ANALISIS VARIASI GENETIK BEBERAPA VARIETAS MANGGA (Mangifera indica L.) BERDASARKAN RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) DAN PENANDA MOLEKULER GEN PSY (Phytoene Synthase)
SKRIPSI
OLEH :
ASIFATUL QUBAIS NIM. 10620061
JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG 2015
ANALISIS VARIASI GENETIK BEBERAPA VARIETAS MANGGA (Mangifera indica L.) BERDASARKAN RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) DAN PENANDA MOLEKULER GEN PSY (Phytoene Synthase)
SKRIPSI
Diajukan Kepada : Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang Untuk Memenuhi Salah Satu Persyaratan dalam Memperoleh Gelar Sarjana Sains (S. Si)
Oleh : ASIFATUL QUBAIS NIM. 10620061
JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG 2015 i
ii
iii
MOTTO
إن صالتي و نسكي و محياي و مماتي هلل رب العالمين Sesungguhnya sholatku, ibadahku, hidupku dan matiku hanya untuk Allah Tuhan semesta alam… Allah kuwi siji-sijne guru sejati manungso. Batin manungso kudu madep, mantep, jejeg lan ajeg manembah marang Pangeran. Batin manungso kudu diluruske, difokuske, diarahke, dikomunikasikne, lan dipasrahke tanpa kenal wayah lan wektu marang Gusti Pengeran, mbuh kuwi pas wayah ngadek, wayah lungguh, turu, mlaku, wayah awan, wayah rino wengi batin kita kudu terus manembah lan mamuji Gusti Pangeran. Batin kang tansah ngucap HU…ALLAH ing seben ambegan. mlebune nafas HU…metune nafas ALLAH..kanthi laku pasrah cipto, roso lan karso dening Gusti Pengeran Kabeh mau kudu dibarengi karo tumindak sing apik ojo nganti tumindak sing gawe wong ciloko..
فمن يعمل مثقال ذ رة خيرا يرة Barangsiapa yang mengerjakan kebaikan seberat dzarrahpun, niscaya ia akan melihat (balasan)nya. Ayat yang memotivasi kita untuk selalu berbuat kebaikan. Tidak ada kebaikan yang sia-sia di dunia ini walau hanya sesuatu yang kecil karena Allah akan membalasnya dan Allah tidak akan mengingkari janji.
iv
Lembar Persembahan بسم هللا الر حمن الر حيم
Ku persembahkan karya ini untuk orang-orang yang teramat berarti dalam hidupku…
Kedua orang tuaku Aba Alil Wafa (alm) yang selama hidupnya telah sabar mendidikku bahkan sampai di penguhujung usianya mendampingiku dalam mengerjakan skripsi dan Umi Uswatun Hasanah yang senantiasa mendo’akanku…
Adikku Bela Salsabila dan Muhammad Mubin Muqorrobin yang selalu memotivasiku agar tetap terus bersemangat dan tidak mengeluh jika mendapat kesulitan. Semoga cita-cita kalian tercapai.
Untuk calon imamku, yang selalu memberi semangat dan doa. Semoga impian kita agar bisa bahagia di dunia dan akhirat menjadi kenyataan, Aamin.. Teman-teman se perjuangan di Lab Biologi Molekuler Luluk, Mar’ah, Mbak Nana, Fitrah, Mbak Adel, Mbak Cita terima kasih sudah sering berbagi pikiran dan lembur bareng di Lab, terus bersemangat untuk menggapai cita-cita. Serta Mas Ismail terimakasih telah banyak meluangkan waktu untuk berdiskusi
Zaim, Eva, Uswah, Ika, Andre, Iva, Mbak Nana terimakasih telah menemani dan membantu proses penyelesaian skripsi.
Teteh Tanti, Mas Fajar, Teh Elin dan Bu Yuyu serta peneliti lain di lab. Genetika tumbuhan LIPI Bogor terimakasih telah berkenan berbagi ilmu teknik molekuler, sehingga saya berani mengambil skripsi bertema molekuler.
v
Neng Has dan Mas Choiri yang telah banyak membantuku ketika hidup di Malang, serta ponakan-ponakanku shofia, Daniel, Rara dan Sefa.
