EU rev. CYS-010811 Pozor: Tento návod k použití je v souladu se směrnicí IVD 98/79/ES a je určen pro zákazníky z členských států Evropské unie.
POTŘEBNÉ MATERIÁLY, KTERÉ NEJSOU SOUČÁSTÍ DODÁVKY Následující materiály jsou požadovány pro provedení analýzy Cystatinu C pomocí ST AIA-PACK Cystatin C (kat. č. 0025217) na analyzátorech systému Tosoh AIA. Následující materiály společnost Tosoh dodává samostatně.
ST AIA-PACK Cystatin C ÚČEL POUŽITÍ ST AIA-PACK Cystatin C je určen pouze pro diagnostické použití in vitro ke kvantitativnímu měření Cystatinu C v lidském séru nebo v heparinizované plazmě nebo EDTA plazmě na analyzátorech systému Tosoh AIA. Měření Cystatinu C se používá jako pomůcka v diagnostice a kontrole renálního selhání.
SHRNUTÍ A VYSVĚTLENÍ TESTU Lidský Cystatin C je základní protein s nízkou molekulární hmotností (13 kDa) ve skupině cystatinů. Cystatin C je produkován konstantní rychlostí ve všech jaderných buňkách. Funkcí Cystatinu C se zdá být ochrana pojivových buněk nebo tkání před destrukcí intracelulárními enzymy. Gen je typ provozního (house-keeping) genu, který je kompatibilní se stabilní rychlostí produkce Cystatinu C většinou typů buněk, dokonce i při zánětlivých podmínkách. Cystatin C není reaktant akutní fáze (1). Vzhledem k malé velikosti je volně filtrován glomerulem a není vylučován, ale je zcela opětovně vstřebáván a rozštěpen renálními tubuly (2-3). Proto ukazuje koncentrace Cystatinu C silnější korelaci s GFR (glomerulární filtrace)(4-5)- zvyšuje se s poklesem GFR(6)- než je korelace mezi kreatininem a GFR. Nerozšířenější měřítka GFR v klinické praxi jsou založena na 24-hodinové clearance kreatininu nebo sérové koncentraci kreatininu. β2-mikroglobulin a sérový kreatinin se také měří jako marker renální funkce pro GFR (7). Měření clearance kreatininu si vyžádá určité nepohodlí, jako jsou obtíže a zátěž pacienta časově náročným sběrem moči, který může být nekompletní z různých důvodů. Sérový kreatinin je ovlivněn více nerenálními faktory, které zahrnují dietu, pohlaví, svalovou hmotu a tubulární sekreci, která může vést k přecenění rozsahu GFR. β2-mikroglobulin je ovlivněn prerenálními faktory, protože je β2-mikroglobulin zvýšený u pacientů s autoimunním onemocněním nebo maligním nádorem. Vzhledem k tomu, že Cystatin C není ovlivněn prerenálními faktory, jak je uvedeno výše, byl Cystatin C navržen jako nový senzitivní endogenní marker renální funkce pro GFR (8-10).
PRINCIP STANOVENÍ ST AIA-PACK Cystatin C je dvoumístná imunoenzymometrická analýza, která je celá prováděná v testovacích miskách ST AIA-PACK Cystatin C. Cystatin C přítomný v testovaném vzorku je vázaný na monoklonální protilátku imobilizovanou na magnetických zrnech a enzymem označenou monoklonální protilátku v AIA-PACK. Magnetická zrna jsou promytím zbavena nenavázaných, enzymem značených monoklonálních protilátek a poté inkubována s fluorogenním substrátem, 4-methylumbeliferylfosfátem (4MUP). Množství enzymem značených monoklonálních protilátek, které se vážou na zrna, je přímo úměrné koncentraci Cystatinu C v testovaném vzorku. Je vynesena standardní křivka a neznámé koncentrace vzorků jsou vypočítány pomocí této křivky.
DODÁVANÝ MATERIÁL Katalogové č. ST AIA-PACK Cystatın C
Plastové testovací kelímky obsahující dvanáct lyofilizovaných magnetických zrn potažených myšími monoklonálními protilátkami proti Cystatinu C a 100 µl myších monoklonálních protilátek proti Cystatinu C konjugovaných s hovězí alkalickou fosfatázou s azidem sodným jako konzervační látkou.
