UPAYA MEMACU PERTUMBUHAN LEAN DOMBA PEDAGING DENGAN MODULASI TESTOSTERON ENDOGEN MENGGUNAKAN EKSTRAK PASAK BUMI (Eurycoma longifolia JACK) ZUBIR

   

UPAYA MEMACU PERTUMBUHAN LEAN DOMBA PEDAGING DENGAN MODULASI TESTOSTERON ENDOGEN MENGGUNAKAN EKSTRAK PASAK BUMI (Eurycoma longifolia JACK)

ZUBIR

SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2012

   

   

PERNYATAAAN MENGENAI DISERTASI DAN SUMBER INFORMASI Dengan ini saya menyatakan bahwa disertasi Upaya Memacu Pertumbuhan Lean Domba Pedaging dengan Modulasi Testosteron Endogen Menggunakan Ekstrak Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack) adalah karya saya sendiri dengan arahan dari komisi pembimbing dan belum diajukan dalam bentuk apa pun kepada perguruan tinggi mana pun. Sumber informasi yang berasal atau kutipan dari karya yang telah diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir disertasi ini.

   

   

ABSTRACT ZUBIR. Lean Growth Promotion of Sheep by Endogenous Testosterone Modulation with Eurycoma Longifolia Jack Extract. Under direction of RUDY PRIYANTO, EDDIE GURNADI, and WASMEN MANALU. Pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack/ELJ) is frequently claimed to increase the expression of masculinity, including induced the lean growth. Bioactive components that play a role in this case was identified as a peptide compounds. The ELJ peptides potentially become a natural ingredients to improve carcass production and quality. The experiment was aim to obtain and characterization peptide extract from root of ELJ, to assess the ability of some protection methods of the peptide in the rumen and to observe the influence of ELJ peptide supplementation on growth, carcass and meat characteristic of rams. The experiment was conducted in three phases. The first phase was extraction and characterization of peptides from ELJ root. Extraction was based on the solubility properties of peptides in the acid-base solution. Characterization of the extract included proximate analysis, electrophoresis and GC-MS. The second phase studied ELJ peptide protection in the in vitro rumen with three methods. These methods were polymeric encapsulation with a primary coat are 2-vinylpyridine+ styrene, hydrophobic encapsulation with stearic acid+beeswax and binding peptide by tannic acid. The third phase was applied to sheep meat. Sixteen rams were divided into 4 treatment groups in the form of ELJ extract suplemented 0, 1.5, 3 mg/kg BW for P0, P1, P2 respectively and LJ100™ 1 mg/kg BW for P3. Observations were made on growth, feed efficiency, body composition, carcass and meat traits. The yield of the extraction from the ELJ root was 0.53% in dry matter with a peptide content of 34.57% and peptide recovery was as much as 8.30%. The resulting peptides have a wide range of bands, but all have a molecular weight below 45 kD. Hydrophobic encapsulation gave the most protective peptide based on organic matter digestibility and NH3 production. There were no significantly differences between treatments on ram growth performance, carcass yields and plasma testosterone level. However, the treatment affected significantly (P<0.05) on Hb, RBC and carcasses composition. The fat weight of dissected carcass of P2 and P3 were significantly lower than P0 (P<0.05) and P1 (P<0.01). Fat reduction occurred in all wholesale cuts and more apparent in the fore saddle. The rams with P2 and P3 treatment had significantly heavier lean weight compared to those with P0 and P1 (P<0.05). ELJ treatment did not have any significant effect on weight of bones, wholesale cuts, noncarcass components and meat properties. Keywords : Ram, lean growth, testosterone, Eurycoma longifolia Jack

   

   

RINGKASAN ZUBIR. Upaya Memacu Pertumbuhan Lean Domba Pedaging dengan Modulasi Testosteron Endogen Menggunakan Ekstrak Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack). Dibimbing oleh RUDY PRIYANTO, EDDIE GURNADI, dan WASMEN MANALU. Pertumbuhan jaringan otot dalam upaya meningkatkan produksi lean telah banyak diupayakan melalui mekanisme hormonal terutama menggunakan androgen. Penggunaan hormon sintetis atau derivatnya sebagai pemacu pertumbuhan ternak hingga saat ini masih kontroversial karena efek karsinogenik dari residunya. Perolehan manfaat anabolik dari testosteron dapat diupayakan melalui peningkatan produksi testosteron endogen. Testosteron endogen suatu individu dinyatakan dapat meningkat setelah mengkonsumsi preparat alami Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack/ELJ). Komponen bioaktif yang berperan dalam hal ini telah diidentifikasi merupakan senyawa peptida. Kemungkinan penggunaan peptida ELJ sebagai pemacu pertumbuhan otot ruminansia pedaging akan sangat relevan dan layak untuk dikaji. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan ekstrak peptida akar ELJ dan mengungkap karakteristiknya, mengkaji upaya proteksi peptida ELJ di rumen dengan enkapsulasi dan menguji kemampuan peptida ELJ terenkapsulasi dalam meningkatkan pertumbuhan lean dan efisiensi pakan domba jantan. Penelitian dilakukan dalam 3 tahap. Tahap I adalah ekstraksi dan karakterisasi peptida/protein akar ELJ. Ekstraksi didasarkan pada sifat kelarutan senyawa protein pada suasana asam-basa. Guna memperoleh ekstrak yang optimal, pengaruh ukuran partikel, pH dan lama maserasi diamati. Karakterisasi ekstrak meliputi komposisi kimia ekstrak berdasarkan analisis proksimat dan GCMS, serta bobot molekul peptida/protein dengan elektroforesis. Tahap II, kajian proteksi peptida ELJ di rumen dengan enkapsulasi. Tiga metode proteksi diujikan dalam suasana rumen secara in vitro. Ketiga metode tersebut adalah enkapsulasi polimerik dengan penyalut utama 2-vinylpyridine+styrene, enkapsulasi hidrofobik dengan penyalut utama asam stearat+malam dan pereaksian peptida dengan asam tanat. Pengamatan dilakukan terhadap kecernaan bahan organik dan produksi gas amoniak. Tahap III, uji kemampuan peptida ELJ terenkapsulasi dalam meningkatkan performa pertumbuhan dan karakteristik karkas. Enam belas ekor domba jantan priangan umur ± 1 tahun dengan bobot awal 30.43 ± 1.41 kg dipelihara dalam kandang individual selama 108 hari. Pakan diberikan berupa rumput gajah dan konsentrat. Sebelum pemberian konsentrat setiap pagi, terlebih dahulu diberikan suplemen yang dibedakan atas empat macam, masing-masing untuk empat ekor domba. Keempat macam perlakuan suplemen tersebut adalah P0, P1, P2, dan P3, masing-masing dengan kandungan peptide ELJ 0, 1.5, 3 dan 1 mg/kg bobot badan. Peptida ELJ pada perlakuan P1 dan P2 merupakan hasil ekstraksi sendiri, sedangkan pada P3 merupakan produk komersial mengandung eurypeptide®. Pengamatan dilakukan terhadap kadar testosteron plasma, profil darah, neraca N, pertumbuhan, konversi pakan, komposisi tubuh, kualitas karkas dan sifat fisik daging. Data dianalisis kovariansi dengan bobot tubuh kosong sebagai kovariat bobot karkas dan bobot setengah karkas sebagai kovariat komponen karkas dan potongan komersial.

   

Kegiatan ini mendapatkan recovery ekstrak peptida/protein akar pasak bumi sebanyak 8.30% dan ekstrak kering sebanyak 0.53% dengan kandungan protein kasar 34.57%. Peptida LJ 100 menghasilkan band tunggal pada jarak 5.1 cm dengan bobot molekul 17.66 kD, sedangkan peptida hasil ekstraksi sendiri memiliki sebaran band yang luas dengan 2 band utama. Peptida dengan bobot molekul yang sama dengan eurypeptide® juga sudah termasuk, meski bukan merupakan fraksi yang dominan. Metode enkapsulasi hidrofobik dengan bahan utama asam stearat memiliki kemampuan proteksi lebih tinggi dibanding enkapsulasi dengan bahan lain berdasarkan kecernaan bahan organik dan produksi gas NH3 rumen. Pertambahan bobot badan harian (PBBH) rerata seluruh ternak adalah 77.7 ± 10.9 g/hari (CV 14.0%). Perbedaan pertumbuhan tersebut di antara perlakuan berbeda tidak nyata, mengindikasikan bahwa sulplementasi peptida pasak bumi tidak berpengaruh pada pertumbuhan ternak. Kecernaan bahan kering pakan juga tidak dipengaruhi oleh perlakuan. Peningkatan neraca N cenderung lebih tinggi pada kelompok ternak yang diberi perlakuan peptida ELJ terutama P2 dan P3. P3 memperlihatkan peningkatan yang konstan pada semua variabel, sedangkan P2 berfluktuasi. Kecernaan BK pakan P2 paling banyak penurunannya di antara semua perlakuan, namun jumlah N yang diretensinya juga paling tinggi, terindikasi bahwa tidak ada hubungan retensi N dengan tingkat kecernaan BK. Hal ini kemungkinan karena faktor-faktor yang pengaruhnya dominan, bervariasi dalam rank yang sempit, sehingga dalam hal ini pengaruh tersebut tidak terlihat. Pengamatan terhadap kadar testosteron plasma memperlihatkan bahwa kadar testosteron P2 dan P3 terlihat lebih tinggi, namun tidak nyata secara statistik. Pengamatan terhadap profil darah memperlihatkan bahwa kadar haemoglobin (Hb) dan butir darah merah (BDM) lebih tinggi pada perlakuan P2 dan P3 dibanding P1, namun berbeda tidak nyata dengan P0. Konsentrasi haemoglobin ditentukan dan terkait dengan perubahan konsentrasi testosteron serum. Bobot potong rerata keseluruhan domba pada penelitian ini adalah 37.869 ± 968 g (CV = 2.56%) sehingga keseragamannya cukup tinggi. Keseragaman tersebut berkurang pada bobot tubuh kosong, dimana rerata totalnya 29.657 ± 1.185 g (CV = 4.0%). Hal ini disebabkan keragaman yang tinggi dari isi saluran pencernaan. Produksi karkas sangat dipengaruhi oleh bobot potong ternak dan perlakuan berpengaruh tidak nyata pada produksi karkas. Rerata keseluruhan bobot karkas adalah 16.973 dengan koefisien variasi 6%, sedangkan rerata persentase karkas terhadap bobot tubuh kosong adalah 57.2% dengan koefisien variasi 2.71%. Lemak tubuh P2 dan P3 nyata lebih rendah dibanding P0 dan P1. P1 meski mendapatkan perlakuan ELJ namun masih memiliki kadar lemak yang tinggi karena memiliki bobot karkas yang juga tinggi. Persentase lemak tubuh meningkat seiring peningkatan bobot karkas dan bobot potong. Kebalikan dari bobot lemak, bobot otot P2 dan P3 nyata lebih tinggi (P<0.05) dibanding P0 dan P1. Bobot tulang dan bobot potongan komersial berbeda tidak nyata di antara perlakuan. Suplementasi ekstrak ELJ 1.5 mg/kg bobot badan (P1) tidak berpengaruh pada komposisi karkas.

   

Sebaran lemak diseksi memperlihatkan bahwa perbedaan dengan signifikansi yang lebih tinggi terlihat pada bagian perempat depan, dimana P0 dan P1 berbeda nyata dengan P2 dan P3. Hal ini menunjukkan bahwa meski penurunan bobot lemak tubuh akibat perlakuan terjadi pada semua bagian tubuh, namun lebih nyata terlihat pada bagian perempat depan. Perbedaan bobot otot total antarperlakuan juga diikuti oleh perbedaan bobot otot masing-masing potongan komersialnya dengan pola yang sama. Bobot otot perempat belakang berbeda tidak nyata antarperlakuan, sama seperti komponennya yaitu potongan leg, loin dan flank, namun pola antar perlakuannya tidak sama. Sebaliknya, bobot otot perempat depan berbeda nyata dengan pola yang sama dengan bobot otot karkas. Ada indikasi bahwa peningkatan bobot otot karkas akibat perlakuan lebih mengarah pada perototan di bagian perempat depan. Bobot tulang antar-perlakuan pada semua potongan berbeda tidak nyata. Perbedaan yang nyata juga tidak ditemukan pada bobot komponen nonkarkas, sifat fisik daging dan komposisi kimia daging. Perbedaan yang nyata pada bobot lemak subkutan dan intermuskuler tidak diikuti oleh perbedaan lemak intramuskuler. Lemak intramuskuler berperan penting dalam menentukan nilai sensori daging, dan perlakuan suplementasi ELJ tidak mengurangi nilai tersebut. Penelitian ini menghasilkan kesimpulan bahwa suplementasi ekstrak peptida pasak bumi dan Eurypeptide® masing-masing sebanyak 3 dan 1 mg/kg bobot badan dapat menurunkan bobot lemak dan meningkatkan bobot otot karkas domba jantan priangan. Penurunan bobot lemak dan peningkatan bobot otot tersebut lebih mengarah pada bagian perempat depan. Perlakuan suplementasi Pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack) berpengaruh tidak nyata pada bobot tulang dan bobot potongan komersial karkas dan karakteristtik daging. Meski perlakuan terlihat dapat “membelokkan” pembentukan lemak menjadi otot namun pengaruh-nya terhadap pertumbuhan dan produksi karkas domba tidak nyata.

Kata Kunci : Domba, pertumbuhan lean, testosteron, pasak bumi

   

   

© Hak Cipta milik IPB, tahun 2012 Hak Cipta dilindungi Undang-Undang Dilarang mengutip sebagian atau seluruh karya tulis ini tanpa mencantumkan atau menyebutkan sumbernya. Pengutipan hanya untuk kepentingan pendidikan, penelitian, penulisan karya ilmiah, penyusunan laporan, penulisan kritik atau tinjauan suatu masalah; dan pengutipan tersebut tidak merugikan kepentingan yang wajar IPB Dilarang mengumumkan dan memperbanyak sebagian atau seluruh karya tulis dalam bentuk apa pun tanpa izin IPB

   

   

UPAYA MEMACU PERTUMBUHAN LEAN DOMBA PEDAGING DENGAN MODULASI TESTOSTERON ENDOGEN MENGGUNAKAN EKSTRAK PASAK BUMI (Eurycoma longifolia JACK)

ZUBIR

Disertasi Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Doktor pada Program Studi Ilmu Ternak

SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2012

   

Penguji pada Ujian Tertutup: 1. Prof. Dr.Ir. Komang G. Wiryawan (Staf Pengajar Departemen Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan Fakultas Peternakan Institut Pertanian Bogor) 2. Prof. Dr. Rahmat Herman, MVSc. (Staf Pengajar Departemen Ilmu Produksi dan Teknologi Peternakan Fakultas Peternakan Institut Pertanian Bogor) Penguji pada Ujian Terbuka : 1. Dr. Elizabeth Wina, M.Sc. (Peneliti Madya pada Balai Penelitian Ternak) 2. Prof. Dr. Ir. Ismet Inounu MS. (Ahli Peneliti Utama pada Pusat Penelitian dan Pengembangan Peternakan)

   

Judul Disertasi

:

Nama NRP Program Studi

: : :

Upaya Memacu Pertumbuhan Lean Domba Pedaging dengan Modulasi Testosteron Endogen Menggunakan Ekstrak Pasak Bumi (Eurycoma longifolia Jack) Zubir D 061060071 Ilmu Ternak

Disetujui

Komisi Pembimbing

Dr. Ir. Rudy Priyanto Ketua

Prof. Dr. Ir. Wasmen Manalu Anggota

Prof. Dr. drh. H.R. Eddie Gurnadi, MSc. Anggota

Diketahui

Koordinator Mayor Ilmu Produksi dan Teknologi Peternakan

Dr. Ir. Rarah. R. A. Maheswari, DEA.

Tanggal Ujian : 12 Januari 2012

Dekan Sekolah Pascasarjana IPB

Dr. Ir. Dahrul Syah, M.Sc.Agr.

Tanggal Lulus :

   

   

PRAKATA

Puji dan syukur atas segala rahmat dan karunia yang telah penulis terima dari Allah SWT, sehingga dapat melangsungkan penelitian hingga menulis disertasi ini. Penelitian dan karya tulis ini dapat terlaksana tidak terlepas dari arahan dan bimbingan dari komisi pembimbing. Oleh karenanya penulis mengucapkan terima kasih yang mendalam kepada Dr. Ir. Rudy Priyanto, Prof. Dr. drh. Eddie Gurnadi, MSc. dan Prof. Dr. Ir. Wasmen Manalu. atas semua bimbingan, saran, koreksi, motivasi dan kebijaksanaan yang telah diberikan kepada penulis. Penelitian yang bertemakan pemacuan pertumbuhan ternak pedaging dengan bahan alami ini dilaksanakan pada tahun 2009 dan 2010, didanai oleh Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian melalui program KKP3T. Terima kasih kepada Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian yang telah memberikan kesempatan dan biaya (baik pendidikan maupun penelitian) hingga penulis dapat menyelesaikan pendidikan S-3. Terima kasih juga penulis sampaikan kepada semua pihak yang telah turut membantu selama pelaksanaan penelitian hingga penyelesaian karya tulis ilmiah ini. Akhir kata, penulis berharap agar Disertasi ini tidak hanya bermanfaat sebagai pemenuhan syarat program Doktor, tetapi lebih jauh dari itu juga bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan dan teknologi terutama di bidang peternakan.

Bogor, Januari 2012

Zubir

   

   

RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Payakumbuh tanggal 22 Agustus 1969 dari pasangan Bapak H. Gazali dan Ibu Hj. Murnas dan merupakan anak kedua dari empat bersaudara. Pendidikan sarjana ditempuh di Fakultas Peternakan Universitas Andalas Padang, lulus pada tahun 1994. Melalui beasiswa Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian diperoleh kesempatan untuk melanjutkan pendidikan Strata 2 di Program Studi Ilmu Ternak Program Pasacasarjana Universitas Gadjah Mada Yogyakarta pada tahun 1999 hingga 2001. Tahun 2006 penulis diterima sebagai mahasiswa program doktor di Program Studi Ilmu Ternak Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor dengan beasiswa yang sama. Penulis bekerja sebagai staf peneliti di Balai Pengkajian Teknologi Pertanian Jambi sejak tahun 1998. Bidang penelitian yang menjadi tanggung jawab penulis adalah sistem usaha tani ternak.

   

   

DAFTAR ISI Halaman DAFTAR TABEL ................................................................................................... xiii DAFTAR GAMBAR .............................................................................................. xiv DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................... xv PENDAHULUAN ................................................................................................... 1 Latar Belakang ............................................................................................. 1 Tujuan Penelitian .......................................................................................... 3 Manfaat Penelitian ........................................................................................ 3 TINJAUAN PUSTAKA .......................................................................................... Pertumbuhan Jaringan Otot .......................................................................... Peran Testosteron dalam Pertumbuhan Otot ............................................... Metabolisme Testosteron ............................................................................ Sistem Pengendalian Hipotalamus-Hipofisis-Testis ................................... Teknik Pendeteksian Hormon ..................................................................... Potensi Pasak Bumi ...................................................................................... Peptida Bioaktif, Metode Ekstraksi dan Karakterisasinya ............................. Proteksi Komponen Bioaktif Pakan Ruminansia ......................................... Komposisi Tubuh Domba ...........................................................................

5 5 6 10 13 14 15 16 17 19

BAHAN DAN METODE ...................................................................................... Ekstraksi dan Karakterisasi Peptida Pasak Bumi ........................................ Upaya Proteksi Peptida dari Degradasi Rumen........................................... Uji Penggunaan Peptida ELJ Terproteksi pada Domba Pedaging ..............

23 23 28 31

HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................. Preparasi Ekstrak Peptida Pasak Bumi ........................................................ Karakteristik Ekstrak Peptida Akar Pasak Bumi ......................................... Proteksi Peptida Pasak Bumi dari Degradari Rumen In vitro...................... Pertumbuhan dan Konsumsi Ternak ........................................................... Utilisasi Nitrogen Pakan .............................................................................. Kadar Testosteron Plasma Darah ................................................................ Profil Darah ................................................................................................. Performa Produksi Karkas............................................................................ Komposisi Fisik Karkas .............................................................................. Komposisi Nonkarkas................................................................................... Karakteristik Daging .................................................................................... Pembahasan Umum ......................................................................................

37 37 42 47 49 50 52 53 54 55 61 62 63

KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................................

69

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................ 71 LAMPIRAN ........................................................................................................... 81

   

   

DAFTAR TABEL

Tabel

Halaman

1. Komposisi bahan kapsulasi hidrofobik penyalut peptida ..............................

29

2. Komposisi nutrisi bahan kering pakan rumput dan konsentrat selama pemeliharaan (% dari bahan kering)...............................................................

32

3. Hasil analisis proksimat komposisi nutrisi serbuk ELJ……….……….….…

38

4. Hasil pengerjaan ekstrak peptida akar ELJ………………..............................

39

5. Rerata perolehan ekstrak peptida dengan ukuran partikel, pH, serta lama perendaman yang berbeda ...............................................................................

40

6. Komposisi ekstrak peptida hasil analisis proksimat ..........................................

42

7. Jarak dan bobot molekul protein pada dua band dominan hasil SDS-PAGE ekstrak protein .................................................................................................

45

8. Kinerja pertumbuhan dan konsumsi pakan domba percobaan........................

50

9. Utilisasi nitrogen (N) pakan oleh domba menjelang dan akhir perlakuan.....

51

10. Kadar testosteron domba jantan pada hari ke-94 perlakuan suplementasi peptida pasak bumi……………………..…………………………………...

52

11. Profil darah domba jantan yang disuplementasi peptida pasak bumi .............

53

12. Produksi karkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi ...........................................................................................

54

13. Komponen diseksi karkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi...............................................................................

56

14. Potongan komersial karkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi ............................................................................... 57 15. Sebaran lemak diseksi pada potongan komersial karkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi…….……………

58

16. Sebaran otot pada potongan komersial karkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi………………………………...

59

17. Sebaran tulang pada potongan komersial karkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi……..….……………...….

61

18. Komponen nonkarkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi………………………………………………………….

62

19. Sifat fisik daging domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi…………………………………………………….…….

63

20. Hasil analisis proksimat otot domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi…………………..………..…………………….

63

   

   

DAFTAR GAMBAR

Gambar

Halaman

1. Skema biosintesis hormon testosteron.............................................

11

2. Mekanisme aksi hormon steroid dalam inti sel ..............................

12

3. Bagan tahapan pelaksanaan analisis SDS-PAGE...........................

25

4. Pengaruh ukuran partikel, tingkat basa, dan asam terhadap perolehan ekstrak peptida ..................................................................

41

5. Analisis gel SDS-PAGE peptida pasak bumi ..................................

44

6. Kromatogram endapan dari larutan asam proses ekstraksi peptida pasak bumi ........................................................................

46

7. Kromatogram supernatan dari larutan asam proses ekstraksi peptida pasak bumi ........................................................................

47

8. Grafik kecernaan (%) bahan organik sampel di dalam rumen secara in vitro......................................................................................

48

9. Grafik pembentukan gas NH3 (mM) dari sampel di dalam rumen secara in vitro .....................................................................................

49

   

   

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran

Halaman

1. Tampilan pengolahan data hasil elektroforesis .................................... 81 2. Tampilan pengolahan data analisis statistik dengan program SAS ..... 83

PENDAHULUAN Latar Belakang Program peningkatan produksi daging selain dapat dicapai melalui pendekatan kuantitatif juga dapat melalui pendekatan kualitatif berupa peningkatan kinerja produksi per individu ternak. Peningkatan produksi daging per individu terutama pada fase finishing dapat memberikan sumbangan sebesar 38% terhadap peningkatan produksi daging ruminansia (Parakkasi 1998). Pemeliharaan ternak fase akhir atau usaha penggemukan bertujuan untuk mendapatkan laju peningkatan bobot badan yang tinggi dengan pemberian pakan berkualitas dalam waktu singkat. Energi pakan mencapai kulminasi efisiensi pada titik tertentu dari laju pertumbuhan, meski bobot badan masih meningkat, namun komponen tubuh yang banyak berkembang hanya lemak. Saat penyiapan karkas, lemak nonedible ditrimming untuk dibuang atau dijual dengan harga yang rendah. Kondisi ternak dengan perlemakan tinggi memiliki harga per kg bobot hidup lebih rendah. Fenomena tersebut juga terjadi pada ternak domba, di mana domba ekor gemuk memiliki harga per kg bobot hidup lebih rendah dibanding domba ekor tipis. Memaksimalkan produksi daging per individu ternak dengan potensi individu yang ada dapat dilakukan melalui perbaikan manajemen pemeliharaan, perbaikan kualitas pakan, pemberian zat aditif, dan pemacu pertumbuhan. Zat pemacu pertumbuhan yang umum digunakan adalah hormon atau bahan sintetis sejenisnya, yang telah cukup lama dikenal dalam praktik dunia peternakan. Hormon Pemacu Pertumbuhan (HPP) telah dirasakan manfaatnya bagi perkembangan usaha ternak pedaging di negara-negara yang tidak dilarang penggunaannya. HPP dapat memperbaiki konversi pakan, meningkatkan hasil dan kualitas karkas, menurunkan kandungan lemak, dan mengurangi polusi dari limbah karena berkurangnya eskresi nitrogen. Penggunaan HPP hingga saat ini masih mengalami kontroversi, karena dapat menimbulkan efek karsinogenik bagi konsumen. Pelarangan penggunaan HPP diberlakukan di banyak negara termasuk Indonesia yang menerapkan Precaution Principles yang lebih baik dibanding Risk

2 Management. Bahan pengganti HPP dengan manfaat yang sama serta risiko minimal perlu diupayakan karena akan menjadi solusi terbaik. Tanaman pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack /ELJ) telah lama dikenal masyarakat

Indonesia

sebagai

tanaman

obat-obatan

yang

berkhasiat

menyembuhkan berbagai penyakit. Lebih jauh ekstrak ELJ telah dilaporkan memiliki sifat afrodisiak, aktivitas cytotoxic, antimalari, anxiolytic, dan antiulcer, serta hepatoprotektor. Studi fitokimia yang dilaksanakan pada ELJ menunjukkan bahwa tanaman tersebut memiliki serangkaian senyawa kuasinoid (seperti eurycomalacton, eurycomanon, dan eurycomanol) yang terutama bertanggung jawab atas rasa pahit, triscullanestype triterpenes, turunan squalene, biphenylneo-lignans, canthin-6-one dan β-carboline alkaloids (Bedir et al. 2003). Meski memiliki banyak khasiat, tanaman ELJ lebih populer dengan fungsi afrodisiak untuk meningkatkan vitalitas pria. Kemampuan afrodisiak yang dimiliki ELJ terutama karena tanaman ini dapat meningkatkan kadar testosteron plasma darah. Testosteron adalah hormon steroid yang terutama diproduksi testis, bekerja memacu pertumbuhan genital lelaki, menentukan karakter seksual sekunder lelaki dan bersifat anabolik. Aksi hormon ini dalam anabolisme protein, meningkatkan otot skeletal, retensi nitrogen, dan mengurangi amonia dalam darah (Schmitt 1976). Testosteron meningkatkan massa otot melalui peningkatan sintesis protein otot sekitar 27% (Griggs et al. 1989). Hasil studi Hamzah dan Yusof (2003) menunjukkan bahwa suplementasi ekstrak ELJ 100 mg/hari selama 5 minggu dapat meningkatkan massa tubuh tanpa lemak, kekuatan dan ukuran otot serta mengurangi lemak tubuh dibanding kontrol. Sejauh ini belum ditemukan hasil penelitian yang memanfaatkan ekstrak tanaman ELJ sebagai pemacu pertumbuhan ternak pedaging, khususnya ruminansia. Aplikasi manfaat ELJ umumnya ditujukan pada manusia dan hewan coba, pemberiannya selalu dilakukan per oral. Mengingat ternak ruminansia memiliki sistem pencernaan yang khas, maka diperlukan teknik khusus dalam penyajiannya. Penelitian ini mengkaji kemungkinan pemanfaatan ekstrak tanaman

3 tersebut sebagai agen pemacu pertumbuhan lean ruminansia pedaging dengan menggunakan ternak domba sebagai model. Tujuan Penelitian 1. Mendapatkan ekstrak peptida akar tanaman pasak bumi dan mengungkap karakteristiknya. 2. Mengevaluasi teknik proteksi sediaan peptida dari degradasi rumen 3. Mengamati pengaruh pemberian peptida pasak bumi pada performa pertumbuhan, karkas, dan daging domba jantan. Manfaat Penelitian 1. Memperkaya khasanah pengetahuan tentang cara pemberian ekstrak atau komponen bioaktif tanaman pada ternak ruminansia untuk meningkatkan bioavailabilitasnya. 2. Mengungkap potensi alternatif fungsi tanaman obat Indonesia dan meningkatkan peluang pemasarannya. 3. Memberikan teknologi alternatif dalam usaha meningkatkan kualitas karkas ternak pedaging.

