17. Baromfi Világkongresszus

A MOÁE Baromfi-egészségügyi Társaságának és a MÁK Budapesti szervezetének szakülése

17. Baromfi Világkongresszus

Dr Pénzes Zoltán, Dr Jánosi Katalin Ceva-Phylaxia, Virológiai Fejlesztési Igazgatóság Budapest, 2011. Nov. 9.

Tartalom • IB vakcinázások következtében kialakuló ellenanyag titer és védelem közötti kapcsolat • R. Ariyoshi, et al. • Az izraeli 233A variáns vakcina hatékonysága egy kínai nephropathogén IB törzzsel szemben • Ashash U. et al. • Rövid áttekintés a Fertőző Bronchitis vírus tojótyúkokra kifejtett hatásáról • R C Jones et al. • Különböző IBV QX-variánsok kimutatása egyazon baromfitelepen • Monne et al. --------------------------------------• Az attenuált V1-1/96 IBV által, a virulens 793B törzs ellen nyújtott védettség kommersz csirkében • Pénzes et al. • A kvantitatív PCR alkalmazhatósága a fertőző bronchitis vakcinák hatékonysági vizsgálatában • Pénzes et al.

2011.11.14.

MOÁE Baromfi-egészségügyi Társaság Szakülése

IB vakcinázások következtében kialakuló ellenanyag titer és védelem közötti kapcsolat

R. Ariyoshi, H. Ota, K. Yamazaki, T. Kawai, T. Honda, H. Shimada THE CHEMO-CERO-THERAPEUTIC RESERCH INSTITUTE Animal Vaccine Science Information Division 1-6-1 Okubo Kumamoto 860-8568, Japan

2011.11.14.


Célok IB elleni vakcinázás: két különböző szerotípusú élő vakcina, majd olaj-emulziós vakcina alkalmazása, átfogó immunválaszt indukál Mely vakcina kombináció a leghatékonyabb? 50, 108, 150 napos állatokban (szerológia, ráfertőzés) 1 Massachusetts és 3 különböző japán szerotípusú ÉLŐ vakcina 2 japán szerotípust tartalmazó INAKTIVÁLT vakcina

2011.11.14.


Kísérleti modell Élő vakcinák – napos, 3 hetes (nerima (Massachusetts), TM86 (Jap. dom. st1), AK01 (Jap. dom. st3), C78 (Jap. dom. st2))

Inaktivált vakcina – 10 hetes (nerima, TM869) Ráfertőző vírusok (4 szerotípus) 16x16 SPF csirke (vakcinázott) + 1x20 SPF csirke (kontroll)

NAPOS

2011.11.14.

3 HETES

10 HETES


vérvétel, ráfertőzés, qPCR ráfert. után: 50., 108., 150. napon

Eredmények, megbeszélés Az elsőként nerima- (Mass) vagy TM-törzs • átfogó védelem, széles spektrum 50 és 108 napos korban

Az elsőként C78 vagy AK01-törzs • szük spektrumú védelem

Plusz inaktivált vakcina • növekvő ellenanyag szint 50 – 108 napos korig; • bizonyos esetekben már csökkenő ea. szint 108 napos kortól

Ellenanyag titer és ráfertőző vírusszaporodás elleni védelem a légcsőben (qPCR) • szoros korreláció 50 és 108 napos korban; • nem volt korreláció 150 napos korban

2011.11.14.


Az izraeli 233A variáns vakcina hatékonysága egy kínai nephropathogén IB törzzsel szemben Ashash U.1, Zhao Y.2,Even-Chen T.1, Finger A.1, Banet-Noach C.1 1Abic

biological laboratories LTD, Israel, A division of Phibro Animal Health [email protected] 2China Agricultural University, Beijing, China Japan

2011.11.14.


Célok, kísérleti modell Kínában 793/B csoportba tartozó vakcinák a nephropathogén IB ellen Az izraeli 233A vakcina hatékony-e a kínai YN NP IB (QX) törzzsel szemben? 4×20 SPF csirke – – – –

GR1 napos (H120) és 2 hetes korban (233A) – szemcsepp GR2 napos és 2 hetes korban (233A) – szemcsepp GR3 ráfertőzött kontroll GR4 negatív kontroll

RÁFERTŐZÉS orrcsepp YN05-1 törzzsel 5 hetes korban

2011.11.14.

