!¶Dan K a r n i t u r u n k a n k e p a d m u A1 k i t a b ( A l Q u r ' a n ) u n t u k m e n j e l a s k a n s e g a l a s e s u a t u clan p e t u n j u k s e r t a rahmat d a n k a b a r g e m b i r a b a g i orango r a n g yang b e r s e r a h d i r i u (Q.S. An NaliL: 8 9 )
Persembahan t e r u n t u k Bapak, I b u , ' ~ a u d a r a saudaraku t e r c i a t a . ,
....,..,.,.,....,d a n dhienul Islam.,....
PENGUJ IAN FIS1OlQGIS BEBERAPA ISOLAT BAKTERl
PATQGEN BRS
[
TANAM AN
Oleh R U S M A N T O A 23 0199
JURUSAN HAMA D
r e d u k s i n i t r a t dan s i t r a t , o k s i d a t i f , d a p a t m e n g h i d r o l i s a p a t i ( l e m a h ) dan m e n d e h i d r o l i s a a r g i n i a , m e n g h i d r o l i s a lemak, rnampu memproduksi a s a n d a r i s u k r o s a (HPTf dan IIPTim) dan t i d a k mampu memproduksi a s a n dari s u k r o s a (SIX d a n IIPTZm), t i d a k menimbulkan g e j a l a busuk pada k e n t a n g , memp r o d u k s i enzim k a t a l a s e d a n o k s i d a s e . I s o l a t p a t o g e n BRS mernperlihatlcau k o t a h a n a n yang b e r beda t e r h a d a p u j i p e n g a r u h suhu.
I s o l a t SLbf, HPTf, d a n
HPTIm pertuinbuhannya t e r h e n t i p a d a suhu 4'T0c, s e d a n g i s o -
l a t HPTzm p a d a s u h u 4 2 ' ~ . Berdasarkm sifat-sifat f i s i o l o g i s d a r i hasil pengujia n l a b o r a t o r i s , p a t o g e n BRS asal tanaman p a d i l e b i h mendek a t i Pseudomonas a v e r a e d a r i p a d a Pseudomonas gluinae. S i f a t yang membedakan a n t a r a k e d u a s p e s i e s b a k t e r i t e r s e b u t a d a l a h dalam ha1 pembentukan k a p s u l . bentuk k a p s u l , sedang
g, glumae
P, a v e n a e
t i d a k mem-
membentuk k a p s u l .
PENGUJIAN P I S I O L O G I S BEBERAPA ISOLAT BAKTERI PATOGEN BRS (BACTERIAL RED S T R I P E ) ASAL TAN&LAN PAD1 ( O r y z a sativa L.)
Oleh
L a p o r a n M a s a l a h K h u s u s s e b a g a i salah s a t u syarat u n t u k nendapatkan g e l a r SARJANA PERTANIAN
pada
J3rusan Haara daa P e n y s k i t T u m b u h a n Fakultas P e r t a a i a ~ ,I n s t i t u t Pertmiail B o g o r
JURUSAN H4hfA D m PENYAKIT TUMBUItAN FAKULTAS PERTANIAN I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR
1990
Judul Laporan
:
PENGUJIAN FISIOLOGIS BEBERAPA ISOLAT DAKTERI PATOGEN BRS (BACTERIAL RED STRIPE) ASAL TANAMAN PAD1 ( O r y z a
sativa L o ) Nama Mahasiswa
:
RUSW'EO
Nornor Pokok
:
A 2 3 0199
f?
bienyetujui;
B
I
. A
Komisi Pendidikan
mdir S a s t r a a t m a d j a )
Dosen Pembimbing
.
.
Rauf ) Ketua J u r u s a n 1 2
Tanggal l u l u s :
9 SEC 13%
RIWAYAT HIDUP
P e ~ u l i sd i l a h i r k a n d i hledaa, Sumatera Utara, p a d a t a n g g a l 25 Deseuber 1967 s e b a g a i anak k e t i g a d a r i empat bersaudara.
Ayah bernama Muhamad B a s i r d a n I b u bernama
Rubini. P e n d i d i k a n S e k o l a h Dasar t e l a h d i s e l e s a i k a n p a d a t a h u n 1980 d i SD N e g e r i No. 060870, Medan.
Kemudian
pada t a h u n 1983 rnenamatkan S e k o l a h hlenengah Pertama d i S U N e g e r i 9 , Medan dan s e l a n j u t n y a b e r h a s i l menyelesaikan p e n d i d i k a n d i SMA N e g e r i 3 , Medan, p a d a t a h u n 1986. Pada t a h u n 1 9 8 6 , p e n u l i s d i t e r i m a s e b a g a i mahasiswa I n s t i t u t P e r t a n i a n Bogor m e l a l u i j a l u r P e n e l u s u r a n Minat dan Kemarapuan (PhtJ3K).
S e t a h u n kemudian, y a k n i pada t a h u n
1987 p e n u l i s t e r d a f t a r s e b a g a i m a h a s i s a a J u r u s a n Hama d a n P e n y a k i t Tumbuhan, F a k u l t a s P e r t a n i a n .
KATA PENGANTAR
Bisn~llahirrohmaanirroilim,
P u j i s y u k u r p e n u l i s p a n j a t k a n k e h a d i r a t A l l a h SET yang t e l a h melimpahkan raimat-Nya s e h i n g g a p e n u l i s d a p a t melaksanakan p e n e l i t i a n dan m e n y e l e s a i l r a n l a p o r a n i n i . Pengujian f i s i o l o g i s beberapa i s o l a t b a k t e r i patogen BRS ( B a c t e r i r a l Red S t r i p e ) asal tanaman p a d i (Oryza s a t i v a L o ) t e l a h dilakukan p e n u l i s d i Laboratorium B a k t e r i P a t o g e n 'Pumbuhan d a n R u m a h Xaca, J u r u s a n Hama dan P e n y a k i t Tumbuhan, I n s t i t u t P e r t a n i a n Bogor.
EIasil p e n e l i t i a n
t e r s e b u t d i s a j i k a n dalam t u l i s a n i n i . M e l a l u i t u l i s a n i n i p e n u l i s menyampaikan t e r i m a k a s i h kepadn Ir. A . I I i d i r S a s t r a a t m a d j a s e l a k u Dosen Pembimbing atas s a r a n d a n a r a h a n n y a dalam p e l a k s a n a a n p e n e l i t i a n sam-
p a i penyusunan l a p o r a n . Kepada Ir. I v o n e Oley Sumarauw d a n semua p i h a k yang t e l a h membantu k e l a n c a r a n p e n e l i t i a n i n i p e n u l i s t i d a k l u p a menyampaikan t e r i m a k a s i h . P e n u l i s m e n y a d a r i t u l i s a n i n i masik j a u h d a r i sempurna.
IValaupuu d e m i k i a n , mudah-mudahan h a s i l p e n e l i t i a n i n i
d a p a t b e r m a n f a a t b a g i yang nlemerlulcannya,
Bogor,
November 1990 Penulis
DAFTAR I S 1 halaman DAFTAR TABEL DAFTAR GAA4BAR PENIJAHULUAN
.................................. .................................
V
vi
...................................
........................... Tujuan P e n e l l t i a n ........................ TINJAUAN PUSTAKA .............................. Padi ..................................... h i o r f o l o g i tanaman p a d i .............. Penyakit b a k t e r i pada p a d i .......... V a r i e t a s p a d i IR-64 ................. B a c t e r i a l Red S t r i p e ................ L a t a r Belakang
DAHAN DAN hb.IETODE
..............................
.............. Bahan d a n A l a t P e n e l i t l a n ................ Bahan inokulum ......................
Waktu dan Tempat P e n e l i t i a n
Eiahan tanaman
.......................
......................... A l a t p e n e l i t i a n ..................... Bahan k i m i a
........................ tanaman ...................
Metode P e n e l i t i a n Penanamax
I s o l a s i patogen
.........So..........
Pengujian s i f a t - s i f a t
fisiologi
.....
I 1 3
4 4 4
4
5
5 8
8 8 8
8 9
9
10 10 10 12
DAFTAR I S 1 ( l a n j u t a n ) ha1aman
U S I L DAN. PEhil3AIIASAN
..........................
Hasil I s o l a s i P a t o g e n
....................
Pengujian Laboratoris Terhadap P a t o g e n BRS
.............................
.......................... K e s i m p u l a n ............................... S a r a n .................................... DAFTAR PUSTAXA ................................ U M P I W ......................................
KESIMPULAN DAN SARAN
20
20 22
36 36 36
38
40
DAFTAR TABEL
Teks
1.
ELasil Analisa K a n d u n g a n A i r , P r o t e i n , S e r a t , Lornak, d a n Debu d a r i B e r b a g a i D i j i - b i j i a n .
..
O D O . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O . . . . . . . D . . . . 0
2.
I h s i l P e n g u j i a n L a b o r a t o r i s T e r h a d a p Beber a p a J e n i s I s o l a t P a t o g e n BRS asal Tanaman Padi ..........,.,..........................QB
1
22
L a t a r Belakang B e r a s a d a l a h s a l a h s a t u bahan p a n g a n pokok s e b a g i a n b e s a r p e ~ d u d u kI n d o n e s i a . rnengandug z a t - z a t
S e b a g a i bahan pangaa b e r a s
g i z i y a s g mudah d i c e r n a ,
b e r a s dan b e b e r a p a b i j i - b i j i a n
Kadar g i z i
l a i n t l y a t e r c a n t u m d i bavah
ini. T a b e l 1.
H a s i l A n a l i s a Kandungm A i r , P r o t e i r r , S e r a t , Lemak, dan Debu d a r i B e r b a g a t B i j i - b i j i a n (%)
Jenis
Air
Protein
Serat
Lernak
Debu
Beras gabah
10.7
7.5
10.0
2.25
7.5
Beras pecah k u l it
9.8
8.9
1.0
2,OO
Sorgum
11.2
9.8
2.3
3.30
1,8
Kedelai
9.8
36.9
4.5
17,20
5,3
Kacaxag h i j a u 23.0
23,O
7.2
1.20
4.0
'
i,1
Sumber: D i r e k t o r a t Jekadral P e r t a n i a n d a l a n Ismail d a n K o d i r , 1977 S e l a i n s e b a g a i b a h m pangan, b e r a s j u g a perrting s e b a g a i k o m o d i t i ekonorni d a a p o l i t i k , s e b a b a p a b i l a raegara men g a l a m i k e k u r a n g a n b e r a s , rnaka s e l a i n s t a b i l i t a s ekonomi juga s t a b i l i t a s n a s i o r a l akan terganggu. S e j a k kernerdekaapl, p e m e r i n t a h I n d o n e s i a t e l a h mem-
2 b e r i k a n p r i o r i t a s yang t i n g g i m t u k mencapai swasembada beras.