Materiály Kat. Č. AIA Nex•IA nebo AIA-21 0018539 AIA Nex•IA nebo AIA-21 LA 0018540 AIA-1800 ST 0019836 AIA-1800 LA 0019837 AIA-2000 ST 0022100 AIA-2000 LA 0022101 AIA-600 II 0019014 AIA-600 II BCR 0019328 AIA-900 0022930 AIA-360 0019945 AIA-PACK SUBSTRATE SET II 0020968 AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II/AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II ST AIA-PACK Cystatin C CALIBRATOR 0025317 ST AIA-PACK Cystatin C CALIBRATOR (1) 0 mg/l ST AIA-PACK Cystatin C CALIBRATOR (2) 0,01 mg/l (přibližně) ST AIA-PACK Cystatin C CALIBRATOR (3) 0,04 mg/l (přibližně) ST AIA-PACK Cystatin C CALIBRATOR (4) 0,08 mg/l (přibližně) ST AIA-PACK Cystatin C CALIBRATOR (5) 0,16 mg/l (přibližně) ST AIA-PACK Cystatin C CALIBRATOR (6) 0,35 mg/l (přibližně) AIA-PACK Cystatin C CONTROL 0025417 AIA-PACK Cystatin C CONTROL úrovně 1 0,04 mg/l (přibližně) AIA-PACK Cystatin C CONTROL úrovně 2 0,16 mg/l (přibližně) ST AIA-PACK Cystatin C SAMPLE DILUTING SOLUTION 0025517 AIA-PACK WASH CONCENTRATE 0020955 AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE 0020956 KELÍMKY NA VZORKY 0018581 AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP 0020970 AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP 0020971 Další požadavky pro AIA Nex•IA /AIA-21: PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0018552 PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0018583 Další požadavky pouze pro AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000: PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0019215 STOJAN PRO PIPETOVACÍ ŠPIČKY 0019216 0022103 PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY Používejte pouze materiály dodané společností Tosoh. Nepoužívejte náhradní materiály získané z jiných zdrojů, protože výkonnost testu je charakterizována přísně na základě materiálů společnosti Tosoh.
0025217 5 zásobníků x 20 testovacích kelímků 1 - 12
2 - 12
VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ 1. ST AIA-PACK Cystatin C je určen pouze pro diagnostické použití in vitro. 2. Před použitím zkontrolujte obal a vnější povrch hliníkového obalu, zda nejsou poškozeny. Pokud jsou patrná jakákoli poškození, kontaktujte vašeho místního obchodního zástupce společnosti Tosoh. 3. V rámci jednoho zásobníku nemíchejte testovací kelímky různých šarží nebo různých testů. 4. ST AIA-PACK Cystain C obsahuje azid sodný, který může reagovat s olověným nebo měděným potrubím za vzniku potenciálně výbušných kovových azidů. Při likvidaci těchto činidel do kanalizace je vždy spláchněte velkým množstvím vody, aby nedocházelo k hromadění azidu. 5. Materiál lidského původu používaný pouze při přípravě kalibračního setu ST AIA-PACK Cystatin C CALIBRATOR SET a kontrolního setu AIA-PACK Cystatin C CONTROL SET byl testovaný schválenými metodami FDA s negativními výsledky pro přítomnost HbsAg a protilátek proti HIV-1 a HCV. Protože žádná testovací metoda neposkytuje absolutní jistotu, že produkty lidského původu nemohou přenášet infekční agens, je doporučené zacházet s tímto produktem se stejnými bezpečnostními opatřeními, jako se vzorky pacientů. 6. ST AIA-PACK Cystatin C byl navržený tak, aby u převážné většiny vzorků nedocházelo k problémům způsobeným zakřivením kalibrační křivky při vysokých koncentracích, tzv. „hook effect“. K jevu zahnutí kalibrační křivky („hook effect“) může dojít při koncentracích Cystatinu C vyšších než 20,0 mg/l. 7. Nepoužívejte po uplynutí data exspirace. 8. Pro bezpečnou likvidaci odpadu se doporučuje, aby každá laboratoř dodržovala zavedené laboratorní postupy a místní, národní či federální nařízení. 9. Po otevření musí být lahvička s roztokem na ředění vzorků těsně uzavřena pomocí čisté gumové zátky. Uzávěr znečistěným materiálem může způsobit znehodnocení činidla. 10. Zbývající roztok na ředění vzorků nesmí být smícháván s další lahvičkou, ale musí být znehodnocen, aby se zabránilo další kontaminaci. 11. Pro automatické ředění s AIA-600 II je nutné použít 30 ml lahvičku pro roztok pro ředění vzorku. 30 ml lahvička musí být čistá a nekontaminovaná.
-
-
-
-
-
ODBĚR VZORKŮ A MANIPULACE S NIMI ● ●
SKLADOVÁNÍ A STABILITA Veškeré neotevřené materiály jsou stabilní do data exspirace uvedeného na štítku, jsou-li uchovávány při specifikované teplotě. Materiály 2–8 °C: ST AIA-PACK Cystatin C ST AIA-PACK Cystatin C CALIBRATOR SET ST AIA-PACK Cystatin C SAMPLE DILUTING SOLUTION AIA-PACK Cystatin C CONTROL SET AIA-PACK SUBSTRATE SET II AIA-PACK WASH CONCENTRATE AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE 1–30 °C: AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP
-
Kat. Č.
