Debreceni Egyetem
Témakörök
Orvos- és Egészségtudományi Centrum Nukleáris Medicina Intézet
PET radiogyógyszerek minőségellenőrzése
1.
A minőségellenőrzés szerepe a helyes gyógyszergyártási gyakorlatban
2.
A 18F-[FDG] minőségellenőrző vizsgálatai
3.
A 11C-Metionin minőségellenőrzése
4.
Műszerek kvalifikálása, vizsgálati módszerek validálása
Dr. Jószai István Vegyész, minőségellenőrző laborvezető
A radiogyógyszerkészítés szabályai, aktivitás-számítás Radiogyógyszerészet gyakorlat 2012. november 15.
2012
2
A minőségellenőrzés szerepe a helyes gyógyszergyártási gyakorlatban 1. Milyen PET radiogyógyszereket ismer? 2. Mo.-on melyek használatosak a humán diagnosztikában ? 1. Pl.: 18F-FDG, 11C-Metionin, 11C-acetát, 18F-FMISO, [11C]PIB 2. 18F-FDG, 11C-Metionin, 11C-acetát 2012
3
2012
4
GMP (Good Manufacturing Practice), helyes gyógyszergyártási gyakorlat
Gyógyszergyártás Magyarországon bármilyen gyógyszergyártási tevékenység (ideértve a gyógyszer gyártását,
A helyes gyártási gyakorlat a gyógyszeripari minőségbiztosításnak az a része,
felszabadítását, minőségellenőrző vizsgálatát) csak a Gyógyszerészeti és Egészségügyi
amelynek révén biztosítható, hogy a gyógyszert úgy gyártsák és ellenőrizzék, hogy az
Minőség- és Szervezetfejlesztési Intézet Országos Gyógyszerészeti Intézet (GYEMSZI-
megfeleljen az előírt követelményeknek, a forgalomba hozatali engedélyben
OGYI) által kibocsátott, érvényes gyógyszergyártási engedély birtokában végezhető. A
foglaltaknak és alkalmas legyen arra a célra, amire engedélyezték.
hatóanyagok
gyártását,
csomagolását,
gyógyszerkészítmények
gyártóhelynek az érvényes törvényeknek, rendeleteknek és GMP irányelveknek megfelelően kell működnie. A minőséggel kapcsolatos ügyek megbízható megoldására olyan egységesen szervezett A gyógyszergyártási engedély jogosultjának biztosítania kell, hogy az általa gyártott termékek megfelelőek legyenek arra a célra, amire szánták őket, és hogy a forgalomba hozatali engedély követelményeinek eleget tegyenek. Ezen kívül, ezek a termékek nem veszélyeztethetik a betegeket azzal, hogy nem kielégítő a biztonságuk, a
és hibátlanul működő minőségbiztosítási rendszerre és minőségellenőrzésre van szükség, amelybe a GMP - vagyis a Helyes Gyógyszergyártási Gyakorlat - nemzetközi szabályai is beépültek.
minőségük vagy a hatékonyságuk. A Helyes Gyógyszergyártási Gyakorlat (GMP) irányelvei. A hatályos európai irányelv 2012
(Eudralex Volume IV) fordítása 3. verzió, 2008. július 1., Országos Gyógyszerészeti Intézet. 5
A Nukleáris Medicina Intézet gyógyszerésze beleegyezésével gyártható-e eddig nem törzskönyvezett jelzett vegyület humán célra?
A Helyes Gyógyszergyártási Gyakorlat (GMP) irányelvei. A hatályos európai irányelv 2012
Magyarországon ki végezhet gyógyszergyártást?
Gyógyszergyártási engedéllyel rendelkező gyártóhely!!!
NEM!!!