Csillóaktivitás (trachea) és kórbonctani vizsgálat 6 hetes korban


Eredmények Csillóaktivitás (%)

Csoport

Kórbonctani elváltozás

Állatlétszám

Kísérleti leírás

Elhullás

1

20

H120 + 223A + R.

2

8

6

3

0

65

2

20

223A + 223A + R

0

6

6

0

0

75

3

20

N. V. + R.

10

10

1

1

4

20

N. V. + N. R.

6 0

0

0

0

0

0 100

Vese Nyálka Trachea Tüdő

N. V. – nem vakcinázott; R. - ráfertőzött N. V. – nem vakcinázott; N. R. – nem ráfertőzött

2011.11.14.


Megbeszélés Vakcinázás (szemcsepp)

Heterológ törzs elleni védelem

2011.11.14.

Ráfertőzés YN05-1 (QX) Részleges védelem


Rövid áttekintés a Fertőző Bronchitis vírus tojótyúkokra kifejtett hatásáról

R. C. Jones, F. T. W. Jordan and K. Ganapathy Department of Infection Biology, School of Veterinary Science, University of Liverpool, UK.

2011.11.14.


IBV tojókban Kísérleti modell – SPF, leghorn , tojószezon, intranasalisan M41

tojócső szövettan általános állapot

tojástermelés

szöveti vírusterjedés

Légzőszervi tünetek (~ 7 napig) Feltűnő eltérések a tojástermelésben és tojásminőségben A vírus szétterjedt a szövetekben (korai fertőzés) – tojócsőben szignifikánsan magas titer a 6. napon

A hámszövet csillóvesztése ill. lymphocytás beszűrődés 2011.11.14.


IBV és az „ál-tojó szindróma” Első leírás: 1956, Broadfoot, USA • a tojócső naposkori fertőződése esetén

Egy tojóállomány egyedeinek többsége – tojóállat küllem – tojócső-fejlődési zavar – tojásrakás elmaradása

Európa → QX típusú törzsek Tojócső-fejlődési rendellenességek

– egyes IBV típusok – napos kori fertőzés – maternális ellenanyagok hiánya az adott szerotípus ellen

Nem az összes IBV típus esetében alakul ki A légzőszervi tüneteket követően → kifejezett vírusszaporodás a tojócsőben 2011.11.14.


IBV és az „ál-tojó szindróma” napos kori fertőződés szövet reparálódás

tojócső hámkárosodás

tojócső átjárhatósága csökken/megszűnik

4-5 hetes korra cisztaképződés

http://www.thepoultrysite.com

2011.11.14.


tojások a hasüregbe

Különböző IBV QX-variánsok kimutatása egyazon baromfitelepen Isabella Monne1, Viviana Valastro1, Alessandra Drago1, Tibor Cserep2, Stuart Young3, Krizia Cecchettin1, Giovanni Cattoli1 1Istituto

Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie, Research & Development Department, OIE/FAO and National Reference Laboratory for Newcastle Disease and Avian Influenza, OIE Collaborating Centre for Diseases at the Human-Animal Interface. Legnaro, Padova, Italy 2Intervet Schering Plough Animal Health United Kingdom 3Stuart Young Veterinary Services, Colliton Barton UnitedKingdom

2011.11.14.


QX IBV előfordulása Kína – 1996 • proventriculitis

Európa – 2003-2004 Hollandia Németország Belgium Franciaország Olaszország

Nagy Britannia - 2009 2011.11.14.


IBV QX szubpopulációk (UK) Légcső és veseminták (érintett tojóállományokból) – poolozva – valós idejű RT-PCR vizsgálat – pozitív minták S1 gén szekvencia-analízis

Két fő szubpopuláció együttes jelenléte

– 1 klón – 2009-ben izolált QX törzs (IBV/Chicken/UK/3355/09 strain) – 8 klón – QX-szerű vírustörzsek (QX-szerű törzsekhez kevésbé hasonló, <94% homologia)

Nagy Britanniában a QX-szerű és a korábbi QX törzsek együttesen vannak jelen – új QX-szerű vírustörzs? – korábbi QX-szerű törzsek evolúciója kapcsán jött létre?

