STAPHYtest 24 In vitro diagnosztikum
Kódszám: 10010223 A STAPHYtest 24 alkalmas klinikai mintákból izolált Staphylococcus törzsek fajainak pontos azonosítására és megkülönböztetésére más Gram pozitív, kataláz pozitív coccusoktól. A készlet 40 vizsgálatra alkalmas, 24 biokémiai tesztet használ és vizuálisan, vagy készülékkel értékelhetı. A készlet lehetıvé teszi a koaguláz szőrıvizsgálatot és a novobiocin rezisztencia vizsgálatát. A biokémiai teszteket a mikrotiter lemez 3 sorának lyukai tartalmazzák, a három csík egy törzs vizsgálatára alkalmas. Az azonosítást segítik a VPtest, PYRAtest és végül az OXItest gyorstesztek, ha használatukat a kiértékelı szoftver javasolja. A STAPHYtest 24 teszttel 40 törzs vizsgálata végezhetı el.
Tartalma • • • • •
10 db mikrotiter lemez (lemezenként 4 törzs vizsgálatára), Használati utasítás, meghatározó táblázattal, 10 db polietilén tasak az inkubáláshoz, 40 db eredményértékelı és leletkiadó lap, Keret és jelzéssel ellátott fedı, steril.
Kiegészítı anyagok Szükséges reagensek, tesztcsíkok:
Kiegészítı reagensek, tesztcsíkok:
A készlet nem tartalmazza! • Paraffinolaj, steril.
• • • • • • • •
Eszközök, értékeléshez szükséges termékek • Densi-La Méter II. Kódszám: 50001529 • Adagoló pipetta, Kódszám: 50001707 • Kódkönyv STAPHY 24-hez Kódszám: 50003505
OXItest, OXItest reagens, VPtest, Acetoin reagens, PYRAtest, PYR reagens, NOVOBIOCIN korong, BACITRACIN korong.
• Vortex V1, Kódszám: 50001715 • Színskála STAPHY 24-hez, Kódszám: 50003500 • Meghatározó szoftver, Kódszám: 50002480
Tárolás, felhasználás A STAPHYtest 24 hőtıszekrényben (2 – 8 ˚C) tárolható és a csomagoláson feltüntetett lejárati ideig használható.
Eljárás Figyelem: A STAPHYtest 24 csak laboratóriumi felhasználásra készült. A készlettel csak megfelelıen gyakorlott személyzet dolgozhat, akik tisztában vannak a fertızı anyagokkal végzett munka szabályaival és a fertızı anyagok megsemmisítésére vonatkozó helyi elıírásokkal. Eszközök: • Petri-csészék, Columbia véres agar táptalajjal, • NOVOBIOCIN korongok • Kémcsıállvány, kémcsı (100x15 mm), 3,5 ml steril fiziológiás sóoldattal, • Denzitométer, • Vortex, • Adagoló mikropipetta, 0,1ml-es, steril pipettaheggyel, • Termosztát 37°C, • A szokásos mikrobiológiai felszerelés: oltókacs, színes jelölı toll, égı, fertıtlenítıszer, • Paraffinolaj. Tartsuk be a fertızı anyagokkal történı munkavégzés szabályait!
Gyártó: ERBA-LACHEMA a.s. Ellenırzött: 2010. 11. 26. Verzió szám: 2/1/2011
Forgalmazó: VITANI Kft. H-1147 Budapest, Telepes u. 17. Telefon: 06-1-467-0767, Fax/Üzenet: 467-0769 E-mail:
[email protected] web: www.vitani.hu
1
A tenyészet izolálása: • A Staphylococcus nemzetségbe tartozó baktériumok tenyésztésére ajánlott szokásos Columbia véres agar táptalajról izolálja a törzset. • A tiszta tenyészetekbıl végezze el a Gram festést és a kataláz tesztet. • Ha tenyészetet ellenırizte, végezzen koaguláz tesztet és az eredményt jegyezze fel. A baktérium szuszpenzió készítése: • Készítsen szuszpenziót 24 órás tiszta tenyészetbıl fiziológiás sóoldatban és gondosan homogenizálja Vortex keverıvel. • A szuszpenzió optikai sőrősége McFarland 2 érték legyen. Kisebb, vagy nagyobb optikai sőrőségő szuszpenzió téves eredményt okozhat. • A szuszpenzióból ugyanazzal az oltókaccsal oltson le egy nem szelektív táptalajra, a tenyészet tisztaságának és morfológiájának ellenırzésére. Koaguláz negatív törzsek novobiocin rezisztenciáját NOVOBIOCIN koronggal kell ellenırizni. STAPHYtest 24 mikrotiter lemez elıkészítése: • Készítsük elı az üres keretet és a fedıt. • Nyissa fel az alumínium fóliacsomagolást a hegesztésnél és vegye ki a lemezt. • Vágja le a szükséges 3 soros egységet, a vizsgálat számának megfelelıen. • Távolítsa el az öntapadó fóliát a csíkokról és helyezze a csíkokat a keretbe. • Írja fel a vizsgált törzs, vagy izolátum számát a megfelelı csíkra. • A lemez maradékát, a fedı fóliával helyezze vissza az alumínium zsákba a nedvszívóval, hajtsa a nyitott végét a lemez alá, és tárolja hőtıszekrényben, különös figyelemmel a nedvesség elleni védelemre. Az elsı felbontás után 10 munkanapon belül használja fel a maradék lemezt. • A keretet és a fedıt fertıtlenítse a következı használathoz.