● ● ● ●
0025217 0025317 0025517 0025417 0020968 0020955 0020956
● ●
●
0020970 0020971
●
Po otevření hliníkového sáčku lze testovací kelímky ST AIA-PACK Cystatin C ponechat v analyzátorech systému TOSOH AIA (18–25 °C) po dobu maximálně 4 dnů (4 x 24 hodin). Pokud jsou přes noc uchovávány při teplotě 2–8 °C, lze testovací kelímky použít až po dobu 12 dnů (12 cyklů při 8 hodinách v systému a 16 hodinách v chladničce). Jakmile otevřete hliníkový sáček, musí se 3 - 12
testovací kelímky spotřebovat do 30 dnů.Testovací kelímky ST AIA-PACK Cystatin C mohou být skladovány až 1 den při teplotě 18–25°C. Když právě kalibrační set ST AIA-PACK Cystatin C CALIBRATOR SET nepoužíváte, skladujte jej vždy ve svislé poloze při teplotě 2–8 °C. Je-li kalibrační set uchovávaný neotevřený a zchlazený na teplotu 2–8 °C, je stabilní do data exspirace uvedeného na štítku. Materiály kalibračních roztoků by měly být spotřebovány do 1 dne od otevření. Po otevření může být ST AIA-PACK Cystatin C SAMPLE DILUTING SOLUTION ponechán v analyzátorech systému TOSOH AIA (18 – 25 °C) po dobu maximálně 10 dnů (10 x 24 hodin). Pokud jsou přes noc uchovávány při teplotě 2–8 °C, lze roztok pro ředění vzorku použít až po dobu 30 dnů (30 cyklů při 8 hodinách v systému a 16 hodinách v chladničce). Roztok pro ředění vzorku by se neměl používat déle než 90 dnů po otevření, i když je uzavřený a uchovávaný v chladničce. Pro automatické ředění s AIA-600 II je nutné použít 30 ml lahvičku pro roztok pro ředění vzorku. Roztok pro ředění vzorku přenesený z původní 100 ml láhve do 30 ml lahvičky je možné ponechat v přístroji AIA-600 II (18°-25°C) po dobu maximálně 3 dny (3 x 24 hodin). Pokud jsou přes noc uchovávány při teplotě 2–8 °C, lze roztok pro ředění vzorku použít až po dobu 9 dnů (9 cyklů při 8 hodinách v systému a 16 hodinách v chladničce). Je-li uchováván neotevřený a zchlazený na teplotu 2-8°C, bude kontrolní set AIA-PACK Cystatin C stabilní do data exspirace uvedeného na štítku. Materiály kontrolních roztoků by měly být spotřebovány do 7 dnů od otevření. Rekonstituovaný roztok substrátu je stabilní 3 dny při teplotě 18–25 °C nebo 7 dnů při teplotě 2–8 °C. Pracovní ředidlo a promývací roztoky budou stabilní po dobu 30 dnů při teplotě 18–25 °C. Činidla nesmí být užívána, když se jeví zakalená či zabarvená.
Pro stanovení je nutno použít sérum, heparinizovanou plazmu nebo plazmu s EDTA. Citrátová plazma by se neměla používat. Používá-li se sérum, vzorek žilní krve se odebírá asepticky bez aditiv. Uchovávejte při teplotě 18–25°C než se vytvoří sraženina (obvykle 15–45 minut), pak odstředěním získejte vzorek séra pro test. Používá-li se heparinizovaná plazma, vzorek žilní krve se odebírá asepticky s určeným aditivem. Co nejdříve odstřeďte a oddělte plazmu od sedimentovaných buněk. Neadekvátní centrifugace nebo přítomnost fibrinu nebo částic ve vzorku může způsobit chybný výsledek. Vzorky obsahující inhibitory alkalické fosfatázy mohou způsobovat chybné výsledky. Zkontrolujte všechny vzorky na přítomnost vzduchových bublinek a pěny. Odstraňte všechny bubliny před provedením analýzy. Během sériového sledování jednotlivého pacienta nestřídejte druhy vzorků. U určitých pacientů se mohou koncentrace naměřené v různých druzích vzorků poněkud lišit. Před provedením analýzy mohou být vzorky uloženy při teplotě 2–8 °C po dobu maximálně 24 hodin. Nelze-li analýzu provést do 24 hodin, musí být vzorek uchováván zmražený při teplotě -20°C nebo nižší po dobu maximálně 60 dnů. Zabraňte opakovanému zmrazování a rozmrazování vzorků. Zakalené vzorky séra nebo vzorky, které obsahují částice hmoty, musí být před analýzou odstředěny. Před analýzou pomalu ponechte vzorky dosáhnout teploty 18–25 °C a jemně je promíchejte. Všechny vzorky pacientů vyžadují před analýzou ředění. Vzorky ředěné 25-krát pomocí ST AIA-PACK Cystatin C SAMPLE DILUTING SOLUTION. AIA Nex•IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000 budou automaticky provádět tato ředění a výpočet výsledků. Podrobné informace o provozu přístroje naleznete v uživatelském manuálu systému TOSOH AIA. Materiály
4 - 12
● ●
kalibrátoru ST AIA-PACK Cystatin C CALIBRATOR a kontroly AIA-PACK Cystatin C CONTROL nevyžadují před analýzou ředění. Naředěný vzorek musí být spotřebován do 24 hodin a nesmí být skladován. Naředěný vzorek potřebný pro analýzu je 10 µl.