Usaha t e r s e b u t d i m u l a i deggarm Rencana Kemalunuran
Kasimo, Program P a d i S e n t r a t a h u n 1959
-
1 9 6 2 , kemudian
d l l a n j u t k a n dengan Program Demomstrasi Massal t a h u n 1963
-
1 9 6 4 , Program Inmas t a h u n 1 9 6 9 , Program I n s u s
t a h u n 1980 d a n t e r a k h i r Program S u p r a I r t s u s t a h u n 1987. B e r k a t program-program
t e r s e b u t d i atas, s e j a k t a h u n
1 9 8 4 I n d o n e s i a t e l a h b e r h a s i l berswasembada b e r a s .
Namun
a d a kecenderungan p r o d u k s i b e r a s p a d a t a r a f swasembada t i d a k mantap.
P r o d u k s i b e r a s p a d a t a h u n 1 9 8 4 mengalami
k e n a i k a n s e k i t a r 8.02 %,
s e d a n g p a d a t a h u a 1985 k e n a i k a n
p r o d u k s i b e r a s h a n y a 2.35 $ ( B a h a r s j a h dalam I s m u n a d j i dkk.,
1988).
S a l a h s a t u f a k t o r yang menyebabkan p r o d u k s i
b e r a s k u r a n g mantap a d a l a h adanya s e r a n g a n harna d a n pen y a k i t pada tanaman p a d i Akhir-akhir
.
i n i muncul p e n y a k i t b a r u p a d a p a d i yang
d i s e b a b k a n o l e h b a k t e r i yang d i k e n a l dengan nama BRS ( B a c t e r i a l Red s t r i p e ) .
BRS p e r t a m a l c a l i ditemukan p a d a
t a n g g a l 1 J u l i 1 9 8 7 d i Subang o l e h Kelompok S t u d i Penyak i t S e n t r a PIIPTP J a t i s a r i .
S e t a h u n kemudian y a k n i d i
t a h u n 1988 t e r j a d i s e r a n g a n p a t o g e n BRS yang cukup l u a s d i Jaws Barat, dan h a 1 i n i mengakibatlran penurunan h a s i l per hektar 16 1988).
-
72 % s e c a r a rata-rata
(Liogi dalam \Vlbowo,
Oleh k a r e n a k e r u g i a n yang d i a k i b a t k a n n y a cukup
b e s a r , saat i n i p e n y a k i t BRS s u d a h t e r m a s u k s a l a h s a t u
3
p e n y a k i t p e n t i n g tanaiiinn p a d i yang p e r l u d i p e r l ~ a t i k a n lebih serius. Tujuan P e n e l i t i a n P e n e l i t i a n i n i b e r t u j u a n untuk lnencoba m e n g e t a h u i sifat-sifat
f i s i o l o g i p a t o g e n BRS yang menyerang daun
tanaman p a d i v a r i e t a s In-64.
T INJAUAN PUSTAIiA
Padi M o r f o l o g i tanaman p a d i Tanaman p a d i t e r m a s u k g o l o n g a n graminae yang d i t a n d a i o l e h b a t a n g yang t e r s u s u n d a r i b e b e r a p a r u a s .
Pada buku
b a g i a n bavah d a r i r u a s tumbuh daun p e l e p a h yang membalut r u a s sampai b a g i a n atas.
T e p a t p a d a buku b a g i a n atas
u j u n g d a r i daun p e l e p a h m e m p e r l i h a t k a n p e r c a b a n g a n dimana cabang yang t e r p e n d e k m e n j a d i l i g u l e ( l i d a h ) daun ( S i r e g a r , 1980). Pada u j u n g b a t a n g t e r d a p a t malai yang t e r d i r i atas bulir-bulir.
Pada s e t i a p b u l i r t e r d a p a t s a t u bunga p a d i
yang t i d a k mempunyai p e r h i a s a n bunga,
Bulir-bulir
ter-
s e b u t t e r d i r i atas tanglcai bunga, bunga d a n d u a sekam kelopak.
Buah t e r b e n t u k s e t e l a h penyerbukan d a n pembuahan.
Buah t e r s e b u t d i k e n a l s e b a g a i b i j i p a d i a t a u g a b a h (Sur6v i n o t o , 1982). Menurut Soemartono dkk.
(1981) pertumbuhan tanaman
- 70 (25 -
p a d i t e r d i r i d a r i t i g a f a s e , y a i t u f a s e v e g e t a t i f (60 h a r i ) , f a s e g e n e r a t i f ( 3 0 h a r i ) d a n f a s e pemasakan 35 h a r i ) . Penyakit b a k t e r i pada p a d i
D a l a m f a s e - f a s e pertumbuhan t e r s e b u t , tanaman p a d i
5 seringkali mendapat gangguan 'diantaranya oleh penyakit yang disebabkan oleh bakteri.
Menurut Sastraatmadja dkk.
(1990) terdapat beberapa jenis bakteri patogen pada padi
-
yang telah dikenal di Indonesia, yaitu: Xanthomonas campestris pv. oryzae penyebab penyakit kresek (Bacterial Leaf Bligth), Xanthomonas campestris pv, oryzicola penyebab penyakit Bacterial Leaf Streak, Pseudomonas glyae, penyebab penyalcit busuk biji dan Pseudomonas avenae penyebab penyakit Garis Bakteri (Bacterial Stripe). Varietas padi IR-64 Varietas padi IR-64 merupakan persilangan IR 565733-2-1 dengan IR 2061-466-1-5-5.
Varietas ini selain
agak tahan terhadap penyakit bakteri busuk daun dan tahan virus kerdil rumput juga dapat ditanm di daerah koloai wereng coklat biotipe i,2,3 dan wereng hijau.
Umur
panen varietas padi IR-64 lebih kurang 115 hari dengan hasil panen lebih kurang 5 ton/ha.
Diskripsi varietas
IR-64 secara lengkap dapat dilihat pada Lampiran 2. Bacterial Red Stripe Gejala penyakit ini rnu~lcul terutama pada bagian daua dan kadang-kadang pada bagian atas pelepah daun pada fase pembungaan.
Gejala awal dapat diamati pada ti~gkatanalcan
maksimm pada bagiaa bawah rumpua.
Pada fase pembungaan
:6
g e j a l a p e n y a k i t i n i t e r j a d i p a d a d a u ~b e n d e r a , daun k e d u a , dan d a m k e t i g a d a r i atas ( B a l a i I n f o r m a s i P e r t m i a a , 1 9 8 8 ) . G e j a l a a w a l d i t a n d a i o l e h t i m b u l n y a b e r c a k yang b e r b e n t u k b u l a t a t a u b u l a t t e l u r berwarna merah k e k u n i n g a r a t a u merah c o k l a t k e k u n i n g a n . 3
-
S e t e l a h mewoapai d i a m e t e r
5 mm b e r c a k t e r s e b u t berkernbang memanjang ke a r a h
u j u n g daun dan kadang-kadaag
ke arah p a n g k a l d a m h i n g g a
b e r b e n t u k g a r i s yang warna s e r t a l e b a r n y a sama dengan ge-
jala awal.
Daun tampak b e r g a r i s merah d m mengerirag.
bfasa pembungaan m e n j a d i t i d a k s e r e n p a k s e h i n g g a p r o s e s pernatangan b u l i r t i d a k serempak,
Pada umumnya s e r a n g a n
b e r a t d a p a t d i a m a t i p a d a s a t s a t u minggu sampai s e p u l u h h a r i s e t e l a h masa pembungam ( D i r e k t o r a t P e r l i n d u n g a n Tanaman Pangan, 1 9 8 9 ) . Sampai s a a t i n i p e n y e b a b , p e n y a k i t BRS rnasih d i k a j i l e b i h l a n j u t dan d i d u g a a d a l a h b a k t e r i g e n u s Pseudomonas. Penyakit diduga d i t u l a r k a n m e l a l u i b i j i ( s e e d borne), Oleh k a r e n a i t u d i a n j u r k a n t i d a k m e n y e b a r l u a s k a n b e n i k v a r i e t a s IR-64
d a r i d a e r a h yaEig t e r k e n a s e r a n g a n p a t o g e n
BRS (Bailai I n f o r m a s i P e r t a n i a l a , 1 9 8 8 ) . P a t o g e n BRS p e r t a m a k a l i d i a m a t i menyerang tanaman p a d i v a r i e t a s IR-64 d l Subang (Jawa B a r a t ) p a d a t a n g g a l 1 J u l i 1987.
Kemudian p e n y a k i t i n i ditemulcan j u g a d i
d a e r a h Jember d a n Malang p a d a IR-64 p u l a .
D i lahan i n i
i n t e ~ s i t a ss e r a n g a n s a n g a t b e r a t yang d i t a n d a i d e n g a s
m e a g e r i n g n y a d a m b e n d e r a dan daun kedua d a r i atas.
Di-
duga p e n y a k i t BRS i n i t e l a h berkembarz$ p a d a pertalnaman padi d i seluruh Indonesia (Balai Informasi Pertanian, 1988). D a r i h a s i l pengamatan s e l a r j u t n y a , d i k e t a h u i bahwa p a t o g e n BRS t i d a k hanya menyerang 11-64,
t e t a p i juga
menyeraag v a r i e t a s yang l a i n , s e p e r t i C i s a d a n e , Krueng Aceh, PB 36 d m PB 46.
Kehilangan h a s i l karetla i n f e k s i
p e n y a k i t i n i d a p a t meacapai 1 6 46.a
-
72 % 'oengm rata-rata
q'o t e r g a n t u n g d a r i t i n g k a t s e r a a g a n n y a ,
Adapun f a k -
t o r yang mernpengaruhi perlrelnbangaa p e n y a k i t i a i a d a l a h suhu t i n g g i d i atas 30°c, kelembaban yang t i n g g i , dan pemupukm n i t r o g e n yang b e r l e b i h a r a ( B a l a i I n f o r m a s i P e r taaiax, 1988).
BAIIAN DAN METODE
Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian dilakukan di laboratorium bakteri patogen tumbuhan dan rumah kaca Jurusan Hama dan Penyakit Tumbuhan, Fakultas Pertanian, Institut Pertaniaa Bogor.
Pelaksanaan penelitian dilakukan mulai bulan Mei sampai bulan Agustus 1990. Bahan dan Alat Penelitian Bahan inokulum Isolat patogen BRS yang digunakan dalam penelitian ini adalah hasil isolasi dari tananan sakit yang berasal dari pertanaman padi di daerah Sleman, Jatisari d m pertanaman padi di rumah kaca Jurusan VPT
-
IPB ( W f , IIPTlm,
dan HPTZm), Bahan tanaman Tanaman padi yang digunakan untuk inokulasi adalah tanaman sehat yang berasal dari benih padi yang sehat
-
pula.