Sahabat–sahabat Biologi yang tercinta Arif, Mbak Bonek, Sahla ,Susi, Erika, Ririn, Afif, Ika ,Khotim dan yang lainnya yang tidak dapat disebutkan satupersatu tetaplah berjuang menggapai mimpi-mimpi kalian.
Teman-teman Asisten Praktikum Elik, Eva, Mbak Yanti, Bagus, Riftin, mbak Evi dan yang lain, terima kasih telah menjadi partner yang baik dan memberikan banyak pengalaman.
Teman-Teman HMJ Biologi terima kasih sudah menjadi tempat diskusi selain kuliah juga bertukar pikiran tentang organisasi dan kehidupan.Terus berjuang untuk HMJ Biologi. Sahabat-sahabat kos mbak Aan, mbak Atim Yanti, Ni’mah, mbak Nju dan yang lainnya terima kasih telah menjadi keluarga di perantauan.
Dan masih banyak orang- orang yang sangat berarti dalam hidupku yang tak bisa disebutkan satu per satu, semoga silaturahmi diantara kita tetap terjaga.Amin رب العا لمين ّ الحمد هلل
vi
vii
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum Warrahmatullahi Wabarokatuh Alhamdulillahirobbil ‘Alamin, segala puji bagi Allah Subhanahu wata’ala yang senantiasa memberikan Rahmat, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Analisis Variasi Genetik Beberapa Varietas Mangga (Mangifera indica L.) Berdasarkan RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) dan Penanda Molekuler Gen PSY (Phytoene Synthase)“. Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari bimbingan, bantuan dan dukungan dari berbagai pihak Oleh karena itu penulis mengucapkan terima kasih kepada : 1. Prof. Dr. H. Mudjia Rahardjo, M.Si selaku Rektor Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang. 2. Dr. drh. Hj. Bayyinatul Muchtaromah, M.Si. selaku Dekan Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang. 3. Dr. Evika Sandi Savitri, M.P. selaku Ketua Jurusan Biologi sekaligus dosen pembimbing I yang telah banyak memberikan pelajaran dan saran pada penelitian ini. 4. Andik Wijayanto, M.Si selaku dosen pembimbing II yang telah sabar memberikan bimbingan, pengarahan, dan saran dalam pembuatan skripsi ini. 5. Kholifah Holil, M.Si dan Ruri Siti Resmisari, M.Si yang telah memberikan pengarahan dan saran dalam pembuatan skripsi ini. viii
6. Dwi Suheriyanto, M.P selaku dosen wali yang telah memberikan banyak nasehat. 7. Seluruh dosen, staf administrasi dan karyawan jurusan Biologi yang telah membantu dalam pembuatan skripsi ini. 8. Aba Alil Wafa (alm.) dan Umi Uswatun Hasanah yang telah memberikan dukungan dan do’a serta mendorong penullis untuk tetap semangat dalam menyelesaikan skripsi ini. 9. Adik Bela Salsabila dan Mubin Muqorrobin yang selalu memberikan semangat dalam menyelesaikan skripsi ini. 10. Ibu Karsinah dan Pak Rebin serta para peneliti di Kebun Percobaan Mangga Cukurgondang yang telah memberikan dukungan dan bantuan untuk pembuatan skripsi ini. 11. Teman-teman seperjuangan di Laboratorium Biologi Molekuler dan Genetika : Luluk, Mar’ah, Nana, dan Fitrah yang telah memberikan bantuan dan saran dalam penelitian. 12. Teman-Teman Biologi 2010 yang telah memberikan pengalaman berharga selama menempuh kuliah. Penulis berharap semoga skripsi ini bermanfaat dalam menambah pengetahuan khususnya dalam bidang Biologi. Harapan lain adalah skripsi ini dapat menjadi inspirasi untuk penelitian selanjutnya, khususnya dalam penerapan bidang biologi molekuler untuk pemuliaan tanaman. Wassalamualaikum Warahmatullahi Wabarokatuh. Malang, 16 Januari 2015 Penulis ix
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ......................................................................................