POSTUP Podrobné pokyny pro AIA Nex•IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800, AIA-360 a AIA-2000 naleznete v jejich uživatelském manuálu. I.
Příprava činidla A. Substrátový roztok Před přípravou roztoku pracovního substrátu ponechte všechna činidla dosáhnout teploty 18–25 °C. Přidejte jednu lahvičku AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II k lyofilizovanému AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II a důkladně promíchejte, aby se všechny pevné materiály rozpustily. B. Promývací roztok Přidejte celý obsah AIA-PACK WASH CONCENTRATE (100 ml) do přibližně 2,0 l vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo reagenční vody pro klinické laboratoře definované směrnicí CLSI C3-A4 (dříve známou pod názvem typ 1 NCCLS), důkladně promíchejte a upravte na konečný objem 2,5 l. C. Ředicí roztok Přidejte celý obsah AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE (100 ml) do přibližně 4,0 l vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo reagenční vody pro klinické laboratoře definované směrnicí CLSI C3-A4 (dříve známou pod názvem typ 1 NCCLS), důkladně promíchejte a upravte na konečný objem 5,0 l.
II. Postup kalibrace A. Kalibrační křivka
B. Postup kalibrace 1. 2. 3. 4.
Pokyny postupu viz příslušný uživatelský manuál systému Tosoh AIA. Ověřte, že kalibrační šarže a čísla koncentrací byly správně zadány do softwaru. ST AIA-PACK Cystatin C CALIBRATOR SET je dodávaný připravený k použití. Společnost Tosoh doporučuje, aby všechny kalibrační roztoky byly spuštěny trojmo.
C. Kritéria přijatelnosti kalibrace 1. Průměrná rychlost pro ST AIA-PACK Cystatin C CALIBRATOR SET (1) má být < 2,0 nmol/(L•s). 2. Vzhledem k tomu, že existuje přímý vztah mezi koncentrací a rychlostí, měla by se rychlost zvyšovat při nárůstu koncentrací. 3. Opakující se hodnoty musí být v rozmezí 10 %. D. Kontrola kalibrace a přijetí
Kalibrační roztoky použité s ST AIA-PACK Cystatin C jsou připraveny gravimetricky a porovnány s vnitřním referenčním standardem. Kalibrační křivka pro ST AIA-PACK Cystatin C je stabilní až 90 dnů. Stabilita kalibrace je sledována prováděním kontroly kvality a závisí na správné manipulaci s činidlem a na řádné údržbě systému Tosoh AIA podle pokynů výrobce. Opětovná kalibrace může být nutná častěji, když jsou kontroly mimo nastavené rozmezí pro tento test nebo když jsou prováděny určité servisní postupy (např. nastavení teploty, změny mechanismu odběru vzorků, údržba promývací sondy nebo nastavení či výměna žárovky detektoru). Další informace o provozu přístroje naleznete v uživatelském manuálu systému TOSOH AIA. Kalibrační křivka vzorku z AIA-1800 sleduje a znázorňuje algoritmus použitý při výpočtu výsledků. Rozsah koncentrací kalibrační křivky je zobrazen v 1/25 rozsahu testu vzorků pacienta. Koncentrace vzorků pacienta jsou vypočítány vynásobením koncentrací získaných z kalibrační křivky a faktorem ředění. AIA Nex•IA /AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000 automaticky vypočítají koncentrace vzorků pacienta pomocí faktoru ředění a ohlásí výsledky.
