ANALISIS KERAGAMAN PROTEIN DAN FITOKIMIA TANAMAN PEGAGAN (Centella asiatica) HASIL PERBANYAKAN IN VITRO
PUTRI KARINA LAILANI
PROGRAM STUDI BIOKIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2008
ANALISIS KERAGAMAN PROTEIN DAN FITOKIMIA TANAMAN PEGAGAN (Centella asiatica) HASIL PERBANYAKAN IN VITRO
PUTRI KARINA LAILANI
Skripsi sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains pada Program Studi Biokimia
PROGRAM STUDI BIOKIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2008
ABSTRAK PUTRI KARINA LAILANI. Analisis Keragaman Protein dan Fitokimia Tanaman Pegagan (Centella asiatica) Hasil Perbanyakan in vitro. Dibimbing oleh EDY DJAUHARI PURWAKUSUMAH dan NATALINI NOVA KRISTINA. Pegagan merupakan tanaman gulma yang digunakan dalam industri farmasi, kosmetik, makanan dan minuman. Pegagan diambil dari alam untuk memenuhi kebutuhan industri sehingga dapat berdampak pada kepunahan. Salah satu cara yang diharapkan dapat mengatasi masalah ini adalah bioteknologi khususnya teknik kultur jaringan dan rekayasa genetika. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan profil senyawa pegagan hasil in vitro dengan pegagan yang di lapang. Sisi keragaman protein dibandingkan dengan metode elektroforesis SDS PAGE, sedangkan kandungan senyawa metabolit sekunder dibandingkan dengan uji fitokimia. Hasil penelitian menunjukkan penurunan daya multiplikasi eksplan pegagan periode 5 tahun. Eksplan dapat berakar pada semua media perakaran dengan media terbaik MS + IAA 0,1 mg/L. Hasil uji lanjutan fitokimia dan pola pita protein pegagan hasil in vitro dan lapang terlihat adanya perbedaan. Hasil uji fitokimia terlihat kandungan metabolit sekunder yakni tanin, saponin, alkaloid, dan triterpenoid pegagan in vitro lebih rendah bila dibandingkan pegagan lapang. Steroid ditemukan pada pegagan hasil in vitro yang tidak ada pada pegagan lapang. Konsentrasi protein total pada pegagan in vitro lebih tinggi dibanding dengan lapang karena penambahan unsur-unsur hara pada media. Pola pita protein pegagan hasil in vitro terlihat lebih tebal daripada yang di lapang. Hasil elektroforesis menunjukkan adanya dua buah pita protein yang dominan masingmasing dengan bobot molekul 53,7 kDa dan 31 kDa.
Judul Skripsi : Analisis keragaman Protein dan Fitokimia Tanaman Pegagan (Centella asiatica) Hasil Perbanyakan In Vitro Nama : Putri Karina Lailani NIM : G44103044
Disetujui
Drs. Edy Djauhari P. K, M.Si Ketua
Dra. Natalini Nova. K Anggota
Diketahui
Dr. Drh.Hasim,DEA Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Tanggal lulus:
PRAKATA Segala puji penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT karena atas rahmat dan hidayah-Nya, kegiatan penelitian dapat diselesaikan. Penelitian berjudul Analisis Keragaman Protein dan Fitokimia Tanaman Pegagan (Centella asiatica) Hasil Perbanyakan in vitro ini dilaksanakan mulai bulan Maret hingga Oktober 2007, bertempat di Balai Tanaman Obat dan Aromatik dan Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan Indonesia pada Laboratorium Biologi Molekular dan Rekayasa Genetika. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Drs. Edy Djauhari P.K, M.Si selaku pembimbing utama, Dra. Natalini Nova.K. selaku pembimbing kedua, dan staf di laboratorium yang telah membantu selama penelitian dan penyusunan skripsi. Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada kedua orang tua, Ni Putu Ayu, Wisnu Herlambang, Gita Agustrina, Metty Lasmayanti, Ashfa dan temanteman semuanya atas dukungannya selama ini. Akhir kata, penulis berharap skripsi ini dapat berguna bagi penulis sendiri maupun semua pihak yang membutuhkannya demi kemajuan ilmu pengetahuan.