Inokuláció • •
Mérjen 0,1 ml szuszpenziót a három sor minden lyukába. A bemérés után fedje le paraffin olajjal a következı lyukakat: H, G és F (Elsı sor, ureáz, arginin és ornitin teszt). Megjegyzés • Új gyártási számú STAPHYtest 24 készlet használata esetén javasolt a pozitív és negatív reakciók színváltozását standard törzsek alkalmazásával ellenırizni. Inkubáció • Helyezzük a sorokat tartalmazó keretet polietilén zsákba. • Zárjuk le a zsák nyitott végét, hogy megakadályozzuk a beszáradást az inkubálás ideje alatt. • Helyezzük a STAPHYtest 24 lemezt tartalmazó polietilén zsákot 37°C-os termosztátba, 20-24 órára. Leolvasás, értékelés • Az inkubáció után vizsgálja meg a Petri csészébe csíkozással leoltott ellenırzı tenyésztés tisztaságát, novobiocin rezisztenciáját, és jegyezze fel az eredményeket. • A Staphylococcusok és a Macrococcusok megkülönböztetésére más Gram-pozitív, kataláz pozitív coccusoktól ajánlatos bacitracin 0.04 érzékenységő tesztet végezni, a BACITRACIN S Használati Utasítása szerint. • Olvassa le az eredményeket és jegyezze fel az értékelı lapra. Megjegyzés • Értékelje a reakciót a Színváltozást bemutató táblázat, a Színskála STAPHYtest 24 teszthez, és/vagy az ajánlott kontroll törzs alapján. • A mikrotiter lemez fedılapjára nyomtatott ● jel mutatja, hogy a tesztlyuk paraffinolajjal fedett. Vizuális értékelés és azonosítás • A kataláz pozitív coccusok alapvetı biokémiai reakcióit és az azonosítás adatbázisát tartalmazza a Meghatározó táblázat, a Kódkönyv vagy a megfelelı szoftver. • Az azonosításhoz minden eredményt figyelembe kell venni: a vizsgálati anyag forrása, a telepek megjelenése és állaga, a mikroszkópos vizsgálat eredménye stb. • A koaguláz pozitív Staphylococcusok azonosításának értékelésénél mindig vegye figyelembe a koaguláz teszt pozitív eredményét. • Kétség esetén meg kell ismételni az eljárást, szükség szerint kiegészítve újabb vizsgálatokkal. Mőszerrel történı leolvasás esetén: • Mőszeres leolvasásnál a használati utasítás szerint kell eljárni. A meghatározás a profil kiszámításával történik, amelynek részleteit a kódkönyv tartalmazza. STAPHYtest 24
2
Megsemmisítés A vizsgálatban használt eszközök fertıtlenítésre és autoklávozásra, az egyszer használatos ampullák, edények, mikrotiter lemezek megsemmisítésre kerülnek, az erre vonatkozó elıírásoknak megfelelıen. Hibaforrások • Szennyezett tenyészet. • A szuszpenzió alacsony turbiditása vagy kis térfogata. • A szuszpenziót szennyezte a szomszédos lyuk reagense. • Nem volt fedve paraffinolajjal a biokémiai reakciónak megfelelı lyuk. • Téves kiértékelés, vagy helytelen kivitelezés történt az egyes lépéseknél. • Elıfordulhat olyan törzs vagy faj, amelyre vonatkozó adatokat a Meghatározó táblázat vagy a Kódkönyv nem tartalmaz.
Korlátok • •
A STAPHYtest 24 készlet kizárólag a Staphylococcus nemzetségbe tartozó kataláz pozitív coccusok azonosítására és az azonosító adatbázisban található rokon fajok megkülönböztetésére alkalmas, nem használható más fajok azonosítására vagy kizárására. Az itt használt módosított mikromódszerekkel kapott eredmények különbözhetnek a szokásos vizsgálatok eredményeitıl, illetve a szakirodalomban hozzáférhetı eredményektıl.
Ellenırzés A készletet egy 162 törzset tartalmazó keverékkel vizsgálták: • Az azonosítás 93,8%-ban helyes volt, • Az azonosítás 2,5%-ban helyes volt, de alacsony i. d. értékkel, • A törzsek 3,7%-a nem volt azonosítható.