2012
(Eudralex Volume IV) fordítása 3. verzió, 2008. július 1., Országos Gyógyszerészeti Intézet. 6
7
2012
8
A minőségellenőrzés helye a helyes gyógyszergyártási gyakorlatban
MINŐSÉG-ELLENŐRZÉS
A minőség-ellenőrzés által kiadott eredményeket felülbírálhatja a gyártás vezetője? HELYES GYÓGYSZERGYÁRTÁSI GYAKORLAT
NEM!!! GYÓGYSZER-
MINŐSÉGBIZTOSÍTÁS
ELŐÁLLÍTÁS
2012
9
2012
A minőségellenőrzés szerepe a gyógyszergyártásban
10
A minőségellenőrzés felépítése
CÉL A MINŐSÉG PONTOS MEGÁLLAPÍTÁSA
Rendszeralkalmasság
FELADAT MINTAVÉTEL, MINTAELŐKÉSZÍTÉS VIZSGÁLAT
Minőségellenőrzés
DOKUMENTÁCIÓ MÓDSZERFEJLESZTÉS KVALIFIKÁLÁS ÉS VALIDÁLÁS ELLENMINTÁK TÁROLÁSA
Műszerek és vizsgálati módszerek minősítése kvalifikálás és validálás
STABILITÁS VIZSGÁLAT
ALAPKÖVETELMÉNYEK MEGFELELŐ FELSZERELÉS KÉPZETT SZEMÉLYZET
2012
JÓVÁHAGYOTT ELJÁRÁSOK A MINTAVÉTELHEZ, A VIZSGÁLATHOZ 11
2012
12
Minőségellenőrző labor Mire van szükség a minőség-ellenőrzés kialakításakor?
1. Megfelelő berendezés 2. Képzett személyzet 3. Jóváhagyott eljárások 2012
13
2012
Bejárat
14
Anyagátadó zsilip
Tisztatérből (C) 2012
15
2012
16
Tisztatéri követelmények a részecskeszám tekintetében
Izotópmunkahely
Mintaelőkészítés
2012
A Helyes Gyógyszergyártási Gyakorlat (GMP) irányelvei. A hatályos európai irányelv 17 (Eudralex Volume IV) fordítása 3. verzió, 2008. július 1., Országos Gyógyszerészeti Intézet.
2012
18
A 18F-[FDG] gyártásából származó szennyező anyagok A cO A cO
18F-[FDG]
minőségellenőrzés
O Ac O Tf O
O Ac
[1 8F] F -
O
O Ac A cO A cO
18
O T f= O S O 2 C F 3
O Ac A cO A cO
18
F
O Ac
g lu cose
18 F
19
2012
LÉP ÉSEI
F
OH
ÉS AZ OSZTÓBERENDEZÉS
CIKLOTRONNAL
TARGETF ÓLIA
18
ELŐÁLLÍTÁSÁNAK
A SZINTÉZISPANEL
IZOTÓP
[ 16 O]H 2O
A 18 F-[F DG]
O
HO HO
ELŐÁLLÍTÁS
2012
O Ac
OH
HCl
O
F
A
18 F-[F DG]
SZINTÉZISE
KÉSZ TERMÉK
TISZTÍTÁSA
ACETONITRIL
13 N
ETANOL 48
V
ACETON
KRYP TOFIX 2.2.2. 18
F
Ac-18 F-[F DG]
pH VIZUÁLIS ELLENŐRZÉS
20
Hatóanyag azonosítás és radiokémiai tisztaságvizsgálat normál fázisú HPLC módszerrel Szennyező: Ac-18F-[FDG]
Hatóanyag: 18F-[FDG]
CH 2OAc O
H
OAc
H OAc
A
18F-FDG
minőség-ellenőrzése során milyen minőségi paramétereket kell vizsgálnunk?
H
HPLC rendszer:
1. Radiokémiai tisztaság 2. Oldószermaradvány 3. Kriptofix tartalom 4. pH 5. Radionuklidos tisztaság 6. Vizuális ellenőrzés 2012
OAc
21
H 18
H
F
Kromatográfiás körülmények:
HPLC pumpa
JASCO PU-2080
Injektor
Rheodyne 7725i, 20µl loop
Gázmentesítő egység
JASCO-DG-2080-54
25ºC
Kromatográfiás oszlop
LiChrocart LiChrosper 100 NH2, 250×4,5 mm 5µm
Injektált térfogat: 20 µ l
RI detektor
Knauer K-2301
Radioaktivitás (RA) detektor
ATOMKI
Mintaelőkészítés:
Interfész
LC-Net II/ADC
1:1 standard oldat:18 F- [FDG] minta
2012 Kiértékelő szoftver
ChromPass Ver. 1.7.403.