i
HALAMAN PERSETUJUAN ......................................................................
ii
HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................
iii
MOTTO ..........................................................................................................
iv
PERSEMBAHAN ...........................................................................................
v
PERNYATAAN ORISINALITAS PENELITIAN ......................................
vii
KATA PENGANTAR ....................................................................................
viii
DAFTAR ISI ...................................................................................................
x
DAFTAR TABEL ..........................................................................................
xiii
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................
xiv
DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................
xv
ABSTRAK ......................................................................................................
xvi
ABSTRACT ......................................................................................................
xvii
ملخص البحث.......................................................................................... xviii BAB I. PENDAHULUAN .............................................................................
1
1.1 Latar Belakang ................................................................................
1
1.2 Rumusan Masalah ...........................................................................
7
1.3 Tujuan Penelitian ............................................................................
7
1.4 Manfaat Penelitian ..........................................................................
7
1.5 Batasan Masalah ..............................................................................
8
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ...................................................................
9
2.1 Deskripsi Tanaman Mangga (Mangifera indica L.) .......................
9
2.1.1 Morfologi Tanaman Mangga ..................................................
7
2.1.2 Taksonomi Tanaman Mangga ................................................ x
12
2.1.3 Kandungan Karotenoid Buah Mangga ..................................
12
2.2 Beta Karoten .....................................................................................
15
2.2.1 Deskripsi Beta Karoten...........................................................
15
2.2.2 Fungsi Biologis Beta Karoten.................................................
16
2.2.3 Biosintesis Beta Karoten ........................................................
18
2.2.3.1 Biosintesis Prekusor Beta Karoten .............................
18
2.2.3.2 Biosintesis Beta Karoten ............................................
19
2.2.3.3 Penyimpanan Beta Karoten ........................................
20
2.2.3.4 Gen-gen yang Berperan dalam Biosintesis Beta Karoten .........................................................................
21
2.2.3.5 Regulasi Biosintesis Beta Karoten .............................
23
2.3 Marka Molekuler .............................................................................
24
2.3.1 Pengertian dan Macam-macam Marka Molekuler .................
24
2.3.2 RAPD .....................................................................................
25
2.3.3 Penggunaan Marka Molekuler untuk Pemuliaan Tanaman ....
26
2.3.3.1 MAS (Marker Assisted Selection)..............................
27
2.4 Desain Primer ..................................................................................
28
2.5 Analisis Variasi Genetik dari Marka Molekuler..............................
30
BAB III. METODE PENELITIAN ..............................................................
31
3.1 Rancangan Penelitian.......................................................................
31
3.2 Waktu dan Tempat ...........................................................................
31
3.3 Alat dan Bahan ...............................................................................
32
3.3.1 Alat ..........................................................................................
32
3.3.2 Bahan .......................................................................................
32
3.4 Prosedur Kerja .................................................................................
33
3.4.1 Pengambilan dan Persiapan Sampel Daun .............................
33
3.4.2 Isolasi DNA Genomik Mangga ..............................................
33
3.4.3 Repurifikasi DNA ...................................................................
34
3.4.4 Uji Kemurnian DNA secara Kualitatif dan Kuantitatif ..........
35
xi
3.4.5 Desain Primer .........................................................................
35
3.4.6 Amplifikasi DNA ...................................................................
36
3.4.6.1 Amplifikasi DNA Berdasarkan RAPD ......................
36
3.4.6.1 Amplifikasi Gen PSY.................................................
37
3.4.7 Elektroforesis DNA Hasil PCR .............................................
38
3.4.8 Analisis Data .........................................................................
38
3.4.8.1 Analisis Variasi Genetik Berdasarkan RAPD ............
38
3.4.8.2 Analisis Data Hasil Amplifikasi Gen Psy ..................
38
3.5 Kerangka Konsep Penelitian............................................................
39
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .....................................................