Minıségbiztosítás A STAPHYtest 24 teszt minısége a gyártás különbözı folyamatában többszörösen ellenırzött. A gyártási számmal ellátott sarzs standard törzsekkel ellenırzött. Azon laboratóriumok számára, amelyek el kívánják végezni a saját ellenırzést, a következı törzsek használata javasolt: S. epidermidis CCM 4418, S. gallinarum CCM 3572, S. lugdunensis CCM 4069, S. nepalensis CCM 7046, S. sciuri subsp. rodentium CCM 4667 és Kytococcus sedentarius CCM 2699. A törzsek liofilizált vagy zselatin-lemez formában a következı címen rendelhetık meg: Czech Collection of Microorganisms, Tvrdého 14, 602 00 Brno, Czech Republic T: +420549-491-430, Fax: +420-543-247-339 M e g j e g y z é s : Mindig friss CCM törzset használjon, ha a készlet mőködését ellenırzi. Ezek a törzsek alkalmasak a teszt mőködésének az ellenırzésére, de nem használhatók a teszt pontosságának vagy meghatározó képességének ellenırzésére. KONTROLL TÖRZSEK EREDMÉNYKÖZLİ LAPJA
bGA
GLR
bGL
PHS
ESL
NAG
GAL
SUC
TRE
MAN
MLT
XYL
MNS
LAC
SOR
RIB
FRU
CEL
ARA
RAF
XOL
3. sor
ORN
CCM 4418 S. epidermidis CCM3572 S. gallinarum CCM 4069 S. lugdunensis CCM7046 S. nepalensis CCM 4657 S. sciuri subsp. rodentium CCM 2699 Kytococcus sedentarius
2. sor
ARG
1. sor
URE
CCM No
+
+
-
+
-
-
+
-
-
+
+
-
-
+
-
d
+
-
d
+
-
-
-
-
+
-
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
d
+
+
+
+
-
-
-
+
-
-
+
-
-
+
-
+
+
-
+
-
+
-
-
-
+
-
-
-
-
+
-
-
+
+
+
+
+
+
d
+
+
+
d
-
+
+
-
-
+
-
+
-
+
-
-
-
s
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
-
+
+
+
+
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Magyarázat: + = pozitív reakció;
STAPHYtest 24
− = negatív reakció; d = változó; s = gyenge reakció.
3
SZÍNREAKCIÓ VÁLTOZÁST BEMUTATÓ TÁBLÁZAT STAPHYtest 24 Oszlop
Teszt
Kód
H G F E D C B A
Ureáz Arginin Ornitin ß-Galaktozidáz ß-Glükuronidáz ß -Glükozidáz Foszfatáz Eszkulin
H G F E D C B A H G F E D C B A
Reakció Pozitív
Negatív
URE ARG ORN bGA GLR bGL PHS ESL
lilásvörös, narancsvörös lilásvörös, vörös lilásvörös, vörös sárga, halványsárga sárga, halványsárga sárga, halványsárga sárga, halványsárga fekete, sötétbarna, sötétszürke
sárga, halvány narancs sárga, halvány narancs sárga, halvány narancs színtelen színtelen színtelen színtelen színtelen, h.barna,h.szürke
N-acetil- ß-D-glükózamin Galaktóz Szukróz Trehalóz Mannit Maltóz Xilóz Mannóz
NAG GAL SUC TRE MAN MLT XYL MNS
sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna
lila, barnáslila lila, barnáslila lila, barnáslila lila, barnáslila lila, barnáslila lila, barnáslila lila, barnáslila lila, barnáslila
Laktóz Szorbitol Ribóz Fruktóz Cellobióz Arabinóz Raffinóz Xilitol Acetoin Pirrolidon-aril-amidáz Oxidáz
LAC SOR RIB FRU CEL ARA RAF XOL VPT PYR OXI
sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna sárga, sárgásbarna vörös, rózsaszín vörös, narancs kék
lila, barnáslila lila, barnáslila lila, barnáslila lila, barnáslila lila, barnáslila lila, barnáslila lila, barnáslila lila, barnáslila színtelen, h.rózsaszín sárga színtelen
1. sor
2. sor
3. sor
Kiegészítı tesztek
STAPHYtest 24
4
MEGHATÁROZÓ TÁBLÁZA
d d d + + + d d + + (-) + (-) d (+)
d + (-) d d + (-) + + (+) + + d + + d + + + (-) + + + + + + d + (+) (+) + + d +
(+) d d d + + (-) (+) + (+) (+) + + d d + d d d d (+) (+) (+) d d (+) + d d (+) d d (-) (+) + d d
d + d d + d + (+) d d d + d + d (-) d d (+) d (+) d (-)
d (-) (+) + d d + d + (-) (-) + + + + (-) d + + + + + d (+) d d