4

5 TINJAUAN PUSTAKA Pertumbuhan Jaringan Otot Pertumbuhan merupakan proses terjadinya perubahan ukuran tubuh dalam suatu organisme sebelum mencapai dewasa, sedangkan perkembangan adalah produk hasil perbedaan pertumbuhan dari masing-masing bagian tubuh suatu organisme (Butterfield 1988). Perubahan ukuran meliputi perubahan bobot hidup, bentuk dimensi linier dan komposisi tubuh termasuk pula perubahan pada komponen-komponen tubuh seperti otot, lemak, tulang dan organ dalam serta komponen kimia terutama air, lemak, protein, dan abu (Soeparno 2005). Tumbuh kembang dipengaruhi oleh faktor genetik, pakan, jenis kelamin, hormon, lingkungan, dan manajemen (Judge et al. 1989). Pertumbuhan ternak terdiri atas tahap cepat yang terjadi mulai awal sampai pubertas dan tahap lambat yang terjadi pada saat kedewasaan tubuh telah tercapai (Tillman et al. 1998). Saat kecepatan pertumbuhan mendekati konstan, kemiringan kurva, hampir tidak berubah, dalam hal ini pertumbuhan otot, tulang dan organ-organ penting mulai berhenti, sedangkan penggemukan (fattening) mulai dipercepat (Judge et al. 1989). Pertumbuhan jaringan otot merupakan tujuan akhir dari berternak hewan pedaging, hal ini dicapai melalui dua bioproses pokok, yaitu asupan protein dan perkembangbiakan sel otot. Asupan protein adalah fungsi dari sintesis dan degradasi protein. Perkembangbiakan sel miogenik dan asupan protein otot dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti hormonal atau agen neurotropik, latihan, luka dan penyakit (Allen et al. 1979). Perkembangbiakan sel otot dapat dibedakan atas tahapan sebelum lahir dan sesudah lahir. Pertumbuhan otot sebelum lahir ditandai sebagai periode hiperplasia serabut otot, sebaliknya pertumbuhan setelah lahir terutama akibat hipertropi. Peningkatan jumlah serabut otot setelah kelahiran meski sangat kecil, tetapi beberapa studi telah menunjukkan bahwa proliferasi sel miogenik tidak berhenti pada saat lahir. Hal ini dibuktikan dengan peningkatan total DNA otot yang luar biasa setelah lahir (Allen et al. 1979).

6 Hipertropi otot rangka dimulai dengan kejadian mikrotrauma pada jaringan otot terlatih. Sel yang membangun jaringan (serabut otot), memperoleh inti tambahan dari sel satelit yang aktif yang melebur kepada sel otot dewasa. Sel satelit dan sinyal yang mengaktifkannya dipercaya sebagai rahasia di balik hipertropi otot (Hawke & Garry 2001). Suatu usaha untuk mencegah trauma selanjutnya, nukleus yang jumlahnya telah meningkat karena pensinyalan yang dibuat oleh latihan dan integrasi dari sel satelit, meningkatkan sintesis protein sarkomer, seperti aktin dan miosin, meningkatkan ukuran dari miofibril yang membangun isi sel tersebut. Peningkatan protein kontraktil meningkatkan kekuatan otot, berkontribusi kepada peningkatan ukuran sarkomer dan membuat penampang otot seperti sebuah silinder yang menjadi lebih besar. Sel otot tersebut tidak terbagi, peningkatan ukuran terjadi hanya pada taraf sarkomer (Russell et al. 2000). Peran Testosteron dalam Pertumbuhan Otot Pertumbuhan ternak diatur oleh hormon baik secara langsung maupun tidak langsung (Soeparno 2005). Faktor endokrin mempengaruhi pertumbuhan otot dan perkembangannya sepanjang hidup, berlebih atau berkurangnya hormon mempengaruhi struktur dan fungsi otot secara berlawanan (Veldhuis et al. 2005), terutama androgen yang berhubungan dengan ukuran otot dan kekuatan, dengan suatu hubungan yang kompleks antara taraf androgen dengan kinerja mekanis. Androgen dan latihan telah memperlihatkan dampaknya pada ukuran serta kekuatan otot baik secara tunggal maupun kombinasi (Bhasin et al. 1996). Serabut otot sebagai anatomi lanjut otot rangka, responsif terhadap latihan dan faktorfaktor endokrin. Secara sederhana sehubungan dengan penggunaan energi, serabut otot dikelompokkan atas serabut "kejang lambat" (tipe I) dan "kejang cepat" (tipe II) yang lebih lanjut dibagi lagi atas tipe IIa dan tipe IIb. Testosteron merangsang hipertropi kedua serabut otot tipe I dan II (Kadi et al. 1999). Terapi testosteron pada lelaki tua yang memiliki kadar testosteron serum rendah dapat meningkatkan kinerja dan kekuatan fisiknya lebih dari 36 bulan, pemberian kombinasi dengan Finasteride dan tingginya taraf dihidrotestosteron

7 serum tidaklah penting (Page et al. 2005). Testosteron menginduksi peningkatan massa otot melalui hipertropi serabut otot (Sinha-Hikim 2002; Bhasin et al. 2003). Mekanisme aksi anabolik testosteron terhadap otot masih kurang dipahami. Secara umum dijelaskan bahwa testosteron meningkatkan saldo protein otot melalui stimulasi sintesis protein otot, menurunkan degradasi protein otot, dan meningkatkan penggunaan kembali asam amino (Arny et al. 1998). Peningkatan sintesis protein otot yang distimulasi testosteron adalah sekitar 27%, sebaliknya oksidasi leusin berkurang tipis sekitar 17%, namun sintesis protein tubuh total tidak berubah nyata. Morfometri otot menunjukkan peningkatan tidak nyata dalam diameter serabut otot (Griggs et al. 1989). Proporsi efek anabolik dari androgen dapat juga menjadi suatu anti-katabolik melalui suatu aksi anti-glukokortikoid (Danhaive & Rousseau 1988; Zhao et al. 2004). Hossner (2005) menyatakan bahwa androgen alami dan sintetik memiliki mekanisme aksi yang berbeda. Testosteron dan DHT meningkatkan sintesis maupun degradasi protein, meskipun pengaruh sintesisnya lebih dominan. Sebaliknya androgen sintetik TBA mengurangi sintesis maupun degradasi protein, meski pengaruhnya pada pengurangan degradasi protein lebih besar. Vektor selular kunci bagi androgen sehubungan dengan hipertropi otot adalah sel satelit (Chen et al. 2005). Sel satelit berlokasi di bawah basal lamina serabut sel dan merupakan suatu subtipe sel otot yang responsif terhadap adaptasi postnatal, tumbuh dan terbarui (Mauro 1961). Mereka memiliki bermacammacam potensi, termasuk proliferasi, peleburan atau transdiferensiasi (Zammit et al. 2004). Perlakuan androgen juga meningkatkan jumlah sel satelit pada orang muda (Sinha-Hikim et al. 2003). Faktor-faktor transkripsi yang merupakan myogenic regulatory factors (MRFs) bekerja pada sel satelit, terdiri atas miogenin; MRF4; MyoD dan Myf5, yang berekspresi secara anatomis dan bergantung pada waktu (Buckingham et al. 2003). Menurut Bhasin et al. (2003) testosteron meningkatkan tanggung jawab sel-sel punca pluripotent ke dalam garis turunan regenerasi otot dan menghambat diferensiasi mereka terhadap garis turunan regenerasi adiposa. Hipotesis bahwa target utama dari aksi androgen

8 adalah sel punca pluripotent menyatukan penjelasan atas pengaruh yang berlawanan dari testosteron terhadap otot dan lemak. Dua gen yang mungkin menengahi pengaruh testosteron adalah IGF-I (suatu regulator pertumbuhan pada jalur autokrin dan parakrin) dan androgen reseptor (AR), di sisi lain gen spesifik otot yang berperan negatif dalam pertumbuhan massa otot adalah miostatin (Mateescu & Thonney 2002). Veldhuis et al. (2005) menambahkan bahwa testosteron dan estradiol mengatur IGF-I bebas, IGFBP-1 dan konsentrasi IGF-I/IGFBP-1 dimerik. Peningkatan taraf IGF-I otot menstimulasi peningkatan proliferasi sel satelit, menghasilkan peningkatan pertumbuhan otot (White et al. 2003) dan memelihara tingginya jumlah proliferasi sel satelit pada suatu titik di dalam kurva pertumbuhan di mana jumlah dan aktivitas sel satelit normalnya menurun sehingga memperpanjang periode cepat pertumbuhan otot (Pampusch et al. 2003). Bukti-bukti bahwa aksi androgen pada otot berinteraksi dengan IGF-I semakin banyak, pada otot diafragma tikus terjadi peningkatan ekpresi mRNA IGF-I yang bergantung pada dosis ekspos androgen (Lewis et al. 2002). Peningkatan yang sama juga terjadi pada sel satelit sapi jantan yang diambil kemudian diperlakukan dengan berbagai konsentrasi androgen (menggunakan trenbolone) (Kamanga-Sollo et al. 2004). Sebaliknya Gibney et al. (2005) menyatakan bahwa efek anabolik testosteron tidak bergantung pada IGF-I. Hal ini disimpulkan dari percobaannya mengenai pengaruh growth hormone (GH) dan testosteron secara tunggal dan kombinasi terhadap metabolisme protein tubuh. Ditemukannya bahwa rangsangan GH meningkatkan sirkulasi IGF-I dan diperbesar oleh testosteron, IGF-I tidak meningkat dengan ketiadaan GH. Penggunaan testosteron dan GH bebas dan tambahan, mempengaruhi metabolisme protein, oksidasi lemak dan penggunaan energi istirahat. Suatu studi terhadap sepuluh lelaki tua yang diekspos secara berurutan dengan testosteron; GH atau keduanya, ekspresi gen IGF-I otot meningkat 1.9 kali dalam kelompok GH dan 2.3 kali pada kelompok testosteron+GH (Brill et al. 2002). Percobaan terakhir yang lebih besar (n=80) perlakuan acak terkontrol dari GH banding testosteron atau kedua-duanya, suatu pengaruh nyata secara statistik terhadap ukuran otot dan

9 komposisi tubuh hanya yang ditemukan di dalam kelompok kombinasi (Giannoulis et al. 2006). Uji in vitro menunjukkan bahwa tidak satupun dari hormon protein hipofisa anterior (GH, prolactin, LH, thyrotrophan) yang memiliki kemampuan secara langsung mempengaruhi proliferasi sel satelit, namun tidak demikian dengan faktor pertumbuhan fibroblast (Allen et al. 1986). Glukokortikoid sebaliknya merangsang atropi otot skeletal sehubungan dengan meningkatnya pengaturan oleh ekspresi gen miostatin (Ma et al. 2003). Kehilangan massa otot rangka dan kemunculan glukokortikoid bebas, secara parsial dapat ditolong dengan suatu penghambat proteasome yang kuat. Hal ini berhubungan dengan ekspresi mRNA dari

berbagai

faktor

yang

berperan

dalam

degradasi

tergantung

ubiquitinproteasome dan mungkin untuk mengendalikan perubahan model otot rangka tak bergerak selama atropi (Krawiec et al. 2005). Testosteron beraksi secara berbeda pada otot rangka dari bagian tubuh yang berbeda dimana ekpresi mRNA IGF-I dan AR berbeda nyata antara otot splenius dan semitendinosus, tetapi ekspresi miostatin berbeda tidak nyata (Mateescu & Thonney 2002). Perbedaan aksi steroid juga terlihat antarorgan, White et al. (2003) menemukan bahwa taraf mRNA IGFBP-3 dari hati lebih tinggi 24% pada steer yang diimplantasi Revalor-S®, sedangkan pada otot tidak berbeda. Taraf mRNA, IGFBP-5, HGF dan miostatin pada kedua organ tidak dipengaruhi perlakuan. Ekspresi reseptor androgen (AR) pada sel-sel CD34C, fibroblas, otot halus dan sel satelit telah diperlihatkan melalui pengujian immunohistokimia (Sinha-Hikim et al. 2004). Penggunaan β-adrenergic clenbuterol pada domba betina dapat menurunkan konsentrasi kolagen karena protein miofibril le bih dipilih untuk diproduksi, tetapi kelarutan kolagen tidak terpengaruh (Young et al. 1995). Testosteron merangsang peningkatan Ca intraseluler dengan mekanisme nongenomik dalam kultur miosit jantung tikus (Vicencio et al. 2006). Testosteron meningkatkan transportasi laktat, monokarboksilat pada otot skeletal tikus. Studi ini memperlihatkan bahwa testosteron merangsang peningkatan protein monocarboxylate transporter (MCT)1 dan MCT4 berikut kandungan

10 plasmalemanya pada otot skeletal. Bagaimanapun rangsangan testosteron bersifat spesifik jaringan dan ekspresi protein MCT1 tidak berubah pada jantung. Peningkatan transportasi laktat pada jantung oleh rangsangan testosteron tidak dapat diterangkan dengan perubahan kandungan MCT1 plasmalema, tapi pada otot skeletal peningkatan laju transportasi laktat berhubungan dengan peningkatan MCT1 dan MCT4 plasmalema (Enoki et al. 2006). Metabolisme Testosteron Testosteron adalah steroid dengan inti siklopentan-perihidro-phenantren dengan gugus keton pada posisi 3 dan gugus alkohol sekunder pada posisi 17. Senyawa ini berupa kristal putih yang tidak larut dalam air dan larut dalam pelarut lemak. Testosteron disintesis di dalam sel-sel Leydig (sel interstisial) yang tersebar dalam jaringan ikat antara tubulus seminiferus yang bergelung akibat rangsangan Luteinizing Hormone (LH) atau Interstitial Cell Stimulating Hormone (ICSH) (Murray et al. 1999). Biosintesis testosteron berasal dari kholesterol. Struktur kerangka C-27 pada kolesterol berasal dari Acetyl-CoA yang telah mengalami serangkaian peristiwa sebagai berikut : diawali pembentukan asetat menjadi mevalonat yang membutuhkan enzim HMG-CoA-reduktase kemudian diubah menjadi skualen dilanjutkan dengan lanosterol. Selanjutnya lanosterol akan diubah menjadi kolesterol sebagai produk intermediate dengan mengambil 3 gugus karbon. Selain sebagai prekursor hormon steroid, kolesterol yang banyak terdapat di membran sel juga merupakan salah satu komponen penting bagi kelangsungan hidup sel (Steimer 2003). Biosintesis hormon steroid termasuk testosteron dimulai dari pengubahan kolesterol menjadi pregnenolon. Pengaturannya diperantarai oleh peningkatan cAMP intraseluler ataupun oleh Ca2+ melalui jalur inositol trifosfat. Rangsangan terhadap cAMP dapat bersifat akut maupun kronis (dalam beberapa jam sampai hari). Rangsangan akut dimulai sejak pengiriman kolesterol ke dalam bagian dalam mitokondria dengan perantaraan Steroidogenic acute regulatory (StAR), sedangkan rangsangan kronis terjadi saat pengubahan kolesterol menjadi

11 p pregnenolon n. Proses konnversi berlanngsung di daalam mitokoondria pada stadium s ini d dengan mem mbutuhkan enzim e side chain c cleavaage (scc), N NADPH, oksigen serta s sitokrom P4 450 secara teerbatas sesuuai dengan kebutuhan k (G Gambar 1 daan 2). Ca2+ d dalam hal ini i berfungssi untuk meeningkatkan aktivitas ennzim scc (L Litwack & S Schmidt 20002b).

Gambar 1. Skema bio osintesis horrmon testosteeron (King & Marchesinni 2004) Keceppatan sekressi testosteron rata-rata sebesar 4-99 mg/d (13 3.9 – 31.2 n nmol/d) dallam kondisii normal paada jantan dewasa. Seebanyak 97% % hormon t testosteron di d dalam plaasma terikat oleh proteinn; 40% terikaat oleh β-gloobulin atau d disebut gonaadal steroid d binding gloobulin (GBG G), 40% albbumin dan 17% 1 terdiri a atas protein yang lain (William ( 19983). Senadaa dengan ituu Murray et al. (1999) m menyatakan bahwa teestosteron terikat dallam β-globbulin plasm ma dengan

12 Protein ini sering spesifiisitas, afinitaas yang relaatif tinggi, daan kapasitass terbatas. P dinam makan sex hoormone bindding globulinn (SHBG) dan d diprodukksi di dalam hati. SHBG G dan albumiin mengikat 97-99% horrmon testosteron yang beeredar dan hanya h sebagiian kecil darri testosteronn yang beradda dalam benntuk bebas ((biologis akttif) di dalam sirkulasi darah. Testossteron yang telah disek kresikan akan bersirkulaasi di ma kurang leb bih 30 samppai 60 menit (Guyton & H Hall 1996) dalam darah selam

Gamb bar 2. Mekannisme aksi hhormon sterooid dalam intti sel B Berbeda darri reseptor hormon h prootein, reseptoor steroid teerletak di dalam d sitoplaasma sel (Poollard 1999) atau inti seel (West et al. a 1990) (G Gambar 2). MulaM mula hormon maasuk ke dalaam sel denggan cara diffusi dipermuudah, dan seegera mengiikat reseptorr protein speesifik di dalaam sitoplasm ma. Reseptorr hormon steroid secaraa inaktif dipelihara dalaam suatu heaat shock protein 90 (H HSP 90). Appabila terjadii ikatan antaara hormon dan reseptorr, maka HSP P 90 menjaddi aktif dan akan melepaskan diri. Kemudian K ikatan hormoon dan resepptor akan seegera menujju ke nukleu us. Ikatan koompleks horrmon-reseptoor di dalam nukleus n akaan mempengaruhi koaktiivator dan faktor fa transkkripsi secara menyeluruhh untuk mennghasilkan suatu s

13 kompleks transkripsional aktif yang nantinya akan mempertinggi ekspresi target gen dan menimbulkan efek hormon steroid (West et al. 1990). Testosteron dapat bebas masuk ke dalam sitoplasma di dalam organ target. Gabungan hormon selanjutnya akan terikat ke dalam jaringan dan akan segera diubah menjadi dihidrotestosteron, suatu bentuk androgen yang paling aktif. Pengubahan bentuk testosteron menjadi dihidrotestosteron membutuhkan enzim intraseluler dari retikulum endoplasmik yakni 5α-reduktase. Proses tersebut terutama terjadi di dalam organ-organ target khusus seperti kelenjar prostat serta genetalia eksterna (Guyton & Hall 1996). Pengubahan menjadi bentuk aktif ini mengakibatkan aktivitas biologik seperti perkembangan organ asesori, distribusi rambut tubuh. Testosteron dan dihidrotestosteron juga beraksi secara lansung ke dalam muskulus. Testosteron dapat meningkatkan sintesis protein di dalam sel otot, sehingga membuat sel otot menjadi lebih kenyal (Brook & Marshall 1996). Testosteron yang terikat di dalam jaringan hati, akan diubah menjadi androsteron dan dehidroepiandrosteron (Guyton & Hall 1996), etiocholanolon, epiandrosteron (Felig et al. 1981). Metabolit tersebut kemudian secara serempak dikonjugasikan sebagai glukoronida atau sulfat (terutama glukoronida) agar dapat larut di dalam air (Steimer 2003). Konjugat kemudian akan dieksresikan ke dalam feses melalui usus dan empedu atau ke dalam urin melalui ginjal. Berdasarkan waktunya, metabolit yang terkonjugasi dengan glukoronat hanya membutuhkan waktu yang lebih singkat dalam tubuh dibandingkan dengan konjugat sulfat (Steimer 2003). Fraksi bebas testosteron masuk dalam sel cible, ikatan rangkapnya disaturasi oleh 5α-reduktase, dan diperoleh androstanolon aktif. Senyawa yang terakhir ini terikat pada protein sitoplasmik spesifik yang mengantar sampai pada intinya. Akibatnya mendorong sintesis RNA, aktivitasnya langsung pada otot, saluran Wolff, cartilage larynx dan sistem saraf pusat. Sistem Pengendalian Hipotalamus-Hipofisa-Testis Hormon protein yang mengatur fungsi gonad pada hewan jantan secara langsung terdiri atas tiga jenis yakni : Follicle Stimulating Hormone (FSH), Luteinizing hormone (LH) serta Prolactin (Jhonson & Everrit 1995). FSH dan LH

14 merupakan glikoprotein yang mempunyai 2 subunit polipeptida, sedangkan prolactin hanya terdiri atas polipeptida rangkai tunggal. FSH dan LH bekerja berdasarkan suatu kontrol dari faktor hipotalamik yang disebut dengan gonadotrophine-releasing hormone (GnRH). Pemberian GnRH dapat merangsang sekresi FSH dan LH dengan mekanisme kerja sebagai berikut : diawali dengan adanya sinyal yang merangsang sel penghasil GnRH yang ditransmisikan dari akson ke akhiran saraf untuk memasuki hipofisis secara fenestrasi. GnRH di dalam membran sel hipofisis, akan berikatan dengan reseptor melalui perantara protein-G. Ikatan hormon dan reseptor tersebut akan mengaktifkan enzim fosfolipase C. Enzim fosfolipase C menghidrolisis PIP2 membentuk diacylglycerol (DAG) dan IP3 (Inositol triPhosphat). Diasilgliserol mengaktifkan protein kinase C yang kemudian dapat melakukan fosforilase protein spesifik untuk mengangkut FSH dan LH keluar sel. IP3 yang berikatan dengan reseptor juga merangsang pelepasan ion Ca2+ sampai terjadi stimulasi enzim protein kinase C yang ikut berpartisipasi dalam pengangkutan FSH dan LH keluar sel (Litwack & Schmidt 2002a), namun infus GnRH dalam waktu yang lama justru akan menurunkan kadar LH dan testosteron (Jhonson & Everitt 1995). GnRH dalam aplikasinya tidak disekresikan secara terus menerus oleh hipotalamus, namun secara pulsatil selama beberapa menit dan terjadi secara periodik 1 sampai 3 jam sekali. Konsekuensinya, sekresi LH juga bersifat pulsatil. Pemberian GnRH secara terus menerus justru menghilangkan pengaruh GnRH yakni tidak disekresikannya baik LH maupun FSH (Guyton & Hall 1996). Aktivitas saraf yang menyebabkan pelepasan GnRH secara pulsatif terjadi di bagian mediobasal hipotalamus, khususnya di nukleus arkuatus. Daerah tersebut mengendalikan aktivitas seksual baik pada jantan maupun betina (Jhonson & Everrit 1995) Teknik Pendeteksian Hormon Hormon setelah disekresikan oleh organ endokrin akan beredar ke seluruh tubuh dengan cara berikatan secara lemah dengan protein tertentu. Hormon tidak mempunyai saluran tersendiri, sehingga disekresikan melalui pembuluh darah.

15 Hormon dalam waktu tertentu akan dipecah menjadi senyawa yang tidak aktif yang selanjutnya akan disekresikan dari tubuh dalam bentuk feses maupun urin. Hormon yang tidak terikat di dalam jaringan akan diubah oleh hati sebelum diekskresikan lewat usus, atau ke dalam urin melalui ginjal (Guyton & Hall 1996). Berdasarkan hal tersebut deteksi suatu hormon dapat dilakukan melalui plasma/serum, feses, urin maupun saliva (Brook & Marshall 1996). Denhard (2004) melaporkan bahwa deteksi hormon dengan menggunakan saliva mempunyai pola yang sangat mirip dengan plasma, namun konsentrasi pada saliva jauh lebih rendah dibanding plasma. Berdasarkan manipulasi terhadap hewan, pengambilan sampel dikelompokkan menjadi invasif (plasma/serum, saliva) maupun non-invasif (feses dan urin) (Brook & Marshall 1996). Potensi Pasak Bumi Tanaman pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack /ELJ) telah lama dikenal masyarakat Indonesia sebagai tanaman obat yang berkhasiat menyembuhkan berbagai penyakit. Lebih jauh ekstrak ELJ telah dilaporkan memiliki sifat afrodisiak, aktivitas cytotoxic, antimalarial, anxiolytic, dan antiulcer. Studi fitokimia menunjukkan bahwa tanaman ELJ memiliki serangkaian senyawa kuasinoid (seperti eurycomalacton, eurycomanon, and eurycomanol) yang terutama bertanggung jawab atas rasa pahit, triscullanetype triterpenes, turunan squalene, biphenyl-neo-lignans, canthin-6-one dan β-carboline alkaloids (Bedir et al. 2003). Meski memiliki banyak khasiat, tanaman ELJ lebih populer dengan fungsi afrodisiak untuk meningkatkan vitalitas pria. Eurycoma longifolia umumnya distandardisasi pada eurycomanone, 13alpha(21)-epoxyeurycomanone, eurycomalactone, dan 14,15beta-dihydroxyklaineanone sebagai marker acuan untuk ekstrak organik, sedangkan quassinoid dan glikoprotein yang lebih polar digunakan sebagai standar untuk ekstrak dengan air (Sambandan et al. 2006) . Hasil pengamatan Hamzah dan Yusof (2003) memperlihatkan bahwa larutan ekstrak Eurycoma longifolia Jack meningkatkan massa bebas lemak, mengurangi lemak tubuh, serta meningkatkan kekuatan dan ukuran otot, dan demikian mungkin memiliki suatu efek ergogenik. Suplementasi 100 mg/hari eurycoma

16 longifolia pada pria dapat meningkatkan massa lean tubuh 2.13 kg dan menurunkan lemak 2.86%. Chan (2000) menyatakan bahwa ekstrak ELJ dapat meningkatkan kadar testosteron sehingga disebutnya sebagai testosterone booster, namun kenaikan kadar hormon testosteron tersebut tidak akan lebih dari 400%. Tikus yang diberi ekstrak ELJ 28 mg/kg BB, kadar testosteronnya nyata lebih tinggi dibanding perlakuan kontrol negatif tragacanth 1%, tetapi berbeda tidak nyata dengan kontrol positif mesterolone 0.42 mg/kg BB (Nainggolan & Simanjuntak 2005). Lebih rinci dijelaskan Taufiqqurrachman (1999) bahwa pemberian ekstrak ELJ dosis 25 mg/kg BB dapat meningkatkan kadar LH 17.8% dan testosteron 99.5% pada tikus, namun jika dosisnya ditingkatkan 2 kali (50 mg) hasilnya tidak menjadi lebih baik, dengan peningkatan LH hanya 17.3% dan testosteron 93.2% dibanding kontrol. Sambandan et al. (2006) menemukan suatu komposisi dari fraksi ekstrak air ELJ yang mengandung glikopeptida dengan bobot molekul 4300 dalton dan disusun oleh sekitar 36 asam amino, adalah kelompok yang memiliki aktivitas meningkatkan sintesis testosteron. Peptida Bioaktif, Metode Ekstraksi dan Karakterisasi Peptida bioaktif adalah fragmen protein spesifik yang berdampak positif pada fungsi atau kondisi tubuh dan akhirnya dapat mempengaruhi kesehatan (Kitts & Weiler

2003).

Mereka

mempengaruhi

banyak

proses

biologi

termasuk

membangkitkan perilaku, saraf, hormonal, respons nutrisi dan gastrointestinal (Clare & Swaisgood 2000). Peptida bioaktif biasanya mengandung 3 -20 residu asam amino dan aktivitas mereka berdasarkan komposisi dan sekuen asam amino (Pihlanto-Leppa¨la¨ 2000) Metode ekstraksi untuk total peptida/protein maupun untuk fraksinasi selektif semuanya didasarkan pada perbedaan kelarutan senyawa tersebut dalam larutan akueus. Perubahan keadaan ionik dan pH umumnya digunakan untuk memperoleh interaksi elektrostatik minimal (Lillford 1998). Menurut Zayas (1997), kelarutan protein bergantung pada komposisi dan sekuen asam amino, bobot molekul, konformasi dan jumlah grup polar dan nonpolar pada asam amino. Faktor-faktor yang mempengaruhi kelarutan protein adalah 1) pH, bila kelarutan

17 protein diplotkan sebagai fungsi dari pH akan terbentuk kurva V dengan kelarutan terendah pada titik isoelektriknya. Kelarutan akan meningkat pada kondisi asam dan basa dan dapat dipertinggi dengan meningkatkan muatan protein; 2) kekuatan ion, garam dengan konsentrasi rendah (0.5-1.0 M) dapat meningkatkan kelarutan protein, tetapi di atas 0.15 M dapat menurunkan kelarutan protein tersebut; 3) pemanasan, kelarutan kebanyakan peptida akan menurun dengan perlakuan panas, tetapi pada suhu 40-50 oC kelarutannya meningkat; 4) skondisi proses, seperti pH ekstraksi dan presipitasi serta kecepatan pengadukan atau pencampuran mempengaruhi kelarutan peptida. Proteksi Komponen Bioaktif Pakan Ruminansia Proses pencernaan makanan pada ternak ruminansia relatif lebih kompleks dibandingkan proses pencernaan pada jenis ternak lainnya. Sistem pencernaan ruminasia memiliki suatu proses yang disebut memamah biak (ruminasi) dan tidak terlepas dari bantuan sejumlah mikroba. Mikroba rumen dapat dibagi dalam tiga grup utama yaitu bakteri, protozoa dan fungi (Czerkawski 1986). Bakteri rumen dapat diklasifikasikan berdasarkan substrat utama yang digunakan, karena sulit mengklasifikasikan berdasarkan morfologinya. Beberapa jenis bakteri yang dilaporkan oleh Hungate (1966) adalah (a) bakteri pencerna selulosa (Bakteroides succinogenes, Ruminococcus flavafaciens, Ruminococcus albus, Butyrifibrio fibrisolvens), (b) bakteri pencerna hemiselulosa (Butyrivibrio fibrisolvens, Bakteroides ruminocola, Ruminococcus sp), (c) bakteri pencerna pati (Bakteroides ammylophilus, Streptococcus bovis, Succinnimonas amylolytica), (d) bakteri pencerna gula (Triponema bryantii, Lactobasilus ruminus), (e) bakteri pencerna protein (Clostridium sporogenus, Bacillus licheniformis). Protein pakan di dalam rumen akan mengalami hidrolisis oleh enzim proteolitik menjadi asam amino dan oligopeptida. Asam-asam amino selanjutnya mengalami katabolisme menghasilkan amonia, VFA dan CO2. Amonia menjadi sumber nitrogen utama untuk sintesis de novo asam-asam amino bagi mikroba rumen. Amonia tersebut berkontribusi besar terhadap pulamonia rumen. Diperlukan kisaran konsentrasi amonia tertentu untuk memaksimumkan laju sintesis protein mikroba (Arora 1989).