TOVÁBBI VIZSGÁLATOK SZÜKSÉGESEK.

2011.11.14.


Attenuált V1-1/96 IBV által nyújtott védettség virulens 793B (homológ) törzs ellen broiler csirkében

Z. Pénzes1, J. Chacón1, P. Soós1, R. Glávits2, A. Zolnai1, N. Nógrády1, V. Palya1 1Ceva-Phylaxia, Virológiai Fejlesztési Igazgatóság 2MgSzH-ÁDI Budapest, 2011. november 9.

Cél

Az IBV V1-1/96 attenuált élő vakcinajelölt törzs által biztosított védelem vizsgálata IBV 793/B virulens törzzsel szemben broiler csirkében

2011.11.14.


Anyagok és módszerek I. Kísérleti modell 1. csoport 2.8 log10 EID50 IBV V1-1/96

D0

2. csoport 3.7 log10 EID50 IBV „793/B-típusú” kereskedelmi vakcina

3. csoport Nem vakcinázott kontroll

Állatok elhelyezése (30 db csirke/csoport, 1 napos broiler) Vakcinázás (spray) (30 db csirke/csoport)

—

D21

Testsúly mérés, homológ ráfertőzés (30 db csirke/csoport)

D26 (DPI* 5)

Testsúly mérés, klinikai vizsgálat, csillóaktivitás vizsgálat (10 db csirke/csoport)

27 (DPI 6)

Testsúly mérés, klinikai vizsgálat, csillóaktivitás vizsgálat, ráfertőző vírus reizolálás (20 db csirke/csoport) Ráfertőző vírus mennyiségi meghatározása qPCR vizsgálattal (10 db csirke/csoport) Légcső kórszövettani vizsgálata (5 db csirke/csoport)

*DPI – days post infection – fertőzés utáni napok száma

2011.11.14.


Anyagok és módszerek II. Mintavétel a légcsőből csillóaktivitás vizsgálata vírusizolálás, qPCR vizsgálat kórszövettani vizsgálat

2011.11.14.


bevezetni megforgatni

Eredmények Ártalmatlanság A vakcinázást követő 3 hét során nem tapasztaltunk vakcinázási reakciót

Napi súlygyarapodásra gyakorolt hatás 60,0 Napi súlygyarapodás (gram)

48,5

54,9

50,2

48,0

50,0

49,1

36,4

40,0

30,0 23,6

30,0 20,0 10,0 0,0

5

6 Fertőzés utáni napok száma

G1 (1/96) 2011.11.14.

51,7

G2 ("793/B")

5/6 átlaga

G3 (nem vakcinázott kontroll)


Eredmények Ciliostasis pontszám (0-4)

Csillóaktivitás vizsgálat I. 40,0

31,8

31,8

31,8

30,0 20,0

11,9

14,7

14,9 14,7

13,4 14,7

10,0 0,0

5

6 Fertőzés utáni napok száma

G1 (1/96)

G2 ("793/B")

5/6 átlag


40 pont – 100% ciliostasis; 0 pont – 0% ciliostatis (ép csillómozgás)

A csillóaktivitás normálnak tekintendő egy adott légcsőszakaszon abban az esetben, amikor a légcsőgyűrűk 50 százalékában kifejezett csillómozgás tapasztalható (0, 1 vagy 2 pontszám, mely megfelel 100, 75 vagy 50%-os csillóaktivitásnak (Ph. Eur.). 2011.11.14.


Eredmények 40,0

31,8

31,8

31,8

30,0 20,0

11,9

14,7

14,9 14,7

13,4 14,7

10,0 0,0

5

6

5/6 átlag

Fertőzés utáni napok száma G1 (1/96)

G2 ("793/B")


40 pont – teljes ciliostasis; 0 pont – ép csillómozgás A csillóaktivitás normálnak tekintendő egy adott légcsőszakaszon abban az esetben, amikor a légcsőgyűrűk 50 százalékában kifejezett csillómozgás tapasztalható (0, 1 vagy 2 pontszám, mely megfelel 100, 75 vagy 50%-os csillóaktivitásnak (Ph. Eur.).