+ + d d + (+) + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + d + + + + + + + + d + + + + + + + + (+) + + + + +
XOL
(+) (+) (-) d + d (-) d + + + d + + (+) d + + (+) + + + + d d + d + + (+) d + + (+) + d d + (+)
RAF
d (-) + d + + + + (+) + (+) (+) d + + + (+) (+) d (-) d d + + d (+) d + + + (+) + d (+) + d (+)
CEL
+ + (-) d (+) + d + + + (+) (+) d (+) + + + + + + (+) d (+) (+) (+) + + + + + + + + + + + (+) d + d + +
A
ARA
FRU
d (-) + (-) (-) d d d (-) (-) + + + + d + d d d + + + d + + + + + + + (-) + + d + + d (+) (+) + + + d + + + +
RIB
d (-) d d d d + d + (+) + (-) + d d (-) + d (+) (+) d + d d d (+) (+) + d + d + d (-) (+) d d d d + (-) d (+)
SOR
d + (-) d + d (-) + (-) d + (+) (+) (+) d + (+) (+) d d d + (+) (+) + (+)
LAC
(+) d (-) (+) d (+) d (-) d + + + + (+) + + + d d d
MNS
d + + (-) + + d (-) + + (+) d + + (+) + + + d + + d d d d (+) + + d d
XYL
d + + d (-) d d (-) d (-) d + + d (-) d (-) (-) (-) + (+) (-) + + d d + + + (+) + (+)
MLT
SUC
(-) d (+) + (-) (+) d d (+) d (-) + d d d (+) +
TRE
GAL
d d d d d d (-) (-) (+) d + d d (+) d d (-) d + d d d + (+) d d d (+) d (+)
3. sor E D C B
MAN
NAG
(-) + -
ESL
ORN
d + d + d + + + + + d (+) (+) (-) + (+) d d + (-) (+) + (+) d -
PHS
ARG
d (-) (+) d (+) (-) + + (+) + + + (+) + + (+) + + d + (+) d d + + (+) + + + + + +
bGL
URE
(+) + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
bGA
NOV
+ + + d + + + -
GLR
COA
H
1. sor 2. sor G F E D C B A H G F E D C B A H G F
d (-) (+) (-) + (-) d d + d -
(-) d + + + d d (-) d d d d d
d + d + d (+) (-) -
d d d d d (+) d (-)
Meghatározás Aerococcus viridans Dermacoccus nishinomyaensis Kocuria kristinae Kocuria rosea Kocuria varians Macrococcus bovicus Macrococcus carouselicus Macrococcus caseolyticus Macrococcus equipersicus Micrococcus sp.* Rothia mucilaginosa Staphylococcus arlettae Staphylococcus aureus ssp.anaerobius Staphylococcus aureus ssp. aureus Staphylococcus auricularis Staphylococcus cap.ssp.ureolyticus Staphylococcus capitis ssp. capitis Staphylococcus caprae Staphylococcus camos ssp. camosus Staphylococcus camosus ssp. utilis Staphylococcus cohn.ssp. urealyticum Staphylococcus cohnii ssp. cohnii Staphylococcus condimenti Staphylococcus delphini Staphylococcus epidermidis Staphylococcus equorum Staphylococcus felis Staphylococcus gallinarum Staphylococcus haemolyticus Staphylococcus hom. ssp. novobiosept. Staphylococcus hominis ssp. hominis Staphylococcus hyicus Staphylococcus chromogenes Staphylococcus intermedius Staphylococcus kloosii Staphylococcus lentus Staphylococcus lugdunensis Staphylococcus lutrae Staphylococcus muscae Staphylococcus pasteuri Staphylococcus piscifermentans Staphylococcus saproph. ssp. saproph. Staphylococcus saprophyt. ssp. bovis Staphylococcus sciu. ssp. rodentium Staphylococcus sciu. ssp. camaticus Staphylococcus sciuri ssp.sciuri Staphylococcus schlei. ssp. schleiferi Staphylococcus schlei.ssp.coagulans Staphylococcus simulans Staphylococcus vitulinus Staphylococcus warneri Staphylococcus xylosus
Magyarázat:+ = 90 - 100 % pozitív reakció, (+) = 75 - 89 % pozitív reakció d = 26 - 74 % változó reakció (−) = 11 - 25 % pozitív reakció, − = negatív reakció * = tájékoztató meghatározás Csomagoláson feltüntetett jelölések Figyelmeztetés a Használati utasításra Csak IN VITRO használatra Tárolási hımérséklet tartomány
STAPHYtest 24
Csomagolási darabszám
Gyártó cég
Felhasználhatóság ideje
Csak egyszeri használatra
Gyári szám
Katalógus szám
5