40
4.1 Ekstraksi DNA................................................................................
41
4.2 Amplifikasi DNA Berdasarkan RAPD (Random Amplified Polimorphic DNA) ............................................................................
45
4.3 Analisis Variasi Genetik Mangga Berdasarkan RAPD ....................
51
4.4 Hubungan Kekerabatan Mangga Berdasarkan Hasil Amplifikasi dengan Teknik RAPD ......................................................................
53
4.5 Amplifikasi Gen PSY dengan Menggunakan Primer 1 ...................
58
4.6 Amplifikasi Gen PSY dengan Menggunakan Primer 2 ...................
69
BAB V. PENUTUP .........................................................................................
65
5.1 Kesimpulan .......................................................................................
65
5.2 Saran ................................................................................................
65
DAFTAR PUSTAKA .....................................................................................
67
LAMPIRAN-LAMPIRAN ............................................................................
75
xii
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Kandungan Beta Karoten dalam Buah Mangga ............................
13
Tabel 3.2 Daftar sampel varietas mangga yang digunakan ...........................
31
Tabel 3.3 Sekuen primer RAPD yang digunakan .........................................
33
Tabel 3.4 Ketentuan desain primer................................................................
35
Tabel 3.5 Hasil sekuen basa primer yang telah didesain ...............................
36
Tabel 3.6 Komponen PCR dalam satu tabung untuk amplifikasi dengan primer RAPD.................................................................................
36
Tabel 3.7 Komponen PCR dalam satu tabung untuk amplifikasi gen PSY ..
37
Tabel 4.8 Pengukuran konsentrasi dan kemurnian DNA hasil ekstraksi ......
42
Tabel 4.9 Pengukuran konsentrasi dan kemurnian DNA hasil repurifikasi ..
44
Tabel 4.10 Derajat polimorfisme pita hasil amplifikasi dengan primer RAPD ............................................................................................
50
Tabel 4.11 Statistik variasi genetik untuk semua lokus yang teramplifikasi ..
51
Tabel 4.12 Jarak genetik empat varietas mangga ............................................
52
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1
Pohon Mangga di Kebun Percobaan Mangga Cukurgondang, Pasuruan ...................................................................................
9
Gambar 2.2
Daun mangga ...............................................................................
10
Gambar 2.3
Beberapa jenis buah mangga ....................................................... 11
Gambar 2.4
Struktur karotenoid ...................................................................... 16
Gambar 2.5
Jalur biosintesis karotenoid tanaman ........................................
19
Gambar 3.6
Kerangka Konsep Penelitian ....................................................
37
Gambar 4.7
Hasil elektroforesis DNA genom mangga ................................
41
Gambar 4.8
Hasil elektroforesis repurifikasi DNA ......................................
43
Gambar 4.9
Hasil amplifikasi DNA dengan primer OPA 12 .......................
45
Gambar 4.10 Hasil amplifikasi DNA dengan primer OPA 13 .......................
46
Gambar 4.11 Hasil amplifikasi DNA dengan primer OPL 17 .......................
47
Gambar 4.12 Zimogram pita hasil amplifikasi RAPD. ..................................
48
Gambar 4.13
Dendogram hubungan kekerabatan mangga berdasarkan RAPD .......................................................................................
53
Gambar 4.14 Hasil amplifikasi gen PSY dengan menggunakan primer 1 .....
58
Gambar 4.15 Hasil amplifikasi gen PSY dengan menggunakan primer 2 .....
60
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1.
Skema Kerja .............................................................................
75
Lampiran 2.
Deskripsi Sampel Varietas Mangga .........................................
79
Lampiran 3.
Dokumentasi Penelitian ............................................................
83
Lampiran 4.
Sekuen lengkap Gen PSY Mangga Jinhuang ...........................