18 Aksi mikroba ini juga diikuti kerugian tertentu, misalnya protein terlarut yang bernilai nutrisi tinggi dapat tercerna dan teraminasi di dalam rumen dan sebagian disintesis kembali ke dalam protein mikroba yang bernilai nutrisi lebih rendah. Asam amino yang merupakan unit penyusun molekul protein, juga secara kimia diubah oleh mikroorganisme rumen menjadi karbon dioksida, asam lemak terbang dan amonia. Suplementasi asam amino untuk ruminansia perlu disiapkan dalam suatu bentuk yang dapat mencegahnya dari degradasi kimia di dalam rumen dan memudahkan penyerapannya menjadi wujud yang tersedia secara biologis. Bermacam pendekatan telah digunakan untuk keberhasilan penyampaian asam amino atau analognya secara kimia bioequivalent pada lokasi penyerapan. Usaha ini telah difokuskan terutama pada metionin dan sedikit pada lisin, karena asam amino ini telah dikenal sebagai sesuatu yang dapat membatasi pertumbuhan dan produksi susu atau protein susu pada ruminansia di bawah beberapa kondisi pakan. Wujud asam amino yang terproteksi dari degradasi rumen dapat dikelompokkan ke dalam dua kategori umum. Pertama termasuk analog, derivat, atau senyawa polimer dari asam amino. Kategori yang kedua adalah asam amino terkapsulasi. Metode alternatif untuk mengurangi degradasi ruminal pada asam amino termasuk yang didasarkan pada perlakuan kimia atau fisika dari protein pakan atau suatu penghambatan degradasi mikroba pada asam amino dengan antibiotik dan senyawa kimia lainnya. Analog asam amino utama atau derivat yang telah dievaluasi kemampuannya untuk ketahanan degradasi mikroba adalah analog hidroksi metionina (MHA), N-(hydroxymethyl)-DL-methionine calsium dan mono-pIus di-N-(hydroxymethyl)-L-lysine kalsium. Banyak analog lainnya, derivat, dan bentuk polimer metionin dan lisin yang telah dievaluasi untuk stabilitas di dalam rumen secara in vitro dan in vivo (Papas et al. 1984). Beberapa macam ekstrak tumbuhan yang disalurkan melewati rumen telah dipelajari karakteristiknya oleh Cardozo et al. (2005). Hasilnya menunjukkan bahwa pengaruh ekstrak tumbuhan dalam fermentasi rumen pada pakan sapi pedaging dapat bergantung pada pH rumen. Ketika pH 5.5, bawang putih,

19 capsicum, yucca, dan kayu manis mengubah fermentasi mikroba rumen mengarah ke propionat, yang lebih efisien secara energi.

Komposisi Tubuh Domba Berg dan Butterfield (1976) mengemukakan bahwa bobot karkas adalah bobot hidup setelah dikurangi bobot saluran pencernaan, darah, kepala, kulit, dan keempat kaki mulai dari persendian carpus atau tarsus ke bawah. Dinyatakan bahwa dijumpai sedikit modifikasi, kadang-kadang dengan atau tanpa ginjal, lemak ginjal, lemak pelvis, lemak sekitar ambing, diaphragma dan ekor. Perbedaan sangat besar adalah lemak ginjal atau lemak pelvis termasuk ke dalam karkas atau tidak. Karkas sebagai satuan produksi dinyatakan dalam bobot karkas dan persentase karkas. Persentase karkas adalah perbandingan antara bobot karkas dengan bobot hidup saat dipotong (dikurangi isi saluran pencernaan dan urine) dikali 100 % (Judge et al. 1989; Berg & Butterfield 1976; Tulloh 1978). Menurut Berg dan Butterfield (1976) persentase karkas dipengaruhi oleh bobot karkas, bobot ternak, kondisi, bangsa ternak, proporsi bagian-bagian nonkarkas, ransum yang diberikan dan cara pemotongan. Herman (1993) menyatakan bahwa persentase karkas domba priangan adalah sebesar 55.1% dan domba Ekor Gemuk adalah sebesar 55.3% pada bobot potong 40 kg. Persentase karkas bervariasi karena umur dan perlemakan dari domba tersebut, sedangkan persentase tulang, otot dan lemak dalam karkas dipengaruhi oleh umur, bangsa dan perlemakan pada domba. Hasil penelitian Sugiyono (1997) mendapatkan bahwa bobot karkas domba lokal yang diberi pakan konsentrat biasa adalah sebesar 7.5 kg dari bobot hidup 19.3 kg dan persentase karkasnya 39.1%. Johnston (1983) menyatakan bahwa persentase karkas pada domba yang kurus dan kondisinya buruk

kurang dari 40%,

sedangkan pada kondisi gemuk persentase karkas dapat melebihi 60 %. Pendapat lain dikemukakan Tulloh (1978) bahwa apabila ternak tidak diberi makan atau minum untuk suatu periode tertentu (dua hari misalnya) maka persentase karkas akan meningkat karena berkurangnya jumlah urin dan feses selama periode tertentu. Komposisi pakan juga berpengaruh pada besarnya persentase karkas.

20 Ternak yang mendapat pakan hijauan dengan mutu yang rendah, mengandung lebih banyak digesta di dalam saluran pencernaannya dari pada ternak yang diberi pakan bermutu tinggi dengan proporsi biji-bijiannya yang tinggi. Ternak yang dipuasakan keragaman persentase karkasnya dapat mencapai 4% lebih besar (Tulloh 1978). Menurut Soeparno (2005) perbedaan komposisi tubuh dan karkas di antara bangsa ternak disebabkan oleh perbedaan ukuran tubuh dewasa atau perbedaan bobot pada saat dewasa. Komponen utama karkas terdiri atas jaringan otot, tulang dan lemak (Berg et al. 1978). Kualitas karkas sangat ditentukan oleh imbangan ketiga komponen tersebut. Tulang sebagai kerangka tubuh, merupakan komponen karkas yang tumbuh dan berkembang paling dini, kemudian disusul oleh otot dan yang paling akhir oleh jaringan lemak (Soeparno 2005). Proporsi komponen karkas dan potongan karkas yang dikehendaki konsumen adalah karkas atau potongan karkas yang terdiri atas proporsi daging tanpa lemak (lean) yang tinggi, tulang yang rendah dan lemak yang optimal (Natasasmita 1978). Komponen karkas yang dapat memberikan nilai ekonomis adalah lemak, karena lemak berfungsi sebagai pembungkus daging dan memberikan keempukan pada daging (Berg & Butterfield 1976). Kirton et al. (1974) menyatakan bahwa kandungan lemak pada domba memperlihatkan perbedaan yang nyata karena perbedaan bangsa dan jenis kelamin. Hasil penelitian Sugiyono (1997) mendapatkan bahwa domba lokal yang diberi pakan konsentrat biasa, persentase daging tanpa lemak (lean), lemak dan tulangnya berturut-turut adalah sebesar 62.63%, 5.42% dan 24% dari bobot setengah karkas. Herman (1993) dan Rachmadi (2003) menyatakan bahwa semakin tinggi bobot potong yang diperoleh menyebabkan bobot karkas segar dan persentase karkas akan semakin tinggi. Herman (1993) menyatakan bahwa pada bobot potong 17.5 kg, bobot karkas, otot, tulang dan lemak pada domba priangan berturut-turut adalah sebesar 8 290, 2 554, 720 dan 598 gram sedangkan untuk domba Ekor Gemuk berturut-turut 8 530, 2 521, 724 dan 794 gram. Rachmadi (2003) menyatakan bahwa domba yang diberi pakan konsentrat yang mengandung bungkil inti sawit sebanyak 45% mempunyai bobot tubuh kosong, bobot karkas

21 dan persentase karkasnya berturut-turut adalah sebesar 14.30 kg, 6.24 kg dan 43.57% dengan masa penggemukan enam bulan. Murray dan Slezacek (1979) melaporkan bahwa tidak ada perbedaan dalam proporsi daging, tulang dan jaringan ikat maupun perlemakan pada tingkat pemberian pakan yang berbeda pada domba, tetapi berbeda dalam depot lemak tubuhnya. Domba yang mendapat pakan lebih banyak mempunyai lemak subkutan lebih banyak, namun lemak intramuskuler lebih rendah.

22

23

BAHAN DAN METODE Penelitian ini akan dilaksanakan dalam tiga tahapan kegiatan, sebagai berikut : I.

Ekstraksi dan Karakterisasi Peptida ELJ a. Persiapan bahan baku Potongan akar kayu pasak bumi dijemur hingga cukup kering, kemudian

diserut hingga berbentuk serpihan halus. Serutan akar tersebut kemudian digiling menggunakan mesin tipe diskmill. Serbuk hasil gilingan kemudian diayak dengan lobang ayakan berdiameter 1 mm. Bagian yang tidak lolos mengalami proses ulang untuk dijemur, digiling, dan diayak kembali. b. Ekstrak peptida Lemak pada serbuk simplisia diekstrak menggunakan heksana. Sampel bebas lemak di tambah air (1:10) bersuhu 45 oC dan diaduk dengan magnetic stirer. pH diatur menjadi 10 - 10.5 menggunakan NaOH 2N. Maserasi selama 30 menit pada suhu 45 oC. Disentrifus 2000 rpm selama 15 menit. Supernatan diambil dan diatur pH-nya menjadi 4.5 dengan HCl 2N. Disentrifus 2000 rpm selama 15 menit, supernatan dibuang. Endapan ditambahkan air 200 ml (pencucian). Disentrifus 2000 rpm selama 15 menit, endapan dikeringkan dan dianalisis komposisinya. c. Analisis proksimat ekstrak peptida (AOAC, 1990) Kadar air ditentukan dengan menempatkan 1 gram sampel dengan cawan yang sudah diketahui bobotnya ke dalam oven udara panas pada suhu 105 oC. Sampel dianggap kering jika bobotnya sudah konstan, paling tidak selama 2 jam. Kadar air %

W –W W –W

Keterangan : W1 = bobot cawan dan sampel sebelum dipanaskan W2 = bobot cawan dan sampel setelah dikeringkan W = bobot cawan kosong

24 Kadar abu merupakan sisa dari pembakaran dengan tanur 5-10 gram sampel pada suhu 600 oC selama 2 jam x 100%

kadar abu %

Kadar protein ditentukan dengan metode Kjeldahl. Sebanyak 0.25 gram sampel dimasukkan kedalam labu kjeldahl 100 ml lalu ditambahkan selenium 0.25 gram dan 3 ml H2SO4 pekat. Selanjutnya didestruksi (dipanaskan dalam keadaan mendidih) selama 1 jam hingga larutan jernih. Setelah larutan dingin ditambahkan 50 ml akuades dan 20 ml NaOH 40% lalu didestilasi. Hasil destilasi ditampung dalam labu erlenmeyer yang berisi campuran 10 ml H3BO3 2% dan 2 tetes indikator Brom Cresol Green-Methyl Red berwarna merah muda. Destilasi dihentikan setelah volume hasil tampungan menjadi 10 ml dan berwarna hijau kebiruan. Destilat dititrasi dengan HCl 0.1 N sampai berwarna merah muda. Perlakuan yang sama dilakukan juga terhadap blanko. Perolehan kadar nitrogen total dihitung dengan rumus : Kadar N %

ml HCl – ml blanko x N HCl x 14.007 x 100 mg sampel

Kandungan protein kasar = %N x faktor koreksi (6.25) Kadar lemak ditentukan setelah kandungan lemak sampel diekstrak dengan pelarut heksan menggunakan labu soxhlet. Labu lemak dikeringkan di dalam oven, didinginkan dalam desikator dan ditimbang (x gram). Sampel sebanyak 5 gram ditimbang dan dibungkus dalam kertas saring kemudian dimasukkan ke dalam labu soxhlet. Sebanyak 70 sampai 100 ml heksan dimasukkan ke dalam labu lemak. Rangkaian alat soxhlet dipasang dan sampel diekstrak. Pelarut dikeluarkan dari dalam labu lemak, labu dikeringkan dan ditimbang (y gram). Kadar lemak

X 100%

Kadar karbohidrat ditentukan by difference. Kadar karbohidrat = 100% - (air + abu + protein + lemak) d. Pengukuran % Recovery Peptida Ekstrak % recovery = B/A (100%)

25 A = jumlah protein kasar serbuk bebas lemak B = jumlah protein kasar ekstrak yang diperoleh e. Elektroforesis gel poliakrilamid sodium dodesil sulfat (SDS-PAGE) metode Bollag dan Edelstein (1991) Penetapan bobot molekul fraksi-fraksi menggunakan metode SDS-PAGE (Laemli 1970 yang telah disistematis oleh Bollag dan Edelstein 1991) dilakukan dengan piranti elektroforesis gel poliakrilamid (PAGE) “Biometra”, bentuk plat gel vertical dengan ukuran gel 88 mm x 148 mm x 1 mm. Tahapan pekerjaan elektroforesis SDS-PAGE dapat dilihat pada Gambar 3. Pembuatan gel separasi

Pembuatan stacking gel

Persiapan sampel

Running gel

Pewarnaan gel

Destaining gel

Penentuan bobot molekul protein-protein yang terpisahkkan Gambar 3. Bagan tahapan pelaksanaan analisis SDS-PAGE Elektroforesis SDS-PAGE pada penelitian ini menggunakan sistem gel diskontinu. Konsentrasi gel separasi yang digunakan adalah 12% dan kosentrasi stacking gel adalah 4%. •

Pembuatan gel separasi

26 Persentase akhir akrilamit yang digunakan adalah 12%. Campuran larutan (8 ml, untuk 1 plate) yang digunakan sebagai berikut : 40% akrilamid/1.1 bisakrilamid

2.40 ml

4X Tris-Cl/SDS, pH 8.8

2.00 ml

Aqudes

3.49 ml

10% APS

0.10 ml

TEMED

0.01 ml

Cara pembuatan : Plat elektroforesis disusun mengikuti petunjuk pembuatannya. Larutan akrilamid, buffer 4X Tris-CL/SDS pH8,8 dan akuades dicampur dalam Erlenmeyer menggunakan stirrer. Ammonium persulfat dan TEMED kemudian ditambahkan pada campuran tersebut. Campuran/larutan di atas dituangkan dengan pipet ke dalam susunan kaca elektroforesis melalui kaca pemisah untuk mengurangi kemungkinan timbulnya gelembung udara. Dilakukan dengan cepat dan hati-hati, 0,5-1 cm bagian yang tidak diisi •

Pembuatan stacking gel Persentase akhir akrilamit yang digunakan adalah 4%. Campuran larutan

yang digunakan (8 ml untuk satu plat) sebagai berikut : 40% akrilamit/1,1 bisakrilamit

0.300 ml

4X Tris-Cl/SDS pH 6,8

0,750 ml

Akuades

1,895 ml

APS

0,050 ml

TEMED

0,005 ml

Cara pembuatan : Akuades di atas separating gel dihilangkan dengan tisu. Larutan akrilamid dan buffer 4X Tris-Cl/SDS pH 6.8 dicampurkan dalam erlenmeyer dan stirer. Ammonium persulfat dan TEMED kemudian ditambahkan pada campuran di atas. Larutan gel tersebut dituangkan menggunakan pipet di atas separating gel sampai memenuhi bagian atas kaca elektroforesis. Sisir dimasukkan dengan hati-hati, dipastikan tidak terbentuk gelembung udara yang terperangkap pada ujung gigi.

27 Setelah terjadi polimerisasi membentuk gel (± 30 menit), gel ditempatkan dalam chamber elektroforesis. •

Persiapan sampel Delapan µl sampel protein (dari 10 mg/ml larutan sampel protein)

dicampurkan dengan 6 µl sampel dalam tabung eppendorf. Campuran sampel dan buffer dimasukkan ke dalam sumur menggunakan pipet •

Running gel Running dilakukan selama ± 1.5 jam atau sampai migrasi sampel

mencapai 1 cm dari bawah gel, tegangan listrik yang digunakan 125 V •

Pewarnaan gel Gel ditempatkan dalam wadah yang berisikan larutan Coomassie Brilliant

Blue selama ± 30 menit. •

Destaining gel Larutan staining dihilangkan dengan campuran metanol, asam asetat

glasial dan akuades dengan perbandingan 2:1:7 selama ± 24 jam •

Penentuan bobot molekul protein-protein yang terpisahkan Bobot molekul protein-protein yang terpisahkan ditentukan berdasarkan

protein standar (Low Moleculer Weight -LMW, Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden) yang dirunning secara bersamaan dengan sampel dan diketahui bobot molekulnya. f. Analisis Kromatografi Gas Spektro Massa (GC-MS). Analisis kromatografi dilakukan terhadap endapan dan supernatan pada larutan asam dari proses ekstraksi. Hal ini dimaksudkan untuk mengetahui zat-zat lain yang terdapat pada endapan selain peptida dan juga zat-zat yang terpisahkan karena tidak ikut mengendap bersama peptida. Analisis ini menggunakan alat Agilent Technologies 6890. Modus ionisasi electron impact dengan energi elektron 70 eV. Kolom HP Ultra 2, berukuran 30 m x 0.25 mm, ketebalan film I.D x 0.25 (µm). Temperatur oven awal 60 oC selama 1 menit, meningkat 10 oC/menit hingga 250 oC dan bertahan selama 1 menit, kemudian mengalami peningkatan

28 akhir 20 oC hingga 300 oC dan bertahan selama 22 menit. Temperatur injeksi port 250 oC, sumber ion 230 oC, antarmuka 280 oC dan quadrupole 140 oC. Gas pembawa helium. Aliran kolom tetap 0.6 µl/menit. Volume injeksi 1 µl, split 50 : 1. Metode arsip : Bahalam. II. Upaya Proteksi Peptida dari Degradasi Rumen Senyawa peptida di dalam rumen akan didegradasi oleh mikroba ruminal, oleh karenanya perlu dilakukan upaya proteksi. Percobaan ini akan menguji tiga metode proteksi peptida ELJ yaitu dengan enkapsulasi polimerik menggunakan 2vinylpyridine/styrene, enkapsulasi hidrofobik menggunakan stearat dan pengikatan senyawa peptida dengan asam tanat. a. Metode proteksi peptida Mikroenkapsulasi pertama merupakan penyalutan dengan substansi polimerik pembentuk film. Sekitar 1.008 g peptida ELJ ditetesi 0.126 ml HCl diaduk dan ditambahkan akuades secukupnya agar merata, kemudian dicampur rata dengan 0.126 g microcrystalline cellulose, lalu diaduk dengan 0.277 g air. Kelembaban adonan diperkirakan sekitar 18%. Adonan tersebut kemudian diekstruder dengan mesin pellet berdiameter 2 inchi yang dilengkapi suatu mata pisau cincang yang berputar di bagian muka. Lobang saringan berdiameter 1.6 mm dan pisau cencang diatur sedemikian hingga memotong pellet dengan ukuran panjang 1 hingga 1.5 kali diameternya. Pellet basah kemudian dibulatkan atau disemir sehingga pinggirnya lebih tumpul, lalu dikeringkan hingga mencapai kadar air maksimal 1%. Pellet yang sudah kering dilapisi dengan suatu pembalut, dengan bobot pembalut sekitar 15% dari total massa butiran tersebut. Komposisi pembalut tersebut adalah 60% 2-vinylpyridine/styrene (80/20) dan 40% kaolin (Wu & Miller 1988). Mikroenkapsulasi kedua, merupakan mikroenkapsulasi hidrofobik yang dimodifikasi dari metode Klose dan Nyack (1993) menggunakan komposisi bahan seperti pada Tabel 1. Komponen penyalut dicampur dan dipanaskan hingga mencair. Setelah cair dan tercampur merata, sumber panas dimatikan. Ekstrak peptida segera dicampurkan dan diaduk merata pada penyalut yang masih cair.

29 Kaolin ditambahkan pada proses akhir pencampuran dimana komponen penyalut mulai membeku. Bongkahan produk enkapsulasi dilewatkan pada suatu kasa mesh 6 untuk memecahkan gumpalan. Produk yang dihasilkan memiliki suatu gravitas spesifik sekitar 1.4. Enkapsulat selanjutnya disemprot dengan propilen glikol dengan rasio sekitar 15 g propilen glikol untuk 500 g enkapsulat. Tabel 1. Komposisi bahan enkapsulat hidrofobik penyalut peptida ELJ Komposisi enkapsul Peptida ELJ Penyalut hidrofobik 90% asam stearat 10% malam Pengatur bobot jenis Kaolin Wetting agent Propylene glycol (% dari total enkapsulat)

% bobot 47.2 37.8 15.0

3.0

Metode proteksi ketiga merupakan pengikatan senyawa peptida dengan asam tanat membentuk peptide-tanic complex. Sampel peptida ditambahkan asam tanat dengan perbandingan 75 : 25, ditambahkan air secukupnya kemudian diaduk merata. Campuran tersebut kemudian dikeringkan dalam oven dengan suhu 50 oC. b. Pengujian in vitro rumen Uji in vitro dilakukan untuk mengamati efektivitas perlakuan enkapsulasi dalam melindungi peptida ELJ di dalam rumen dan melepaskannya di dalam abomasum. Metode pengujian in vitro rumen dilakukan menurut Tilley dan Terry (1963) dalam Close dan Menke (1986). Preparasi sampel dilakukan dengan mengeringkannya pada temperatur di bawah 60 oC. Sampel kering selanjutnya digiling hingga berukuran ± 1 mm. Sebanyak 0.5 gram dimasukkan ke dalam tabung fermentor (erlenmeyer) berkapasitas + 100 ml. Preparasi medium dilakukan dengan memasukkan ke dalam erlenmeyer kapasitas 1 liter bahan-bahan sebagai berikut : 2 g trypticase, 400 ml akuades dan 0.1 ml

larutan mineral mikro, lalu diaduk sampai seluruh bahan larut.

Selanjutnya tambahkan 200 ml larutan penyangga rumen, 200 ml larutan mineral makro, 1.0 ml larutan rezasurin dan 40 ml larutan pereduksi. Medium lalu

30 ditempatkan ke dalam waterbath pada suhu 39 oC sambil diberikan gas CO2 dan diaduk dengan magnetic stirrer. Kondisi reduksi medium diamati, dengan indikator perubahan warna dari biru ke merah muda lalu menjadi tidak berwarna (medium tereduksi dengan komplit). Inkubasi dilakukan dalam cairan rumen domba yang dikoleksi dari minimal dua ekor ternak berbeda. Cairan rumen disaring menggunakan 2 lapis kain kasa dan dimasukkan ke dalam termos pada suhu 39oC. Selanjutnya dicampur 1 bagian cairan rumen dan 4 bagian medium, lalu ditempatkan dalam penangas air pada suhu 39oC sambil terus diberikan gas CO2 dan diaduk dengan magnetic stirrer. Sebanyak 50 ml medium yang telah bercampur cairan rumen dimasukkan ke dalam masing-masing tabung fermentor yang telah berisi sampel dan 2 tabung fermentor yang tidak berisi sampel (blanko). Tabung fermentor ditutup dengan tutup karet yang berventilasi, kemudian ditempatkan di shaker waterbath, inkubasi pada suhu 39oC selama 48 jam atau disesuaikan dengan peubah yang diukur. Setelah inkubasi tahap pertama berakhir, tutup karet tabung fermentor dilepaskan dan ditambahkan 2 ml HCl 6 N agar pH mencapai 2. Selanjutnya ditambahkan 0.5 g pepsin, diaduk sampai tercampur rata dan ditambahkan 1 ml toluen. Tabung fermentor kembali ditempatkan pada shaker waterbath, dan inkubasi selama 48 jam pada suhu 39oC. Kertas saring whatman no. 41 digunakan untuk mendapatkan sisa fermentasi (residu dan blanko), lalu ditentukan bahan kering sampel, residu, dan blankonya. Pengujian secara in vitro dilakukan terhadap 4 macam bahan, yaitu : 1) Peptida terenkapsulasi polimerik (EP), 2) Peptida terenkapsulasi hidrofobik (EH), 3) Peptida terikat tanin (ET), 4) Peptida nonenkapsulasi (NE). Peubah yang diamati meliputi kecernaan bahan organik (BO) dan produksi gas NH3. % Kecernaan BO

O

–

O

– O

O

Kadar NH3 dihitung dengan metode Mikrodifusi Conway N NH c. Analisis data

mM

H SO

N H SO K

x 100%

31 Data dianalisis variansi dalam rancangan acak kelompok dengan keempat macam bahan terproteksi sebagai faktor perlakuan dan ulangan sebagai kelompok. Hasil yang berbeda nyata, akan dilanjutkan dengan uji Beda Nilai Terkecil. Perlakuan yang menghasilkan efektivitas enkapsulasi tertinggi, digunakan pada percobaan tahap selanjutnya. Rumus persamaan yang digunakan dalam rancangan tersebut (Steel dan Torrie 1995) adalah : Yij = μ + τi + δj + E(ij) Keterangan : -

Yij

=

pengamatan ke-i dan ulangan ke-j

-

μ

=

nilai rerata total

-

τi

=

pengaruh faktor perlakuan ke-i

-

δj

=

pengaruh kelompok ke-j

-

E(i)j

=

pengaruh galat percobaan

III. Uji Penggunaan Peptida ELJ Terproteksi pada Domba Pedaging a. Ternak dan Perlakuannya Pemeliharaan ternak dilaksanakan di kandang percobaan ruminansia kecil Balai Penelitian Ternak Ciawi. Ternak yang digunakan merupakan domba jantan ekor tipis jenis priangan berjumlah 16 ekor. Ternak dipilih berdasarkan keseragamannya dan diseleksi dari sebuah usaha peternakan rakyat yang memiliki populasi lebih dari 1000 ekor di Desa Cimande, Caringin, Bogor. Umur ternak berkisar 12 bulan yang ditandai dengan sedang atau baru bergantinya insisivus. Pemeliharaan dilakukan pada kandang individu dengan ukuran ruang 85 x 96 cm. Setiap kandang dilengkapi kran minum otomatis, sedangkan tempat pakan berupa kotak kayu ditaruh di sisi depan luar kandang. Pemberian obat cacing, obat mata, antibiotik dan vitamin dilakukan di awal pemeliharaan. Masa adaptasi dilaksanakan selama satu bulan. Selama masa adaptasi dilakukan juga pengamatan dan pengukuran beberapa peubah. Sebelum memasuki masa perlakuan ternak ditimbang dan ditetapkan sebagai bobot awal, yaitu 30.43 ± 1.41 kg (CV = 4.64%).