2,5 ml/min,izokratikus elúció.
Eluens: 95:5 V/V% acetonitril:víz elegy Standard:
19 F-
[FDG]
22
Hatóanyag azonosítás és radiokémiai tisztaság vizsgálat kromatogramja Radioaktivitás detektor
DETEKTORVÁLASZ, mV
200
Törésmutató detektor 18F-[FDG]
160 RADIOKÉMIAI TISZTASÁG: % TERÜLET > 96%
120
A 18F-FDG HPLC vizsgálatából milyen információt nyerünk?
HATÓANYAG AZONOSSÁG: ∆ IDŐ = ±5%
80
Ac-18F-[FDG]
40
19F-[FDG]
1. Radiokémiai tisztaság 2. Azonosítás
0 0
1
2
3
4
5
6
7
8
IDŐ, perc 2012
23
2012
24
HPLC rendszer
AUTOSAMPLER
RI DETEKTOR
RA DETEKTOR
PUMPA
A 18F-FDG HPLC vizsgálata során milyen detektort alkalmazunk a radioaktív komponensek kimutatására?
KOLONNA INTERFACE BOX
SOLVENT ORGANIZER
1. Radioaktivitás detektor DEGASSER 2012
25
UV DETEKTOR
Radiokémiai tisztaság vizsgálat radio-TLC módszerrel
Hatóanyag: 18F-[FDG]
Szennyező: Ac-18F-[FDG]
2012
26
A radiokémiai tisztaság vizsgálat radio-TLC kromatogramja 18F
CH 2OAc O
H
OAc
H OAc
OAc H
TLC rendszer:
H 18
RADIOKÉMIAI TISZTASÁG: % TERÜLET > 95%
H
F
Kromatográfiás körülmények:
radio-TLC szkenner
miniGita Star (raytest)5
Silica gel 60F254 típusú kromatográfiás vékonyréteg
GMC béta detektor
Beta Detector GMC (raytest)
Eluens 95:5 V/V% acetonitril:víz elegy
Szoftver
GINA Star TLC (raytest)
Kifejlesztési idő: 45 perc
2012
27
2012
28
Radio-TLC rendszer GMC BETA DETEKTOR
A
18F-FDG
TLC vizsgálata során milyen radioaktív komponenseket tudunk kimutatni?
SZKENNER
1. Szabad 18F 2. 18F-FDG 3. Acetilezett 18F-FDG 2012
29
2012
Oldószermaradványok gázkromatográfiás meghatározása Szennyezők
Megengedett koncentráció (mg/ml)
30
Oldószermaradvány vizsgálat kromatogramja
Mintaelőkészítés: 5 µl Metanol (ISTD) (0,6 g/l)
acetonitril aceton etanol
0,52 6,25 6,25
A gázkromatográf egységei:
+ 95 µl 18F-[FDG] minta
Kromatográfiás körülmények: Kolonna: Porabond U., 25m, 0,32mm, 7 µm. Detektor: FID
Clarus 500 GC FID detektorral NCI 901 Interfész boksz TotalChrom Client/Server and Workstation Software
Injektor hőmérséklete: 250°C Detektor hőmérséklete: 250°C Vivőgáz nyomása: 30 psi Split arány: 15 Levegő: 45 ml/min Hidrogén: 450 ml/min Injektált térfogat: 1 µl Hőmérséklet program: 60°C 1 perc, 2°C/perc 100°C.
