Vizeletszteroid-profilok meghatározása GC-MS technikával
Bufa Anita
PTE ÁOK Bioanalitikai Intézet
2009
Bevezetés Magyarországon orvosi diagnosztikai célokra egyedül a PTE ÁOK Bionalitikai Intézetben alkalmazzuk a vizeletszteroid-profil módszert. Holland MCA szekció SKZL (Stichting Kwaliteitscewaking Klinisch Chemishie Ziekenhuislaboratoria) külsı minıségbiztosítási program.
Vizeletszteroid-profil elemzés A vizeletszteroid-profil módszer alapja C. H. L. Shackleton és mtsai által kidolgozott szteroid-profil meghatározás volt, melyet továbbfejlesztettünk. Minták győjtése és tárolása: • 24 órás vizelet, fagyasztva (-20°C) tárolva
Mintaelıkészítés: • Szteroidok kivonása (Szilárd fázisú extrakcióval, oktadecilszilán fázist tartalmazó Sep-pak C18 oszlopokon).
• Konjugátumok hidrolízise és kivonása (β-glükuronidáz-arilszulfatáz enzim keverék alkalmazása, ismételt szilárd fázisú extrakció).
• Származékképzés • Tisztítás
Vizeletszteroid-profil elemzés Gázkromatográftömegspektrometria • Minıségi analízis (Szelektív ionkövetés, három jellemzı tömegion).
• Mennyiségi analízis (Belsı standard módszer, több-pontos kalibráció külön az alacsony és magas koncentráció tartományra).
Mérési körülmények: 5975 tömegspektométer
detektorral felszerelt 6890N gázkromatográf, HP-1-MS oszlop, He vivıgáz, split-splitless mintabemérı, elektronionizáció 70 eV-on, 2 µl minta bemérése splitless injektálási technikával, automata mintabemérés, hımérsékleti program.
A szteroid-profil segítségével meghatározott vizeletszteroidmetabolitok 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
Triviális név Androszteron Etiokolanolon Dehidroepiandroszteron 11β-hidroxi-androszteron 11β-hidroxi-etiokolanolon 16α-hidroxi-DHEA Pregnándiol Pregnántriol Pregnéndiol Androszténtriol Tetrahidro-11-deoxikortizol 11-keto pregnántriol Pregnéntriol Tetrahidrokortizon Tetrahidro-11-dehidrokortikoszteron Tetrahidrokortikoszteron Allo-tetrahidrokortikoszteron Tetrahidrokortizol Allo-tetrahidrokortizol α-kortolon β-kortolon α-kortol Kortizol
Rövidítés An Et DHEA 11-OH-An 11-OH-Et 16-OH-DHEA PD PT ∆5-PD ∆5-AT THS 11-O-PT ∆5-PT THE THA THB aTHB THF aTHF α-CL β-CL α-C F
Tudományos név 5α-androsztán-3α-ol-17-on 5β-androsztán-3α-ol-17-on 5-androsztén-3β-ol-17-on 5α-androsztán-3α,11β-diol-17-on 5β-androsztán-3α,11β-diol-17-on 5-androsztén-3β,16α-diol-17-on 5β-pregnán-3α,20α-diol 5β-pregnán-3α,17α,20α-triol 5-pregnén-3β,20α-diol 5-androsztén-3β,16α,17β-triol 5β-pregnán-3α,17α21-triol-20-on 5β-pregnán-3α,17α,20α-triol-11-on 5-pregnén-3β,17α,20α-triol 5β-pregnán-3α,17α,21-triol-11,20-dion 5β-pregnán-3α,21-diol-11,20-dion 5β-pregnán-3α,11β,21-triol-20-on 5α-pregnán-3α,11β,21-triol-20-on 5β-pregnán-3α,11β,17α,21-tetrol-20-on 5α-pregnán-3α,11β,17α,21-tetrol-20-on 5β-pregnán-3α,17α,20α,21-tetrol-11-on 5β-pregnán-3α,17α,20β,21-tetrol-11-on 5β-pregnán-3α,11β,17α,20α,21-pentol-11-on 4-pregnén-11β,17α,21-triol-3,20-dion
A klinikai diagnosztikában leggyakrabban vizsgált, vizeletben ürülı szteroid-metabolitok eredete Koleszterin Cit P-450 koleszterin oldallánc hasítás 17α α-hidroxiláz
Pregnenolon
17α α-hidroxiláz/17, 20 liáz