Tanaman ditanam dalam ember plastilc yang bsrisi
tanab steril.
Uatuk aeaguji hipersensitivitas terhadap
isolat bakteri digunakan tanaman tembakau.
Bahan k i m i a Media tumbuh b a k t e r i yang d i g u n a k a n dalam p e n e l i t i a n i n i a d a l a h P o t a t o S u c r o s e Agar (PSA), medium k i n g ' s B , medium p o l y - P - l ~ y d r o x y b u t ~ r a t e ,medium r e d u k s i n i t r a t , medium o k s i d a t i f / f e r m e n t a t i f , medium h i d r o l i s a p a t i , medium L - a r g i n i a ,
medium 3 - k e t o l a l c t o s e ,
medium r e d u k s i
s i t r a t , medium p r o d u k s i asam d a r i s u k r o s a d a n medium t e t r a z o l i u m c h l o r i d e (Lampiran I). Bahan k i m i a l a i n yang d i g u n a k a a a d a l a h l a r u t a n h u c k e r s c r y s t a l v i o l e t , l u g o l t s i o d i n e , l a r u t a n p e a c u c i z a t warna s a f r a n i n , lar u t a n CuS04, l a r u t a n z a t warna h i j a u m a l a k i t , l a r u t a n g l u k o s a 176, l a r u t a l l H202 3 $ dan l a r u t a n t e t r a m e t h y l - p phenylenediamine dihydrochloride 1 A l a t penelitian
A l a t - a l a t yang d i g u n a k a n dalam p e n e l i t i a n i n i ada-
l a h cawan p e t r i , t a b u n g r e a k s i , l a b u t a k a r , l a b u e r l e n meyer, jarum o s e , p i p e t , g e l a s u k u r , a l a t s m t i k , mikroskop, w a t e r b a t h , a u t o k l a f , pembakar b u n s e n / s p i r i t u s ,
pe-
n a n g a s a i r , r u a n g i s o l a s i , k e r t a s pH m e t e r , dan ember plastik isi 5 l i t e r .
hietode P e n e l i t i a n Penanaman tallaman Sebelum d i l a k u k a n penyemaian, b e n i h p a d i d i c u c i dalam l a r u t a n N a O C l 1 % selarna 1 2 m e n i t u n t u k menghilangkan cendaman kontominan. nah s t e r i l .
Penyemaian d i l a k u k a n p a d a ta-
S e t e l a h berumur dua minggu b e n i h yang d i -
semailcan t e r s e b u t d i p i n d a h k a n ice dalam ember p l a s t i k yang t e l a h b e r i s i t a n a h s t e r i l . t i k ditanam 5
-
D a l a m s e t i a p ember p l a s -
8 b e n i h d a n d i b e r i pupulc d a s a r NPK.
Pupuk N s e b a n y a k 0.75 gram u n t u k s e t i a p ember d i b e r i k a n s e b a n y a k t i g a k a l i ( t i d a k s e k a l i g u s ) , y a i t u p a d a saat tanam, umur t i g a minggu d a n umur 7 minggu.
Pupuk P d a n
K d i b e r i k a n s e k a l i g u s , y a i t u masing-masing
s e b a n y a k 0.375
gram u n t u k s e t i a p ember.
Tanaman p a d i d i t e m p a t k a n dalam
rumah k a c a d a n p a d a saat bsrumur t i g a minggu d i l a k u k a n p e a j a r a n g a n , s e h i n g g a . t e r t i n g g a 1 dua rumpun p a d i dalam s e t i a p ember p l a s t i k . Tanaman t e m b a k a , ~y a n g a k a n d i g u n a k a n untulr u j i h i p e r s e ~ s i t i v i t a sd i t a n a m dalam p o t yang b e r i s i tanall s t e r i l , liemudian d i t e m p a t k a n dalam rumah k a c a . I s o l a s i patogen Untuk mendapatkan i s o l a t p a t o g e n BRS yang a k a n d i gunakan dalam p e n e l i t i a n d i l a k u k a n s e r a n g k a i n p e k e r j a a n
11 yang s e s u a i dengan k o n s e p P o s t u l a t ICoch, y a i t u i s ~ l a s i , i n o k u l a s i , dan r e i s o l a s i . Pada t a h a ~ li s o l a s i , dnun p a d i yang s a k i t clipotongp o t o n g dengan p a n j a n g i
-
2 cm t i a p p o t o n g .
Potongan
daun p a d i t e r s e b u t kemudian d i s t e r i l k a n permulcaannya dengan menggunalcan a l l i o h o l 70 Yb a t a u dengan menggunalcan l a r u t a n NaOCl 1 $, l a l u d i c u c i dengan a i r s t e r i l . t e l a h s e l e s a i kemudian potongan-potongan
Se-
daun t e r s e b u t
d i t a n a m d i dalam cawan p e t r i yang b e r i s i medium PSA. Pada s e t i a p s a t u caman p e t r i d i t a n a m 4 padi
,
-
5 potongan d a u n
l a l u d i i n k u b a s i k a n p a d a s u h u lcamar.
IColoni b a k t e r i
yang tumbuh p a d a m e d i m s e t e l a h p e r i o d e i n k u b a s i d i p i n dahkan ke cawan p e t r i yang l a i n daii p e n h d a h a n i n i d i lalcukan sampai d i p e r o l e h b i a k a n murni.
Untuk m e n g e t a h u i
t i p e v i r u l e n s i n y a , malca d i l a k u k a n p e n g g o r e s a n p a d a medium T Z C ( T e t r a Zolium C h l o r i d e ) dan d i i n k u b a s i k a n p a d a suhu
kamar s e l a m a 2
-
3 hari.
Iiemudian dilalcukan p e m e r i k s a a n
t e r h a d a p kolonl-lcol o n i yang d i p e r o l eh s e p e r t i r e l c a s i gram dengan metode IiOlI, warna s e r t a b e n t u k k o l o n i dan l a i n - l a i n , Sebelum t a h a p i n o k u l a s i d i l a k u k a n , i s o l a t b a l c t e r i d i s u n t i k k a n t e r l e b i h d a h u l u pada daun tembalcau dan d i i n k u b a s i k a n p a d a suhu kamar selama 1
-
2 hari.
B a k t e r i yang
m a s i h v i r u l e n alcan menimbulkan g e j a l a n e l c r o t i k p a d a b e k a s suntikan.
S e t e l a h i t u b a r u l a h i s o l a t b a k t e r i patogen
BRS d i i n o k u l a s i k a n p a d a tanaman u j i d a n d i b i a r k a n sampai
muncul g e j a l a pada tanaman u j i t e r s e b u t .
D a r i setiap
i s o l a t d i b u a t s u s p e n s i dan i n o k u l a s i d i l a k u k a n dengan rnenyemprotlcan s u s p e n s i p a d a daun d a n b a t a n g p a d i dengan menggunakan hand s p r a y e r .
Penyemprotan s u s p e n s i h a k t e r i
d i l a k u k a n empat k a l i , y a k n i t i g a k a l i sebelum a t a u menj e l a n g k e l u a r malai (tanaman p a d i berumur 7 , 8 , clan 9 minggu) dan s a t u k a l i k e t i k a tanaman p a d i berumur 10 minggu.
Penyemprotan p e r t a m a d a n k e d u a menggunakan s u s p e n s i
b a k t e r i yang t e r l a r u t dalam a i r s t e r i l , sedang penyemprota n k e t i g a d a n keempat menggunakan s u s p e n s i b a k t e r i yang t e r l a r u t dalam a i r s a r i k e n t a n g s t e r i l .
Agar s u p a y a ke-
lelrlbaban t e t a p t i n g g i maka tanaman p a d i yang t e l a h disemp r o t d i s e l u b u n g i dengan k a n t u n g p l a s t i k .
Tiap j e n i s iso-
l a t d i b u a t t i g a ulangan. Cara r e i s o l a s i d a r i t a n m a n y a n g t e l a h d i i n o k u l a s i a d a l a h sama s e p e r t i yang d i l a k u k a n p a d a i s o l a s i p e r t a m a . R e i s o l a s i d i l a k u k a n d a r i tanaman yang m o m p e r l i h a t k a n ge-
j a l a , y a i t u a d a n y a g a r i s merah s e p e r t i komet d i b a g i a n t engah d a m ' p a d i
.
Pengujian s i f a t - s i f a t Pewarnaan G r a m .
fisiologi Kaca obyek d i b e r s i h k a n d a n d i b e b a s -
kan d a r i lemak dengan menggunakan a l l c o h o l , l a l u diganggang d i atas n y a l a lampu s p i r i t u s ,
Pada k a c a obyek t e r -
s e b u t d i b u a t o l e s a n b a k t e r i , kemudian d i r a t a k a n , d i k e r i n g -
13
anginkan dan selanjutnya difiksasi di atas nyala lampu spiritus.
Setelali dingin olesan balcteri disiram dengail
larutan Gram A sebanyak 2
-
3 tetes, didiamkan selama
satu menit, lalu dicuci dengan air mengalir dan kemudian dikering-anginkan.
Selanjutnya olesan bakteri ditetesi
dengan larutan Gram B dan dibiarkan selama satu menit, lalu dicuci dengan air mengalir dan dikering-anginkan. Setelah itu dicuci dengan larutan Gram C selama:3O detik, selanjutnya dicuci dengan air mengalir dan dikering-anginkan.
Dengan cara yang s m a olesan bakteri dicuci dengan
larutan Gram D (dibiarkan selama dua menit).
Kemudian
preparat diamati dengan menggurrakan mikroskop (peabesaran kuat).
Bakteri gram positif akan berwarna violet, gram
negatif berwarna merah dan gram variabel berwarna merah atau violet (Jutono, dkk., 1980). Pewarnaan kapsul (Pewarnaan. ~ n t b o n y L . Kaca obyek dibersihkau dan dibebaskan dari lemak dengan menggunakaa alkohol, kemudian diganggang di atas nyala lampu spiritus. Setelah itu dibuat olesan bakteri di atas kaca obyek yang sudah bersih tersebut, diratakan dan dikering-anginkan. Selanjutnya olesan bakteri disiram dengan larutan zat warna crystal violet selania dua menit, kemudian disiram kembali dengan larutan CuSOq 20 %.
Larutan CuSO* yang
berlebihan dihisap dengan tissue dan dikering-anginkan, lalu preparat tersehut diamati di barveh mikroskop dengan
pembesaraii kuat.
Sel bakteri akan tampak bermarna biru
tua dan kapsulnya merupakan zone ber~varnabiru violet di sekitar sel (Jutono, dkk., 1980). Pewarnaan spora.
Kaca obyek dibersihkan dan dibe-
baskan dari lemak dengan r~~enggunalran alkohol, lalu diganggang dl atas nyala lampu spiritus.