2011.11.14.

Ph. Eur. határ SPF csirkék esetében Normál csillóaktivitással rendelkező csirkék %os aránya

Ciliostasis pontszám (0-4)

Csillóaktivitás vizsgálat II. 100

80

80

80

80

80 75

70

60 40 20 0 0

0

5

6

0 5/6 átlag

Fertőzés utáni napok száma G1 (1/96)

G2 ("793/B")


„A csirkét nem érintett abban az esetben, ha 10 légcsőgyűrűből 9 esetében normál csillóaktivitás tapasztalható.“ (Ph. Eur.) A Ph. Eur. által, SPF csirkékre (!!!) megadott határ: 80%-a a csirkéknek normál csillóaktivitást kell mutatnia.


Eredmények Ráfertőző vírus visszaizolálás (fertőzés utáni 6. napon) 100 100

Pozitív csirkék (%)

80 60 40

30

Ph. Eur. határ SPF csirkék esetében

30

20 0

G1 (1/96)

G2 ("793/B")


A légcsőtampon mintából készített inoculumot oltották embrionált SPF tojásba. Az IBV jelenléte megerősített antigén ELISA vizsgálattal. 2011.11.14.


Eredmények Ráfertőző vírus mennyisége a légcsőben (qPCR) (fertőzés utáni 6. napon)

REU vírustiter (lg EID50/ml)

3,00 2,50

1,73

2,00 1,50 1,00

0,71

0,93

0,50 0,00

G1 (1/96)

G2 ("793/B")


Mindegyik vakcinázott csoport szignifikánsan alacsonyabb REU* IBV titterrel rendelkezett, mint a kontroll csoport. *REU – relative equivalent unit

2011.11.14.


Eredmények VI. Kórszövettani vizsgálatok (fertőzés utáni 6. napon) A légcső felső része 2,5

Kórszövettani pontszámok (0-3)

3,0 2,5 2,0 1,5

2011.11.14.

1,1

1,0 0,5 0,0

• • • •

1,2

G1 (1/96)

Elváltozások hámszövet ciliumvesztése hámszövet metaplasia degeneráció limfocitás beszűrődés

G2 ("793/B")


Pontszámok 0 = nincs elváltozás 1 = enyhe elváltozások 2 = közepes mértékű elváltozások 3 = súlyos mértékű elváltozások


Eredmények VII. A hatékonysági mutatók összefoglalása broiler csirkében Csoport

Vizsgálati anyag

Csillóaktivitás vizsgálata

Vírus izolálás*

Ráfertőző vírus mennyisége (qPCR)

Kórszövettani vizsgálatok

1

IBV V1-1/96 (2.8 log10 EID50)



*





2

IB „793/B” (3.7 log10 EID50)



*





3

Nem vakcinázott kontroll

×

×

×

×

* - nem érte el a Ph. Eur. SPF csirkére vonatkoztatott határértékét

2011.11.14.


A kvantitatív PCR alkalmazhatósága a fertőző bronchitis vakcinák hatékonysági vizsgálatában Pénzes Zoltán PhD, Soós Pál PhD, Nógrády Noémi PhD, Varga Mária, Jorge Chacón PhD, Zolnai Anna PhD, Nagy Zoltán PhD Virológiai Fejlesztési Igazgatóság CEVA-Phylaxia, Budapest

Derzsy Napok, Sárvár, 2011 Június 2-3.

Kombinált vakcinázás eredmények Teljes védelem

Teljes védelem DV-110-2008

33

Összefoglalás, következtetések Az általunk validált IBV kvantitatív RT-PCR kellően specifikusnak és érzékenynek bizonyult. A hagyományosan használt módszerekkel összevethető eredménnyel szolgált három különböző hatékonysági kísérleti elrendezésben. Jól alkalmazható kiegészítő módszer különböző IB vakcinázási programok hatékonyágának laboratóriumi vizsgálatánál.

34

Köszönöm a figyelmet.

2011.11.14.


17. Baromfi Világkongresszus

Recommend Documents