2012
Belső standard: metanol
31
2012
32
Clarus 500 gázkromatográf
A 18F-FDG gázkromatográfiás vizsgálata során milyen komponenseket tudunk kimutatni, ehhez milyen detektort és típusú kolonnát kell alkalmazni? 1. Etanol aceton, acetonitril 2. Lángionizációs (FID) detektor 3. Kapilláris kolonna 2012
33
2012
34
A 18F-[FDG] γ-spektruma
γ-spektrometriás vizsgálatok Radionuklidos azonossági azonossági vizsgálat Vizsgálat gyakorisága
511 keV energia csúcs
Hetente
109,7 perc ± 5%
Hetente
2,5E+06 EGYSÉGEK
2,0E+06 Ge félvezető detektor
Radionuklidos tisztaság tisztaság vizsgálat Követelmény
Vizsgálat gyakorisága
Szennyező Hetente radionuklid max 0,1%
511 keV
TÍPUS
GEM 10P4
1,5E+06 Főerősítő, nagyfeszültségű tápegység, előerősítő tápegység
Canberra
Személyi számítógép analizátor kártyával
Canberra
Eu-152
Energiakalibrálás
CPS
Követelmény
1,0E+06
5,0E+05
0,0E+00 0
500
1000
1500
2000
ENERGIA, keV 2012
35
2012
36
Kryptofix 2.2.2 tartalom meghatározása színfoltteszt módszerrel
Kryptofix 2.2.2 tartalom meghatározása színfoltteszt módszerrel
Kryptofix 2.2.2. Követelmény: 2,2 mg/V V – maximálisan felhasznált mennyiség 8 ml 1 FDG készítmény Követelmény
Vizsgálat gyakorisága
<275µg/ml
Minden sarzsból
2 Kryptofix oldat (275µg/ml) 3 Fiziológiás sóoldat
2012
37
2012
38
A 18F-[FDG] minőség-ellenőrzés összesített eredménye Gyártás szám
Gyártás időpont (2007)
Kémhatás (pH) min. 5, max. 8
Rad.kém .tisztaság HPLC, min 96%
Rad.kém .tisztaság TLC min 95%
Oldószer maradék Etanol, max.: 6,25 mg/ml
Oldószer maradék Aceton, max.: 6,25 mg/ml
Oldószer maradék Acetonitril, max.: 0,52 mg/ml
Kriptofix 2.2.2. Koncentráció <275 mg/ml
Radionuklidos tisztaság >99.5 % Felezési idő: 109, 7 perc +5 % (104,2–115,2) perc
2002
08. 07.
6
99, 27
98, 74
<0,035
0, 091
0, 041
<275
>99,5%/113,6 perc
2003
08. 07.
6
98, 07
98, 22
0, 166
0, 544
0, 034
<275
–
2004
08. 08.
6
98, 14
98, 33
1, 258
0, 851
0, 034
<275
–
2005
08. 08.
6
99, 27
98, 34
0, 131
0, 205
0, 042
<275
–
2007
08. 08.
6
99, 30
99, 00
0, 731
0, 269
0, 051
<275
–
2008
08. 09.
7
99, 11
98, 69
1, 034
0, 702
0, 132
<275
–
2009
08. 09.
6
99, 26
98, 67
<0,035
0, 224
0, 034
<275
–
2010
08. 10.
6
99, 08
98, 55
0, 881
0, 795
0, 037
<275
–
2011
08. 10.
6
99, 19
98, 75
0, 104
0, 232
0, 043
<275
–
2012
08. 13.
6
99, 24
98, 79
<0,035
0, 081
0, 054
<275
–
2013
08. 13.
6
99, 33
98, 85
<0,035
0, 105
0, 035
<275
–
2014
08. 14.
7
97, 68
98, 09
1, 187
1, 036
0, 073
<275
–
08. 14.
6
97, 99
97, 10
0, 472
0, 307
0, 084
<275
–
08. 15.
7
99, 22
98, 73
1, 040
0, 116
0, 192
<275
>99,5%/113,6 perc
2015 2016
2012
39
11C-Metionin
H
S
O
11CH
OH NH2
L-Homocisztein
2012
minőségellenőrzés
-HI
3I
11CH 3
S
O OH NH2
L-Metionin
40
Radiokémiai tisztaság
A 11C-Metionin minőségi követelményei
Radiokémiai tisztaság:
Radionuklidos tisztaság:
-
- 511 keV fotocsúcs %-os aránya >99%.