Diakan BRS di-
ambil sebanyak satu ose, lcemudian dioleskan pada kaca obyek yang sudah bersih, diratakan dan dikering-anginkan serta difiksasi di atas nyala lampu spiritus& Setelah itu olesan bakteri disiram dengan larutan zat warna hijau malakit selama 10 menit (tidalc dipanaskan), kemudian dicuci dengan air mengalir selama 10 detik dan dikeringanginkan.
Selanjutnya dilalcukan pewarnaan dengan laru-
tan safranin selama lima detik, dicuci dengan air mengalir dan dikering-anginkan,
Dengan msngguaakan mikroskop,
preparat bakterj. tersebut diamati dengan pembesaran kuat. Spora yang terlepas akan tampak berwarna hijau, spora yang masih terdapat di dalam sel tampak transparan, sedang sel vegetatif berwarna merah (Jutono, dkk., 1980). Uji hidrolisa pati.
Isolat patogen DRS digoreskan
pada medium NA yang ditmbah dengan zat pati dan diinkubasikan selama 1
-
3 hari pada suhu kamar.
Kemudian
seluruh permukaan agar digenangi dengan iodium.
Reaksi
positif ditandai dengan tampaknya area jernili di sekitar pertumbuhan koloni bakteri, sedang reaksi negatif ditan-
15 d a i dengan tampaknya warna b i r u g e l a p ( v i o l e t ) d i s e k i t a r koloni b a k t e r i (Kerr, 1980). U j i hipersensitivitas.
I s o l a t p a t o g e n BRS yang d i -
gunakan pada u j i i n i a d a l a h i s o l a t yang berumur 2 4 jam.
-
48
D a r i i s o l a t t e r s e b u t kentldian d i b u a t s u s p e n s i bak-
t e r i , l a l u dengan menggunakan jarum s u n t i k s u s p e n s i t e r sebut d i s u n t i k k a n pada j a r i n g a n a n t a r a tulang-tulang daun d i b a g i a n balvah permukaan daun tembakau.
Ileaksi
p o s i t i f d i t a n d a i dengan t i m b u l n y a b e r c a k n e k r o t i k pada tempat i n o k u l a s i . U.ii a k u m u l a s i p o l y - p - h y d r o x y b u t y r a t e .
I s o l a t pato-
gen BRS d i g o r e s k a n pada medium p o l y - p - h y d r o x y b u t y r a t e d a n d i i n k u b a s i k a n s e l a m a 24 jam pada suhu kamar.
Pada
k a c a obyek yang b e r s i h d a n s u d a h d i t e t e s k a n a q u a d e s (1
-
2 t e t e s ) , i s o l a t t e r s e b u t diambil s e d i k i t dan d i -
pindahlcan ke a t a s t e t e s a n a q u a d e s p a d a k a c a obyek, kemud i a n dicarnpur sampai m e r a t a .
Preparat tersebut dibiar-
k a n sampai k e r i n g u d a r a , kemudian d i f i k s a s i dengan mel a l u k a n k a c a obyek t e r s e b u t b e b e r a p a k a l i d i atas n y a l a lampu s p i r i t u s .
Setelah dingin olesan bakteri tersebut
d i s i r a m dengan l a r u t a l z s u d a n b l a c k B d a n d i b i a r k a n s e l a m a 1 5 m e n i t p a d a s u h u kamar, k e n u d i a n g e l a s obyek d i b i l a s deogan a i r .
A i r yang b e r l e h i h a n d i h i s a p dengan k e r t a s
s e r a p dan d i b i a r k a n s a n p a i k e r i n g u d a r a . genarigi dengan s a f r a n i n 0 , 5 E/o selama 5
-
Preparat di10 d e t i k ,
kemudian d i b i l a s dengan a i r d a n s e l a n j u t n v a d i k e r i n g anginkan.
S e t e l a h lcering d i a m a t i d i bawah m i k r o s k o p
dengan pembesaran k u a t .
Reaksi p o s i t i f d i t a n d a i b u t i r -
h u t i r berwarna h i t a r n - b i r u a t a u abu-abu k e b i r u a n (ICerr, 1980), U j i fluoresensi.
I s o l a t p a t o g e n BRS d i g o r e s k a n
p a d a midium K i n g ' s B d a n d i i n l ~ u b a s i l c a n selania 2 p a d a suhu kamar,
-
3 hari
S e t e l a h luasa i n k u b a s i t e r s e b u t , b i a k a n
d i s i n a r i dengan s i n a r u l t r a v i o l e t .
Reaksi p o s i t i f di-
t a n d a i dengan a d a n y a w a r n a h i j a u m e n y k i l a t ( K e r r , 1 9 8 0 ) . U j i oksidatif-fermentatif.
I s o l a t p a t o g e n BRS d i -
tanam p a d a medium o k s i d a t i f - f e r m e n t a t i l d i dalam t a b u n g realcsi.
Medium t e r s e b u t t e r d i r i d a r i dua j e n i s , y a k n i
yang s a t u d i t u t u p dengan p a r a f i n dan yang s a t u l a g i t i dak d i t u t u p dengan p a r a f i n ,
S e t e l a h i s o l a t p a t o g e n BRS
t e r s e b u t ditanam, l a l u diinkubasikan selama 2
-
3 hari
R e a k s i p o s i t i f d i t a n d a i dengan adanya
pada suhu kamar.
g a r i s k u n i n g p a d a mediurn d i d a l a ~ nt a b u n g r e a k s i yang t i d a k d i t u t u p dengan p a r a f i n ( K e r r , 1 9 8 0 ) . U,ji reduksi n i t r a t .
I s o l a t p a t o g e n DRS d i t a n a m
p a d a medium r e d u k s i n i t r a t dan d i i n k u b a s i k a n selaiua 3 7 hari,
S e t e l a h i t u Ice dalam masing-masing
s i ditambahkan 2
dan 2
-
-
-
t a b u n g reak-
3 t e t e s l a r u t a n A (asam s u l f a n i l a t )
3 t e t e s larutan B (dirnetil-6-naftilamin).
R e a k s i p o s i t i f d i t a n d a i dengan t e r b e n t u k n y a warna merah.
17 A p a b i l a t i d a l c t e r j a d i p e r u b a h a n warna, dengan menggunakan tusulc g i g i ditambahkan s e d i l c i t debu s e n g ice dalam t a b u n g biakan,
J i k a t e r b e n t u k warna merah a r t i n y a u j i t e r s e b u t
n e g a t i f , sedangkan j i k a t i d a k t e r j a d i p e r u b a h a n warna a r t i n y a u j i t e r s e b u t p o s i t i f (Hadioetomo, 1 9 8 5 ) . U j i roduksi sitrat.
I s o l a t p a t o g e n BRS d i t a n a m p a d a
medium r e d u k s i s i t r a t d l dalam t a b u n g r e a k s i , kemudian d i i n k u b a s i l c a n pada s u h u lcanar selauta b e b e r a p a h a r i , R e a k s i p o s i t i f d i t a n d a i dengan a d a n y a p e r u b a h a n warnn medium d a r i h i j a u m e n j a d i b i r u (Hadioetomo, 1 9 8 5 ) . U j i produksi 3-ketolaktose.
I s o l a t p a t o g e n BRS d i -
g o r e s k a n pada medium p r o d u k s i 3 - k e t o l a l c t o s e d a n d i i n k u b a s i k a n s e l a m a 48 jam p a d a suhu kamar.
S e t e l a l i masa
-
i n k u b a s i d i l e w a t i , bialcaa d i s i r a m dengan l a r u t a n Benediet's.
R e a k s i p o s i t i f d i t a n d a i dengan t i m b u l n y a warna
kuning kecoklatan d i s e k e l i l i u g koloni b a k t e r i (Kerr, 1980). U ; i i p r o d u k s i asam d a r i s u k r o s a .
I s o l a t p a t o g e n BRS
d l g o r e s k a n p a d a medium y a n g ditambahkan dengan l a r u t a n s u k r o s a 1 0 % s e b a n y a k 0 , 5 r n l p e r t a b u n g r e a k s i , kemudian diinkubasikan selama 7
-
1 4 h a r i pada s u h u kamar.
Reaksi
p o s i t i f d i t a n d a i dengan a d a n y a p e r u b a h a n warna medium menjadi kuaing (Schaad, 1988 d a K ~ err, 1980). .
Uji peinbusukan k e n t a n g .
dengaa d i a m e t e r 3.5
-
Iientang d l p o t o n g b u l a t
4 cm d a n t e b a l n y a 0.5
- 0.8
cm.
18
Kemudian potongan-potongan tersebut permukaanya disterilkan dengan alkohol 70 % dan setelah itu dicuci dengan air steril, ditiriskan dan kemudian potongan kentang tersebut diletakkan dalam cawan petri yang dilapisi dengan kertas saring steril.
Di dalam setiap cawan petri dile-
takkan satu potongan kaatang, Kertas saring dibasahi dengan air steril untuk menjaga kelembaban dalam cawan petri selama masa inkubasi.
Pada pusat potongan kentang
diletakkan (digoreskan) satu lup bakteri. dibuat dua ulangan.
Setiap isolat
Perlakuan yang sama juga diberikan
pada kentang yang telah direbus sebelumnya, Setelah diinokulasi cawan petri diiakubasikan pada suhu kamar. Reaksi positif ditandai dengan adanya pembentukkan atau penarnaan coklak pada potongan kentang. Pengaruh suhu terhadap pertumbuhan bakteri.
Pada
uji ini digunakan empat tingkat suhu yang berbeda, yaitu sui~u32Oc, 37'~,
42'~ dan 47'~.
Dengan menggunakan ja-
rum osa isolat. patogen BRS digoreskan pada medium agar miring (PSA), kemudian diinkubasikan pada keerapat suhu tersebut di dalam materbath, Pengamatan dilakukan setelah 24 jam masa inkubasi terlewati. U,ii hidrolisa lernak.
Isolat patogen BRS digoreskan
pada medium PSA yang dicampur dengan 0.5 ml mirayak kelapa yang steril.
Biakan diinkubasikan selama 5
-
7 hari
pada suhu kamar, kemudian disiram dengan larutan CuS04 jenuh.
Reaksi positif ditandai dengan timbulnya warna
k e h i j a u a n dan m e n g k i l a t ( J u t o n o , dkk., U j i olcsidase.