84
Lampiran 5.
Desain Primer Conserve ...........................................................
85
xv
ABSTRAK Qubais, Asifatul. 2015. Analisis Variasi Genetik Beberapa Varietas Mangga
(Mangifera indica L.) Berdasarkan RAPD (Random Amplified Polymorphic Dna) dan Penanda Molekuler Gen PSY (Phytoene Synthase). Skripsi. Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang. Pembimbing Biologi : Evika Sandi Savitri. Pembimbing Agama : Andik Wijayanto. Kata Kunci : variasi genetik mangga (Mangifera indica L.), RAPD, gen PSY, warna kulit buah, beta karoten Buah mangga merupakan buah musiman yang penting karena merupakan buah komersial yang digemari oleh masyarakat. Karakterisasi molekuler dalam pemuliaan tanaman perlu dilakukan untuk menyeleksi tanaman mangga berdasarkan RAPD dan penanda molekuler gen PSY. Marka RAPD sering digunakan pada tahap awal penyeleksian tanaman karena relatif cepat dan murah. Namun, penggunaan RAPD berdasarkan kandungan beta karoten buah masih belum diteliti. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui variasi genetik beberapa varietas mangga berdasarkan RAPD dan penanda molekuler gen PSY. Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah 4 varietas mangga yang masing-masing mewakili warna kulit buah yang berbeda, yaitu Garifta Merah, Gedong Gincu, Podang Kuning dan Arumanis. Primer RAPD yang digunakan adalah OPA 12, OPA 13 dan OPL 17. Amplifikasi gen PSY menggunakan 2 primer yang didesain dari sekuen gen PSY mangga Jinhuang dari Cina. Tahap penelitian meliputi ekstraksi DNA, amplifikasi DNA, analisa variasi genetik dengan software Popgen 1.32 dan pembuatan dendogram dengan NTSys 2.01. Parameter data dalam penelitian ini adalah konsentrasi dan kemurnian DNA genom, jumlah dan panjang pita hasil amplifikasi DNA, persentase lokus polimorfik, jarak genetik dan dendogram hubungan kekerabatan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa DNA genom hasil isolasi memiliki konsentrasi DNA antara 115,46 sampai 342, 23 ng/µl dan kemurniannya yaitu antara 1,5558 sampai 2,0702. Amplifikasi DNA dengan primer RAPD menghasilkan 23 pita dengan panjang antara 180 sampai 2500 bp, diantaranya 21 pita polimorfik dengan persentase 91,3%. Nilai jarak genetik terdekat adalah 0,3629 yaitu antara Garifta Merah dengan Gedong Gincu dan Garifta Merah dengan Podang Kuning, sedangkan nilai jarak genetik terjauh adalah Garifta Merah dengan Arumanis yaitu 1,3437. Dendogram hubungan kekerabatan menunjukkan bahwa Garifta Merah berkerabat dekat dengan Gedong Gincu dengan koefisien kemiripan 0,73. Podang Kuning memiliki koefisien kemiripan 0,64 dengan kelompok Garifta Merah dan Gedong Gincu. Sedangkan Arumanis memiliki koefisien kemiripan 0,36 dengan varietas lainnya. Sedangkan, hasil amplifikasi gen PSY hanya menghasilkan pita pada sampel Garifta Merah saja dengan ukuran 400 bp.