11 C-Metionin
%-os aránya >95%.
HATÓANYAG H
H3[11C]
NH 2
S
Enantiomer tisztaság:
CO2
pH vizsgálat:
- L-11C-Metionin %-os aránya >90%, - D-11C-Metionin %-os aránya <10%. Kémiai tisztaság:
11 C-Metionin
- indikátorpapír: 4,5-8,5.
Egyéb vizsgálat:
- Homocisztein: 2mg/Vml–0,2 mg/ml, - Metionin: 2mg/Vml–0,2 mg/ml.
SZENNYEZİK
- sterilitás, - bakteriális endotoxin.
O
-
NH2
S
Azonosítás: -
H
H3[11C]
radionuklidos: 511 keV, t1/2=19,9-20,9perc, 2012 kémiai: ∆tR=5%.
41
CO2
O
H3[11C]
OH
CO2 O
2012
11 C-Metionin-S-oxid
11
C-Metanol 42
Radiokémiai tisztaság
Kromatográfiás körülmények: Nucleodur C18 Pyramid, 5 µm kromatográfiás oszlop
NH2
S
11C-Metionin-S,S-dioxid
Radiokémiai tisztaság
H
H3[11C]
Kromatográfiás körülmények:
Nucleodur C18 Pyramid, 5 µm kromatográfiás oszlop
11C-METIONIN
Metionin-S,S-dioxid
Eluens KH2 PO4 (pH=3,3)
Eluens KH2 PO4 (pH=3,3)
1 ml/perc
1 ml/perc
Radioaktivitás detektor
Törésmutató detektor
Kromatografálási idı: 10 perc
Kromatografálási idı: 10 perc
Metanol
METIONIN
Metionin-S-oxid
2012
43
2012
44
Enantiomer tisztaság
HATÓANYAG
O
Enantiomer tisztaság Kromatográfiás körülmények:
SZENNYEZİ HO
OH
D-(11C)-METIONIN
LiChrospher C18, 5 µm kromatográfiás oszlop
O
L-(11C)-METIONIN
Eluens: 30mM NaOAc, 17mM L-prolin, 8mM CuOAc 2
NH2
H 2N
2 ml/perc
S 11
C H3
L-11C-Metionin
11
S
Radioaktivitás detektor
C H3
Kromatografálási idı: 15 perc
D-11C-Metionin
2012
45
2012
Kémiai tisztaság
Enantiomer tisztaság
Kromatográfiás körülmények:
Kromatográfiás körülmények:
LiChrospher C18, 5 µm kromatográfiás oszlop
46
Nucleodur C18 Pyramid, 5 µm kromatográfiás oszlop
L-(11C)-METIONIN
Homocisztein
Metionin
Eluens KH2 PO4 (pH=3,3) Eluens: 30mM NaOAc, 17mM L-prolin, 8mM CuOAc2
1 ml/perc
2 ml/perc
UV/Vis detektor: 225 nm
Radioaktivitás detektor
Kromatografálási idı: 10 perc
Kromatografálási idı: 15perc
2012
47
2012
48
A 11C-Metionin kísérleti gyártás mintáinak minőség-ellenőrzése Gyáráti tétel
Radioké miai tisztaság
Radionukli dos tisztaság >99%
Felezési idı 19,9-20,9
>90%
Kémiai tisztaság <0,2mg/ml
Enantiomer tisztaság
>95% 2008-03-12
99,7
54,3
-
99,990
20,4
2008-04-02
99,6
99,3
0,02
99,997
20,9
2008-04-11
99,6
99,4
0,02
99,998
20,3
2012
49
Műszerek kvalifikálása, vizsgálati módszerek validálása
2012
50
Műszer-kvalifikáció Tervezési kvalifikálás (Design qualification – D.Q.) A készülék specifikációjával szemben támasztott igények megfogalmazása
Telepítési kvalifikálás (Installation qualification – I.Q.) A készülék üzembe helyezése
Működési kvalifikálás (Operational qualification – O.Q.) A készülék helyes működéséről való megbizonyosodás
Egy HPLC rendszer radioaktivitás detektora javításon esett át. Milyen típusú kvalifikáláson kell átesnie a rendszernek?