32 Pakan berupa rumput gajah dan konsentrat komersial GT-03 produksi Indofeed. Jumlah pemberian pakan disesuaikan dengan perkembangan bobot badan dengan perbandingan bahan kering antara rumput dan konsentrat 25 : 75. Pemberian pertama adalah suplemen ELJ, setelah habis dilanjutkan dengan pemberian konsentrat. Pakan rumput diberikan setelah konsentrat habis dimakan. Hasil analisis proksimat komposisi nutrisi dari rumput dan konsentrat ditampilkan pada Tabel 2. Tabel 2. Komposisi nutrisi bahan kering pakan rumput dan konsentrat selama pemeliharaan (% dari bahan kering) Serat kasar

TDN

17.89

6.15

89,69

2.00

8.45

31.21

51,75

6,01

15,53

12,41

80,20

Jenis Pakan

Air

Abu

Lemak Protein

Konsentrat

11.52

8.26

7.35

Rumput gajah

86.03

8.45

Total Pakan

30,15

8,31

Pemberian suplemen ELJ dibedakan atas 4 macam perlakuan masingmasing pada 4 ekor domba. Keempat perlakuan tersebut adalah : ‐

P0 : enkapsulat tanpa ELJ (placebo)

‐

P1 : enkapsulat ekstrak peptida ELJ 1.5 mg/kg bobot badan

‐

P2 : enkapsulat ekstrak peptida ELJ 3 mg/kg bobot badan

‐

P3 : enkapsulat LJ100™ 1 mg/kg bobot badan LJ100™ merupakan suplemen komersial dari ekstrak ELJ mengandung

bahan aktif eurypeptide® yang diproduksi oleh Physician Formulas, Irvine, California, USA. Perlakuan dilaksanakan selama 108 hari. b. Pengamatan peubah Kadar testosteron darah, diukur dengan teknik Radioimmunoassay (RIA). Sampel darah diambil dengan menggunakan syringe steril kapasitas 3 cc pada vena jugularis sebanyak 1 cc. Sampel darah tersebut kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi 3 ml yang telah berisi EDTA. Selama dalam perjalanan ke laboratorium tabung berisi sampel darah ditempatkan bersamaan dengan pecahan es. Tabung beserta isinya kemudian disentrifus 10.000 rpm, suhu 10 oC selama 5 menit,

33 sehingga dapat digunakan untuk mengukur hormon testosteron. Plasma diukur kandungan hormon testosteronnya dengan menggunakan kit Testo CT2 produksi Cisbio-Bioassays USA. Pengukuran dilakukan secara kuantitatif dan menggunakan radioaktif 125I (Jaffe & Behrman 1974). Pengamatan profil darah meliputi kadar hemoglobin (Hb) packet cell volume (PCV), butir darah merah (BDM), butir darah putih (BDP), limfosit, netrofil, monosit, dan eosinofil dengan metode yang mengacu pada Sastradipradja et al (1989) Jumlah rerata konsumsi bahan kering (BK) ransum/ekor/hari diperoleh dengan cara menghitung selisih antara jumlah BK diberikan (jumlah ransum yang diberikan x % BK ransum)/ekor/hari dan jumlah BK sisa (jumlah ransum sisa x % BK ransum sisa)/ekor/hari. Konsumsi zat-zat makanannya dihitung dengan mengalikan jumlah konsumsi BK dengan % zat-zat makanan yang terkandung di dalamnya. Pertambahan bobot badan harian (PBBH), ditentukan dengan menghitung selisih bobot badan akhir dengan bobot badan awal/ekor/lama periode penelitian (hari). Penimbangan bobot badan dilakukan setiap bulan dan dilakukan pada pukul 07.00 sebelum pemberian pakan. Konversi pakan tiap ekor domba ditentukan dengan menghitung nisbah antara rataan jumlah konsumsi bahan kering /ekor/hari dengan rataan pertambahan bobot badan/ekor/hari. Penentuan jumlah nitrogen (N) teretensi dilakukan dengan menghitung selisih antara jumlah N terkonsumsi dalam ransum dan jumlah N yang dikeluarkan bersama feses ditambah urine yang dinyatakan sebagai neraca nitrogen (Bondi & Drori 1987), sebagai berikut : B = I – (U+F) Keterangan : B = Neraca N (jumlah N teretensi) I = Jumlah N terkonsumsi dari ransum U = Jumlah N yang dikeluarkan dalam urin F = Jumlah N yang dikeluarkan dalam feses

34 Penentuan neraca N dilakukan dua kali, yaitu pada masa sebelum perlakuan dan di akhir masa perlakuan. Koleksi urin dan feses dilakukan selama 7 hari dan setiap hari diambil sampel sebanyak kira-kira 5% dari jumlah urin yang keluar dalam waktu 24 jam. Sebelum digunakan, penampung urin (botol plastik) diisi dengan H2SO4 3M sebanyak 5 ml, untuk menghindari penguapan N urin menjadi amonia. Sampel urin segera ditaruh di dalam freezer untuk kemudian dianalisis kandungan N-nya. Sampel feses diambil sebanyak 10% dari bobot sampel yang diekskresikan setiap harinya. Sampel feses tersebut langsung dikeringkan dengan oven pada suhu 60 oC selama 24 jam. Analisis kadar N dilakukan dengan metode kjeldahl. Pemotongan domba dilakukan secara halal dengan memotong leher tepat di samping tulang rahang bawah hingga vena jugularis, oesophagus dan trachea terputus. Kepala dipisah dari leher pada sendi occipito-atlantis. Kaki depan dan kaki belakang dipisahkan pada sendi carpo-metacarpal dan sendi tarsometatarsal dan ekor dipisahkan dari tubuhnya. Karkas segar diperoleh setelah semua organ tubuh bagian dalam dikeluarkan, yaitu hati, limpa, jantung, paruparu, trakea, alat pencernaan, empedu, pancreas, dan ginjal. Bobot tubuh kosong merupakan hasil pengurangan bobot potong dengan bobot isi saluran pencernaan dan kantung kemih. Karkas segar yang diperoleh kemudian ditimbang untuk mendapatkan bobot karkas segar (bobot karkas panas). Karkas segar dibelah secara simetris sepanjang tulang belakangnya dari leher (Ossa vertebrae cervicalis) sampai sakral (Ossa vertebrae sacralis) dan ditimbang bobotnya (bobot karkas segar kiri dan kanan). Karkas sebelah kanan dimasukkan ke dalam kantong plastik dan diikat untuk dibawa ke ruang chiller. Suhu ruang chilly berkisar 5 0C, dan di dalamnya karkas digantung selama ± 24 jam. Belahan karkas yang telah dikeluarkan dari ruang pendingin ditimbang bobotnya (bobot karkas kanan dingin). Karkas selanjutnya dipotong menjadi delapan potongan komersial mengikuti petunjuk Romans dan Ziegler (1994) yaitu : paha belakang (leg), pinggang (loin), punggung (rack), bahu (shoulder), leher (neck), paha depan (shank), dada (breast), dan perut (flank) kemudian masing-

35 masingnya ditimbang. Potongan komersial karkas selanjutnya diurai menjadi lemak subkutan, lemak intermuskuler, otot dan tulang, yang kemudian ditimbang. Kualitas karkas. Beberapa hal diamati sehubungan dengan kualitas karkas adalah persentase karkas, komposisi potongan komersial karkas, dan komposisi komponen karkas. Persentase karkas (%), didapat dari perbandingan antara bobot karkas dengan bobot tubuh kosong dikali 100. Bobot karkas (gram), didapat dari bobot yang diperoleh dari selisih bobot potong dengan bobot darah, kepala, kaki, kulit, organ tubuh bagian dalam (selain ginjal), alat reproduksi dan ekor. Bobot tubuh kosong (gram), diperoleh dari selisih bobot potong dengan bobot isi saluran pencernaan. Sifat fisik daging yang diamati terdiri atas pH, daya mengikat air, keempukan dan susut masak. pH Daging diukur dengan cara menusukkan dioda pH meter digital terkalibrasi ke dalam sampel daging beberapa kali sehingga didapatkan nilai rata-rata yang mewakili. Daya Mengikat Air (DMA) ditentukan dengan metode Hamm. Sampel sebanyak 0.3 g diletakkan pada kertas saring Whatman 41 dan ditutup dengan kertas yang sama, lalu ditekan dengan Carper Press dengan tekanan 35 kg/cm2 selama 5 menit. Penekanan menghasilkan dua lingkaran yaitu lingkar dalam (LD) yang merupakan luas area daging dan lingkar luar (LL) yang merupakan areal air daging. Batas kedua lingkaran ditandai dan luasnya diukur menggunakan Planimeter dengan satuan inch. Berdasarkan ukuran luas area tersebut dapat ditentukan jumlah air yang dibebaskan. Semakin banyak air yang dibebaskan semakin rendah daya mengikat air dari sampel daging tersebut. Luas area basah

luas LL – luas LD 100

Jumlah air pada area basah dihitung dengan rumus sebagai berikut : mgH O

luas area basah x 6.45 konversi inch ke cm 0.0948

Persentase jumlah air yang dibebaskan adalah sebagai berikut : % air bebas

mgH O X 100 % 300

8

36 Keempukan daging ditentukan dengan mengambil sampel daging seberat ± 100 g ditusuk dengan termometer bimetal lalu dicelupkan pada air mendidih. Sampel diangkat setelah suhu bagian dalamnya yang ditunjukkan termometer mencapai 81 oC, kemudian didinginkan. Daging dipotong searah serat dengan menggunakan corer dan diletakkan alat warner blatzer shear force. Tingkat keempukan daging ditunjukkan oleh besarnya kekuatan (kg/cm3) yang diperlukan untuk memotong sampel daging tersebut. Semakin besar tenaga yang diperlukan, daging semakin alot. Susut masak daging ditentukan dengan persiapan dan perebusan sampel seperti penentuan keempukan, lalu sampel ditimbang sampai bobotnya konstan. Persentase susut masak dihitung dengan rumus berikut : Susut Masak %

bobot awal bobot akhir x 100% bobot awal

Komposisi kimia daging yang diamati terdiri dari kadar air, protein kasar, lemak dan abu menggunakan analisis proksimat dengan metode AOAC (1990). c. Rancangan percobaan dan analisis data Percobaan ini dilaksanakan dalam Rancangan Acak Lengkap (RAL) pola searah, terdiri atas empat macam perlakuan dan empat kali ulangan. Keempat perlakuan merupakan perbedaan dalam pemberian suplemen peptida ELJ seperti yang telah diuraikan sebelumnya. Data secara umum dianalisis ragam berdasarkan persamaan berikut (Steel & Torrie 1995) : Yij = μ + τi + E(i)j Data komposisi tubuh dianalisis peragam dengan bobot setengah karkas sebagai peragam, berdasarkan persamaan berikut : Keterangan : Yij μ τi Xij E(i)j

Yij = μ + τi + Xij + E(i)j = = = = =

pengamatan ke-i dan ulangan ke-j nilai rerata total pengaruh faktor perlakuan kovariat pengaruh galat percobaan

37

HASIL DAN PEMBAHASAN Preparasi Ekstrak Peptida Pasak Bumi Akar kayu pasak bumi didatangkan dari Kalimantan Timur, berbentuk potongan-potongan kayu dengan panjang ± 50 cm dan diameter 1.5 sampai 5 cm. Potongan akar kayu tersebut sebelum dikirim telah dijemur, namun kurang kering dan juga karena kelembaban udara, sehingga jika disimpan akan ditumbuhi jamur. Penjemuran ulang perlu dilakukan dan bahan baku akan mengalami penyusutan bobot 10 hingga 15%. Potongan kayu ELJ kering diserut dengan mesin dan diserpih secara manual untuk potongan kecil yang tersisa. Hasil serutan dan serpihan tersebut kemudian digiling menggunakan mesin giling tipe Diskmill hingga berukuran cukup halus. Partikel hasil penggilingan seukuran tepung tidak bisa didapatkan karena pada saringan dengan diameter lubang 3 mm material tersendat. Bahan berupa kayu dengan serat kasar yang sangat tinggi tersebut memiliki tekstur yang liat dan tidak mudah pecah/putus sehingga sulit untuk dibuat halus.

Saringan mesin yang

digunakan akhirnya adalah yang berdiameter lubang 5 mm. Serbuk yang dihasilkan diayak dengan diameter lubang ayakan 1 mm. Bagian yang tidak lolos ayakan digiling kembali. Kehalusan ukuran partikel bahan yang diekstrak berpengaruh pada mudah atau tidaknya bahan baku diambil ekstraknya. Bahan baku dalam bentuk serbuk lebih mudah diekstrak dibandingkan bentuk simplisia. Keberadaan lemak di dalam bahan yang akan diekstrak peptidanya dapat mengganggu proses ekstraksi, karena lemak dapat berikatan dengan peptida membentuk lipopeptida. Lemak perlu diekstrak terlebih dahulu dengan pelarut yang umum digunakan, yaitu heksana. Besarnya volume bahan yang akan diekstrak lemaknya, menyebabkan ekstraksi hanya dapat dilakukan dengan cara maserasi panas berulang. Cara ini cukup efektif di mana sebagian besar (95.53%) kandungan lemak pada bahan dapat terekstrak. Kandungan lemak bahan yang rendah yaitu 0.99% atau 4.95 g dalam 500 g bahan, belum akan mencapai titik jenuh dengan volume heksana 5000 ml. Bahan baku yang akan diekstrak dianalisis komposisi kimianya terlebih dahulu, hal ini dimaksudkan untuk mengetahui kandungan peptida/protein yang akan

38 diekstrak serta kadar kandungan lain yang mempengaruhinya. Hasil analisis komposisi kimia bahan baku ditampilkan pada Tabel 3. Tabel 3. Hasil analisis proksimat komposisi nutrisi serbuk ELJ No.

Komponen

Kadar (%)

1.

Abu

2.46

2.

Lemak

0.99

3.

Protein

2.54

4.

Serat kasar

60.18

5.

BETN

33.83

Tabel 3 memperlihatkan bahwa kandungan protein kasar serbuk ELJ sangat rendah (2.54%). Hal ini wajar karena bahan tersebut bukanlah merupakan sumber protein, meski demikian menurut Sambandan et al. (2006) bagian yang kecil tersebut merupakan komponen bioaktif yang diinginkan. Sebagaimana layaknya bahan berupa kayu, komponen terbesarnya adalah serat kasar (60%). Mengingat bagian tanaman yang diekstrak adalah akar, kemungkinan besar peptida yang terdapat di bagian tersebut merupakan metabolit sekunder. Heldt dan Piechulla (2011) menjelaskan bahwa hormon yang berupa peptida juga terdapat pada tanaman. Saat ini makin banyak bukti bahwa tanaman mengandung peptida sekresi dan nonsekresi yang terlibat dalam pengaturan berbagai aspek pertumbuhan tanaman (misalnya, pertumbuhan kalus dan akar, pengaturan

meristem,

pembentukan

nodul,

reaksi

ketidakcocokan,

dan

pertahanan) Suatu pekerjaan isolasi, menemukan peptida sistemin dari 49 asam amino (yang berasal dari prekursor 115 asam amino) yang diidentifikasi sebagai penyebab alkalisasi cepat dari suspensi media kultur sel tembakau. Peptida ini disebut RALF (Rapid Alkalization Factor). Penerapan Ralf dalam konsentrasi nanomolar menghasilkan aktivasi cepat MAPK, penghentian pertumbuhan akar dan pembesaran sel meristematik. Homolog dari RALF ditemukan dalam banyak jenis tanaman.

39 Tabel 4. Hasil pengerjaan ekstrak peptida akar ELJ No.

Uraian

Jumlah

1.

Bobot bahan (g)

500

2.

Bobot basah ekstrak (g)

3.18

3.

Kadar air ekstrak (%)

4.

Bobot kering ekstrak (g)

2.64

5.

Persentase Hasil (%)

0.53

16.98

Hasil yang diperoleh masih rendah (0.53%), namun cukup wajar bila mengacu pada hasil total ekstrak etanol kental ELJ menurut BPOM (2004) yang hanya 3.3%. Senyawa aktif dari ekstrak ELJ telah teridentifikasi sekitar 90 macam, dan kelompok peptida adalah bagian kecil di antaranya. Ekstrak ELJ pada perdagangan internasional umumnya dibedakan atas perbandingan bahan baku dengan ekstrak sebagai berikut 30:1, 50:1, 100:1 dan 200:1. Semakin tinggi perbandingan bahan baku dengan ekstrak, semakin tinggi pula kandungan bahan aktifnya. Mengacu pada hal tersebut perolehan ekstrak pada penelitian ini berada pada kelompok perbandingan 200:1. Perolehan ekstrak peptida dari suatu bahan fase padat dengan pelarut fase cair dipengaruhi oleh beberapa faktor, baik yang berinteraksi maupun tidak. Kombinasi dari level faktor-faktor tersebut perlu dicermati untuk mendapatkan pengaturan yang optimal guna mendapatkan ekstrak maksimal. Bagian ini mengamati pengaruh ukuran partikel, pH basa dan asam, serta lama perendaman dalam larutan basa untuk mendapatkan jumlah ekstrak maksimal. Tabel 5 memperlihatkan bahwa ukuran partikel berpengaruh nyata pada perolehan ekstrak, dan partikel halus menghasilkan ekstrak yang lebih tinggi. Peningkatan hasil dengan ukuran partikel yang lebih halus tersebut sebanyak 110%. Sesuai dengan penjelasan dalam Asep et al. (2008) bahwa semakin kecil ukuran matriks yang diekstrak semakin besar kontak area cair-padat sehingga waktu yang diperlukan untuk inisiasi maserasi matriks semakin berkurang. Efisiensi ekstraksi bergantung pada transfer massa dari matriks asalnya ke cairan pelarut dan penggelontoran massa dari sel matriks oleh pelarut. Ukuran matriks yang lebih kecil menyebabkan lebih pendeknya jalan

40 difusi internal dari zat terlarut untuk mencapai fase fluida dan menurunnya resistensi difusional pada fase padat tersebut. Tabel 5. Rerata perolehan ekstrak peptida dengan ukuran partikel, pH, serta lama perendaman yang berbeda Partikel* Halus Halus Halus Halus Halus Halus Kasar Kasar Kasar Kasar Kasar Kasar

Peubah pH Basa* Durasins 10.5 10.5 10.5 8.5 8.5 8.5 10.5 10.5 10.5 8.5 8.5 8.5

30 menit 30 menit 150 menit 30 menit 30 menit 150 menit 30 menit 30 menit 150 menit 30 menit 30 menit 150 menit

pH Asamns

Hasil

3.5 4.5 4.5 3.5 4.5 4.5 3.5 4.5 4.5 3.5 4.5 4.5

0.520 0.412 0.538 0.278 0.108 0.112 0.310 0.156 0.092 0.266 0.064 0.050

Keterangan : * Berpengaruh nyata (P<0.05) pada hasil ekstrak Partikel halus adalah serbuk akar ELJ yang lolos pada lobang ayakan berdiameter 1 mm sedangkan partikel kasar tidak lolos Durasi adalah lama perendaman simplisia dalam suasana basa.

Kelarutan peptida dari serbuk ELJ terlihat lebih tinggi pada pH 10.5 dibanding pH 8.5, peningkatan tersebut sebesar 130%. Pemilihan suasana basa sebagai pH selama ekstraksi berdasarkan pada kenyataan bahwa sebagian besar asam amino akan bermuatan negatif pada pH di atas titik isoelektriknya. Muatan yang sejenis memiliki gaya tolak menolak, sehingga menyebabkan interaksi antara residu asam amino minimum dan kelarutan peptida akan meningkat (Cheftel et al. 1985). Lehninger (1982) menyatakan pengaruh pH didasarkan pada adanya perbedaan muatan antara asam-asam amino penyusun protein. Daya tarik menarik yang paling kuat antarprotein yang sama terjadi pada pH isoelektrik, sedangkan pada pH di atas dan di bawah titik isoelektrik protein akan mengalami perubahan muatan yang menyebabkan menurunnya daya tarik menarik antarmolekul protein, dan molekul lebih mudah terurai. Semakin jauh perbedaan pH dari titik isoelektrik maka kelarutan protein akan semakin meningkat.

41

Kasar

Halus 12 10

Halus

8 Kasar

Halus

6 4

Basa

2 Kasar

Halus

0

Asam Hasil

Kasar

Halus

Kasar

Halus Kasar

Keterangan : Guna memperjelas tampilan, nilai hasil ekstrak dikali 5

Gambar 4. Pengaruh ukuran partikel, tingkat basa, dan asam pada perolehan ekstrak peptida Menurut Harborne (1987) protein tumbuhan umumnya mempunyai lebih banyak asam amino asam dibanding asam amino basa sehingga jumlah muatannya akan negatif dan akan begerak ke anoda. Seperti asam amino, protein yang larut dalam air akan membentuk ion yang mempunyai muatan positif dan negatif. Molekul protein akan membentuk ion positif dalam suasana asam, sedangkan dalam suasana basa akan membentuk ion negatif. Protein mempunyai muatan positif dan negatif yang sama pada titik isoelektriknya, sehingga tidak bergerak ke arah elektroda positif maupun negatif apabila ditempatkan di antara kedua elektroda tersebut. Protein mempunyai titik isoelektrik yang berbeda-beda. Titik isoelektrik protein mempunyai arti penting karena pada umumnya sifat fisika dan kimia erat hubungannya dengan pH isoelektrik ini. Protein bermuatan negatif.pada pH di atas titik isoelektriknya, sedangkan di bawah titik isoelektriknya protein bermuatan positif. Titik isoelektrik albumin adalah pada pH 4.55-4.90. Adanya gugus amino dan karboksil bebas pada ujung-ujung rantai molekul protein, menyebabkan protein mempunyai banyak muatan (polielektrolit) dan bersifat amfoter (dapat bereaksi dengan asam maupun basa). Daya reaksi berbagai jenis

42 protein terhadap asam dan basa tidak sama, bergantung pada jumlah dan letak gugus amino dan karboksil dalam molekul. Gugus amino bereaksi dengan H+ dalam larutan asam (pH rendah), sehingga protein bermuatan positif. Sebaliknya, dalam larutan basa (pH tinggi) molekul protein akan bereaksi sebagai asam atau bermuatan negatif. Muatan gugus amino dan karboksil bebas akan saling menetralkan pada pH isoelektrik, sehingga molekul bermuatan nol (Winarno 2002). Penambahan asam klorida (HCl) yang bersifat asam kuat mengakibatkan terdapatnya ion H+ yang berlebih, yang menunjukkan adanya kekeruhan dan endapannya lebih banyak pada proses pemanasan. Keelektronegatifan asam kuat lebih besar sehingga menarik ikatan elektron lebih kuat daripada atom hidrogen, dan lebih mudah dalam pembentukan ion H+. Kekuatan asam meningkat dengan naiknya keelektronegatifan atom X pada ikatan H−X. Karakteristik Ekstrak Peptida Pasak Bumi Analisis proksimat dilakukan terhadap ekstrak peptida yang dikomposit dari beberapa ulangan ekstraksi. Tabel 6. Komposisi ekstrak peptida hasil analisis proksimat No.

Komponen

Kadar (%)

1.

Abu

8.53

2.

Lemak

6.13

3.

Protein

34.57

4.

Serat kasar

3.50

5

BETN

47.26

Hasil analisis proksimat ekstrak tersebut menunjukkan bahwa kandungan protein/peptide masih sangat rendah untuk dapat disebut sebagai isolat. Menurut Natarjan (1980) isolat protein dari kacang-kacangan biasanya kandungan proteinnya 90-95% sedangkan konsentrat protein kandungannya 65-70%. Rendahnya kandungan peptida/protein ekstrak disebabkan karena bahan baku yang digunakan bukanlah bahan yang berprotein tinggi seperti kacang-kacangan. Selain itu kemungkinan protein/peptida terekstrak banyak yang merupakan protein kompleks

43 dengan senyawa karbohidrat atau glikopeptida sebagaimana yang dinyatakan sebelumnya. Penghitungan persentase recovery ekstrak peptida sebagai berikut : Jumlah peptida serbuk bebas lemak

:

11.00 g

Jumlah peptida ekstrak yang diperoleh :

0.91 g

Persentase recovery isolat

:

8.30 %

Kadar peptida/protein pada serbuk merupakan kadar protein kasar yang ditentukan dengan metode Kjeldahl. Metode ini mengukur kadar protein berdasarkan jumlah N total di dalam sampel. Kenyataannya, senyawa fitokimia yang mengandung N bukan hanya merupakan peptida, antara lain ada senyawa alkaloid yang porsinya cukup dominan dari keseluruhan metabolit sekunder tanaman. Alkaloid tidak larut dalam air, sehingga tidak banyak terikut di dalam ekstrak. Sebaliknya jumlah N yang terukur pada ekstrak diperkirakan sebagian besar merupakan N dari senyawa peptida. Perbedaan tersebut menyebabkan nilai persentase recovery isolat menjadi rendah. Analisis elektroforesis menggunakan marker LMW Amersham dengan rentang 14.4 – 97.0 kD (SDS-PAGE I) dan marker Spectra MLRPL dengan rentang 42 - 1.7 kD (SDS-PAGE II). Pelaksanaan SDS-PAGE I melakukan running dua gel secara bersamaan, masing-masingnya berseberangan pada sisi aparatus. Pewarnaan kedua gel dilakukan berbeda, masing-masing dengan komasie blue dan silver. Hal ini dimaksudkan untuk memperoleh perbandingan guna mendapatkan hasil yang lebih baik. Pewarnaan silver pada pekerjaan ini menghasilkan nilai R2 hubungan Rf dan BM yang lebih tinggi serta memperlihatkan band yang lebih jelas, sehingga gel ini digunakan untuk pembahasan selanjutnya. Jumlah band yang muncul pada SDS-PAGE I masing-masing pita cukup banyak berkisar antara 14 hingga 20 band, tetapi hanya terdapat 2 band yang dominan. Jarak kedua band dominan tersebut dari dasar sumur ditampilkan pada Tabel 7. Kedua band yang dominan muncul pada separuh bagian bawah dari pita. Hal ini menunjukkan mereka memiliki bobot molekul yang relatif rendah. Band I

44 terindiikasi sebagaai kelompok protein ovaalbumin dann band II meerupakan prrotein α-lakttalbumin.

Mr (kkD)Marker

A

B

C

D

E

F

97.0 66.0 45.0

30.0

20.1 14.4

H Hasil SDS PAGE I pewarnaan kom masie Mr(kD) Markerr

A

Hasil SDS PAGE I pew warnaan silver B

C

D

E

F

42 26 17 10 4.6

Hasil SDS PAG GE II dengan marrker berat moleku ul lebih rendah Keteraangan : e sendiri daari lima ulangan A-E = peptiide/protein hasil ekstrak ™ F = peptiida/protein dari LJ100 L

Gam mbar 5. Analisis gel SDS--PAGE peptida pasak buumi Band tungggal yang teerlihat pada eurypeptide® memiliki bobot mo olekul sekitarr 17.7 kD juuga terdapatt pada beberrapa protein hasil ekstraak sendiri, meski m bukan merupakann band yanng dominan.. Hal ini leebih jelas tterlihat padaa gel pewarrnaan komassie blue. Pennumpukan ppeptida yangg cukup kenntal terlihat pada batas bawah b gel, baik b pada geel pewarnaann silver mauupun gel pew warnaan kom masie blue menunjukka m an bahwa mayoritas m peeptida yang terekstrak memiliki bobot b molekkul di bawah h 14.4 kD. Peptida denngan bobot molekul lebbih rendah lebih disukaai karena sifaat fungsionalnya (Kjell et e al. 2001)

45 Tabel 7. Jarak dan bobot molekul protein pada dua band dominan hasil SDS-PAGE I ekstrak protein Sampel

Band

Jarak (cm)

A

I II I II I II I II I II I II

4.5 3.0 4.5 4.5 2.9 4.0 2.9 5.1

B C D E F

BM (Da) 22 405.78 40 635.91 22 405.78 22 405.78 42 281.46 27 324.36 42 281.46 17 658.35

Keterangan : sampel A- E merupakan hasil ekstrak sendiri dan F eurypeptide®

Eurypeptide® menghasilkan band tunggal pada jarak 5.1 cm dengan bobot molekul 17.66 kD, sedangkan peptida/protein hasil ekstraksi sendiri memiliki band yang luas dengan 2 band utama. Hal ini disebabkan karena peptida eurypeptide® merupakan hasil fraksinasi dan pemurnian sedangkan hasil ekstraksi sendiri merupakan peptida/protein total. Meski band utama peptida ekstraksi tidak sama dengan peptida eurypeptide®, namun hasil ekstraksi juga mencakup peptida dengan bobot molekul yang sama dengan eurypeptide®. Demikian juga halnya dengan peptida yang memiliki bobot molekul ≤ 14.4 kD, tampak bahwa besarnya band yang terbentuk antara ekstraksi sendiri dengan eurypeptide® sama. Bagaimanapun hasil yang ditunjukkan pada gel ini belum merupakan bagian yang utama. Mengacu pada Sambandan et al. (2006) bahwa peptida bioaktif dari ELJ yang bertanggungjawab atas peningkatan kadar testosteron adalah glikopeptida dengan bobot molekul 4.3 kD. Hasil SDS-PAGE II memperlihatkan hanya ada sebuah band yang jelas terdeteksi pada sebagian besar ulangan ekstrak. Band tunggal tersebut memiliki berat molekul ± 8.2 kD. Running eurypeptide® pada gel ini tidak menghasilkan satu pun band. Peptida dengan berat molekul < 4.6 kD tidak terdeteksi pada gel ini. Analisis SDS-PAGE untuk peptida dengan berat molekul yang sangat rendah membutuhkan kecermatan yang tinggi dalam pengerjaannya.

46 A Analisis GC C-MS padataan (ekstrak peptida) meenunjukkan bahwa senyyawasenyaw wa volatil sudah tidakk banyak ditemukan. d Beberapa ssenyawa deengan persenntase area beesar teridenttifikasi sebaagai asam organik o alifaatik dengan atom rantai C19. Meski demikian, d peerkiraan jeniis senyawa yang y ditunjuukkan berganntung pada rujukan r keppustakaan yang digunakkan dalam indentifikasi, dalam haal ini databaase yang digu unakan adalah Wiley2755.L.

Gambar 6. Kromatograam endapan dari larutan asam prosess ekstraksi peptida paasak bumi H Hasil analisiis GC-MS menunjukkan m n bahwa end dapan akhir (ekstrak pep ptida) membbawa beberaapa senyaw wa lain yanng di antaaranya adalaah stigmastterol. Stigmaasterol yangg ditemukann berikatan dengan seny yawa lain seperti stigm masta5.22-ddien-3-ol, (3 3.beta); stigmast-5-en-3-ol, (3.beta); (24R)-4-sstigmasten-33-one stigmaa; stigmast-4-en-3-one (CAS) 4-stti dan stigm mast-22-en-33-one, 4-meethyl. Rahmaalia et al. (2011) meenyatakan bahwa b stigm masterol addalah salah satu terpennoid utama yang y ditemuukan pada taanaman ELJJ. Terpenoidd lain yang juga esta-5,22-dien-3; cukup banyak adaalah 24-ethyll-3.alpha,5alpha-cyclo; 23-ethylchol 2 dan senyawa quiinoline. Sen nyawa kelom mpok flavonnoid yang dominan ad dalah

47 b benzopyrone e dan naftaleen. Ditemukan juga senyyawa fitosterrol ergosten,, cholestan, d metil kolesterol yaang secara vvariatif terikat dengan senyawa lain dan n. Alkaloid y yang ditemuukan dalam endapan e antaara lain senyyawa quinoliine; quinoxaaline dan 4p propylamino o-7-nitrobenzo-2-oxa-1, namun porssi senyawa aalkaloid ini ditemukan d dalam jumlaah kecil.

