelinhüvely legkülső membránján - csak érett sejteken – késői marker - szerepe lehet adhézióban, faszcikulációban
adaxonal abaxonal Quarles 2007
Oligodendrociták (ODC)
Myelin associated proteins
OMgp, Oligodendrocyte-myelin glycoprotein - kicsi, glikozilált protein - a paranodális területeken - axon-növekedés gátlása: OMgp KO egérben nodusok túl szélesek és több az axon-kollaterális ! Nogo-A, neurite outgrowth inhibitory protein - neuronokon és érett oligodendrocitákon - axon-növekedés (sprouting) gátlása neuron
MOBP, myelin-associated oligodendrocytic basic protein - myelin bázikus fehérjéhez hasonló lokalizáció és funkció - több izoforma - KO egér myelinjében nem láttak abnormalitást MOSP, myelin/oligodendrocyte-specific protein - myelin extracelluláris felszínén - funkciója ?? talán myelinképzés
Llorens 2011