1. Pečlivě zkontrolujte křivku kalibrace a použijte výše uvedená kritéria. 2. Je-li to nutné, editujte kalibraci a potom kalibraci akceptujte. Další informace o kalibraci naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. III. Postup kontroly kvality A. Komerčně dostupné kontroly Komerčně dostupné kontroly by měly být spuštěny nejméně jednou denně. Doporučuje se, aby byly použity nejméně dva stupně kontrol, normální a abnormální. Metoda laboratoře pro tento určitý test specifikuje následující: Kontrolní materiál: _____________________ Frekvence: _____________________ Číslo šarže kontrolního materiálu, přijatelné limity a nápravná opatření v případě, že kontroly nesplní laboratorní kritéria, můžete nalézt ve zvláštním dokumentu o kontrole kvality, který je v laboratoři. B. Postup kontroly kvality 1. Proveďte analýzu vzorků kontroly kvality dle pokynů specifického uživatelského manuálu pro váš analyzátor systému Tosoh AIA. Podrobné pokyny o definici a editaci souborů naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA.
5 - 12
6 - 12
2. Materiál kontroly kvality, který má projít tímto testem, je specifikovaný individuální metodou laboratoře. IV. Zpracování vzorků A. Příprava
VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ Kontrola kvality Za účelem sledování a vyhodnocení přesnosti analytické výkonnosti se doporučuje v souladu s místními nařízeními analyzovat komerčně dostupné kontrolní vzorky.
Všechny vzorky pacientů vyžadují před analýzou ředění a jsou naředěny 25-krát pomocí ST AIA-PACK Cystatin C SAMPLE DILUTING SOLUTION. Naředěné nebo nenaředěné vzorky pacientů jsou umístěny na příslušné pozice analyzátorů systému Tosoh AIA. V případě AIA-360 musí být vzorky manuálně zředěny v kelímcích na vzorek a tyto je třeba uložit do AIA-360. Další informace týkající se přípravy vzorku a provozu přístroje získáte v části ODBĚR A MANIPULACE SE VZORKY resp. ve specifickém uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. Primární zkumavky a také kelímky na vzorky jsou kódovány čárovým kódem a mohou být použité v AIA-1800 a AIA-2000.
Minimální doporučená frekvence zpracování interního kontrolního materiálu je: Po kalibraci je spuštěna dvastupňová analýza interních kontrolních vzorků, aby byla akceptována kalibrační křivka. Dva stupně kontrol jsou opakovány, když jsou provedeny určité servisní postupy (např. nastavení teploty, změna mechanismu pro odběr vzorků, údržba promývací sondy nebo nastavení či výměna žárovky detektoru). K ověření celkového výkonu analyzátorů systému Tosoh AIA by měl být po denní údržbě provedený nejméně dva stupně kontroly.
B. Postup analýzy 1. Poskytněte dostatečné množství testovacích kelímků ST AIA-PACK Cystatin C pro počet vzorků, které mají být analyzovány. 2. Vložte vzorky pacienta podle pokynů v uživatelském manuálu a pokračujte v analýze. Poznámka: Kelímky AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP budou v případě použití vestavěných ředění vyžadovány systémem AIA Nex•IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000.
POZNÁMKY K POSTUPU 1. Lyofilizovaný substrát musí být zcela rozpuštěn. 2. Analýzy ligand prováděné na analyzátorech systému TOSOH AIA vyžadují, aby laboratoř používala vodu reagenční čistoty třídy I dle CAP nebo reagenční vodu pro klinické laboratoře dle CLSI. Voda musí být testována nejméně jednou měsíčně a nesmí obsahovat částicovou hmotu včetně bakterií. pH vody by mělo být také rutinně testováno. Další informace naleznete v dokumentu CLSI C3-A4, „Příprava a testování reagenční vody v klinické laboratoři“; schválené 4. vydání směrnice. 3. Vyskytne-li se vzorek obsahující koncentraci Cystatinu C vyšší než 8,00 mg/l, musíte tento vzorek naředit roztokem pro ředění vzorku ST AIA-PACK Cystatin C SAMPLE DILUTING SOLUTION a provést analýzu znovu podle postupu analýzy. Doporučené ředění pro vzorky obsahující více než 8,00 mg/l je 5-násobné ředění. Je žádoucí takové ředění vzorku, aby byl odečet naředěného vzorku mezi 0,01 a 8,00 mg/l. Diluční faktor by se měl zadat do softwaru. Další informace o ředění vzorků naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. 4. V analyzátoru systému Tosoh AIA mohou být současně uloženy dvě různé kalibrační křivky pro každý analyt. Tak mohou být v rámci téhož cyklu použity dvě různé šarže testovacích kelímků ST AIA-PACK Cystatin C. 5. Nejsou-li pro tento test specifikace analýzy připraveny v softwaru systému, musí být specifikace zadány pod kódem testu 102.