xvi
ABSTRACT Qubais, Asifatul. 2014. Genetic Diversity of Some Mangoes (Mangifera indica L.) Based On RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) and PSY (Pgytoene Synthase) Gene Molecular Marker. Thesis. Department of Biology, Faculty of Science and Technology of the State Islamic University of Maulana Malik Ibrahim Malang. Biology Supervisor: Dr.EvikaSandi Savitri, M.P. Religion Supervisor: Andik Wijayanto, M.Si. Keywords : genetic diversity of mangoes (Mangifera indica L.), RAPD, PSY gene, fruit colour, beta carroten. Mango fruit is an important seasonal fruit as a commercial fruit favored by the people. Molecular characterization in plant breeding is done for selecting plants and mango based on RAPD and PSY gene molecular marker. RAPD markers are often used in the early stages of selecting the plant because it is relatively fast and inexpensive. However, the use of RAPD based on beta carroten contain of the fruit skin has not been studied. Therefore, this study aims to determine the genetic variation of several varieties of mango based on RAPD and molecular markers PSY gene. The sample used in this study are 4 varieties of mangoes, each representing a different fruit skin color, Garifta Merah, Gedong Gincu, Podang Kuning and Arumanis. RAPD primers used were OPA 12, OPA 13 and OPL 17. PSY gene amplification using two primers designed from mango Jinhuang’s PSY gene sequences from China. Methode of research include DNA extraction, amplification of DNA, the genetic variation analysis with software Popgen 1.32 and manufacture dendogram with NTSYS 2.01. Parameter data in this study is the concentration and purity of genomic DNA, the number and length of band results of DNA amplification, the percentage of polymorphic loci, genetic distance and dendogram. The results showed that the genomic DNA isolated DNA concentrations between 115.46 to 342, 23 ng / ml and purity of between 1.5558 to 2.0702. DNA amplification by RAPD produced 23 band with length between 180 to 2500 bp, including 21 polymorphic band with percentage 91.3%. The closest genetic distance value is 0.3629 which is between Garifta Merah with Gedong Gincu and Garifta Merah with Podang Kuning, while the value of genetic distance is the farthest Garifta Merah with Arumanis is 1.3437. Dendogram indicate that the Garifta Merah closely related to Gedong Gincu with a similarity coefficient of 0.73. Yellow Kuning has similarity coefficient of 0.64 with Garifta Merah group and Gedong Gincu. While Arumanis has similarity coefficient of 0.36 with the other varieties. Meanwhile, the result of PSY gene amplification produces only one band on Garifta Merah with a size of 400 bp only.
xvii
ملخص البحث القبيس ,عاصفة 5102 .حتليل أنواع الورايث\اجلني من عدة أصناف املاجنو الهندية اعامتدا عىل طريقة ( RAPDأمبليفياكيس العشوايئ لتعدد أشاكل امحلض النووي الريبوزي املنقوص الكسجني) وعالمة اجلزييئ ) (molekulerمن اجلني ) (PSYالفيتون س ينثاسا. أطروحة .قسم عمل احلياة .لكية العلوم والتكنولوجيا اجلامعة الإسالمية احلكومية مولان ماكل اإبراهمي مالجن .املرشفة يف قسم عمل احلياة : اإيفياك ساندي سافيرتي واملرشف يف قسم الإساليم :أنديك وجيااينطا .املرشف البيولوجيا Dr.Evika Sandi Savitri, M.P. : سافيرتي ،عضو الربملان ادلين املرشف Andik Wijayanto, M.Si. : مفاتيح اللكامت :أنواع الورايث\اجلني من املاجنو الهندية ، RAPD،اجلني\الورايث ،PSYولون جدل الفاكهة ,بيتا كاروتين