Gambaar 7. Kromattogram supeernatan dari larutan l asam m proses eksttraksi peptida pasak buumi Senyaw wa-senyawaa yang diteemukan pad da supernataan berbeda dari yang d ditemukan p pada endapaan. Jika padaa endapan lebih banyakk didominasi golongan t terpenoid, p pada supernnatan lebih banyak dido ominasi gollongan alkaaloid. Jenis s senyawa yaang ditemukkan dari keedua golong gan tersebutt juga berbeda antara p padatan dan supernatan. Hal ini tenttunya berkaiitan dengan ssifat senyaw wa-senyawa t tersebut dallam pelarutt polar. Goolongan alkaaloid yang dominan antara a lain s senyawa ben nzeneethamiine, N-[pentaafluoro]; dan n 3-(4-N,N-ddimethylamiinophenyl). P Proteksi Peptida Pasak k Bumi darii Degradari Rumen In Vitro b tas sampel tterenkapsulasi melewati rumen secaara in vitro Uji bioavailabilit d dengan tiga metode m enkaapsulasi dipeerlihatkan pad da Gambar 88. Hasil analiisis statistik m menunjukkan n bahwa maacam perlakkuan berpeng garuh sangatt nyata (P< 0.01) pada k kecernaan b bahan organ nik, perbedaaan hanya teerdapat antaara EH denggan semua

48 D baahan organikk nyata paling rendah ppada enkapssulasi perlakuuan lain. Degradasi hidrofo fobik. Hal in ni mengindik kasikan bahw wa enkapsullasi hidrofobbik paling effektif dalam memprotekssi bahan pakkan dari degrradasi ruminal dengan peersentase pro oteksi %. Enkapsuulasi polimerik dan tannin masing-masing hannya mempro oteksi 56.16% 11.86% % dan 14.63% %. 90,00 80,00 70,00 60,00 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 0,00 EP

EH Ulanggan 1

ET Ulan ngan 2

NE

Ulan ngan 3

Keterangan : K E poliimerik dengan bbahan utama vyynilpyridine/stiirene EP = Enkapsulasi EH = Enkapsulasi E hidrrofobik dengann bahan dasar assam stearat ET = Enkapsulasi E denngan asam tanatt NE = Tanpa T enkapsulaasi

Gambar 8.

Grafik keecernaan (%)) bahan orgaanik sampel di dalam ruumen secara in vitro v

Tingkat degradasi d prrotein/peptidda di dalam m rumen anntara lain dapat d diketahui melalui pengamatan n terhadap volume gas NH N 3 yang terrbentuk. Analisis n (P<0.0 01) di statistiik menunjukkkan bahwa produksi gaas NH3 berbeeda sangat nyata antara perlakuan. Produksi gas NH3 paling rendaah pada EH H kemudian ET, masing g-masing beerbeda nyata dari yang laain, sedangkan EP dan N NE tidak berbbeda. Kemampuaan bahan hiidrofobik teerutama asam m stearat daalam melinddungi peptidda dari degradasi rumen n nyata lebiih tinggi dib banding keddua metode lain. Kebannyakan asam m stearat di d dalam rumen r secaara alami m merupakan hasil biohid drogenase daari asam lem mak tak jenuuh terutama linoleat dann linolenat. Asam A lemakk bebas tidakk jenuh meru upakan kom mponen lipid terbesar yanng meninggaalkan

49 rumen, terdiri atas sepertiganya palmitat dan dua pertiganya stearat (Lock et al. 2006). Berdasarkan hal tersebut dapat dikatakan bahwa asam stearat yang terdapat di dalam bahan pakan merupakan produk by pass di rumen 250,00 200,00 150,00 100,00 50,00 0,00 EP

EH Ulangan 1

Keterangan : EP = EH = ET = NE =

Ulangan 2

ET

NE

Ulangan 3

Enkapsulasi polimerik dengan bahan utama vynilpyridine/stirene Enkapsulasi hidrofobik dengan bahan dasar asam stearat Enkapsulasi dengan asam tanat Tanpa enkapsulasi

Gambar 9. Grafik pembentukan gas NH3 (mM) dari sampel di dalam rumen secara in vitro Pertumbuhan dan Konsumsi Ternak Rerata bobot awal domba penelitian adalah 30.43 ±1.41 kg dengan koefisien variasi 4.63%, terlihat bahwa keseragaman cukup tinggi. Keseragaman yang tinggi juga terdapat pada bobot akhir keseluruhan, yaitu 38.83 ± 0.89 kg dengan koefisien variasi 2.29%. Sejalan dengan hal tersebut, pertambahan bobot badan (PBB) berbeda tidak nyata di antara perlakuan, yang berarti bahwa suplementasi peptida ELJ tidak berpengaruh pada pertumbuhan. Tabel 8 juga memperlihatkan bahwa perbedaan yang tidak nyata terdapat pada nilai konsumsi dan konversi pakan. Saat dimulai perlakuan domba berumur ± 1 tahun sehingga telah dewasa kelamin dan memproduksi hormon testosteron. Menurut Ensminger (2002), pubertas domba jantan dimulai pada umur 4-6 bulan. Sasaran dari pemberian ELJ adalah pertumbuhan lean (otot), sedangkan otot menempati porsi sekitar 60% dari

50 bobot karkas atau hanya sekitar 34% dari bobot tubuh. Perbedaan yang kecil dalam pertumbuhan otot tidak akan mudah terdeteksi melalui perubahan bobot hidup yang merupakan akumulasi dari seluruh perubahan bobot komponen tubuh. Menurut Hoosner (2005), pertumbuhan hewan merupakan faktor kuantitatif yang diukur secara objektif melalui perubahan panjang dan bobot tubuh. Pengukuran pertumbuhan dengan penimbangan bobot tubuh adalah cara yang paling mudah dan umum. Selain itu, perubahan kualitatif terjadi pada proporsi tubuh dan fungsi yang menyertai pematangan dan peningkatan ukuran tubuh. Kualitas pertumbuhan otot juga penting untuk produksi daging konsumsi, dan rasio lemak intramuskular terhadap otot merupakan ukuran penting dari kualitas daging. Tabel 8. Kinerja pertumbuhan dan konsumsi pakan domba percobaan Perlakuan

Peubah Bobot Awal (kg) Bobot Akhir (kg) PBBH/ekor (g) Konsumsi/hari (g) Nisbah Pakan/PBB

P0

P1

P2

30.500 ± 987 38.650 ± 412 75.5 ± 10.9 844 ± 11 11.29 ± 1.93

30.250± 719 39.150± 823 82.4± 10.7 847± 7 10.32± 1.25

30.550 ± 1684 38.600 ± 712 74.5 ± 11.8 850 ± 14 11.51 ± 1.79

P3 30.425 ± 2364 38.900 ± 1545 78.5 ± 13.0 847 ± 14 10.94 ± 2.11

Keterangan : PO = tanpa pemberian peptida/LJ100 (kontrol) P1 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 1.5 mg/kg BB P2 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 3 mg/kg BB P3 = pemberian LJ100™ terenkapsulasi 1 mg/kg BB

Rerata PBB keseluruhan ternak adalah 8.39 ± 1.18 kg dan PBBH adalah 78 ± 11 g. PBBH tersebut lebih rendah dibanding yang didapatkan oleh Herman (1993) pada jenis domba yang sama. Selain karena perbedaan kualitas pakan, lebih rendahnya PBBH yang didapat juga disebabkan pengukuran yang didasarkan pada kondisi fisiologis ternak yang berbeda. Nilai PBBH yang didapatkan sebanding dengan yang diperoleh Hasnudi (2004) pada domba lokal sumatera dan sei putih dan lebih tinggi dibanding Rianto et al. (2006) pada jenis domba yang sama. Utilisasi Nitrogen Pakan Sebelum memasuki masa perlakuan rerata kecernaan bahan kering total unit percobaan adalah 72.1 ± 5.6 %. Nilai kecernaan bahan kering tersebut hampir

51 setara dengan yang didapatkan Saka (1997), namun jauh lebih tinggi dibanding yang diperoleh Mahesti (2009). Kualitas pakan kemungkinan besar menjadi penyebab perbedaan tersebut. Kadar serat kasar yang rendah yang mengakibatkan TDN pakan menjadi tinggi berkontribusi besar terhadap tingginya kecernaan BK pakan. Nilai kecernaan bahan kering pakan secara paralel akan diikuti oleh kecernaan protein, karena perhitungannya didasarkan pada variabel pengamatan yang sama. Hal ini berbeda dari nilai retensi N, dimana variabel ini dipengaruhi banyak faktor lain. Semua variabel pada kondisi sebelum perlakuan tidak signifikan berbeda di antara perlakuan dan keseragamannya tinggi, meski neraca N terlihat cenderung lebih tinggi pada P2 dan P3. Tabel 9. Utilisasi nitrogen (N) pakan oleh domba menjelang dan akhir perlakuan Tingkat Efisiensi N (%)

Perlakuan P0

P1

Pra perlakuan Kecernaan BK (%) Kecernaan Protein Retensi N (g) Retensi N (%Ko) Retensi N (% Trc) Neraca N (mg/Kg0,75) Akhir perlakuan Kecernaan BK (% Kecernaan Protein Retensi N (g) Retensi N (%Ko) Retensi N (% Trc) Neraca N (mg/Kg0,75)

69.8 ± 7.21 72.26 ± 6.64 59.85 ± 4.58 53.44 ± 4.37 74.15 ± 5.74 714.36 ± 71.26

72.4 ± 5.25 75.39 ± 4.69 51.00 ± 7.48 45.17 ± 6.46 59.78 ± 6.14 602.73 ± 81.23

69.89 ± 8.84 71.80 ± 7.82 87.28 ± 5.43 51.27 ± 7.04 71.56 ± 8.31 959.61 ± 69.09

71.21 ± 6.34 72.13 ± 6.61 80.33 ± 7.78 45.12 ± 5.52 62.47 ± 3.09 868.79 ± 86.82

%Peningkatan Neraca N

34.91 ± 11.55

44.98 ± 12.06

P2 76.0 ± 4.87 77.37 ± 4.33 65.70 ± 6.43 59.08 ± 5.86 76.24 ± 3.92 765.61 ± 77.63

P3 72.1 ± 6.30 76.39 ± 3.28 58.85 ± 11.18 51.52 ± 9.27 67.23 ± 9.93 699.29 ± 159.28

73.67 ± 4.69 73.19 ± 2.55 75.74 ± 4.66 74.51 ± 3.47 103.77 ± 20.26 96.22 ± 13.35 57.23 ± 9.07 52.39 ± 5.70 75.34 ± 8.46 70.21 ± 5.59 1124.91 ± 205.48 1047.97 ± 142.76 46.78 ± 20.83

53.30 ± 27.55

Keterangan : PO = tanpa pemberian peptida/LJ100 (kontrol) P1 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 1.5 mg/kg BB P2 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 3 mg/kg BB P3 = pemberian LJ100™ terenkapsulasi 1 mg/kg BB Retensi N (%Ko) = Persentase N teretensi terhadap konsumsi Retensi N (% Trc) = persentase N teretensi terhadap kecernaan

P3 memperlihatkan peningkatan yang konstan pada semua variabel, sedangkan P2 berfluktuasi. Kecernaan BK pakan P2 paling banyak penurunannya di antara semua perlakuan, namun jumlah N yang diretensinya juga paling tinggi, terindikasi bahwa tidak ada hubungan retensi N dengan tingkat kecernaan BK. Hal ini kemungkinan karena faktor-faktor yang pengaruhnya dominan bervariasi dalam rank yang sempit, sehingga pengaruh tersebut tidak terlihat.

52 Tingkat konsumsi dapat mempengaruhi proses metabolisme protein, yaitu semakin tinggi konsumsi akan dapat menurunkan waktu degradasi protein pakan oleh mikroba dalam rumen, karena laju alir pakan yang semakin cepat. Menurut (Widyobroto et al. 1999) laju partikel pakan keluar dari rumen berhubungan dengan lama tinggal pakan di dalam rumen. Lebih lanjut dijelaskan semakin lama waktu tinggal pakan di dalam rumen akan menyebabkan degradasi pakannya meningkat. Sintesis protein mikroba berhubungan positif dengan waktu tinggal pakan dalam rumen (Soeparno 2005). Kadar Testosteron Plasma Darah Tabel 10. Kadar testosteron domba jantan pada hari ke-94 perlakuan suplementasi peptida pasak bumi Kadar Testosteron (nmol/L) Rerata Standar Deviasi Keterangan : PO P1 P2 P3

= = = =

Perlakuan P0

P1

P2

P3

21.91 7.3

16.28 6.1

26.00 11.6

27.63 7.5

tanpa pemberian peptida/LJ100 (kontrol) pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 1.5 mg/kg BB pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 3 mg/kg BB ™ pemberian LJ100 terenkapsulasi 1 mg/kg BB

Hasil analisis kadar testosteron plasma tersebut masih dalam rank yang sama dengan hasil pengamatan Kishk (2008) dan Wheaton dan Godfrey (2003). Meski kadar testosteron P2 dan P3 terlihat lebih tinggi, namun tidak nyata secara statistik. Banyak faktor nuisance dalam akurasi pengamatan kadar testosteron plasma sesaat. Hasil pengamatan pola diurnal testosterone domba oleh Sanford et al. (1974) menemukan bahwa level testosteron serum domba berfluktuasi dalam 24 jam mulai dari 0.69 hingga 19.66 ng/ml. Jumlah puncak tertinggi dalam waktu 24 jam juga bervariasi antarindividu mulai dari 3 hingga 6 puncak. Meski ada kecenderungan bahwa salah satu puncak terjadi di sekitar jam delapan pagi, namun diantara domba yang diamati tidak ada yang memperlihatkan pencapaian puncak dalam waktu yang persis sama.

53 Profil Darah Darah merupakan media yang penting dan dapat diandalkan untuk menilai status

kesehatan

individu

hewan.

Pengamatan

terhadap

profil

darah

memperlihatkan bahwa kadar haemoglobin (HB) dan butir darah merah (BDM) lebih tinggi pada perlakuan P2 dan P3 dibanding P1, namun berbeda tidak nyata dengan P0. Konsentrasi haemoglobin ditentukan dan terkait dengan perubahan konsentrasi testosteron serum. Peningkatan tajam konsentrasi testosteron menghasilkan rangsangan akut eritropoietin yang mengarah pada peningkatan produksi eritrosit (Thomsen et al. 1986). Tabel 11. Profil darah domba jantan yang disuplementasi peptida pasak bumi Pengamatan

Perlakuan P0 ab

Hemoglobin (gr%) 11.84 ± 0.60 Packet volume cell (%) 29.13 ± 1.27 Butir darah merah (juta/mm3) 9.99 ab ± 1.26 Butir darah putih (ribu/mm3) 11.96 ± 3.53 Limfosit (%) 27.50 ± 5.97 Netrofil (%) 54.25 ± 14.77 Monosit (%) 1.25 ± 0.50 Eosinofil (%) 17.00 ± 9.83

P1

P2

9.54 ± 2.63 24.19 ± 8.98 7.79 a ± 2.77 9.45 ± 5.83 37.50 ± 26.41 53.50 ± 25.41 1.00 ± 0.82 8.00 ± 6.48

B

A

13.04 ± 1.35 33.90 ± 3.05 11.10 b ± 0.91 8.36 ± 1.44 23.20 ± 4.76 56.80 ± 9.73 1.60 ± 0.55 18.40 ± 8.79

P3 B

13.12 ± 1.48 32.75 ± 5.37 11.83B ± 1.91 8.03 ± 2.41 25.60 ± 9.45 57.00 ± 9.27 2.00 ± 1.22 15.40 ± 11.78

Keterangan : PO = tanpa pemberian peptida/LJ100 (kontrol) P1 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 1.5 mg/kg BB P2 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 3 mg/kg BB P3 = pemberian LJ100™ terenkapsulasi 1 mg/kg BB Superskrip berbeda pada baris yang sama huruf kapital berbeda sangat nyata (P<0.01). huruf kecil berbeda nyata (P<0.05)

Hasil yang hampir sama dinyatakan oleh Andrea et al (2008) bahwa hemoglobin dan hematokrit meningkat secara signifikan sesuai dosis perlakuan LH dan testosteron enanthat pada lelaki muda maupun tua. Peningkatan hemoglobin dan hematokrit secara signifikan lebih besar pada lelaki tua dibanding lelaki muda, namun perubahan dalam tingkat eritropoietin atau sTfR tidak signifikan berkorelasi dengan perubahan kadar testosteron total maupun testosteron bebas. Bachman et al. (2010) menyatakan tingginya kadar testosteron serum nyata menekan hepcidin dalam waktu 1 minggu. Tekanan atas hepcidin ini lebih jelas pada lelaki lebih tua dan berkaitan dengan lebih besarnya peningkatan

54 dalam hemoglobin. Tingkat serum hepcidin pada 4 dan 8 minggu dapat memprediksi perubahan hematokrit dari tingkat awal sampai tingkat puncak. Performa Produksi Karkas Bobot potong rerata keseluruhan domba pada penelitian ini adalah 37.869 ± 968 g (CV = 2.56%) sehingga keseragamannya cukup tinggi. Keseragaman tersebut berkurang pada bobot tubuh kosong, dimana rerata totalnya 29.657 ± 1.185 g (CV = 4.00%). Hal ini disebabkan keragaman yang tinggi dari isi saluran pencernaan. Rerata isi saluran pencernaan P3 lebih tinggi dibanding P1, sehingga meski bobot potongnya lebih tinggi bobot tubuh kosongnya lebih rendah, namun persentase karkas terhadap tubuh kosongnya lebih tinggi. Bagaimanapun, semua besaran antarperlakuan pada Tabel 12 berbeda tidak nyata. Secara umum jika diurut besaran nilai antarperlakuan, maka akan didapatkan urutan yang hampir sama antarsemua peubah di Tabel 12. Hal ini berarti bahwa produksi karkas sangat dipengaruhi oleh bobot potong ternak dan perlakuan berpengaruh tidak nyata pada produksi karkas. Tabel 12. Produksi karkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi Peubah

P0

Bobot potong (g) Tubuh kosong (g) Karkas segar *(g) Karkas segar/Bobot potong (%) Karkas segar/Tubuh kosong (%) Karkas kanan dingin* (g) Penyusutan dingin karkas (%)

37 650 ±957 29 143 ±1 264 16 308 ±1 258 43.27 ±2.3 55.90 ±2.2 7 631 ±646 4.87 ±2.5

Perlakuan ELJ P1 P2 37 900 ± 1 065 37 575 ±866 30 215 ± 708 29 463 ±943 17 463 ± 332 16 788 ±697 46.09 ± 1.0 44.66 ±0.8 57.80 ± 0.6 56.97 ±0.8 8 257 ±378 7 871 ±420 3.68 ± 2.0 5.39 ±1.4

P3 38 350 ±1 182 29 808 ±1 784 17 333 ±1 370 45.18 ±3.0 58.10 ±1.6 8 295 ±759 5.14 ±0.8

Keterangan : PO = tanpa pemberian peptida/LJ100 (kontrol) P1 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 1.5 mg/kg BB P2 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 3 mg/kg BB ™ P3 = pemberian LJ100 terenkapsulasi 1 mg/kg BB *Dikoreksi terhadap bobot tubuh kosong pada rataan : 29.657 ± 1185 g

Rerata keseluruhan bobot karkas adalah 16.973 dengan koefisien variasi 6%, sedangkan rerata persentase karkas terhadap bobot tubuh kosong adalah 57.2% dengan koefisien variasi 2.71%. Aplikasi persamaan Huxley pada domba priangan yang diperoleh Herman (1993) menyatakan bahwa domba priangan

55 dengan bobot tubuh kosong 29.66 ± 1.19 kg tersebut memiliki persentase karkas 56.1%, dengan komposisi fisik lemak 24.7%, otot 60.2% dan tulang 15.1%. Persentase karkas tersebut hampir sama dengan persentase karkas yang diperoleh dari perlakuan kontrol pada penelitian ini, sedangkan persentase karkas perlakuan ELJ tampak lebih tinggi. Saka (1997) juga memperoleh rerata persentase karkas yang hampir sama pada domba ekor tipis local, yaitu 56.48 %, namun diperoleh dari rerata bobot potong yang lebih rendah, yaitu 29.45 kg. Rianto et al. (2006) memperoleh persentase karkas panas domba ekor tipis yang lebih rendah, yaitu 39.06%, karena bobot potongnya juga lebih rendah, yaitu 25.45 kg, sedangkan persentase lemak, daging dan tulang karkas berturut-turut 9.71; 69.03 dan 21.27%. Domba Kheri yang memiliki fenotipik yang hampir sama dengan domba priangan jika dipelihara secara intensif pada bobot tubuh kosong 25 kg, juga menghasilkan persentase karkas yang hampir sama, yaitu 57% (Karim et al. 2007). Menurut Berg dan Butterfild (1976) dalam Soeparno (2005), persentase karkas dipengaruhi oleh bangsa, jenis kelamin, umur, bobot potong, proporsi bagian-bagian nonkarkas. Otot menempati porsi sekitar 60% dari bobot karkas, sehingga pertumbuhan otot memiliki pengaruh yang dominan pada persentase karkas. Komposisi Fisik Karkas Tabel 13 memperlihatkan bahwa lemak tubuh paling tinggi pada P1 berbeda sangat nyata dari P2 dan P3, namun berbeda tidak nyata dari P0. Sebaliknya lemak tubuh paling rendah terdapat pada perlakuan P2 dan berbeda tidak nyata dari P3. P1 meski mendapatkan perlakuan ELJ namun masih memiliki kadar lemak yang tinggi karena memiliki bobot karkas yang juga tinggi. Depot lemak tubuh meningkat seiring peningkatan bobot karkas dan bobot potong. Hal ini sesuai dengan pernyataan Safdarian et al (2008) bahwa domba yang lebih berat umumnya lebih berlemak daripada domba yang ringan. Barton dan Kirton (1958) dalam Stanford et al. (1998) menemukan bahwa bobot karkas dapat menjadi prediktor utama kandungan lemak karkas domba, tidak menghasilkan banyak kesalahan dalam pengukurannya seperti gravitas spesifik dan tidak dipengaruhi oleh ragam isi perut seperti persentase karkas.

56 Persentase lemak tubuh umumnya berbanding lurus dengan bobot karkas, sedangkan persentase otot dan tulang berbanding terbalik. Berbalikan dengan bobot lemak, bobot otot nyata lebih tinggi (P<0.05) pada P2 dan P3 dibanding P0 dan P1. Tampak adanya peningkatan massa otot dengan pemberian ekstrak peptida ELJ 3 mg/kg dan LJ100™ 1 mg/kg bobot badan. sedangkan dengan pemberian ekstrak peptida ELJ 1.5 mg/kg bobot badan peningkatan tersebut tidak nyata. Tabel 13. Komponen diseksi karkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi Peubah (g) Karkas kanan Lemak* Otot* Tulang*

P0 7.631 ±646 1.337 a ±73 4.785b ±79 1.849 ±96

Perlakuan ELJ P1 P2 8.257 ±378 1.509A ±70 4.818b ±76 1.698 ±92

7.871 ±420 1.080B ±69 5.071a ±74 1.825 ±91

P3 8.295 ±759 1.094B ±71 5.105a ±76 1.760 ±93

Keterangan : PO = tanpa pemberian peptida/LJ100 (kontrol) P1 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 1.5 mg/kg BB P2 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 3 mg/kg BB ™ P3 = pemberian LJ100 terenkapsulasi 1 mg/kg BB *Dikoreksi terhadap bobot setengah karkas kanan pada rataan : 8.014 ± 586 g Superskrip berbeda pada baris yang sama huruf kapital berbeda sangat nyata (P<0.01), huruf kecil berbeda nyata (P<0.05)

Persentase lemak, otot, dan tulang semua karkas perlakuan berturut-turut adalah sebagai berikut 15.7%, 61.7%, dan 22.4%. Herman (2004) mendapatkan komposisi yang relatif berbeda pada bangsa domba yang sama, yaitu : 26.83%, 57.65%, 13.89%, dan 1.63% masing-masing untuk persentase lemak, otot, tulang, dan jaringan ikat. Perbedaan utama terlihat pada persentase lemak dan tulang, pada penelitian ini didapatkan persentase lemak lebih rendah sehingga persentase tulang menjadi lebih tinggi. Kematangan fisiologis ternak selama proses penggemukan kemungkinan menjadi penyebab perbedaan ini. Herman (2004) melakukan penyembelihan terhadap domba penggemukan yang bobot hidupnya dipastikan mencapai kestabilan, dimana pada kondisi tersebut pertumbuhan lemaknya maksimal. Penggemukan pada penelitian ini lebih menekankan pada durasi pemeliharaan.