VÝPOČET VÝSLEDKŮ
Je-li jedna nebo více hodnot kontrolního vzorku(ů) mimo přípustné rozmezí, bude před ohlášením výsledků pacientů nutné prošetřit validitu kalibrační křivky. Je nutno dodržovat standardní laboratorní postupy podle přísného zákonného orgánu, který na provoz laboratoře dohlíží.
OMEZENÍ ● ●
●
●
● ●
Analyzátory systémů Tosoh AIA provádějí všechny operace manipulací se vzorky a činidly automaticky. Analyzátory systému Tosoh AIA odečítají míru fluorescence generované reakcí a automaticky ji převádějí na koncentraci Cystatinu C v mg/l. U vzorků vyžadujících ředění provedou systémy AIA Nex•IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 a AIA-2000 automaticky ředění a vypočtou výsledky, pokud byly faktory ředění zadány do softwaru. Podrobné informace o programování ředění naleznete v příslušném uživatelském manuálu systému Tosoh AIA.
7 - 12
● ● ●
Pro diagnostické účely je nutné využívat výsledky tohoto testu společně s dalšími údaji (např. symptomy, výsledky dalších testů, klinickými dojmy, léčbou atd.). Vzorky pacienta mohou také obsahovat lidské protilátky proti myším protilátkám (HAMA), buď v důsledku přirozené produkce protilátek nebo protilátek produkovaných v reakci na léčebné režimy. HAMA mohou způsobovat jak falešně pozitivní, tak i falešně negativní výsledky testů užívajících myší monoklonální protilátky. Jiné heterofilní protilátky jsou také známé svou interferencí s testy tohoto typu. ST AIA-PACK Cystatin C byl vytvořen k minimalizaci účinků heterofilních protilátek, ale interference způsobená vysokými titry protilátek nemůže být vyloučena. Při použití ST AIA-PACK Cystatin C je nejvyšší koncentrace Cystatinu C měřitelná pomocí 25-násobného ředění ST AIA-PACK Cystatin C SAMPLE DILUTING SOLUTION rovna 0,32 mg/l, což odpovídá 8,00 mg/l ve vzorcích a nejnižší měřitelná koncentrace je 0,0004 mg/l (citlivost testu), což odpovídá 0,01 mg/l ve vzorcích. Přestože přibližná hodnota koncentrace nejvyššího kalibračního roztoku je 0,35 mg/l, přesná koncentrace se může poněkud lišit. Specifikace testu, ASSAY RANGE HIGH (VYSOKÝ ROZSAH TESTU), musí být definována jako horní hranice rozsahu testu, 0,32 mg/l, která odpovídá přibližně 8,00 mg/l v původních vzorcích (diluční faktor 25). Přestože hemolýza nemá významný vliv na test, mohou hemolyzované vzorky poukazovat na špatné zacházení se vzorkem před analýzou a výsledky je nutno interpretovat opatrně. Lipémie má na test nevýznamný vliv, kromě případu silné lipémie, kdy může dojít k prostorové interferenci. Vzorky obsahující fibrin mohou vykazovat buď falešně zvýšené, nebo falešně snížené výsledky. Fibrin musí být eliminován ze vzorku před začátkem analýzy. Vzorky pacientů, kteří užívají léky a/nebo u kterých probíhá léčba, mohou vykazovat chybné výsledky. Pro úplnější pochopení omezení tohoto postupu, si laskavě přečtěte oddíly ODBĚR A MANIPULACE SE VZORKY, VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ, SKLADOVÁNÍ A STABILITA a POZNÁMKY K POSTUPU této příbalové informace.
8 - 12
PŘEDPOKLÁDANÉ HODNOTY
Sérum B2
Každá laboratoř by měla stanovit referenční interval, který odpovídá charakteristikám testované populace. Podobně jako u všech diagnostických postupů musí být klinické výsledky interpretovány s ohledem na současně podávané léky. I.
Sérum C2
Referenční rozmezí Daný interval byl určen ve vzorcích séra od 150 zjevně zdravých asiatů. Počet vzorků (n) 150 Referenční interval 0,52-0,97 mg/l
Plazma A2
VÝKONNOSTNÍ CHARAKTERISTIKY PŘESNOST a. Výtěžnost: Ke třem vzorkům séra a třem vzorkům heparinizované plazmy byla přidána tři různá množství Cystatinu C a byla provedena analýza před přídavkem a po něm.