19801,
I s o l a t p a t o g e n BRS d i g o r e s k a n p a d a
medium PSA yang t e l a h d i t a m b a h dengan l a r u t a n s u k r o s a 1 %, kernudian d i i n k u b a s i k a n s e l a m a s a t u h a r i p a d a s u h u kamar, S e t e l a h i t u b i a k a n b a k t e r i digoreslcan p a d a k e r t a s s a r i n g yang sebelumnya t e l a h direndam dalam l a r u t a n t e t r a m e t h y l d i h y d r o c h l o r i d e 1 C/o,
p-phenylenediamine waktu 1 0
-
Dalam selang
60 m e n i t alcan t e r j a d i warna h i t a m p a d a k e r t a s
s a r i n g bekas g o r e s a n bialcan b a k t e r i , ha1 t e r s e b u t menunjukkan r e a k s i n y a p o s i t i f (Iierr, 1980), U j i katalase.
I s o l a t p a t o g e n BRS yang d i g u n a k a h
p a d a p e n g u j i a n i n i a d a l a h yang berumur 24 j a m , E[2O2 3
Larutan
% s e b a n y a k 5 m l d i t u a n g k e dalam t a b u n g r e a k s i .
Kernudiax b i a k a n b a k t e r i s e b a n y a k s a t u o s e dimasutdcan ke dalam t a b u n g r e a k s i t e r s e b u t ,
Reaksi p o s i t i f d i t a n d a i
dengan t e r b e n t u k n y a gelembung-gelembung udara p a d a p e r -
rnukaaa b i a k a n d i dalam t a b u n g r e a k s i ( S c h a a d , 1 9 8 8 ) . U j i d e h i d r ~ l i s aa r g i n i n .
I s o l a t p a t o g e n BRS d i t a n a m
p a d a medium d e h i d r o l i s a a r g i n i n dalam t a b u n g r e a k s i .
Me-
dium t e r s e b u t t e r d i r i d a r i dua j e n i s , y a k a i y a n g s a t u d i t u t u p dengan p a r a f i n u d a n yang s a t u l a g i t i d a k d i t u t u p dengan p a r a f i n .
S e t e l a h i s o l a t t e r s e b u t ditanam l a l u di-
i n k u h a s i k a n s e l a m a b e b e r a p a h a r i pada s u h u kamar.
Beaksi
p o s i t i f d i t a n d a i dengan a d a n y a p e r u b a h a n warna medium menj a d i l e b i h rnerah ( K e r r , 1 9 8 0 ) .
IUSIL DAN PEMBAH.4SAN
H a s i l I s o l a s i Patogen I s o l a t p a t o g e n BRS yang d i g u n a k a n dalam p e n e l i t i a n a d a l a h i s o l a s i d a r i tanaman p a d i s a k i t yang b e r a s a l d a r i d a e r a h Sleman ( ~ a t i s a r i )dan p e r t a n a m a n p a d i d a r i rumah k a c a HPT
-
IPB.
G e j a l a tanaman yang t e r s e r a n g p a t o g e n
BRS yang d i p e r o l e h d a r i kedua l o k a s i t e r s e b u t a d a l a h t e r d a p a t n y a b e r c a k merah pada daun yang kemudian akan memanjang ke a r a h u j u n g daun s e h i n g g a b e n t u k n y a s e p e r t i komet
. H a s i l p e n g g o r e s a n pada medium PSA menunjuklcan ada-
nya p e r b e d a a a warna.
K o l o n i p a t o g e n BRS a s a l Sleman
(SLM) pada medium PSA tampak berwarna p u t i h Icotor, s e d a n g i s o l a t asal rumah k a c a HPT
-
IPB a d a yang b e r w a r n a a g a k
k e k u n i n g a n (HPTirn d a n HPTZm) d a n a d a p u l a yang berwarna k e h i j a u a n (HF'T*).
Adanya penyirnpangan warna d a r i i s o l a t
p a t o g e n BRS yang umumnya b e r u a r n a p u t i h k o t o r (warna
umum k o l o n i Pseudornonas) d i d u g a lcarena s u d a h t e r l a l u s e r i n g n y a i s o l a t p a t o g e n BRS asal rumah k a c a IIPT d i p i n d a h -
kan d a r i s a t u medium k e medium l a i n ,
Warna k e h i j a u a n
pada k o l o n i i s o l a t KPTf bukan elisebabkan o l e h a d a n y a pigmen f l u o r e s e n s .
Dari h a s i l l e n g g o r e s a a s u s p e n s i b a k t e r i p a d a medium TZC d i p e r o l e h dua t i p e k o l o n i yang tumbuh, y a i t u t i p e
21 v i r u l e n yang b e r u a r n a p u t i h dengan warna lcemerahan p a d a b a g i a n t e n g a h n y a dan t i p e a v i r u l e n yang b e r w a r n a nlerah saja. D a r i pemerilrsaan r e a k s i Gram dengan menggunalcan KOEI 3
% d i p e r o l e h h a s i l bahrra p a t o g e n BILS a d a l a h b e r s i f a t
Gram negatif.
I i e a k s i t e r s e b u t d i t a n d a i dengan terbelatuk-
n y a s l i m e yang m e n g i k u t i j a r u a o s e sampai s e t i n g g i 0 , s 2 cm a p a b i l a j a r ~ mo s e d i a n g l t a t - a n g k a t Isolat-isolat
-
ke atas.
yang t e l a h d i p e r i k s a d i i n o k u l a s i k a n
pada tanaman u j i dengan menggunalcan metode penyemprotan (hand s p r a y f )
Tananlan u j i yang d i i n o k u l a s i menunjukkan
g e j a l a yang s ~ w as e p e r t i tanaman s a k i t yang d i p e r o l e h d a r i l a p a n g (Lampiran 3 ) .
G e j a l a p e r t a m a muncul 60 h a r i
s e j a k d i i n o k u l a s i pertama k a l i .
Gejala a w a l t e r l i h a t
d a r i adanya b e r c a k k e c i l b e n v a r n a merah p a d a b a g i a n tengah a t a u agak ke t e p i d a m padi.
Kemudian b e r c a k
t e r s e b u t a k a n ineraanjmg ke a r a h u j u n g d a u n , s e h i n g g a bentuknya ttuupak s e p e r t i komet. p e r t a m a ole11 masing-masing
S a a t tuullculnya g e j a l a
i s o l a t b a k t e r i berbeda-beda,
s e c a r a b e r u r u t a n a d a l a h s e b a g a i b e r i k u t : SUd, HPTim, HPTf dan HPT2,,
Iial i n i diduga karena t i n g k a t v i r u l e n s i n y a
yang agak b e r b e d a . Pada t a h a p r e i s o l a s i , h a s i l p e m e r i k s a a n t e r h a d a p p a t o g e n yang d i i s o l a s i d a r i tallaman u j i yang m e m p e r l i h a t kan g e j a l a b a k t e r i a d a l a h sarna s e p e r t i yang d i p e r o l e h
22 pada pemeriksaan terhadap patogen pada tahap isolasi pertama. Pengujian Laboratoris Terhadap Patogen BRS Dari pengujian laboratoris diperoleh hasil sebagai berikut: Tabel 2.
-
-
NO.
Hasil Pengujian Laboratoris Terhadap Beberapa Jenis Isolat Patogen BRS Asal Padi
-
Jexis Uji Laboratoris
SU4
-
1. , Pewarsaan Gram 2. Pe~rarnaankapsul 3. Pelrarnaan spora 4. Hidrolisa pati +/1 emah 5. Uji hepersensitivitas + 6. Akumulasi PEIB + 7, Fluoresensi
-
8. 9.
10. 11. 12. 13, 14. 15. 16. 17. 18. 19.
+ -
Oksidatif Fermentatif Reduksi nitrat + Reduksi sitrat + Produksi 3-ketolatose Produksi asam (sukrosa) Suhu maksimum 47Oc Hidrolisa lemak + Pembusukan kentang Oksidase + Katalase + Dehidrolisa arginin +
-
-
Jenis Isolat IPTf IPTlm
-
HPT2m
-
-
nd
nd
-
-
+/1 emah
+/1 emah
+/1 emah
+
+
+
-
+
-
+ +
+
+
+
-
-
-
-
+ +
+ +
+ +
-
nd
nd
+
+
-
47Oc
47Oc
42'~
+
+
+
-
-
+
nd
nd
+ +
+
+
nd
nd
-
Keterangan: nd artinya tidak dilakukan pengujian
Hasil pengujian menunjukkan semua jenis isolat patogen BRS bereaksi positif pada uji hipersensitivitas, akumulasi poly-P-hydr~x~butyrate, hidrolisa pati (lemah), reduksi sitrat, reduksi nitrat, hidrolisa lemak, oksidatif, dan uji katalase serta uji oksidase, dehidrolisa arginin (kecuali BPTlm dan HPT2,).
Sedang yang reaksinya
negatif adalah pewarnaan Gram, pewarnaan spora, uji fluoresensi, fermentatif, pembusukan kestang, pewarnaan kapsul, dan produksi 3-ketolaktose, Pada pengujian produksi asam dari sukrosa, patogen BRS berealcsi positif (HPTf dan EPTIm) dan negatif (SLM dan HPTZm). Uji reaksi Gram dengan menggunakan metode pewarnaan Gram merupakaa salah satu cara yang dapat, digunakan untuk menentukan bahwa seluruh isolat.yang diuji bersifat Gram negatif.
Hal tersebut ditazldai oleh sel bakteri yaag ber-
vraraa rnerah apabila dilakukan serangkaian proseslur pewarnaax Gram.
IIadioetorao (1986) menyebutkan adanya warna merah
pada sel bakteri Gram negatif disebabkan kompleks ungu-. kristal-yodium yang teldl masuk ke dalam dinding sel terekstraksi ketika dilakukan pencucian dengan alkohol (etanol).
Selanjutnya Hadieotomo (1986) menyebutkan tereks-
traksinya kompleks ungu kristal-yodium disebabkan dinding sel bakteri Gram negatif relatif lebih tipis dari pada bakteri Gram positif, selain itu kandungan lemak pada dinding selnya juga lebih tinggi,
Pewarnaan k a p s u l merupakan c a r a untulc ~ e n e n t u k a n ada tidaknya kapsul pada s u a t u j e n i s b a k t e r i .
Tanpa pe-
warnaan, k a p s u l b a l c t e r i s a n g a t s u k a r d i a m a t i dengan m i k r o s k o p c a h a y a b i a s a lcarena t i d a k b e n v a r n a d a n mempunyai i n d e k s b i a s yang r e n d a h (IIadioetomo, 1 9 8 6 ) .
H a s i l pe-
n g u j i a n n e n u n j u k k a n i s o l a t p a t o g e n BRS (SLM dan HPTf) t i d a k inempunyai k a p s u l , h a 1 i n i d i t a n d a i dengan t i d a k a d a n y a zone yang b e n v a r n a b i r u v i o l e t d i s e l c i t a r s e l . Pewarnaan s p o r a merupakan s u a t u c a r a u n t u k menentukan ada t i d a k n y a s p o r a pada s u a t u s e l b a k t e r i .