57 Rerata bobot tulang pada karkas domba perlakuan ELJ terlihat lebih tinggi secara tidak nyata dibanding kontrol. Reseptor androgen terdapat pada osteoblas dan mampu menstimulasi proliferasi osteoblas dengan bantuan vitamin D. Androgen juga mempengaruhi ekspresi molekul adhesif seperti fibronektin yang memfasilitasi ikatan sel-sel tulang dengan matriks estraseluler yang merupakan syarat penting fungsi osteoblastik (Nieschlag & Behre 2004), dengan demikian androgen dapat meningkatkan massa tulang. Perbandingan perolehan komponenkomponen karkas antara dua unit karkas sudah semestinya dilakukan pada bangsa, jenis kelamin, perlakuan ternak, serta bobot karkas yang sama. Tabel 14. Potongan komersial karkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi Peubah (g) Bagian perempat belakang Leg Loin Flank Bagian perempat depan Rack Shoulder Neck Shank Breast

P0

Perlakuan ELJ P1

P2

P3

3.341 ±71 2.509 ±58 546 ±36 285 ±33

3.330 ±68 2.452 ±56 555 ±35 323 ±32

3.376 ±67 2.487 ±55 602 ±34 288 ±31

3.277 ±69 2.510 ±56 497 ±35 271 ±32

4.638 ±75 760 ±61 1.741 ±128 828 ±68 529 ±77 780b ±35

4.667 ±72 724 ±58 1.662 ±123 732 ±65 652 ±74 897a ±33

4.628 ±70 711 ±57 1.687 ±120 800 ±64 638 ±72 792b ±33

4.713 ±72 725 ±59 1.760 ±124 912 ±66 563 ±74 754b ±34

Keterangan : PO = tanpa pemberian peptida/LJ100 (kontrol) P1 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 1.5 mg/kg BB P2 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 3 mg/kg BB ™ P3 = pemberian LJ100 terenkapsulasi 1 mg/kg BB Dikoreksi terhadap bobot setengah karkas kanan pada rataan : 8.014 ± 586 g Superskrip berbeda pada baris yang sama huruf kapital berbeda sangat nyata (P<0.01), huruf kecil berbeda nyata (P<0.05)

Tabel 14 memperlihatkan bahwa bobot potongan belakang karkas domba penelitian berbeda tidak nyata antarperlakuan. Keseragaman bobot potongan belakang tersebut cukup tinggi dimana nilai rerata dari keseluruhan unit percobaan adalah 3.324 kg dengan koefisien variasi 7.4%. Hal ini berbeda dari bobot potongan depan yang rerata totalnya 4.637 g memiliki koefisien variasi lebih tinggi yaitu 8.4%. Ada kecenderungan bahwa domba yang diberi perlakuan ELJ memiliki bobot potongan depan lebih tinggi. Perbedaan yang signifikan untuk hal ini terlihat jika data di-adjust pada bobot otot yang sama. Efek

58 maskulinitas dari testosteron menghasilkan perototan yang lebih menonjol pada karkas bagian depan. Diaz et al. (2006) menyatakan bahwa domba jantan menunjukkan potongan depan (neck, anterior rib dan shoulder) yang lebih besar, sedangkan betina memiliki loin-rib yang lebih besar dan jantan lebih berotot pada shoulder dan neck dibanding betina. Penelitian ini mendapatkan porsi bagian perempat belakang dan perempat depan masing-masing sebanyak 41.7 dan 58.3%, porsi tersebut sesuai dengan yang didapatkan Barone et al. (2007). Kirton (1997) dalam Kvame dan Vangen (2006) menyatakan bahwa bobot potongan perempat depan lebih tinggi dibanding belakang. Porsi potongan leg sebagaimana umumnya karkas domba menempati kira-kira sepertiga dari bobot belahan karkas. Penelitian ini mendapatkan porsi leg sebesar 31%, sedikit lebih rendah dibanding yang didapatkan Karim et al. (2007) serta Barone et al. (2007) masing-masing sebesar 33%. Porsi potongan shoulder yang didapatkan pada penelitian ini berada diantara temuan kedua peneliti tersebut yaitu, sebesar 21% sedangkan Karim et al. (2007) serta Barone et al. (2007) masing-masing mendapatkan 25 dan 20%. Tabel 15. Sebaran lemak diseksi pada potongan komersial karkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi Peubah (g) Perempat belakang Leg Loin Flank Perempat depan Rack Shoulder Neck Shank Breast

P0 500ab ±38 316ab ±23 92 ±11 83 ±26 845a ±45 162 ±17 194ab ±28 175 ±16 68 ±24 246a ±23

Perlakuan ELJ P1 P2 556a ±36 400b ±36 331a ±22 241b ±22 106 ±10 80 ±10 119 ±25 78 ±24 954A ±43 681B ±42 185 ±17 129 ±16 269a ±27 161b ±27 117 ±16 146 ±15 95 ±23 72 ±23 288a ±22 173b ±23

P3 420b ± 37 255b ± 22 79 ± 11 86 ± 25 674B ± 43 166 ± 17 174b ± 27 112 ± 16 52 ± 23 171b ± 22

Keterangan : PO = tanpa pemberian peptida/LJ100 (kontrol) P1 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 1.5 mg/kg BB P2 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 3 mg/kg BB ™ P3 = pemberian LJ100 terenkapsulasi 1 mg/kg BB Dikoreksi terhadap bobot setengah karkas kanan pada rataan : 8.014 ± 586 g Superskrip berbeda pada baris yang sama huruf kapital berbeda sangat nyata (P<0.01), huruf kecil berbeda nyata (P<0.05)

59 Perbedaan bobot lemak tubuh antarperlakuan yang terlihat pada Tabel 15 membentuk pola yang sama di antara semua bagian potongan. Perlakuan P1 berbeda nyata dari P2 dan P3, sedangkan P0 berbeda tidak nyata dari semua perlakuan lain. Perbedaan dengan signifikansi yang lebih tinggi terlihat pada bagian perempat depan, dimana P0 dan P1 berbeda nyata dari P2 dan P3. Hal ini menunjukkan bahwa penurunan bobot lemak tubuh akibat perlakuan terjadi pada semua bagian tubuh dan lebih nyata terlihat pada bagian perempat depan. Sesuai menurut Nieschlag dan Behre (2004) bahwa kehilangan massa lemak pada perlakuan testosteron dosis yang lebih tinggi adalah merata di seluruh tubuh dan lapisannya serta pada bagian luar maupun dalam. Keseragaman yang tinggi dari ternak percobaan kemungkinan menjadi penyebab tidak terlihatnya perbedaan dalam pola penurunan lemak antarpotongan. Perbedaan yang ekstrim dalam eksistensi androgen seperti pada jantan dan betina akan dapat menjelaskan perbedaan porsi lemak pada potongan tertentu dari karkas. Diaz et al. (2006) menyatakan bahwa interaksi bobot potong dengan jenis kelamin signifikan pada proporsi lemak total di leg, loin-rib, anterior rib, dan flank. Proporsi ini meningkat seiring peningkatan bobot potong pada domba jantan sedangkan pada domba Tabel 16. Sebaran otot pada potongan komersial karkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi Peubah (g) Perempat belakang Leg Loin Flank Perempat depan Rack Shoulder Neck Shank Breast

P0 2.127 ±57 1.626 ±42 319 ±24 182 ±15 2.644ab ±104 384 ±33 1.139 ±104 444 ±49 297 ±29 379c ±15

Perlakuan ELJ P1 P2 2.136 ±54 2.246 ±53 1.617 ±40 1.689 ±40 317 ±23 351 ±23 202 ±14 206 ±14 2.605b ±100 2.819ab ±98 355 ±32 390 ±31 1.044 ±100 1.107 ±98 446 ±47 493 ±46 316 ±28 394 ±28 443a ±14 436ab ±14

P3 2.203 ±55 1.698 ±41 323 ±23 184 ±15 2.913a ±101 369 ±32 1.205 ±101 570 ±47 371 ±29 397bc ±15

Keterangan : PO = tanpa pemberian peptida/LJ100 (kontrol) P1 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 1.5 mg/kg BB P2 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 3 mg/kg BB ™ P3 = pemberian LJ100 terenkapsulasi 1 mg/kg BB Dikoreksi terhadap bobot setengah karkas kanan pada rataan : 8.014 ± 586 g Superskrip berbeda pada baris yang sama huruf kapital berbeda sangat nyata (P<0.01), huruf kecil berbeda nyata (P<0.05)

60 betina terlihat konstan. Soeparno (2011) menyatakan domba yang mendapat pakan berenergi tinggi, menimbun lemak intermuskuler di bagian paha yang lebih tinggi daripada di bagian rusuk 9 dan 11. Data pada Tabel 16 juga memperlihatkan bahwa bobot lemak pada potongan komersial antarindividu memiliki koefisien variasi yang tinggi. Hal ini sesuai dengan pendapat Safdarian et al. (2008) bahwa lemak merupakan jaringan paling beragam pada karkas. Seperti halnya pada lemak, secara umum perbedaan bobot otot total antarperlakuan

diikuti

oleh

perbedaan

bobot

otot

masing-masing

potongan

komersialnya dengan pola yang sama. Bobot otot perempat belakang berbeda tidak nyata antarperlakuan, sama seperti komponennya yaitu potongan leg, loin dan flank, namun pola antarperlakuannya tidak sama. Senada dengan temuan Fahmy (1997) bahwa dua bangsa domba (Romanov dan Booroola-DLS) dengan konsentrasi testosteron plasma berbeda memiliki banyak perbedaan pada komposisi karkas kecuali porsi potongan leg. Hal ini menunjukan bahwa potongan leg tidak nyata dipengaruhi oleh level testosteron. Sebaliknya, bobot otot perempat depan berbeda nyata dari pola yang sama dengan bobot otot karkas. Ada indikasi bahwa peningkatan bobot otot karkas akibat perlakuan lebih mengarah ke perototan di bagian perempat depan. Pengecualian pada potongan breast, dimana perbedaan nyata antarperlakuan terlihat dengan pola yang berbeda, kemungkinan disebabkan adanya interaksi faktor lain. Tabel 17. memperlihatkan bahwa tidak terdapat perbedaan nyata bobot tulang antarperlakuan pada semua potongan, sama seperti bobot tulang total pada tabel terdahulu. Perlakuan pada ternak yang telah mendekati dewasa tubuh serta durasi yang relatif singkat merupakan penyebab utama tidak terlihatnya pengaruh perlakuan ini. Nieschlag dan Behre (2004) menyatakan variasi densitas tulang pada jantan eugonadal berhubungan dengan aktivitas androgenik. Densitas tulang ditentukan oleh dua hal, yaitu pencapaian massa tulang maksimal dan kuantitas pemeliharaan dan penyerapan dari jaringan tulang. Androgen mempengaruhi kedua proses tersebut dan karenanya menjadi suatu penentu penting massa tulang pada jantan. Tidak terlihatnya pengaruh perlakuan pada tulang pada penelitian ini

61 menunjukkan bahwa margin peningkatan testosteron oleh pengaruh ELJ tidak berdampak nyata pada peningkatan massa tulang. Tabel 17. Sebaran tulang pada potongan komersial karkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi Peubah (g) Perempat belakang Leg Loin Perempat depan Rack Shoulder Neck Shank Breast

P0 694 ±29 563 ±22 131 ±19 1.156 ±77 210 ±26 397 ±37 213 ±31 164 ±59 170 ±14

Perlakuan ELJ P1 P2 632 ±28 721 ±27 500 ±21 553 ±20 131 ±18 168 ±18 1.067 ±74 1.104 ±72 166 ±25 184 ±24 340 ±335 411 ±35 161 ±30 162 ±29 241 ±57 169 ±56 158 ±13 178 ±13

P3 663 ±28 568 ±21 94 ±19 1.097 ±74 202 ±25 375 ±36 208 ±30 138 ±57 174 ±13

Keterangan : PO = tanpa pemberian peptida/LJ100 (kontrol) P1 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 1.5 mg/kg BB P2 = pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 3 mg/kg BB ™ P3 = pemberian LJ100 terenkapsulasi 1 mg/kg BB Dikoreksi terhadap bobot setengah karkas kanan pada rataan : 8.014 ± 586 g Superskrip berbeda pada baris yang sama huruf kapital berbeda sangat nyata (P<0.01), huruf kecil berbeda nyata (P<0.05)

Menurut Soeparno (2011) hormon-hormon tertentu mempunyai pengaruh sekunder pada pertumbuhan kerangka, misalnya tiroksin, insulin, hormon pertumbuhan dan hormon-hormon gonadal cenderung bersifat anabolik. Estrogen menghambat resorpsi tulang. Adrenal kortikoid menstimulasi resorpsi tulang dan menghambat pembentukan tulang baru. Komposisi Nonkarkas Bobot komponen tubuh nonkarkas berbeda tidak nyata di antara perlakuan. Tabel 18 memperlihatkan bahwa komponen nonkarkas yang terbesar adalah kulit, diikuti kepala dan perut. Perolehan bobot kulit dan kepala tersebut setara dengan yang didapatkan Herman (1993), namun bobot perut kosong diperoleh lebih tinggi. Perbedaan sifat fisik pakan dapat menjadi penyebab perbedaan perkembangan saluran pencernaan. Herman (1993) menggunakan formulasi pakan dengan konsentrat tinggi dan seluruh pakan berbentuk pellet, sedangkan dalam penelitian ini menggunakan hijauan segar di samping konsentrat.

62

Tabel 18. Komponen nonkarkas domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi Peubah (g)

P0

Kepala Kaki Ekor Kulit Perut Kosong Usus Kosong Paru Jantung Hati Limpa Ginjal Keterangan : PO P1 P2 P3

= = = =

2.738± 152 835± 27 156± 20 3.133± 266 1.003± 50 823± 76 340± 24 116± 16 589± 231 54± 10 77± 6

Perlakuan ELJ P1 2.703± 117 761± 50 206± 62 3.080± 188 1.013± 25 780± 48 325± 19 123± 22 439± 39 52± 4 82± 3

P2

2.660± 305 830± 37 120± 14 3.180± 322 993± 43 865± 79 371± 34 117± 17 449± 34 57± 7 83± 5

P3 2.897± 168 850± 92 147± 17 3.238± 287 1020± 95 798± 104 356± 32 116± 10 412± 27 51± 4 85± 3

tanpa pemberian peptida/LJ100 (kontrol) pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 1,5 mg/kg BB pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 3 mg/kg BB ™ pemberian LJ100 terenkapsulasi 1 mg/kg BB

Karakteristik Daging Sifat fisik daging tidak dipengaruhi oleh suplementasi peptida ELJ seperti yang diperlihatkan oleh Tabel 19. Peningkatan ekspresi maskulinitas yang diakibatkan suplementasi tersebut tidak cukup besar untuk berpengaruh pada sifat fisik daging. Sifat fisik daging dari ternak yang maskulinitasnya berbeda secara ekstrim seperti jenis kelamin dan kastrasi telah dinyatakan berbeda oleh Zhang et al. (2010). Dijelaskan bahwa, jantan nonkastrasi menghasilkan daging lebih tinggi pada nilai shearforce, pH, drip, susut masak, dan kandungan abu dibanding jantan kastrasi dan betina. Salah satu penyebab keempukan daging jantan nonkastrasi lebih rendah adalah karena kadar hidroksiprolinnya yang lebih tinggi. Kadar kolagen juga berhubungan dengan susut masak daging, semakin tinggi kadar kolagen susut masak juga semakin tinggi (Okeudo & Moss 2005).

63 Tabel 19.

Sifat fisik daging domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi

Peubah pH Keempukan (kg/cm3) Susut masak (%) Daya mengikat air (%) Keterangan : PO P1 P2 P3

= = = =

Perlakuan ELJ P1 P2

P0 5.12 ± 0.08 3.32 ± 0.65 43.19 ± 2.26 31.18 ± 2.28

5.16 ± 0.09 3.09 ± 0.85 42.03 ± 2.13 31.58 ± 7.33

P3

5.22 ± 0.08 2.50 ± 0.55 42.13 ± 2.43 34.36 ± 7.14

5.18 ± 0.03 2.63 ± 0.49 44.04 ± 3.10 35.55 ± 9.55

tanpa pemberian peptida/LJ100 (kontrol) pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 1.5 mg/kg BB pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 3 mg/kg BB ™ pemberian LJ100 terenkapsulasi 1 mg/kg BB

Hasil analisis proksimat otot menunjukkan tidak terdapat perbedaan yang nyata pada semua variabel di antara perlakuan. Perbedaan yang nyata pada depot lemak karkas seperti yang disajikan sebelumnya tidak diikuti oleh perbedaan lemak intramuskuler. Lemak intramuskuler atau marbling merupakan lokasi deposit lemak yang paling akhir diisi, kemungkinan juga merupakan yang terakhir dimobilisasi disebabkan kebutuhan energi maupun tuntutan fisiologis. Soeparno (2011) menjelaskan bahwa deposit lemak pada hewan muda biasanya muncul di area viseral, dengan kecukupan nutrien selanjutnya berkembang ke daerah subkutan, intermuskuler, dan intramuskuler. Tabel 20.

Hasil analisis proksimat otot domba jantan priangan yang disuplementasi ekstrak peptida pasak bumi

Peubah (%) Abu Lemak Protein Keterangan : PO P1 P2 P3

= = = =

P0 3.52 ± 0.17 2.33 ± 0.99 75.97 ± 3.39

Perlakuan ELJ P1 P2 4.00 ± 0.55 3.02 ± 1.45 77.51 ± 0.46

4.03 ± 0.49 2.18 ± 2.14 78.32 ± 4.50

P3 3.60 ± 0.34 2.41 ± 1.36 74.98 ± 6.45

tanpa pemberian peptida/LJ100 (kontrol) pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 1.5 mg/kg BB pemberian peptida ELJ terenkapsulasi 3 mg/kg BB ™ pemberian LJ100 terenkapsulasi 1 mg/kg BB

Pembahasan Umum Pasak bumi merupakan tanaman semak, memiliki tinggi yang umumnya kurang dari 10 meter yang banyak ditemukan di hutan sekunder dan primer di beberapa daratan di Asia Tenggara. Tanaman ini di Indonesia ditemukan di Pulau

64 Sumatera dan Kalimantan. Populasi tanaman tersebut di beberapa kawasan hutan di Sumatera cukup tinggi. Ginting (2010) yang mengamati ekologi ELJ di sekitar hutan Bukit Lawang Sumatera Utara menemukan bahwa indeks nilai penting (INP) ELJ di kawasan tersebut untuk keanekaragaman tingkat pertumbuhan pohon (dari 72 jenis tanaman), tingkat pertumbuhan tiang (dari 44 jenis), tingkat pertumbuhan pancang (dari 70 jenis) dan tingkat pertumbuhan semai (dari 69 jenis) masing-masing adalah 2.16%, 22.9%, 24%, 24.6%. Tanaman ELJ di kawasan hutan ini dapat dikategorikan berperan karena menurut Sutisna (1981) bahwa suatu jenis dapat dikatakan berperan jika INP untuk tingkat semai dan pancang lebih dari 10%, sedangkan untuk tingkat tiang dan pohon sebesar 15%. Heriyanto et

al. (2006) menemukan bahwa ELJ lebih menyukai tempat tumbuh yang miring, aerasi baik, dan tidak pernah tergenang air. Kelimpahan tanaman tingkat semai pada kondisi tersebut ditemukan antara 60 hingga 280 individu per ha. Disimpulkan juga bahwa ancaman terhadap kelangkaan ELJ di Bengkulu tidak terlalu merisaukan karena masyarakat setempat jarang yang memanfaatkan tumbuhan ini untuk ramuan obat tradisional. Noorhidayah dan Sidiyasa (2007) yang

mengamati ekologi tanaman obat di hutan Sungai Wain Kalimantan Timur menyatakan bahwa ELJ lebih banyak ditemukan pada tutupan hutan agak terbuka pada hutan primer, maupun hutan primer terganggu. Data penelitian tersebut mengindikasikan bahwa meski populasinya tidak dominan tanaman ELJ masih dalam kondisi tersedia. Beberapa hasil penelitian di atas menunjukkan bahwa ELJ secara alami masih cukup tersedia, namun tentunya untuk pemenuhan kebutuhan yang besar di masa datang perlu dilakukan budi daya. Laporan hasil budi daya tanaman ELJ di Indonesia hingga saat ini belum ditemukan. Informasi tentang adanya pihak-pihak yang melakukan budi daya tanaman ELJ juga tidak jelas. Bisa diasumsikan bahwa semua produk ELJ yang diperdagangkan merupakan hasil eksploitasi dari hutan. Ada kemungkinan beberapa alasan yang menyebabkan masyarakat ataupun investor kurang tertarik untuk melakukan budi daya. Alasan pertama adalah populasi tanaman ini di alam masih cukup banyak, sehingga biaya untuk mencari dan mengeksploitasi tanaman yang sudah ada masih lebih murah dibanding melakukan budi daya. Meski ada

65 informasi perusahaan eksportir yang melakukan budi daya, tetapi hasilnya hanya sebagai cadangan pendukung kontinuitas produk mereka yang yang berasal dari hutan atau juga sebagai showwindow. Alasan kedua adalah biaya untuk budi daya ELJ relatif tinggi terutama jika analisis investasi dikaitkan dengan waktu dan opportunity cost penggunaan lahan. ELJ merupakan tanaman tahunan sehingga butuh waktu yang lama untuk satu siklus panen. Alasan ketiga karena permintaan pasar yang belum stabil, sehingga produk yang telah dipersiapkan dalam jumlah banyak

sering

menjadi

kadaluarsa

di

tempat

penyimpanan.

Beberapa

permasalahan tersebut menjadi hambatan dalam usaha budi daya ELJ secara konvensional, namun teknologi budi daya juga terus berkembang. Ada informasi bahwa budi daya ELJ melalui kultur jaringan telah dilakukan secara komersial dan ekstraksi komponen bioaktifnya dilakukan pada fase dini perkembangan tanaman. Hal ini sejalan dengan temuan Mahmood et al. (2011) bahwa konsentrasi salah satu komponen aktif ELJ yaitu 9-methoxycanthin-6-one ditemukan lebih tinggi pada jaringan kalus dibanding pada tanaman utuh ELJ. Produk ELJ yang beredar di pasaran umumnya dipromosikan sebagaimana fungsinya yang dikenal awam, yaitu sebagai afrodisiak, sementara sebagian juga dipromosikan sebagai agen testosterone booster dan bodybuilding. Harga yang ditawarkan meski relatif tinggi namun cukup wajar mengingat manfaatnya bagi konsumen (terutama lelaki). Sejauh ini belum ditemukan adanya informasi atau hasil penelitian yang khusus mengamati pengaruh ELJ terhadap pertumbuhan otot dan perubahan komposisi tubuh, terutama pada ternak. Penggunaan ELJ sebagai pemacu pertumbuhan lean bagi ternak pedaging sebagaimana yang dilaksanakan pada penelitian ini dapat menjadi informasi awal yang terukur mengenai hal tersebut. Hasil penelitian membuktikan bahwa ekstrak akar ELJ mampu meningkatkan pertumbuhan otot dan menurunkan lemak karkas. Ekstraksi pada penelitian ini dilakukan dengan asumsi bahwa komponen bioaktif ELJ yang berperan dalam peningkatan testosterone adalah kelompok peptida, sehingga digunakan metode ekstraksi peptida/protein yang umum yaitu berdasarkan sifat kelarutannya pada suasana asam dan basa. Nilai recovery protein yang diperoleh masih rendah terutama jika dibandingkan dengan nilai recovery

66 dari isolasi protein beberapa kacang-kacangan. Proses ekstraksi menyisakan 10,09 gram protein dalam 500 gram bahan baku, suatu jumlah yang masih optimis untuk dikurangi. Selain karena kandungan protein kasar bahan baku yang juga rendah, sisa lemak yang masih tertinggal turut menghalangi kesempurnaan ekstraksi lemak. Adanya sisa lemak terlihat pada kromatogram yang menunjukkan bahwa asam lemak cukup dominan dari senyawa yang terdeteksi. Kelompok peptida ELJ dengan berat molekul < 8 kD seperti yang dikemukakan Sambandan et al. (2006) tidak terdeteksi dengan elektroforesis pada penelitian ini. Analisis SDS PAGE untuk peptida dengan berat molekul yang sangat rendah membutuhkan kecermatan yang tinggi dalam pengerjaannya. Peptida bioaktif ELJ yang dimaksud kemungkinan juga bukan atau bukan hanya dalam keadaan bebas pada bahan asal, tetapi merupakan potongan dari rantai polipeptida atau protein dengan molekul lebih besar, seperti halnya pada susu. Peptida bioaktif dari susu terbentuk setelah protein utama mengalami hindrolisis oleh enzim percernaan sebagaimana yang diamati Hernandez-Ledesma et al. (2007) Penelitian ini menyingkirkan anggapan bahwa senyawa yang berfungsi sebagai testosterone booster adalah kelompok quassinoid seperti eurycomanone, eurycomanol, dan eurycomalacton, karena hasil analisis GC-MS tidak mengindikasikan adanya senyawa tersebut. Anggapan lain bahwa peningkatan testosteron adalah akibat adanya fitosterol pada ELJ, juga sulit diterima. Stigmasterol sebagai fitosterol yang ditemukan cukup dominan pada ekstrak, banyak juga ditemukan pada tanaman lain namun tidak memberikan efek yang sama seperti ELJ. Fitosterol lain seperti ergosten, cholestan, dan metil kolesterol ditemukan dalam kadar yang sangat sedikit (persentase areanya pada kromatogram < 0,5%). Hasil karakterisasi ekstrak menguatkan dugaan bahwa komponen ekstrak ELJ yang berkontribusi dalam memperlihatkan pengaruh perlakuan pada penelitian ini adalah kelompok senyawa peptida. Proteksi komponen bioaktif ekstrak dari degradasi rumen yang dilakukan pada penelitian ini terbukti dapat menghantarkan senyawa tersebut mencapai organ target sehingga memperlihatkan fungsi yang dinginkan. Meski demikian

67 efisiensinya

masih

perlu

ditingkatkan.

Hasil

analisis

in

vitro

rumen

memperlihatkan bahwa nilai proteksi EH sesungguhnya baru 34% berdasarkan KCBO dan 75.5% berdasarkan produksi gas NH3. Menekan jumlah substrat ekstrak yang terdegradasi di rumen akan meningkatkan efisiensi dan menghemat penggunaannya. Peningkatan kadar testosteron pada penelitian ini meski terlihat tidak nyata, namun berdasarkan pengamatan terhadap kadar haemoglobin dan butir darah merah serta komposisi tubuh diyakini testosteron meningkat pada P2 dan P3. Komposisi fisik karkas nyata dipengaruhi perlakuan P2 dan P3 terutama bobot lemak dan otot, namun tidak pada tulang, sedangkan sifat fisik dan komposisi kimia daging tidak terpengaruh nyata. Mekanisme pengaruh testosteron pada pertumbuhan otot secara rinci telah dijelaskan pada Tinjauan Pustaka, sedangkan mekanismenya dalam menurunkan lemak tubuh, testosteron mempengaruhi sinyal transduksi katekolamin di dalam sel lemak (Arner 2005). Mekanisme aksi testosteron dan katekolamin dalam menurunkan lemak tubuh berbeda diantara spesies. Sebagaimana umumnya penelitian yang dilaksanakan dalam skala laboratorium, akan sulit mencapai nilai ekonomis bila dilakukan analisis finansial. Pertumbuhan otot yang diakibatkan oleh pengaruh suplementasi ELJ pada penelitian ini baru mencapai 6% atau 958 gram dari 16.028 gram bobot karkas. Pertambahan bobot otot tersebut jika diuangkan dengan harga daging Rp 60.000,/kg adalah Rp. 57.480,-. Nilai tersebut masih jauh lebih rendah dibandingkan biaya total preparasi suplemen yang digunakan yang mencapai ratusan ribu rupiah. Tambahan penerimaan diperkirakan akan lebih tinggi jika produk yang dipasarkan berupa karkas, karena penampilannya yang lebih lean lebih disukai konsumen. Williams dan Droulez (2010) melaporkan bahwa di Australia ada kecenderungan meningkat (38%) penjualan daging merah dengan cara memisahkan lemaknya. Pemisahan atau penghilangan lemak belakangan juga meningkat (89%) dilakukan oleh konsumen setelah membeli daging. Penelitian lebih lanjut diperlukan guna menjadikan ekstrak ELJ sebagai sebuah produk yang layak untuk diaplikasikan di lapangan. Penelitian lanjutan

68 tersebut akan menyangkut optimalisasi recovery ekstrak peptida, maksimalisasi proteksi bahan aktif di rumen dan pembebasannya di usus halus, serta dosis dan waktu pemberian yang tepat pada ternak. Peningkatan recovery ekstrak pada praktiknya akan tercapai dengan memaksimalkan kelarutan dan pengendapatan peptida dalam larutan asam basa. Hal ini dapat dicapai antara lain dengan lebih memperkecil ukuran matriks, memaksimalkan pemisahan lemak, penambahan garam, penggunaan titik isoelektrik yang lebih selektif, dan sebagainya. Penelitian lebih mendalam mengenai beberapa metode lain yang dapat melindungi ekstrak peptida dari degradasi rumen dan membebaskannya pascarumen perlu dilakukan untuk mendapatkan metode proteksi yang paling efektif. Setiap tahapan perlu dicermati dan keutuhan senyawa aktif saat mencapai usus terdeteksi dan terukur. Percobaan suplementasi peptida pasak bumi pada beberapa level yang lebih tinggi perlu dilakukan untuk mendapatkan dosis pemberian optimal. Frekuensi dan lama pemberian juga perlu diamati agar suplementasi lebih efisien. Umumnya respon fisiologis tidak optimal dengan pemberian perlakuan yang terus-menerus.

69 KESIMPULAN DAN SARAN

Simpulan ƒ

Suplementasi ekstrak peptida pasak bumi dan produk mengandung eurypeptide® masing-masing sebanyak 3 dan 1 mg/kg bobot badan dapat menurunkan bobot lemak dan meningkatkan bobot otot karkas domba jantan priangan.

ƒ

Ekstrak pasak bumi yang digunakan mengandung peptida kasar 34.57% dan disalut dengan bahan hidrofobik dengan komponen utama asam stearat

ƒ

Penurunan bobot lemak terjadi pada semua bagian karkas dan lebih nyata pada bagian perempat depan. Peningkatan bobot otot juga lebih mengarah ke otot di bagian perempat depan.

ƒ

Perlakuan

suplementasi

pasak

bumi

(Eurycoma

longifolia

Jack)

berpengaruh tidak nyata pada bobot tulang dan bobot potongan komersial karkas. ƒ

Meski perlakuan terlihat dapat “membelokkan” pembentukan lemak menjadi otot namun pengaruhnya pada efisiensi pakan, pertumbuhan dan produksi karkas domba tidak nyata.

Saran ƒ

Aplikasi ekstrak pasak bumi lebih lanjut ditentukan oleh nilai ekonomisnya, dalam hal ini efisiensi proses ekstraksi berperan penting. Pengamatan komprehensif pada setiap level faktor yang berpengaruh pada hasil, perlu dicermati untuk menghasilkan produk dengan efisiensi optimal.

ƒ

Pengamatan lebih mendalam dan terukur perlu dilakukan pada efektivitas metode proteksi ruminal sehingga kehilangan substrat saat mencapai usus dapat ditekan.

ƒ

Suplementasi peptida pasak bumi dengan beberapa dosis yang lebih tinggi serta pengaturan frekuensi pemberiannya perlu dikaji untuk mendapatkan dosis optimal dan penggunaan yang efisien.

70

71

DAFTAR PUSTAKA [AOAC] Association of Official Analytical Chemist. 1990. Official Methods of Analysis. 15th Ed. Arlington, Virginia Allen RE, Merkel RA, Young RB. 1979. Cellular aspects of muscle growth : myogenic cell proliferation. J Anim Sci 49:115-127 Allen RE, Dodson MV, Boxhorn LK, Davis SL, Hossner KL. 1986. Satellite cell proliferation in response to pituitary hormones. J Anim Sci 62:1596-1601 Andrea DC et al. 2008. Effects of graded doses of testosterone on erythropoiesis in healthy young and older men. J Clin Endocrinol Metab 93(3):914–919 Arner P. 2005. Effects of testosterone on fat cell lipolysis. Species differences and possible role in polycystic ovarian syndrome. Biochimie 87:39–43 Arny AF et al. 1998. Testosterone injection stimulates net protein synthesis but not tissue amino acid transport. Am J Physiol Endocrinol Metab 275:864–871. Arora SP. 1989. Pencernaan Mikroba pada Ruminansia. Yogyakarta: Gadjah Mada Univ. Press. Asep EK et al. 2008. The effects of particle size, fermentation and roasting of cocoa nibs on supercritical fluid extraction of cocoa butter. J Food Eng 85:450–458. Bachman E et al. 2010. Testosterone suppresses hepcidin in men: a potential mechanism for testosterone-induced erythrocytosis. J Clin Endocrinol Metab 95(10):4743-7 Barone CMA, Colatruglio P, Girolami A, Matassino D, Zullo A. 2007. Genetic type, sex, age at slaughter and feeding system effects on carcass and cut composition in lambs. Livest Sci 112:133-142. Bedir E, Abou-Gazar H, Ngwendson JN, Khan IA. 2003. Eurycomaoside: a new quassinoid-type glycoside from the roots of Eurycoma longifolia. Chem Pharm Bull 51(11):1301-1303. Berg RT, Butterfield RM. 1976. New Concepts of Cattle Growth. Sydney: University Press. Berg RT, Anderson BB, Liboriussen T. 1978. Growth of bovine tissue III. Genetic influences on pattern of fat growth and distribution in young bulls. J Anim Prod. 28:62-70. Bhasin S et al. 1996. The effects of supraphysiologic doses of testosterone on muscle size and strength in normal men. NEJM 335:1-7.