املاجنو يه من اإحدى الفواكه اليت لها دور هم ّم لن لها قمية اقتصادية مع جابب ءاخر أن الناس يرغبون فهيا .والاهامتم هبذا النبت لتكون مثرته أذل طعام ولون جدلها أحىل منظرا حتتاج اإىل مدة طويةل ،ويقتيض ذكل اإىل اختيار طريق مناسب يصيب كثريا من الهداف. وتشخيص اجلزء ( (moleculeيؤدّي اإىل ترسيع معلية انتقاء النبات فال يتاج اإىل انتظار أوان اإمثار الشرر ملعرفة وص الفاكهة. فطريقة RAPDتس تخدم بكرثة يف أوائل املراحل لنتقاء النبات ،لن ابس تخداهما تكون النتيجة أرسع واللكفة أقل .ولكن اس تعامل طريقة RAPDلنتقاء النبت اعامتدا عىل الفاكهة بيتا كاروتين مل يكن حبث فيه قبل .مث اس تعامل عالمة اجلزييئ )(molekuler العام يف املرحةل الوىل ل بدّ أن يعتىن هبا ابس تعامل عالمة اجلزييئ ) (molekulerاخلاص جلني لون الفاكهة بعده .وهذه اجلني يه اجلني لبيتا الاكروتني اليت ِّّ صمت من اجلني الفيتون س ينثاسا ) .(PSYوالهدف من هذا البحث هو معرفة أنواع الورايث من عدة أصناف املاجنو اعامتدا عىل طريقة RAPDوعالمة اجلزييئ ) (molekulerمن اجلني الفيتون س ينثاسا ).(PSY والع ّينة اليت تس تعمل يف هذا البحث تكون من أربع أصناف املاجنو ذوات اللوان اخملتلفة وهن جاريفتا امحلراء وجيدوجن جينرو وبوداجن الصفراء وأرومانيس .وأساس RAPDاملس تعمل هو .OPL 17 ،OPA 13 ،OPA 12أمبليفياكيس اجلني PSYيس تعمل ابلساسني املص َّممني من تسلسل اجلني PSYمن ماجنو جيهنواج من الصني .ومرحةل البحث حتوي اس تخالص امحلض النووي الريبوزي املنقوص الكسجني ) ،(DNAوأمبليفياكيس ) (DNAوحتليل أنواع الورايث سسوفت وير بويجني 1.35وصناعة ديندوغرام ب .NTSys 2.01ومتثابتة البياانت يف هذا البحث يه كثافة وصفاء DNAجينوم ،عدد وطول السلسةل املنتجة من أمبليفياكيس ، DNAنس بة موضع صبغوي لتعدد الشاكل ) ، (lokus polimorfikمسافة اجلني وديندوغرام لعالقة الرسة. ونتيجة رحالن كهرابيئ من DNAجينوم بعد اإعادة التطهري تدل عىل أن كثافة سلسةل DNAيف لك ع ّينة تقارب كثافة DNA اجلديد ويه ما بني 115,46و .(ng/µl) 342,23وصفاء DNAجينوم ما بني 1,5558و .2,0702وأمبليفياكيس DNAمع أساس RAPDينتج منه 53سلسةل بطول ما بني 081اإىل (bp) 5211ومن مجةل هذه السلسالت 50سلسةل متعددة الشاكل ونسبهتا .91,3% ونتيجة مسافة اجلني القرب يه 0,3629ويه ما بني جاريفتا امحلراء مع جيدوجن جينرو وجاريفتا امحلراء مع بوداجن الصفراء ،أما نتيجة مسافة اجلني البعد ويه ما بني جاريفتا امحلراء مع أرومانيس فهي .1,3437وديندوغرام لعالقة الرسة تدل عىل أن جاريفتا امحلراء تقرب جيدوجن جينرو من حيث الرسة مبعامل الش به .0,73وبوداجن الصفراء تقرب جاريفتا امحلراء وجيدوجن جينرو من حيث الرسة مبعامل الش به .0,64وأما أرومانيس تقرب ا ُلخر من حيث الرسة مبعامل الش به .0,36 وهذه النتاجئ تتقسم عىل حسب اللوان .وأساس RAPDاملس تعمل يف هذا البحث يصلح لتسهيل انتقاء املاجنو يف املرحةل الوىل. وأمبليفياكيس اجلني PSYتتودل منه السلسةل يف ع ّينة جاريفتا امحلراء دون غريها بطول . (bp) 400وطول السلسةل املذكور ل يوافق الصناعة املص َّممة الساس ية ذلا مل يثبت أن تكل املنتجة من اجلني .PSYوحتليل أنواع الورايث اعامتدا عىل تسلسل اجلني PSYل يتمكّل معه البحث لن سلسةل أمبيليفاكيس ل تظهر يف الع ّينات الثالث.
xviii