Plazma B2 Vzorek
Sérum A1
Sérum B1
Sérum C1
Plazma A1
Plazma B1
Plazma C1
Původní koncentrace (mg/l) 0.96 0.96 0.96 0.91 0.91 0.91 0.92 0.92 0.92 0.91 0.91 0.91 1.24 1.24 1.24 0.86 0.86 0.86
Cystatin C přidaný (mg/l) 4.16 2.08 1.04 4.01 2.00 1.00 4.05 2.03 1.01 4.08 2.04 1.02 4.20 2.10 1.05 4.08 2.04 1.02
Předpokládaná koncentrace (mg/l) 5.12 3.04 2.00 4.92 2.91 1.91 4.97 2.95 1.93 4.98 2.94 1.93 5.44 3.34 2.29 4.94 2.90 1.88
Naměřená koncentrace (mg/l) 4.95 3.07 2.05 4.75 3.03 2.01 4.96 2.98 2.01 4.86 3.08 2.03 4.97 3.38 2.28 4.82 2.90 1.94
Procento výtěžnosti (%) 96.7 100.9 102.3 96.6 104.2 104.9 99.7 101.3 104.0 97.5 104.6 105.2 91.3 101.1 99.5 97.6 100.1 103.1
b. Ředění: Tři vzorky séra a tři vzorky heparinizované plazmy obsahující vysoké koncentrace Cystatinu C byly sériově ředěny pomocí ST AIA-PACK Cystatin C SAMPLE DILUTING SOLUTION a byla provedena analýza. Vzorek
Faktor ředění
Sérum A2
žádný 7.5/10 5.0/10 2.5/10 1.0/10
Předpokládaná koncentrace (mg/l) 6.89 5.17 3.45 1.72 0.69
Naměřená koncentrace (mg/l) 6.89 4.88 3.25 1.64 0.67
Procento výtěžnosti (%) 100.0 94.4 94.3 95.1 96.5
Plazma C2
žádný 7.5/10 5.0/10 2.5/10 1.0/10 žádný 7.5/10 5.0/10 2.5/10 1.0/10 žádný 7.5/10 5.0/10 2.5/10 1.0/10 žádný 7.5/10 5.0/10 2.5/10 1.0/10 žádný 7.5/10 5.0/10 2.5/10 1.0/10
5.05 3.79 2.53 1.26 0.51 4.93 3.70 2.47 1.23 0.49 4.94 3.70 2.47 1.23 0.49 6.33 4.75 3.17 1.58 0.63 7.05 5.29 3.53 1.76 0.71
5.05 3.67 2.63 1.26 0.49 4.93 3.65 2.48 1.22 0.48 4.94 3.66 2.54 1.29 0.53 6.33 4.71 3.10 1.64 0.66 7.05 5.11 3.41 1.79 0.72
100.0 96.8 104.2 99.4 96.3 100.0 98.6 100.6 98.7 96.9 100.0 98.9 102.7 104.2 106.5 100.0 99.1 98.0 103.8 103.8 100.0 96.7 96.6 101.8 101.6
c. Linearita: Linearita pro ST AIA-PACK Cystatin C byla stanovena na základě pokynů CLSI protokolu EP6-A. Linearita byla měřena přístrojem AIA-1800 a byla demonstrována linearita od 0,01 do 8,00 mg/l s rozdílem +/- 10 % tohoto intervalu. PŘESNOST a. Přesnost v rámci jednoho cyklu byla stanovena pomocí šesti kontrolních roztoků v celkem 20 cyklech. V rámci jednoho cyklu byla provedena analýza jedné sady dvou paralelních vzorků na jeden kontrolní vzorek. Průměrná hodnota každých dvou paralelních vzorků byla použita k získání sdružené směrodatné odchylky (SO), která pak byla použita k výpočtu variačního koeficientu (CV). Vzorek Sérum A3 Sérum B3 Sérum C3 Plazma A3 Plazma B3 Plazma C3
Střední hodnota (mg/l) 0.70 2.15 4.69 0.69 2.08 4.69
Sdružená směrodatná odchylka (mg/l) 0.02 0.04 0.18 0.02 0.06 0.15
CV (%) 3.3 2.0 3.7 2.5 2.7 3.3
b. Celková přesnost byla stanovena paralelním stanovením šesti kontrolních vzorků ve 20 samostatných cyklech. Průměrné hodnoty každého cyklu byly použity k výpočtu sdružené 9 - 12
10 - 12
REFERENCE
směrodatné odchylky (SD) a variačního koeficientu (CV). Vzorek Sérum A3 Sérum B3 Sérum C3 Plazma A3 Plazma B3 Plazma C3
Střední hodnota (mg/l) 0.70 2.15 4.69 0.69 2.08 4.69
Sdružená směrodatná odchylka (mg/l) 0.03 0.06 0.16 0.02 0.06 0.16
CV (%) 3.7 2.6 3.4 3.1 3.0 3.4
KORELACE a. Korelace mezi sérem (x) a heparinizovanou plazmou (y) v ST AIA-PACK Cystatin C byla provedena s použitím 106 pacientských vzorků. Směrnice Průsečík s osou y Korelační koeficient Počet vzorků
0.980 0.018 0.999 106
b. Korelace mezi sérem (x) a EDTA plazmou (y) v ST AIA-PACK Cystatin C byla provedena s použitím 132 pacientských vzorků. Směrnice Průsečík s osou y Korelační koeficient Počet vzorků