17α α-OH-pregnenolon
17β β -hidroxi-szteroid-dehidrogenáz
Dehidroepiandroszteron
3β β -hidroxi-szteroid-dehidrogenáz
3β β -hidroxi-szteroid-dehidrogenáz 17α α-hidroxiláz
17α α-OH-progeszteron
Progeszteron
17α α-hidroxiláz/17, 20 liáz
17β β -hidroxi-szteroid-dehidrogenáz
Androszténdion
21-dezoxikortizol
11-dezoxikortikoszteron
3β β -hidroxi-szteroid-dehidrogenáz
21-hidroxiláz
11β β -hidroxiláz
21-hidroxiláz
Tesztoszteron
Aromatáz
11-dezoxikortizol
Aromatáz
Ösztron
11β β -hidroxiláz
11β β -hidroxiláz
Androszténdiol
Ösztradiol
17-hidroxi-szteroid-dehidrogenáz 11β β -hidroxiláz
21-dezoxikortizon
11β β -hidroxiláz
11β β -hidroxi-szteroid-dehidrogenáz
Kortikoszteron
11-hidroxi-androszténdion Kortizon
Kortizol
11β β -hidroxi-szteroid-dehidrogenáz
PD ∆5-PD
THA THB aTHB
11-O-PT
∆5-PT PT
Szérum
THS THE α-CL β-CL
THF aTHF α-C F
DHEA ∆5-AT 16-OH-DHEA
Vizelet An Et
11-OH-An 11-OH-Et
Vizeletszteroid-metabolitok, szérum szteroid-hormonok, szintézisben résztvevı enzimek. (Andrew, 2001; Homma és mtsai, 2003; Honour, 1997a közleményei alapján).
Congenitalis adrenalis hyperplasia (CAH)
21-hidroxiláz hiány
−csökkent kortizol metabolitok −emelkedett 21-deoxi-szteroidok (17-OH-Pg, PT, 11-O-PT) és androgén metabolitok −enyhe formájában (néhány késın manifesztálódó formában is) a kortizol metabolitok szintje normális, de a 17-hidroxi-progeszteron és a kortizol metabolitok aránya megnövekszik
11β-hidroxiláz hiány 3β -hidroxi-szteroiddehidrogenáz hiány
−teljes defektusnál alig detektálhatók a kortizol metabolitok −emelkedett 11-deoxi-kortizol (THS) és 11 -deoxi-androgén metabolitok (An, Et) kortizol metabolitok −csökkent −emelkedett 3β -hidroxi-5-én szteroid szulfátok (p1.: ∆5-PT) −leányoknál túlzott, férfiakban elégtelen androgén termelés
17α -hidroxiláz hiány
−teljes defektusnál a kortizol és androgén metabolitok alig detektálhatóak −fı vizelet szteroidok a kortikoszteron metabolitjai (THB, aTHB)
StAR fehérje hiány Cushing szindróma hormontermelı tumorok androgéntermelés zavarai
−csökkent szteroid metabolit szintek −emelkedett az összes kortizol metabolit szintje
ivarmirigy tumorok
−bizonyos szteroidok szintje emelkedett (p1.: 3β -hidroxi-5-én szteroidok, 11-OH-An)típusú petefészek (PT), ill. here eredető metabolitok emelkedett −különféle
5α -reduktáz hiány
szintje (tesztoszteron és metabolitjai, és 3β-hidroxi-5-én szteroidok) −5α -redukált szteroidok alacsony szintje
mellékvese tumorok
−csökkent 5α /5β metabolit arány pl.: An/Et, THF/aTHF 17β -hidroxi-szteroiddehidrogenáz hiány alacsony ösztrogén termelés terhesség alatt hypothyreosis policisztás ovárium szindróma
−emelkedett An és Et szint
méhlepény-szulfatáz hiány −3β -hidroxi-5-én szteroidok emelkedett szintje a terhes nı vizeletében, alacsony −csökkentösztriol 5α /5βszint metabolit arány −emelkedett 5α /5β metabolit arány
16 éves, 21 hidroxiláz hiányban szenvedı nı vizelet mintájának szteroidprofil kromatogramja
Abundance
PT TIC: 2009sz0091.D\data.ms
220000 200000 180000 160000 140000 120000 100000 80000
11-O-PT 60000 40000 20000
20.00 Time-->
Idı (perc)
25.00
30.00
35.00
40.00
45.00
Köszönöm a figyelmet!