Hasil
p e n g u j i a n menunjukkan bahwa i s o l a t p a t o g e n BRS t i d a k memiliki spora.
H a l i n i t e r l i h a t d a r i t i d a k adanya mar-
n a h i j a u a t a u b a g i a n yang t r a n s p a r a n d i dalam s e l b a k t e r i . Menurut Hadioetomo ( 1 9 8 6 ) t e r d a p a t d u a j e n i s s p o r a , y a i t u e k s o s p o r a dan e n d o s p o r a .
S e l a n j u t n y a IIadioetomo ( 1 9 8 6 )
manyatakan semua e n d o s p o r a b a k t e r i mengandung s e j u m l a h b e s a r asam d i p i k o l i n a t , k a l s i u m dan
ca2+-
asam d i p i k o l i -
nat-peptidoglikan. Pada p e n g u j i a n kernampuan m e n g h i d r o l i s a p a t i semua i s o l a t p a t o g e n BRS menunjukkan r e a k s i p o s i t i f , s a n g a t lemah.
tetapi
A p a b i l a permukaan a g a r d i g e n a n g i i o d i u m ,
maka a r e a d i s e k i t a r k o l o n i berwarna t e r a n g ( k u n i n g ) . . Namun warna k u n i n g t e r s e b u t t i d a k b e r t a h a n lama, dalam waktu k u r a n g l e b i h 4
-
6 m e n i t s e l u r u h permukaan a g a r
akan berwarna b i r u v i o l e t / g e l a p .
Hal t e r s e b u k menunjuk-
k a n bahwa p a t o g e n BllS mampu m e n g h i d r o l i s a p a t i , t e t a p i 1emah.
IIal i n i kemungkinan d i s e b a b k a n p a t o g e n BliS t e r -
s e b u t men$hasillcan enzim a m i l a s e dalam j m l a h yang s e d i kit.
hfenurut IIadioetomo ( 1 9 8 6 ) b a k t e r i p e n g h a s i l enzim
a m i l a s e mampu m e n g h i d r o l i s a p a t i m e n j a d i m o l e k u l y a n g l e b i h sederhana.
Basil pengujlan h i d r o l i s a p a t i dapat
d i l i h a t p a d 8 g a a b a r d i bawah i n i .
Gambar I. EIasil u j i h i d r o l i s a p a t i ; t e r l i h a t s e l u r u h permukaan medium ( i s o l a t SLM d a n IIPTf) b e m a r n a v i o l e t / b i r u g e l a p 'Iipersensitivitas
merupakan s u a t u r e a k s i a k i b a t
adanya i n v a s i patogen d a r i l u a r .
Heaksi h i p e r s e n s i t i f
d a p a t t e r j a d i a p a b i l a hubungan antara p a t o g e n dengan tanaman t i d a k k o m p a t i b e l , s e p e r t i b a k t e r i v i r u l e n p a d a ta-
s e b u t d i t a n d a i dengan t i m b u l n y a g e j a l a n e k r o t i k s e b a g a i alcibat s e l - s o l d i s e k i t a r serangan patogen m a t i s e c a r a c e p a t , s e h i n g g a perkembangan p a t o g e n t e r s e b u t ke j a r i n g a n tananian yang l a i n t e r h m b a t , bul 8
-
G e j a l a n e k r o t i k alcan t i m -
2 4 jam s e t e l a h i n o k u l a s i ( P e r s l e y e t a l . ,
1983).
Pada p e n g u j i a n i n i s e l u r u h p a t o g e n BRS m o m p e r l i h a t k a n r e a k s i p o s i t i f , y a i t u timbulnya bercak nekrotik.
Bercak
n e k r o t i k t e r s e b u t d a p a t d i l i h a t p a d a gambar d i bawah i n i ,
Gambar 2.
H a s i l u j i h i p e r s e n s i t i v i t a s pada daun tembakau, y a i t u b e r u p a b e r c a k n e k r o t i k (tanda panah)
Pada u j i h i p e r s e n s i t i v i t a s d i atas timbunya b e r c a k n e k r o t i k l e b i h lwna d a r i p a d a waktu yang d i n y a t a k a n o l e h
--
P e r s l e y e t a l . (1983), y a i t u 2
-
3 hari.
H a l i n i mungkin
disebablran o l e h f a k t o r linglcungan ( s u h u dan k e l e m b a b a n ) , f a l i t o r tanaman d a n f a k t o r i n t e r n d a r i i s o l a t yang d i i n o kulasikan. Pada p e n g u j i a n a k u m u l a s i PHB t e r b u k t i semua i s o l a t p a t o g e n 13RS yang d i u j i mengakumulasi poly-B-hydroxybutyrate.
D i bawah mikroslcop dengan b a n t u a n minyak i m e r s i
t e r l i h a t adanya b u t i r - b u t i r bensarna b i r u kehitaman ( b i r u g e l a p ) dalam s e l , s e d a n g b a g i a n s e l y a n g l a i n n y a berwarna merah jambu.
--
Menurut P e r s l e y e t a l . (1983) PHB
s e r i n g t e r b e n t u k a p a b i l a r a s i o C/N p a d a medium t i n g g i . U j i f l u o r e s e n s i p a d a i s o l a t p a t o g e n BRS menunjulckan
r e a k s i yang n e g a t i f .
Bialcan b a k t e r i p a d a medium K i n g ' s
B yang d i s i n a r i dengan lampu u l t r a v i o l e t t i d a l c memperli-
hatkan f l u o r e s e n s i ( h i j a u mengkilap)
.
Hal i n i d i s e b a b k a n
b a k t e r i yang d i u j i t i d a k m e n g h a s i l k a n pigmen f l u o r e s e n s , Menurut S a s t r a h i d a y a t
1)
a d a b e b e r a p a j e n i s b a k t e r i yang
m e n g h a s i l k a n pigmen f l u o r e s e n s dan mampu memantullcan w a r n a h i j a u m e n g k i l a p a p a b i l a d i s i n a r i dengan c a h a y a lampu ultra violet. U j i o k s i d a t i f pada i s
I
menunjukkan r e a k s i p o s i t i f , s e d a n g u j i f e r m e n t a t i f bers i f a t nega$if.
U j i o k s i d a t i f yang p o s i t i f d i t a n d a i
dengan a d a n y a warna k u n i n g yang bermula d a r i d a s a r t a b u n g r e a k s i yang t i d a k d i t u t u p dengan p a r a f i n . ')
Tanpa t&un p e n e r b i t a n
H a l i n i me-
28
n u n j u k k a bahwa p a t o g e n BRS memerlukan s k s i g e n d a r i u d a r a b a g i portumbuhannya.
B a k t e r i yang d e m i k i a n t e r g o l o n g
b a k t e r i a e r o b i k ( ~ a s t r a h i d a y a t ' ) ),
Adapun h a s i l pengu-
j i a n n y a d a p a t d i l i h a t p a d a gambar d i bawah i n i .
Gambar 3 ,
H a s i l u j i o k s i d a t i f - f e r m e n t a t i f dirnana t e r j a d i p e r u b a h a n warna medium m e n j a d i kuning pada tabung yang t i d a k d i t u t u p dengan p a r a f i n
U j i n i t r a t p a d a p a t o g e n BRS menunju
positif.
B i a k a n b a k t e r i y a n g t e l a k d i t e t e s i dengan la-
rutan dimetil-0(-naftilamin
t i d a k memperlihatkan peruba-
han warna, d e m i k i a n j u g a h a l n y a s e t e l a h d i t a m b a h k a n s e d i k i t d e b u s e n g ke dalam t a b u n g r e a k s i .
Menurut Hadioetomo
( 1 9 8 5 ) p e r i s t i w a t e r s e b u t sesungguhnya p o s i t i f , k a r e n a n i t r a t t e l a h t e r e d u k s i s e c a r a l a n j u t dan t i d a k t e r s e d i a
l a g i urltuk b e r e a l c s i dengan s e n g ,
P e r u b a h a n n i t r a t menja-
d i n i t r i t merupakan s u a t u r e a k s i e n z i m a t i k y a n g dikendal i k a n o l e h s u a t u enzim yang bernama n i t r a t a s e . Pada u j i s i t r a t semua i s o l a t p a t o g e n BRS menunjukkan r e a k s i yang p o s i t i f .
Reaksi s i t r a t t e r s e b u t d i t a n d a i
dengan a d a n y a p e r u b a h a n n a r n a medium d a r i h i j a u m e n j a d i biru.
Perubahan xvarna t e r s e b u t kemungkinan d i s e b a b k a n
medium m e n j a d i a l k a l i n a k i b a t pertumbulian b a l c t e r i yang menggunakan s i t r a t s e b a g a i sumber k a r b o n s a t u - s a t u n y a d a n garam amonium s e b a g a i sumber n i t r o g e n n y a (Hadioetomo, 1985).
H a s i l u j i s i t r a t t e r h a d a p i s o l a t p a t o g e n BRS
d a p a t d i l i h a t p a d a gambar d i balvali i n i .
Gambar 4.
IIasil u j i reduksi s i t r a t ; t e r l i h a t t e r j a d i p e r u b a h a n Ivarna medium d a r i h i j a u menjadi b i r u k e c u a l i k o n t r o l
30 I s o l a t b a k t e r i yang d i p e r i k s a p a d a u j i p r o d u k s i 3k e t o l a k t o s e menunjukkan r e a l c s i yang n e g a t i f ,
Apabila
pennukaan a g a r d i g e n a n g i dengan l a r u t a n b e n e d i c t ' s r e a -
gent, maka d i s e k e l i l i n g k o l o n i b a l c t e r i t i d a l c t e r d a p a t warna k u n i n g k e c o k l a t a n .
H a l i n i ~ n e n u n j u k k a n balxwa bak-
t e r i u j i t i d a k mepproduksi 3 - k e t o l a k t o s e
d a n i n i lcemung-
k i n a n d i s e b a b k a n t i d a l c d i h a s i l l c a n n y a enzim t e r t e n t u , I I a s i l p e n g u j i a n n y a d a p a t d i l i h a t p a d a gambar d i bawah ini.
l i h a t pada s e l u r u h i s o l a t t i d a k timbul warna k u n i n g k e c o k l a t a n U j i p r o d u k s i asam d a r i sulcrosa pada keempat i s o l a t
p a t o g e n BRS menunjukkan h a s i l yang b e r b e d a ,
Pada i s o l a t
HPTf d a n HPTim menunjukkan r e a l f s i yang p o s i t i f , y a i t u
31
t e r j a d i n y a p e r u b a h a n w a r n a medium d a r i a g a k lcehljauan menj a d i lcuning, s e d a n g i s o l a t SLhI dan HPT2,
menunjukkan r e a k s l
yang n e g a t i f , y a i t u t i d a k t e r j a d i p e r u b a h a n warna p a d a medium,
hfenurut Hadioetorno ( 1 9 8 5 ) t e r j a d i n y a p e r u b a h a n n a r -
n a menunj ukkan bahna b a k t e r i t e r s e b u t membentulc asam d a r i sukrosa.