Üzemelési kvalifikálás (Performance qualification – P.Q.) A rendszer az alkalmazott minőségellenőrzési vizsgálatokhoz felhasználható
IQ OQ PQ
OMCL Network of the Council of Europe, Quality assurance document, PA/PH/OMCL (07) 48 DEF Qualification of equipment core document, EDQM. 2012
EDQM
51 European Directorate for the Quality of Medicines & Healthcare
2012
52
Linearitás vizsgálat y = 2,1669x R2 = 0,9914
LINEARITÁS 12,000
10,000
Milyen célt szolgál a műszerek üzemelési kvalifikálása?
Area arány
8,000
6,000
Követelmény: R2>0,99
4,000
2,000
A műszer megfelelően működik a készítmény vizsgálati körülményei között! 2012
0,000 0
1
2
3
4
5
6
Koncentráció arány
53
KR-02-01/2 A CLARUS 500 GC kvalifikálása 54
2012
Ismételhetőség RSD%
Csúcsterület
= 0,64%
RSD%
retenciós idő
= 0,54%
Miért fontos, hogy lineáris tartományban mérjen a műszerünk?
Követelmény: RSD% < 1% ( yi − y )2 RSD = 100 ∑ n −1 y %
ahol, az egyes mérési eredmények (oldószer-ISTD csúcs alatti terület arányok) yi y a mérési eredmények átlaga n a mérési eredmények száma
A vizsgálandó komponens tartalmát pontosan tudjuk meghatározni! 2012
55
2012
KR-02-01/2: A CLARUS 500 GC kvalifikálása 56
Vizsgálat-validálás Vizsgálat
Azonosítás
típusa
Szennyezők
Teljes vizsgálat
Vizsgálat
Vizsgálata
Validálási
mennyiség
Azonosítás
Szennyezők
típusa
Vizsgálata
Validálási
kimutatás
paraméter
Teljes vizsgálat
mennyiség
kimutatás
paraméter -
Helyesség Pontosság
+
-
+ +
-
+
-
Ismételhetőség
-
+
-
Középfokú precizitás
+
-
+
-
Specifikusság
+
+
-
+ +
Kimutathatósági határ Meghatározási határ Linearitás Tartomány
-
+
+ -
+ +
-
+ +
-
+ +
ICH guideline 2012
+ + módszerrel szennyező komponensek + + + mennyiségi meghatározását kívánjuk megoldani. Ismételhetőség + Középfokú precizitás + + Az eljárás minősítése - során milyen paraméterekre Specifikusság + + kell+ validálni? Kimutathatósági határ Helyesség Egy Pontosság
Meghatározási határ Linearitás Tartomány
-
+
+
-
+
-
+
-
+ + + +
Validation of analytical procedures: text and methodology Q2(R1) ICH
57 International Conference on Harmonisation
2012
Követelmény
58
KÖSZÖNÖM A FIGYELMET!
A 18F-FDG azonosítás és radiokémiai tisztaságvizsgálat validálása Vizsgált paraméter
-
Eredmény
Az [18 F]FDG azonosítási vizsgálatának validálása Linearitás
R 2 >0,990
R 2=0,9965
Kimutatási határérték (LOD)
< 1 mg/ml
0,09 mg/ml
Specifikusság
R S >1,5
3,85-6,92
Robosztusság
R S >1,5
1,92-4,74
18
Az [ F]FDG radiokémiai tisztaság vizsgálatának validálása
2012
Linearitás
R 2 >0,990
[ 18 F]FDG R 2 = 0,9985 Ac-[ 18 F]FDG R 2 = 0,9972
Precizitás
RSD % <1%
0,08%
Specifikusság
R S >1,5
4,59-5,01
Robosztusság
R S >1,5
2,00-4,87
VR-09-02/1: A 2-[18F]-FDG azonosítását és 59 radiokémiai tisztaságát meghatározó HPLC módszer validálása
2012
MINŐSÉGELLENŐRZÉS
60