72 Bhasin S et al. 2003. The mechanisms of androgen effects on body composition: mesenchymal pluripotent cell as the target of androgen action. Review article. J Gerontol A Biol Sci Med Sci 58(12):1103-1110 Bollag DM, Edelstein SJ. 1991. Protein Method. New York : John Willey & Sons Inc. Bondi AA, Drori D. 1987. Animal Nutrition. Chichester: John Wiley & Sons Ltd. [BPOM] Badan Pengawas Obat dan Makanan. 2004. Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat Indonesia. Vol 1. Jakarta: BPOM-RI Brill KT et al. 2002. Single and combined effects of growth hormone and testosterone administration on measures of body composition, physical performance, mood, sexual function, bone turnover, and muscle gene expression in healthy older men. J Clin Endocrinol Metab 87:5649-5657 Brook CGD, Marshall NJ. 1996. Essential Endocrinology. Ed ke-3. Blackwell Scientific Buckingham et al. 2003. The formation of skeletal muscle: from somite to limb. J Anat 202:59-68. Butterfield RM. 1988. New Concepts of Sheep Growth. Sidney: University of Sidney Press. Cardozo PW, Calsamiglia S, Ferret A, Kamel C. 2005. Screening for the effects of natural plant extracts at different pH on in vitro rumen microbial fermentation of a high-concentrate diet for beef cattle1. J Anim Sci 83:2572-2579. Chan. 2000. Learn a Tree a Month, Eurycoma longifolia. Penang Branch: Malaysian Nature Society. Cheftel JC, Cuq JL, Lorient D. 1985. Amino acids, peptides and proteins. Di dalam: Fennema OR, editor. Food Chemistry. New York: Marcel Dekker. hlm 245-370 Chen Y, Zajac JD, Maclean HE. 2005. Androgen regulation of satellite cell function. J Endocrinol 186:21-31. Clare DA, Swaisgood HE. 2000. Bioactive milk peptides: A prospectus. J Dairy Sci 83:1187-1195. Close WH, Menke KH. 1986. Selected topics in animal nutrition. Ed ke-2. Stuttgart: University of Hohenhelm. Czerkawski JW. 1986. Effect of unseed oil fatty acids and unseed oil on rumen fermentation of sheep. J Agric Sci Camb 81: 517.

73 Danhaive PA, Rousseau GG. 1988. Evidence for sex-dependent anabolic response to androgenic steroids mediated by muscle glucocorticoid receptors in the rat. J Steroid Biochem 29:575-581. Denhard M. 2004. Sample Collection, Handling, Storage and Preparation. Berlin, Germany: Institute for Zoo and Wildlife Research. Diaz MT et al. 2006. Body composition in relation to slaughter weight and gender in suckling lambs. Small Rum Res 64:126-132. Enoki TY, Yoshida L, Lally J, Hatta H, Bonen A. 2006. Testosterone increases lactate transport, monocarboxylate transporter (MCT)1 and MCT4 in rat skeletal muscle. J Physiol 577:433-443. Ensminger ME. 2002. Sheep & Goat Science, Animal Agriculture Series. Ed ke-6. Illinois: Interstate Publisher Inc. Fahmy MH. 1997. Carcass composition in Romanov and crossbred male lambs from 10 to 34 weeks of age and its association with testosterone concentration. Small Rum Res 26:267-276 Felig P, Baxter JD, Broadus AE, Frohman LA. 1981. Endocrinology and Metabolism. McGraw-Hill Book Company. Giannoulis MG et al. 2006. The effects of growth hormone and/or testosterone in healthy elderly men : a randomized controlled trial. J Clin Endocrinol Metab 91:477-484. Gibney J, Wolthers T, Johannsson G, Umpleby AM, Ho KKY. 2005. Growth hormone and testosterone interact positively to enhance protein and energy metabolism in hypopituitary men. Am J Physiol Endocrinol Metab 289:266271. Ginting ABR. 2010. Kajian ekologi pasak bumi (Eurycoma Longifolia Jack) dan pemanfaatan oleh masyarakat di sekitar hutan Bukit Lawang [tesis]. Medan: Program Studi Magister Ilmu Biologi FMIPA-USU. Griggs RC et al. 1989. Effect of testosterone on muscle mass and muscle protein synthesis. J Appl Physiol 66(1):498-503. Guyton AC, Hall JE. 1996. Textbook of Medical Physiology. Ed ke-9. Philadelphia, Pennsylvania: WB Saunders Company. Hamzah S, Yusof A. 2003. The ergogenic effects of eurycoma longifolia jack: A pilot study. Br J Sports Med 37:464-470 Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia, Penuntun cara modern menganalisis tumbuhan. Ed ke-2. Padmawinata K, penerjemah. Bandung: Penerbit ITB. Hasnudi. 2004. Kajian tumbuh kembang karkas dan komponennya serta penampilan domba sungei putih dan lokal sumatera yang menggunakan pakan

74 limbah kelapa sawit [disertasi]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Hawke TJ, Garry DJ. 2001. Myogenic satellite cells: physiology to molecular biology. J Appl Physiol 91(2):534-51. Heldt WH, Piechulla B. 2011. Plant Biochemistry. Ed ke-4. Academic Press. Terjemahan dari : Pflanzenbiochemie Heriyanto NM, Sawitri R, Subiandono E. 2006. Kajian ekologi dan potensi pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack) di kelompok hutan Sungai Manna-Sungai Nasal, Bengkulu. Bul Plasma Nutfah 12(2):69-75. Herman R. 1993. Perbandingan pertumbuhan, komposisi tubuh dan karkas antara domba priangan dan ekor gemuk [disertasi]. Bogor : Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Herman R. 2004. Komposisi dan distribusi otot karkas domba priangan jantan dewasa. JITAA 29(2):57-64. Hernandez-Ledesma B, Quiros A, Amigo L, Recio I. 2007. Identification of bioactive peptides after digestion of human milk and infant formula with pepsin and pancreatin. Int Dairy J 17:2–49. Hossner KL. 2005. Hormonal Regulation Massachusetts: CABI Publishing.

of

Farm

Animal

Growth.

Hungate RE. 1966. The Rumen and Its Microbes. New York: Academic Press. Jaffe BM, Behrman NR. 1974. Methods of Hormone Radioimmunoassay. New York: Academic Press. Jhonson MH, Everrit BJ. 1995. Essential Reproduction. Ed ke-4. Blackwell Science. Johnston RG. 1983. Introduction to Sheep Farming. London: Granada Publishing Ltd. Judge MD, Aberle ED, Forrest JC, Hedrick HB, Merkel RA. 1989. Principles of Meat Science. Iowa: Kendall/Hunt Publishing Co. Kadi F, Eriksson A, Holmner S, Thornell LE. 1999. Effects of anabolic steroids on the muscle cells of strength-trained athletes. Med Sci Sports Exerc 31: 1528-1534. Kamanga-Sollo E et al. 2004. IGF-I mRNA levels in bovine satellite cell cultures: effects of fusion and anabolic steroid treatment. J Cell Physiol 201:181-189. Karim SA, Porwal K, Kumar S, Singh VK. 2007. Carcass traits of Kheri lambs maintained on different system of feeding management. Meat Sci 76:395-401.

75 King MW, Marchesini S. 2004. Steroid Hormon and Receptors. http://www.med. unibs.it/-marchesi/sterhorm.html Kirton AH, Dalton DC, Ackerley LR. 1974. Performance of sheep on new Zealand. J Agric Res 17:283-293. Kishk WH. 2008. Interrelationship between ram plasma testosterone level and some semen characteristics. Slovak J Anim Sci 41(2):67-71. Kitts DD, Weiler K. 2003. Bioactive proteins and peptides from food sources. Applications of bioprocesses used in isolation and recovery. Curr Pharmaceut Design 9:1309-1323. Kjell B, Ann J. Helena L, penemu; Astra Aktiebolag. 19 Nopember 2001. Formulasi serbuk yang mengandung melezitosa sebagai pengencer. ID 0 007 014. Klose RE, Nyack W, penemu; Balchem Corporation. 2 Maret 1993. Encapsulated bioactive substances. US Patent 5 190 775. Krawiec BJ, Robert AF, Thomas CV, Leonard SJ, Charles HL. 2005. Hindlimb casting decreases muscle mass in part by proteasome-dependent proteolysis but independent of protein synthesis. Am J Physiol Endocrinol Metab. 289: 969-980. Kvame TE, Vangen O. 2006. In vivo composition of carcass regions in lamb of two genetic lines, and selection of CT positions for estimation of each region. Small Rum Res 66:201-208. Laemli CK. 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the methodes. Nature 227:680-685. Lehninger AL. 1982. Dasar-Dasar Biokimia Jilid 1. Suhartono MT, penerjemah. Jakarta: Erlangga Lewis MI, Horvitz GD, Clemmons DR, Fournier M. 2002. Role of IGF-I and IGF-binding proteins within diaphragm muscle in modulating the effects of nandrolone. Am J Physiol Endocrinol Metab 282:483-490. Lillford PJ. 1998. Large-scale methodes for protein separation and isolation. Di dalam : Franks F, editor. Characterization of Proteins. New Jersey: Humana Press. hlm 427-448 Litwack G, Schmidt TJ. 2002a. Biochemistry of hormones I : Polypeptide hormones. Di dalam: Textbook of Biochemistry and Clinical Correlation. Ed ke-5. John Wiley and Sons. hlm 959-988. Litwack G, Schmidt TJ. 2002b. Biochemistry of Hormones I : Steroid Hormones. Di dalam: Textbook of Biochemistry and Clinical Correlation. Ed ke-5. John Wiley and Sons. hlm 999-1033.

76 Lock et al. 2006. Dynamics of ruminant fat digestion: Part 1. Feedstuffs 78(16) Reprinted Ma K et al. 2003. Glucocorticoid-induced skeletal muscle atrophy is associated with upregulation of miostatin gene expression. Am J Physiol Endocrinol Metab 285: 363-371. Mahmood M, Normi R, Subramaniam S. 2011. Distribution of 9-methoxycanthin6-one from the intact plant parts and callus cultures of Eurycoma longifolia (Tongkat Ali). AJCS 5(12):1565-1569. Mahesti G. 2009. Pemanfaatan protein pada domba lokal jantan dengan bobot badan dan aras pemberian pakan yang berbeda [tesis]. Semarang: Program Pascasarjana Universitas Diponegoro Mateescu RG, Thonney ML. 2002. Gene expression in sexually dimorphic muscles in sheep. J Anim Sci 80:1879-1887. Mauro A. 1961. Satellite cell of skeletal muscle fibers. J Biophys Biochem Cytol 9: 493. Murray DM, Slezacek O. 1979. Growth rate effects on the chemical composition of carcass and musscle tissue of sheep. Austr J Exp Agric Anim Husb 19:161169. Murray RK, Granner DK, Mayes PA, Rodwell VW. 1999. Biokimia Harper. Ed ke-24. Jakarta: Penerbit CV. EGC. Russell B, Motlagh D, Ashley WW. 2000. Form follows function: how muscle shape is regulated by work. J Appl Physiol 88(3):1127-32. Nainggolan O, Simanjuntak JW. 2005. Pengaruh ekstrak etanol akar pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack) terhadap perilaku seksual mencit putih. Cermin Dunia Kedokteran 146:55-57. Natarjan KR. 1980. Peanut protein ingridients, preparation, properties and food uses. Adv Food Res 26:215-273. Natasasmita A. 1978. Body composition of swamp buffalo (Bubalus bubalis), A study of development growth and of sex differences [disertasi]. Melbourne: University of Melbourne. Nieschlag E, Behre HM. 2004. Testosterone Action, Deficiency, Subtitution. Ed ke-3. Cambridge Univ Press. Noorhidayah, Sidiyasa K. 2007. Aspek ekologi tumbuhan obat hutan asli Kalimantan di hutan lindung Sungai Wain, Kalimantan Timur. Info Hutan 4 (6):523-531. Okeudo NJ, Moss BW. 2005. Interrelationships amongst carcass and meat quality characteristic of sheep. Meat Sci 69:1-8

77 Page ST et al. 2005. Exogenous testosterone alone or with finasteride increases physical performance, grip strength, and lean body mass in older men with low serum testosterone. J Clin Endocrinol Metab 90(3):1502-1510. Pampusch MS et al. 2003. Time course of changes in growth factor mRNA levels in muscle of steroid-implanted and nonimplanted steers. J Anim Sci 81:27332740 Papas AM, Sniffen CJ, Muscato TV. 1984. Effectiveness of Rumen-Protected Methionine for Delivering Methionine Postruminally in Dairy Cows. J Dairy Sci 67:545-552 Parakkasi A. 1998. Ilmu Nutrisi dan Makanan Ternak Ruminan. Jakarta: UI-Press. Pihlanto-Lepa¨la¨ A, Koskinen P, Pilola K, Tupasela T, Korhonen H. 2000. Angiotensin I-converting enzyme inhibitory properties of whey protein digests: Concentration and characterization of active peptides. J Dairy Res 67: 53-64. Pollard JW. 1999. Modifiers of Estrogen Action. Sci Med July/August: 38-47. Rachmadi D. 2003. Dampak pemberian bungkil inti sawit dan konsentrat yang dilindungi formaldehida pada domba terhadap kinerja dan kandungan asam lemak poli tak jenuh [disertasi]. Bogor: Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Rahmalia A, Rizkita R, Esyanti, Iriawati. 2011. A qualitative and quantitative evaluation of terpenoid and alkaloid in root and stem of pasak bumi (Eurycoma longifolia Jack). J Mat Sains 16(1):49-52 Rianto E, Lindasari E, Purbowati E. 2006. Pertumbuhan dan komponen fisik karkas domba ekor tipis jantan yang mendapat dedak padi dengan aras berbeda. Anim Product 8(1):28-33. Romans RJ, Ziegler PT. 1994. The Meat We Eat. Ed ke-7. The Interstate Printers and Publisher Inc Safdarian M, Zamiri MJ, Hashemi M, Noorolahi H. 2008. Relationships of fattail dimensions with fat-tail weight and carcass characteristics at different slaughter weights of Torki-Ghashghaii sheep. Meat Sci 80:686-689. Saka IK. 1997. Metabolisme zat-zat makanan, karakteristik karkas dan sifat fisik daging domba ekor tipis jantan yang diberi clenbuterol [disertasi]. Bogor : Program Pascasarjana IPB. Sambandan TG, Rha CK, Kadir AA, Aminudim N, Saad JM, penemu; Government of Malaysia, Massachusetts Institute of Technology. 7 Nov 2006. Bioactive fraction of Eurycoma longifolia. US Patent 7 132 117 B2. Sanford LM, Winter JSD, Palmer WM, Howland BE. 1974. The profile of LH and testosterone secretion in ram. Endocrinology 95:627-631

78 Sastradipradja D et al. 1989. Penuntun Praktikum Fisiologi Veteriner. Bogor: PAU Ilmu Hayat IPB. Sinha-Hikim I et al. 2002. Testosterone-induced increase in muscle size in healthy young men is associated with muscle fiber hypertrophy. Am J Physiol Endocrinol Metab 283: 154-164. Sinha-Hikim I, Roth SM, Lee MI, Bhasin S. 2003. Testosterone-induced muscle hypertrophy is associated with an increase in satellite cell number in healthy, young men. Am J Physiol Endocrinol Metab 285:197-205. Sinha-Hikim I, Taylor WE, Gonzalez-Cadavid NF, Zheng W, Bhasin S. 2004. Androgen receptor in human skeletal muscle and cultured muscle satellite cells : up-regulation by androgen treatment. J Clin Endocrinol Metab 89:5245-5255. Soeparno. 2005. Ilmu dan Teknologi Daging. Ed ke-4. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Soeparno. 2011. Ilmu Nutrisi dan Gizi Daging. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press Stanford K, Jones SDM, Price MA. 1998. Methods of predicting lamb carcass composition: A review. Small Rum Res. 29:241-254. Steimer TH. 2003. Steroid Hormone Metabolism. http://www.gfmer.ch/books/ reproductive_health/steroid_hormone_metabolism Steel RGD, Torrie JH. 1995. Prinsip dan Prosedur Statistika: Suatu Pendekatan Biometrik. Bambang Sumantri, penerjemah. Jakarta: PT Gramedia Pustaka Utama. Terjemahan dari: Principles and Prosedures of Statistics. Sugiyono, 1997. Komposisi fisik karkas, sifat fisik dan komposisi kimia daging potongan komersial karkas kambing Kacang dan domba lokal jantan [skripsi]. Bogor: Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor. Sutisna U. 1981. Komposisi jenis hutan bekas tebangan di Batulicin, Kalimantan Selatan, Deskripsi dan Analisis. Laporan No. 328. Bogor: Balai Penelitian Hutan. Taufiqqurrachman. 1999. Pengaruh ekstrak Pimpinella alpina Molk. (purwoceng) dan akar Eurycoma longifolia Jack. (pasak bumi) terhadap peningkatan kadar testosteron, LH, dan FSH serta perbedaan peningkatannya pada tikus jantan Spragul Dawley [tesis]. Semarang: Pascasarjana Ilmu Biomedik, Universitas Diponegoro. Thomsen K, Riis B, Krabbe S, Christiansen C. 1986. Testosterone regulates the haemoglobin concentration in male puberty. Acta Paediatrica 75(5):793-796.

79 Tillman AD, Hartadi H, Reksohadiprodjo S, Prawirokusumo S, Lebdosoekojo S. 1998. Ilmu Makanan Ternak Dasar. Ed ke-6. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Tulloh NM. 1978. Growth, Development, Body Composition, Breeding and Management. Di dalam: A Course Manual In Beef Cattle Management and Economics. Boeker WAT, Dumsday RG, Frish JE, Swan RQ, Tulloh NM, editor. Australian Vice-Chancellors Committee. Veldhuis JD et al. 2005. Endocrine control of body compositionin infancy, childhood, and puberty. Endocr Rev 26:114–146. Vicencio JM et al. 2006. Testosterone induces an intracellular calcium increase by a nongenomic mechanism in cultured rat cardiac myocytes. Endocrinol 147(3):1386–1395 West NB, Chang C, Liao S, Brenner RM. 1990. Localization and regulation of estrogen, progestin and androgen receptors in the seminal vesicle of the rhesus monkey. J Steroid Biochem Mol Biol 37:11-21. Wheaton JE, Godfrey RW. 2003. Plasma LH, FSH, testosterone, and age at puberty in ram lambs actively immunized against an inhibin α-subunit peptide. Theriogenology 60:933-941. White ME, Johnson BJ, Hathaway MR, Dayton WR. 2003. Growth factor messenger RNA levels in muscle and liver of steroid-implanted and nonimplanted steers. J Anim Sci 81:965-972. Widyobroto BP, Reksohadiprojo S, Budi SPS, Agus A. 1999. Penggunaan protein pakan terproteksi (undegraded protein) untuk meningkatkan produktivitas sapi perah di Indonesia. Laporan Penelitian. Yogyakarta: Fakultas Peternakan Universitas Gadjah Mada.

William FG. 1983. Review of Medical Physiology. California: Departement of Physiology, University of California San Fransisco, LANGE Medical Publications. Williams PG, Droulez V. 2010. Australian red meat consumption – predominantly lean in response to public health and consumer demand. Food Aust 62(3): 8794. Winarno FG. 2002. Kimia Pangan. Jakarta: PT Gramedia Pustaka Utama. Wu SHW, Miller JrEG, penemu; Eastman Kodak Company. 25 Oktober 1988. Rumen-stable pellets. United States Patent 4 780 315. Young OA, Watkins S, Oldham JM, Bass JJ. 1995. The role of insulin-like growth factor I in clenbuterol-stimulated growth in growing lambs J. Anim. Sci. 73:3069-3077

80 Zammit PS et al. 2004. Muscle satellite cells adopt divergent fates: a mechanism for selfrenewal. J Cell Bio 166:347-357. Zayas JF. 1997. Functionality of Protein in Food. Berlin: Springer-Verlag Zhang et al. 2010. Effect of sex on meat quality characteristics of Qinchuan cattle. African J Biotech 9(28):4504-4509. Zhao J, Bauman WA, Huang R, Caplan AJ, Cardozo C. 2004. Oxandrolone blocks glucocorticoid signaling in an androgen receptor-dependent manner. Steroids 69:357–366.

    81  

Lampiran 1. Tampilan pengolahan data hasil elektroforesis Jarak pita band elektroforesis 1 = Pewarnaan komasie blue 2 = Pewarnaan silver No Marker Sampel A Sampel B Sampel C Sampel D Sampel E 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 1,2 1,0 3,05 1,45 3,00 1,45 1,50 3,05 2,90 2 1,8 1,6 3,60 3,05 3,30 3,05 2,90 3,06 3,30 3 2,9 2,7 4,35 3,30 3,60 3,80 3,60 3,80 3,60 3,30 3,80 4 4,0 3,7 4,75 4,50 4,75 4,50 4,75 4,50 4,75 3,80 5 5,1 5,0 5,15 5,40 5,15 5,10 5,15 5,10 5,15 4,50 6 5,5 5,5 5,10 Keterangan : jarak dasar sumur sampai akhir pita gel 1 = 5,5 cm, gel 2 = 5,5 cm Nilai R2 dari gel 2 lebih tinggi sehingga gel 2 dipilih untuk penghitungan selanjutnya. Dua band/pita yang menonjol dari sampel A-E adalah berada pada kisaran marker no 3 dan no 5 maka : No Marker Sampel A Sampel B Sampel C Sampel D Sampel E 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2,7 3 2,9 2,9 2 5,0 4,5 4,5 4,5 4,0 Marker 1 2 1,2 1,0 1,8 1,6 2,9 2,7 4,0 3,7 5,1 5,0 5,5 5,5

Rf 1 2 0,22 0,18 0,33 0,29 0,53 0,49 0,73 0,67 0,93 0,91 1,00 1,00

Standar

BM

log BM

Regresi (nilai y)log BM 1.y=-0.981x+5.175

Phosforilase b albumin ovalbumin carbonic anhidrase trypsin inhibitor a-laktalbumin

97000 66000 45000 30000 20100 14400

4,9868 4,8195 4,6532 4,4771 4,3032 4,1584

5,192300 4,018538 5,192300 5,192300 5,192300 5,192300

2. y=-0.948x+5.126

5,12600 4,35036 4,60891 4,35036 5,12600 4,35036 4,62615 4,43655 4,62615 5,12600 4,24695

BM kD 2 133659,552 22405,777 40635,911 22405,777 133659,552 22405,777 42281,462 27324,360 42281,462 133659,552 17658,345

Sampel LJ100 1 2 2,15 3,30 2,35 3,60 2,95 4,10 3,45 5,10 4,75

Sampel LJ100 1 2 5,1

    82    rf = jarak suatu band standar/jarak total band regresi = marker sebagai x dan log BM sebagai y

Hubungan Rf dan BM gel 1 5,1000 5,0000 4,9000

y = -0,981x + 5,175 R² = 0,990

log BM

4,8000 4,7000 4,6000 4,5000 4,4000 4,3000 4,2000 4,1000 0,00

0,20

0,40

0,60

0,80

1,00

1,20

Rf

Hubungan Rf dan BM gel 2 5,1000 5,0000 4,9000

y = -0,948x + 5,126 R² = 0,991

log BM

4,8000 4,7000 4,6000 4,5000 4,4000 4,3000 4,2000 4,1000 0,00

0,20

0,40

0,60 Rf

0,80

1,00

1,20

    83  

Lampiran 2. Tampilan pengolahan data analisis statistik dengan program SAS   Peubah : Lemak Karkas                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     510020.3950     170006.7983       9.16    0.0025               Karkas kanan                 1      95924.0522      95924.0522       5.17    0.0440               Galat                       11     204130.1978      18557.2907                                    Total terkoreksi            15     852994.4375                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.760690      10.85297      136.2251       1255.188                             Peubah : Otot                                                                                                           Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      322907.616      107635.872       4.98    0.0201               Karkas kanan                 1     1515247.265     1515247.265      70.13    <.0001               Galat                       11      237678.235       21607.112                                    Total terkoreksi            15     2841505.000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.916355      2.972420      146.9936      4945.250                             Peubah : Tulang                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      44892.6712      14964.2237       0.47    0.7124               Karkas kanan                 1     260496.2181     260496.2181       8.10    0.0159               Galat                       11     353812.5319      32164.7756                                    Total terkoreksi            15     630469.9375                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.438811      10.05616      179.3454       1783.438                             Peubah : Perempat Belakang                                                                                                             Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      17997.6673       5999.2224       0.34    0.7949               Karkas kanan                 1     577321.1837     577321.1837      33.00    0.0001               Galat                       11     192415.0663      17492.2788                                    Total terkoreksi            15     891286.4375                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.784115      3.970307      132.2584      3331.188                             Peubah : Lemak Perempat Belakang                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     60769.49808     20256.49936       4.05    0.0365               Karkas kanan                 1      4211.66446      4211.66446       0.84    0.3787               Galat                       11      55078.8355       5007.1669                                    Total terkoreksi            15     123793.7500                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.555076      15.15638      70.76134      466.8750                             Peubah : Otot Perempat Belakang                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      38239.1996      12746.3999       1.14    0.3748               Karkas kanan                 1     274424.6936     274424.6936      24.59    0.0004               Galat                       11     122736.3064      11157.8460                                    Total terkoreksi            15     535201.7500                                                                   Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.770673      4.849060      105.6307       2178.375                        

    84        Peubah : Tulang Perempat Belakang                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     15588.34916      5196.11639       1.79    0.2069               Karkas kanan                 1     21856.69744     21856.69744       7.53    0.0191               Galat                       11     31909.80256      2900.89114                                    Total terkoreksi            15     61924.00000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.484694      7.949804      53.85992      677.5000                             Peubah : Perempat Depan                                                                                                             Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3       14839.697        4946.566       0.25    0.8568               Karkas kanan                 1     1453110.607     1453110.607      74.67    <.0001               Galat                       11      214061.393       19460.127                                    Total terkoreksi            15     2278926.000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.906069      2.992589      139.4996      4661.500                             Peubah : Perempat Depan lmk                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     220461.8787      73487.2929      10.53    0.0015               Karkas kanan                 1      59836.8824      59836.8824       8.57    0.0137               Galat                       11      76765.6176       6978.6925                                    Total terkoreksi            15     377680.0000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.796744      10.59462      83.53857      788.5000                             Peubah : Otot Perempat Depan                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     248678.9143      82892.9714       2.18    0.1476               Karkas kanan                 1     398747.2710     398747.2710      10.50    0.0079               Galat                       11      417731.229       37975.566                                    Total terkoreksi            15     1299083.750                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.678442      7.098236      194.8732       2745.375                             Peubah : Tulang Perempat Depan                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      13263.2532       4421.0844       0.22    0.8829               Karkas kanan                 1     131604.7609     131604.7609       6.45    0.0275               Galat                       11     224588.7391      20417.1581                                    Total terkoreksi            15     368497.7500                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.390529      12.91795      142.8886      1106.125                             Peubah : Kepala                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     103403.8521      34467.9507       1.36    0.3064               Karkas kanan                 1     195008.4019     195008.4019       7.68    0.0182               Galat                       11     279216.5981      25383.3271                                    Total terkoreksi            15     603293.7500                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.537180      5.794825      159.3215       2749.375                             

    85         Peubah : Kulit                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               Model                        4      70071.5058      17517.8764       0.22    0.9195               Galat                       11     861228.4942      78293.4995                                    Total terkoreksi            15     931300.0000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.075241      8.861750      279.8098      3157.500                             Peubah : Kaki                                                                                                           Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     20854.76823      6951.58941       2.06    0.1636               Karkas kanan                 1      2095.37327      2095.37327       0.62    0.4472               Galat                       11     37087.62673      3371.60243                                    Total terkoreksi            15     58223.75000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.363015      7.090887      58.06550      818.8750                             Peubah : Perut Kosong                                                                                                        Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      9635.75259      3211.91753       1.53    0.2606               Karkas kanan                 1     18793.15717     18793.15717       8.98    0.0122               Model                        4     20511.90717      5127.97679       2.45    0.1081               Total terkoreksi            15     43543.75000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.471064      4.544566      45.75810        1006.875                            Peubah : Usus Kosong                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      9122.08032      3040.69344       0.62    0.6193               Karkas kanan                 1     21085.67099     21085.67099       4.27    0.0633               Galat                       11     54364.32901      4942.21173                                    Total terkoreksi            15     91775.00000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.407635      8.612663      70.30087       816.2500                             Peubah : Paru                                                                                                           Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     4585.980801     1528.660267       2.07    0.1631               Karkas kanan                 1      973.041753      973.041753       1.31    0.2759               Galat                       11      8140.70825       740.06439                                    Total terkoreksi            15     13872.93750                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                                0.413195      7.818681      27.20412      347.9375                             Peubah : Jantung                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     135.2183395      45.0727798       0.18    0.9103               Karkas kanan                 1     554.1900202     554.1900202       2.17    0.1691               Galat                       11     2814.639980      255.876362                                    Total terkoreksi            15     3465.457500                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.187801      13.58627      15.99614       117.7375                              