H a s i l p e n g u j i a n s e l e n g k a p n y a d a p a t d i l i h a t pada
gambar d i bawah i n i .
ster tida Hal
32
t u j u a n merebus k e n t a n g sebelum i n o k u l a s i a d a l a h untuk rnen g u r a n g i kemungkinan a d a n y a lcontaminasi b a l c t e r i l a i n t e r utama b a k t e r i - b a k t e r i yang t e r b a w a dalam umbi. Pada u j i s u h u a d a s a t u j e n i s i s o l a t p a t o g e n BRS y a n g m e m p e r l i h a t k a n h a s i l yang b e r b e d a d a r i l c e t i g a j e n i s i s o -
l a t yang l a i n n y a .
I s o l a t SLM, IIPTf, d a n IIPTim
tgrnyata
s u d a h t i d a k d a p a t tumbuh p a d a s u h u 4 7 ' ~ , s e d a n g i s o l a t IIPT2m t i d a k d a p a t tumbuh p a d a suhu y a n g l e b i h r e n d a h l a g i , P e r b e d a a n t e r s e b u t kemungkinan d i yakni pada suhu 42'~. sebabkan o l e h f a k t o r g e n e t i k .
T e r h e n t i n y a pertumbuhan
b a k t e r i pada suhu yang t i n g g i a d a l a h disebabkan t e r j a d i n y a
-.
( d e n a t u r a t i o n ) p r o t e i n s e l b a k t e r i ( R o g e r e t a1 _.
t
1977).
T e r u r a i n y a p r o t e i n a k a n rnerusalc s t r u k t u r DNA a t a u s t r u k t u r p r o t e i n p a d a b a g i a n s e l l a i n n y a , s e h i n g g a t i d a k d a p a t mel a k u k a n m e t a b o l i s m e u n t u k pertumbuhannya. P e n g u j i a n lcemaapuan m e n g h i d r o l i s a l e a a k p a d a keempat j e n i s i s o l a t b a k t e r i menunjukkan r e a k s i yang p o s i t i f . A p a b i l a p e m u k a a n a g a r d i g e n a n g i dengan l a r u t a n CuSOq, maka k o l o n i b a l c t e r i tampak berlvarna k e h i j a u a n dan mengki-
lat.
H a l i n i menunjukkan bahwa b a k t e r i t e r s e b u t mampu
m e n g h i d r o l i s a lemak.
T e r h i d r o l i s a n y a lemak rnenjadi b e n t u k
l e b i h s e d e r h a n a kemuggkinan disehablcan t e r b e n t u k n y a s u a t u enzim t e r t e n t u s e p e r t i enzim l i p a s e ,
Adapun h a s i l peng-
u j i a n n y a s e p e r t i yang t e r c a n t u m p a d a gambar d i bawah i n i ,
Gambar 7 .
Ifasil u j i h i d r o l i s a lemak y a n g memperl i h a t k a n adanya perubahan warna h i j a u m e n g k i l a t p a d a ssmua j e n i s i s o l a t y a n g diuji
I s o l a t p a t o g e n BRS y a n g d i p e r i k s a p a d a u j i o k s i d a s e menunjukkan r e a k s i yang p o s i t i f .
Apabila biakan digoros-
kan p a d a k e r t a s s a r i n g y a n g sebelumnya t e l a h direndam dalarn l a r u t a n tetramethyl-p-phenylenodiamine
dihydrochlo-
r i d e 1 %, maka a k a n t i m b u l warna h i t a m p a d a b e k a s g o r e s a n tersebut, Pada p e n g u j i a n u j i k a t a l a s e s e l u r u h i s o l a t p a t o g e n BRS menunjukkan r e a k s i y a n g p o s i t i f .
Hal i n i ditandai
dengan t e r b e n t u k n y a gelembung-gelembung rnukann b i a k a n b a k t e r i .
udara pada per-
Menurut Hadioetomo ( 1 9 8 5 ) p e r i s -
t i w a t e r s e b u t menunjukkan bahwa i s o l a t b a k t e r i yang d l -
u j i m e n g h a s i l k a n enzim k a t a l a s e yang mampu mengubah hid r o g e n p e r o k s i d a (HZOZ) m e n j a d i a i r dan o k s i g e n . U j i d e h i d r o l i s a a r g i n i n terhadap dua j e n i s i s o l a t
p a t o g e n DRS (SLhi d a n IIPTf) menunjukkan r e a k s i yang p o s i tif.
Iial t e r s e b u t d i t a n d a i dengan t e r j a d i n y a perubahan
w a r n a , y a i t u d a r i merah muda m e n j a d i merah t u a b a i k pada t a b u n g yang d i t u t u p d e n g a n p a r a f i n maupun yang t i d a k . I I a s i l p e n g u j i a n n y a d a p a t d i l i h a t p a d a gambar d i bawah
ini
.
Gambar 8.
D a r i hasil pengujian l a b o r a t o r i s d i atas, patogen BRS m e m i l i k i s i f a t - s i f a t
f i s i o l o g i yang l e b i h m e n d e k a t i
Pseudomonas a v e n a e d a r i p a d a Pseudomonas g l ~ u n a e , Adapun s i f a t yang melnbedakannya a d a l a h dalam h a 1 pembentulrkan kaps&.
-
Menurut Bradbuxy ( 1 9 8 6 ) P. a v e n a e t i d a l c memben-
-
t u k k a p s u l , s e d a n g P. glumae membent.uk k a p s u l .
ICESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan Hasil pengujian laboratoris terhadap isolat patogen BRS asal daun padi menghasilkan sifat-sifat fisiologi sebagai berikut: gram negatif, tidak berlcapsul, tidak membentulc spora, rnenimbulkan gejala nekrotilc pada daun tembakau, tidak menghasilkan pigmen fluoresen, m m p u mengakumulasi PHB, mampu mereduksi nitrat dan sitrat, oksidatif, menghidrolisa pati (lemah), mendehidrolisa arginin, tidak mampu memproduksi 3-ketolaktose, mampu memproduksi asam dari sukrosa (13P'Ef dan IIPTim) dan tidak mampu memproduksi a s m dari sukrosa (SLhl dan IiPTZm), memiliki suhu maksimum 42'~ (LIPTZm) dan 47'~ (SUf, IIPTf, dan IIPTim), tidak meni~nbullcangejala husuk pada kentang, menghidrolisa lemak, dan mampu memproduksi enzim lcatalase serta oksidase. Berdasarkan sifat-sifat fisiologi dari hasil p0ng.rujian laboratoris, patogen BRS asal tanaman padi lebih
-
mendekati P. avenae, Adapun sifat yang membedakannya
-
dengan genus Pseudomonas lainnya seperti P. glumae adalah dalam ha1 pembentukkan kapsul.
Dalam ha1 ini diketahui
bahwa patogen BRS tidak membentuk kapsul.
Saran hiengingat p a t o g e n BRS t e l a h banyak menyebabkan k e r u g i a n yang cukup b e s a r dan sampai saat i n i belum d i t e m u k a n metode p e n g e n d a l i a n yang e f e k t i f , maka p e r l u dilalcukan p e n e l i t i a n l e b i h l a n j u t , t e r u t m a mengenai a s p e k pengendaliannya. Untuk l e b i h memantapkan h a s i l p e n g u j i a n l a b o r a t o r i s i n i , maka p e r l u d i l a k u k a n p e n e l i t i a n t e r h a d a p s i f a t - s i f a t lainaya.
DAFTAR PUSTAIU
B a l a i I n f o r m a s i P e r t a n i a n J a v a Timur. 1988. P e n y a k i t B a k t e r i B e r g a r i s Merah ( B a c t e r i a l Red S t r i p e - - BRS) Pada Tanaman P a d i . Balai I n f o r m a s i P e r t a n i a n Jawa Timur. 15 hal,
B r a d b u r y , J. P.
ria.
1986.
Guide t o P l a n t P a t h o g e n i c Bacte-
CAB I n t e r n a t i o n a l hfycologycal I a s t i t u t e ,
F e r r l a n e , Kea, B u r r e y , England.
332 p ,
D i r e k t o r a t P e r l i n d u n g a n Tanaman Pangan. 1989. Relcomend a s i P e n g e n d a l i a n Hama dan P e n y a k i t Tanaman P a d i dan P a l a w i j a d i I n d o n e s i a . D i r e k t o r a t J e n d r a l Pert a n i a n Tanaman Pangan, D i r e k t o r a t P e r l i n d u n g a n Tanaman Pangan. J a k a r t a 135 h a l . Hadioetomo, R. S. 1985. M i k r o b i o l o g i Dasar D a l a m Praktek. Teknik dan P r o s e d u r Dasar L a b o r a t o r i u m . PT. Gramedia. Jakarta. 1 6 1 hal. Press,
1986. Dasar-Dasar h f i k r o b i o l o g i . Jakarta. 443 h a l .
UI-
I s m u n a d j i , hl. dkk. 1988. P a d i . Badan P e n e l i t i a n dan Pengembangan P e r t a n i a n . P u s a t P e n e l i t i a n dan Pengembangan Tanaman Pangan. Bogor, 4 3 2 hal. J u t o n o dkk. 1980. Pedoman P r a k t i k u m U i k r o b i o l o g i Umum Untuk P e r g u r u a n T i n g g i , D e p t . M i k r o b i o l o g i Fakultas P e r t a n i a n , U n i v e r s i t a s Gadjah htada. Eogyalcarta. 181 h a l . K e r r , A. and Brown, J . P. 1980, P l a n t ~ r o t e c t i o n . Hedg e s & B e l l P t y L t d . Melbourne. 432 p. K i r a l y , 2. and Iclement, F. 1974. hlethodes i n P l a n t Pathology. e r i c a n E l s e v i e r P u b l i s h i n g Company I n c . New York, %A. P e r s l e y , G. J . 1985. B a c t e r i a l W i l t Disease i n A s i a and t h e S o u t h P a s i f i c . P r o c e e d i n g of a n I n t e r n a M o n a 1 workshop h e l d a t PCARRD, Los Banos, P h i l i p p i n e s 8-10 O c t o b e r .