Bogor, Maret 2008
Putri Karina Lailani
RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Surabaya pada tanggal 21 Januari 1986 dari pasangan Muhammad Nawir dan Niniek Soedjarwati. Penulis merupakan anak pertama dari tiga bersaudara. Tahun 2003 penulis lulus dari SMU Islam Al-azhar Kelapa Gading dan pada tahun yang sama lulus seleksi masuk IPB melalui Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI) pada program studi Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Selama perkuliahan penulis pernah mengikuti lembaga kemahasiswaan staf Departemen Wirausaha Himpunan Mahasiswa Kimia (IMASIKA) periode 2004-2005, panitia Masa perkenalan Departemen Biokimia (MPD) 2006. Penulis melakukan praktek kerja lapang di Balai Tanaman Obat dan Aromatik dari bulan Juli-September 2006 dengan judul Pengaruh Konsentrasi Sukrosa Terhadap Pertumbuhan Tanaman Sambung Nyawa (Gynura Procumbens) Dengan Teknik Kultur Jaringan.
DAFTAR ISI Halaman DAFTAR TABEL .....................................................................................
ix
DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................
x
PENDAHULUAN ....................................................................................
1
TINJAUAN PUSTAKA Tanaman Pegagan (Centella asiatica) ................................................ Kultur Jaringan Tanaman .................................................................... Aplikasi Kultur Jaringan Pada Perubahan Tanaman ........................... Elektroforesis SDS PAGE ...................................................................
1 2 3 3
BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat .................................................................................... Metode Penelitian ............................................................................... Pemilihan Eksplan, Inisiasi Akar, dan Aklimatisasi ........................... Uji Fitokimia ....................................................................................... Ekstraksi Protein Daun Pegagan ......................................................... Penentuan Kadar Protein Hasil Ekstraksi dengan Metode Lowry ...... Analisis Protein dengan Elektroforesis SDS PAGE ...........................
4 4 4 5 5 5 5
HASIL DAN PEMBAHASAN Pemilihan Eksplan dan Inisiasi Akar Pegagan .................................... Aklimatisasi ........................................................................................ Analisis Fitokimia ............................................................................... Konsentrasi Protein Total dan Elektroforesis SDS PAGE .................
6 7 8 8
SIMPULAN DAN SARAN .....................................................................
9
DAFTAR PUSTAKA ...............................................................................
10
LAMPIRAN ..............................................................................................
12
DAFTAR TABEL Halaman 1 Penampilan akar pegagan dua bulan setelah kultur pada media auksin ... 7 2 Pertumbuhan tanaman setelah aklimatisasi di rumah kaca pada pupuk kandang dan sekam 8 minggu setelah tanam ........................................... 7 3 Hasil uji fitokimia tanaman pegagan hasil in vitro dan dari lapang ......... 8 4 Konsentrasi protein total pegagan hasil in vitro dan dari lapang .............. 9
DAFTAR LAMPIRAN Halaman 1 Proses umum penelitian ..........................................................................
13
2 Pembuatan bufer ekstraksi protein ..........................................................
14
3 Pengukuran kadar protein total (metode Lowry) ....................................
15
4 Larutan standar protein untuk metode Lowry ........................................
16
5 Pembuatan gel SDS PAGE .....................................................................
17
6 Pewarnaan gel SDS PAGE .....................................................................
18
7 Pembuatan kurva standar Bovine Serum Albumin .................................
19
8 Nilai absorbansi dan konsentrasi protein sampel pegagan .....................
20
9 Perolehan nilai konsentrasi sebenarnya ..................................................
20
10 Volume sampel dan buffer yang dimasukkan ke sumur pada konsentrasi tertentu .................................................................................................. 21 11 Perhitungan BM pita protein pada elektroforesis SDS PAGE ..............
22
12 Gambar tanaman pegagan hasil in vitro ketika diberi perlakuan perakaran.................................................................................................
23