0.986 0.022 0.999 132
SENZITIVITA Omezení detekce: Mez detekce pro ST AIA-PACK Cystatin C byla stanovena dle CLSI pokynu EP17-A. Slepý vzorek byl měřen v 60 replikátech. Šest vzorků s nízkou hladinou bylo změřeno každý v 10 replikátech. Výsledkem je, že je mez detekce pro ST AIA-PACK Cystatin C odhadnuta na 0,00006 mg/l, což odpovídá 0,002 mg/l v originálních vzorcích (diluční faktor 25). INTERFERENCE Interference je v rámci této studie definována jako výtěžnost přesahující 10 % známé koncentrace vzorku po přidání následujících látek k lidským vzorkům. ● Hemoglobin (do 470 mg/dl), volný bilirubin (do 19 mg/dl) a konjugovaný bilirubin (do 18 mg/dl) neinterferují s testem. ● Lipémie vyjádřená koncentrací triglyceridu (do 1600 mg/dl) neinterferuje s testem. ● Kyselina askorbová (do 20 mg/dl) neinterferuje s testem. ● Bílkoviny, stanovené jako koncentrace lidského albuminu (až do 50 g/dl přidané ke vzorkům od zjevně zdravých subjektů), neruší tento test. ● EDTA•2K (až do 10 mg/ml) neinterferuje s tímto testem. ● Heparin (do 100 U/ml) neinterferuje s testem.
11 - 12
1) Abrahamson M, Olafsson I, Palsdottir A, Ulvsback M, Lundwall A, Jensson O, Grubb A : Structure and expression of the human Cystatin C gene. Biochem J 1 : 287-294 (1990). 2) Simonsen O, Grubb A, Thysell H : The blood serum concentration of Cystatin C ( -trace) as a measure of the glomerular filtration rate. Scand J Clin Lab Invest 45 : 97-101 (1985). 3) Randers E, Erlandsen EJ : Serum Cystatin C as an endogenous marker of the renal function - a review. Clin Chem Lab Med 37 : 389-395 (1999). 4) Grubb A : Diagnostic value of analysis of Cystatin C and protein HC in biological fluids. Clinical Nephrology 38 : 20-27 (1992). 5) Coll E, Botey A, Alvarez L, et al. : Serum Cystatin C as a new marker for non-invasive estimation of glomerular filtration rate and as a marker for early renal impairment. Am J Kidney Dis 36 : 29-34 (2000). 6) Newman DJ : Cystatin C. Ann Clin Biochem 39 : 89-104 (2002). 7) Filler G, Witt I, Priemm F, Ehrich JH, Jung K : Are Cystatin C and beta 2-microglobulin better markers than serum creatinine for prediction of a normal glomerular filtration rate in pediatric subjects. Clin Chem 43 : 1077-1088 (1997). 8) Grubb A, Simonsen O, Sturfelt G, Truedsson L, Thysell H : Serum concentration of Cystatin C, factor D and β2-microglobulin as a measure of glomerular filtration rate. Acta Med Scand 218 : 499-503 (1985). 9) Hoke FJ, Kemperman FAW, Krediet RT : A comparison between Cystatin C, plasma creatinine and the Cockcroft and Gault formula for the estimation of glomerular filtration rate. Nephrol Dial Transplant 18 : 2024-2031 (2003). 10) Pucci L, Triscornia S, Lucchesi D, Fotino C, et al.: Cystatin C and estimates of renal function: searching for a better measure of kidney function in diabetic patients. Clin Chem 53 : 480-488 (2007).
TOSOH CORPORATION 3-8-2, Shiba, Minato-ku TOKYO 105-8623 (JAPONSKO) Tel.: +81 (0)3 5427 5181 Fax: +81 (0)3 5427 5220 TOSOH EUROPE N.V. Transportstraat 4 B-3980 TESSENDERLO BELGIE Tel.: +32 (0)13 66 88 30 Fax: +32 (0)13 66 47 49 TOSOH BIOSCIENCE, INC. 6000 Shoreline Court, Suite 101 South San Francisco, CA 94080, USA Telefon: +1 650 615 49 70 Objem netto (po rekonstituci pro lyofilizovaný materiál)
12 - 12