Roger, Y. S . , Adel Berg, E. A . a n d Ingraharn, J. Lo 1977. G e n e r a l h l i c r o b i o l o g y . F o u r t h e d i t i o n . Unwin Drot h e r s L i m i t e d , Old Woking, S u r r y , G r e a t B r i t a i n . 305-308 p. S a s t r a a t r n a d j a , A . iI. dklc. 1990. I d e n t i f i k a s i dan Pengu j i a n P a t o g e n i s i t a s B a k t e r i Penyebab P e n y a k i t Garis hIerah ( B a c t e r i a l Red Stripe-BRS) A s a l P a d i Terhadap Beberapa Twnbuiian K e l u a r g a Graminae. J u r u s a n IPTIPB. hialcalah Seminar. 1 6 h a l . S a s t r a h i d a y a t , I, R. P e n e r b i t Usaha N a s i o n a l .
l l m u Penyalcit Tumbuhan. Jakarta. 366 h a l .
Schaad, N. W . i 9 8 0 . L a b o r a t o r y Guide f o r I d e n t i f i c a t i o n of P l a n t P a t h o g e n i c B a c t e r i a . 2end e d i t i o n . The American P h y t o p a t h o l o g i c a l S o c i e t y S t . P a u l Minnes o t a . I 5 8 p. S i r e g a r , H. 1980, Budidaya Tanaman P a d i d i I n d o n e s i a . PT S a s t r a Hudaya. J a k a r t a . 320 h a l . Soernartono. halo
1981.
Padi.
CV Xasaguna,
Jakarta.
59-60
S u r o w i n o t o , S. 1 9 8 2 , T e h n o l o g i P r o d u k s i Tanaman P a d i Sawah d m P a d i Gogo. J u r u s a n Agronomi, F a k u l t a s P e r t a n i a n , I n s t i t u t P e r t a n i a n Bogor, Bogor, 47 h a l , Wibowo, B. S. 1988. P e n y a k i t Tanaman P a d i . Sentra P e r a m a l a n Hama d a n P e n y a k i t Tanaman Pangan. Jatis a r i , Karawang. 4 3 h a l .
L A M P I R A N
Lampiran 1.
Media Untuk P e r b a n y a k a n d a n P e n g u j i a n S i f a t - s i f a t Fisiologis Bakteri
Medium PSA Komposisi medium:
ICentang
200 g
Gula p a s i r
15 g
Agar
20 g
Aquades
I 1
Cara pembuatan: Kentang dilcupas dan d i p o t o n g m e n j a d i k e c i l - l c e c i l l a l u d i r e b u s dan diambil sari kentangnya,
ICemudian d i -
t a a b a h k a n ke dalam s a r i k e n t a n g , a q u a d e s s e h i n g g a volumenya m e n j a d i 1 l i t e r , g u l a p a s i r d a n a g a r .
Setelah i t u
d i r e b u s k e m b a l i sampai mendidih d a n s e l a n j u t n y a d i s t e r i -
l i s a s i dalam a u t o k l a f , biedium K i n g ' s D Komposisi medium:
Proteose peptone (Difco)
20 g
Bacto a g a r
15 g
G l y c e r o l C.P.
10 g
K2m04
1.5 g
hfgS04. 7H20
1.5 g
A i r Steril
1 1
p a d i u k u r sebelum d i s t e r i l k a n , yakni 7,2
Cara pembuatan: S e l u r u h . bahan dimasukkan k e d a l a m p e n a n g a s b e r i s i
a i r 1 l i t e r , d i r e b u s sampai m e n d i d i h d a n d i s t e r i l k a n dalam a u t o k l a f .
-
Medium alcumulasi poly-/3 - h y d r o x y b u t y r a t e Kornposisi medium:
Sukrosa
20
g
Peptone
5
g
K2KP04
0.5
g
bigS04.7H20
0.25 g
15
Agar Air s t e r i l pIL diulcur 7 - 2 Reagents:
Sudan b l a c k B
0.3 g
70 % E t h a n o l
100 m l
I
-
7.4
1 sebelum d i s t e r i l k a n
S a f r a n i n ( 0 . 5 %)
Cara pembuatan: S e l u r u h bahan dimasukkan ke dalam p e n a n g a s b e r i s i
a i r 1 l i t e r , d i r e b u s sampai l n e n d i d i h d a n d i s t e r i l k a n dalam a u t o k l a f . bfedium r e d u k s i n i t r a t Komposisi medium:
Peptone
1 g
KNO 3
i g
Yeast e k s t r a k
1g
Aquades
11
42 Reagents:
(a)
(b)
Asam s u l p h a n i l i k
Lo g
Asam a s e t a t 30 %
1 1
Dimethyl-
6 ml
-naphthylamine
~ s a ma s e t a t
1 1
Cara pembuatan: S e l u r u h bahan dimasulckan k e dalarn penangas b e r i s i
a i r i l i t e r , d i r e b u s sampai m e n d i d i h dan d i s t e r i l k a n dalam a u t o k l a f , AIedium o k s i d a t i f - f e r m e n t a t i f Komposisi medium:
Aquades Agar
1.5 g
Peptone
1
g
hTL4132 PO
i
g
KC1
0.2 g
blgS04. 7H20
0.2 g
Brom t i m o l b i r u
40
ml
pH 7 . 2 d i u k u r sebelum d i s t e r i l k a n Glukosa 5 C/o
Cara
pembuatan: S e l u r u h bahan dimasulckan ke dalam penangas b e r i s i
a i r 1 l i t e r , d i r e b u s sampai m e n d i d i h dan d i s t e r i l k a n dalam a u t o k l a f k e c u a l i g l u k o s a 5 s t o r i l k a n t e r l e b i h dahulu,
% dicampur s e t e l a h d i -
Medium h i d r o l i s a p a t i Kornposisi medium:
Nutrient broth
8
g
Water s o l u b l e s t a r c h
2
G
Agar
i.5g
Aquades
1 1
C a r a pembuatan: S e l u r u h bahan dimasukkan ice dalam p e n a n g a s b e r i s i
a i r 1 l i t e r , d i r e b u s sampai m e n d i d i h d a n d i s t e r i l k a n dalam a u t o k l a f . Medim d e h i d r o l i s a a r g i n i n IComposisi medium:
Peptone
1
g
NaCl
5
g
ICZHP04
0.3 g
Aquades
1
1
hlerah p h e n o l
10
ml
L (+) a r g i n i n HC1
10
g
Agar
3
g
pH d i u k u r s e b e l u m d i s t e r i l k a n Cara pembuatan: S e l u r u h bahan dimasukkan k e dalam p e n a n g a s b e r i s i
a i r 1 l i t e r , d i r e b u s sampai n e n d i d i b dan d i s t e r i l k a n dalam a u t o k l a f .
hiedim uji produksi 3-ketolaktose Komposisi medium:
Laktose
10 g
Yeast
1g
Agar
20 g F 1
Aquades Benedict' s reagent Larutan A:
Sodium citrat
173 g
Sodim karbonat
100 g
Aquades
600 ml
Larutan B:
Copper sulfat
18 g
Aquades
150 ml
Larutan B dicampurkan ke dalau,larutanA Cara pembuatan: Seluruh bahan dimasukkan ke dalam penangas berisi air I liter, direbus sampai mendidill dan disterilkan dalam autoklaf. hiedium reduksi sitrat Komposisi medium:
NaCl
5
MgS04.7H20
0.2 g
Nf13H2P04
l
g
K2m04
1
Aquades
1
g 1
Sodium citrat 2
g
g
Agar
20 g
Brom t i m o l b i r u I % (w/v) p a d a 50 7h e t a n o l
15 g
plI 6 * 8 d i u k u r sebelum d i s t e r i l l c a n Cara pembuatan:
S e l u r u h bahan dimasuklcan ke dalam p e n a n g a s b e r i s i a i r 1 l i t e r , d i r e b u s sarnpai m e n d i d i h dan d i s t e r i l k a n dalarn a u t o k l a f . Medium produlcsi asam d a r i s u k r o s a Komposisi medium:
NH4E2POg
1
KC1
0 . 2 !2
hfgS04, 71120
0.2 g
Yeast e k s t r a k
1
g
g
Brom t i m o l b i r u 1 % (w/v) dalam 50 YL etanol 3 m l Agar
1.5 g
pH 7 . 1 d i u k u r sebelum d i s t e r i l k a n l a r u t a n s u k r o s a 1 0 % (w/v) Cara pembuatan: S e l u r u h bahan dimasulckan ke dalam p e n a n g a s b e r i s i
a i r 1 l i t e r , d i r e b u s sampai m e n d i d i h d a n d i s t e r i l k a n dalam a u t o k l a f k e c u a l i g l u k o s a 5 q', dicampur s e t e l a h d i s t e r i l k a n t e r l e b i h dahulu.
bIedium t < e t r a z o l i u m c h l o r i d e (TZC) Komposisi medium:
Glukosa
10 g
Peptone
10 g
Casaniino a c i d s Agar Aquade s
1 1
18 g 1 1
2 , 3 , 5 - t r i p h e n y l t e t r a zolium c h l o r i d e 1 % (w/v) Cara pembuatan: S e l u r u h bahan dimasukkan ice dalam p e n a n g a s b e r i s i a i r 1 l i t e r , d i r e b u s sampai m e n d i d i h dan d i s t e r i l k a n dalam a u t o k l a f .
Untuk 2 , 3 , 5 - t r i p h e n y l
t e t r a zolium
c h l o r i d e 1 % d i b u a t dan d i s t e r i l k a n t e r s e n d i r i ( t i d a k dicampurkan dengan bahan yang l a i n ) dan dicampurkan dengan medium TZC s e t e l a h d i s t e r i l k a n , y a k n i 0.5 m l p e r cawan p e t r i .
Lampiran 2 .
D e s k r i p s i P a d i V a r i e t a s IR-64
Asal
: P e r s i l a n g a n I R 5657-33-2-i/lR
Golongan
2061-465-1-5-5 : C e r e , kadang-kadang
Umur tanaman : Bentuk tanaman : : T i n g g i tanaman Analcan p r o d u k t i f : Warna k a k i i7arna b a t a n g lVarna daun t e l i n g a : Warna l i d a h daun : kluka daun Posisi d a m Daun b e n d e r a Bentuk g a b a h Kerontokan Kerebahan : Rasa n a s i : Bobot 1 000 b u t i r : Xadar amilosa : Ice t a h a n a n t e r h a dap hama : Icetahanan t e r h a dap penyakit
berbulu
$ 115 h a r i Tegak
2 8 5 Cm Banyak IIi j a u IIi j a u T i d a k berwarna Tidak benvarna Kasar Tegak Tegalc Ramping, pan j a n g Tahan Tahan Enalc 27 gram 24.1 % Tahan wereng c o k l a t b i o t i p e 1, 2 , 3 d a n wereng h i j a u
: Agak t a h a n b a k t e r i bus& daun d a n t a h a n v i r u s k e r d i l rumput
Lampiran 3 .
G e j a l a k h a s BRS berupa g a r i s morah yang tirnbul s e b a g a i h a s i l i n o l c u l a s i dengan metode penyemprotan ( h a n d s p r a y e r )