    86          Peubah : Lemak Jantung                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     871.6232486     290.5410829       0.92    0.4643               Karkas kanan                 1      39.0667395      39.0667395       0.12    0.7321               Galat                       11     3484.778260      316.798024                                    Total terkoreksi            15     4552.420000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.234522      28.00759      17.79882       63.55000                             Peubah : Hati                                                                                                           Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     67064.34930     22354.78310       1.45    0.2812               Karkas kanan                 1       590.48530       590.48530       0.04    0.8484               Galat                       11     169501.2647      15409.2059                                    Total terkoreksi            15     245732.4375                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.310220      26.28910      124.1338      472.1875                             Peubah : Ginjal                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     92.20240237     30.73413412       1.41    0.2916               Karkas kanan                 1      0.75605769      0.75605769       0.03    0.8556               Galat                       11     239.5289423      21.7753584                                    Total terkoreksi            15     355.6200000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.326447      5.697689      4.666407       81.90000                             Peubah : Leg                                                                                                            Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3       8288.5503       2762.8501       0.23    0.8708               Karkas kanan                 1     346988.6732     346988.6732      29.39    0.0002               Galat                       11     129888.8268      11808.0752                                    Total terkoreksi            15     568348.0000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.771463      4.364931      108.6650      2489.500                             Peubah : Lemak Leg                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     23745.05994      7915.01998       4.26    0.0318               Karkas kanan                 1      6987.93675      6987.93675       3.76    0.0787               Galat                       11     20458.89325      1859.89939                                    Total terkoreksi            15     52495.63750                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.610274      15.08911      43.12655       285.8125                             Peubah : Otot Leg                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      20400.1248       6800.0416       1.10    0.3901               Karkas kanan                 1     166935.3059     166935.3059      27.01    0.0003               Galat                       11      67997.9441       6181.6313                                    Total terkoreksi            15     322137.9375                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.788917      4.743311      78.62335      1657.563                          

    87           Peubah : Tulang Leg                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     11323.32959      3774.44320       2.30    0.1344               Karkas kanan                 1      8094.29738      8094.29738       4.92    0.0485               Galat                       11     18086.89762      1644.26342                                    Total terkoreksi            15     35989.25000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.497436      7.422913      40.54952       546.2750                             Peubah : Loin                                                                                                           Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     20962.94332      6987.64777       1.53    0.2606               Karkas kanan                 1     25133.89606     25133.89606       5.52    0.0386               Galat                       11     50110.43144      4555.49377                                    Total terkoreksi            15     92614.01437                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.458933      12.27241      67.49440      549.9688                             Peubah : Lemak Loin                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     1783.983322      594.661107       1.43    0.2875               Karkas kanan                 1       16.466586       16.466586       0.04    0.8461               Galat                       11     4585.190914      416.835538                                    Total terkoreksi            15     6378.579375                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.281158      22.89974      20.41655      89.15625                             Peubah : Otot Loin                                                                                                           Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      3021.35075      1007.11692       0.50    0.6916               Karkas kanan                 1     10659.47321     10659.47321       5.26    0.0425               Galat                       11     22276.07179      2025.09744                                    Total terkoreksi            15     37653.75750                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.408397      13.73817      45.00108      327.5625                             Peubah : Tulang Loin                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     10119.22121      3373.07374       2.63    0.1027               Karkas kanan                 1      3380.19094      3380.19094       2.63    0.1330               Galat                       11     14124.72656      1284.06605                                    Total terkoreksi            15     25776.76438                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.452036      27.31630      35.83387      131.1813                             Peubah : Rack                                                                                                           Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      4951.23919      1650.41306       0.13    0.9416               Karkas kanan                 1     22228.46872     22228.46872       1.72    0.2162               Galat                       11     142012.4388      12910.2217                                    Total terkoreksi            15     169487.0894                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.162105      15.56708      113.6232      729.8938                          

    88            Peubah : Lemak Rack                                                                                                        Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     5967.345817     1989.115272       1.88    0.1915               Karkas kanan                 1      385.207606      385.207606       0.36    0.5585               Galat                       11     11640.68489      1058.24408                                    Total terkoreksi            15     19380.27437                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.399354      20.26438      32.53066        160.5313                            Peubah : Otot Rack                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      2453.54835       817.84945       0.21    0.8843               Karkas kanan                 1     10458.50609     10458.50609       2.74    0.1259               Galat                       11     41934.58641      3812.23513                                    Total terkoreksi            15     53558.83438                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.217037      16.47669      61.74330       374.7313                             Peubah : Tulang Rack                                                                                                        Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     4380.718681     1460.239560       0.63    0.6119               Karkas kanan                 1      115.675604      115.675604       0.05    0.8276               Galat                       11     25577.35690      2325.21426                                    Total terkoreksi            15     29974.93937                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.146709      25.32006      48.22048        190.4438                            Peubah : Shoulder                                                                                                       Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      24760.9063       8253.6354       0.15    0.9304               Karkas kanan                 1     374978.9792     374978.9792       6.61    0.0260               Galat                       11      623642.566       56694.779                                    Total terkoreksi            15     1124807.490                                                                   Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                              0.445556      13.90384      238.1067         1712.525                            Peubah : Lemak Shoulder                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     26849.73943      8949.91314       3.23    0.0647               Karkas kanan                 1      1554.65273      1554.65273       0.56    0.4695               Galat                       11     30479.40977      2770.85543                                    Total terkoreksi            15     63037.56938                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.516488      26.39783      52.63892       199.4063                             Peubah : Otot Shoulder                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      53675.8923      17891.9641       0.47    0.7088               Karkas kanan                 1     182732.7099     182732.7099       4.81    0.0507               Galat                       11     418119.3951      38010.8541                                    Total terkoreksi            15     711712.0100                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.412516      17.34668      194.9637      1123.925                        

    89           Peubah : Tulang Shoulder                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      9839.07764      3279.69255       0.69    0.5745               Karkas kanan                 1     21030.43370     21030.43370       4.45    0.0586               Galat                       11     51960.91380      4723.71944                                    Total terkoreksi            15     78017.05438                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.333980      18.03771      68.72932       381.0313                             Peubah : Neck                                                                                                           Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     66784.01372     22261.33791       1.40    0.2954               Karkas kanan                 1     36342.45408     36342.45408       2.28    0.1592               Galat                       11     175264.5459      15933.1405                                    Total terkoreksi            15     293058.0000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.401946      15.43112      126.2265      818.0000                             Peubah : Lemak Neck                                                                                                        Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     7856.863431     2618.954477       2.83    0.0874               Karkas kanan                 1     3175.547919     3175.547919       3.43    0.0909               Galat                       11     10171.53458       924.68496                                    Total terkoreksi            15     18270.63938                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.443285      22.12241      30.40863        137.4563                            Peubah : Otot Neck                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     39098.99456     13032.99819       1.57    0.2523               Karkas kanan                 1      7786.66941      7786.66941       0.94    0.3536               Galat                       11      91323.5206       8302.1382                                    Total terkoreksi            15     153582.5975                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.405378      18.65842      91.11607       488.3375                             Peubah : Tulang Neck                                                                                                        Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     9411.941072     3137.313691       0.94    0.4526               Karkas kanan                 1     5759.164183     5759.164183       1.73    0.2148               Galat                       11     36562.18082      3323.83462                                    Total terkoreksi            15     51607.43750                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.291533      30.94824      57.65271        186.2875                            Peubah : Shank                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     40172.49167     13390.83056       0.65    0.5983               Karkas kanan                 1      7386.79713      7386.79713       0.36    0.5610               Galat                       11     226060.9404      20550.9946                                    Total terkoreksi            15     285873.5544                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.209228      24.06390      143.3562      595.7313                          

    90            Peubah : Lemak Shank                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     3641.266678     1213.755559       0.60    0.6310               Karkas kanan                 1     1870.205128     1870.205128       0.92    0.3587               Model                        4      6384.18200      1596.04550       0.78    0.5594               Galat                       11     22424.01737      2038.54703                                    Total terkoreksi            15     28808.19938                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.221610      63.00954      45.15027       71.65625                             Peubah : Otot Shank                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     24443.61919      8147.87306       2.70    0.0970               Karkas kanan                 1      2428.16889      2428.16889       0.80    0.3891               Galat                       11     33215.30611      3019.57328                                    Total terkoreksi            15     58964.75750                                                                     R‐Square     Coeff Var      Root MSE    ShaOt Mean                                                0.436692      15.94448      54.95064      344.6375                             Peubah : Tulang Shank                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     23024.79892      7674.93297       0.63    0.6082               Karkas kanan                 1      9714.26490      9714.26490       0.80    0.3894               Galat                       11     133096.1201      12099.6473                                    Total terkoreksi            15     173480.7775                                                                    R‐Square     Coeff Var      Root MSE    ShaTul Mean                                               0.232790      61.73183      109.9984       178.1875                             Peubah : Breast                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     46242.45931     15414.15310       3.66    0.0474               Karkas kanan                 1     27959.49451     27959.49451       6.65    0.0257               Galat                       11      46274.5755       4206.7796                                    Total terkoreksi            15     143359.8975                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.677214      8.052478      64.85969       805.4625                             Peubah : Lemak Breast                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     39995.28466     13331.76155       7.29    0.0058               Karkas kanan                 1      7423.88573      7423.88573       4.06    0.0690               Galat                       11     20115.38927      1828.67175                                    Total terkoreksi            15     69722.52000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.711494      19.48643      42.76297       219.4500                             Peubah : Otot Breast                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     10814.47305      3604.82435       4.58    0.0258               Karkas kanan                 1      3962.19076      3962.19076       5.04    0.0463               Galat                       11      8652.38674       786.58061                                    Total terkoreksi            15     28326.15438                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.694544      6.778807      28.04604      413.7313                        

    91           Peubah : Tulang Breast                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3      836.875355      278.958452       0.42    0.7394               Karkas kanan                 1     1045.938850     1045.938850       1.59    0.2332               Galat                       11     7230.481150      657.316468                                    Total terkoreksi            15     9059.170000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.201861      15.07463      25.63818       170.0750                             Peubah : Flank                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     5958.878082     1986.292694       0.52    0.6798               Karkas kanan                 1      152.388138      152.388138       0.04    0.8459               Galat                       11     42347.67186      3849.78835                                    Total terkoreksi            15     48815.56000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.132496      21.25978      62.04666      291.8500                             Peubah : Lemak Flank                                                                                                         Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     3832.280324     1277.426775       0.56    0.6517               Karkas kanan                 1      214.924975      214.924975       0.09    0.7644               Galat                       11     25044.89002      2276.80818                                    Total terkoreksi            15     28878.43750                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.132748      51.97104      47.71591       91.81250                             Peubah : Otot Flank                                                                                                          Derajat   Jumlah         Kuadrat                                              Sumber variasi             Bebas     kuadrat        Tengah         Nilai F   Pr > F               ELJ                          3     1801.999639      600.666546       0.76    0.5383               Karkas kanan                 1      145.353647      145.353647       0.18    0.6758               Galat                       11      8664.17635       787.65240                                    Total terkoreksi            15     10769.01000                                                                    Kuadrt‐R      Koef Var      Akar GKT        Rerata                                               0.195453      14.52084      28.06515      193.2750                                 ==========================================================================================    Kuadrat Tengah Terkecil (LSMEAN)    ==========================================================================================    Peubah : Lemak Karkas                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        1336.65067        72.99100      <.0001           1                                       1        1509.27452        70.13071      <.0001           2                                       2        1080.55925        68.81575      <.0001           3                                       3        1094.26556        70.80673      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                   Perlakuan       1             2             3             4                                         1                      0.1299        0.0238        0.0440                                         2        0.1299                      0.0013        0.0012                                         3        0.0238        0.0013                      0.8941                                         4        0.0440        0.0012        0.8941                                 

    92      ==========================================================================================  Peubah : Otot                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        4785.32913        78.76085      <.0001           1                                       1        4818.56802        75.67445      <.0001           2                                       2        5071.16721        74.25555      <.0001           3                                       3        5105.93564        76.40391      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.7757        0.0203        0.0176                                         2        0.7757                      0.0390        0.0184                                         3        0.0203        0.0390                      0.7548                                         4        0.0176        0.0184        0.7548                                  ==========================================================================================  Peubah : Tulang                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        1849.29972        96.09533      <.0001           1                                       1        1698.41933        92.32965      <.0001           2                                       2        1825.51393        90.59846      <.0001           3                                       3        1760.51702        93.21966      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.3004        0.8567        0.5398                                         2        0.3004                      0.3547        0.6341                                         3        0.8567        0.3547                      0.6334                                         4        0.5398        0.6341        0.6334                                  ==========================================================================================  Peubah : Perempat Belakang                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        3340.58908        70.86556      <.0001           1                                       1        3330.83597        68.08855      <.0001           2                                       2        3375.98058        66.81189      <.0001           3                                       3        3277.34437        68.74489      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.9258        0.7162        0.5534                                         2        0.9258                      0.6507        0.5790                                         3        0.7162        0.6507                      0.3344                                         4        0.5534        0.5790        0.3344                                  ==========================================================================================  Peubah : Lemak Perempat Belakang                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        491.999092       37.914738      <.0001           1                                       1        555.792688       36.428975      <.0001           2                                       2        399.674640       35.745929      <.0001           3                                       3        420.033581       36.780132      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.2689        0.0962        0.2202                                         2        0.2689                      0.0119        0.0202                                         3        0.0962        0.0119                      0.7044                                         4        0.2202        0.0202        0.7044                                  ==========================================================================================  Peubah : Otot Perempat Belakang                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        2127.14349        56.59815      <.0001           1                                       1        2136.51805        54.38024      <.0001           2                                       2        2245.98400        53.36060      <.0001           3                                       3        2203.85445        54.90444      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.9108        0.1451        0.3732                                         2        0.9108                      0.1853        0.3868                                         3        0.1451        0.1853                      0.6001                                         4        0.3732        0.3868        0.6001                                 

    93     ==========================================================================================  Peubah : Tulang Perempat Belakang                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        694.223696       28.858765      <.0001           1                                       1        631.622756       27.727878      <.0001           2                                       2        721.149116       27.207978      <.0001           3                                       3        663.004433       27.995161      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.1614        0.5003        0.4742                                         2        0.1614                      0.0446        0.4276                                         3        0.5003        0.0446                      0.1719                                         4        0.4742        0.4276        0.1719                                  ==========================================================================================  Peubah : Perempat Depan                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        4638.16722        74.74547      <.0001           1                                       1        4666.69510        71.81642      <.0001           2                                       2        4627.83016        70.46986      <.0001           3                                       3        4713.30752        72.50869      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.7965        0.9196        0.5054                                         2        0.7965                      0.7113        0.6459                                         3        0.9196        0.7113                      0.4245                                         4        0.5054        0.6459        0.4245                                  ==========================================================================================  Peubah : Lemak Perempat Depan                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        844.612489       44.760925      <.0001           1                                       1        954.006718       43.006882      <.0001           2                                       2        680.869994       42.200499      <.0001           3                                       3        674.510799       43.421446      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.1188        0.0195        0.0246                                         2        0.1188                      0.0010        0.0006                                         3        0.0195        0.0010                      0.9198                                         4        0.0246        0.0006        0.9198                                  ==========================================================================================  Peubah : Otot Perempat Depan                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        2643.61872       104.41530      <.0001           1                                       1        2605.32372       100.32359      <.0001           2                                       2        2819.98520        98.44251      <.0001           3                                       3        2912.57235       101.29065      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.8043        0.2332        0.1054                                         2        0.8043                      0.1613        0.0476                                         3        0.2332        0.1613                      0.5333                                         4        0.1054        0.0476        0.5333                                  ==========================================================================================  Peubah : Tulang Perempat Depan                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        1155.61946        76.56137      <.0001           1                                       1        1067.26892        73.56116      <.0001           2                                       2        1104.13106        72.18188      <.0001           3                                       3        1097.48056        74.27025      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.4414        0.6253        0.6133                                         2        0.4414                      0.7317        0.7706                                         3        0.6253        0.7317                      0.9509                                         4        0.6133        0.7706        0.9509                                 

    94      ==========================================================================================  Peubah : Leg                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        2508.95123        58.22394      <.0001           1                                       1        2452.52340        55.94232      <.0001           2                                       2        2486.93058        54.89340      <.0001           3                                       3        2509.59479        56.48158      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.5162        0.7828        0.9941                                         2        0.5162                      0.6743        0.4734                                         3        0.7828        0.6743                      0.7829                                         4        0.9941        0.4734        0.7829                                  ==========================================================================================  Peubah : Lemak Leg                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        315.900006       23.107702      <.0001           1                                       1        331.350233       22.202181      <.0001           2                                       2        240.821376       21.785889      <.0001           3                                       3        255.178384       22.416199      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.6526        0.0336        0.0993                                         2        0.6526                      0.0155        0.0297                                         3        0.0336        0.0155                      0.6610                                         4        0.0993        0.0297        0.6610                                  ==========================================================================================  Peubah : Otot Leg                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        1626.44111        42.12729      <.0001           1                                       1        1617.40278        40.47646      <.0001           2                                       2        1688.68035        39.71752      <.0001           3                                       3        1697.72576        40.86663      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.8846        0.2933        0.2710                                         2        0.8846                      0.2422        0.1765                                         3        0.2933        0.2422                      0.8791                                         4        0.2710        0.1765        0.8791                                  ==========================================================================================  Peubah : Tulang Leg                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        563.252709       21.726898      <.0001           1                                       1        500.218639       20.875487      <.0001           2                                       2        553.130535       20.484070      <.0001           3                                       3        568.498117       21.076716      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.0698        0.7344        0.8717                                         2        0.0698                      0.1028        0.0365                                         3        0.7344        0.1028                      0.6181                                         4        0.8717        0.0365        0.6181                                  ==========================================================================================  Peubah : Loin                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        546.083843       36.164274      <.0001           1                                       1        554.761202       34.747107      <.0001           2                                       2        601.969608       34.095596      <.0001           3                                       3        497.060347       35.082051      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.8711        0.2728        0.3731                                         2        0.8711                      0.3607        0.2522                                         3        0.2728        0.3607                      0.0592                                         4        0.3731        0.2522        0.0592                                 

    95     ==========================================================================================  Peubah : Lemak Loin                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0         92.518456       10.939422      <.0001           1                                       1        104.972555       10.510740      <.0001           2                                       2         80.357704       10.313663      <.0001           3                                       3         78.776285       10.612058      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.4474        0.4240        0.4079                                         2        0.4474                      0.1284        0.0970                                         3        0.4240        0.1284                      0.9184                                         4        0.4079        0.0970        0.9184                                  ==========================================================================================  Peubah : Otot Loin                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        318.934718       24.112097      <.0001           1                                       1        317.415767       23.167218      <.0001           2                                       2        351.336852       22.732831      <.0001           3                                       3        322.562662       23.390538      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.9660        0.3371        0.9198                                         2        0.9660                      0.3261        0.8745                                         3        0.3371        0.3261                      0.4053                                         4        0.9198        0.8745        0.4053                                  ==========================================================================================  Peubah : Tulang Loin                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        130.947529       19.200198      <.0001           1                                       1        131.171303       18.447801      <.0001           2                                       2        168.162857       18.101903      <.0001           3                                       3         94.443310       18.625628      0.0004           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.9937        0.1756        0.2194                                         2        0.9937                      0.1869        0.1753                                         3        0.1756        0.1869                      0.0178                                         4        0.2194        0.1753        0.0178                                  ==========================================================================================  Peubah : Rack                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        760.114836       60.880593      <.0001           1                                       1        723.794238       58.494869      <.0001           2                                       2        710.689302       57.398086      <.0001           3                                       3        724.976624       59.058729      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.6876        0.5565        0.7002                                         2        0.6876                      0.8779        0.9885                                         3        0.5565        0.8779                      0.8679                                         4        0.7002        0.9885        0.8679                                  ==========================================================================================  Peubah : Lemak Rack                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        162.330063       17.430303      <.0001           1                                       1        184.618494       16.747263      <.0001           2                                       2        129.288737       16.433251      <.0001           3                                       3        165.887706       16.908698      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.3951        0.1845        0.8913                                         2        0.3951                      0.0406        0.4329                                         3        0.1845        0.0406                      0.1560                                         4        0.8913        0.4329        0.1560                                 

    96      ==========================================================================================  Peubah : Otot Rack                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        384.321379       33.082770      <.0001           1                                       1        355.410670       31.786357      <.0001           2                                       2        389.941414       31.190361      <.0001           3                                       3        369.251537       32.092761      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.5576        0.9013        0.7609                                         2        0.5576                      0.4618        0.7573                                         3        0.9013        0.4618                      0.6590                                         4        0.7609        0.7573        0.6590                                  ==========================================================================================  Peubah : Tulang Rack                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        210.196440       25.837085      <.0001           1                                       1        166.006256       24.824609      <.0001           2                                       2        183.724715       24.359145      <.0001           3                                       3        201.847588       25.063905      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.2615        0.4602        0.8289                                         2        0.2615                      0.6262        0.3159                                         3        0.4602        0.6262                      0.6210                                         4        0.8289        0.3159        0.6210                                  ==========================================================================================  Peubah : Shoulder                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        1740.91334       127.58028      <.0001           1                                       1        1662.39177       122.58080      <.0001           2                                       2        1686.90875       120.28240      <.0001           3                                       3        1759.88614       123.76242      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.6783        0.7578        0.9207                                         2        0.6783                      0.8909        0.5744                                         3        0.7578        0.8909                      0.6862                                         4        0.9207        0.5744        0.6862                                  ==========================================================================================  Peubah : Lemak Shoulder                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        193.668959       28.204536      <.0001           1                                       1        268.765448       27.099286      <.0001           2                                       2        161.415128       26.591173      <.0001           3                                       3        173.775464       27.360510      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.0925        0.4112        0.6385                                         2        0.0925                      0.0179        0.0269                                         3        0.4112        0.0179                      0.7566                                         4        0.6385        0.0269        0.7566                                  ==========================================================================================  Peubah : Otot Shoulder                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        1138.75530       104.46380      <.0001           1                                       1        1044.51096       100.37019      <.0001           2                                       2        1107.19140        98.48824      <.0001           3                                       3        1205.24234       101.33770      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.5451        0.8256        0.6713                                         2        0.5451                      0.6696        0.2685                                         3        0.8256        0.6696                      0.5101                                         4        0.6713        0.2685        0.5101                                 

    97     ==========================================================================================  Peubah : Tulang Shoulder                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        397.380305       36.825959      <.0001           1                                       1        340.418695       35.382863      <.0001           2                                       2        410.795888       34.719431      <.0001           3                                       3        375.530111       35.723935      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.3073        0.7906        0.6922                                         2        0.3073                      0.1902        0.4852                                         3        0.7906        0.1902                      0.5018                                         4        0.6922        0.4852        0.5018                                  ==========================================================================================  Peubah : Neck                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        827.966282       67.633633      <.0001           1                                       1        731.875268       64.983278      <.0001           2                                       2        799.981829       63.764836      <.0001           3                                       3        912.176621       65.609683      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.3466        0.7630        0.4120                                         2        0.3466                      0.4773        0.0685                                         3        0.7630        0.4773                      0.2542                                         4        0.4120        0.0685        0.2542                                  ==========================================================================================  Peubah : Lemak Neck                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        175.078277       16.293295      <.0001           1                                       1        117.265465       15.654811      <.0001           2                                       2        145.884108       15.361282      <.0001           3                                       3        111.597150       15.805715      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.0319        0.2078        0.0218                                         2        0.0319                      0.2258        0.7970                                         3        0.2078        0.2258                      0.1552                                         4        0.0218        0.7970        0.1552                                  ==========================================================================================  Peubah : Otot Neck                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        444.145245       48.821037      <.0001           1                                       1        446.280296       46.907890      <.0001           2                                       2        492.806194       46.028364      <.0001           3                                       3        570.118265       47.360058      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.9764        0.4722        0.1049                                         2        0.9764                      0.5007        0.0810                                         3        0.4722        0.5007                      0.2751                                         4        0.1049        0.0810        0.2751                                  ==========================================================================================  Peubah : Tulang Neck                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        213.091093       30.890983      <.0001           1                                       1        161.419939       29.680460      0.0002           2                                       2        162.416395       29.123949      0.0002           3                                       3        208.222573       29.966564      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.2715        0.2460        0.9160                                         2        0.2715                      0.9816        0.2755                                         3        0.2460        0.9816                      0.3052                                         4        0.9160        0.2755        0.3052                                 

    98      ==========================================================================================  Peubah : Shank                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        529.403112       76.811889      <.0001           1                                       1        652.111772       73.801866      <.0001           2                                       2        638.465837       72.418075      <.0001           3                                       3        562.944279       74.513278      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.2925        0.3116        0.7704                                         2        0.2925                      0.8991        0.3980                                         3        0.3116        0.8991                      0.4907                                         4        0.7704        0.3980        0.4907                                  ==========================================================================================  Peubah : Lemak Shank                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        67.9040638      24.1920344      0.0171           1                                       1        94.6724578      23.2440227      0.0018           2                                       2        71.5900562      22.8081954      0.0094           3                                       3        52.4584221      23.4680830      0.0471           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.4599        0.9114        0.6704                                         2        0.4599                      0.5002        0.2131                                         3        0.9114        0.5002                      0.5778                                         4        0.6704        0.2131        0.5778                                  ==========================================================================================  Peubah : Otot Shank                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        297.209458       29.443187      <.0001           1                                       1        316.166975       28.289398      <.0001           2                                       2        394.275553       27.758970      <.0001           3                                       3        370.898014       28.562093      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.6645        0.0315        0.1145                                         2        0.6645                      0.0787        0.1868                                         3        0.0315        0.0787                      0.5763                                         4        0.1145        0.1868        0.5763                                  ==========================================================================================  Peubah : Tulang Shank                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        163.982637       58.938405      0.0178           1                                       1        241.190060       56.628789      0.0013           2                                       2        169.349475       55.566995      0.0111           3                                       3        138.227828       57.174662      0.0341           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.3840        0.9470        0.7703                                         2        0.3840                      0.3923        0.2126                                         3        0.9470        0.3923                      0.7090                                         4        0.7703        0.2126        0.7090                                  ==========================================================================================  Peubah : Breast                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        779.579475       34.752568      <.0001           1                                       1        896.622625       33.390721      <.0001           2                                       2        792.069421       32.764643      <.0001           3                                       3        753.578479       33.712591      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.0398        0.7933        0.6185                                         2        0.0398                      0.0503        0.0098                                         3        0.7933        0.0503                      0.4388                                         4        0.6185        0.0098        0.4388                                 

    99     ==========================================================================================  Peubah : Lemak Breast                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        245.794616       22.912892      <.0001           1                                       1        288.435349       22.015006      <.0001           2                                       2        172.781359       21.602223      <.0001           3                                       3        170.788676       22.227219      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.2242        0.0365        0.0465                                         2        0.2242                      0.0036        0.0025                                         3        0.0365        0.0036                      0.9508                                         4        0.0465        0.0025        0.9508                                  ==========================================================================================  Peubah : Otot Breast                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        379.073256       15.027393      <.0001           1                                       1        443.081957       14.438515      <.0001           2                                       2        435.734078       14.167792      <.0001           3                                       3        397.035710       14.577695      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.0133        0.0168        0.4303                                         2        0.0133                      0.7277        0.0405                                         3        0.0168        0.7277                      0.0887                                         4        0.4303        0.0405        0.0887                                  ==========================================================================================  Peubah : Tulang Breast                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        170.528805       13.737233      <.0001           1                                       1        158.134548       13.198913      <.0001           2                                       2        177.829563       12.951433      <.0001           3                                       3        173.807084       13.326144      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.5451        0.6990        0.8731                                         2        0.5451                      0.3174        0.4059                                         3        0.6990        0.3174                      0.8357                                         4        0.8731        0.4059        0.8357                                  ==========================================================================================  Peubah : Flank                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        285.527536       33.245315      <.0001           1                                       1        323.536386       31.942533      <.0001           2                                       2        287.589195       31.343608      <.0001           3                                       3        270.746883       32.250442      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.4455        0.9639        0.7664                                         2        0.4455                      0.4463        0.2543                                         3        0.9639        0.4463                      0.7203                                         4        0.7664        0.2543        0.7203                                  ==========================================================================================  Peubah : Lemak Flank                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0         83.426453       25.566734      0.0076           1                                       1        119.322558       24.564852      0.0005           2                                       2         78.493998       24.104259      0.0076           3                                       3         86.006991       24.801644      0.0053           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.3521        0.8880        0.9461                                         2        0.3521                      0.2680        0.3448                                         3        0.8880        0.2680                      0.8351                                         4        0.9461        0.3448        0.8351                                 

    100      ==========================================================================================  Peubah : Otot Flank                   ELJ         LSMEAN         Galat baku     Pr>|t|      Perlakuan                                       0        181.747012       15.037628      <.0001           1                                       1        201.946734       14.448349      <.0001           2                                       2        205.693429       14.177441      <.0001           3                                       3        183.712824       14.587624      <.0001           4                       Kuadrat Tengah Terkecil untuk Pengaruh ELJ                    Perlakuan      1             2             3             4                                         1                      0.3725        0.2593        0.9303                                         2        0.3725                      0.8589        0.3781                                         3        0.2593        0.8589                      0.3118                                         4        0.9303        0.3781        0.3118